UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO MULTIDISCIPLINAR EM SADE FARMACOGNOSIA II

Deteco de Flavonoies por CCD Em Arnica

VITRIA DA CONQUISTA Maro/2013

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO MULTIDISCIPLINAR EM SADE FARMACOGNOSIA II

Discentes: Edson Fernandes Da Silva Lucas Batista Thiago Rodrigues

Deteco de Flavonoies Hidrlisveis por CCD Em Arnica montana

Realatrio apresentado professora Patricia Krepsky, ministrante do componente curricular Farmacognosia II - IMS064 - como requisito para obteno de notas parciais na presente disciplina.

VITRIA DA CONQUISTA Maro/ 2013

1.Introduo Extratos brutos vegetais so, normalmente, misturas complexas constitudas quase sempre por diversas classes de produtos naturais, contendo diferentes grupos funcionais. O isolamento destas substncias, seja para identificao ou, em maior quantidade, para a realizao de ensaios farmacolgicos, um processo tedioso que envolve adsorventes caros e grandes quantidades de solventes. A obteno de grandes quantidades de substncias ou extratos semi-purificados para ensaios farmacolgicos in vivo , atualmente,uma das etapas essenciais para o estudo de plantas medicinais.Por isso necessrio o desenvolvimento de novas metodologias defracionamento e isolamento de substncias obtidas a partir de extratos de plantas.(BARRETO,2005) De acordo com a Resoluo RDC n. 48, de 16 de maro de 2004, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa), que dispe sobre as condies para a promoo, proteo e recuperao da sade, a organizao e o funcionamento dos servios correspondentes, medicamento fitoterpico aquele obtido empregando-se exclusivamente matrias-primas ativas vegetais. Ele caracterizado pelo

conhecimento da eficcia e dos riscos de seu uso, assim como pela reprodutibilidade e constncia de sua qualidade. Sua eficcia e segurana so validadas por intermdio de levantamentos etnofarmacolgicos de utilizao, documentaes tcnico-cientficas em publicaes ou ensaios clnicos. No se considera medicamento fitoterpico aquele que, na sua composio, inclua substncias ativas isoladas, de qualquer origem, nem as associaes destas com extratos vegetais (BRASIL, 2004).

Para ser realizada a anlise das drogas vegetais, devem ser realizados ensaios de controle de qualidade que objetivem avaliar as caractersticas fsicas, qumicas e microbiolgicas das matrias- primas. Assim, as verificaes das especificaes devem

ser vistas como um requisito necessrio para a garantia da qualidade, segurana e eficcia do produto, e no ser tratada como norma regulatria. ( LEITE.2009) A cromatografia em camada delgada definida como um mtodo que consiste na separao de componentes de determinado material vegetal, atravs da migrao diferencial sobre uma camada fina de slica gel, retida sobre superfcie plana. (LEITE. 2009) A tcnica de cromatografia em camada delagada CCD comumente empregada, utiliza-se como adsorvente gel silica, celulose ou poliamida. As agliconas geralmente so eluidas em sistemas n-butanol-cido cido-gua e os heterosdeos em cido

actico de 6 a 60%. Em alguns casos e prefervel submeter o extrato vegetal bruto antes mesmo de testar a presena ou ausncia de compostos fenlicos, pois muitos podem ser caracterizados diretamente atravs da observao da absoro ou extino de fluorescncia de radiao ultra violeta de suas manchas respectivas. (SIMES, 2003) Aps a secagem as placas cromatogrficas devem ser levadas a cmaras escuras sob luz ultra violeta utilizando comprimento de onda curto(254nm) e longo (365nm) No presente relatrio est descrita a tcnica de CCD para pesquisa de flavonoides hidrolisvel em extrato etanlico de Arnica( SIMES, 2003). A Arnica montana uma planta da famlia Asteraceae uma espcie nativa da Europa extensivamente utilizada na medicina tradicional daquele continente, utilizada como medicamento tpico para o tratamento de contuses, distenses musculares, alvio da dor e edema, cicatrizaes, afeces bucais, entre outras. Cientificamente avaliada por suas aes antiinflamatrias, analgsicas e antimicrobianas, a indicao principal da arnica tem sido para casos de leses externas sem ferimentos, particularmente em edemas e hematomas. Entretanto, desenvolve efeitos adversos como vermelhido e ardor em pele e mucosas, dermatites de contatos, enterites, taquicardia, cardiotoxicidade, aumento da presso arterial e at casos severos de intoxicao e colapso quando utilizada via oral. (Alfredo, et al, 2008) Seus princpios ativos so lactonas sesquiterpnicas (arnicolide, helenalina e dihidro-helenalina), flavonides (incluindo quercitina e seus derivados como quercitina-

3-mono-glucosdeo e quercitina-3-glicogalacturnico), lcoois (arnidiol, arnilenediol, isoarnilenediol), carotenides, leo essencial, cido fenilcarboxilico, entre outros. As lactonas sesquiterpnicas, especialmente os steres helenalina e dihidro-helenalina, so os principais princpios ativos da Arnica montana, sendo responsveis por sua atividade antiinflamatria, o que foi comprovado por vrios estudos in vitro e in vivo. Pesquisas realizadas concluram que uma quantidade suficiente de lactonas sesquiterpnicas penetra a barreira da pele, gerando efeitos antiinflamatrios. (Marques, 1996)

OBJETIVO Idetificar presena de flavonoides hidrolisveis , em amostra de extrato de Arnica, pelo mtodo cromatografia de camada delgada.

2. Materiais

2.1. Extrato
Arnica Lychnophora ericoides Extrato alcoolico, previamente preparado e sedido pela professora da

diciplina. 2.2. Intrumentos

Suporte para montagem de placa de Cromatrografia Cabine escura de luz UV

2.3. Vidrarias
-Bquer; -Capilar; - Cuba cromatogfica; -Placa de vidro;

2.4. Reagentes, Solventes E Substancias De Referencia

Hexano Etanol Soluo de AlCl3

Acetato de etila cido frmico cido actico

Rutina Quercetina

3. METODOS

Cromatografia em camada delgada Foi realizada a cromatografia em camada delgada, onde se utilizou uma placa de vidro com slica gel, com espessura de 250 m, como fase estacionria e acetato de etila/ cido actico/ cido frmico/ gua acetona 100:27:27:10) como fase mvel. Em seguida com o auxlio de um capilar, aplicou-se separadamente em forma de banda, 25 l extrato de arnica; 25l de rutina e sobre cada amostra aplicada, aplicou-se tambm 5l de HCL 3 N. levou-se a placa cromatogrfica para a estufa a 100C por 15m. aps aplicouse a placa a soluo de quercitina sem aplicao do cido. Preparouse um bquer graduado de 100 ml (cuba cromatogrfica), a fase mvel, colocando na lateral um papel filtro. Colocou-se a placa de vidro preparada anteriormente dentro deste bquer, onde foi esperado aproximadamente 10 minutos para se obter o resultado. Desenvolvido este procedimento, a placa foi removida da cuba e deixada para secar, at que esteja livre do solvente. a placa foi borrifada com soluo de AlCl 3 a 10% em etanol e deixou secar. Levou-se a placa para ser observada sob luz ultravioleta (366 nm).

4. RESULTADOS E DISCURSO Para a identificao flavonoides no extrato analisado realizou-se o procedimento de Cromatografia em camada delgada (CCD). Este mtodo oferece fcil execuo (facilidade em efetuar a separao e identificao das espcies qumicas) e baixo custo (SIMES et. Al. 2007). A CCD um modo de cromatografia do tipo adsoro. A fase mvel um material usado para impulsionar a amostra a ser separada (o soluto) sobre a fase estacionria. Esta fase pode ser um material slido altamente polar (slica gel G utilizada nesta anlise) com o qual as molculas de diferentes polaridades sero adsorvidas. A distncia que cada substncia percorre caracterstica de cada composto. E esta propriedade geralmente expressa em valor de Rf, sendo que este valor sempre ser entre zero e um. Na preparao da cuba cromatogrfica indispensvel presena nas laterais do bquer o papel filtro, pois este acelera e mantm a saturao. Ressaltando que o sistema deve permanecer fechado para tambm garantir e permitir a saturao da cuba pelo vapor do solvente. Se os componentes da amostra forem coloridos, manchas dispostas verticalmente na placa sero visveis, caso contrario indicado que as manchas sejam observadas sob a luz ultravioleta. Depois de aplicado o revelador, surgiu algumas manchas A proposta da prtica inclua a escolha entre rutina ou arnica observao. Este grupo efetuou a prtica com a rutina e a arnica. A rutina e o extrato de arnica foi aplicada na placa cromatogrfica com o capilar, como descrito no mtodo, e posteriormente colocado o cido concentrado por cima do local onde foi adicionado a rutina e a arnica a fim de promover a hidrlise. Quando o conjunto foi colocado na estufa, uma placa de vidro foi colocada por cima, esse cuidado tem como objetivo manter a presena de gua na placa, impedindo sua evaporao e perda, o que seria indesejado j que se trata de hidrlise. Aps os 15 minutos de estufa foram adicionados os parmetros de comparao, a rutina e, a quercetina, sem o cido. A fim de se calcular o fator de reteno (Rf), todos os extratos foram aplicados como alvo de

de forma de banda e uniforme na placa e o clculo deveria ser feito aps visualizao no UV. Se o Rf se igualasse ao da rutina, isso seria evidncia da no hidrlise da amostra; caso o Rf se igualasse ao da quercetina, isso seria evidncia da hidrlise da mesma. O resultado observado foi a comprovao da hidrlise d e flavonoides presente no extrato arnica associada ao cido, pois o resultado do Rf foi compatvel com a quercetina. Fig.01.

Quercitina

Figura. 01. O valor do Rf no foi calculado devido a perda dos dados necessrios para realizao do clculo, sendo que a comparao quanto a correspondncia entre as bandas foi feita apenas de forma visual com auxilio da imagem obtida na fig. 01.

E. Arnica

Rutina

6.CONCLUSO A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que a amostra do extrato de Arnica possui flavonoides hidrolisveis, embora no tenha sido possvel calcular o RF, a concluso obtida baseia-se apenas na observao visual da placa cromatogrfica.

7.REFERENCIAS

BARRETO, Amaro Gomes Jnior. Cromatografia de troca-inica aplicada ao isolamento da frao cida do leo de copaba (Copaifera multijuga) e da sacaca (Croton cajucara). Publicado na revista Qum. Nova vol.28 no.4 So Paulo July/Aug. 2005. Artigo disponivel em http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422005000400028 BRASIL, Agencia Nacional De Vigilncia Sanitria, RESOLUO-RDC N. 48, DE 16 DE MARO DE 2004 - Dispe sobre o registro de medicamentos fitoterpicos. Disponvel em: http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/rdc_48_16_03_04_registro_fitoterapicos% 20.pdf Farmacopia brasileira. 5 edio, parte 1, Atheneu editora so Paulo LTDA. 1988. LEITE, Joo Paulo Viana. Fitoterapia Tecnolgicas. So Paulo. Editora Atheneu. 2009 Bases Cientficas E

MATOS, F.J.A. Farmcias vivas: sistema de utilizao de plantas medicinais projetado para pequenas comunidades. 4. ed. Ver. atual. Fortaleza: EUFC, 2002. 165 p. MELO, J.G. Controle de Qualidade e Prioridades de Conservao de Plantas Medicinais Comercializadas no Brasil. Dissertao apresentada para obteno do ttulo de mestrado em botnica. UFRPE. Recife. 2007. Artigo disponvel em http://www.pgb.ufrpe.br/doctos/Dissertacao_Joabe_Gomes_de_melo.pdf SIMES, C.M.; SCHENKEL, E.P.; GOSMANN, G.; MELLO, J.C.P.; MENTZ, L.A.; PETROVICK, P.R. Farmacognosia da planta ao medicamento. 5a. Ed., Porto Alegre: Editora da Universidade UFRGS, 2003.