UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA CIENCIAS BSICAS E INGENIERA LICENCIATURA EN INGENIERA QUMICA

DISEO DE UNA PLANTA INDUSTRIAL PARA LA PRODUCCIN DE EDULCORANTE NATURAL A PARTIR DE STEVIA

LABORATORIO DE PROCESOS Y DISEO

TESIS PROFESIONAL
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE LICENCIATURA EN INGENIERA QUMICA PRESENTA
BELLO CRUZ HILARIO GUEVARA MARTINEZ MARTN 96216385 93220338

ASESOR. Dr. Jaime Vernon Carter

Vo. Bo.

INDICE 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. INTRODUCCIN ESTUDIO DE MERCADO QU ES LA STEVIA? QU ES EL ESTEVISIDO? CMO SE LOGRO LA MICROPROPAGACIN? PRUEBAS DE TOXICIDAD LA SEGURIDAD DE LOS AZUCARES DE STEVIA LOCALIZACIN DE LA ZONA DE CULTIVO Y DE LA NAVE INDUSTRIAL 8.1 ZONA DE CULTIVO 8.1.1 CONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE LAS PLANTAS DE STEVIA 8.1.2 HUMEDAD 8.1.3 TEMPERATURA 8.1.4 TOPOGRAFIA 8.1.5 FERTILIZANTES QUMICOS 8.1.6 DATOS CLIMTICOS DE LA ZONA DE CULTIVO 8.1.7 DATOS GENERALES SOBRE LA ZONA DE CULTIVO 8.1.8 UBICACIN DEL TERRENO DE SIEMBRA 8.1.9 SUB-ARRENDAMIENTO DE TERRENO DE CULTIVO 3 4 7 9 10 11 12 12 12 12 12 13 13 13 13 15 15 15 16 18 18 18 19 20 20 21 23 24 26 27 27 27 27 28 29 30 31 32 33 1

9. NAVE INDUSTRIAL 10. PROCESO DE OBTENCIN DEL EDULCORANTE 10.1 PARTE EXPERIMENTAL 10.2 EXTRACCIN 10.3 IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACION DE LAS MUESTRAS OBTENIDAS POR LA EXTRACCIN CON METANOL 10.4 RESULTADOS 10.4.1 SECADO 10.4.2 EXTRACCIN DEL ESTEVIOSIDO USANDO METANOL AL 100% 11. EXTRACCIN CON FLUIDOS SUPERCRTICOS 11.1 QUE ES EL CO2 SUPERCRITICO? 11.2 EXTRACCIN DEL ESTEVISIDO POR MEDIO DEL EXTRACTOR CON FLUIDO SUPERCRTICO. 11.3 ANLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIN DEL EDULCORANTE CON FLUIDO SUPERCRITICO. 12. PROCESO 12.1 PROCESO DE OBTENCIN DEL ESTEVIOSIDO 12.2 MATERIA PRIMA 12.3 PROCESO PROPUESTO 12.4 CROQUIS DE LA PLANTA INDUSTRIAL 13. CAPACIDAD A INSTALAR, MONTO DE LA INVERSIN, Y CAPITAL DE TRABAJO. 13.1 PERSONAL 13.2 COSTOS DE PRODUCCIN 13.3 GANANCIA/ AO

14. RESULTADOS DEL DISEO 14.1 CARACTERSTICAS DEL EQUIPO UTILIZADO EN EL PROCESO 14.2 LISTA DE EQUIPOS DEL PROCESO

34 34 35

APNDICE A: PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PARA MEDIO MS (MURASHIGE SCOOK) APNDICE B: EQUIPO DE SECADO APNDICE C: CUANTIFICACIN DE LA CANTIDAD DE ESTEVISIDO POR MEDIO DE SOXHLET APNDICE D: ANLISIS DE LAS MUESTRA OBTENIDAS POR MEDIO DEL HPLC. APNDICE E: CROMATOGRMAS DE LOS ESTNDARES DE AZCARES APNDICE F: EXTRACCIN CON FLUIDO SUPERCRTICO APNDICE G: DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN UN APARATO DE EXTRACCIN SUPERCRTICA PARA EL CASO DE LA STEVIA APNDICE H: S E G U R I D A D STEVIA REBAUDIANA BERTONI APNDICE I: S E G U R I D A D DIOXIODO DE CARBONO LIQUIDO Y GASEOSO

36 38 39 40 41 43 44

46 51

15. BIBLIOGRAFA

62

1. INTRODUCCIN Dada su gran importancia y relacin con la industria de los alimentos, los edulcorantes han encontrado diversas aplicaciones. Una de ellas, esta en la fabricacin de bebidas dietticas y productos bajos en caloras.

Diversas substancias edulcorantes son elaboradas

qumicamente para su uso en la

preparacin de alimentos de consumo humano con diferente objetivo, ya sea para conservar la vida de los alimentos, hasta mejorar el sabor, color, aroma y otros aspectos. Sin embargo, la adiccin a estas sustancias qumicas se da muy fcilmente, y con el tiempo las consecuencias a la salud pueden ocasionar un peligro. Se ha encontrado que el edulcorante natural Stevia, posee grandes beneficios a la salud tanto de personas que sufren de diabetes como de sobrepeso as como de toda la poblacin en general. En la actualidad en Mxico una de cada tres personas esta afectado por la obesidad que afecta tanto a hombres como a mujeres, y en el caso de Estados Unidos un estudio llevado a cabo revela que existen casi 160 millones de americanos que hacen uso de un sustituto diettico, siendo el Aspartame el edulcorante ms utilizado. Por otro lado en el mbito mundial se ha generado un movimiento al consumo de alimentos sanos de preferencia de origen natural porque la gente se ha dado cuenta de la importancia de cuidar su salud.

El objetivo es crear una infraestructura adecuada a las necesidades de la planta Stevia para obtener una cosecha y una produccin mecanizada eficaz pues se pretende lograr la produccin en masa de esta planta, la cual es originaria del norte Paraguay, creando el medio tanto climtico como nutricional de la misma, una vez logrado esto el procesamiento para la obtencin del edulcorante esteviosido ser el paso final de la investigacin.

2. ESTUDIO DE MERCADO Estados Unidos de Amrica es el pas, con mayor venta de bebidas gaseosas, el segundo lugar lo ocupa Mxico, y el tercer lugar lo ocupa Brasil. En Mxico, hay aproximadamente casi 100 marcas de refresco, el 66% es de sabor de cola y el 34% de sabores. Los refrescos de dieta bajos en caloras tienen una preferencia del 2% de las ventas totales de la industria.

El sistema Coca cola maneja el 60% del mercado mexicano con ventas que superan los 7 mil millones de litros, en Brasil se consumen 5 mil millones de litros de bebidas gaseosas al ao casi el 8% menos. Las empresas transnacionales siempre buscan que la poblacin a la que va dirigido su producto tenga una edad que oscila entre los 10 y 24 aos de edad, que es considerado como el intervalo de consumo de la bebida sabor cola.

Listos para dar la guerra estn los edulcorantes bajos en caloras, y de origen natural, como la Stevia que incluso en Brasil se propuso que fuera incluido en todas las bebidas gaseosas. En Japn ms de 50 compaas lo usan en bebidas gaseosas, comida enlatada, helados, caramelos y Pepsi diet.

A pesar de las acusaciones, el negocio de los refrescos y otra bebidas no alcohlicas, es uno de los ms rentables de la industria alimentara, pues es un importante generador de fuentes de trabajo.

Los refrescos estn compuestos de manera bsica por agua carbonatada, azcares obtenidos de caa o maz u otros edulcorantes como el Aspartame, Sacarina, Ciclamato de Sodio, etc., muy usados en productos dietticos, el concentrado proporciona el sabor y color, y un cido para dar la caracterstica agridulce.

La razn de sustituir los edulcorantes artificiales por edulcorantes naturales es principalmente a problemas asociados con la salud y el uso del Aspartame. Uno de los importantes edulcorantes naturales que se comercializan a nivel mundial y que compite con los artificiales es la Sacarosa del cual la Organizacin de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentacin(FAO), estim que la produccin mundial de azcar de caa para 1998/99 en 129 millones de toneladas, 6.5% ms que el ao anterior.

Para 1999/2001 la produccin mundial de azcar de caa se estim en 134.3 millones de toneladas, 2% mas que el ao anterior y superior a la demanda prevista. Sin embargo, al final de febrero del 2001 el precio diario del azcar, de acuerdo a un convenio internacional lleg a su nivel mas bajo, 4.70 centavos de dlar por libra(11 centavos de dlar por Kg.), pero en abril y finales de mayo el precio se recupero un 30%, esto debido a la demanda de importaciones de mercados importantes como la Federacin de Rusia, Bangladesh, Pakistn e Indonesia.

Se prev que en Brasil la produccin aumentara en 300,000 ton. En Cuba la produccin debera alcanzar los 4 millones de toneladas. En Mxico, se estima que la produccin azucarera se mantendr estable en 5.1 millones de toneladas pese a las condiciones atmosfricas.

Para los dems pases como Brasil debern disminuir su produccin en 3,8 millones de ton, o sea un 10% quedando a 16 millones de ton. En Cuba, la produccin deber aumentar 200, 000 ton a 4,2 millones de ton como una muestra de mejorar la eficiencia de la elaboracin, mientras que en Mxico la produccin deber mantenerse estable en 5 millones de toneladas, pues existen dificultades comerciales que afligen a la industria.

Produccin de Edulcorantes (1999-2000)

miles de toneladas por ao
30000 25000 20000 15000 10000 5000 0 Francia Alemania Italia Espaa Resto Euro. Total Euro. Total Africa Canad EE.UU. Mxico Cuba Resto A NyC

Azcar de remolacha

Azucar de caa

Fructuosa

Grfica 1 .- Edulcorantes en algunos pases.

De esta manera se presenta un panorama general en el cual tomando como base al azcar, el mercado para la Stevia podra resultar atractivo.

DEMANDA E IMPORTACIONES DE LAS HOJAS DE STEVIA !" Brasil es el primer productor de Amrica Latina con 1200 Ha !" Paraguay cuenta con 700 Ha !" Canad tiene un programa gubernamental de produccin de Stevia con 100 Ha

!"Japn es l mayor consumidor de azcar de Stevia desde hace 25 aos inclusive la

transnacional Coca-Cola tuvo que utilizar a usar este edulcorante natural, as mismo el 75% de sus productos hechos a base de azcar se elaboran con azcar de Stevia.

3.-Qu es la Stevia?
La Stevia es un miembro de la familia de las Compositae. Y uno de los 154 miembros del genero stevia. Depende de un tallo pequeo de 65 centmetro de alto. Las flores son pequeas (7-15 mm), de color blanco (Robinsn 1930) Esta especie se caracteriza por un pequeo rango de habitas naturales, mejor conocidos como microclimas.

La Stevia es un diploide y tiene 11 cromosomas pares que es caracterstico para la mayora de los miembros del gnero del Sur de Amrica (Frederico et al) 1996)

La Stevia es una planta perenne (es decir siempre esta verde) que produce una variedad de azcares de alto-potencial (intensos) bajos en caloras, estos se encuentran en el tejido de la hoja y en algunas partes a lo largo del tallo. Los azucares de la Stevia son ampliamente utilizados en muchos alimentos, en varios pases incluido Japn, Brasil y China.

La Stevia, es normalmente conocida, en el valle de Ro Monday en el Noroeste de Paraguay. Los conquistadores haban informado de la Stevia a Espaa durante el siglo XVI pero esta informacin permaneca oculta, hasta que atrajo de nuevo la atencin por los europeos en 1888 debido principalmente a M.S. Bertoni. Antes del descubrimiento europeo, mucho tiempo atrs, era conocida por las gentes Guarans, indgenas nativos de esa regin. El Guaran lo llam el ca-h, que significa la hierba dulce y se utiliz para endulzar las bebidas amargas.

Las hojas de Stevia contienen diterpenoides steviol-glucsidos (SGs) los cuales son:

Estevisido Rebaudisido A

Rebaudisido C Dulcosido A

Otros dos glucsidos que se encuentran presentes en el tejido de la planta son el rebaudisido D y rebaudisido E. Tambin el rebaudisido B ha sido detectado pero los estudios indican que es probable que se forme artificialmente durante el aislamiento de estos glucsidos.

Las proporciones normales (en peso w/w) de los cuatro glucsidos ms importantes son: el estevisido 5-10%, rebaudisido A 2-4%, rebaudisido C 1-2% y dlcosido A 0.51%. Ellos son 300 veces ms dulces que el azcar de caa. Se ha conocido por mucho tiempo que el rebaudisido A tiene las propiedades ms sensitivas al gusto -ms dulce- y ms marcadas de los cuatro glucsidos del steviol. Los glucsidos del steviol son estables al calor y no cambian de pH, no son fermentables y no se oscurecen al cocinar. Por consiguiente tienen una amplia gama de aplicaciones en los productos de comida. Tambin son no txicos y no mutagnicos. Por consiguiente tales compuestos pueden ser usados con xito como alternativas para pacientes que sufren de diabetes y otras enfermedades relacionadas con las perturbaciones en el metabolismo de los carbohidratos. Para lograr la extraccin del edulcorante Estevisido se logr la micropropagacin de esta planta.

4. Qu es el estevisido?
Es un glucsido que pertenece al grupo de los hidrocarburos alifticos, de los cuales dependiendo de la ausencia o presencia de ligaduras, dependen sus propiedades fisicoqumicas y toxicolgicas.

Los azcares de los diterpenos glucsidos de Stevia han sido sujetos de varias revisiones (Kinghorn y Soejarto 1985, Crammer e Ikan 1986, y Hanson y De Oliveira 1993). Aunque el inters en la qumica de los principales azucares son de fecha muy temprana de este siglo, el progreso significativo hacia la caracterizacin qumica de estos no fue hecho hasta 1931, con el aislamiento del estevisido (Bridel y Lavieille 1931a)

El tratamiento de esta sustancia con el jugo digestivo de un caracol dio las cantidades de tres moles de glucosa y una mol de steviol, mientras que la hidrlisis con cidos dieron el isoesteviol (Bridel y Lavieille 1931b) El Isosteviol tambin fue obtenido cuando el steviol estaba caliente en cido sulfrico diluido. Los estudios subsecuentes han llevado al aislamiento de otros siete glucsidos dulces del steviol (Fig.1)

En el Merk. Index (8589) al estevisido se le reporta como un agente edulcorante calorignico, Sin datos de toxicidad hasta el momento (Sigma-Aldrich, 2002)
H O H
2

H O

O O H O H H O H
2

C O O

C C H
3

O H O H O H O H O H
2

C O

O H O H O H

L a s h o ja s d e S t e v ia r e b a u d ia n a u n 6 .0 % d e e s t e v i s id o .

c o n t ie n e n h a s t a

Figura 1.- Estructura del esteviosido.

5. Cmo se logro la Micropropagacin?

En el laboratorio de Biotecnologa Vegetal se cuenta con una campana de flujo laminar donde es posible controlar las condiciones estriles de los explantes nodales, en esta campana se hacen los cortes y se transfieren a un medio asptico (ver apndice) que es elaborado en el mismo laboratorio Posteriormente estos explantes nodales se etiquetan con la fecha, de esta forma se lleva un control sobre el periodo de crecimiento, y de cuando se debe realizar un cambio del medio asptico para evitar que la planta pierda los nutrientes que el medio de cultivo le ofrece. Con la utilizacin de este mtodo (micropropagacin por sembrado in vitro) se consigue una multiplicacin libre de contaminacin. Adems con este mtodo se necesita una cantidad pequea de material para iniciar un cultivo in vitro. La Micropropagacin in vitro puede suponer elevados ahorros en combustible, espacio de invernadero, etc. Debido a la existencia de condiciones perfectamente controladas (medio nutritivo y medio fsico), que permiten una gran precisin en el calendario de la produccin de explantes nodales, se puede eliminar el efecto estacional y conseguir una produccin homognea a lo largo del ao. Todas las plantas se colocan en un cuarto o Sala de Incubacin, aqu debe tenerse muy en cuenta las instalaciones elctricas, pues las diferentes fases del crecimiento de los inculos necesitaran diferentes fotoperiodos, temperatura, intensidad lumnica, etc.; adems no puede faltar el aire acondicionado y filtrado, anaqueles para incubacin, etc.

10

Un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales es, en esencia, igual a cualquier otro laboratorio, sin embargo, las condiciones de esterilidad de ste son de fundamental importancia porque todos los medios empleados contienen nutrientes, los cuales facilitan el crecimiento de muchas bacterias y hongos. As, todos los medios, instrumentos y recipientes de cultivo deben esterilizarse para matar las bacterias y el mtodo ms comn de esterilizacin es el de vapor hmedo, por lo que se utiliza con frecuencia un autoclave, generalmente el tiempo empleado para una buena esterilizacin es de 15 minutos a una presin de 15 lb/in2 y a una temperatura de 120-1210C.

6. PRUEBAS DE TOXICIDAD En 1991 un estudio con hmster consista de tres grupos- 50 machos y 50 hembrasa los cuales se les trato por dos aos donde un grupo recibi una dosis de estevisido de 2.5 % de su dieta diaria, un segundo grupo recibi 5% de esta dieta y un tercer grupo no recibi estevisido. Despus del periodo de tiempo, sus tejidos fueron examinado al microscopio, se encontr que no haba diferencia entre los que haban recibido estevisido y los que no lo recibieron. Algo interesante fue que las hembras que tomaron estevisido decreca la incidencia de tumores, mientras que los machos presentaban una baja incidencia de dao en el rin. Meses despus, otra prueba realizada con cuatro grupos de 20 hmster-10 machos y 10 hembras- con un mes de edad. Al primer grupo se le administr una dosis diaria de 500 mg/kg de peso de estevisido, al segundo grupo 1000 mg/kg, al tercer grupo 2500 mg/kg y al cuarto grupo no se le administro nada de estevisido.

11

7. LA SEGURIDAD DE LOS AZUCARES DE STEVIA Los azcares de la Stevia tienen una larga historia de uso en Amrica del Sur y ahora en Japn y no hay reportes de efectos adversos, Pezzuto y colaboradores (1985) informaron que la actividad metablica del steviol es mutagnica, un resultado que ha sido confirmado en ms recientes estudios (Matsui et al 1996) Pero Kinghorn y Soejarto (1985) y Kinghorn (1992) dirigieron dos revisiones de la literatura relacionadas a la seguridad de los azucares de la Stevia y concluyeron que las hojas que contienen los azcares de Stevia y as como el estevisido son seguros para el consumo humano. Sin embargo, la actividad metablica del steviol que es mutagnico no se ha identificado todava y no es conocida si la activacin del steviol realmente ocurre en los humanos (Procinska et al. 1991, Matsui et al. 1996).

Las investigaciones arrojaron resultados, que dosis mayores a 2.5 g/kg de peso de cuerpo no afecta de ninguna manera el crecimiento ni la reproduccin de estos hmsters.

8. LOCALIZACIN DE LA ZONA DE CULTIVO Y DE LA NAVE INDUSTRIAL

8.1 ZONA DE CULTIVO

8.1.1 CONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE LAS PLANTAS DE STEVIA

8.1.2 HUMEDAD La exigencia de humedad es alta y de manera continua; es decir, no se debe dar la falta de agua durante las diferentes etapas de su desarrollo, de ah que la distribucin natural de este cultivo en Paraguay se observe en zonas donde las precipitaciones medias anuales son altas. (1,400 mm. a 1,600 mm.)

12

8.1.3 TEMPERATURA El buen desarrollo del cultivo se da a temperaturas menores de 20 C; en Paraguay y en las reas de desarrollo la temperatura media anual est entre 21 C y 23 C.

8.1.4 TOPOGRAFIA En cuanto a la topografa, lo ideal es un terreno no muy accidentado, con un porcentaje de pendiente menor a 5%.

8.1.5 FERTILIZANTES QIMICOS Existen formulaciones y/o combinaciones que pueden ser utilizadas en el momento de la fertilizacin qumica del cultivado de la Stevia, y una de las ms recomendadas por hectrea es: 60 Kg de Nitrgeno 60 Kg de xido de potasio 120 Kg de anhdrido fosfrico

8.1.6 DATOS CLIMTICOS DE LA ZONA DE CULTIVO De lo que se menciono anteriormente se muestra ver que el microclima de Paraguay, donde crece y se cultiva la Stevia, es muy parecida al clima que se da en ciertas regiones de Mxico, tal es el caso de Metepec, Toluca Edo. De Mxico.

Al no tenerse los datos de Temperatura promedio de Metepec, lo que hicimos fue mostrar la grafica 1 sobre otros municipios cercanos y observamos que se alcanzan temperaturas mximas de 230C aproximadamente, as como temperaturas mnimas de 100C, por lo que la planta de Stevia no tendra problemas de adaptacin en cuanto a la Temperatura.

13

De la Fig. 2 a) lo que mostramos son las precipitaciones pluviales anuales que se da en distintos municipios de Toluca y en cuanto a Metepec vemos que se encuentra en una regin donde las precipitaciones varan entre 800 Y 1200 mm de agua anualmente.

Adems la zona no es accidentada y el relieve es menor a 5%, lo que evitara zonas con exceso de humedad, y as no tener problemas de pudricin o de enfermedad de las plantas de Stevia, lo que reducira perdidas en la cosecha.

METEPEC

Figura 2. - temperatura promedios de las zonas adyacentes a Metepec, as como la ubicacin de la que es una zona probable para el cultivo de la Stevia.

8.1.7 DATOS GENERALES SOBRE LA ZONA DE CULTIVO El terreno consta de 200 Ha: la cual solo es una expectativa de la cantidad inicial del cultivo, porque lo que creemos, al ser una compaa grande se espera contar con ms hectreas de cultivo para tener una ganancia an mayor. Mano de Obra: Al ser una zona poblada, adems de ser una zona de cultivo, no creemos tener dificultades para encontrar gente para el trabajo de cultivo de la Stevia, lo que generara nuevas fuentes de trabajo.

14

Servicios con los que cuenta o Agua o Electricidad o Drenaje o Vas de comunicacin o Fcil acceso.

8.1.8 UBICACIN DEL TERRENO DE SIEMBRA

Latitud Cabecera Norte

Latitud Oeste Altitud

Grados Min Grados Min Metros

Metepec

19

15

99

36

2,610

Tabla 1.- Ubicacin de la zona de siembra.

Se encuentra cerca de Toluca y de la Nave Industrial a 12 Km, por lo que el transportar ya sea las hojas secas o la cosecha de Stevia sera rpida

8.1. 9 SUB-ARRENDAMIENTO DE TERRENO DE CULTIVO Usaremos el mtodo que tienen algunas compaas que utilizan productos naturales en la elaboracin de sus productos (Barcel), y es que en nuestro caso, despus de haber logrado la Micropropagacin por sembrado in vitro lo que haremos es rentar terrenos de cultivo, y as lograremos una reduccin en nuestra inversin inicial. Equipo y recursos El equipo constara con un laboratorio de Micropropagacin para el sembrado in vitro de la Stevia Para lograr la Micropropagacin por sembrado in vitro y su posterior sembrado a tierra, se contar con el personal con conocimientos en Biologa, para el trabajo a nivel laboratorio en cuanto a la micropropagacin por sembrado in vitro de la Stevia, y as tener mayor cantidad de materia prima para iniciar el sembrado en tierra frtil de la Stevia.

15

9. NAVE INDUSTRIAL Debido a la zona de cultivo ubicada en Metepec, Estado de Mxico, se ha pensado en la necesidad de ubicar la planta industrial en un lugar estratgico como Toluca, Estado de Mxico que ofrece las siguientes caractersticas, a travs de sus parques industriales:

PARQUE INDUSTRIAL TOLUCA 2000

Tabla 2. Ubicacin del parque industrial

Equipamiento industrial
Energa elctrica (kVA/ha) Subestacin elctrica Red de gas Planta de tratamiento de agua Agua potable (l/seg/ha) 400 Drenaje Pluvial (l/seg/ha) SI Drenaje sanitario (l/seg/ha) 72 0.4

NO Descargas industriales (l/seg/ha) 0.4 SI Espuela de ferrocarril 0.5 NO

Urbanizacin
Camino de acceso (m) Guarnicin (%) Banquetas (%) Pavimentacin (%) Alumbrado Pblico 0 100 100 100 SI Tabla 3. Ciudades ms cercanas Nomenclatura de calles Sealizacin Mobiliario urbano reas verdes SI SI SI SI

Distancia a las ciudades ms cercanas

Ciudad Al centro de la ciudad DISTRITO FEDERAL NAUCALPAN TOLUCA Km 10 50 52 10

16

Tabla 4. Puertos cercanos

Distancia a los puertos ms cercanos

Puerto VERACRUZ ACAPULCO ZIHUATANEJO km 520 480 356

Tabla 5. Unidades habitacionales

Distancia a zonas habitacionales

Zona habitacional CONJUNTO SAN JOSE TOLUCA METEPEC km 3 10 12

Tabla 6. Servicios publicos

Servicios de Apoyo
Asociacin industriales Vigilancia Oficina administracin de SI SI de SI Bancos reas recreativas Restaurantes Hoteles rea comercial Aduana interior NO SI SI NO SI NO Guardera Servicios mdicos SI NO

Sala de eventos especiales NO Mantenimiento SI Sistema contra incendio SI Estacin de bomberos Gasolinera NO NO

17

10. PROCESO DE OBTENCIN DEL EDULCORANTE

10.1 PARTE EXPERIMENTAL Para llevar a cabo la extraccin del edulcorante a nivel laboratorio se procedi de la siguiente manera:

Proceso de secado:

Por lo general el termino secado se refiere a la eliminacin de humedad en una sustancia. Por ejemplo, un slido hmedo, como madera, tela o papel puede secarse por evaporacin de la humedad ya sea en una corriente de gas o sin el beneficio del gas para acarrear el vapor. Se cont con hojas de la Stevia Rebaudiana B. las cuales se secaron con una balanza de humedad a una temperatura de 35oC por un periodo de tiempo de 2 horas, esto con el fin de calcular la masa en base seca. Los datos experimentales se muestran en el apndice J

Molienda de las hojas Este proceso se lleva a cabo con la ayuda de un mortero y pistilo hasta obtener un polvo muy fino que se tamizo con un tamao de malla No. 5 el cual se mezclara con el solvente de extraccin que fue metanol

10.2 EXTRACCIN i) Extraccin del estevisido por medio del Soxhlet.

Las hojas de Stevia ya secas, molidas y tamizadas (1 g) se colocan en un cartucho y se coloca dentro del Soxhlet, as mismo en el matraz de bola se tiene metanol puro al 100%. (Bondarev, et.al 2000 ) y este proceso de extraccin se hace por periodos de tiempo cortos al da ( 4 hrs.) vease apndice extraccin del estevisido con metanol por Soxhlet

18

Una vez que se tiene el concentrado (aproximadamente 150 ml), se coloca en un rotavapor, para as tener un residuo, este procedimiento se lleva a cabo a 700C. Al tener este ser analiza por medio del HPLC, y as conocer las cantidades de estevisido encontrado en la cantidad de hoja utilizada para este experimento.

10.3 IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACION DE LAS MUESTRAS OBTENIDAS POR LA EXTRACCIN CON METANOL

Anlisis de los SGs por HPLC Las muestras son analizadas con un aparato cromtografico (Agilent serie 1100) con calibracin de 10-ml y deteccin a 210 nm, las muestras son cromatografiadas con una columna (Zorbax para carbohidratos ) Para saber el contenido de estevisido en las hojas de Stevia, se inyecta una cantidad conocida al HPLC y el pico que aparece se clcula el rea bajo la curva con ayuda del software.Los cromatgramas se mostraran ms adelante, para as compararlo con los estndares que tambin sern analizados (ver apndice I)

FIGURA 3 .- Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin HP.

19

10.4 RESULTADOS
10.4 .1 SECADO

Peso de la hoja fresca de Peso de la hoja seca de Stevia (mg) a T = 350C Stevia (mg). 18.0 7.5 28.0 11.0 46.0 13.0 55.0 15.6 77.0 18.0 90.0 21.0 106.0 25.2 125.0 26.5 160.0 32.5
Tabla 7.- Peso seco obtenido por medio del TGA ( anlisis termo-gavimtrico)

Grfica 2.- Representacin grfica de la tabla 11, teniendo un comportamiento lineal.

20

RESULTADOS

10.4.2 EXTRACCIN DEL ESTEVIOSIDO USANDO METANOL AL 100% Peso de la hoja seca de Stevia (mg) Cantidad de estevisido (g/hoja seca) 18 1800 30 2850 36 3250 39 3700 Tabla 8.- Cantidad de estevisido obtenido por medio del HPLC, una vez calculado el rea bajo la curva que se tiene en el Cromatgrama.

Grfica 3.- Representacin grfica de la tabla 12, teniendo un comportamiento aproximadamente lineal.

21

10.5 ANLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIN DEL EDULCORANTE CON METANOL.

En el proceso de secado observamos un periodo de secado decreciente sin embargo el proceso es llevado a temperaturas bajas pues se tienen hojas con alto contenido de humedad (78%) y las temperaturas altas podra daar el producto, y as se tiene que el secado para un 5% de humedad tarda 1.7 hrs. a T= 35 0C. Al cabo de este tiempo se tiene un peso total de hoja seca de aproximadamente 25 % de peso seco con respecto al peso hmedo de hojas de Stevia.

As mismo en la segunda grfica se observa que el % de estevisido total obtenido de las hojas secas es de aproximadamente el 9%, sin embargo en la literatura se destaca el hecho de que este porcentaje varia de acuerdo al tipo y genero de la planta, y en este proyecto se cuantifico las plantas desarrolladas por micropropagacin en el laboratorio de biotecnologa vegetal.

Sin embargo en este

proceso se utiliza metanol al 100% como solvente de

extraccin y esto implicara reducir en el proceso industrial al metanol hasta la medida permisible (200 ppm), adems de que resultara extremadamente caro el proceso por la cantidad de metanol a utilizar, por lo que se pretende buscar una alternativa que sea ms barato, libre de solventes txicos, fcil de adquirir y minimizar el riesgo de utilizar un componente altamente voltil.

Una alternativa es la extraccin con fluido supercrtico el cual es un proceso libre de solventes orgnicos, que resultan ser no txicos, no flamables, fcil de adquirir y barato, por ende se sigui la investigacin de este proceso.

22

11. EXTRACCIN CON FLUIDOS SUPERCRITICOS

La extraccin con fluidos supercrticos (SCE) en ingles (SFE) es un proceso de separacin que hace uso del poder de solvatacin de ciertos fluidos cuando estos se encuentran por encima de sus condiciones crticas tanto presin como temperatura, para fraccionar mezclas de compuestos o separar compuestos orgnicos de componentes inorgnicos.

Este proceso maximiza la recuperacin y la calidad del material extrado, adems de minimizar los costes energticos, debido a que es ms rpido y selectivo que los mtodos convencionales de separacin. Es altamente efectivo para aplicaciones en los procesos qumicos, farmacuticos, alimentarios, en la eliminacin de residuos y en la industria del petrleo.

Los fluidos supercrticos, poseen propiedades intermedias entre las correspondientes a gases y lquidos: alta difusividad y alta viscosidad junto con su alto poder de solvatacin. Aquellos solventes con temperatura crtica debajo de 373 0K tienen que ser tambin investigados. Un solvente particularmente deseable, y es particular para el extracto de qumicos indeseables, valiosos, o sensible al calor de los productos naturales como alimentos, es el Dixido de carbono con una moderada presin critica una alta densidad critica y una temperatura critica cercana a la temperatura ambiente.

23

11.1 QUE ES EL CO2 SUPERCRITICO?

El Dixido de carbono lo encontramos en su estado natural como un gas y est en su estado de fluido supercrtico cuando ambos presin y temperatura son iguales o exceden el punto critico de 310C y 73 atm. De esta forma el estado supercrtico del CO2 tiene cualidades como gas y como lquido. Y es esta caracterstica dual la que provee las condiciones ideales para extraer compuestos con un alto grado de recuperacin en un corto periodo de tiempo.

Como dixido de carbono es inflamable, no corrosivo, no toxico en bajas concentraciones, muy disponible, barato y seguro es el solvente mas utilizado en la industria. La separacin del dixido de carbono del soluto es siempre posible por una simple reduccin de la presin del extracto. Algunas de las aplicaciones en las que el dixido de carbono supercrtico ha sido utilizado son: la de extraer la cafena del caf, la piperina de la pimienta, la capsina de los chiles, aceites de la nuez de moscada y la nicotina del tabaco.

Los equipos importantes que conforman un proceso de extraccin supercrtica y su operacin es la siguiente: primeramente tenemos al extractor (contiene las semillas o lpulos para que los saborizantes o aceites sean extrados), el compresor (para recircular el dixido de carbono), la vlvula de reduccin de presin (para reducir la presin del gas), y finalmente el separador. (Para recolectar el saborizante o el aceite extrado y separar el dixido de carbono). En la operacin del proceso de extraccin, el dixido de carbono es comprimido a la presin seleccionada, por ejemplo: 4000 psi (272.19 atm) y la temperatura puede ajustarse a 500C, ya que a estas condiciones es un fluido supercrtico.

24

Procesos a gran escala usando Extraccin con fluidos supercrticos (SCE)

Productos naturales Aceite de rosas Extraccin de aceites esenciales Saborizantes y fragancias Extracto de nicotina Extraccin de pigmentos naturales Productos farmacuticos Produccin de drogas sintticas Separacin de isomeros Purificacin de drogas(por tica) Enzimas catalizadoras de reacciones Remocin de solventes residuales Cristalizacin de micropartculas de drogas Limpieza Componentes electrnicos Partes de precisin Polmeros Terminacin de fibras textiles Solventes residuales y monmeros para polmeros Reacciones qumicas y sntesis de polmeros Monmeros para empaques

Alimentos Extracto de lpulo Descafeinizacin El colesterol de la mantequilla cidos grasos de la cebada El extracto del aceite de semilla Textiles El tinte con SCE

Lanolina de lana y cuero

El chaleco tejido de estambre se tio usando SCE. Nutraceuticos Licoponas Beta carotenos Biosaborizantes

25

11. 2 Extraccin del estevisido por medio del extractor con fluido supercrtico.

Se utiliz un extractor de extractor de fluido supercrtico SFX-2-10, que se encuentra en la UNAM, en el rea de alimentos, bajo la asesora del Dr. Eduardo Barzana y la Dr. Sandra Prez. (ver apndice E).

Datos experimentales obtenidos en un aparato de extraccin supercrtica para el caso de la Stevia Los resultados se muestran en el apndice , variando presin y temperatura para as conocer cual es el mximo porcentaje de recuperacin obtenido por la extraccin supercrtica, estos anlisis se muestran en la grafica siguiente:

Cantidad de estevisiodo recuperado en las hojas de Stevia

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0

40 30 20

50

60

70

80

90 100 110 120

% de recuperacin

10

Tiempo de extraccin (min)

Grfica 4. La muestra a la cual se le extraer el estevisido contiene 0.5 mg de hojas de 0 Stevia con las siguientes condiciones: T = 40 C y P = 368 atm con fluido de extraccin supercrtica (CO2)

26

11. 3 ANLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIN DEL EDULCORANTE CON FLUIDO SUPERCRITICO. En este experimento se obtuvo que la presin ideal de extraccin para la mxima recuperacin de esteviosido fue de 368 atm, y a una temperatura de 40 0C, a un tiempo de 2 hrs, para conocer la cantidad mxima de esteviosido extrado, sin embargo despus de un tiempo de 90 min se determino que el porcentaje de recuperacin mxima fue de 88.4 % de estevisido.

12. PROCESO

12.1 PROCESO DE OBTENCIN DEL ESTEVIOSIDO Este importante edulcorante se obtena anteriormente por una extraccin con metanol. Sin embargo, este solvente deja residuos que pueden causar serios daos a la salud, otro mtodo es el intercambio inico el cual resulta un tanto complejo por tratar de encontrar la resina adecuada para dicha separacin.

12.2 Materia Prima

La principal materia prima son las hojas de estevia, las cuales se obtendrn de la tcnica de micropropagacin y la posterior sembrado a tierra. Se pretende cultivar 200 Ha para que la inversin sea redituable y con una recuperacin a un tiempo razonable.

27

12.3 Proceso propuesto

El proceso que a continuacin se propone, est basado en la recuperacin del estevisido con dixido de carbono supercrtico sustentada en un extractor de lecho fijo.

DIAGRAMA DE PROCESO
agua

Justificacin: El dixido de carbono puede llegar a ser un buen disolvente si se utiliza a

condiciones supercrticas, es decir superior a 73.5 atm y 32.5 0 C , por lo cual se utiliz una presin de 400 atm y una Temperatura de 50 0C, pues este gas no es toxico, ni flamable adems del hecho de ser barato, adems el hecho de ser un proceso simple, limpio y libre de algn tipo de solvente orgnico.

28

12.4 CROQUIS DE LA PLANTA INDUSTRIAL

E1= Extractor 1 S1= Separador 1

TANQUES DE CO2

S1

E1

29

13. CAPACIDAD A INSTALAR, MONTO DE LA INVERSIN, Y CAPITAL DE TRABAJO. La planta esta diseada para producir 111 ton/ao de estevisido pensando en cubrir la demanda del pas y exportar en caso necesario.

Monto de inversin: Inversin fija : Capital de trabajo Inversin Total:

17,000,000 de Dlares 27,000,000 de Dlares 10,000,000 de Dlares 37,000,000 de Dlares

La tasa interna de retorno esta dada por: ganancia por ao inversion total 32, 000, 000 37000, 000

Tasa de retorno =

Tasa de retorno =

Tasa de retorno = 0.865

estos es indicativo que la inversin se recuperar en poco tiempo ( ver anexos de Excel).

30

13.1 Personal
Personal Actividad Personal .- Alimentar al extractor y supervisar la temperatura y la presin as como el flujo .- Supervisar los intercambiadores de calor (flujo, presin, temperatura, bombas y compresores del proceso, as como el separador -Supervisas la bomba de desplazamiento, el extractor, las vlvulas, as como el separador

Obreros

Tcnicos

Mantenimiento

.-Limpieza de oficinas y espacio de la planta .-Limpieza del equipo de la planta

Nmero de empleados en la planta

Mano de obra Operador Laboratorista Almacenista Obrero general Jefe de mantenimiento Ingeniero de turno Administrativos Vigilante Secretarias Importe total Personas por turno 2 1 2 3 1 1 3 2 3 Nmero de turnos 3 3 3 3 3 3 1 3 1 Total de personas 6 3 6 9 3 3 3 6 3 42 Sueldo diario 111.69 148.92 74.46 74.46 223.38 297.84 260.61 74.46 111.69 Sueldo anual 40766.85 54355.8 27177.9 27177.9 81533.7 108711.6 95125.65 27177.9 40766.85 502791.15

31

La organizacin de la compaa se presenta a continuacin

Organigrama de la planta Gerente general Gerente de vantas Agente de ventas Agente de compras Secretaria Gerente de personal Contador Secretaria Mantenimiento Ingeniero de planta Tcnicos Obreros Secretria Ayudante general Laboratorista

13.2 Costos de produccin Los costos de la produccin se cuantifican sumando los costos anuales del dixido de carbono, y las hojas de Stevia;

MATERIA PRIMA Hojas de Stevia Seca Dioxido de carbono

CANTIDAD ton/ao 1400 600

PRECIO $/ton 1000 10000

COSTO $/ao 1,400,000.00 6,000,000

Tabla 3-. Costo de produccin anual que se requieren para la produccin de 111 ton de estevisido.

32

Los costos de servicios se calcularon como un porcentaje del costo total de instalacin para cada uno de los equipos, por lo que sumando los costos de cada equipo se obtiene el total siguiente.
Costos de servicios Cserv= 268,666

sumando los costos de mano de obra

Costos de mano de obra Cmano= 54,000

se tiene un valor de produccin de:

Costos de produccin Cproduc= 10,147,658 USD

13.3 Ganancia/ ao Cantidad Ton/ao 111.38 Precio $/ton 300,000 Ganancia $/ao 33,415,200

Producto Estevisido

Tabla 4.- Como se observa en la tabla, la ganancia anual es redituable comparado con la inversin fija, es decir se puede recuperar el costo de la inversin en un periodo de tiempo corto.

33

14. RESULTADOS DEL DISEO 14. 1 CARACTERSTICAS DEL EQUIPO UTILIZADO EN EL PROCESO

Condensadores

Como el nombre lo indica un condensador de vapor es un dispositivo en el cual el vapor es condensado. El calor latente que cede el vapor en el proceso de condensacin, lo recibe el refrigerante, constituido por agua. El vapor que entra en un condensador sale en forma de condensado, mientras que la temperatura del agua refrigerante que pasa a travs de l condensador es mayor a la salida que a la entrada.

Tanques de almacenamiento Son receptculos empleados para retener transportar o almacenar lquidos y gases. por lo comn, se obtiene el costo mnimo con una forma cilndrica horizontal y el fondo relativamente plano al nivel del terreno. El diseo preliminar de un tanque de almacenamiento es directo y elemental solo se necesita saber su tamao, temperatura, presin y condiciones de exposicin. a causa de sus grandes superficies, los tanques de almacenamiento no pueden sostener diferencias de presin apreciables, la presin se libera automticamente en los tanques que tienen techos flotantes los cuales pueden moverse libremente. Los tanque elevados pueden proporcionar un flujo grande cuando se requiere pero las capacidades de bombeo no deben de ser de ms del flujo promedio. en esta forma es posible ahorrar en inversiones de bombas y tuberas. un medio eficiente de evitar las perdidas por ventilacin es el utilizar un tanque de volumen variable.

34

Bombas La mayora de los procesos en las industrias de procesos qumicos incluyen la conduccin de lquidos o transferencia de un valor de presin o de energa esttica a otro, la bomba es el medio mecnico para obtener esta conduccin o transferencia. Las ventajas primordiales en el uso de bombas centrfugas son: la simplicidad, el bajo costo inicial, el flujo uniforme ( sin pulsaciones), el pequeo espacio necesario para su instalacin, los costos de mantenimiento y su capacidad de adaptacin para su uso con impulsor de motor o turbina.
14.2 LISTA DE EQUIPOS DEL PROCESO Equipos Compresor Calentador Extractor de acero inoxidable 316L cantidad 1 2 1 Funcin Circulacin de aire atmosfrico a una presin de 2 atmsferas elevar la temperatura del dixido de carbono antes de entrar al extractor. Esta soportara las presiones altas y as llevara a cabo la extraccin con fluido supercrtico. alimentar agua al condensador a la salida del separador. Para secar las hojas de Stevia. Separa el dixido de carbono del slido (estevisido) almacenar, butano, maleico, agua y acetona Esta bomba es para elevar la presin del dixido de carbono a temperaturas bajas. Esta servir para moler las hojas de Stevia remover calor para hacer liquido al dixido de carbono.

Bombas Secador rotatorio Separador Tanques de almacenamiento Bomba de Desplazamiento positivo con cabezal enfriado Molino de rodillo liso Condensador

1 1 1 4 1

1 2

35

APNDICE A Preparacin de las soluciones para medio MS(MURASHIGE SCOOK) Solucin de fierro-EDTA(10x) en 1000mL.

1. Disolver 5.75 g de FeSO4.7H2O en 350 mL de agua, aplicando calor si es necesario. 2. Disolver 7.45 g de Na2EDTA en 350 mL de agua, aplicando calor si es necesario. 3. Cuando ambas soluciones se hayan disuelto, combinarlas y aforar todo a 1000 mL, conservar en frasco mbar y refrigerarlo. 4. Use 5 mL por litro de medio MS(Murage Skoch) Solucin de macronutrientes MS(10x), g/L. COMPUESTO KNO3 NH4NO3 MgSO4.7H2O CaCl2 2H2O KH2PO4
.

MASA POR LITRO 19.00 16.50 3.70 4.40 1.70

Solucin de micronutrientes MS(100x), mg/100mL. COMPUESTO H3Bo3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O MASA POR LITRO 620 2230 860 25 2.5 2.5

Solucin de vitaminas (100x), mg/100mL. COMPUESTO cido nicotnico TiaminaHCl Piridoxina HCl Mio-Inositol MASA POR LITRO 50 50 10 1000

36

Medio de cultivo en medio MS (1000 ml) El medio de cultivo que se utilizo para llevar a cabo la siembra de los explantes de Stevia, esta compuesto de las siguientes soluciones, con el fin de proporcionar a la planta un sistema rico en nutrientes, vitaminas y minerales para su buen crecimiento. Solucin Agua Macronutrientes Micronutrientes Vitaminas Fierro EDTA Solucin Sacarosa cido Indolbutrico Phytagel Volumen(mL) 400 50 10 10 5 Masa(g) 10 0.01 2.5

PROCEDIMIENTO: En un matraz Erlenmeyer de 2L, se mezclan todos los compuestos de la solucin antes mencionados en las tablas anteriores, la solucin debe estar en continua agitacin, para tener una mezcla bien integrada. El AIB se debe disolver en Hidrxido de Sodio con una concentracin (1N) antes de agregarlo a la solucin. Se debe medir el volumen de la solucin agitada, para posteriormente aforar al volumen requerido. Medir el pH de la solucin el cual debe estar en un valor de [5.8] es decir ajustar el medio. Agregar el Phytagel despus de medir el pH, a continuacin se pone a calentar la solucin, hasta que hierva por un tiempo de 5 min aproximadamente, se deja enfriar por otros 5 min. El Phytagel se usa con el fin de obtener un medio de cultivo slido para el sembrado de la Stevia. Una vez fra la mezcla se coloca en tubos de ensaye, los necesarios de acuerdo al volumen de 1000 mL. Se procede a esterilizar en autoclave. La operacin se lleva a cabo hasta una presin de 1 (Pa), despus de lograr esto se deja por un tiempo de 15 minutos y se apaga el autoclave.

37

APNDICE B EQUIPO DE SECADO

Utilizando TGA a 35 C se obtuvo la siguiente curva de secado.

Temp.: 10 0C hasta 200 0C. Estabilidad: 0.15 0C Dimensiones: 140 * 410 * 435 mm Peso : 15.2 kg

Curva de secado
Hmedad (kg humedad/kg de slido seco)

5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 tiempo (hr) 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8

Grfica 5.-. La correspondiente grfica representa la humedad en base seca, as mismo el periodo de secado se comporta de manera decreciente con respecto al tiempo, del cual se logro el secado de las hojas de Stevia hasta un 5% de humedad.

38

APNDICE C Cuantificacin de la cantidad de estevisido por medio de soxhlet

Las hojas de Stevia secas (1 g) son mezcladas con metanol puro por tres horas en un Soxhlet, utilizando un cartucho de 50 ml. El extracto se concentr en un rotavapor y el residuo se trato por la tcnica de HPLC(High Performance Liquid Chromatography), esto con el fin de identificar al estevisido. Las condiciones de operacin en el Soxhlet se llevo a cabo a T= 35 0C utilizando 150 ml de metanol puro. Las condiciones en el rotavapor fueron a T= 80 0C,

Fig4.- Equipo de soxhlet y rotavapor utilizados para la extraccin del estevisido.

39

APNDICE D

Anlisis de las muestra obtenidas por medio del HPLC.

Las muestras obtenida son analizadas con un aparato cromatogrfico (Aligent serie 1100) con calibracin de 10 l con deteccin a 210 nm, la columna empacada (Agilent ZORBAX a 5 m) se utiliza pues esta diseada especialmente para azucares con las siguientes caractersticas del equipo: Compartimiento termostatico de columna. Calentamiento y refrigeracin Peltier desde 10% bajo Tamb., hasta 80 0C. Soporta tres columnas de 30 cm. Dos intercambiadores de calor y contribuyen con volmenes de solo 3 y 6l. Modulo electrnico. Vlvula opcional de alta calidad. Temp.: 100C hasta 80 0C. Estabilidad: 0.15 0C. Presin : 0.8 0C. Dimensiones: 140 * 410 * 435 mm Peso : 10.2 kg Todas la muestras estn a las condiciones siguientes: #" Fase mvil : Acetonitrilo al 75% #" T: 30 0C #" Velocidad de flujo : 1.4 ml/min #" Inyeccin de la muestra: 5 ml.

Inyeccin de la muestra

Columna empacada (Agilent ZORBAX a 5 m)

Figura 5.- HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Agilent serie 1100, con columna empacada Agilent ZORBAX 5 m

40

APNDICE E Cromatgramas de los Estndares de azcares

Cromatgrama 1-. Estndar de Glucosa, indicando que este azcar se detecta a un tiempo de retencin de 13.30 mi n, este nos dar una comparativa con los cromatgramas de las muestras que sern analizadas posteriormente, utilizando diferentes cantidades de hoja seca de Stevia.

Cromatgrama 2-. Estndar de Stevia + azcar refinada de caa, donde el estevisido es el que tiene el tiempo de retencin de 9.70 min.

Cromatgramas de las muestras de las hojas de Stevia utilizando extraccin del estevisido por medio del Soxhlet.

41

Cromatgrama 3-. Estndar del estevisido donde su tiempo de retencin(tR) de 9.68 min, utilizando algn mtodo numrico se calculara el rea bajo la curva, teniendo as la cuantificacin de la cantidad de estevisido encontrado en la extraccin de la hoja de Stevia( peso seco =18 mg).

Cromatgrama 4-. Estndar del estevisido con un peso seco de 30 mg, sin embargo aparecieron dos picos, el del tR = 13.30 pertenece a la glucosa, el otro pico a tR = 9.08 pertenece a la sacarosa,

Cromatgrama 4-. Estndar del estevisido con un peso seco de 39 mg, apareciendo nuevamente la sacarosa.

42

APNDICE F

Extraccin con Fluido Supercrtico

Extractor de fluido supercrtico SFX-2-10 Especificaciones del extractor Rango de Temperatura: Desde T ambiente hasta 150 0C estable 10C. Presin Mxima: 10,000 psi (dispositivo de control de seguridad 12,500 psi 750 psi) Cartuchos para muestreo: Cartucho de acero inoxidable de 0.5 ml (DI= 6.9 mm), 2.5 ml (DI= 7.6 mm) Restrictor proporcionado: capilar de acero inoxidable Recipiente de recoleccin: DI= 113 y 20 mm (8 y 30 ml) de tronollo enrroscable Requerimientos de poder: 110/117/234 VAC, 50/60 Hz, 820 watts mximo. Peso: 10 kg

Fig 6.- Equipo utilizado en la UNAM, bajo la asesoria del Dr. Eduardo Barsana

43

APNDICE G Datos experimentales obtenidos en un aparato de extraccin supercrtica para el caso de la Stevia Se utilizo muestras pequeas para conocer cuales serian las condiciones optimas de extraccin para la recuperacin mxima de esteviosido contenido en las hojas de Stevia. Se vario la presin desde la presin critica del dixido de carbono (73.5 atm ) hasta 400 atm y se observo que la mxima recuperacin era de 88.4 % a una temperatura de 400C. As mismo se vario la temperatura sin embargo se observo que la temperatura deban ser bajas pues esta al incrementarse disminua el porcentaje de recuperacin.
In f u e n c ia d e la p r e s i n s o b r e e l p o r c e n t a je d e r e c u p e r a c i n d e l e s t v io s id o

1 0 0 9 0 8 0

R e c u p e r a c

7 0 6 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 0 5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0
(a tm

2 5 0
)

3 0 0

3 5 0

4 0 0

P r e s i n

Grfica 6 .- Efecto de la recuperacin con respecto a la presin superior a la presin critica del dixido de carbono
In flu e n c ia d e la te m p e r a tu r a e n la re c u p e ra c i n d e l

e ste v i sid o

1 0 0 9 0 8 0 R e c u p e r 7 0 6 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 4 0
T e m p e r a tu r a ( o C )

C 1
8 0 1 0 0

Grfica 7.- Comportamiento de la recuperacin del esteviosido con respecto a la temperatura.

44

APNDICE H

SEGURIDAD

STEVIA REBAUDIANA BERTONI

- - - - - - - - - IDENTIFICACIN QUMICA- - - - - - - - - CATALOGO #: NOMBRE: S5381 HOJAS STEVIA REBAUDIANA BERTONI

- - - - - COMPOSICIN/INFORMACION DE INGREDIENTES - - - - - CAS #:NINGUNO

- - - - - - - - - IDENTIFICACIN DE RIESGOS- - - - - - - - ETIQUETA DE DECLARACIONES PREVENTIVAS PRECAUCIN: EVITE CONTACTO E INHALACIN.

- - - - - - - - - - MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS- - - - - - - - - - SI TRAGO, LAVE LA BOCA CON AGUA PROCURE QUE LA PERSONA ESTE CONSCIENTE. LLAME A UN MEDICO. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL, LAVE CON CANTIDADES COPIOSAS DE AGUA. POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS. QUITE LA ROPA CONTAMINADA Y LOS ZAPATOS. LLAME A UN MEDICO. SI ES INHALADA, REMUEVA CON AIRE FRESCO. SI RESPIRA CON DIFICULTAD LLAME A UN MEDICO.

45

EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS, LAVE CON CANTIDADE COPIOSAS DE AGUA POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS. ASEGURE EL LAVADO ADECUADO SEPARANDO LOS PARPADOS CON LOS DEDOS. LLAME A UN MEDICO.

- - - - - - - - - MEDIDAS DE LUCHA CONTRA EL FUEGO- - - - - - - - - MEDIOS DE EXTINCIN ROCIO DE AGUA. DIOXIDO DE CARBONO, POLVO QUMICO SECO O UNA ESPUMA APROPIADA. PROCEDIMIENTOS ESPECIALES DE LUCHA CONTRA EL FUEGO ROPA DE PROTECCIN QUE CONTENGA EL USO DE UN APARATO RESPIRATORIO AUTONOMO PARA PREVENIR EL CONTACTO CON LA PIEL Y LOS OJOS.

. - - - - - - - - MEDIDAS DE DESCARGO ACCIDENTALES- - - - - - - - ROPA CON EQUIPODE PROTECCIN. BARRA Y PONGA EN UNA BOLSA PARA DISPOSICIN DE DESECHOS. EVITE EL POLVO QUE SUBE. VENTILE EL AREA Y LAVE EL SITIO DEL DERRAME, DESPUES DE HABER RECOGIDO EL MATERIAL COMPLETAMENTE.

. - - - - - - - - - - MANEJO Y ALMACENAMIENTO- - - - - - - - - - REFERIDO A LA SECCIN 8.

- - - - - - CONTROL DE EXPOSICIN/PROTECCIN PERSONAL- - - - - ROPA APROPIADA NIOSH/MSHA-RESPIRADOR APROPIADO, GUANTES

RESISTENTES A LOS QUMICOS, LENTES DE SEGURIDAD Y OTRA ROPA PROTECTORA

- - - - - - - PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS - - - - - - -

46

LA APARIENCIA Y OLOR HOJAS VERDES Y CAFES

- - - - - - - - -ESTABILIDAD Y REACTIVIDAD - - - - - - - - ESTABILIDAD ESTABLE. PELIGRO DE POLIMERIZACIN NO OCURRE

- - - - - - - - - INFORMACIN TOXICOLOGICA - - - - - - - EFECTOS AGUDOS PUEDE SER DAINO POR INHALACIN, LA INGESTIN O ABSORCIN POR LA PIEL. PUEDE CAUSAR IRRITACIN. LAS PROPIEDADES TOXICOLOGICAS NO HAN SIDO COMPLETAMENTE INVESTIGADAS.

. - - - - - - - - - INFORMACIN ECOLOGICA - - - - - - - - - LOS DATOS NO ESTAN DISPONIBLES TODAVIA.

. - - - - - - - - - CONSIDERACIONES DE LA ELIMINACIN- - - - - - DISUELVA O MEZCLE EL MATERIAL CON UN COMBUSTIBLE SOLVENTE Y QUEME EN UN INCINERADOR QUMICO EQUIPADO CON UN DISPOSITIVO DE POST-COMBUSTIN Y LIMPIADOR. OBSERVE TODAS LAS REGULACIONES FEDERALES, ESTATALES Y LOCALES MEDIO AMBIENTALES.

- - - - - - - - - - INFORMACIN DEL TANSPORTE- - - - - - - - AVISE A LA COMPAIA SIGMA-QUMICA PARA LA INFORMACIN DE TRANSPORTE.

47

- - - - - - - - - INFORMACIN REGULATORIA- - - - - - - - - INFORMACIN EUROPEA

PRECAUCIN: LA SUBSTANCIA NO ESTA PROBADA TOTALMENTE.

SECCIN 16. - - - - - - - - - - OTRA INFORMACIN- - - - - - - - - - - SE CREE QUE LA INFORMACIN ANTERIOR ES CORRECTA PERO, PERO NO PRETENDE QUE SEA TODO INCLUIDO. Y SOLO SE USARA COMO UNA GUIA. SIGMA-ALDRICH FLUKA NO SE HARA RESPONSABLE POR CUALQUIER DAO QUE RESULTE DE MANEJAR O TENER CONTACTO CON EL PRODUCTO ANTERIOR.

48

Los compuestos y sus caractersticas Aire: Desempea un papel muy importante en la naturaleza; es indispensable para la vida de todos los seres , permite la combustin y la respiracin; es el vehculo del sonido. Lo utiliza la industria tanto como en materia prima para muchas reacciones, tal como la oxidacin parcial del butano como benceno, materiales como en este caso hojas de Stevia. El aire cuyo peso molecular cuyo peso molecular es 28.97 g/mol es un fluido transparente, inodoro, inspido y elstico, mal conductor del calor y la electricidad especialmente cuando esta ionizado. El aire esta compuesto bsicamente por: as mismo para el secado de muchos

Nitrgeno Oxgeno Argn Dixido de carbono Nen Helio Metano Kriptn Oxido Nitroso Hidrgeno Xenn

78.084 % 20.947 % 0.934 % 0.0314 % 0.0018 % 0.0005 % 0.0002 % 0.0001 % 0.00005 % 0.00005 % 0.0000087 %

49

Dixido de carbono: El Dixido de carbono se puede preparar por la oxidacin total de cualquier

compuesto orgnico; por calentamiento de algunos carbonatos, por la accin de un cido sobre un carbonato etc. Es un gas incoloro, inodoro e inspido, es moderadamente soluble en agua ; 100 g H2O disuelven 0.154 g de C0 a 25 C

PM (g/mol) P.f. (C y 5.2 atm) Sublima a (K) Temperatura crtica (K) Presin critica (atm) Calor de fusin (kcal/mol g)

44.01 217.5 195 304.2 72.9 1.99 393.6 1.53 1.976 914

Calor de formacin(kj/mol) a 25oC Peso especifico (aire) Densidad del gas(0C y 1 atm) Densidad del lquido (25C y 1 atm)

El CO2 no es inflamable ni mantiene combustin, es muy estable pero se puede descomponer a 2000 C o ms y reacciona hasta cierto punto con agua para formar cido carbnico. En presencia de luz solar y de un catalizador (clorofila) , se combina con el agua para formar almidn o celulosa. Se usa como agente refrigerante y de congelamiento de helados , carnes y otros alimentos ; es importante como material extintor de incendios ; en sntesis qumicas en estado gaseoso tal como la fabricacin de cido saliclico, en industrias de bebidas, etc. La concentracin mxima permisible es de 5000 pmm en aire.

50

APNDICE I

SEGURIDAD

DIXIDO DE CARBONO LIQUIDO Y GASEOSO

PRODUCTO QUMICO E IDENTIFICACIN DE LA COMPAA PRODUCTO: ANHDRIDO CARBNICO (MSDS NO. P-4574-H) NOMBRE COMERCIAL: ANHDRIDO CARBNICO NOMBRE QUMICO: SINNIMOS DEL ANHDRIDO CARBNICO: ANHDRIDO CARBNICO, CIDO GASEOSO FRMULA: CO2 FAMILIA QUMICA: CIDOS ANHDRIDOS

TELFONO DE EMERGENCIA: 1-800-645-4633 * NOMBRE DE LA COMPAA: PRAXAIR, INC. CHEMTREC: 1-800-424-9300 * 39 CAMINO DE RIDGEBURY VIEJO 1-800-PRAXAIR, CT 06810-5113,

LLAME A EMERGENCIA LAS 24 HORAS DEL DA PARA CASOS DE : DERRAMAMIENTOS, GOTERAS, FUEGO, EXPOSICIN, O ACCIDENTES.

PRODUCTO. PARA LA INFORMACIN RUTINARIA, AVISE A SU PROVEEDOR, PRAXAIR VENTAS REPRESENTANTE, O LLAMAR AL 1-800-PRAXAIR (1-800772-9247).

COMPOSICIN / INFORMACIN DE LOS INGREDIENTES ESTA SECCIN SLO CUBRE MATERIALES DE FABRICACIN

51

PARA LAS MEZCLAS PERSONALIZADAS DE ESTE PRODUCTO, PDALE A UN MSDS PARA CADA COMPONENTE. VEA SECCIN 16 PARA LA INFORMACIN IMPORTANTE SOBRE LAS MEZCLAS. EL INGREDIENTE LA CAS NMERO CONCENTRACIN EL OSHA PEL ACGIH TLV-TWA EL ANHDRIDO CARBNICO 124-38-9 >99% 5,000 PPM * 5,000 PPM * * * EL SMBOLO> LOS MEDIOS MAYOR QUE; EL SMBOLO <, MENOS DE.

IDENTIFICACIN DE RIESGOS APRECIACIN GLOBAL

PRECAUCION!

LQUIDO DE ALTA PRESIN Y GAS. PUEDE CAUSAR SOFOCACIN RPIDA. PUEDE AUMENTAR LA RESPIRACIN Y EL LATIDO DEL CORAZN. PUEDE CAUSAR DAO AL SISTEMA NERVIOSO. PUEDE CAUSAR VRTIGO Y ADORMECIMIENTO. OLOR: LIGERAMENTE PICANTE

VALORES LMITE DE TOLERENCIA:

TLV-TWA, 5,000 PPM (ACGIH, 1998). TLV-TWA, 15 MIN STEL, 30,000 PPM. ACGIH RECOMIENDA UN TLV DE 5 MG/M3 PARA UN PERIODO DE TRABAJO DE 8 HRS. TLV-TWAS DEBE USARSE COMO UNA GUA EN EL MANDO DE RIESGOS DE SALUD Y NO CUANDO LAS PELIGROSAS. CONCENTRACIONES PELIGROSAS SEAN

52

LOS EFECTOS DEL GAS A LA SOBREEXPOSICIN:

EL GAS DE DIXIDO DE CARBONO ES ASFIXIANTE DEBIDO A LA FALTA DE OXGENO. TAMBIN ES FISIOLGICAMENTE ACTIVO EN LA CIRCULACIN AS COMO EN LA RESPIRACIN. LAS CONCENTRACIONES MODERADAS PUEDEN CAUSAR CABEZA, ADORMECIMIENTO, VRTIGO, PICAZN DE LA DOLOR DE NARIZ Y

GARGANTA, EXCITACIN, RESPIRACIN Y AGITACIN RPIDA, TOS, SALIVACIN EN EXCESO, VOMITO, E INCONSCIENCIA. PUEDE OCASIONAR LA MUERTE POR FALTA DE OXGENO. EVITE CONTACTO CON: EL GAS FRO, LQUIDO, EL ANHDRIDO CARBNICO SLIDO PUEDE CAUSAR SEVERO DAO A LA PIEL O CONGELAMIENTO. ESTE PRODUCTO ES UN GAS A LA TEMPERATURA NORMAL Y PRESIN.

OTROS EFECTOS DE SOBREEXPOSICIN CAUSA DAO A LA RETINA O A LAS CLULAS DEL GANGLIO Y CENTRO NERVIOSO

CONDICIONES MDICAS AGRAVADAS POR LA SOBREEXPOSICIN LA TOXICOLOGA Y LAS PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DEL

ANHDRIDO CARBNICO SUGIEREN QUE SEA IMPROBABLE UNA SOBREEXPOSICIN

DATOS DEL LABORATORIO SIGNIFICANTES A LA SALUD HUMANA LA EVALUACIN: UN SOLO ESTUDIO HA MOSTRADO UN AUMENTO EN EL CORAZN EN RATAS EXPUESTAS A 6% EL ANHDRIDO CARBNICO EN EL AIRE DURANTE 24 HORAS EN LOS MOMENTOS DIFERENTES DURANTE LA GESTACIN. NO HAY NINGUNA

53

EVIDENCIA QUE EL DIXIDO DE CARBONO SEA HUMANOS.

MUTAGNICO EN LOS

CARCINOGENO: EL ANHDRIDO CARBNICO NO SE LISTA POR NTP, OSHA, O IARC. LAS MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS LA INHALACIN: INMEDIATAMENTE DELE AIRE FRESCO. SI NO ESTA RESPIRANDO DE LA RESPIRACIN ARTIFICIAL. SI RESPIRAR LE ES DIFCIL UN PERSONAL CALIFICADO PUEDE DAR OXGENO LLAME A UN MDICO. EL CONTACTO SUPERFICIAL: PARA LA EXPOSICIN A VAPOR FRO O SLIDO, INMEDIATAMENTE EXPONGA A UN MEDIO CALUROSO. EN CASO DE LA EXPOSICIN PROLONGADA, QUITE LA ROPA CONTAMINADA MIENTRAS ROCI CON AGUA CALUROSA. LLAME A UN MDICO. TRAGADO: ESTA ES UNA RUTA IMPROBABLE DE EXPOSICIN., PUES SE TRATA DE UN PRODUCTO QUE ES UN GAS A LA TEMPERATURA Y PRESIN NORMAL. EL CONTACTO CON LOS OJOS: LAVE POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS. SOSTENGA LOS PRPADOS ABIERTOS. VEA A UN MDICO

INMEDIATAMENTE, PREFERENTEMENTE OFTALMLOGO.

LAS MEDIDAS Y LA LUCHA CONTRA EL FUEGO EL PUNTO DE LLAMARADA (EL MTODO DE LA PRUEBA) NO AUTOIGNITION APLICABLE LA TEMPERATURA NO APLICABLE LOS MEDIOS DE EXTINCIN: EL ANHDRIDO CARBNICO NO PUEDE APAGAR EL FUEGO. USE LOS MEDIOS QUE SE DESTINAN PARA RODEAR EL FUEGO. LOS PROCEDIMIENTOS DE LUCHA: AVISE! ES LQUIDO DE ALTA PRESIN Y GAS. EVACUE A TODO EL PERSONAL DEL REA DE PELIGRO.

54

INMEDIATAMENTE ROCI LOS CILINDROS CONTENEDORES CON EL AGUA AL MXIMO. ALJESE HASTA EL FRESCO. BRIGADAS DE FUEGO EN EL SITIO DEBEN OBEDECER OSHA 29 CFR 1910.156. EL FUEGO Y RIESGOS DE LA EXPLOSIN: EL CALOR DEL FUEGO PUEDEN AUMENTAR LA PRESIN EN EL CILINDRO Y CAUSAR QUE SE ROMPA.

NINGUNA PARTE DE CILINDRO DEBE SUJETARSE A UNA TEMPERATURA SUPERIOR QUE 125F (52C). LOS CILINDROS DEL ANHDRIDO CARBNICO ESTN PROVISTOS CON UN DISPOSITIVO DE ALIVIO DE PRESIN.

LAS PRECAUCIONES DE MANEJO: PROTEJA LOS CILINDROS DEL DAO. USE CONVENIENTEMENTE UN VEHCULO DE MANO PARA MOVER LOS

CILINDROS; NO ARRASTRE, RUEDE. NUNCA INTENTE ALZAR UN CILINDRO POR SU GORRA, PIENSA SOLAMENTE QUE LA GORRA PROTEGE LA VLVULA. NUNCA INSERTE UN OBJETO (EL EJ., TIRN, EL

DESTORNILLADOR, LA BARRA DE LA PALANCA) EN LAS APERTURAS DE LA GORRA; HACIENDO PUEDEN DAAR LA VLVULA AS Y PUEDEN CAUSAR UNA GOTERA. USE UN TIRN DE LA CORREA AJUSTABLE QUITE OXID DE LAS GORRAS CONSULTE A SU

PROVEEDOR. NUNCA APLIQUE LA LLAMA O EL CALOR DIRECTAMENTE A CUALQUIER PARTE DEL CILINDRO. LAS TEMPERATURAS ALTAS PUEDA DAAR EL CILINDRO Y PODRA CAUSAR QUE EL DISPOSITIVO DE ALIVIO DE LA PRESIN PUEDE FALLAR PREMATURAMENTE. PARA LA INFORMACIN ADICIONAL SOBRE EL ALMACENAMIENTO Y MANEJANDO, REFIRASE A LA ASOCIACIN DE GAS COMPRIMIDA (CGA) EL FOLLETO P-1, EL MANEJO SEGURO DE GASES COMPRIMIDOS EN LOS RECIPIENTES, DISPONIBLE DEL CGA. VENTILATION/INGENIERIA DE CONTROL: DESCARGA LOCAL: USE UN SISTEMA DE LA DESCARGA LOCAL, SI NECESARIO, PARA PODER CONTROLAR LA CONCENTRACIN DE CARBONO SI ES QUE UN OBRERO EST RESPIRANDO EN LA ZONA.

55

MECNICO (GENERAL) BAJO CIERTAS CONDICIONES, LA VENTILACIN DE LA DESCARGA GENERAL PUEDE SER ACEPTABLE PARA GUARDAR EL

ANHDRIDO CARBNICO DEBAJO DEL LMITE DE LA EXPOSICIN.

PROTECCIN RESPIRATORIA: NINGUNO REQUERIDO BAJO EL USO NORMAL. UN RESPIRADOR DE AIRE DEBE SER PROPORCIONADO.

PROTECCIN SUPERFICIAL: EL USO DE GUANTES DE NEOPRENO PARA EL MANEJO DEL CILINDRO.

PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS EL PESO MOLECULAR: 44.01 GRAVEDAD ESPECFICA (EL AIRE = 1) A LAS 70F (21.1C) Y 1 ATM: 1.522 DENSIDAD DEL GAS A 70F (21.1C) Y 1 ATM: 0.1444 LB/FT 3 (1.833 KG/M 3) DENSIDAD LQUIDA (SATURADO) A 70F (21.1C) Y 1 ATM: 47.6 LB/FT 3 (762 KG/M 3) PRESIN DE VAPOR A 70F (21.1C): 838 PSIG (5778 KPA) SOLUBILIDAD EN EL AGUA, VOL/VOL A 68F (20C) Y 1 ATM: 0.90 EL PUNTO DE SUBLIMACIN A 1 ATM: -109.3F (-78.5C) LA APARIENCIA, OLOR, Y ESTADO: EL GAS DESCOLORIDO, INCOLORO, LIGERAMENTE CIDO. LA ESTABILIDAD Y REACTIVIDAD ES EN ESTADO ESTABLE INCOMPATIBILIDAD (LOS MATERIALES A EVITAR): LOS METALES

ALCALINOS, LOS METALES ALCALINO-TERREOS, EL CROMO, TITANIO SOBRE 1022F (550C), URANIO SOBRE 1382F (750C), MAGNESIO SOBRE 1427F (775C). LOS PRODUCTOS DE DESCOMPOSICIN ARRIESGADOS: LAS DESCARGAS ELCTRICAS Y LAS TEMPERATURAS ALTAS DESCOMPONEN EL ANHDRIDO CARBNICO EN MONXIDO DE CARBONO Y OXGENO.

56

LA POLIMERIZACIN ARRIESGADA: PUEDE LLEGAR A OCURRIR EL PROCESO DE LA SOLDADURA PUEDE GENERAR HUMOS ARRIESGADOS Y GASES. EL ANHDRIDO CARBNICO ES UN ASFIXIANTE. ESTIMULA LA RESPIRACIN INICIALMENTE. LAS CONCENTRACIONES ALTAS PRODUCEN EL

NARCOTISMO. LOS SNTOMAS EN LOS HUMANOS SON COMO SIGUE: EL EFECTO: LA CONCENTRACIN: LA PROPORCIN RESPIRATORIA AUMENTA LIGERAMENTE. 1% LOS AUMENTOS DE LA PROPORCIN RESPIRATORIA A 50% SOBRE EL NIVEL NORMAL. PROLONGADAS EXPOSICIN PUEDE CAUSAR DOLOR DE CABEZA, EL CANSANCIO 2% .

LA INFORMACIN ECOLOGICA NINGN EFECTO ECOLGICO ADVERSO ESPERADO. EL ANHDRIDO

CARBNICO NO CONTIENE NINGUNA CLASE DE OZONO. EL ANHDRIDO CARBNICO NO SE LISTA COMO UN CONTAMINANTE MARINO.

EL MTODO DE LA DISPOSICIN DE DESECHO: NO INTENTE DISPONER DE RESIDUO O LAS CANTIDADES SIN USAR. EL RETORNO DEL CILINDRO AL PROVEEDOR.

EL PROGRAMA DE DIRECCIN PARA ACCIDENTES QUMICOS REQUIERE EL DESARROLLO Y LA APLICACIN DE DIRECCIN DE RIESGO LOS PROGRAMAS EN LOS MEDIOS DE LA FABRICACIN, USO, EL ASA REGUL LAS SUBSTANCIAS EN CANTIDADES QUE EXCEDEN LOS UMBRALES ESPECIFICADOS. EL ANHDRIDO CARBNICO NO SE LISTA COMO UNA SUSTANCIA REGULADA EL PRODUCTO: EL ANHDRIDO CARBNICO LA FECHA DE P-4574-H: MAYO DE 1999

57

TSCA: EL ACTO DE MANDOS DE SUBSTANCIAS TXICAS: EL ANHDRIDO CARBNICO SE LISTA EN EL TSCA EL INVENTARIO. OSHA: LA SEGURIDAD PROFESIONAL Y ADMINISTRACIN DE SALUD: 29 CFR 1910.119: LA DIRECCIN DE SEGURIDAD DE PROCESO DE MUY ALTO RIESGO LOS QUMICOS: EXIGE A LOS MEDIOS A DESARROLLAR UN PROCESO DE SEGURIDAD DE DIRECCIN

EL ANHDRIDO CARBNICO NO SE LISTA COMO UN QUMICO MUY ARRIESGADO. LAS REGULACIONES ESTATALES: CALIFORNIA: EL ANHDRIDO CARBNICO NO SE LISTA POR CALIFORNIA ADVIRTIENDO: LA COMBUSTIN DE ESTE GAS PRODUCE EL QUMICO MONXIDO DE CARBONO PENNSYLVANIA: EL ANHDRIDO CARBNICO EST SUJETO AL OBRERO DE PENNSYLVANIA Y A LA COMUNIDAD CON DERECHO A SABER EN EL ACTA (35 P.D. SECCIONES 7301-7320). OTRA INFORMACIN EST SEGURO DE LEER Y ENTENDER TODAS LAS ETIQUETAS E

INSTRUCCIONES PROPORCIONADAS CON TODOS LOS RECIPIENTES DE ESTE PRODUCTO. HUMOS Y GASES PUEDEN SER PELIGROSOS A SU SALUD Y PUEDEN CAUSAR LA ENFERMEDAD DE PULMN. SACAR SU CABEZA FUERA DE HUMOS. NO RESPIRE HUMOS Y GASES. USAR BASTANTE VENTILACIN, LOCAL, MANTENERSE ALEJADO DE HUMOS Y GASES DE LA ZONA DE RESPIRACIN Y EL REA GENERAL. LA SOBRE EXPOSICIN A CORTO PLAZO A LOS HUMOS PUEDE CAUSAR VRTIGO, NUSEA, Y SEQUEDAD O IRRITACIN DE LA NARIZ, GARGANTA, Y OJOS O PUEDE CAUSAR OTRA INCOMODIDAD SIMILAR. CONSIGA UN MSDS PARA CADA MATERIAL QUE USTED USA.

58

CONSULTAR LAS PUBLICACIONES DE LA SOCIEDAD DE LA SOLDADURA AMERICANA, O VE EL SITIO DE WEB DE OSHA A HTTP://WWW.OSHA-SLC.GOV/SLTC/WELDINGCUTTINGBRAZING /. LAS NOTAS A MDICO: AGUDO: LOS GASES, HUMOS, Y POLVOS PUEDEN CAUSAR LA IRRITACIN A LOS OJOS, PULMONES, NARIZ, Y GARGANTA. ALGUNOS LOS GASES TXICOS ASOCIADOS CON SOLDAR Y LOS PROCESOS RELACIONADOS PUEDEN CAUSAR EL EDEMA PULMONAR, LA ASFIXIA, Y MUERTE. LA SOBRE EXPOSICIN AGUDA PUEDE INCLUIR SEALES Y SNTOMAS COMO ACUOSO LOS OJOS, LA NARIZ E IRRITACIN DE LA GARGANTA, EL DOLOR DE CABEZA, EL VRTIGO, LA DIFICULTAD LA TOS RESPIRATORIA, FRECUENTE, O LOS DOLORES DEL PECHO. CRNICO: LA INHALACIN PROLONGADA DE CONTAMINANTES AREOS PUEDE LLEVAR A SU ACUMULACIN EN LOS PULMONES, UNA CONDICIN QUE PUEDE VERSE COMO LAS REAS DENSAS EN LAS RADIOGRAFAS DEL PECHO. LA SEVERIDAD DE CAMBIO ES PROPORCIONAL A LA LONGITUD DE EXPOSICIN. LOS CAMBIOS VISTOS NECESARIAMENTE NO SE ASOCIAN CON SNTOMAS O SEALES DE FUNCIN PULMONAR REDUCIDA O ENFERMEDAD. ADEMS, LOS CAMBIOS EN LAS RADIOGRAFAS PUEDEN SER CAUSADOS TAMBIN POR LOS FACTORES DE NO TRABAJO RELACIONADOS COMO EL FUMAR, ETC.,

OTRO EQUIPO PROTECCIONISTA: LOS GUANTES DE USO, CABEZA, Y PROTECCIN DEL CUERPO. (VEA ANSI Z49.1.)

OTRAS CONDICIONES ARRIESGADAS DE MANEJAR, EL ALMACENAMIENTO, Y USO: DE ALTA PRESIN EL LQUIDO Y GAS. EL CONDUCTO DEL USO Y EQUIPOS DISEADOSPARA RESISTIR PRESIONES DEBEN SER ENCONTRADOS

ADECUADAMENTE. EL ANHDRIDO CARBNICO ES MS PESADO QUE EL AIRE. TIENDE A AUMENTAR CERCA DEL SUELO DE UN ESPACIO ADJUNTO,

59

MIENTRAS ESTA CAMBIANDO DE SITIO

EL AIRE Y EMPUJNDOLO

ASCENDENTE. ESTO CREA UNA ATMSFERA DEFICIENTE EN OXIGENO CERCA DEL SUELO. VENTILE EL ESPACIO. ANTES DE LA ENTRADA. VERIFIQUE LA CONCENTRACIN DE OXGENO SUFICIENTE. CERCA LA VLVULA DEL CILINDRO DESPUS DE CADA USO. LAS MEZCLAS: CUANDO USTED MEZCLA DOS O MS GASES O LICUA LOS GASES, USTED PUEDE CREAR RIESGOS INESPERADOS. OBTENGA Y EVALE LA INFORMACIN DE SEGURIDAD PARA CADA COMPONENTE ANTES DE QUE USTED PRODUZCA LA MEZCLA. CONSULTE AL HIGIENISTA INDUSTRIAL U OTRA PERSONA ESPECIALIZADA CUANDO USTED EVALA EL PRODUCTO FINAL. RECUERDE, LOS GASES Y LQUIDOS TIENEN PROPIEDADES QUE PUEDEN CAUSAR LESIN SERIA O MUERTE. LAS CONEXIONES DE LA VLVULA NORMALES PARA EE.UU. Y CANAD: ENHEBRADO: CGA-320 EL YUGO ALFILER-PUESTO EN UN NDICE: CGA-940 (EL USO MDICO) LA CONEXIN DE EXTREMISTA-ALTO-INTEGRIDAD: CGA-716 USE LAS CONEXIONES DE CGA APROPIADAS. NO USE LOS ADAPTADORES. ADICIONAL LIMITADO-NORMAL LAS CONEXIONES PUEDEN APLICAR. VEA FOLLETO DE CGA QUE V-1 LIST. PREGNTELE A SU PROVEEDOR PRAXAIR DE SEGURIDAD COMO SE HA REFERIDO EN ESTE MSDS Y EN LA ETIQUETA PARA ESTE PRODUCTO. MS ALL PUEDE ENCONTRARSE INFORMACIN SOBRE ESTE PRODUCTO EN LOS FOLLETOS SIGUIENTES PUBLICADOS POR EL LA ASOCIACIN DE GAS COMPRIMIDA, INC. (CGA), 1725 JEFFERSON DAVIS HIGHWAY, ARLINGTON, VA 22202-4102, EL TELFONO (703) 412-0900. EL AV-1 CAJA FUERTE MANEJO Y ALMACENAMIENTO DE GASES

COMPRIMIDOS EL ANHDRIDO CARBNICO DE G-6

60

LA NORMA DE G-6.1 PARA LOS SISTEMAS DE ANHDRIDO CARBNICO DE PRESIN BAJOS A CLIENTE SITES LA G-6.2 ARTCULO ESPECIFICACIN PARA EL ANHDRIDO CARBNICO EL P-1 CAJA FUERTE MANEJO DE GASES COMPRIMIDOS EN LOS RECIPIENTES LA P-14 ACCIDENTE PREVENCIN EN OXGENO-RICH, LAS ATMSFERAS OXGENO-DEFICIENTES SB-2 LAS ATMSFERAS OXGENO-DEFICIENTES V-1 COMPRESSED LA GAS CILINDRO VLVULA ENTRADA Y CONEXIONES DE LA TOMA DE CORRIENTE EL MANUAL DE GASES COMPRIMIDOS, TERCERA EDICIN, PRAXAIR LES PIDE A LOS USUARIOS DE ESTE PRODUCTO ESTUDIAR ESTE MSDS Y DARSE CUENTA DE RIESGOS DEL PRODUCTO Y SEGURIDAD LA INFORMACIN. PARA PROMOVER USO SEGURO DE ESTE PRODUCTO, UN USUARIO DEBE (1) NOTIFIQUE A LOS EMPLEADOS, AGENTES, Y CONTRATISTAS DE LA INFORMACIN EN ESTE MSDS Y DE CUALQUIER OTRO RIESGO DEL PRODUCTO CONOCIDO Y SEGURIDAD DE LA INFORMACIN.

61

15. BIBLIOGRAFA

Ahmed, M. S., Dobberstein, R. H. and Farnsworth, N. R. 1980. Stevia rebaudiana. I. Use of pbromophenacyl bromide to enhance ultraviolet detection of water-soluble organic acids (steviolbioside and rebaudioside B) in high-performance liquid chromatographic analysis. J. Chromatogr. 192: 387393. Ahmed, M. S. and Dobberstein, R. H. 1982a. Stevia rebaudiana. II. High-performance liquid chromatographic separation and quantitation of stevioside, rebaudioside A and rebaudioside C. J. Chromatogr. 236: 523-526. Ahmed, M. S. and Dobberstein, R. H. 1982b. Stevia rebaudiana. III. High-performance liquid chromatographic separation and quantitation of rebaudiosides B, D, and E, dulcoside A, and steviolbioside. J. Chromatogr. 245: 373-376. Bennett, R. D., Lieber, E. R., and Heftmann, E. 1967. Biosynthesis of steviol from (-)-kaurene. Phytochemistry 6: 1107-1110. Bonvie, L., Bonvie, B., and Gates, D. 1997. The stevia story, a tale of incredible sweetness and intrigue. B.E.D. Publications, Atlanta. Brandle, J.E., and Rosa, N. 1992. Heritability for yield, leaf:stem ratio and stevioside content estimated from a landrace cultivar of Stevia rebaudiana. Can. J. Plant Sci. 72: 1263-1266. Bridel, M. and Lavieille, R. 1931a. Le principe saveur sucre du Ka-h- (Stevia rebaudiana) Bertoni. Bull. Soc. Chim. Biol. 13: 636-655. Bridel, M. and Lavieille, R. 1931b. Le principe sucr du Ka-h- (Stevia rebaudiana Bertoni). II. Lhydrolyse diastasique du stvioside. III. Le stviol de lhydrolyse diastasique et lisostviol de lhydrolyse acide. Bull. Soc. Chim. Biol. 13: 781-796. Carneiro, J.W.P. 1990. Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni, production of seed. M.Sc Thesis, State University of Maringa, Brazil (English abstr.). Chang, S. S. and Cook, J. M. 1983. Stability studies of stevioside and rebaudioside A in carbonated beverages. J. Agric. Food Chem. 31: 409-412. Chang, K.F., Howard, R.J. and Gaudiel R.G. 1997. First report of stevia as a host for Sclerotinia sclerotiorum. Plant Disease 81: 311. Chappell, J. 1995. Biochemistry and molecular biology of the isoprenoid biosynthetic pathway in plants. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 46: 521-547. Cook, I. F. and Knox, J. R. 1970. A synthesis of steviol. Tetrahedron Lett. 4091-4093. Crammer, B. and Ikan, R. 1986. Sweet glycosides from the stevia plant. Chem. Brit. 22: 915-916. Darise, M., Kohda, H., Mizutani, K., Kasai, R. and Tanaka, O. 1983. Chemical constituents of flowers of Stevia rebaudiana Bertoni. Agric. Biol. Chem. 47: 133-135.

62

Das, S., Das, A.K., Murphy, R.A., Punwani, I.C., Nasution, M.D., and Kinghorn, A.D. 1992. Evaluation of the cariogenic potential of the intense natural sweeteners stevioside and rebaudioside A. Caries Res. 26: 363-366. Djerassi, C., Quitt, P., Mosettig, E., Cambie, R. C., Rutledge, P. S. and Briggs, L. H. 1961. Optical rotatory dispersion studies. LVIII. The complete absolute configurations of steviol, kaurene and the diterpene alkaloids of the garryfoline and atisine groups. J. Amer. Chem. Soc. 83: 3720-3722. Dolder, F., Lichti, H., Mosettig, E. and Quitt, P. 1960. The structure and stereochemistry of steviol and isosteviol. J. Amer. Chem. Soc. 82: 246-247. Donalisio, M.G.R., Duarte, F.R., Pinto, A.J.D.A., and Souza, C.J. 1982. Stevia rebaudiana. Agronomico 34: 65-68. DuBois, G.E. and Stephenson, R.A. 1984. Diterpenoid sweeteners. Synthesis and sensory evaluation of stevioside analogues with improved organoleptic properties. J. Med. Chem 28:93-98. Fors, A. 1995. A new character in the sweetener scenario. Sugar J. 58: 30. Frederico, A.P., Ruas, P.M., Marinmorlaes, M.A., Ruas, C.F. and Nakajima, J.N. 1996. Chromosome studies in some Stevia (Compositae) species from southern Brazil. Braz. J. Genet. 19: 605-609. Fujinuma, K., Saito, K., Nakazato, M., Kikuchi, Y., Ibe, A. and Nishima, T. 1986. Thin layer chromatographic detection and liquid chromatographic determination of stevioside and rebaudioside A in beverages and foods following reverse phase column chromatography. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 69: 799-802. Fujita, S., Taka, K. and Fujita, Y. 1977. Miscellaneous contributions to the essential oils of the plants from various territories. XLI. The components of the essential oil of Stevia rebaudiana. Yakugaku Zasshi 97: 692-694; Chem. Abstr. 87: 122621v (1977). Fullas, F., Kim, J., Compadre, C. M. and Kinghorn, A. D. 1989. Separation of natural product sweetening agents using overpressured layer chromatography. J. Chromatogr. 464: 213-219. Goenadi, D.H. 1983. Water tension and fertilization of Stevia rebaudiana Bertoni on Oxic Tropudalf (English abstr.). Menara Perkebunan. 51: 85-90. Haga, T., Ise, R., and Kobayashi, T. 1976. A method for purifying stevioside (English abstr.). Jap. Patent 51-131900. Hanson, J. R. and De Oliveira, B. H. 1993. Stevioside and related sweet diterpenoid glycosides. Nat. Prod. Rep. 10: 301-309. Hanson, J.R., and White, A.F. 1968. Studies in terpenoid biosynthesis II. The biosynthesis of steviol. Phytochemistry 7: 595-597. Hashimoto, Y., Moriyasu, M., Nakamura, S., Ishiguro, S. and Komuro, M. 1978. High-performance liquid chromatographic determination of Stevia components on a hydrophilic packed column. J. Chromatogr. 161: 403-405. Hedden, P., and Kamiya, Y. 1997. Gibberellin biosynthesis: enzymes, genes and their regulation. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48: 431-460.

63

Itagaki K., and Ito, T. 1979. Purification of stevioside (English abstr.). Jap. Patent 54-041898. Kaneda, N., Kasai, R., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977. Chemical studies on sweet diterpeneglycosides of Stevia rebaudiana: conversion of stevioside into rebaudioside-A. Chem. Pharm. Bull. 25: 2466-2467. Kasai, R., Yamaguchi, H. and Tanaka, O. 1987. High-performance liquid chromatography of glycosides on a new type of hydroxyapatite column. J. Chromatogr. 407: 205-210. Katayama O., Sumida, T, Hayashi, H. and Mitsuhashi H. 1976. The practical application of Stevia and research and development data (English translation). I.S.U. Company, Japan. 747 pp. Kim, K.K., Sawa, Y., and Shibata, H. 1996a. Hydroxylation of ent-kaurenoic acid to steviol in Stevia rebaudiana Bertoni- Purification and partial characterization of the enzyme. Arch. Biochem. Biophys. 332: 223-230. Kim, K.K., Yamashita, H., Sawa, Y., and Shibata, H. 1996b. A high activity of 3-hydroxy-3methylglutaryl coenzyme A reductase in chloroplasts of Stevia rebaudiana Bertoni. Biosci. Biotech. Biochem. 60: 685-686. Kinghorn, A.D. 1992. Food ingredient safety review: Stevia rebaudiana leaves. Herb Research Foundation, Boulder. Kinghorn, A. D., Nanayakkara, N. P. D., Soejarto, D. D., Medon, P. J. and Kamath, S. 1982. Potential sweetening agents of plant origin. I. Purification of Stevia rebaudiana sweet constituents by droplet counter-current chromatography. J. Chromatogr. 237: 478-483. Kinghorn, A. D. and Soejarto, D. D. 1985. Current status of stevioside as a sweetening agent for human use. Pages 1-52 in H. Wagner, H. Hikino and N. R. Farnsworth, eds. Economic and medicinal plant research. Academic Press, London. Kinghorn, A. D., Soejarto, D. D., Nanayakkara, N. P. D., Compadre, C. M., Makapugay, H. C., Hovanec-Brown, J. M., Medon, P. J. and Kamath, S. K. 1984. A phytochemical screening procedure for sweet ent-kaurene glycosides in the genus Stevia. J. Nat. Prod. 47: 439-444. Kitada, Y., Sasaki, M., Yamazoe, Y. and Nakazawa, H. 1989. Simultaneous determination of stevioside, rebaudioside A, and C and dulcoside A in foods by high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. 474: 447-451. Kobayashi, M., Horikawa, S., Degrandi, I. H., Ueno, J. and Mitsuhashi, H. 1977. Dulcosides A and B, new diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 16: 1405-1408. Kohda, H., Kasai, R., Yamasaki, K., Murakami, K. and Tanaka, O. 1976. New sweet diterpene glucosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 15: 981-983. Lee, J.I., Kang, K.K., and Lee, E.U. 1979. Studies on new sweetening resource plant stevia (Stevia rebaudiana Bert.) in Korea. I. Effects of transplanting date shifting by cutting and seeding dates on agronomic characteristics and dry leaf yields of stevia (English abstr.). Res. Rep. ORD 21: 171-179. Lee, J.I., Kang, K.H., Park, H.W., and Ham, Y.S. 1982. New high rebaudioside - A stevia variety "Suweon 11" (English abstr.). Res. Rep. ORD 24: 186-188.

64

Lewis, W.H. 1992. Early uses of Stevia rebaudiana (Asteraceae) leaves as a sweetener in Paraguay. Econ. Bot. 46: 336-337. Liu, J. and Li, S. F. Y. 1995. Separation and determination of Stevia sweeteners by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography. J. Liq. Chromatogr. 18: 1703-1719. Lovering, N.M. and Reeleder, R.D. 1996. First report of Septoria steviae on stevia (Stevia rebaudiana) in North America. Plant Disease 80: 959. Makapugay, H. C., Nanayakkara, N. P. D. and Kinghorn, A. D. 1984. Improved high-performance liquid chromatographic separation of the Stevia rebaudiana sweet diterpene glycosides using linear gradient elution. J. Chromatogr. 283: 390-395. Martelli, A., Frattini, C. and Chialva, F. 1985. Unusual essential oils with aromatic properties-I. Volatile components of Stevia rebaudiana Bertoni. Flav. Frag. J. 1: 3-7. Matsui, M., Matsui, K., Kawasaki, Y., Oda, Y., Noguchi, T., Kitagawa, Y., Sawada, M., Hayashi, M., Nohmi, T., Yoshihira, K., Ishidate, M., Jr, and Sofuni, T. 1996. Evaluation of the genotoxicity of stevioside and steviol using six in vitro and one in vivo mutagenicity assays. Mutagenesis 11: 573579. Matsushita, K., and Kitahara, T. 1981 Separation of stevioside and rebaudioside A by crystallization (English abstr.). Jap. Patent 56-121454. Mauri, P., Catalano, G., Gardana, C. and Pietta, P. 1996. Analysis of Stevia glycosides by capillary electrophoresis. Electrophoresis 17: 367-371. McGarvey, D.J., and Croteau, R. 1995. Terpenoid metabolism. Plant Cell 7: 1015-1026. Metivier, J. and Viana, A. M. 1979. Determination of microgram quantities of stevioside from leaves of Stevia rebaudiana Bert. by two-dimensional thin layer chromatography. J. Exp. Bot. 30: 805-810. Miyazaki, Y., and Watanabe, H. 1974. Studies on the cultivation of Stevia rebaudiana Bertoni; On the propogation of the plant (English abstr.). Jap. J. Trop. Agric. 17: 154-157. Mizukami, H., Shiiba, K. and Ohashi, H. 1982. Enzymatic determination of stevioside in Stevia rebaudiana. Phytochemistry 21: 1927-1930. Mori, K., Nakahara, Y. and Matsui, M. 1972. Diterpenoid total synthesis-XIX. ()-Steviol and erythroxydiol A: rearrangements in bicyclooctane compounds. Tetrahedron 28: 3217-3226. Morita, T. 1987. Dried leaves (English abstr.). Jap. Patent 62-96025 Mosettig, E. and Nes, W. R. 1955. Stevioside. II. The structure of the aglucone. J. Org. Chem. 20: 884-899. Mosettig, E., Beglinger, U., Dolder, F., Lichti, H., Quitt, P. and Waters, J. A. 1963. The absolute configuration of steviol and isosteviol. J. Amer. Chem. Soc. 85: 2305-2309. Murai, N. 1988. Stevia drying system (English abstr.) Jap. Patent 63-258553.

65

Nabeta, K., Kasai, T. and Sugisawa, H. 1976. Phytosterol from the callus of Stevia rebaudiana. Agric. Biol. Chem. 40: 2103-2104. Nakahara, Y., Mori, K. and Matsui, M. 1971. Diterpenoid total synthesis. Part XVI. Alternative synthetic routes to ()-steviol and ()-kaur-16-en-19-oic acid. Agric. Biol. Chem. 35: 918-928. Nakamura, S. and Tamura, Y. 1985. Variations in the main glycosides of stevia. Jap. J. Trop. Agric. 29:109-115. Nikolova-Damyanova, B., Bankova, V. and Popov, S. 1994. Separation and quantitation of stevioside and rebaudioside A in plant extracts by normal-phase high performance liquid chromatography and thin-layer chromatography: a comparison. Phytochem. Anal. 5: 81-85. Nishiyama, P., Alvarez, M. and Vieira, L. G. E. 1992. Quantitative analysis of stevioside in the leaves of Stevia rebaudiana by near infrared reflectance spectroscopy. J. Sci. Food Agric. 59: 277-281. Ogawa, T. 1980. Decolorization and purification of a stevia sweet component (English abstr.). Jap. Patent 55-111768. Ogawa, T., Nozaki, M. and Matsui, M. 1980. Total synthesis of stevioside. Tetrahedron 36: 26412648. Oshima, Y., Saito, J. and Hikino, H. 1986. Sterebins A, B, C and D, bisnorditerpenoids of Stevia rebaudiana leaves. Tetrahedron 42: 6443-6446. Oshima, Y., Saito, J. and Hikino, H. 1988. Sterebins E, F, G and H, diterpenoids of Stevia rebaudiana leaves. Phytochemistry 27: 624-626. Pendergast, W.R. 1991. GRAS Affirmation Petition Number 2G0390. Pezzuto, J.M., Compadre, C.M., Swanson, S.M., Nanayakkara, N.P.D., and Kinghorn, A.D. 1985. Metabolically activated steviol, the aglycone of stevioside, is mutagenic. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 2478-2482. Phillips, K.C. 1989. Stevia: steps in developing a new sweetener. Pages 1-43 in T.H. Grenby ed. Developments in sweeteners, Volume 3. Elsevier Applied Science, London. Planas, G.M., and Kuc, J. 1968. Contraceptive properties of Stevia rebaudiana. Science. 162: 1007. Procinska, E., Bridges, B.A., and Hanson, J.R. 1991. Interpretation of results with the 8-azaguanine resistance system in Salmonella typhimurium: no evidence for direct acting mutagenesis by 15oxosteviol, a possible metabolite of steviol. Mutagenesis 6: 165-167. Rajbhandari, A. and Roberts, M. F. 1983. The flavonoids of Stevia rebaudiana. J. Nat. Prod. 46: 194195. Robinson, B.L. 1930. Contributions from the Gray Herbarium of Harvard University. The Gray Herbarium of Harvard University, Cambridge. Ruddat, M., Heftmann, E., and Lang, A. 1965. Biosynthesis of steviol. Arch. Biochem. Biophys. 110: 496-499.

66

Sakamoto, I., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977a. Application of C NMR spectroscopy to chemistry of natural glycosides: rebaudioside-C, a new sweet diterpene glycoside of Stevia rebaudiana. Chem. Pharm. Bull. 25: 844-846. Sakamoto, I., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977b. Application of C NMR spectroscopy to chemistry of plant glycosides: rebaudiosides-D and -E, new sweet diterpene-glucosides of Stevia rebaudiana Bertoni. Chem. Pharm. Bull. 25: 3437-3439. Saxena, N.C., and Ming, L.S. 1988. Preliminary harvesting characteristics of stevia. Phys. Prop. Agric. Mat. Prod. 3: 299-303. Schiffman, S.S., Pecore, S.D., Booth, B.J., Losee, M.L., Carr, B.T., Sattely-Miller, E., Graham, B.G., and Warwick, Z.S. 1994. Adaptation of sweeteners in water and in tannic acid solutions. Phys. Behavior 55: 547-559. Schiffman, S.S., Booth, B.J., Carr, B.T., Losee, M.L., Sattely-Miller, E., and Graham, B.G. 1995. Investigation of synergism in binary mixtures of sweeteners. Brain Res. Bull. 38: 105-120. Schock, C.C. 1982. Experimental cultivation of Rebaudi's stevia in California. University of California Agronomy Progress Report No. 122. Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1992. Development of the male gametophyte in Stevia rebaudiana (English abstr.). Buletinul Academiei de Schtintse A Republica Moldava 6: 3-9. Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1994a. Development of the female gametophyte in Stevia rebaudiana (English translation). Buletinul Academiei de Schtintse A Republica Moldava 6: 10-18. Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1994b. Structure, topography and onogeny of Stevia rebaudiana (English abstr.). Botanicheskii Zhurnal 79: 38-48. Shibata, H., Sonoke, S., Ochiai, H., Nishihashi, H., and Yamada, M. 1991. Glycosylation of steviol and steviol-glucosides in extracts from Stevia rebaudiana Bertoni. Plant Physiol. 95: 152-156. Shibata, H., Sawa, Y., Oka, T., Sonoke, S., Kim, K.K. and Yoshioka, M. 1995. Steviol and steviolglycoside. Glucosyltransferase activities in Stevia rebaudiana Bertoni. Purification and partial characterization. Arch. Biochem. Biophys. 321: 390-396. Shizhen, S. 1995. A study on good variety selection in Stevia rebaudiana. Scientia Agricultura Sinica 28: 37-41. Shuping, C., and Shizhen, S. 1995. Study on storage technique of Stevia rebaudiana seed (English abstr.). Acta Agronomica Sinica 21: 102-105. Shyu, YT, Liu, S.Y., Lu, H.Y., Wu, W.K. Su, C.G. 1994. Effects of harvesting dates on the charateristics, yield and sweet components of stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) lines. J. Agric. Res. China 43:29-39. Sholichin, M., Yamasaki, K., Miyama, R., Yahara, S. and Tanaka, O. 1980. Labdane-type diterpenes from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 19: 326-327. Sincholle, D. and Marcorelles, P. 1989. Study of the anti-androgenic activity of extracts of Stevia rebaudiana Bertoni (English abstr.). Med. Plants and Phytotherapy 23: 282-287.
13

13

67

Soejarto, D.D., Compadre, C.M., Medon, P.J., Kamath, S.K., and Kinghorn, A.D. 1983. Potential sweetening agents of plant origin. II. Field search for sweet-tasting Stevia species. Econ. Bot. 37: 7179. Soejarto, D.D., Kinghorn, A.D., and Farnsworth, N.R. 1982. Potential sweetening agents of plant origin. III. Organoleptic evaluation of stevia leaf herbarium samples for sweetness. J. Nat. Prod. 45: 590-599. Striedner, J., Czygan, F.-C. and Braunegg, G. 1991. Contributions to the biotechnological production of sweeteners from Stevia rebaudiana Bertoni. I. A method for the serial analysis of diterpene glycosides by HPLC. Acta Biotechnol. 11: 495-499. Sumida, T. 1968. Reports on Stevia rebaudiana Bertoni M. introduced from Brazil as a new sweetness resource in Japan. Misc. Pub. Hokkaido Natl. Exp. Sta. 2: 69-83. Sumida, T. 1980. Studies on Stevia rebaudiana Bertoni as a new possible crop for sweetening resource in Japan (English summary). J. Cent. Agric. Exp. Stn. 31: 1-71. Tan, S., and Ueki, H. 1994. Method for extracting and separating sweet substances of Stevia rebaudiana Bertoni (English abstr.). Jap. Patent 06-007108. Tanaka, O. 1982. Steviol-glycosides: new natural sweeteners. Trends Anal. Chem. 1: 246-248. Tanaka, O. 1997. Improvement of taste of natural sweeteners. Pure Appl. Chem. 69:675-683 Uneshi, H., Ise R., and Kobayashi, T. 1977. Purification of a stevia sweetening agent (English abstr.). Jap. Patent 54-030199. Valio, I.F.M. and Rocha, R.F. 1966. Effect of photoperiod and growth regulators on growth and flowering of Stevia rebaudiana Bertoni. Jap. J. Crop Sci. 46:243-248. Van Calsteren, M.-R., Bussire, Y. and Bissonnette, M. C. 1993. Spectroscopic characterization of two sweet glycosides from Stevia rebaudiana. Spectroscopy 11: 143-156. Van Hooren, D.L., and Lester, H.R. 1992. Stevia drying in small scale bulk tobacco kilns. In Methods to utilize tobacco kilns for curing, drying and storage of alternate crops, final report. Ontario Ministry of Agriculture and Food, Delhi. Vis, E. and Fletcher, H. G. 1956. Stevioside. IV. Evidence that stevioside is a sophoroside. J. Amer. Chem. Soc. 78: 4709-4710. Wood, H. B., Allerton, R., Diehl, H. W. and Fletcher, H. G. 1955. Stevioside. I. The structure of the glucose moieties. J. Org. Chem. 20: 875-883. Xiang, Z.P. 1983. Stevia (partial English translation). General Bureau of State Farms, Heilongjiang, China. Xili, L., Chenggjiany, B.C., Eryi, X., Reiming, S., Yuengming, W., Haodong, S., and Zhiyan, H. 1992. Chronic oral toxicity and carcinogenicity study of stevioside in rats. Food Chem. Tox. 30: 957-965. Yamasaki, K., Kohda, H., Kobayashi, T., Kasai, R. and Tanaka, O. 1976. Structures of stevia 13 diterpene-glycosides: application of C NMR. Tetrahedron Lett. 1005-1008.

68

EQUIPO enfriador 2

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 36564 Costo instalacion CBM= 104,938 Costo total de instalacion CTBM= 123,827 Costos de sitios Csite= 6,191 Costos de servicios Cserv= 6,191 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 277,711 Costos de contingencias Ccontig= 97,199 CTDC= 374,909 Costos de terreno Cterr= 7,498 Costos de regalias Creg= 7,498 Costos de arranque Carran= 37,491 CTPI= 427,397 CTPImod= 406,027 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 406,027 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

$DOLARES $DOLARES 0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo m3/ao total anual 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 total gral= 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

EQUIPO tanque de dixido de carbono

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 73,801 Costo instalacion CBM= 233,455 Costo total de instalacion CTBM= 275,477 Costos de sitios Csite= 13,774 Costos de servicios Cserv= 13,774 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 610,280 Costos de contingencias Ccontig= 213,598 CTDC= 823,879 Costos de terreno Cterr= 16,478 Costos de regalias Creg= 16,478 Costos de arranque Carran= 82,388 CTPI= 939,222 CTPImod= 892,261 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 892,261 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

$DOLARES $DOLARES 0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo m3/ao total anual 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 total gral= 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

$ $ $ $ $ $ $

EQUIPO compresor de aire

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 642,082 Costo instalacion CBM= 334,017 Costo total de instalacion CTBM= 394,140 Costos de sitios Csite= 19,707 Costos de servicios Cserv= 19,707 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 1,409,653 Costos de contingencias Ccontig= 493,379 CTDC= 1,903,032 Costos de terreno Cterr= 38,061 Costos de regalias Creg= 38,061 Costos de arranque Carran= 190,303 CTPI= 2,169,456 CTPImod= 2,060,983 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 2,060,983 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

$DOLARES $DOLARES 0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo Kwattao 0 0 0 0 0 total gral= 0 total anual 0 0 0 0 0 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

$ $ $ $ $ $ $

EQUIPO Bomba de dezplamiento directa

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 642,082 Costo instalacion CBM= 4,359,147 Costo total de instalacion CTBM= 5,143,793 Costos de sitios Csite= 257,190 Costos de servicios Cserv= 257,190 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 10,659,402 Costos de contingencias Ccontig= 3,730,791 CTDC= 14,390,193 Costos de terreno Cterr= 287,804 Costos de regalias Creg= 287,804 Costos de arranque Carran= 1,439,019 CTPI= 16,404,820 CTPImod= 15,584,579 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 15,584,579 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

$DOLARES $DOLARES 0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo Kwattao 0 0 0 0 0 total gral= 0 total anual 0 0 0 0 0 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

$ $ $ $ $ $ $

EQUIPO Bomba para el agua

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 12,400 Costo instalacion CBM= 39,680 Costo total de instalacion CTBM= 46,822 Costos de sitios Csite= 2,341 Costos de servicios Cserv= 2,341 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 103,585 Costos de contingencias Ccontig= 36,255 CTDC= 139,839 Costos de terreno Cterr= 2,797 Costos de regalias Creg= 2,797 Costos de arranque Carran= 13,984 CTPI= 159,417 CTPImod= 151,446 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 151,446 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

$DOLARES $DOLARES 0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo Kwattao total anual 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 total gral= 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

$ $ $ $ $ $ $

EQUIPO secador rotatorio

INV. DIRECTA PERMANENTE

DESCRIPCION Costo de compra CP= 158,041 Costo instalacion CBM= 200,000 Costo total de instalacion CTBM= 236,000 Costos de sitios Csite= 11,800 Costos de servicios Cserv= 11,800 Costos de asignacion Casig= 0 CDPI= 617,641 Costos de contingencias Ccontig= 216,174 CTDC= 833,816 Costos de terreno Cterr= 16,676 Costos de regalias Creg= 16,676 Costos de arranque Carran= 83,382 CTPI= 950,550 CTPImod= 903,023 Capital de trabajo Ctrabajo= 0 CTCI= 903,023 precio 2.646E-05 518.4 0.211 1326.85 0 0

Costo de Edificios (laboratorio de micropropagacion, planta industrial, terrenos de cultivo de 250 Has. 10,000,000 USD. 19,998,318 USD. 10,969,713 USD. 19,998,318 USD.

$DOLARES $DOLARES

costo total de equipos costo total de instalacion= Inversion total =

0.18 fraccin caract. para la contingencia y los honorarios 0.05 del CTBM $DOLARES $DOLARES $DOLARES

CAP. TOTAL DEPRECIABLE

$DOLARES $DOLARES

0.35 del CDPI

$DOLARES $DOLARES $DOLARES $DOLARES

0.02 del CTDC 0.02 del CTDC 0.1 del CTDC 0.95 factor tpico para Mxico

INV. TOTAL PERMANENTE

CAP. TOTAL INVERSION

$DOLARES $DOLARES unidades(m3) $/Kg. $/Kwattao $/m3 $/m3 /ton /1000gpy consumo Kwattao 0 0 0 0 0 total gral= 0 total anual 0 0 0 0 0 0

articulo vapor electricidad agua de enfriamiento agua de proceso refrigeracion liquido desechos

$ $ $ $ $ $

$ $ $ $ $ $ $

CALCULO DE LA RECUPERACION DE LA INVERSION

FLUJOS ANUALES Flujos Negativos $usd $ PROYECTO =30,000,000 INV.INICIAL= 37,400,000 GASTOS= 16,799,212.70 $EQUIPO= 15,896,221.41 Flujo Positivo $usd REGALIAS= INFLACION= IMPUESTO= RESCATE= MATERIA PRIMA Hojas de Stevia Seca Dioxido de carbono CANTIDAD ton/ao 1400 600 PRECIO $/ton 1000 10000 COSTO $/ao 1,400,000.00 6,000,000

0 0.2 0.15 4,768,866

% %

Total= 7,400,000 P.E= P.E= 351.5567568 PRIMER AO 351.5567568 SEGUNDO AO CANTIDAD ton/ao 111.384 PRECIO $/ton 300000 GANANCIA $/ao 33,415,200

PRODUCTO Esteviosido

AOS 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

FAI sin inflacin -37,400,000 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987 16,615,987

Ganancia por ao 0 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200 33,415,200

Gastos 0 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213 16,799,213

Beneficios de Operacin 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Depreciacin 0 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887 -476,887

Ingreso Grabable 0 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101 16,139,101

Flujo Neto Impuestos despues de impuestos 0 0 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122 -2,420,865 14,195,122

Flujo Constante 0 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122 14,195,122

VPN 0 -25,056,415 -14,322,864 -4,989,340 3,126,767 10,184,251 16,321,194 21,657,667 26,298,077 30,333,217 33,842,034