Cromatografia

Cromatografia em Camada Delgada

Definio Tipos

Toxicidade e Primeiros Socorros Descarte de Resduos EPIs e EPCs Referncias

Aplicaes Tcnica Geral Vantagens Desvantagens

cromatografia

um

mtodo

fsico-qumico

de

separao dos componentes de uma mistura. Essa tcnica se destaca devido sua facilidade em efetuar a

separao, identificao e quantificao das espcies

qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras

tcnicas instrumentais de anlise.

realizada atravs da distribuio destes componentes entre duas fases, que esto em contato ntimo. Uma das

fases permanece estacionria enquanto a outra se move

atravs dela.

Durante a passagem da fase mvel sobre a fase estacionria, os componentes da mistura so distribudos entre as duas fases, de tal forma que cada um dos

componentes

seletivamente

retido

pela

fase

estacionria, resultando em migraes diferenciais destes componentes, ou seja, os componentes da amostra tm

diferentes

velocidades

ao

passarem

pela

fase

estacionria.

A cromatografia em camada delgada (CCD) consiste na

separao dos componentes de uma mistura slidolquido onde a fase mvel (lquida) migra sobre uma

camada delgada de ADSORVENTE retido em uma

superfcie plana (fase estacionria slida). O processo

de separao est fundamentado, principalmente no

fenmeno de ADSORO.

um p insolvel, dividido de forma muito fina, inerte e capaz de adsorver as toxinas ou outras substncias em sua superfcie extensa.

Na adsoro as molculas de um lquido (fase mvel)

unem-se superfcie do adsorvente (fase estacionria

slida). As foras que unem a molcula superfcie so as interaes moleculares.

grau

de

adsoro

depende

da

temperatura,

da presso, da rea da superfcie e da fora das interaes moleculares.

A intensidade das interaes varia na seguinte ordem

aproximada:

Formao de sal

Coordenao

Ligao de Hidrognio

Dipolo dipolo

Van der Waals

importante ressaltar que Absoro diferente de

Adsoro. Na Absoro, uma substancia se infiltra na outra, enquanto que a Adsoro apenas superficial.

Absoro

Adsoro

Estabelecer a identidade de dois compostos;

Determinar o nmero de componentes de uma mistura;

Determinar o solvente apropriado para uma separao por cromatografia em coluna;

Monitorar uma separao realizada por cromatografia em coluna atravs da identificao de fraes coletadas;

Checar a eficincia de uma separao;

Monitorar o andamento de uma reao.

Preparao das placas cromatogrficas e ativao:

Espalhamento e placas pr-fabricadas.
Adsorvente usado: Slica gel

Fonte: http://www.chinasilicagel.com/3-drying-indicator/5-1b.jpg

Fonte: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422005000300030

 Existem vrias formas bastante simples de preparar a

placa. Uma delas consiste em preparar a suspenso do adsorvente no solvente adequado (na maioria das vezes o dispersante utilizado a gua) e, mantendo-se a placa de vidro na posio horizontal transferir a

suspenso para a superfcie da placa, espalhando-se

de maneira uniforme manualmente (com um basto

de vidro) ou com o auxlio de um espalhador. A

dificuldade encontrada nesse processo a obteno de superfcies uniformes.
Aps a deposio, deixa-se a placa secar ao ar.

 A etapa final a transferncia da placa para

uma estufa por um determinado tempo para

que ocorra a sua ativao; o tempo e a temperatura dependem do adsorvente usado

e da atividade desejada.
A slica, por exemplo, ativada a 105 -110 C

por 30 a 60 minutos. A espessura da camada de slica a ser depositada de 0,25 mm para

placas analticas e de 1,0 mm para placas

preparativas.

 As placas devem ser: inertes aos reagentes e solventes,

resistentes temperatura e uniformes.

Tambm existem placas cromatogrficas pr-

fabricadas dos adsorventes mais utilizados que esto disponveis no mercado h algum tempo. Apesar de terem custo bem mais elevado, dispensam a fase de

preparao e so bem mais uniformes e homogneas,

o que melhora a separao, nessas placas a camada de adsorvente est depositada sobre uma lmina de

material plstico, alumnio ou vidro.

Fonte: Qumica Orgnica Experimental Tcnicas de Pequena Escala

Preparao de uma placa de cromatografia em camada fina

SLICA (SiO2)
A slica empregada na separao de compostos

lipoflicos como aldedos, cetonas, fenis, cidos

graxos,

aminocidos,

alcalides,

terpenides

esterides, usando o mecanismo de adsoro.

ALUMINA (Al2O3)
A alumina geralmente empregada na separao de

compostos lipoflicos e, pelo fato de poder ser

preparada

com

caractersticas

cida,

neutra

alcalina, bastante til na separao de substncias

que apresentam variaes dessas caractersticas.

Aplicao das amostras nas placas cromatogrficas:

Solventes usados: Etanol e Diclorometano

A amostra dissolvida em um solvente voltil para a

aplicao na placa, pois tais solventes podem ser facilmente eliminados aps a aplicao, a evaporao do solvente ajuda a manter as manchas

formadas menores, e quanto menores as manchas

melhor poder ser a separao.
importante ressaltar que a soluo no deve ser

muito diluda, pois exige um grande volume de amostra, aumentando assim as manchas na placa.

 A evaporao do solvente importante pois se

no evaporado corretamente pode ocorrer tambm a cromatografia por partio onde a

fase estacionria um slido recoberto com

uma fina camada de lquido, no caso o solvente que no evaporou

Aplicao na placa de CCD com uma pipeta capilar

Seleo da fase mvel (Eluente): Solventes usados: 1,2 dicloroetano e cido actico
A fase mvel o solvente ou uma mistura de solventes

que usada para eluir uma mistura e promover a

separao dos seus componentes.

A eluio a separao dos componentes de uma

mistura causada por um fluxo de eluente.

A escolha do solvente depende dos materiais a serem

separados. Um solvente que faz com que todo o material aplicado se mova totalmente com a frente do solvente muito polar, j um que no movimenta o material atravs da placa no suficientemente polar.

 s vezes, um nico solvente capaz de

separar todos os componentes da mistura,

porm melhores resultados so obtidos com

misturas

de

solventes,

pois

obtm-se

uma polaridade mdia em relao polaridade dos componentes da mistura.

Com a expanso do solvente as manchas

formam anis concntricos. Pela aparncia dos anis pode-se fazer uma avaliao da

aplicabilidade do solvente.

Fonte: Qumica Orgnica Experimental Tcnicas de Pequena Escala

Mtodos dos anis concntricos para testar solvente

Tabela 1: Solventes (eluentes) para a cromatografia

Aumento da Polaridade e poder de solvente em relao grupos funcionais polares

Preparao da cuba cromatogrfica:

A cuba cromatogrfica o recipiente com tampa

removvel onde a placa fica contida e realizada a separao.

O nvel do solvente colocado na cuba dever ficar

abaixo dos pontos de aplicao das amostras. Durante a

ascenso do solvente o sistema fica fechado para que a

atmosfera esteja saturada pelo vapor do solvente, isso importante pois se aberto o sistema o solvente ir se evaporar para saturar a atmosfera e equilibrar o sistema liquido-gasoso, resultados. podendo produzir variaes nos

Um papel de filtro colocado nas paredes da cuba para

facilitar a saturao, que indispensvel para boa

migrao das substncias.

A placa cromatogrfica dever ser retirada da cuba

somente quando o solvente atingir um limite prdeterminado na parte superior da placa (cerca de 2 cm).

Desenvolvimento do cromatograma:
A placa transferida para uma cuba cromatogrfica

contendo o solvente, que ascende pela placa. Durante este processo, chamado desenvolvimento do

cromatograma, os vrios componentes da mistura so

separados.
A separao baseada em muitos equilbrios dos

solutos entre as fases mvel e estacionria e resulta das diferenas de velocidade, nas quais os componentes

individuais da mistura migram pela placa.

Fonte: Qumica Orgnica Experimental Tcnicas de Pequena Escala

Cmara de desenvolvimento com uma placa de cromatografia em camada fina

Revelao dos cromatogramas:

Quando

os

compostos
porm

serem

separados
que

so
os

coloridos, a separao pode ser acompanhada visualmente, mais frequente

compostos sejam incolores. Neste caso, deve-se usar

reagentes para torna-los visveis.
Procedimentos usados: vapores de iodo e Lmpadas

de raio UV.

 Fsicos: podem ser visualizados atravs de luz ultravioleta,

por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas

radiaes. Quando as substncias no so fluorescentes,

podem-se

utilizar

adsorventes

impregnados

com

reagentes fluorescentes.
Biolgicos e Enzimticos: Utiliza-se reaes enzimticas

ou bacterianas para tornar a mancha visvel.

Tipos de reveladores biolgicos:

Antibiticos
Enzimas Substratos

Procedimentos Qumicos: Aplicao de um reativo qumico

para formar um derivado colorido ou fluorescente.
Tipos de reveladores qumicos:

Alcalides: Dragendorff, iodoplatinato Flavonides: NP-PEG

Anti-oxidantes: -caroteno
Saponinas, terpenos e esterides: anisaldedosulfrico Antraquinonase cumarinas: vapor de amnia

Fenlicos, saponinase terpenides: soluo de CeSO4

Compostos fenlicos: FeCl3

Revelador universal: vapores de iodo

Tcnicas para as revelaes utilizadas:

Raio UV: baseia-se na utilizao de

substncias fluorescentes misturadas slica quando da preparao das placas, possibilitando a revelao dos compostos em cmaras de luz ultravioleta.
Vapores de Iodo: vale-se do fato de que o iodo

complexa-se com compostos insaturados, de modo que placas que os contenham, ao serem

colocadas em uma cmara contendo cristais

de iodo, apresentaro pontos amarronzados.

Um composto percorre sempre a mesma distncia em relao ao deslocamento da frente de solvente. A razo entre esses deslocamentos o valor de Rf.

Rf =

distncia percorrida pela substncia distncia percorrida pela frente do solvente

Quando as condies so especificadas, Rf constante para um composto e corresponde uma propriedade fsica do mesmo, os valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6.

E ele pode ser usado para auxiliar a identificao de uma substncia. Porm no um mtodo com uma boa exatido, por isso a identificao do composto deve ser confirmada por outra tcnica. Portanto, as comparaes feitas do Rf obtido com o Rf de padres considerado um mtodo qualitativo.

Rf(componente 1) = 22 = 0,35 65

Rf(componente 2) = 50 = 0,77 65

Fcil execuo; Maior rapidez; Menor trajeto da fase mvel ; Boa resoluo; Manchas em geral menos difusas; Baixo custo; Versatilidade.

 Difcil reprodutibilidade: muito difcil a confeco de duas placas idnticas, com a

mesma quantidade de amostra, etc;

Difcil determinao exata do Rf.

Cafena
Inflamabilidade: No inflamvel Contato com a pele: No apresenta riscos.

Primeiros Socorros
Lavar com gua em abundncia

Contato com os olhos: No apresenta riscos. Lavar com gua em abundncia Ingesto: O consumo excessivo pode causar casos de insnia, enxaqueca, tremuras, palpitaes. Estimulante do SNC.
Inalao: No apresenta riscos.

Paracetamol
Inflamabilidade: No inflamvel Ingesto: Alto potencial hepatotxico, no devendo ser utilizadas mais que 4000 mg dirias (8 comprimidos de 500mg). Crianas com menos de 37 kg tem a dose limite diria em 80 mg/kg. Em indivduos adultos pode ocorrer toxicidade em doses nicas de 10 - 15 g (20 a 30 comprimidos de 500mg) (150 - 250 mg/kg) e uma dose de 20 a 25 g (40 a 50 comprimidos de 500mg) pode levar a fatalidade.

cido acetilsaliclico
Inflamabilidade: No inflamvel
Contato com a pele: um composto muito presente em remdios para a eliminao de verrugas e no tratamento de acne (em baixas concentraes 0,5%), porm o contato prolongado com a exposio luz solar, pode causar manchas e queimaduras. Ingesto : Toxicidade suave a moderada: 150-300mg/Kg Toxicidade severa: 300-500mg/Kg Potencialmente letal: >500mg/Kg Estimulao do centro respiratrio H sintomas no sistema nervoso central (zumbido no ouvido incluindo perda de audio, convulses e coma), a hipoprotrombinemia e edema pulmonar no-cardiognico . rgos alvo: o fgado, rins, pulmes e o VIII nervo craniano. Inalao: Concentrao atmosfrica mxima permitida de 5mg/m3

Acetato de etila
Inflamabilidade: Inflamvel

Primeiros Socorros

Contato com a pele: causar dermatite, remova a vtima para um chuveiro e retire desengordurante de tecido orgnico todas as roupas contaminadas, lavar as partes atingidas do corpo com sabo e gua corrente durante 15 minutos, pelo menos. No colocar qualquer medicamento ou produto qumico, encaminhe a vtima ao dermatologista. Contato com os olhos: causa irritao conjuntival e opacidade da crnea; lave os olhos imediatamente com grande quantidade de gua fresca e limpa pelo menos por 15 minutos. Leve a vtima a um oftalmologista. se a vtima estiver consciente, dar gua para beber e aps induzir o vmito. Obter socorro mdico imediatamente. remova a vtima da rea contaminada, se necessrio inicie respirao artificial e obtenha socorro.

Ingesto: dor de cabea, sonolncia e inconscincia e tambm pode causar acidose devido hidrolisao Inalao: os vapores podem causar irritao para o sistema respiratrio em altas concentraes e pode causar dor de cabea, nuseas, diminuio dos reflexos, irritao pulmonar e efeitos txicos. Exposio em concentrao acima de 6000 ppm pode causar dor de cabea e diminuio dos reflexos.

cido actico
Inflamabilidade: Inflamvel

Primeiros Socorros
Usar gua, p qumico ou dixido de carbono.

Lave imediatamente em gua corrente por, pelo menos, 15 minutos. Contato com a pele: Causa srios problemas Remova a roupa contaminada e os de pele. Os sintomas incluem vermelhido, sapatos. Lave as roupas e os sapatos dor e queimaduras. antes de reutiliz-los. Procure ajuda mdica.

Contato com os olhos: A soluo pode causar srios ferimentos seguidos de perda de viso. A exposio ao vapor pode causar intensa lacrimao e irritao nos olhos.
Ingesto: A ingesto pode causar graves ferimentos e levar morte. Os sintomas so dor de garganta, vmito e diarreia. A ingesto de 1 ml resulta em perfurao do esfago.

Lave imediatamente com gua corrente por, pelo menos, 15 minutos, abrindo e fechando as plpebras. Procure ajuda mdica imediatamente.
NO INDUZA O VMITO! Se possvel, d grandes quantidades de gua ou leite. Nunca d algo pela boca para uma pessoa inconsciente. Procure um mdico imediatamente.

Inalao: Pode causar irritao nas mucosas do nariz, garganta, pulmo e dificuldade na Levar a pessoa para um lugar arejado respirao.

Diclorometano
Inflamabilidade: Vapores inflamveis. Contato com a pele: Pode causar uma irritao da pele.

Primeiros Socorros
Usar CO2, espuma, p qumico ou gua Lavar abundantemente com gua. Tirar a roupa contaminada. Enxaguar abundantemente com gua, mantendo a plpebra aberta (durante pelo menos 10 minutos). Consultar imediatamente um oftalmologista. Ateno em caso de vmitos. Perigo de aspirao! Manter livres as vias respiratrias. Beber muita gua. Administrao posterior de: Carvo ativado (20 - 40 g, numa suspenso a 10%). Chamar um mdico. Exposio ao ar fresco. Eventualmente, respirao artificial ou ventilao com aparelhagem apropriada. Manter livres as vias respiratrias. Chamar um mdico caso o sinistrado se queixar de dores ou de mal-estar geral.

Contato com os olhos: Pode causar uma irritao dos olhos.

Ingesto: Pode ser perigoso se for engolido

Inalao: Facilmente absorvido pelas vias respiratria e drmica. um depressor do sistema nervoso central e irritante de mucosas. Produz monxido de carbono no organismo, o que impossibilita o transporte do oxignio para os tecidos, provocando hipxia. Possui potencial mutagnico.

Etanol
Inflamabilidade: Inflamvel Contato com a pele: Causa dermatoses e irritaes moderadas.

Primeiros Socorros
Usar p qumico seco, dixido de carbono gua ou espuma de lcool. Lave imediatamente com gua corrente e sabo. Remova a roupa contaminada e os sapatos. Procure ajuda mdica. Lave as roupas e os sapatos antes de reutiliz-los. Lave imediatamente com gua corrente por, pelo menos, 15 minutos, abrindo e fechando ocasionalmente as plpebras. Procure ajuda mdica imediatamente.

Contato com os olhos: Causa severa irritao nos olhos. Pode causar conjuntivite e problemas na crnea.

Ingesto: mostra-se relacionada dose, mas a tolerncia varia amplamente entre os indivduos. Nveis sangneos maiores do que 100 mg/dl definem, em termos legais, o estado de intoxicao e esto tipicamente associados com ataxia; com 200 mg/dl, os pacientes esto sonolentos e confusos. Com nveis acima de 400 mg/dl geralmente h depresso respiratria, podendo levar morte. Pode causar problemas no fgado, rim e corao.
Inalao: Causa irritao no trato respiratrio. Em altas concentraes, causa problemas no sistema nervoso central, dor de cabea, inconscincia e coma. Pode causar efeitos narcticos.

INDUZA O VMITO! D de 2 a 4 copos de gua ou leite se a pessoa estiver consciente. Nunca d algo pela boca para uma pessoa inconsciente.

Remover o indivduo ao ar livre. Se no estiver respirando, fazer respirao artificial. Se respirar com dificuldade, d oxignio. Procure ajuda mdica.

Metanol
Inflamabilidade: Inflamvel Importante: a chama quando o metanol est queimando limpa e clara, praticamente invisvel a luz do dia!

Primeiros Socorros
- Incndios pequenos: p, dixido de carbono, hlon, gua pulverizada, espuma comum - Incndios grandes: gua pulverizada, espuma do tipo AFFF(R) (com formao de pelcula aquosa resistente ao lcool) com sistema de proporo de espuma de 3% ou 6%
Lavar com gua em abundncia e retirar vestes contaminadas Lavar com gua em abundncia e observar a plpebra superior e inferior se h alguma irritao. Em qualquer complicao, procurar o oftalmologista dosagens acima de 40 ml/dl indica uso de antdoto especfico: etanol (lcool etlico) EV ou VO. Nveis acima de 50mcg/dl e a presena de acidose metablica indicam uso de etanol + hemodilise, para melhor prognstico do caso.

Contato com a pele: absorvido atravs da pele e o contato com o lquido provoca desengorduramento e dermatite. Contato com os olhos: irritao da crnea e raramente opacificao no contato com os olhos na forma lquida do metanol.

Ingesto: Uma dose de 30-100 mL pode ser fatal para o homem. Distrbios digestivos: nuseas, vmitos, diarreia e dor abdominal. Distrbios neuropsquicos: dor de cabea, vertigens, embriaguez, astenia, sonolncia, coma, dilatao das pupilas, diminuio da acuidade visual e cegueira, devido degenerao das terminaes da retina e do nervo ptico. Hemorragia cerebral, leses do crebro e cerebelo. Distrbios hemodinmicos: hipotenso e insuficincia cardaca. A morte pode ser em conseqncia de insuficincia respiratria ou cardaca. Inalao: a inalao de concentraes elevadas de vapores de metanol (acima de 2.000 ppm) provoca irritao das membranas mucosas do trato respiratrio e sinais e sintomas de efeitos sistmicos: Distrbios neurolgicos: dor de cabea, fadiga, insnia, vertigens, tremores, rudo nos ouvidos, viso turva, viso dupla e cegueira. Distrbios locais: irritao e coceira na pele, dermatite e eczema. Distrbios digestivos: nuseas, vmito e clica. A exposio a concentraes de 25.000 ppm imediatamente perigosa para a vida e a sade

Levar a vtima a um espao ventilado. Se necessrio, reanime a pessoa ou ajude-a a respirar.

Recipientes adequados e rotulados pelas tcnicas Posterior descarte por empresa especializada

Jaleco de algodo de manga comprida e comprimento at o joelho, calas compridas, sapato fechado, cabelos presos

Livros

COLLINS, CarolCarolH. H. etetal, introdual, introduo a mo mtodos

cromatogrtodos cromatogrficos, 6ficos, 6eded, ed. , Unicamp,Campinas,1995.

NETTO, J. Z., CAZETTA, J. O. Cromatografia Plana, FunepFunep, Jaboticabal, 2005 , THE MERCK INDEX, 13th, ed. MerckMerck& CO., Inc., Usa, 2001.& 2001. BRAGA, G.L. Introduo a Mtodos Cromatogrficos. 6 Edio COLLINS, C.H.; BRAGA,G.L.; BONATO,P.S. Fundamentos de Cromatografia. So Paulo: da Unicamp, 2006. 456p.

Sites:

http://www.higieneocupacional.com.br/download/dicloroetano.pdf
http://amam.forumeiros.com/t93-metanol-ch3oh-e-nitrometano http://www.methanex.com/products/documents/MSDS_EUportugues.pdf http://www.qca.ibilce.unesp.br/prevencao/produtos/etanol.html http://www.ff.up.pt/toxicologia/monografias/ano0607/aspirina/toxicidade.html http://www.qca.ibilce.unesp.br/prevencao/produtos/acido_acetico.html
http://www.slideshare.net/b.cortez/cromatografiaprincpios-cg