Informe I y II Curva de absorcin y curva de calibracin

Laboratorio de Bioqumica Profesor: Edwin Patio

Jaidy Moreno C.C. 1128396793 Cindy Paternina C.C. 1017178584

Universidad de Antioquia Departamento de Qumica Medelln 2011

DETERMINACIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN DE UN COMPUESTO

RESULTADOS

Los datos a partir de los cuales se basa nuestro anlisis estn consignados en la Tabla 1.

Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para una muestra de albmina a diferentes longitudes de onda ().

Longitud de Onda (nm) 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620

Absorbancia 0,125 0,102 0,149 0,167 0,225 0,279 0,314 0,311 0,284 0,243 0,188

CURVA DE ABSORCIN

0.35 0.3 0,314 0,279 0,311 0,284 0,243 0,188

Absorbancia

0.25 0,225 0.2 0.15 0,125 0.1 0.05 0 380 430 480 530 580 0,102 0,149 0,167

630

680

Longitud de onda

Figura 2. Curva de absorcin para una muestra de albmina a diferentes longitudes de onda ().

Se determina de este modo que la longitud de onda de mxima absorbancia es 540 nm para una muestra de albmina.

DISCUSIN

Los resultados obtenidos experimentalmente de los valores de la absorbancia de la solucin de albmina siguen un comportamiento de curva a medida que se evalan en el eje X a diferentes longitudes de onda. As se determin la longitud de onda de mxima absorbancia, que fue igual a 540 nm, es en este punto la diferencia de la absorbancia entre el blanco y la solucin coloreada fue mxima, esto nos indica que es una regin del espectro electromagntico donde se logra una mayor apreciacin de los cambios en coloracin influidos por los cambios en la concentracin de la muestra. Tambin podemos inferir de este valor que la molcula que se est analizando en este rango de luz no es muy sensible al estmulo, posiblemente por su composicin qumica y enlaces especficos. Para evaluar la exactitud o error relativo del mtodo se ha debido realizar una serie de mediciones repetitivas de un patrn de referencia, cuyas caractersticas sean muy similares a las de la muestra de albmina, es decir que la matriz de anlisis sea lo ms parecida a la muestra. Se obtiene el valor medio de concentracin de la sustancia analizada o anlito y se calcula el error relativo, tomando como valor esperado el contenido del anlito certificado en el patrn de referencia. As podemos calcular una desviacin estndar y aplicarla a nuestras mediciones, para presentar estos resultados con ms detalle, contribuyendo en la reproducibilidad del mtodo; sobra advertir que todas las mediciones deben realizarse en el mismo espectrofotmetro. Con este razonamiento proponemos al curso de Laboratorio de Bioqumica implementarlo para prximas experiencias, as se le indica al estudiante trabajar en sus experimentos considerando siempre, no slo las causas de error tradicionales, sino tambin las instrumentales evaluadas con un criterio que se ha de determinar experimentalmente.

CURVA DE CALIBRACIN PARA SOLUCIONES DE ALBMINA

CLCULOS Y RESULTADOS Se prepararon en nueve tubos de ensayo una solucin blanco, seis soluciones patrn y dos soluciones problemas, tal como se puede constatar en la tabla 1. Es necesario conocer los valores de las concentraciones de las soluciones patrn empleadas para la construccin de la curva de absorcin, para este fin procederemos de la siguiente forma: basndonos en la frmula que establece que el producto de la concentracin inicial por el volumen inicial de una solucin es igual al producto de la concentracin final por el volumen final de la misma calculamos las concentraciones necesitadas (CoVo = CfVf), de donde despejamos que Concentracin final de la solucin patrn es: Cf = . La solucin patrn de gelatina posee una concentracin de 8 mg/ml, est ser considerada como nuestra concentracin inicial (Co). Al considerar el volumen final se debe tener presente los 4 ml correspondientes al volumen empleado del reactivo de color Biuret, as, el volumen final (V f) es igual a 6,0 ml.

Tubo 1: Cf =

)(

Tubo 4: Cf =

)(

Cf = 0,133 mg/ml Tubo 2: Cf =

( )( )

Cf = 0,933 mg/ml Tubo 5: Cf =

( )( )

Cf = 0,400 mg/ml Tubo 3: Cf =

( )( )

Cf = 0,120 mg/ml Tubo 6: Cf =

( )( )

Cf = 0,667 mg/ml

Cf = 0,160 mg/ml

Tabla 1. Datos del contenido de cada uno de los tubos involucrados en el ensayo, con sus respectivas concentraciones y valores experimentales de absorbancia
Tubo Blanco Solucin Patrn Solucin Problema Solucin salina 2,0 ml Concentracin Final Absorbancia

1 2 3 4 5 6 7 8

0,1 ml 0,3 ml 0,5 ml 0,7 ml 0,9 ml 1,2 ml -

0,5 ml 1,0 ml

1,9 ml 1,7 ml 1,5 ml 1,3 ml 1,1 ml 0,8 ml 1,5 ml 1,0 ml

0,133 mg/ml 0,400 mg/ml 0,667 mg/ml 0,933 mg/ml 1,200 mg/ml 1,600 mg/ml -

0,089 0,172 0,423 0,569 0,815 0,979 0,386 0,987

Antes de proceder a hallar los valores de la concentracin de la solucin problema en la curva de absorcin es necesario calcular el valor de la pendiente de tal recta, as, tomaremos arbitrariamente los valores de los tubos 1 y 4 para efectuar tal clculo. Tubo 1: Tubo 4: Coordenada en el eje X (C1) = 0,133 mg/ml Coordenada en el eje Y (A1) = 0,089 mg/ml Coordenada en el eje X (C4) = 0,933 Coordenada en el eje Y (A4) = 0,569

La pendiente es: m =

= 0,6 ml/mg

Ya calculada la pendiente de la recta, es momento de plantear la ecuacin utilizada para calcular la concentracin de la muestra o solucin problema: Concentracin muestra =
( )

, de este modo, teniendo en cuenta los

valores para la absorbancia de los tubos 7 y 8 consignados en la tabla 1, procedemos de la siguiente forma: Concentracin de la muestra de albmina en el tubo 7: C7 = = 0,643 mg/ml Concentracin de la muestra de albmina en el tubo 8: C8 = = 1,645 mg/ml

Para una mejor visualizacin de los datos, los resultados de los clculos son presentados en la figura 1, representando la Curva de Calibracin, estando indicada la lnea de tendencia central, la cual nos provee informacin acerca del comportamiento o relacin de proporcionalidad entre los valores de la concentracin de la solucin y los resultados de la absorbancia de la misma, igualmente se puede verificar con una inspeccin visual que los valores para la concentracin de los tubos 7 y 8 son proporcionales y estn de acuerdo al que indica la grfica.

CURVA DE CALIBRACIN
1.2 1 Absorbancia 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.5 1 Concentracin 1.5 2

Figura 1. Curva de Calibracin para la muestra patrn de gelatina.

DISCUSIN En trminos generales se lograron los objetivos planteados, el error de las mediciones no fue significativo, puesto que se obtuvo un resultado concordante tanto en el empleo del mtodo del factor como en el anlisis de la curva de calibracin por interpolacin grfica. La grfica 1 representa de una forma clara los resultados obtenidos, aunque no se observa directamente un comportamiento netamente lineal se puede trazar una lnea de tendencia central de una forma fcil, donde se observa una desviacin no muy grande. Dado que se ha trabajado con datos reales, los grficos que se

obtienen no son tan ideales, pero esta situacin no es un obstculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la recta ms probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de clculo de las computadoras. Los desvos de dichos datos pueden deberse a errores producto de desviaciones experimentales, posiblemente al mal estado de las celdas, al igual que el material de las mismas puesto que stas deben ser preferiblemente de cuarzo, tambin se desconoce el estado del espectrofotmetro y las condiciones de la preparacin de la gelatina y la muestra problema. Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de numerosos factores dependientes del mtodo de medicin. A pesar de que la recta no comienza en el origen, comienza en un punto muy cercano a ste, lo cual indica que aunque no cumple totalmente la Ley de Beer-Lambert, se aproxima bastante al resultado esperado.

BIBLIOGRAFA

Coto C.E. 2008. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Aires. Las curvas de Calibracin. <http://74.125.47.132/search?q=cache:RPiaqeyuorAJ:www.quimicaviva.qb .fcen.uba.ar/contratapa/calibracion/calibracion.htm+curva+de+calibracion+ de+albumina&cd=1&hl=es&ct=clnk&gl=ar> Harris D.C. 2003. Quantitative chemical analysis. Sexta edicin. W.H. Freeman. San Francisco, Estados Unidos. Robinson K, Rubinson J. 2001. Anlisis instrumental. Primera edicin. Prentice Hall. Madrid, Espaa. Tissue B. 1996. Science Hypermedia Home Page. Beer-Lambert Law <http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/spec/beerslaw.htm>. Fecha de consulta: 30 de julio de 2009.