Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Biol: 3725L
Objetivos
Conocer los mtodos rpidos para la identificacin de bacterias (API 20E, Enterotubo II, Biolog y Vitek). Inocular un desconocido en varias pruebas bioqumicas
Tomar datos de las reacciones bioqumicas despus de 24 horas de inoculacin.
Enfermedades
Gastrointestinales Tracto urinario Meningitis Septicemia Pneumonia
API 20E
Provee lectura de 22 pruebas bioqumicas Utilizacin
Se genera anaerobiosis con aceite mineral estril en pruebas cuyas siglas estn subrayadas:
Ej. ADH, LDC, ODC, etc
Luego de hacer la suspensin inocular los microtbulos de API 20E Aadir 5 ml de agua en la bandeja de incubacin para proveer atmsfera hmeda.
API 20E
Sistema de Enterotubo II
Identificar miembros de la familia Enterobacteriaceae, fermentadoras de glucosa y que son oxidasa negativa. (Salmonella, Yersinia, Escherichia etc.)
Algunas de las pruebas usadas en este sistema son: Simmon Citrate, Triple Sugar-iron agar, ureasa entre otros.
Sistema de Enterotubo II
Tubo con 12 compartimentos, cada uno con un medio de cultivo slido diferente. 15 pruebas estndar preformadas: Aerobia y anaerobias Se inocula con una aguja, que se pasa por el centro de los compartimentos Incubacin: 18 24 horas a 37C (oscuridad) Desventajas Poco preciso Riesgos de contaminacin de las pruebas Se diagnosticaban errneamente gneros de bacterias
Sistema Enterotubo II
Lectura
Observar cambios de color
Identificacin:
Estructurar un cdigo de 5 dgitos (Biocode) Consultar con el manual ENCISE (Enterobacteriaceae
Numerical Coding and Identification System for Enterotube)
Sistemas Computarizados
VITEK
Identificacin y/o determinacin de reaccin antibitica de bacterias y levaduras anaerobias (ms de 300 especies). 30 pozos con pruebas bioqumicas deshidratadas. Identificacin en 2 a 7 hrs. La automatizacin aporta mayor seguridad, suprimiendo las manipulaciones repetitivas. Una vez inoculada, queda hermticamente cerrada y por lo tanto es manipulable sin riesgo de contaminacin. No es necesario aadir ningn reactivo, lo cual evita cualquier riesgo de olvido o error.
Sistemas Computarizados
Inoculador / Sellador El cual permite la inoculacin de las tarjetas en pocos minutos. Incubador / Lector Asegura simultneamente la incubacin y la lectura de las tarjetas para una capacidad que vara de 32 a 480 tarjetas segn el modelo. Ordenador Efecta un control permanente de las operaciones en curso, memoriza los valores, trata e interpreta los resultados. Impresora
Sistemas Computarizados
BIOLOG: Identificacin de 1900 bacterias, levaduras y hongos en base a su capacidad enzimtica. Sistema de microplacas de 96 fosas cada una conteniendo una fuente nica de carbono, nutrientes bsicos y un indicador colorimtrico. El indicador colorimtrico que utiliza este sistema es una sal de tetrazolium que en su forma oxidada es incolora. Cuando el organismo es introducido en la gran variedad de sustratos de carbono en la microplaca se produce una huella con un patrn caracterstico. Los resultados bioqumicos de la muestra son ledos y guardados en segundos automticamente, eliminando la subjetividad visual de la interpretacin.
Sistemas Computarizados
BIOLOG: Posteriormente son comparados con la extensa base de datos para su identificacin final. Los resultados se interpretan y se registran automticamente. Especie identificada se exhibe en un monitor de la pc junto con su patrn de la reaccin.
Tambin una lista de 10 especies con los patrones relacionados ms cercanos y otra estadstica til.
La tecnologa de Biolog es tan sensible que puede detectar cultivos mezclados o contaminados.
Prctica
Prctica
De las colonias aisladas de la prctica de la semana anterior, se inocular aproximadamente 11 colonias (una en cada columna) y la primera columna representa el control negativo.
De MacConkey Gram negative De MSA Gram positive
Instrucciones
Inocular de la misma colonia, cada fosa de las columnas de la placa.
Seguir instrucciones del instructor.
Posibles resultados
Medio Dextrosa Lactosa Bile Esculine Agar Manitol SIM Rojo Rojo Marrn claro Rojo Marrn claro Negativo Amarillo Amarillo Negro Amarillo Motilidad Turbidez difusa Produccin de H2S Negro Azul Rosado Fuschia Amarillo intenso = coliforme total Fluorescencia = E. coli Fluorescencia = Enterococcus sp. Colonias fusha = fermentador de Lactosa Verde metalico = E.coli Burbujas Positivo
Verde Rojo Amarillo claro No Fluorescencia Colonias claras (G-) Colonias oscuras (G-) No burbujas
Fermentacin de carbohidratos
MSA
Fermentacin del mannitol.
SIM
Sulfide Indole
Motility
Simmons citrate
negativo
positivo
Urease