Tema 1 La definicin que se da a la mejora gentica se define, segn ngeles Bernardo en 2002, de la siguiente forma: La mejora gentica vegetal/animal

es la ciencia, el arte y el negocio de mejorar las plantas/animales para el beneficio humano. Arte, porque el mejorador tiene una capacidad, que viene de la experiencia, y que le permite seleccionar ciertos genotipos. Ciencia porque se aplica el mtodo cientfico, al menos hoy en da. Negocio porque se obtienen beneficios de su aplicacin. En general, se aplican las leyes de la herencia (la transmisin de caracteres desde progenitores a descendientes, necesaria para la perpetuacin de la mejora) y la variacin (entre individuos de una poblacin o incluso los de una misma familia, con progenitroes comunes), y con su aplicacin se seleccionan algunos organismos que, atencin, no son mejores que otros en todos los caracteres sino slo en lo relativo al inters del consumidor o del mejorador. Para ello se emplea la informacin proporcionada por los distintos fenotipos o la que nos den los marcadores moleculares.

La mejora gentica se ha aplicado en plantas o animales, dando un mejor resultado en las primeras (>3000 especies frente a doce o quince). Las plantas se han empleado en muchos ms campos que los animales: los animales se llevan a consumo, compaa, caza o guerra, mientras que las plantas abarcan decoracin, consumo, industria papelera o textil, produccin de frmacos, cosmticos, productos artesanales, etc. Ejemplos de mejora vegetal son los del girasol o el maz. La mejora gentica, as, busca mezclar genotipos de distintas variedades para crear variedades cada vez ms productivas o de mejor calidad (nutritiva o industrial) para un medio y una aplicacin determinados. De hecho, cuando el medio empleado es adverso se pueden seleccionar plantas resistentes para zonas donde el cultivo sera, si no imposible. Estas plantas resistentes hacen que aumenten los beneficios y disminuyan los costes al permitir otras cantidades de herbicidas, agua o fertilizantes (generalmente su dosis se restringe por la planta cultivada, pero con tcnicas de mejora se pueden alterar esos lmites). Adems, al minimizar el uso de fertilizantes y herbicidas se disminuye el efecto en el medio ambiente. Las caractersticas susceptibles de ser mejoradas son el rendimiento de grano o fruto, o respecto a una cualidad industrial como la cantidad de aceite o la cantidad de fibra. Se suelen mejorar las caractersticas nutricionales, resistencia a estrs bitico y abitico, adaptacin al medio o manejo del cultivo (por ejemplo, haciendo cultivos unitarios, con una altura de cereal estndar y un tallo recto para que sea ms fcil de recolectar, etc.).

Histricamente, la agricultura empez hace 10000 aos en Mesopotamia, en varias zonas de forma independiente. Entonces empez el proceso de mejora una fase previa de

domesticacin (primero vegetales como el maz y luego animales como el perro o la vaca). As, mientras que las plantas y los animales han coexistido con el hombre toda la historia, en algn momento el ser humano empez a seleccionar las plantas que mejores cualidades ofrecan; esto conllev tambin la seleccin de algunas malas plantas y plagas que se coseleccionaron, de forma que incluso hoy en da estamos en una carrera selectiva con las plagas de vegetales. Lo que realmente ocurre es que tras cada ciclo reproductivo (siembra-cosecha) el hombre selecciona las plantas de mayor inters. Esta gran presin selectiva, acrecentada si se recoge, por ejemplo, tras cada ciclo lunar (para homogeneizar las poblaciones) es lo que permiti los rpidos cambios hacia plantas domesticadas , si bien cada vez los cambios estn ms y ms restringidos. As, se adquirieron caracteres que no se habran conseguido de otra forma (al no ser beneficiosos para la planta sino nocivos) como es la prdida de la dispersin al no perder la semilla, el aumento desproporcionado del tamao del fruto, los tiempos de cosecha y siembra, la maduracin rpida y sincrnica o la prdida de ciertas toxinas (por ejemplo, en tomate). As, las plantas se acomodan a un ambiente muy cuidado, perdiendo capacidad de supervivencia a cambio de desarrollar esas caractersticas beneficiosas para el ser humano; de hecho muchas plantas ya no sobreviviran en el medio ambiente sino que requieren de intervencin humana para su supervivencia. PEGAR 25

Las especies mejoradas, pese a su tratamiento, an no son homogneas entre s. De hecho, su relacin con otras plantas produce cambios a nivel genmico tambin. PEGAR 30 La figura siguiente se explica a continuacin. En ella vemos como las plantas de los cultivos primarios tienen estrecha relacin con otras plantas como son las malas hierbas o las malas hierbas compaeras (similares al cultivo, se cruzan y comparten genes con el cultivo de inters sin serlo, como ocurre por ejemplo con el trigo y el centeno). Existen tambin plantas de inters que lo pierden (cultivos para producir sosa se perdieron cuando comenz su sntesis qumica) y se dejan al abandono, aumentando su variabilidad y acabando como plantas asilvestradas o como malas hierbas. Al otro extremo estn las plantas protegidas, que si bien no se cultivan directamente si que son seleccionadas, de una forma inconsciente, por el hombre (por ejemplo las palmeras datileras que mejores dtiles dan se esparcen por el mundo).

La mejora gentica, histricamente, se puede dividir en varias etapas. Una primera etapa es la de mejora intuitiva, en una etapa prehistrica, empleando las plantas que tenan ms a mano para crear algunas razas o vairedades locales. A partir del sXVII, cientficamente se empezaron a generar variedades y a haber distribuidores de semillas, variedades comerciales puras, hbridos hechos de forma consciente, etc. Todo esto era posible porque se conoca la fisiologa vegetal y la reproduccin sexual, permitiendo la polinizacin manual para la obtencin de las variedades. Tras este tipo de mejora, en el sXX se empez a hacer mejora

gentica: aplicando las leyes de Mendel se pudo hacer cruces de gametos concretos, implantando especies en todo el mundo. Finalmente, hoy en da se lleva a cbao una mejora molecular, empleando las tcnicas de ingeniera gentica y marcadores de DNA para formar variedades a la carta.

La variacin (natural o inducida) es lo que nos permite tener material para mezclar y obtener nuevas combinaciones ms ptimas, es decir, lo que nos permite mejorar: si no hay variacin no es posible la mejora (excepto por transgnesis, claro). Existen varias variedades de cada especie, determinadas principalmente por el genotipo, los elementos extranucleares, el desarrollo, la reproduccin y la posible recombinacin que puede alterar variedades estables. As, la variacin total es causada por factores hereditarios, factores del medio (ecolgicos) y la interaccin entre ambos tipos. La variacin puede ser continua o discontinua. La primera se manifiesta en pequeas diferencias entre los individuos, generalmente cuantitativas, que forman una serie continua con el carcter presente (altura, peso, nmero de semillas de trigo, nmero de huevos de un insecto, etc.); suelen codificarse por muchos genes. La segunda se manifiesta de una forma muy visible, como presencia/ausencia, lo que hace de la clasificacin por genotipos algo simple; se suele dar por uno o dos genes, como la presencia/ausencia de cuernos, el color rojo/blanco de las flores, etc. Los caracteres que se van a mejorar deben ser variables, pero esto no es lo nico que importa. Existe el concepto de heredabilidad, que debe ser alta en los caracteres a mejorar. Este concepto lo que nos indica es la proporcin de la variacin fenotpica que se debe a factores genticos, o lo que es lo mismo, qu proporcin de un carcter es transmitida a la descendencia. Se puede definir en sentido amplio (lo que afecta la varianza genotpica a la fenotpica total) o estricto (proporcin de la varianza fenotpica debida a varianza genotpica aditiva). En cualquier caso sus valores, que van de 0 a 1, se clasifican como bajos, intermedios y altos (aproximadamente 0.25, 0.6 o, en el caso de altos, mayores que 0.8), siendo los primeros los ms difciles de mejorar. Como ejemplos tenemos, del bajo, los caracteres polignicos como la produccin crnica de ganado o gallinas; del intermedio el porcentaje de aceite de las semillas o los das hasta la madurez fisiolgica del grano; en las altas tenemos todos los caracteres cualitativos, generalmente monognicos. Otros caracteres importantes a tener en cuenta son datos varios sobre el genoma de la especie a mejorar. En mejora vegetal, por ejemplo, se sabe que las plantas permiten altos grados de ploida (aceptan perfectamente poliploidas, y permiten aneuploidas e hibridaciones interespecficas) y mucho DNA repetitivo (hasta el doble que en humanos), que permite una mayor variacin al ser susceptible a evolucionar. El nmero elevado de repeticiones produce, adems, genomas enormes que dificultan el trabajo tanto in silico como a nivel de laboratorio. As, en vegetales es posible realizar la mejora con hibridacin intraespecfica o interespecfica (en esta segunda pueden ser necesarios cruces puente entre especies prximas para acercarse a una especie ms alejada); se emplean tambin otras muchas tcnicas que no estudiaremos como el cultivo in vitro, la fusin somtica o tcnicas de transgnesis y biologa molecular.

Respecto a los marcadores genticos, estos se definen como secuencias de DNA con una ubicacin fsica identificable en un cromosoma y cuya herencia se puede rastrear en una familia (segn el HGGRI, Instituto Nacional de Investigaciones de Genoma Humano). En general pueden ser fenotipos mutantes, secuencias de DNA (gnicas o no) u otros muchos tipos, deben ser muy variables entre las poblaciones (polimrficos) para permitir una clara diferencacin entre distintos alelos, y heredarse de forma mendeliana y ligada a un carcter de inters (para que sea fcil predecir su herencia, que a ser posible debe ser codominante para permitir diferenciar AA de Aa); en resumen se busca que vare entre distintas lneas pero no en una lnea pura. Tambin deben seguir una metodologa reproducible para que se pueda realizar rutinariamente, ser discriminantes (para diferenciar individuos muy similares), que no vare por el ambiente y que sea fcil y econmico de medir con la capacidad del laboratorio de anlisis. Adems, lo ideal es tener una biblioteca de marcadores con una alta densidad, es decir, presentes a lo largo de todo el genoma, para facilitar su uso en cartografiado de genes. Por ejemplo, que un manzano al crecer desarrolle las hojas en grupos de tres e implique que las manzanas sean todas ms dulces; generalmente el fenotipo de inters es visible pero el marcador es una secuencia de DNA. As, para que se transmita con el gen de inters deben estar en locus prximos, lo que a su vez facilita el mapeo de genes y cromosomas, el rastreo de patrones hereditarios, etc. No hay que confundir los marcadores con los distintos alelos de un gen (sus formas alternativas) ni con las mutaciones en s (cambio de funcin de un alelo silvestre, ya sea para mejor o para peor). An as, para emplear marcadores se deben emplear mutantes (que muestran fenotipos alternativos al silvestre) que se analizan como unidades de diferencia.

Los marcadores genticos se emplean para varios fines. En primer lugar, permiten conservar y emplear los recursos genticos, al permitir hacer estudios filogenticos, construir colecciones de DNA en bancos de germoplasma, identificar el germoplasma de lite (de mejores caractersticas) y predecir el vigor hbrido, la seleccin de mejores caracteres en hbridos o heterosis. Tambin permiten identificar el sistema reproductivo empleado por una especie en concreto con otra (saber si son compatibles o no, es decir, si hibridan). Se identifica el sexo prematuramente, el grado de alogamia (las diferencias entre ambas especies) y la compatibilidad. Se pueden emplear tambin para hacer seleccin asistida, indirecta. Puede ser por introgresin (meter un gen seleccionado por el marcador en una especie o en un individuo de la misma especie). Se emplea tambin para obtener lneas puras (se diferencian fcilmente homozigotos de heterocigotos)y obtener caracteres cuantitativos mejorados. Se emplean tambin, en plantas, para obtener plantas transgnicas, clonaje posicional o mapeo (clonas el gen con recombinasa de forma que elimine un marcador, con lo que si lo detectas ser que no ha habido transformacin o ha habido un problema), adems de para

identificar variedades comerciales (y comprobar que no se te da gato por liebre) y localizar/clasificar plantas. Todos estos mtodos se han empleado, por ejemplo, para mejorar la calidad del centeno al eliminar algunas caractersticas que permiten al hongo Claviceps purpurea habitar la harina de centeno, liberando alcaloides txicos. Esto ocurre cuando la cantidad de polen es baja, por lo que se han seleccionado con marcadores las cepas con alta produccin de polen y, por tanto, mayor resistencia indirecta al hongo.

Para comprender lo relativo a mercadores que veremos en el curso hay que tener en cuenta varios conceptos genticos. Por ejemplo, las definiciones: -Genoma: Todo el material gentico de un individuo. -Gen: Unidad mnima estructural y funcional de la herencia. Sus distintas variaciones, producidas entre otras por mutaciones, se llaman alelos. -Mutacin: Cambios permanentes y heredables en el genoma. -Genotipo/Fenotipo: El primero es la constitucin gentica de un individuo referida a algunos caracteres concretos. Estos se pueden observar en el fenotipo del individuo. El estudio de ciertos fenotipos requiere a veces de una investigacin muy completa, que puede facilitarse mediante el uso de marcadores genticos.

Los efectos entre distintos alelos pueden llegar a ser de mucha importancia. Son: Relaciones entre alelos: No siempre se trata de un fenmeno de dominancia completa, sino que existen otros muchos rangos, segn cunto afecte cada alelo al fenotipo. As, tambin tenemos la dominancia incompleta (parcial) cuando el heterocigoto no es como el homozigoto dominante sino que tiene un poco del carcter recesivo; si el heterocigoto es intermedio entre ambos se trata de herencia intermedia. Tambin existe el caso de la codominancia, cuando Aa presenta los rasgos de AA y de aa. Por ltimo, el efecto de sobredominancia ocurre cuando el heterocigoto es mejor que cualquiera de los homocigotos (anemia falciforme). PEGAR 60 -Penetrancia/expresividad: La penetrancia es la proporcin de individuos que presentan el fenotipo correspondiente a su genotipo; si es menor que uno se llama penetrancia incompleta. La expresividad es, en cada individuo, el grado de expresin del fenotipo para un genotipo dado. PEGAR 61

 -Alelismo mltiple: Cuando existen varios alelos para un mismo carcter tenemos una cantidad de genotipos distintos a la proporcin habitual, y lo mismo pasa con los fenotipos. La tabla que resume las ecuaciones para calcular estos nmeros variables aparece a continuacin. PEGAR 62 -Prueba de alelismo: Esto es ms bien un mtodo para conocer si dos fenotipos distintos se deben a dos genes o dos alelos del mismo gen. Para ello se cruzan las dos especies: si son dos genes se cruzar (a+/a+) x (b+/b+), dando (a+/b+), que es el fenotipo salvaje; en el caso de alelismo mltiple el cruce ser (a/a) x (b/b), dando un fenotipo (a/b), mutante. -Interaccin entre genes: Esto ocurre cuando varios genes son necesarios para dar un fenotipo en concreto, cuando ambos contribuyen para un mismo fenotipo. Tenemos varios tipos de interaccin: la ms normal aparece en la zona inferior con los pimientos. La imagen del zurrn de pastor (Capsella bursapastori) es un ejemplo de epistasia, donde se ha duplicado un gen de forma que cualquier alelo dominante, en cualquiera de los dos genes, da el fenotipo dominante, con lo que la proporcin 9:3:3:1 de 2 genes se altera a 15:1. Tambin es posible que hayan 3 genes con 2 alelos cada uno, de forma que cada gen dominante de un color ms rojo: esto dara una proporcin extraa, propia de este modelo de herencia, como se ve en la tabla de la herencia polignica aditiva. En general, todos estos estudios se realizan con tcnicas de gentica de bioqumica, para saber qu ruta se ve interrumpida en el fenotipo mutante y encontrar as la relacin entre los distintos genes que dan lugar a un tipo u otro de epistasia. Esto empez en el estudio de la ruta de biosntesis de la niacina por parte del hongo Neurospora crassa, estudio realizado por Beadle y Tatum (propusieron 1gen-1enzima). Tambin se han hecho estudios sobre el color de la aleurona del maz (en imagen). Tambin se determina si se trata de herencia intermedia o completa segn el agente activo del gen deba atravesar un umbral o el fenotipo aparezca gradualmente con el agente activo producto del gen (esta informacin se obtiene tras conocer la relacin entre los alelos). En general, todos los problemas de epistasia se resumen en la tabla que aparece al final de las figuras. PEGAR 64, 65, 66, 69, 72 Alelos letales: Estos alelos letales suelen ser recesivos, quedando enmascarados por el dominante en heterocigotos. Por ejemplo, en ratones hay un alelo pleiotrpico Ay que es dominante para el color amarillo pero letal recesivo. De esta forma, los heterocigotos AAy tendrn descendencia amarilla (50%) y negra (25%), murindose el otro 25% al ser AyAy. La proporcin. 2:1, fue difcil de explicar hasta que se encontr que realmente otro 25% de los ratones mora y no llegaba a nacer. Herencia extranuclear: En el caso de los orgnulos, algunos (mitocondrias y cloroplastos) tienen su propio genoma circular y en varias copias, codificando para unos pocos genes (si bien muchos otros estn a cargo de genes nucleares debido al

efecto de la endosimbiosis). En este caso, herencia es uniparental ya que los orgnulos residen en el citoplasma y, en especies hetergamas, ste es aportado enteramente por la madre (excepto algunas excepciones donde el padre puede aportar algo de citoplasma) en la fecundacin. Esto se observa en el dondiego de noche. Adems, al haber varios de estos orgnulos en cada clula stos se reparten al azar en cada divisin celular. Si a esto se le suma que su tasa de mutacin es alta, se puede llegar a la conclusin de que es posible que ocurra una segregacin replicativa que d lugar a clulas heteroplsmicas (con orgnulos mutados y salvajes) o, eventualmente, homoplsmicas (con orgnulos slo salvajes o slo mutantes), dando especies variegadas como se ve en la imagen. PEGAR 76, 77

Para acabar el tema, hablaremos de los marcadores clsicos, los ms tradicionales. Los ms comunes son los marcadores fenotpicos, diferencias morfolgicas visibles que se observan directamente. El problema de estos marcadores es que si se quiere conocer el genotipo es algo complejo, ya que se necesitan varios cruces (ms an en caso de que sea una relacin gnica compleja, epistasia, etc.). Esto encarece mucho el proceso, y lo alarga en el tiempo. Esto se soluciona en parte con codominancia, herencia intermedia, etc. Otros datos de gran importancia en los marcadores clsicos son los datos de aloenzimas. Estas son distintas variantes proteicas, que dependen de variaciones allicas monolocus y que se pueden detectar por electroforesis ya que su migracin es distinta. Por ejemplo, el estudio sobre la anemia falciforme se haca con estudios con aloenzimas hasta que llegaron los marcadores de DNA, que desbancaron este mtodo. PEGAR 85 Estas aloenzimas se clasifican segn su funcin y en un signo de tres letras (ADH, ACP como fosfatasa cida, fosfoglucoisomerasa PGI, etc.). Por ltimo, tambin se empleaban como marcadores los datos de secuencias de protenas, un sistema algo ms caro pero con mejores resultados. Lo que se hace es PAGE con un extracto enzimtico (tratado o no con proteasas, aunque puede hacer que la variabilidad sea menor) y, si la mutacin hace que su migracin sea distinta, se podr observar en el gel. Generalmente, estas variantes proteicas estn codificadas por una variante allica monolocus. La secuencia de aa de la protena tambin puede dar informacin de gran valor. Las ventajas de esta tcnica es que permite detectar locus invariables (una nica banda) o distintos genotipos y locus gnicos ya que stos aparecern como un patrn de bandas caracterstico para el individuo. Pero tienen tambin sus inconvenientes: la degeneracin del cdigo gentico hace que hayan mutaciones que no se observen en datos de secuencia de protenas o aloenzimas. adems de que no todas las sustituciones de aminocidos alteran la movilidad electrofortica y, por tanto, son observables mediante PAGE. Es por esto que estas tcnicas estn limitadas, ya que no detectan todos los posibles marcadores.