Enzimas. Aspectos generales y clasificacin.

Las enzimas se definen habitualmente como sustancias proteicas elaboradas por las clulas que catalizan una reaccin especfica necesaria para el mantenimiento de la vida. Desde un punto de vista biotecnolgico es importante el estudio de las reacciones metablicas catalizadas enzimticamente, si como el de las transformaciones enzimticas in vitro catalizadas por enzimas aisladas que permiten la obtencin o biotransformacin de muchos productos de inters en la industria farmacutica, qumica, alimentaria, etc., como los ejemplos que se presentan en la siguiente tabla. Tabla 1. Algunas aplicaciones de las enzimas Enzimas Amidasas Amilasas Amiloglucosidasas Catalasa Celulasas Glucanasas Glucosa Isomerasa Glucosa oxidasa Hemicelulasas Invertasa Lacasas Lipasas Pectinasas Penicilina acilasa Proteasas Catlisis enzimtica. Desde el punto de vista estructural, las enzimas son protenas y, desde el punto de vista cintico, catalizadores. El conocimiento detallado de la funcin cataltica de una enzima requiere el mximo conocimiento posible de la estructura de la molcula enzimtica. Ello implica, no sol conocer qu aminocidos y en que nmero estn presentes en una molcula determinada, sino tambin la secuencia de los aminocidos en la cadena polipeptdica y, finalmente, la conformacin de la protena, la cual tiene una gran importancia sobre la accin cataltica. Los aminocidos no son los nicos constituyentes de las protenas (enzimas). Muchas enzimas contienen otros grupos orgnicos e incluso inorgnicos. Estas partes de las protenas conjugadas se denominan grupos prostticos. Aplicaciones Produccin de aminocidos Detergencia. Hidrolisis de almidn Hidrolisis de almidn Produccin de cido glucnico. Aplicaciones analticas Detergencia. Hidrolisis de celulosa Hidrolisis de almidn Produccin de jarabes de fructosa Produccin de cido glucnico. Aplicaciones analticas Hidrolisis de hemicelulosa Hidrolisis de sacarosa Blanqueo de pasta de papel Detergencia. Biotransformaciones Clarificacin de zumos de frutas Produccin de antibiticos semi-sintticos Detergencia. Biotransformaciones

En las enzimas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte polipeptdica de la enzima (componente proteico) Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima. Los cofactores pueden ser: o Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si no estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+ o La mayora de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular adecuada.

La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima. Las enzimas no hacen factibles las reacciones imposibles sino que, sencillamente, aceleran las que tendran lugar de manera espontnea (aqullas con un G<0). Gracias a ellas tienen lugar, en condiciones fisiolgicas, reacciones que, sin catalizador, requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o de pH. En las reacciones espontaneas, los productos finales tienen menor energa libre de Gibbs (G) que los reactantes. Por tanto, en las reacciones espontaneas se libera energa de Gibbs (G<0). Sin embargo, el comienzo de la reaccin requiere un aporte inicial de energa, esta energa inicial que hay que suministrar a los reactantes para que la reaccin transcurra se llama energa de activacin (Ea), cuanto menor sea Ea mas fcilmente transcurre la reaccin. Perfil energtico espontnea de una reaccin Perfil energtico de una reaccin catalizada

En una reaccin catalizada por un enzima: 1. La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato. 2. El sustrato se une a una regin concreta de la enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende (1) un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin Una vez formados los productos, la enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin 1.- La enzima y su sustrato 2.- Unin al centro activo 3.- Formacin de productos

Las enzimas, a diferencia de los catalizadores inorgnicos catalizan reacciones especficas. Sin embargo hay distintos grados de especificidad. La enzima sacarasa es muy especfica: rompe el enlace -glucosdico de la sacarosa o de compuestos muy similares. As, para el enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras que la maltosa y la isomaltosa son sustratos anlogos. La enzima acta con mxima eficacia sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos anlogos. Entre las enzimas poco especficas estn las proteasas digestivas como la quimotripsina, que rompe los enlaces amida de protenas y pptidos de muy diverso tipo. Modos de accin La accin de los catalizadores consiste, precisamente, en disminuir la Ea. Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la Ea an ms que los catalizadores inorgnicos. Por ejemplo, la descomposicin del agua oxigenada (H2O2) para dar H2O y O2 puede ocurrir sin catalizador, con un catalizador inorgnico (platino), o con un enzima especfico (catalasa). Las respectivas Ea para cada proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin 20.000 veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces. Para que una reaccin qumica tenga lugar, las molculas de los reactantes deben chocar con una energa y una orientacin adecuadas. La actuacin de la enzima (1) permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca y (2) modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros nuevos:

Sitio activo Para formar el complejo ES, el sustrato se fija a un lugar definido de la enzima. Esta regin de la molcula ha recibido las denominaciones de sitio activo, centro activo, sitio cataltico o lugar del sustrato y es donde se cumple la accin cataltica. El lugar de sustrato posee sitios de unin y cataltico. Al fijarse al primero, el sustrato se dispone de manera tal que el enlace a ser modificado en la reaccin se ubica exactamente en el sitio cataltico. Tanto la unin como la accin catalizadora exigen una conformacin tridimensional altamente especfica a nivel del sitio activo, en el cual las cadenas laterales de los restos aminoacdicos aportan grupos funcionales esenciales. Por ejemplo, cadenas laterales reactivas como las de cistena, glutamato, aspartato, lisina, arginina, histidina, serina y treonina, o restos hidrofbicos, suelen desempear un papel importante en la unin del sustrato.

El sitio activo es una agrupacin de un nmero no muy grande de aminocidos, distribuidos especialmente de manera precisa. Esta disposicin se mantiene gracias a la contribucin de las estructuras (primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) de la protena. En la formacin del sitio activo participan restos de aminocidos situados a veces en posiciones distantes de la cadena polipeptdica, que convergen en una zona restringida y se ubican en posiciones espaciales adecuadas, por los plegamientos y torsiones de la cadena. La unin del sustrato a la enzima comprende la formacin de enlaces no covalentes, tales como puentes de hidrogeno, enlaces inicos e interacciones hidrofbicas y de Van der Waals. Los grupos qumicos del sitio activo capaces de interaccionar con el sustrato estn dispuestos en el espacio del tal modo que enfrentan a los grupos correspondientes del sustrato especifico y lo fijan en la posicin apropiada. La molcula de sustrato fijada a la enzima sufre una deformacin en los enlaces que han de ser afectados por la reaccin y adquiere un estado tenso, desde el cual pasa fcilmente a formar el o los productos. Este estado de tensin o activacin es el llamado intermediario de transicin y explica por qu la enzima reduce la energa de activacin. Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo de la enzima: El modelo llave-cerradura: Supone que la estructura del sustrato y la del sitio activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es valido para muchos casos, pero no siempre es correcto.

El modelo del ajuste inducido: En algunos casos, el centro activo adopta la conformacin idnea solo en presencia del sustrato. La unin del sustrato al centro activo de la enzima desencadena un cambio conformacional que da lugar a la formacin del producto.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

Ante la necesidad de establecer una nomenclatura inequvoca para las enzimas, se cre una Comisin Enzimtica para establecer unas normas que permitan nombrar las enzimas. As, el nombre de cada enzima consiste en un cdigo alfanumrico, encabezado por las letras EC (de Enzyme Commission), seguido de cuatro nmeros separados por puntos. El primer nmero corresponde a cada una de las seis grandes clases o grupos en que se han dividido las enzimas, en funcin de su accin cataltica especfica Clase 1: OXIDORREDUCTASAS. Clase 2: TRANSFERASAS. Clase 3: HIDROLASAS Clase 4: LIASAS. Clase 5: ISOMERASAS Clase 6: LIGASAS Tabla 2. Tipo de enzimas segn su accin cataltica especifica Numero de clasificacin 1 Tipo de enzimas Actividad Catalizan reacciones de xido-reduccin. Facilitan la transferencia de electrones de una molcula a otra. Ejemplo: la glucosa oxidasa, cataliza la oxidacin de glucosa a cido glucnico. Catalizan la transferencia de grupos funcionales de una sustancia a otra. Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la transferencia de un grupo metilo de una molcula a otra. Catalizan reacciones de hidrlisis. Rompen las biomolculas con molculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas. Catalizan las reacciones de formacin de dobles enlaces por eliminacin de grupos o adicin de grupos a un doble enlace Catalizan las reacciones en las cuales un ismero se transforma en otro, es decir, reacciones de isomerizacin. Catalizan la unin de molculas. Formacin de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por condensacin acoplada con la ruptura de ATP

Oxidorreductasas

Transferasas

Hidrolasas

Liasas

Isomerasas

Ligasas

El segundo nmero hace referencia a las distintas subclases dentro de cada clase, y el tercero y el cuarto se refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en la reaccin. Por ejemplo, la ATP:glucosa fosfotransferasa se define como EC 2.7.1.1. El nmero 2 nos indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el primer 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el segundo 1 indica que es la D-glucosa la que acepta el grupo fosfato.

El nombre sistemtico de una enzima consta actualmente de 3 partes:

el sustrato preferente el tipo de reaccin realizado terminacin "asa"

Un ejemplo sera la glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerizacin de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato. Cuando la accin tpica del enzima es la hidrlisis del sustrato, el segundo componente del nombre se omite y por ejemplo, la lactosa hidrolasa se llama simplemente lactasa. Adems de los nombres sistemticos, an persisten otros consagrados por el uso. As, la glucosa:ATP fosforiltransferasa se llama habitualmente glucoquinasa. Propiedades de las enzimas Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser protenas y de actuar como catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable que las dems conformaciones posibles. As, cambios en la conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad de un enzima son:

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica Las enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo. La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10 (Figura de la izquierda). Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos.

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

Efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad enzimtica Si se mantiene la concentracin de la enzima constante y variando la concentracin de sustrato se obtiene una curva hiperblica como la de la figura. Al principio un aumento de la concentracin de sustrato produce un aumento rpido de la velocidad de reaccin, pero si se sigue aumentando la

concentracin de sustrato, la velocidad de reaccin comienza a disminuir y a muy altas concentraciones de sustrato se observa que no cambia la velocidad de reaccin, se dice que los centros activos de la enzima se encuentran saturados. La velocidad de reaccin que se obtiene a esa alta concentracin de substrato se define como la velocidad mxima (V) de la reaccin enzimtica bajo las condiciones especificadas.