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CUADERNILLO TEÓRICO
OAB
Editado por Olimpíada Argentina de Biología
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Editado por Olimpíada Argentina de Biología
Ingeniería genética
En 1970 comienza el desarrollo de la tecnología del DNA recombinante, llevando
a métodos de investigación novedosos.
Las técnicas de DNA recombinante se desarrollaron en un principio como
herramientas que permitirían a los científicos obtener una gran cantidad de copias de
cualquier segmento de DNA específico, de manera que éste pudiera estudiarse desde
el punto de vista bioquímico. Esto se realizó en un inicio introduciendo DNA ajeno en
células de microorganismos. En condiciones apropiadas, éste se duplica y transmite a
las células hijas cuando la original se divide. Así una secuencia de DNA específica
puede ser amplificada o clonada para producir millones de copias idénticas que pueden
aislarse en forma pura. En la actualidad son cada vez más importantes los métodos in
vitro.
La tecnología del DNA recombinante tiene varias aplicaciones, una de las que
más avanza es la ingeniería genética, que implica la modificación del DNA de un
organismo para producir nuevos genes con nuevas características. Su desarrollo se
debe al descubrimiento de las enzimas de restricción y de la transformación bacteriana
de los plásmidos. Las bacterias producen enzimas conocidas como de restricción, las
cuales cortan las moléculas de DNA sólo en lugares específicos.
La amplificación de un fragmento de DNA puede lograrse in vitro, con el uso de
polimerasas de DNA de bacterias termorresistentes e in vivo, introduciendo moléculas
de DNA recombinante (vector + inserto DNA) en bacterias u otros microorganismos
como las levaduras.
Las enzimas de restricción son “tijeras moleculares” cuya especificidad permite
realizar cortes del DNA de manera controlada. Existen varias enzimas conocidas, un
ejemplo es Bam HI que reconoce y corta una molécula de DNA en la secuencia de
bases 5´G/GATTCC-3´, otro es EcoRI, que corta la secuencia 5´-G/AATTC-3´.
Muchas de las enzimas empleadas para estudios de DNA recombinante cortan
secuencias polindrómicas, en las cuales una cadena se lee igual que su complemento
pero en sentido opuesto, por ejemplo para 5´-AAGCTT-3´ se lee, 3´-TTCGAA-5´.
Cuando la enzima corta, quedan extremos de cadenas sencillas complementarios a los
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que se denomina “pegajosos” por la posibilidad que poseen de unirse entre sí por
enlaces de hidrógeno. Además, el fragmento puede tratarse con una ligasa de DNA
para lograr una molécula recombinante estable.
En la figura se muestra el mecanismo de acción de una enzima de restricción.
Luego del aislamiento, los fragmento del DNA, deben ser incorporados a un
portador adecuado llamado vector para poder ser amplificado.
Vectores
Después de unirse a un vector o vehículo de clonación, un segmento de DNA
puede llegar a entrar en una célula huésped y replicarse (clonarse). Los vectores son,
esencialmente, moléculas de DNA transportadoras. Para servir de vector, una molécula
de DNA debe tener unas determinadas características:
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vector.
3. Debe tener algún marcador de selección, (normalmente genes de resistencia a
antibióticos o genes de enzimas que la célula huésped no tenga) para poder
distinguir las células huésped que transportan al vector, de las que no las contienen.
4. El vector debería poder extraerse fácilmente de la célula huésped.
Los plásmidos
Un plásmido es una molécula circular separada del DNA bacteriano y mucho
más pequeña que éste pero con la capacidad de duplicarse dentro de la célula
bacteriana y de brindarles facultades para desarrollarse en condiciones específicas en
las que no podrían hacerlo si no estuvieran transformadas.
Son moléculas de DNA de doble cadena extracromosómicas de origen natural
que tienen un origen de replicación (ori+) y que se replican autónomamente en células
bacterianas. Para poder utilizarlos en ingeniería genética, se han modificado de manera
que contengan un número limitado de sitios de restricción y genes de resistencia a
antibióticos específicos.
El vector pBR322 fue uno de los primeros plásmidos diseñados que se utilizó.
ori
Figura. Mapa de restricción del plásmido pBR322, que muestra las localizaciones de los sitios
de las enzimas de restricción que cortan el plásmido por un solo sitio. Estos sitios pueden
utilizarse para insertar los fragmentos de DNA a clonar. También se muestran las
localizaciones de los genes de resistencia a antibióticos.
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ori
Figura. El plásmido pUC18 ofrece varias ventajas como vector de clonación. Debido a su
pequeño tamaño, puede aceptar fragmentos de DNA relativamente grandes; se replica hasta
un alto número de copias y tiene un gran número de sitios de restricción en el sitio de clonación
múltiple, localizado dentro del gen lacZ. Las bacterias que contienen pUC18 producen colonias
de color azul si crecen en un medio que contenga X-gal. El DNA insertado en el sitio de
clonación múltiple interrumpe el gen lacZ, resultando en colonias blancas, lo que permite la
identificación directa de las colonias que tienen insertos de DNA clonados.
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Figura. Pasos en la
clonación utilizando el fago
lambda como vector. Se
extrae el DNA de una
preparación de fago lambda
y se elimina el grupo central
de genes por tratamiento
con una enzima de
restricción. El DNA a clonar
se corta con la misma
enzima y se liga entre los
brazos del cromosoma de
lambda. Luego se
empaqueta el cromosoma
recombinante dentro de las
proteínas del fago para
formar un virus
recombinante. Este virus
puede infectar células
bacterianas y replicar su
cromosoma, incluido el 6
inserto de DNA.
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Los cósmidos son vectores híbridos construidos utilizando partes del cromosoma
del fago lambda y de DNA plasmídico. Los cósmidos contienen la secuencia cos del
fago lambda, necesaria para el empaquetamiento del DNA del fago dentro de su
cubierta proteica, y secuencias plasmídicas de replicación (ori) y de genes de
resistencia a antibióticos, que permiten identificar las células huésped que los
contienen. El DNA de los cósmidos que contienen insertos de DNA se empaqueta en la
cápside proteica de lambda para formar partículas fágicas infectivas.
Una vez que el cósmido entra en la célula huésped se replica como un
plásmido. Puesto que la mayoría del genoma lambda se ha delecionado, los cósmidos
pueden transportar insertos de DNA mucho más grandes que los que lambda puede
llevar. Los cósmidos pueden transportar casi 50kb de DNA insertado; los vectores
fágicos pueden acomodar insertos de DNA de unas 15 kb, y los plásmidos
generalmente están limitados a insertos de 5- 10 kb.
Existen otros vectores híbridos, construidos con orígenes de replicación
provenientes de distintas fuentes (por ejemplo, plásmidos y virus animales como
SV40), que pueden replicarse en más de un tipo de célula huésped. Generalmente,
estos vectores transbordadores contienen marcadores genéticos que permiten su
selección en los dos sistemas huésped, y pueden utilizarse para transportar insertos de
DNA entre E. coli y otras células huésped como levadura y viceversa.
A menudo, estos vectores se emplean para investigar la expresión génica.
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Figura. El cósmido pJB8 contiene un origen de
replicación bacteriano (ori), un solo sitio cos
(cos), un gen de resistencia a ampicilina (amp)
para seleccionar las colonias que han
incorporado el cósmido, y una región que
contiene cuatro sitios de restricción para la
clonación (BamHI, EcoRI, Clal y Hind III). Las
cubiertas víricas que contienen un cósmido
pueden utilizarse para infectar células huésped
adecuadas, y el vector que transporta el inserto
de DNA se transferirá a la célula huésped por
infección. Una vez dentro, la secuencia ori
permite que el cósmido se replique como un
plásmido bacteriano.
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Figura. Resumen de los pasos seguidos en la clonación de un vector plasmídico. Los vectores plasmídicos se aíslan y
se cortan con una enzima de restricción. El DNA a clonar se corta con la misma enzima de restricción, produciendo
una colección de fragmentos. Estos fragmentos se reparten entre los vectores y se transfieren a huéspedes
bacterianos para su replicación. Las células bacterianas que contienen plásmidos pueden identificarse por crecimiento
en un medio selectivo, y pueden aislarse. El DNA clonado puede recuperarse del huésped bacteriano para nuevos
análisis.
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1. El DNA que se va a clonar se aísla y se trata con una enzima de restricción para
crear fragmentos que acaben en secuencias específicas.
2. Estos fragmentos se ligan a moléculas de plásmido que han sido cortadas con la
misma enzima de restricción, obteniéndose un vector recombinante.
3. El vector recombinante se transfiere a células huésped bacterianas,
generalmente por transformación, un proceso en el que las moléculas de DNA
atraviesan la membrana de la célula huésped transfiriéndose a su interior.
4. La célula huésped se hace crecer en una placa de cultivo, donde formará
colonias. Puesto que las células de cada una de las colonias provienen de una
sola célula inicial, todas las células de la colonia, y los plásmidos que contienen,
son genéticamente idénticas, o clones. Se rastrean las colonias para identificar
las que han incorporado el plásmido recombinante.
contiene ampicilina a una placa que contiene tetraciclina, debido a que el inserto ha
inactivado el gen de resistencia a tetraciclina. Entonces, el patrón de colonias de la
placa con tetraciclina se compara con el de la placa con ampicilina, y se identifica las
colonias de la placa con ampicilina que no han crecido en la placa con tetraciclina. Las
células de estas colonias contienen vectores con el inserto de DNA, y se transfieren a
un medio de crecimiento para nuevos análisis.
Figura. Selección de colonias que contienen un vector plasmídico que tiene dos genes de
resistencia a antibióticos, uno para tetraciclina y otro para ampicilina. En este experimento,
la presencia del inserto de DNA en el plásmido inactivará el gen de resistencia de
tetraciclina.
un solo fago inicial. Los cósmidos infectan a las células bacterianas como los fagos,
pero luego se replican como los plásmidos dentro de la célula huésped. Las células que
contiene cósmidos con DNA clonado pueden identificarse y recuperarse de la misma
manera que los plásmidos.
Vectores de levadura
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Bibliotecas genómicas
Las bibliotecas genómicas (o genotecas) suelen construirse utilizando vectores
fágicos, que pueden contener grandes fragmentos cromosómicos. Para preparar una
biblioteca en el fago lambda, se corta el DNA de lambda con una enzima de restricción
para eliminar el grupo génico central. El DNA genómico que se desea clonar se corta
con la misma enzima, y se purifican los fragmentos cortados de tamaño óptimo para el
empaquetamiento (de 15 a 17kb) mediante electroforesis en gel o por centrifugación.
Estos fragmentos de DNA se ligan con los brazos del cromosoma de lambda para
formar la biblioteca.
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Bibliotecas de cDNA
Se puede construir una biblioteca que represente los genes que se están
transcribiendo en una célula eucariótica en un momento dado, utilizando el mRNA
aislado de esa célula. Casi todas las moléculas de mRNA eucariótico tiene una cola de
poli-A en su extremo 3’. Primero, se hibrida la población de moléculas de mRNA que
tienen colas de poli-A 3’ con oligo-dT (DNA corto de cadena sencilla formado sólo por
dexositimidina). La secuencia de oligo-dT híbrida con la cola de poli –A, y sirve de
cebador para la síntesis de una cadena complementaria de DNA utilizando la enzima
retrotranscriptasa (transcriptasa inversa). Esta enzima es una DNA polimerasa
dependiente de RNA que copia un molde de RNA de cadena sencilla en un DNA de
cadena sencilla. El resultado es un dúplex RNA-DNA de doble cadena. La cadena de
RNA se elimina y la cadena sencilla de DNA se utiliza como molde para sintetizar la
cadena complementaria de DNA, utilizando la DNA polimerasa I. El extremo 3’ de la
cadena sencilla de DNA se dobla sobre sí mismo formando una horquilla (un lazo), por
lo que puede servir de cebador para sintetizar la segunda cadena. El resultado es un
DNA dúplex con las cadenas unidas por un extremo. La horquilla puede abrirse,
obteniéndose una molécula de DNA de doble cadena (denominada DNA
complementario o cDNA), cuya secuencia nucleotídica deriva de una molécula de
RNA.
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Si se añade un trozo corto de DNA con sitios de restricción en cada uno de sus
extremos, el cDNA puede clonarse. Este sitio de clonación puede cortarse con la
enzima de restricción adecuada, produciendo extremos pegajosos, lo que permite que
el cDNA se inserte en el sitio de restricción de un vector plasmídico o fágico.
Una biblioteca de cDNA es diferente de una biblioteca genómica ya que
representa sólo un subconjunto de todos los genes del genoma. Otra diferencia es que
las bibliotecas de cDNA no contienen las secuencias promotoras adyacentes al gen, ni
tampoco contienen las secuencias intercaladas o intrones, ya que éstos han sido
eliminados del pre-mRNA durante la reacción de corte y empalme y no se encuentran
en el mRNA maduro.
Las bibliotecas de cDNA utilizan mRNA como punto de partida, de manera que
sólo representan a las secuencias que se están expresando en un tipo celular, en un
tejido, o en un estadio concreto del desarrollo embrionario. La decisión de construir una
biblioteca genómica o de cDNA depende del problema planteado. Si se está interesado
en un gen particular, podría ser más fácil preparar una biblioteca de cDNA del tejido en
el que se expresa dicho gen. Por ejemplo, los glóbulos rojos producen grandes
cantidades de hemoglobina, y la mayoría del mRNA de estas células es mRNA de la
β-globina. Una biblioteca de cDNA preparada utilizando mRNA aislado de glóbulos
rojos permite aislar con facilidad un gen de la globina. Si se interesaran las secuencias
reguladoras adyacentes al gen de la globina, se necesitaría construir una biblioteca
genómica, ya que estas secuencias reguladoras no se encuentran en el mRNA de la
globina, y por lo tanto no estarían representadas en la biblioteca de cDNA.
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Cartografía de restricción
Un mapa de restricción es la recopilación del número, del orden y de la
distancia entre los sitios de corte de enzimas de restricción en un segmento clonado de
DNA. Las unidades de mapa se expresan en pares de bases (pb) o, para largas
distancias, en pares de kilobases (kb). Los mapas de restricción proporcionan
información que puede utilizarse para subclonar fragmentos de un gen, o bien para
comparar la organización de un gen y de su cDNA con el fin de identificar los exones y
los intrones en la copia genómica del gen.
Los fragmentos generados tras cortar el DNA con enzimas de restricción pueden
separarse mediante electroforesis en gel, método que separa los fragmentos por su
tamaño, y en el que los fragmentos más pequeños se mueven más rápidamente. Los
fragmentos aparecen como una serie de bandas que pueden visualizarse tiñendo el
DNA con bromuro de etidio e iluminándolo con luz ultravioleta (siguiente figura). El
tamaño de los fragmentos individuales puede determinarse corriendo un conjunto de
fragmentos marcadores de tamaño conocido en otro carril del mismo gel.
Figura. Gel de agarosa que contiene fragmentos separados de DNA, teñidos con un colorante
(bromuro de etidio) y visualizados mediante iluminación ultravioleta.
La siguiente figura muestra los pasos que deben seguirse para construir el
mapa de restricción de un segmento de DNA clonado que contiene sitios de corte para
dos enzimas de restricción. Para construir el mapa, empecemos con una segmento de
DNA clonado de 7 kb de longitud. Tres muestras del DNA clonado se digieren con
enzimas de restricción: una con HindIII; otra con SalI; y la última con las dos
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enzimas nombradas. Los fragmentos generados por la digestión con las enzimas de
restricción se separan por electroforesis. El tamaño de estos fragmentos se estima por
comparación con un conjunto de patrones de tamaño separados electroforéticamente
en carriles adyacentes del mismo gel. Para construir el mapa, se analizan los
fragmentos generados con las enzimas de restricción.
1. Cuando el DNA se corta con HindIII, se producen dos fragmentos, uno de 0,8 kb
y otro de 6,2 kb, indicando que sólo hay un sitio de restricción para esta enzima (y que
está localizado a 0,8 kb de uno de los extremos).
2. Cuando el DNA se corta con SalI, se producen dos fragmentos, uno de 1,2 kb y
otro de 5,8 kb, lo que significa que hay un único sitio de restricción localizado a 1,2 kb
de uno de los extremos.
En conjunto, estos resultados muestran que hay un sitio de restricción para cada
enzima, pero se desconoce la relación existente entre estos dos sitios. Con esta
información, hay dos mapas posibles. En un modelo, el sitio HindIII está a 0,8 kb de
uno de los extremos (modelo I), y el sitio SalI está a 1,2 kb del mismo extremo. En el
modelo alternativo (modelo 2), el sitio HindIII está localizado a 0,8 kb de un extremo, y
el sitio SalI está localizado a 1,2 kb del otro extremo.
El modelo correcto puede determinarse si se consideran los resultados de la
digestión de ambas enzimas, HindIII y SalI. El modelo 1 predice que la digestión con
ambas enzimas generará tres fragmentos de 0,4, 0,8 y 6,2 kb; ambas enzimas
generarán tres fragmentos de 0,8, 1,2 y 5 kb. El patrón real de fragmentos observado
después de la digestión con ambas enzimas indica que el modelo correcto es el modelo
1 de la Figura.
En la mayoría de los casos, la cartografía de restricción es más compleja e
implica un mayor número de enzimas y un mayor número de sitios para cada enzima.
Los mapas de restricción proporcionan una manera importante de caracterizar un
segmento de DNA, y pueden construirse sin tener ninguna información de la capacidad
codificadora ni de la función del DNA cartografiado. Junto con otras técnicas, el
cartografiado de restricción puede utilizarse para definir los extremos de un gen, y
proporciona una manera de diseccionar la organización molecular de un gen y de sus
regiones flanqueantes. El cartografiado también puede servir de punto de partida para
analizar un gen intacto de segmentos clonados de DNA, y proporciona una
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Figura. Construcción de un mapa de restricción.
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Secuenciación de DNA
En cierto sentido, la caracterización definitiva de un segmento de DNA clonado
es la determinación de su secuencia de nucleótidos. La capacidad de secuenciar DNA
clonado ha permitido grandes avances en el conocimiento de la estructura génica y de
los mecanismos de regulación. Aunque desde la década de los 40 hay técnicas que
permiten determinar la composición de bases del DNA, fue en la década de los 60
cuando se desarrollaron los métodos para determinar la secuencia de los nucleótidos.
En 1965, Robert Holley determinó la secuencia de una molécula de tRNA que contenía
74 nucleótidos. Se necesitó un año de esfuerzo para realizar este trabajo. En la
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del ciclo se realiza a una temperatura diferente. El ciclo puede repetirse llevando a
cabo otra vez todos los pasos. Empezando con una molécula de DNA, el primer ciclo
produce dos moléculas de DNA, dos ciclos producen cuatro, tres ciclos producen ocho,
etc. Veinticinco ciclos amplifican varios millones de veces el DNA en cuestión. El
proceso es automático y se utiliza una máquina denominada termociclador, que puede
programarse para realizar un número predeterminado de ciclos, produciendo grandes
cantidades de segmentos de DNA amplificado en unas pocas horas.
La PCR es ampliamente utilizada en laboratorios de investigación y tiene
muchas aplicaciones en campos entre los que se incluyen las enfermedades
infecciosas, la arqueología, el control de alimentos, la genética humana, la terapia del
cáncer y la evolución molecular, entre otros. En aplicaciones clínicas, la PCR se utiliza
para identificar los agentes infecciosos como el bacilo de la tuberculosis y otras
bacterias, el HIV y otros virus. La PCR tiene la ventaja de ser rápida y menos laboriosa
que las técnicas de clonación convencionales, y ha reemplazado a la utilización de
sondas clonadas en campos como el diagnóstico prenatal. Aunque el desarrollo de la
técnica de PCR representa un adelanto importante, también tiene sus limitaciones.
Puesto que la PCR amplifica secuencias de DNA, incluso la más pequeña
contaminación del material inicial con DNA de otras fuentes puede provocar
dificultades. Células desprendidas de la piel de uno de los empleados del laboratorio
mientras se realizaba la PCR pueden contaminar las muestras recogidas del escenario
del crimen, dificultando la obtención de datos fiables. La PCR debe realizarse siempre
con controles adecuados.
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El clonado de ADN basado en células se usa para amplificar ADN con el objeto de
poder caracterizarlo físicamente y llevar a cabo estudios funcionales de los genes, de
grupos de genes o de otras secuencias de ADN de interés.
Ejercicio 1
1. ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN.
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Ejercicio 2
2. VECTORES DE CLONADO
Existen vectores naturales tales como plásmidos o bacteriófagos que han sido
modificados artificialmente para poder ser utilizados en el clonado. Otros han sido
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Ejercicio 3
a) ¿Qué son los plásmidos y qué características naturales poseen?
b) Los plásmidos naturales han sido modificados para hacerlos más adecuados como
vectores de clonado. Observa la estructura del pBR322 y deduce qué condiciones debe
reunir un plásmido para que sirva como vector.
Origen de BamH I
replicación Sph I 562
(ORI) Tetr Sal I 651
BstZ I 939
Ampr
Pst I
Pvu I
Sca I
Fig.2 Esquema del plásmido vector pBR322
f) ¿Cómo se origina la molécula quimera cuando el ADN de interés es cortado con una
enzima diferente a la empleada para cortar el plásmido?
g) ¿Qué tamaño máximo de fragmentos puede ser clonado en plásmidos?
h) ¿Cómo se introducen las moléculas recombinantes en las bacterias hospedadoras?
i) ¿Cómo identificarías las colonias de bacterias que han incorporado los plásmidos con
inserto?
j)¿Qué es una biblioteca genómica o genoteca? ¿Cómo se construye?
Bacteriófagos: usaremos como ejemplo el Fago lambda por ser uno de los más
conocidos.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Figura. Mapa sintetizado del cromosoma lineal del bacteriófago lambda mostrando la
posición de algunos genes.
Ejercicio 4
Ejercicio 5
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VECTORES DE EXPRESIÓN
ori
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Ejercicio 7
a) ¿Qué es una sonda, qué tipos de sondas existen y para qué sirven?
b) Describe brevemente cada una de las técnicas de sondeo mencionadas arriba.
ADN COMPLEMENTARIO
Ejercicio 8
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Esta técnica consiste en alrededor de unos 30 ciclos de replicación del ADN. Cada ciclo
contiene 3 etapas:
1. Desnaturalización: 95ºC
2. Renaturalización: ~55ºC
3. Síntesis: ~75ºC
• Rapidez: Una reacción típica de 30 ciclos de 3 a 5 min cada uno. El tiempo requerido
para el clonado en células es de semanas o meses.
• Sensibilidad de la reacción: Es posible amplificar secuencias a partir de diminutas
cantidades de ADN, aún de una única célula.
• No es necesario que el ADN esté muy purificado: Permite amplificar secuencias
específicas de material en el que el ADN está muy degradado o embebido en un
medio que hace problemático su aislamiento.
Ejercicio 9
BIBLIOGRAFÍA:
KLUG, W y M. CUMINGS. 1999. Conceptos de Genética. Ed. Prentice Hall. 5ta. ed.
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Tópico: Organismos
Bacteria
Organismos: Termotogales, flavobacterias, cianobacterias, bacterias púrpuras,
bacterias gram-positivas, bacterias verdes no-sulfurosas.
Características: Células procarióticas. Membranas lipídicas compuestas principalmente
por diésteres de diacil-glicerol. El RNA ribosomal de la subunidad pequeña de los
ribosomas (16S-rRNA) es del tipo eubacteriano, es decir, posee un bucle entre las
posiciones 500-545.
Dominio Archaea
Organismos: Pyrodictium, Thermoprocteous, termococales, metanococales,
metanobacterias, metanomicrobiales, halófilos extremos.
Características: Células procarióticas. Membranas lipídicas compuestas principalmente
por diéteres de glicerol isoprenoides o tetraéteres de diglicerol. El RNA ribosomal de la
subunidad pequeña de los ribosomas (I6S-rRNA) es del tipo arqueobacteriano, es
decir, tiene una estructura única entre las posiciones 180-197 ó 405-498.
Dominio Eukarya
Organismos: Animales, protozoos ciliados, protozoos flagelados, plantas, hongos,
diplomonas, algas rojas, euglenoides, microsporidias.
Características: Células eucarióticas. Membranas lipídicas compuestas principalmente
por diésteres de acil-glicerol. El RNA ribosomal de la subunidad pequeña de los
ribosomas (18S-rRNA) es del tipo eucariota, es decir, posee una estructura única entre
las posiciones 585-655.
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(P(
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Figura. La estructura filogenética más profunda de la diversidad biológica obtenida por Carl
Woese a partir de la secuenciación de rRNA.
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Los tres dominios Archaebacteria , Bacteria y Eukarya, incluyen a los seis Reinos tal
como se muestra:
Reino Características
Archaeo- Se caracterizan por la ausencia de peptidoglucano en las paredes
bacteria celulares y la presencia de lípidos de composición distintiva en las
membranas celulares que no se encuentra en ninguna otra bacteria. La
mayoría vive en lugares calurosos y ácidos
Eubacteria o Células de vida libre; diferenciación celular incipiente en algunos
Bacteria grupos. Incluye a todas las bacterias.
Protista o Células eucariotas. Flagelo de estructura 9+2 en algún momento de su
Protoctista ciclo de vida. La distinción entre unicelularidad y multicelularidad es
irrelevante. Es un grupo definido por exclusión, es decir, no son
animales, ni plantas, ni hongos ni procariotas. Contiene
aproximadamente 27 phyla incluyendo a protozoos y algas como los
organismos más comunes.
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Ejercicio 1
Bibliografía:
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Animal
Radial-diploblástico
Bilateral –
(Cnidaria)
Triploblástico
Según su desarrollo embrionario
Protostomados Deuterostomados
(Platyhelminthes, Nematoda, (Equinodermata,
Mollusca, Annelida Chordata)
Arthropoda)
Según la disposición del tubo digestivo
Celomados
Esquizocelomados (Annelida,
Mollusca, Arthropoda)
Según el modo de formación del celoma
Según la metamería
Enterocelomados
Sin metamería Con metamería (Equinodermata*1,
Mollusca Chordata)
Homómera Heterónoma * *1
Equinodermata: es considerado por su
(Annelida) (Arthropoda) bilateralidad en estadíos larvales.
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Glosario
Sistema digestivo en saco ciego: Existe una abertura que funciona como boca y ano
que se abre a un saco ciego.
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Sistema digestivo de tubo en tubo: Tubo unidireccional, con dos aberturas, boca y
ano.
Celoma: Cavidad llena de fluido que rodea al tubo digestivo, proporcionando un diseño
del tipo “tubo dentro de un tubo”, lo que permite una flexibilidad mucho mayor de la
cavidad interna. También supone la disponibilidad de espacio para los órganos
viscerales y permite un mayor tamaño y complejidad al dejar mayor superficie expuesta
para intercambios celulares. Funciona adicionalmente como un esqueleto hidrostático
en ciertos casos, especialmente en muchos gusanos contribuyendo a actividades como
traslación y excavación.
Acelomado: No existe cavidad corporal alrededor del tubo digestivo. El espacio entre
la epidermis (ectodérmica) y el tubo digestivo (Endodérmico) está completamente
ocupado por una masa esponjosa de células denominada parénquima (mesodermo).
Pseudocelomado: Existe una cavidad corporal alrededor del tubo digestivo limitada
por blastocele persistente que deriva del blastocele embrionario, por ello se denomina a
esta cavidad pseudoceloma o pseudocele.
Celomado: Hay una verdadera cavidad desarrollada dentro del mesodermo tapizada
por peritoneo mesodérmico.
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Ejercicio 2
Ejercicio 3
* Busca un dibujo de pata birrámea y unirrámea, identifica sus partes y explica a qué se
debe el nombre e hipotetiza cuál será la importancia adaptativa de cada tipo.
* Completa el cuadro dado arriba mencionando dos ejemplos de cada una de las
Clases.
Bibliografía consultada:
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BARNES, R. D. 1989. Zoología de los Invertebrados. Ed. Mc Graw Hill Interamericana 5ta.
ed.
CURTIS, H. y S. BARNES 2000. Biología. Ed. Médica Panamericana. 6ta. ed.
HICKMAN, C., L. ROBERTS y A. PARSON. 2002. Principios integrales de Zoología.
Ed. Mc Graw Hill Interamericana 11ma. ed.
PURVES, W; D. SADAVA; G. H. ORIANS Y H. CRAIG HELLER. 2003. Vida. La ciencia
de la Biología. Ed. Médica Panamericana. 6ta. ed.
SOLOMON, E. P; L. R. BERG y D. W. MARTIN, 1999. Biología. Ed. Mc Graw Hill
Interamericana 5ta. ed.
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El estudio de los vegetales, como cualquier ser vivo, implica abordarlo desde
diferentes perspectivas, entre ellas su morfología externa.
No siempre el cuerpo de las plantas superiores sigue, el modelo estructural básico (raíz,
tallo y hoja). Además de la variabilidad en el aspecto externo, que es causada por diferentes
modos de ramificación y simetría, la multitud de formas de los órganos vegetativos aumenta por
modificaciones morfológicas. Estas modificaciones o adaptaciones están generalmente
relacionadas con el ambiente en el que se desarrolla la planta, algunas son la acumulación de
reservas y la existencia de mecanismos de multiplicación vegetativa.
Este texto hace referencia a las adaptaciones del cormo no relacionadas y relacionadas
con la acumulación de reservas.
1- Hoja
a- Espinas foliares: son modificaciones agudas, muy ricas en tejidos de sostén y como
consecuencia, rígidas; pueden ser ramificadas o sencillas. Este tipo de adaptación está difundida
en vegetales típicos de zonas áridas, pero aparece también, como defensa contra herbívoros, en
algunos vegetales no xeromorfos de otras regiones climáticas y en ciertas plantas trepadoras.
Las espinas foliares se producen por transformación de hojas o de partes de éstas (fig. 1).
En Berberis sp, por ejemplo, son parte de la lámina foliar, que además presenta estípulas
modificadas. Éstas se desarrollan también en Acacia, Robinia y Prosopis (algarrobo).
Figura 1: Estípulas transformadas en espinas de Robinia pseudoacia.
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2- Tallo
a- Espinas caulinares: aparecen como toda rama lateral en la axila de las hojas. Pueden
ser simples o ramificadas, generalmente presentan una foliación reducida, aunque en algunos
casos producen hojas normales con yemas en las axilas. Ejemplo: Crataegus (fig. 4) y Prunus
spinosa.
Figura 4: Espina de Crataegus sp.
b- Zarcillos caulinares: son semejantes en forma y función a los zarcillos foliares, difieren
en su origen. Se originan de una yema axilar, del mismo modo que las ramas laterales normales.
Figura 5: Zarcillo caulinar de Passiflora sp.
Los braquiblastos tienen, con frecuencia, una vida limitada, suelen ser simples o
escasamente ramificados. En algunas plantas leñosas las hojas normales, al menos en estado
adulto, se forman únicamente en los braquiblastos por Ejemplo: Prunus cerasus (guindo), Malus
y Ginkgo.
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Figura 7: Opuntia sp tallos aplanados con ramas laterales (aréolas), las hojas de dichas ramas se han transformado
en espinas. Derivación de una forma suculenta (a la derecha) a partir de una forma cactácea con hojas (a la
izquierda)
Si las ramas laminares fotosintetizantes son braquiblastos y presentan por ello aspecto
muy semejante al de las hojas, reciben el nombre de filóclados. Ejemplo :Ruscus sp (fig. 8).
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Figura 8: Rama de Ruscus aculeatus mostrando filóclados con aspecto de hoja, sobre las que aparecen las flores.
e- Estolones: ramas laterales, más o menos delgadas, a menudo muy largas que nacen de
las base de algunos tallos. Los estolones pueden desarrollarse arrastrándose por la superficie de
la tierra y constituyen estolones epígeos, por ejemplo el fresal (fig. 9); o bien pueden hacerlo por
debajo del suelo formando estolones subterráneos, por ejemplo la menta.
Figura 9: Formación de un estolón de fresa (Fragaria sp).
3– Raíz
a- Espinas radicales: entre las Monocotiledóneas, por ej. algunas palmeras
(Acanthorrhiza) producen espinas radicales en la base del tallo, originadas por transformaciones
de las raíces adventicias.
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1- Hoja
Bulbos: brote subterráneo con los catáfilos o las bases foliares convertidos en órganos
reservantes.
En un bulbo de cebolla (Allium cepa) en corte longitudinal se distingue el tallo en forma
de disco con entrenudos breves, en su extremo se ubica la yema terminal de donde brota el
vástago epígeo con la inflorescencia. Las hojas cercanas al ápice tienen vaina engrosada y lámina
fotosintetizante normal. Las ubicadas en la parte media han perdido la lámina, y se reducen a la
vaina gruesa. Las más externas son muy delgadas, y constituyen las vainas foliares de hojas
viejas que han muerto después de la reabsorción de sus sustancias de reserva.
En otros casos, el bulbo está constituido por catáfilos escamosos y reservantes que se
disponen de manera imbricada, a este tipo se lo llama escamoso, por ejemplo la azucena.
En las plantas con bulbo, éste permanece latente en la estación desfavorable; al finalizar
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este período se reactiva la yema, produciendo hojas y flores a expensas de las reservas
almacenadas en él.
En las axilas de las hojas se producen yemas, cuyas hojas también acumulan reservas en
la base formando nuevos bulbos; éstos al independizarse y formar raíces adventicias contribuyen
a la multiplicación vegetativa de la planta.
2- Tallo
a- Rizoma: tallo subterráneo reservante, con crecimiento horizontal; como vive fuera de
la zona de la luz, carece de nomófilos u hojas propiamente dichas capaces de asimilar o
transpirar; en su lugar hay catáfilos, la mayoría de las veces en forma de escamas membranosas.
Posee yemas y produce vástagos folíferos y floríferos; también raíces adventicias. Podría
confundirse con una raíz, difiere de ella por sus catáfilos y yemas, por no tener caliptra y
principalmente por su anatomía.
Durante el período del año desfavorable a la vegetación, en los países con inviernos fríos
o con estaciones excesivamente secas, el rizoma defiende a la planta contra los rigores del
ambiente.
Figura 11: Rizoma: a, yema que dará el brote epígeo el año siguiente; b, c, d y e, cicatrices de los brotes de los años
anteriores.
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Figura 12: Esquema de una planta rizomatosa; a, b, c las ramas floríferas que se han formado como ramas laterales,
en tres años consecutivos, el eje principal continua el crecimiento monopódico.
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a b c
3– Raíz
a- Tubérculos radicales: los producen algunas plantas herbáceas bianuales y perennes.
Con frecuencia se asemejan a los tubérculos caulinares, pero se diferencian de ellos por la falta
de hojas y yemas axilares y por su estructura anatómica. Se desarrolla por transformación de
raíces adventicias que detienen su crecimiento en longitud y no desarrollan raíces laterales.
Todos los tubérculos radicales realizan la función de almacenamiento en el parénquima cortical,
que está muy engrosado a consecuencia de procesos de crecimiento primario. Ejemplos: dalia
(Dahlia sp) (fig. 14) y batata (Ipomea batata).
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GLOSARIO
de larga duración. Las ramas más viejas (más largas) están más alejadas de estas yemas
terminales.
Nomófilo: Hoja normal cuya función principal es fotosíntesis y regulación de la
transpiración.
Plagiótropa/po: la planta o el órgano que, como consecuencia de la acción unilateral de
un estímulo, se coloca en posición oblicua o transversal con respecto a la dirección del mismo.
En un pino, cedro o abeto, el tronco es ortótropo pero las ramas son plagiótropas.
Ortotrópo: en los fenómenos trópicos, la planta o el órgano que, como consecuencia de la
acción de un estímulo unilateral, se orientan en la misma dirección del estímulo. En el
geotropismo, por Ejemplo: la raíz y el tallo de la mayoría de las plantas son órganos ortótropos,
porque la dirección de la vertical del punto en que crece.
Simpódico Sistema de ramificación de las plantas superiores , cuyas ramas se originan a
partir de yemas axilares, y que se caracteriza porque la yema terminal de los tallo y ramas es de
vida corta transformandose tempranamente en flor.
Xeromorfo: aplícase a los vegetales que por su morfología externa o por su estructura
están adaptados a la sequedad; como los xerófitos.
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Ejercicio 1
Analiza la exomorfología de los siguientes vegetales, para cada uno, nombra los órganos
marcados con flechas. Menciona el órgano modificado, nombre de la modificación y su función.
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Las Gramíneas= Poaceas son una de las familias dentro de las Liliopsidas=
Monocotiledóneas más importante dentro del Reino Plantae. Cobran esta importancia ya que
incluyen una gran cantidad de géneros de gran valor e importancia económica, como los pastos
que constituyen la base de la alimentación del ganado (Bromus, Poa, Panicum, Eragrostis, etc.)
y los cereales que alimentan a la humanidad (Zea, Oryza Triticum, Avena, etc), además hay
plantas sacaríferas, como la caña de azúcar (Saccharum), industriales (Arundo, Saccharum, etc),
ornamentales (Lolium, Cynodon) oleaginosas, medicinales, aromáticas etc. Si analizamos la
exomorfología y la anatomía del cuerpo de las plantas de las diferentes especies que están
incluidas en esta familia nos encontraremos que en general todas responden a un plan básico de
organización con características comunes, (con excepciones), que nos permiten identificarlas,
aunque no podemos desconocer que en ellas existe una prodigiosa diversidad de delicadas e
interesantes estructuras.
Es así como el análisis de raíces, tallos, hojas, flores y frutos, entre otros, nos pueden
indicar la pertenencia de un vegetal a esta familia.
Este texto trata sobre el estudio de la flor e inflorescencias.
Para poder arribar a su estudio se deben recordar algunos conceptos básicos.
Una inflorescencia consta de: un eje principal, el raquis con hipsófilos llamados brácteas.
En la axila de cada bráctea nacen flores sostenidas o no por un pedicelo, o bien ramificaciones
con flores que constituyen inflorescencias parciales. Toda la inflorescencia está sostenida por un
pedúndulo.
En las inflorescencias simples cada rama lateral del eje principal forma una sola flor.
En las inflorescencias complejas, el eje principal produce inflorescencias parciales
provistas de un mayor o menor número de flores.
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parciales acaban en flores terminales. Estas flores se reconocen claramente porque se abren antes
que las flores laterales inmediatas.
En las inflorescencias abiertas, en cambio, el eje principal y sus ramas laterales de
primer orden detienen su crecimiento después de un cierto tiempo, pero no concluyen en una flor
terminal; en otras palabras quedan teóricamente abiertos.
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Inflorescencia
Salvo muy raras excepciones, las inflorescencias de las Gramíneas son compuestas. La
inflorescencia parcial o elemental es la espiguilla y las totales son panojas o espigas de
espiguillas.
Espiguilla o Espícula (= espiguita, fig. 2)
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• Panoja laxa: las ramas y pedicelos son alargados y las espiguillas un tanto separadas
entre sí (ej. Avena byzantina, Poa annua, oriza sativa).
• Panoja densa: las ramificaciones y pedicelos son cortos y las espiguillas están
apretadas junto al raquis principal (ej. Phleum, Alopecurus).
B- Espiga compuesta: las espiguillas están sostenidas sobre el raquis o sostenidas por un
brevísismo pedicelo (fig 4).
Existen tres tipos:
• Espigas unilaterales: las espiguillas están dispuestas en dos o más rangos hacia un
solo lado del raquis. Es posible distinguir las que tienen raquis articulado y las que
tienen raquis continuo y tenaz (ej. Cloris).
• Espigas dísticas: las espiguillas están ordenadas en dos series opuestas y alternas a lo
largo del raquis articulado (ej. Triticum).
• Espigas cilíndricas: las espiguillas se disponen en varios rangos sobre el raquis,
generalmente ensanchado (ej. Zea).
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La diversidad de disposición de las flores sobre las ramas de las plantas o la extremidad del tallo
(inflorescencia) es enorme. Los esquemas de abajo representan algunas de ellas. Señala si las
mismas son inflorescencias simples o complejas y busca un ejemplo para cada una.
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Bibliografía consultada:
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Teorías taxonómicas
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pueden existir relaciones entre ellas; sin embargo las similitudes compartidas podrían
ser el resultado de una evolución convergente y llevar a conclusiones erróneas al
intentar reconstruir las relaciones evolutivas del grupo estudiado.
Sólo las similitudes que son debidas a una descendencia común pueden ser
verdaderos indicadores de relaciones, porque podrían ser el resultado de descender de
un ancestro, pero por sí solas no dicen nada sobre los patrones de ramificación
evolutiva a partir de este ancestro.
Para distinguir los caracteres primitivos de los que han evolucionado
recientemente, el análisis cladista usa el concepto de comparación de grupos externos.
Un grupo externo es aquel conjunto de organismos que se encuentra relacionado al
estudiado, pero no incluido en el mismo. Con esto se puede deducir que cualquier
estado de un carácter que se encuentre tanto en el grupo en estudio como en el
externo, es un carácter ancestral en tanto que los estados del carácter que no
aparezcan en el grupo externo serán derivados.
Los organismos que comparten estados derivados de un carácter constituyen
subconjuntos internos del grupo denominados clados (klados= rama). Así un carácter
derivado, compartido por los miembros del clado es una sinapomorfía, en tanto que si
es sólo de uno de estos miembros se denomina autopomorfía.
De la asociación jerárquica de clados, en la cual algunos quedarán incluidos en
otros surgen esquemas ramificados denominados cladogramas. El mejor cladograma
es aquel en el cual el patrón de ramas refleja más claramente la distribución de
caracteres entre los organismos y el menor número de cambios independientes.
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- vértebras, mandíbulas
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Ejercicio 3
Ejercicio 4
* Analizando el ejemplo antes expuesto, indicar, en qué parte del párrafo se refleja el
costo energético, el costo de oportunidad y el costo de riesgo considerados en el
comportamiento territorial.
Entre las causas próximas del comportamiento están aquellos que determinan
su organización a través del tiempo. Los estudios sobre esta correlación temporal
permitieron descubrir los mecanismos encefálicos y hasta el nivel molecular que
permiten a los animales organizar su comportamiento en el tiempo.
Dentro de los ritmos biológicos se conocen a los diarios, mensuales y anuales.
En muchos animales, incluyendo al hombre los períodos de actividad y sueño,
alimentación e ingestión de agua, fluctuación de la temperatura corporal y secreción de
algunas hormonas tienen ciclos que parecen seguir un ritmo interno. Estas actividades
rítmicas diarias son ritmos circadianos que significa “aproximadamente un día”. Esto
sugiere que los animales poseen relojes biológicos ajustados o reprogramados con
precisión por indicios ambientales.
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Los sentidos de orientación que usan los animales son variados, en muchos casos es
el sol, también pueden ser los olores, el campo magnético terrestre o las
constelaciones.
sería mayor, la estrategia óptima sería seleccionar una mayor variedad de alimentos.
Los animales pueden aprenden a pastorear de manera eficiente a través de
condicionamiento operante, esto es ensayando al azar diversas estrategias y
seleccionando la que conlleva las mayores recompensas.
El riesgo de los predadores influye sobre la estrategia de pastoreo, de tal
manera que en oportunidades extremas la presión selectiva parece ser más fuerte
sobre el cuidado de la prole cachorros y la defensa de un territorio contra organismos
extraños que hacia el pastoreo óptimo
Ejemplo de la influencia de los factores mencionado son los leones, los cuales
pastorean en manadas (unidades sociales en las que suele haber algunas hembras,
cachorros y machos no emparentados) y utilizan diferentes estrategias según la
situación: En caso de abundancia de alimento cazan en grupos pequeños, grandes o
solos; pero cuando es escaso lo hacen en grupos lo más grandes posibles,
disminuyendo la ganancia de energía por el alimento obtenido, pero protegiendo a sus
cachorros de predadores y competidores. (Solomon et al, 1999)
Ejercicio 5
Bibliografía consultada:
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MÉTODOS BIOLÓGICOS
Introducción
Materiales: cápsulas de Petri- agar-agar o gelatina sin sabor- hansa- una papa- una cuchara de té-
azúcar- ½ litro de agua- tapón de goma- elermeyer grande o frasco de vidrio con tapa- embudo-
papel de filtro- trípode- mechero- varilla de vidrio- jarra metálica- trapo o manopla- diferentes
fuentes de bacterias (cultivo líquido- saliva, roce de manos, granos de tierra, agua estancada por
más de 5 días, etc.)- hansa- porta y cubreobjeto-microscopio.
Todo el material de vidrio debe ser lavado con detergente, enjuagado muy bien y puesto a secar
en un horno a gas o microondas, envuelto en papel metalizado o plástico adherente
respectivamente y una vez frío se guarda en la heladera hasta el momento de ser utilizado.
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Preparar en una jarra metálica un caldo, hirviendo de 20 a 30 minutos una papa en ½ litro de
agua, luego agregar una cucharada de azúcar y filtrar esta preparación en un elermeyer.
Nota: Si no se usa inmediatamente, se guarda en la heladera sellado con un tapón de goma. (con
esta cantidad se pueden preparar unas 7 cápsulas de Petri).
*Colocar nuevamente la preparación sobre el fuego, agregar una cucharada de agar-agar o
gelatina sin sabor y revolver suavemente con la varilla de vidrio para que se disuelva
completamente.
*Antes de comenzar a trabajar se deben limpiar las mesadas con alcohol, se enciende el mechero
y se lo deja en el lugar de trabajo.
*Desenvolver las cápsulas y verter el caldo de cultivo hasta la mitad, tratando de levantar los
menos posible la tapa, tapar rápidamente y esperar a que solidifique.
Importante: Al preparar las placas se debe trabajar próximo al mechero para mantener las
condiciones de esterilidad. Si las placas no se usan de inmediato pueden guardarse en la
heladera.
4) Sembrado
*Antes de comenzar la siembra, también se deben limpiar las mesadas con alcohol, se debe
encender el mechero y dejarlo en el lugar de trabajo.
* En general se siembra con hansa, palillo o espátula de Drigalsky.
1- Esterilizar el hansa en el fuego (Fig. 1. 1), enfriarla sobre las paredes de la cápsula antes de
sembrar.
2- Tomar la muestra con el hansa y pasarla sobre el agar en zigzag con movimientos suaves (Fig.
1. 2 y Fig. 2).
Recomendación: Levantar la tapa de la cápsula lo menos posible para evitar contaminaciones y
trabajar siempre al lado del mechero.
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Importante: El hansa puede prepararse con el tubo de un bolígrafo vacío y un alambre fino
doblado formando un rulo.
Fig. 1: esterilización (1) y sembrado (2)
hansa
Fig. 2: Sembrado
palillo Espátula de Drigalsky
3- Dejar las cápsulas bien tapadas a temperatura ambiente. Si se contara con una estufa a 36º C
se las coloca dentro para acelerar el crecimiento bacteriano. En cualquier caso, las cápsulas no
deben abrirse para evitar la contaminación por hongos.
5) Observación
1- Extraer con el hansa, una pequeña porción de una colonia bacteriana y colocarla en un
portaobjetos, luego agregarle una gota de agua taparlo con un cubreobjetos (ver fig. 3: montaje).
bacterias de la placa y se pasa sobre una gota de agua tratando que la misma se extienda bien
sobre el portaobjetos.
c) Se coloca sobre el extendido unas gotas de azul de metileno, se deja descansar un minuto y
luego se enjuaga. Se repite esta operación y luego se coloca el cubreobjetos.
d) Se lleva al microscopio para su observación.
Materiales: Cultivo de protozoos- portaobjetos- cubreobjetos- pipeta Pasteur- pinza- papel tisú.
Cultivo de Protozoos
Los protozoos son organismos unicelulares que pertenecen al Reino Protista, por lo tanto
son eucariotas. Según su rol ecológico algunos son heterótrofos y otros autótrofos.
Estos organismos se desarrollan en diferentes medios, uno de ellos, el acuático. Por esto
es posible observarlos en lugares con agua estancada de pocos días, por. ej. en floreros.
Si no se contara con esos medios, puede prepararse uno, colocando agua en un recipiente
al que se le agregan alguno de los siguientes materiales: pequeñas hojas secas, porciones de
tierra, granos de arroz o de trigo. Se los deja unos días (4 ó 5) y luego se observan al
microscopio.
Importante: No dejar más días porque estos organismos consumen el oxígeno del agua y mueren,
si se los dejara más días se debe mantener el cultivo, agregando un poco de agua potable o de
lluvia.
Montaje
1- Con una pipeta Pasteur se extrae agua del recipiente, buscando el fondo o rozando los palitos
u hojas que hubiera en el medio.
2- Se prepara un portaobjetos y se le coloca una gota del líquido extraído (a), luego se coloca el
cubreobjetos con la pinza o mano tratando que no quede burbujas de aire (b y c), ver fig. 3.
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Fig. 3
3- Llevar al microscopio y observar, algunos de los ejemplares que pueden aparecer se muestran
en la fig. 4.
Fig. 4
4- Si bien no se observarán como en las figuras, los movimientos permitirán determinar qué tipo
de estructura de movilidad presentan (pseudópodos, cilios, flagelos).
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Procedimiento
1- Se toma la hoja y se practica un pequeño corte que puede ser en forma de V en el órgano en
estudio, luego se toma uno de los bordes y se levante deslizándolo cuidadosamente y tratando de
separar la epidermis de los tejidos subepidérmicos (fig. 5). También puede cortarse como se
muestra en la fig. 6
2- El trozo obtenido se monta sobre un portaobjetos con unas gotas de agua, orientando la
cutícula hacia arriba para esto puede ayudarse con una pinza (Fig. 6.3).
3- Se coloca el cubreobjetos quedando el preparado listo para su observación (Fig. 6.4). Puede
secarse los bordes del cubre objetos con un papel tisú. (Fig. 6.5)
Fig. 5
Vaina de cebolla
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Fig. 6
Gota de agua
Procedimiento
*TEÑIDOS
Introducción
Esta técnica implica realizar finos cortes al órgano a observar, de tal manera que sea
posible distinguir los tejidos constitutivos. Es una actividad que permite la observación en el
momento de trabajo, ya que no presentan ninguna técnica de fijación, por lo tanto es fácil de
realizar por los alumnos.
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Corte longitudinal: Es aquel que se realiza paralelo al eje longitudinal del órgano.
Fig. 7
3- Limpiar el porta y cubreobjeto con alcohol lavándolos con alcohol 70º y secarlos con una
gasa, evitando dejar pelusas en su superficie.
4- Colocar unas gotas de agua sobre el portaobjetos y montar el corte con la pinza.
5- Colocar el cubreobjetos en un ángulo de 45° para que no se formen burbujas de aire, apretar
suavemente con la pinza. (repasar Fig. 6)
6- Observar al microscopio.
Recomendación: Si se va a realizar una observación prolongada (más de 10 minutos), en lugar
de unas gotas de agua, es conveniente colocar unas gotas de glicerina diluida (1:1) en agua sobre
el portaobjeto, para evitar la desecación de la muestra.
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Introducción
Para esta actividad el docente deberá contar con ejemplares de invertebrados conservados
en alcohol etílico al 70%. Éste se prepara colocando 300 ml de agua por cada 1000 ml de
alcohol.
Entre los organismos se pueden recolectar bichos bolita, ciempiés, milpiés, arañas, lombrices,
pequeños caracoles, varios insectos como: langostas, escarabajos, cigarras, grillos, alguna larva
de mariposa u otro insecto, entre otros.
Luego deberá tomar una porción de tierra húmeda con hojarasca de peso conocido,
colocarla en un recipiente al que le irá agregando los ejemplares conociendo el tipo y número
que colocó.
Esto será presentado a los alumnos como muestra con un protocolo de trabajo en el que
se consignen los siguientes aspectos, una fundamentación sobre el concepto de biodiversidad y la
importancia de su conservación, un objetivo de trabajo claro, y los materiales y procedimientos.
El grupo de alumnos o cada uno deberá tomar el volumen de la muestra recibida, luego
con la ayuda de un cernidor o pinza buscará la presencia de organismos.
Al verificar que todos fueron extraídos es posible:
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* Construir una clave dicotómica que permita la identificación de los ejemplares, considerando
diferentes características exomorfológicas como: apéndices, la tagmosis, presencia de alas, tipos
de alas, número de patas, tipo de aparato bucal, etc. Recordar que una clave dicotómica es una
herramienta de trabajo que siempre va considerando de a dos alternativas para una determinada
característica.
Una buena clave dicotómica debe tener las siguientes características:
Ejemplo 1:
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Ejemplo 2:
A. Fruto seco.
B. Fruto dehiscente.
C. La dehiscencia se produce por dos líneas de sutura (dorsal y
ventral).......................... Legumbre.
Materiales: insectos con aparatos bucales diferentes conservados en alcohol 70°- pinza- aguja de
disección- cápsula de Petri o vidrio de reloj, gotero con agua o recipiente y pipeta Pasteur-
plancha de telgopor- plasticola transparente o cinta adhesiva.
Introducción
Los insectos conforman el grupo más numeroso y diverso entre los artrópodos, presentan
una gran diversidad tanto en forma como en tamaño. A nivel exomorfológico es posible
reconocer variaciones en el aparato bucal, tipo de alas, antenas y modificaciones en las patas.
Con la ayuda de una figura (Fig. 8) como la siguiente se puede observar con una lupa la
exomorfología del insecto.
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Fig. 8
*Con la ayuda de las siguientes figuras puedes determinar las características que te permitirán
completar el cuadro dado debajo.
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Recomendación: El cuadro puede ser completado colocando los códigos que identifican a cada
tipo de estructura (número o letra).
Cuadro de características.
Característica Muestra
Tipo de alas
Tipo de antenas
Tipo de aparato bucal
Tipo de patas
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* Se extrae una pata y se la pega sobre el telgopor, se identifican sus partes con la ayuda de un
esquema como el siguiente. (Fig. 13)
Fig. 13
Introducción
Si cuenta con lupa es posible tomar dos ejemplares de insectos para analizar los aparatos
bucales, separando e identificando cada una de las piezas que lo componen. El más fácilmente
visible es el aparato masticador que poseen las langostas, escarabajos o grillos.
En la cabeza de los insectos, además de las antenas encontramos tres pares de apéndices.
Éstos son los bucales, que conforman el aparato bucal, muy importante para la sistemática de
insectos y la comprensión de sus hábitos.
Los elementos más notables de la boca de un insecto son las mandíbulas, maxilas, y el labio. La
disposición y forma primaria de los mismos son las del aparato bucal masticador típico.
Estas piezas se observan modificadas según los hábitos alimentarios, así aparecen aparatos
bucales: cortador-chupador- chupador- picador-chupador, masticador- lamedor, etc.
Procedimiento
Se corta la cabeza y con la ayuda de una figura como la Fig. 9 se van separando los apéndices y
se van pegando uno a uno sobre el telgopor, con sus nombres.
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Fig. 9
Luego del trabajo de observación del o los insectos (I), si se cuenta con otros
invertebrados artrópodos como: araña (A), escorpión (E), cangrejo (C), milpiés (M) u otro
representante de cada una de las Clases de Arthropoda, puede elaborarse un cuadro comparativo
con las siguientes características.
Característica I A E C M
Tagmosis
Segmentos que componen la tagmosis
Nº de patas
Nº de antenas
Nº de alas
Ubicación de las patas
Ubicación de las alas.
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Situación problemática: Un técnico preparó seis soluciones pero al finalizar olvidó rotularlas. Lo
que sabemos es que utilizó glucosa, almidón, y albúmina y que tres de las muestras son una
mezcla entre 2 ó 3 de los compuestos mencionados anteriormente. Utilizando los test
mencionados a continuación ¿te animas a ayudarnos a determinar que contiene cada muestra?
Muestra (M)
M1: Lugol(+) Fehling (-) Bradford (-) M4: Lugol(+) Fehling (+) Bradford (-)
M2: Lugol(-) Fehling (+) Bradford (-) M5: Lugol(+) Fehling (-) Bradford (+)
M3: Lugol(-) Fehling (-) Bradford (+) M6: Lugol(+) Fehling (-) Bradford (+)
Reacción de Bradford:
Bajo condiciones apropiadas los grupos ácidos y básicos de las proteínas interactúan con grupos
disociados de colorantes orgánicos para formar precipitados coloreados. Este procedimiento es
muy útil para la determinación cuantitativa de proteínas y fue desarrollado por Marion Bradford.
El método emplea el colorante Azul brillante de Comassie G-250. La unión del colorante a la
proteína produce un cambio en la absorción máxima del colorante de 465 nm (forma roja) a 595
nm (forma azul). Por lo tanto el cambio de color de la solución de marrón-rojizo a azul indica
presencia de proteínas.
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Respuesta
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MÉTODOS ESTADÍSTICOS
TEST ESTADÍSTICO X2
En Biología es muy importante poder evaluar si los datos observados (Oi) se ajustan o no
a las frecuencias teóricas esperadas (Ei). Cuando asumimos que los datos se adecuarán a una
proporción dada, establecemos lo que se llama HIPOTESIS NULA (Ho). Se llama así debido a
que se asume que no hay diferencias reales entre Oi y E1, y en el caso de existir alguna pequeña
diferencia sería atribuida al azar. Una de las pruebas estadísticas más simples para valorar la Ho,
es el análisis de X2. Esta prueba tiene en cuenta las desviaciones observadas de cada componente
de una proporción esperada, así como el tamaño de la muestra y las reduce a un único valor
llamado estadístico o X2 calculado
(O1 - E1)2
X2 = ∑
Ei
Este valor de X2 se utiliza luego para estimar si la desviación observada se debe o no al azar. La
distribución de X2 es una función de la densidad de probabilidades. El estadístico puede tomar
valores entre 0 → ∝
La tabla de doble entrada que se te presenta a continuación representa los valores de X2
tabulados en función de los Grados de Libertad (GL) y de un valor de probabilidad α
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verdadera.
Uno de los aspectos más importantes del análisis de X2 es comprender lo que significa
realmente el valor α. Analicemos un ejemplo: ¿qué indica un α= 0, 26? Si se repitiera el
experimento muchas veces, en el 26% de las repeticiones esperaríamos una desviación por azar
igual o mayor que la observada en la prueba inicial. Por el contrario en el 74% de las
repeticiones mostrarían menor desviación por azar que la inicialmente observada. Esto
demuestra que una Ho nunca puede ser aceptada o rechazada de manera absoluta. Por ello se
debe fijar un límite que sirva de base para rechazar o no la Ho. Este límite es a menudo un valor
de α = 0.05. Esto significa que si el valor de X2 calculado no excede al valor de X2 tabulado,
hay 95% de probabilidad de aceptar la Ho sin equivocarse.
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LA DISTRIBUCIÓN T Y EL TEST T
La distribución t fue descrita por primera vez por Gosset usando una lapicera llamada “Student”
y por ello se llamo distribución de student. Esta distribución dice que la diferencia entre la media
(m) aritmética de la muestra (m) y la verdadera (µ) dividida por el error estándar de la media de
la muestra sigue la distribución t
m−u
t=
Sm
S2
Sm =
n
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Bibliografía consultada:
MORFOLOGÍA VEGETAL
GENÉTICA
ZOOLOGÍA DE INVERTEBRADOS
BIOLOGÍA GENERAL
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