Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa

Adsorcin
(Tomado de Tejeda y col., 1995)

Sergio Huerta Ochoa

UAM-Iztapalapa

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La adsorcin es una de las operaciones ms utilizadas en la etapa de concentracin de caldos acuosos diluidos. Mediante la adsorcin, las molculas de un soluto se concentran en una superficie slida por la accin de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el slido. Debido a estas fuerzas el fenmeno es fcilmente reversible. La adsorcin es esencialmente un fenmeno de superficie.

1. Contacto del adsorbente y la solucin 2. Al efectuarse la adsorcin el soluto se une preferentemente a la superficie del adsorbente respecto a otros solutos La operacin de adsorcin requiere de cuatro pasos 3. Lavado de la columna con una solucin que no provoque la desorcin del soluto de inters 4. Finalmente se efecta la recuperacin del soluto utilizando un fludo que favorezca la desorcin, elucin

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El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacidad de adsorcin de los sistemas

El anlisis de la operacin de adsorcin mediante la formulacin de algunos modelos requiere:

El establecimiento de la rapidez de la adsorcin con respecto a los fenmenos difusivos y cinticas de superficie

Los balances de masa y energa del sistema de adsorcin especfico (intermitente, continuo, serie, paralelo, etc.)

Las condiciones iniciales y de frontera

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Fundamentos

Las operaciones de adsorcin son utilizadas en la obtencin de varios tipos de productos biotecnolgicos como aminocidos, antibiticos, vitaminas y protenas. Debido a lo anterior cada vez existe una mayor necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operacin, tales como:

Los tipos de adsorcin segn el tipo de interaccin soluto-adsorbente. Aspectos fundamentales que requieren mayor anlisis Los tipos de adsorbente

Las relaciones de equilibrio La cintica de la adsorcin

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Tipos de adsorcin segn el tipo de interaccin soluto-adsorbente
Fsica Inica

Se pueden distinguir cuatro tipos bsico de adsorcin:

Hidrofbica

Por afinidad

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Relaciones de equilibrio

En el anlisis de los procesos de adsorcin los datos de equilibrio se expresan normalmente como isotermas de adsorcin: Las isotermas son parte esencial para modelar la adsorcin y por lo tanto para el diseo, clculo de eficiencias y costos de la adsorcin. Las isotermas nos permiten estimar el grado de purificacin que puede ser alcanzado, la cantidad de adsorbente requerido, y la sensibilidad del proceso respecto a la concentracin del producto. Freundlich (Adsorcin por intercambio inico)

Cuatro tipos bsicos de isotermas

Lineal (Aprox. de isotermas en la regin baja de concentracin del soluto)

Langmuir (Adsorcin por afinidad)

Irreversible (Sistemas altamente especficos)

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Isoterma de Freundlich: se describe por medio de una ecuacin exponencial emprica:

q = Ky n
q = cantidad de soluto adsorbida por cantidad de adsorbente y = concentracin de soluto en la solucin n = constante adimensional K = constante cuyas unidades dependen de n n < 1 isoterma favorable n > 1 isotermas desfavorables Isoterma lineal: se describe por medio de una ecuacin recta que pasa por el origen:

q = Ky
Isoterma Langmuir: se describe por medio de expresiones del tipo:

q=

q0 y Kd + y

q0 = capacidad mxima del adsorbente Kd = constante de equilibrio de desorcin

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Cintica de la adsorcin

El estudio de las isotermas de adsorcin nos permite determinar para un sistema soluto-adsorbente dado, el grado de separacin que puede ser logrado y la sensibilidad del proceso respecto a la concentracin del soluto. Sin embargo, para el desarrollo del modelo de la adsorcin es necesario poder establecer, mediante el empleo de coeficientes de transferencia de masa, la velocidad de la adsorcin o el tiempo necesario para alcanzar una cierta separacin.

La velocidad efectiva de la adsorcin depende tanto de las condiciones de operacin (Flujo, temperatura, composicin y presin), como de la configuracin del sistema (intermitente, columna, etc.) y del tamao del equipo donde se realizar la operacin. El estudio de estos efectos se divide en dos grandes conceptos:

Los mecanismos de transporte (fsicos y qumicos) Los efectos de mezclado

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Mecanismos de transporte

Para que una partcula de soluto pueda ser adsorbida en la superficie de un poro del adsorbente, el soluto tiene que pasar del seno de la fase lquida a la superficie del adsorbente. Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este proceso que pueden visualizarse principalmente como:

Resistencia de la pelcula del lquido que rodea al adsorbente El soluto difunde desde el seno del lquido a travs de la pelcula de lquido que rodea a la partcula de adsorbente Resistencia a la difusin en el seno del adsorbente El soluto difunde a travs del seno del adsorbente, llamado difusin en la fase del adsorbente Resistencia a la difusin dentro del poro La adsorcin se efecta principalmente dentro del poro, por lo que el soluto debe difundir a travs del lquido al interior de los poros. Resistencia a la reaccin en la superficie El soluto se une al sitio de adsorcin por medio de una reaccin de superficie, la cual es ms rpida que los procesos anteriores.

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Control de la resistencia en la pelcula

Cuando la resistencia de la pelcula es mucho mayor que la del poro o la de la reaccin de superficie, la velocidad de adsorcin est controlada a nivel local por el flujo del soluto a travs de la pelcula que rodea al adsorbente. En este caso la velocidad de adsorcin puede expresarse como:

R = kL a y y*

kL = Coeficiente de transferencia de masa a = rea del adsorbente por unidad de volumen del lecho (adsorbente y lquido) y = Concentracin de soluto en el seno de la fase lquida y* = Concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio con la concentracin de soluto en el adsorbente R =Velocidad de adsorcin referida al volumen del lecho (adsorbente y solucin) El parmetro a puede ser correlacionado con la porosidad del lecho (volumen de lquido sin incluir el lquido de los poros/volumen del lecho) y el dimetro de la partcula del adsorbente dp de acuerdo a la expresin:

a=

6(1 ) dp

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La resistencia de la pelcula por si misma rara vez controla la rapidez de la transferencia de masa, excepto en los casos en que la partcula de adsorbente es pequea y la difusividad en el poro es grande. Para sistemas de adsorcin en columnas, kL generalmente puede correlacionarse con una expresin de la forma:

Sh = C1 + C2 (Re ) (Sc )
a

donde C1, C2, a y b son constantes y Sh, Re y Sc son los nmeros adimensionales de Sherwood, Reynolds y Schmidt dados por las siguientes relaciones:

Sh =
Re =

kLd p DAB
v L d p

Sc =

L L DAB

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Control de la difusin del soluto en el seno del adsorbente
La difusin en la fase slida del soluto una vez que ha pasado del seno del lquido a la fase slida, se presenta en algunos slidos homogneos permeables como las resinas que se utilizan en intercambio inico o en adsorbentes con poros cubiertos con pelculas mviles, o en lquidos utilizados para impregnar la partcula porosa. Considerando una geometra esfrica uniforme el balance de soluto en la pelcula est dado por:
2q 2 q q = DS r 2 + r r t

DS = Difusividad efectiva del soluto en la fase slida [L2/t] r = La coordenada radial al interior de la partcula [L] q = Concentracin de soluto en la fase slida [M/L3] La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la Ley de Fick como:

R = aD S
Ra = es el radio externo de la partcula

q r

r = Ra

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El balance de masa del soluto suele ser aproximado utilizando una fuerza impulsora lineal de la siguiente forma:

q = S ksa q* q t

q* = Concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de soluto en el seno de la fase lquida S = Factor de correccin adimensional que se introduce al linearizar la expresin ks = Coeficiente de transferencia de masa (L3total/rea-tiempo)

Con la linearizacin anterior la expresin de la velocidad de transferencia de masa por unidad de volumen de lecho es:

R = (1 ) S ksa q* q
ksa se correlaciona con la difusividad mediante la ecuacin:

ksa =

60 D S 2 dp

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Control de la difusin del soluto en la fase lquida al interior de los poros
Cuando la velocidad de adsorcin est controlada por la difusin del soluto al interior de los poros de la partcula de adsorbente, hasta el sitio de adsorcin, el balance de soluto al interior de la partcula est dado por la expresin:

2 yi yi qi 2 yi ( ) i = Dp + 1 r 2 t r r t
yi = Concentracin de soluto en la fase lquida al interior del poro [M/L3] qi = Concentracin de soluto en la fase slida [M/L3] Dp = Difusividad efectiva del soluto al interior del poro [L2/t] i = Porosidad de la partcula al soluto de inters [L3/L3] Para el caso en que la acumulacin del soluto al interior del poro sea mucho menor que la velocidad de adsorcin, el balance de soluto puede ser escrito como:

2 yi qi 1 2 yi = Dp + r 2 t 1 i r r
La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como:

R = aD

yi r

r = Ra

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Para lquidos la difusividad Dp puede ser expresada como: D D p = AB i 0 0 = Tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de los slidos) DAB = Difusin molecular del soluto en un lquido libre de adsorbente i = Porosidad de la partcula al soluto de inters [L3/L3] El balance de soluto puede aproximarse utilizando una fuerza impulsora lineal: * q p k p a (q q ) = q R (1 ) t
yA

de tal manera que,

R =

p k p a (q * q )
qR yA

q* = Concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de soluto en el seno del lquido q = Concentracin promedio de soluto en el adsorbente qR = Concentracin de la fase slida en equilibrio con la concentracin yA de la solucin que se va a tratar p = Factor de correccin por linearizacin kpa puede correlacionarse con la difusividad efectiva del poro mediante la expresin

k pa =

60 D p (1 )
2 dp

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Control de la reaccin de superficie

Generalmente la reaccin de adsorcin en la superficie del adsorbente es mucho ms rpida que los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante. En las expresiones cinticas ms utilizadas la reaccin de superficie es tratada como una reaccin qumica, reversible o irreversible, de un cierto orden. Dos expresiones comunmente utilizadas principalmente para sistemas de intercambio inico son:

Cintica reversible de primer orden:

R = (k 1 y k 2 q )
Cintica reversible de segundo orden:

R = [k 1 y (q 0 q ) k 2 q ]

k1 y k2 son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin, respectivamente. q0 es la capacidad mxima de adorcin del adsorbente.

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Efectos de mezclado

La velocidad de adsorcin efectiva tambin puede disminuir por efectos de un mezcaldo imperfecto. Uno de los modelos ms utilizados para describir la desviacin del comportamiento ideal del flujo al interior de las columnas, es el modelo de flujo tapn con dispersin, donde los efectos de la dispersin axial debida a remolinos y de la difusin molecular, se agrupan en el concepto del coeficiente efectivo de dispersin axial, en funcin del cual se puede definir un coeficiente aparente de transferencia de masa dado por: 2

kd a =
E = Coeficiente de dispersin axial [L2/t] v = Velocidad superficial de flujo [L/t]

v E

Para flujo laminar en lechos empacados el nmero de Reynolds basado en el dimetro de las partculas de lecho es menor a 10. Bajo esta consideracin el nmero de Peclet (grado de dispersin en la columna) toma un valor constante de 2
Pe = d pv E =2

De tal manera que la velocidad de adsorcin se puede expresar en funcin de un coeficiente aparente de transferencia de masa por dispersin

R = kd a y y*

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Resistencias combinadas

En algunos sistemas, la cintica de adsorcin puede ser descrita en forma ms adecuada utilizando un modelo donde la combinacin de resistencias (p. ej. Pelcula y poro) describen en forma ms precisa la cintica. En estos casos, la combinacin de resistencias se presenta por medio de un coeficiente de transferencia de masa global que agrupa el efecto de las resistencias individuales. Para el establecimiento del coeficiente global de transferencia de masa es necesario fijar la forma en que las resistencias individuales estn relacionadas: en serie o en paralelo. Si se considera como ejemplo el caso de la resistencia de la pelcula y la del poro actuando en serie, para el clculo del coeficiente global se deben sumar los inversos de los coeficientes individuales (para equilibrios lineales).

1 1 1 = + K0 kL k p
K0 = Coeficiente global de transferencia de masa referido a la fase lquida

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Tipos de cromatografa lquida segn el principio de separacin
Cromatografa lquido-lquido Tipos bsicos de cromatografa por elucin Cromatografa de filtracin en gel Cromatografa por adsorcin

Fsica Por intercambio inico Cromatografa por adsorcin De interaccin hidrofbica De fase inversa De afinidad

Planta Piloto de Fermentaciones Departamento de Biotecnologa Tipos de cromatografa de acuerdo a la presin de operacin

Presin baja (1 atm, 90-100 m) (Cromatografa de baja presin, FPLC)

De acuerdo a la presin de operacin y al tamao de partcula

Presin moderada (2-50 atm, 30-50 m)

Presin alta (51-350 atm, 5-10 m) (Cromatografa de alta resolucin, HPLC)

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Cromatografa por elucin La cromatografa por elucin es un mtodo para separar en sus componentes una mezcla de solutos y es empleada con el propsito de purificar productos de inters
Eluyente (fase mvil) Muestra a t = 0

Adsorbente (fase estacionaria)

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Tipos de cromatografa por elucin

Eluyente (composicin constante) Muestra a t = 0 Eluyente (composicin vara gradualmente) Muestra a t = 0

Elucin isocrtica

Elucin por gradiente

La operacin de una columna de cromatografa por elucin es similar a la de una columna de adsorcin. Sin embargo, en la cromatografa por elucin la columna no se satura completamente con soluto.

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Adsorcin frontal o cromatografa por elucin?

Eluyente + A y B diluidos Eluyente + A y B concentrados

Adsorcin frontal

Cromatografa por elucin

En la cromatografa por elucin el soluto se purifica a expensas de un cierto grado de dilucin, mientras que en la adsorcin el soluto se retiene en la columna y posteriormente se eluye concentrado.

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Filtracin en gel
Mezcla

Separacin por tamao

Flujo Flujo

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Intercambio inico
+ Mezcla
Gradiente salino

+ + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

+
+ Matriz cargada positivamente
Las cargas en las protenas son debidas a: Cargas positivas: Histidina, lisina, argenina y en menor grado N-aminos terminales Cargas negativas: cidos asprtico y glutmico, C-grupos carboxilo terminales y en menor grado residuos de cisteina Arriba de su pI las protenas tienen carga neta negativa Debajo de su pI las protenas tienen carga neta positiva

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Cromatoenfoque

pH 9

pH 6

pH 6

pH 9

pH 9

Intercambio inico

Cromatoenfoque

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Cromatoenfoque
Buffer de elucin a pH 8
8 pH 4

Tasa de migracin

Tasa de flujo

8.5 5 9

+ + + +
Protena con pI 9
6

+ + + - - -

9.5

10

Columna equilibrada a pH 10

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Cromatografa de interaccin hidrofbica

Gradiente salino

Mezcla

Matriz cargada con grupos noinicos

La hidrofobicidad en la superficie de las protenas ocurre debido a: La presencia en la superficie de cadenas de aminocidos no polares tales como: alanina, metionina, triftofano y fenilalanina Iones del salting out decrecen la disponibilidad de agua en solucin, incrementan la tensin superficial y mejoran las interacciones hidrofbicas

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Protein Lab

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