A Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao.

. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes A Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia ( chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processo seja dependente da cor. Apesar deste estudo e de outros anteriores, que tambm poderiam ser considerados precursores do uso dessa tcnica, a cromatografia foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi redescoberta. A partir da, diversos trabalhos na rea possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com os avanos tecnolgicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios, sendo alguns deles listados abaixo:

Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia planar resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por centrifugao (Chromatotron) e cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em coluna, os quais sero mais bem compreendidos quando classificados por outro critrio.

Classificao pela fase mvel empregada

Em se tratando da fase mvel, so trs os tipos de cromatografia: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da gravidade, e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase mvel. A CLAE foi inicialmente denominada cromatografia lquida de alta presso, mas sua atual designao mostra-se mais adequada. No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna. Enquanto na CGAR so utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase estacionria. Classificao pela fase estacionria utilizada Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao.

Classificao pelo modo de separao

Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos. Dentre os vrios tipos de cromatografia, especial nfase ser dada cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia lquida clssica e de alta eficincia (CLAE) e cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR).

CROMATOGRAFIA PLANA

Na cromatografia plana, a fase estacionria suportada sobre uma placa plana ou nos poros de um papel. Nesse caso, a fase mvel desloca-se atravs da fase estacionria por ao da capilaridade ou sob a influncia da gravidade. til em separao de compostos polares. Encontra-se bastante difundida devido sua facilidade experimental e ao seu baixo custo. Cromatografia em Papel Esta tcnica assim chamada porque utiliza para a separao e identificao das substncias ou componentes da mistura a migrao diferencial sobre a superfcie de um papel de filtro de qualidade especial (fase estacionria). A fase mvel pode ser um solvente puro ou uma mistura de solventes. Este mtodo muito til para separar substncias muito polares, como acares e aminocidos. Possui o inconveniente de poder-se cromatografar poucas quantidades de substncia de cada vez Manipula-se o papel com cuidado e pelas pontas, e cortam-se tiras em tamanhos que possam ser contidos nas cubas. importante cortar o papel seguindo o eixo das fibras, pois a celulose est orientada neste sentido, o que facilitar a passagem da fase mvel. Os lquidos polares tero grande afinidade pelas hidroxilas da molcula de celulose, formando pontes de hidrognio, ficando retido e funcionando como fase estacionria, e os lquidos menos polares sero repelidos por esta estrutura, funcionado como fase mvel.As cubas devero ser perfeitamente fechadas para permitir a saturao interna. A cromatografia pode ser ascendente ou descendente, sendo que esta ltima mais rpida e consome menos eluente. 2 cm de altura de eluente na cuba so suficientes para a cromatografia ascendente. Coloca-se a amostra a ser analisada um pouco acima da extremidade inferior do papel seco, que aps ter esta extremidade inferior mergulhada numa mistura de solventes, tero os seus constituintes arrastados, juntamente com esta mistura que tende a subir por capilaridade. Os diferentes constituintes apresentaro variao na velocidade de deslocamento, de acordo com os seus coeficientes de partio. Os componentes menos solveis na fase estacionria (gua) tero uma movimentao mais rpida. Pode ser utilizado para anlise de mistura de aminocidos ou misturas de acares. A cromatografia em papel pode ser tambm no sentido descendente e bidimensional, este ltimo realizado em duas etapas com solventes apresentando diferentes propriedades.

Cromatografia Centrfuga

A cromatografia centrifuga uma cromatografia em camada delgada preparativa e acelerada centrifugamente. Baseia-se no principio da operao onde a amostra a ser separada aplicada como uma soluo no centro do disco giratrio umedecido com o solvente. A eluio com solvente gera bandas circulares de separao dos componentes que so removidos juntamente com o solvente para um tubo de recepo.

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

A mistura a ser separada colocada na coluna com um eluente (fase mvel; solvente) menos polar e vai-se aumentando gradativamente a polaridade do eluente e conseqentemente o seu poder de arraste de substncias mais polares. Uma seqncia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol, gua e cido actico.

CROMATOGRAFIA GASOSA Cromatografia data de 1903 no trabalho do cientista russo Mikhail Semenovich Tswett. O estudante graduado alemoFritz Prior desenvolveu a cromatografia gasosa de estado slido em 1947. Archer John Porter Martin, quem foi vencedor do Prmio Nobel por seu trabalho no desenvolvimento das cromatografias lquido-lquido (1941) e em papel (1944), estabeleceu os fundamentos para o desenvolvimento da cromatografia gasosa e posteriormente produziu a cromatografia gs-lquido (1950). Tcnica de separao e anlise de misturas por interao dos seus componentes entre uma fase estacionria e uma fase mvel.

Tcnica utilizada na Cromatografia Gasosa:

Uma cromatografia gasosa uma tcnica que se baseia na anlise qumica instrumental por separao de compostos qumicos e uma amostra complexa. Uma cromatografia gasosa usa um tubo estreito atravs do qual se d o fluxo conhecido como colunas, atravs do qual diferente constituintes de uma amostra passam em uma corrente de gs (gs condutor, ou transportador, a fase mvel) em diferentes taxas dependendo de vrias propriedades fsicas e qumicas e suas interaes com um especfico recheio da coluna, chamada fase estacionria. Como o composto qumico sai no final da coluna, so detectados e identificados eletronicamente. A funo da fase estacionria na coluna seperar componentes diferentes, causando a cada um sada da coluna em um tempo diferente (tempo de reteno). Outros parmetros que podem ser usados para alterar a ordem ou tempo de reteno so a taxa de fluxo do gs condutor e a temperatura.

Em uma anlise CG, um volume conhecido de analito gasoso ou lquido injetado na entrada da coluna, geralmente com o uso de uma micro seringa (ou com fibras de micro extrao de fase slida, ou). Conforme o gs carreador leva as molculas do analito atravs da coluna, essa movimentao inibida pela adsoro das molculas do analito nas paredes da coluna ou no material do empacotamento da mesma. A taxa com que as molculas progridem ao longo da coluna depende da fora da adsoro que, por sua vez, depende do tipo de molcula e do material da fase estacionria. Uma vez que cada tipo de molcula tem uma taxa de progresso diferente, os vrios componentes da mistura de analito so separados conforme progridem ao longo da coluna, chegado ao fim dela em momentos diferentes (tempos de reteno). Um detector empregado para monitorar o fluxo de sada da coluna. Assim, o momento em que cada componente sai da coluna, e a quantidade deles, pode ser determinada. Geralmente, as substncias so identificadas (qualitativamente) pela ordem com que emerge (eluem) da coluna e pelo tempo de reteno do analito na coluna.

CROMATOGRAFIA LQUIDA

A cromatografia lquida (HPLC) um processo de anlise de separao fsico cuja aplicao permite a anlise qualitativa mais comumente e quantitativa de uma amostra. Esse mtodo analtico vem sendo amplamente empregado graas ao rpido tempo de anlise. Permite separar constituintes de uma mistura atravs de sua distribuio em duas fases: fase mvel um lquido e a fase estacionria um slido. A cromatografia liquida utilizada em vrias reas da cincia, no acompanhamento de snteses, em anlises de pesticidas, feromnios, no isolamento de produtos naturais e sintticos e na produo e controle de qualidade de medicamentos, dentre tantas outras aplicaes. A cromatografia a lquido permite, entre outras, a anlise das seguintes classes dos principais compostos: protenas, cidos nuclicos, aminocidos, corantes, polissacardeos, pigmentos de plantas, compostos inicos, ons metlicos, ctions, lipdeos polares, explosivos, polmeros sintticos, surfatantes, farmacuticos, metablicos de plantas, nions, complexos de metais pesados, etc.Hoje a cromatografia lquida de alta eficincia tem as seguintes caractersticas:

1. Alto poder de resoluo; 2. Separaes rpidas; 3. Monitoramento contnuo do eluente; 4. Medidas quantitativas acuradas; 5. Anlises repetitivas e reprodutveis com a mesma coluna; 6. Automao do procedimento analtico e do manuseio dos dados.

Sob alguns aspectos, a cromatografia lquida de alta eficincia mais verstil que a cromatografia com fase gasosa porque ela no est limitada a amostras volteis e termicamente estveis e porque a escolha de fases estacionrias e mveis mais ampla (Mendham ET AL, 2002). O emprego da cromatografia a lquido para solucionar problemas analticos ou preparativos necessita, alm da instrumentao adequada, da combinao correta das condies experimentais tais como: 1. Tipo de coluna (fase estacionria); 2. Fase mvel, sua composio e vazo; 3. Temperatura; 4. Quantidade de amostra injetada, etc. A seleo correta dessas variveis necessita do conhecimento bsico dos fatores que controlam a separao na cromatografia a lquido (Ciola,1998).

Cromatografia a lquido de alto desempenho (HPLC)

A cromatografia a lquido de alto desempenho um tipo de cromatografia que emprega uma fase mvel lquida e uma fase estacionria finamente dividida e que, para ter um fluxo razovel, opera a presses elevadas. Originalmente chamava-se cromatografia lquida de alta presso e esta terminologia foi abandonada quando se constatou que o diferencial de comportamento desta para as demais cromatografias lquidas no era a maior presso, mas sim o melhor desempenho cromatogrfico. Dentre as principais caractersticas e vantagens do mtodo HPLC esto:

1. Coluna recheada com partculas de pequeno tamanho (3 - 10 mm); 2. Alta resoluo; 3. Anlise no destrutiva; 4. Velocidade de separao; 5. Monitorao contnua do efluente da coluna; 6. Medio quantitativa exata; 7. Anlises repetitivas e reprodutivas com a mesma coluna; 8. Automao do procedimento analtico e do tratamento dos dados.

Os componentes essenciais da HPLC so: 1. Bomba de alta presso: dispositivo importante, pois est relacionada ao tempo de reteno, a reprodutibilidade e a sensibilidade do detector. Este sistema composto por bomba e controladores de presso e vazo. De uma maneira geral, a bomba deve ter a capacidade de impulsionar a fase mvel. Existem dois tipos de bomba, com presso constante e com volume constante. 2. Sistema de injeo da amostra: a introduo da amostra pode ser realizada por meio de uma vlvula de amostragem ou por meio de uma seringa de injeo. O efluente desses dispositivos preenche uma serpentina de volume conhecido e o acionamento da vlvula transfere, integralmente, esse volume para a corrente de fase mvel. 3. Coluna: so feitas de ao inoxidvel polido, com comprimentos de 10 a 30 cm, com calibre de preciso. Dimetros internos tpicos variam de menor ou igual a 1 mm para colunas capilares; 2, 3, 4, 5 e 6 mm para colunas analticas recheadas e maiores ou iguais a 10 mm para colunas preparativas. Os recheios usados so constitudos por partculas pequenas, rgida comum a distribuio granulomtrica estreita. Os tipos de recheio podem ser divididos em trs categorias: 4. 1- grnulos porosos, polimricos, baseados em copolmeros de estirenodivinilbenzeno e so utilizados na troca de ons e na cromatografia por permeao em gel;

2- grnulos de camada porosa, constitudos por uma camada delgada de slica modificada, estes recheios peculiares so usados em algumas aplicaes de troca de ons e muito usados em cromatografia de fase reversa para anlise de compostos orgnicos; 3- partculas de slica totalmente porosas que proporcionam considervel melhoria da eficincia da coluna, da capacidade de analisar as amostras e da velocidade de anlise. 1. Detector: monitora a fase mvel medida que elui da coluna. So duas principais classes em que podem ser divididos: detectores de propriedades macroscpicas e detectores de propriedades de soluto, que medem a diferena entre uma propriedade fsica do soluto na fase mvel e a mesma propriedade na fase mvel pura. Esse monitoramento efetuado pela deteco propriamente dita, associada a uma transduo para um sinal eltrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente na fase mvel pura. Esse monitoramento efetuado pela deteco propriamente dita, associada a uma transduo para um sinal eltrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente.

2.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS CIOLA, R. Fundamentos da cromatografia a lquido de alto desempenho: HPLC. So Paulo, SP, 1998. MENDHAM, J.; DENNEY, R. C.; BARNES, J. D.; THOMAS, M.T. Vogel, Anlise Qumica Quantitativa. 6 ed. Londres, 2002. Cromatografia de Coluna. Disponvel em: http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/COLUN A.htm. Acesso em: 04 de maio de 2010. Cromatografia. Disponvel em: http://ube167.pop.com.br/repositorio/4488/meusite/qorganicaexperimental/cromatografia. htm. Acesso em: 04 de maio de 2010. Experimento 5: Introduo a Mtodos Cromatogrficos. Cromatografia em Camada Delgada e em Coluna. Disponvel em: http://vsites.unb.br/iq/litmo/disciplinas/tecnica_pesquisa_I/Cromatografia.D OC. Acesso em: 04 de maio de 2010. Cromatografia em Papel. Disponvel em: http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/CROMA _PAPEL.htm. Acesso em: 03 de maio de 2010. Cromatografia em Papel. Disponvel em: http://www.setor1.com.br/analises/cromatografia/cro_pa.htm. Acesso em: 03 de maio de 2010. Cromatografia Gasosa. Disponvel em: http://www.ebah.com.br/cromatografiagasosa-nivel-tecnico-ppt-a24620.html. Acesso em: 28 de abril de 2010. PENTEADO, Jos Carlos, et. al. Experimento didtico sobre cromatografia gasosa: uma abordagem analtica e ambiental. Disponvel em: http://www.scielo.br/scielo. php?Pid=S010040422008000800047&script=sci_arttext. Acesso em: 28 de abril de 2010.