Quim. Nova, Vol. 28, No. 6, 1087-1101, 2005 POLMEROS BIOMIMTICOS EM QUMICA ANALTICA.

PARTE 2: APLICAES DE MIP (MOLECULARLY IMPRINTED POLYMERS) NO DESENVOLVIMENTO DE SENSORES QUMICOS Csar Ricardo Teixeira Tarley, Maria Del Pilar Taboada Sotomayor e Lauro Tatsuo Kubota* Departamento de Qumica Analtica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual de Campinas, CP 6154, 13083-970 Campinas - SP Recebido em 10/12/04; aceito em 3/3/05; publicado na web em 10/8/05

BIOMIMETIC POLYMERS IN ANALYTICAL CHEMISTRY. PART 2: APPLICATIONS OF MIP (MOLECULARLY IMPRINTED POLYMERS) IN THE DEVELOPMENT OF CHEMICAL SENSORS. The aim of this paper is the description of the strategies and advances in the use of MIP in the development of chemical sensors. MIP has been considered an emerging technology, which allows the synthesis of materials that can mimic some highly specific natural receptors such as antibodies and enzymes. In recent years a great number of publications have demonstrated a growth in their use as sensing phases in the construction of sensors . Thus, the MIP technology became very attractive as a promising analytical tool for the development of sensors. Keywords: molecularly imprinted polymers; biomimetic sensors.

INTRODUO A biomimetizao de interaes bioqumicas um dos maiores desafios em vrias reas da cincia. A partir deste ponto de vista, polmeros sintticos com impresso molecular, mais conhecidos como MIP (Molecularly Imprinted Polymers) tm atrado considervel ateno na ltima dcada, pois aparecem como uma ferramenta promissora para o desenvolvimento de sistemas com reconhecimento biomimtico semelhante aos sistemas especficos enzima-substrato e/ou antgeno-anticorpo1. As vantagens dos MIP em relao aos materiais biolgicos (enzimas e anticorpos) incluem fcil preparo, baixo custo; possibilidade de sntese em situaes onde nenhuma biomolcula (receptor ou enzima) se encontra disponvel ou quando elas possuem um alto preo e, resistncia a ambientes adversos, nos quais biomolculas naturais no resistiriam, como na presena de cidos, bases, ons metlicos, solventes orgnicos, altas temperaturas e alta presso2,3. Ainda, os MIP podem ser armazenados a seco em temperatura ambiente por longos perodos de tempo, sem perda do desempenho inicial. Devido aos stios de ligao dos MIP, que apresentam afinidades e seletividades aproximadas aos dos sistemas anticorpoantgeno, estes materiais so designados como polmeros biomimticos. Neste sentido, no surpreendente que exista atualmente uma forte tendncia do seu uso como elementos de reconhecimento em sensores biomimticos, em face da grande seletividade e sensibilidade inerentes s interaes anticorpo-antgeno ou enzima-substrato. Os MIP so obtidos por polimerizao na presena de uma molcula molde a ser impressa, de tal forma que um esqueleto polimrico formado ao redor do futuro analito ou de uma molcula com estrutura anloga. Aps a polimerizao a molcula que foi impressa removida por dissoluo ou evaporao (quando so analitos volteis), revelando stios de ligao (cavidades) que so complementares em forma e tamanho do analito (Figura 1). Com esta estratgia, o resultado uma memria molecular no polmero, que apropriada para que ocorra um processo de incluso reversvel e um enriquecimento seletivo do analito. A primeira etapa da sntese consiste em misturar o monmero contendo grupos funcio*e-mail: kubota@iqm.unicamp.br

Figura 1. Representao esquemtica do processo de impresso molecular

nais complementares queles da molcula molde, o que permite formar em soluo o complexo monmero-molcula molde, por meio de interaes (covalentes ou no covalentes) entre os respectivos grupos funcionais complementares. Posteriormente, so adicionados ao meio reacional o reagente de ligao cruzada e o iniciador radicalar de polimerizao. Finalmente, a polimerizao induzida por meio de calor e/ou luz UV na ausncia de oxignio. O mtodo mais comum de preparo dos MIP a polimerizao em bulk onde, aps a reao, o polmero obtido triturado, resultando em pequenas partculas com impresso molecular, usualmente na escala de micrmetros. Este processo bem estabelecido e bastante empregado quando o polmero utilizado em colunas para HPLC, em ensaios biomimticos de imunoafinidade e em espectrofluorimetria. Se necessrio, o controle das partculas pode ser realizado por meio de peneiras e/ou por sedimentao. Contudo, este procedimento consome tempo e implica uma perda de material, obtendo-se apenas uma produo de partculas teis de aproximadamente 20%4. Para contornar esta desvantagem um mtodo alternativo foi introduzido e chamado de gerao das microprolas ou micro-esferas5,6. Estes materiais podem ser usados diretamente aps sua obteno, assim que a molcula molde for removida da cavidade seletiva por meio de extrao com solvente. A grande vantagem do uso destas microprolas o tamanho uniforme das partculas obtidas. Desta forma, no uso em cromatografia resultados mais reprodutveis podero ser obtidos se a fase estacionria do MIP apresentar uma estrutura bem definida, com cavidades e tamanhos dos poros uniformes. Partculas deste tipo podem ser preparadas pela polimerizao por suspenso em meio aquoso 7, precipitao 8 , expanso em multi-etapas 9 e polimerizao sobre superfcie modificada10. Para algumas aplicaes a polimerizao pode ser realizada in situ11-14, como por ex., no caso da micro-extrao em fase slida, onde a polimerizao

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realizada sobre um cabo de fibra ptica silanizada15. Polimerizao in situ tambm pode ser usada para obteno dos MIP sobre superfcies de transdutores, visando a construo de sensores qumicos, em especial, para preparao de sensores potenciomtricos16. Os MIP tm apresentado real potencial como receptores biomimticos para aplicaes em tcnicas de separao17, ensaios de fluoroafinidade18,19 e radioafinidade17,20, e para desenvolvimento de sensores qumicos16,17,19,21-24. Neste sentido, a tecnologia de impresso molecular tem crescido rapidamente nos ltimos anos, sendo empregada em reas de grande importncia como na indstria de alimentos25, no monitoramento e controle de poluentes ambientais26,27, na rea de defesa e segurana, monitorando armas qumicas de destruio em massa28 e, mais recentemente, como uma ferramenta para o desenvolvimento de sistemas de liberao de drogas (DDS - drug delivery systems), atualmente em um estado incipiente29. O objetivo deste trabalho mostrar em detalhe os avanos recentes no emprego dos MIP no desenvolvimento e aplicao de sensores biomimticos, visando complementar o trabalho anterior30, no qual foram descritas a preparao dos MIP e suas aplicaes em tcnicas de extrao e separao. EMPREGO DOS MIP NO DESENVOLVIMENTO DE SENSORES BIOMIMTICOS Nas dcadas passadas presenciou-se um grande aumento na atividade de desenvolvimento de sensores qumicos; em particular, aquela relacionada ao desenvolvimento de biossensores tem tido um crescente interesse, principalmente devido s caractersticas oferecidas por estes dispositivos, tais como boa seletividade (decorrente do reconhecimento biomolecular) e possibilidade de serem portteis, devido a seu tamanho pequeno e sua rpida resposta. Estas caractersticas os tornam potencialmente promissores para aplicao em indstrias farmacutica, alimentcia, de contro-

le de processos industriais nas reas mdica, de anlises clnicas e ambiental. Um sensor qumico ou biossensor pode ser definido como um dispositivo que emprega um elemento de reconhecimento intimamente acoplado a um transdutor, onde o elemento de reconhecimento o responsvel pela interao seletiva com o analito de interesse, sendo a parte crtica destes dispositivos. O transdutor tem como objetivo converter a energia do evento de reconhecimento em um sinal mensurvel31,32. Nos biossensores o reconhecimento seletivo realizado por biomolculas (receptores biolgicos), tais como anticorpos ou enzimas, que possuem a capacidade de suprir as demandas analticas para uma ampla gama de analitos de interesse2. Contudo, a principal desvantagem destas biomolculas em sensores est associada pobre estabilidade qumica e fsica, resultando em uma falta de estabilidade operacional e de armazenagem, razes pelas quais os receptores artificiais tm atrado crescente interesse. Uma metodologia alternativa que envolve o uso de receptores artificiais a de impresso molecular. A alta estabilidade e seletividade destes materiais surgem como uma alternativa para o desenvolvimento de sensores biomimticos, e isto fica bastante claro quando so comparadas as vantagens oferecidas pelos MIP em relao s biomolculas naturais (Tabela 1). O termo sensor biomimtico refere-se queles sensores nos quais os elementos biolgicos, usados nos biossensores convencionais, so substitudos por compostos ou materiais que permitem a ocorrncia de interaes de reconhecimento de forma seletiva para um determinado analito, de forma similar ao que ocorre com o elemento biolgico. As tentativas iniciais que testaram as propriedades de reconhecimento dos MIP, visando seu emprego na construo de sensores, incluem medidas elipsomtricas em finas camadas de MIP impressas com Vitamina K133 e estudos da permeabilidade de membranas com impresso molecular34. O primeiro sensor biomimtico empregando MIP como elemento de reconhecimento foi um sensor de

Tabela 1. Comparao entre as caractersticas oferecidas pelas biomolculas naturais (enzimas, anticorpos, receptores) e os MIP, em relao ao seu emprego na construo de biossensores e sensores biomimticos
BIOMOLCULAS Apresentam estabilidade varivel, dependendo da estrutura e da fonte. So qumica, fsica e termicamente frgeis. Algumas enzimas e receptores, apesar de serem de fcil obteno, apresentam custo elevado. So restritas ao uso em meio aquoso. Muitas apresentam pobre desempenho em meio no aquoso. A integrao de vrias biomolculas com a finalidade de construir um dispositivo multicanal (contendo vrios biossensores) pode ser dificultada, devido variao nas caractersticas operacionais de cada biossensor (pH, fora inica, temperatura, substrato). Precisam de condies especiais para armazenagem. Apresentam constantes de afinidade (constante de MichaellisMenten) e cintica (velocidades turnover) com valores elevados. Consideraes ticas podem estar envolvidas, principalmente no caso do uso de fontes animais. Nos casos onde conhecida a interao entre o reconhecedor biolgico e o analito, podem ser usadas na construo de biossensores. A preparao, separao, purificao e/ou liofilizao consomem tempo, porm, uma vez que a biomolcula isolada, pode ser realizada uma produo reprodutvel em grande escala. No so reutilizveis. MIP Apresentam altas estabilidades qumicas, fsicas e trmicas, por longos perodos de tempo. Geralmente so baratos e fceis de preparar sempre que a quantidade da molcula molde for suficiente. Apresentam melhor desempenho em meio orgnico, porm tambm podem ser usados em meio aquoso. Como sofrem pouca influncia da variao dos parmetros operacionais (pH, fora inica, temperatura), em relao aos biossensores, so adequados para construo de dispositivos multicanais. Podem ser estocados a seco e em temperatura ambiente. Ainda nas melhores situaes, as constantes de afinidade e cintica so menores que as obtidas com biomolculas. So sintticos e no precisam de nenhuma fonte natural. Podem ser sintetizados para analitos para os quais ainda no se conhece o elemento de reconhecimento biolgico. A preparao relativamente rpida e com boa reprodutibilidade.

So reutilizveis.

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capacitncia, desenvolvido pelo grupo de Mosbach, em 19912,35. O dispositivo consistiu de um capacitor de efeito de campo contendo uma fina membrana polimrica impressa com anilida de fenilalanina, na qual a ligao deste analito resultava em uma mudana na capacitncia do sistema, permitindo a deteco qualitativa do mesmo. Posteriormente, um grande nmero de trabalhos descrevendo a aplicao dos MIP no desenvolvimento de sensores qumicos foi publicado usando diversos tipos de transdutores, dentre os quais destacam-se: os eletroqumicos, tais como os transistores de efeito de campo (FETs field effect transistors) e os eletrodos; os piezeltricos, que so transdutores sensveis a variaes de massa, tais como osciladores de onda acstica de superfcie (SAW surface-acoustic wave oscillator) e as microbalanas de quartzo (QCM quartz crystal microbalance), e pticos, baseados no uso de fibras pticas como guias de luz. No intuito de construir estes sensores qumicos, a imobilizao do MIP na superfcie do transdutor de grande importncia e, a seguir, so descritas as estratgias de imobilizao que tm sido empregadas com este propsito. Ademais, sero apresentados outros mtodos de preparo de sensores biomimticos, cuja formao dos stios seletivos no se d por meio da sntese convencional dos MIP. ACOPLAMENTO DE RECEPTORES SINTTICOS SELETIVOS NOS DIFERENTES TIPOS DE TRANSDUTORES De maneira anloga construo de biossensores, um ponto muito importante na construo dos sensores biomimticos encontrar uma forma adequada de acoplar o material sinttico contendo o receptor seletivo ao transdutor, com finalidade de coloclos em contato ntimo. Neste sentido, a estratgia para acoplar o MIP com o transdutor depender da natureza fsica do transdutor. Se o transdutor for um eletrodo slido, tal como ouro e carbono vtreo, a imobilizao pode ser dividida basicamente em dois grupos. O primeiro compreende o encapsulamento do MIP dentro de matrizes suportes, cujo material resultante posteriormente depositado sobre a superfcie do transdutor. No segundo grupo e tambm o mais empregado, a imobilizao do material seletivo contempla a formao de filmes sobre a superfcie do transdutor. Neste caso, diferentes estratgias adotadas na formao dos filmes tm sido propostas, tais como, a polimerizao direta do MIP sobre o transdutor; a polimerizao in situ do MIP, a qual realizada por eletropolimerizao; filmes com impresso molecular empregando monocamadas auto-organizadas e filmes com impresso molecular empregando o processo sol-gel. Quando o transdutor possuir caractersticas granulares, por ex. grafite em p, o MIP facilmente misturado com o grafite formando um compsito. Com base no exposto, a seguir so descritas as estratgias que tm sido empregadas para construo destes sensores biomimticos. Imobilizao do MIP por ocluso Esta a estratgia de imobilizao mais simples, e baseia-se no encapsulamento de partculas de MIP dentro de matrizes suportes, tais como gis36 ou polmeros solveis inertes37,38, para formar membranas que podem ser fixadas mecanicamente na superfcie do transdutor. Os MIP ainda podem ser encapsulados como uma fina camada de partculas polimricas, entre a superfcie do transdutor e uma membrana inerte39,40. Contudo, apesar da facilidade da imobilizao, existem algumas desvantagens que devem ser consideradas21, entre elas, as mais importantes so limitaes difusionais resultando em sensores com tempo de resposta longo; ligaes no especficas do analito po-

dem acontecer na matriz suporte, ou, ainda, diminuio da capacidade de ligao, originada pelo bloqueio dos stios especficos por parte do material usado como matriz suporte. No tipo de imobilizao por ocluso so empregadas partculas de MIP previamente sintetizadas, que podem ter sido obtidas pelo mtodo de polimerizao em bulk ou na forma de microesferas. O emprego de partculas obtidas pelo mtodo em bulk mais comum, devido facilidade inerente de obteno. J o uso de microprolas tem sido apenas recentemente mostrado na construo de sensores piezeltricos41,42. Este tipo de estratgia de imobilizao tem sido restringida ao desenvolvimento de sensores piezeltricos, pois, no caso de sensores pticos e eletroqumicos a adsoro no especfica tem sido observada. Imobilizao de MIP em compsitos Outro procedimento para preparo de sensores modificados com MIP, particularmente os eletroqumicos, baseia-se na formao de materiais compsitos base de grafite em p43,44. A vantagem desta imobilizao tornar os processos de limpeza destes sensores (extrao do analito do MIP) mais simples. Desta forma, aps cada uso, a superfcie do sensor pode ser facilmente renovada por meio de um simples polimento mecnico da superfcie. Uma estratgia para construo de sensores biomimticos usando este tipo de imobilizao o uso de pastas de carbono modificadas, que permitem fcil incorporao de partculas de MIP no desenvolvimento de sensores amperomtricos e voltamtricos. Contudo, a necessidade freqente do uso de solventes orgnicos restringe a aplicao deste tipo de sensores, a menos que o desempenho do MIP tenha sido testado em meio aquoso. Apenas Yamasaki e colaboradores44,45 tm mostrado o emprego de pasta de carbono modificada na construo de sensores biomimticos baseados em MIP em meio aquoso. Estes autores, recentemente relataram um sensor amperomtrico base de pasta de carbono modificada com partculas de MIP para determinao de frutosil-valina (Fru-val), como um indicador do grau da diabetes44. As partculas de MIP foram obtidas usando Fru-val como molcula molde, utilizando-se o mtodo de polimerizao em bulk, as quais foram trituradas, peneiradas e, posteriormente, misturadas com grafite em p e um aglutinante, no caso leo mineral, para obteno da pasta de carbono. Por outro lado, Pizzariello e colaboradores43 relataram a preparao de um sensor voltamtrico para determinao de clenbuterol em cido perclrico contendo 10% de etanol. O compsito foi preparado misturando-se partculas de MIP (previamente obtidas pelo mtodo de polimerizao em bulk), grafite em p e n-eicosano usado como matriz slida de ligao. Formao de filmes seletivos sobre superfcie de transdutores para desenvolvimento de sensores biomimticos Polimerizao direta do MIP sobre a superfcie do transdutor O uso de filmes na superfcie dos transdutores a estratgia mais amplamente empregada na construo de sensores baseados em MIP. Nestes casos, o controle da espessura da camada sensora necessrio para se obter tempo de resposta e sensibilidade adequadas para aplicao do sensor46. Existem vrias estratgias para obteno de filmes de MIP na superfcie dos transdutores e a seguir, so descritos os procedimentos mais comumente empregados. Cabe lembrar que em todos os procedimentos, a sntese do polmero realizada sobre a superfcie do transdutor. Os filmes podem ser preparados sobre a superfcie dos transdutores, por meio da polimerizao de monmeros funcionais

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derivados do cido meta-acrlico (MAA), vinil piridina (VP) ou acrilamida, seguindo procedimentos similares queles usados na obteno de partculas MIP por polimerizao em bulk, usando reagentes de ligao cruzada, molcula molde e iniciadores de polimerizao47-55. Para iniciar a polimerizao trmica, o composto 2,2-azo (bis)2-isobutironitrila (AIBN) tem sido amplamente empregado; j para promover a polimerizao fotoqumica, alm do AIBN, tambm tm sido usados derivados de benzofenonas51,53 ou acetofenonas55 como iniciadores radicalares. Para obteno dos filmes nas superfcies dos transdutores, vrias alternativas tm sido empregadas. A mais simples a adio de pequenas quantidades (L) da soluo de polimerizao sobre a superfcie dos transdutores, cujo procedimento comumente conhecido como a tcnica do sanduche, e tem sido usada na preparao de sensores piezeltricos27,56,57, de efeito de campo (ISFETs)54 e na preparao de membranas para condutometria48. Outra possibilidade de obteno dos filmes consiste na imerso do transdutor em uma soluo onde a polimerizao j tenha sido iniciada, ficando retida uma fina camada do polmero na ponta do transdutor; este o caso de sensores baseados em feixes de fibras pticas49,52 e eletrodos de ouro51. Em alguns casos, a silanizao da superfcie do eletrodo deve ser previamente realizada, com finalidade de ativar a superfcie para a interao com as molculas do polmero21,58. Outra alternativa inclui o uso da tcnica de spincoating, cujo procedimento consiste na adio de uma alquota da mistura de polimerizao sobre a superfcie do transdutor. Este, por sua vez, submetido a uma alta rotao, em geral maior que 500 rpm, para retirar o excesso da mistura de polimerizao e somente deixar uma fina camada do polmero na superfcie do eletrodo55. Finalmente, o enxerto da superfcie do transdutor estimulada por fotopolimerizao (grafting photopolymerization) tem sido proposto para-se obter filmes finos na superfcie dos transdutores. Neste processo, o iniciador de polimerizao primeiramente adsorvido na superfcie do transdutor, aps a mistura contendo o monmero e a molcula molde ser depositada, permitindo que a polimerizao ocorra na presena de radiao UV. Aps a polimerizao e remoo do excesso, apenas um fino filme permanece na superfcie do transdutor. Esta tcnica tem sido empregada na construo de sensores de capacitncia usando eletrodos de ouro51,53. Cabe ressaltar que nas imobilizaes baseadas em monmeros derivados de VP, MAA e acrilamina, a preparao do polmero deve ser realizada em condies isentas de oxignio, j que a presena deste pode inibir o processo de polimerizao, devido formao de radicais livres secundrios. Isto implica em que os transdutores devam ser apropriadamente condicionados em atmosfera inerte, o que poder acarretar alguma dificuldade de execuo. Membranas de MIP tambm podem ser obtidas por meio da evaporao de solues de polmeros lineares pr-formados contendo o analito. Estes polmeros lineares atuam simultaneamente como polmero funcional para interagir com a molcula molde e como matriz polimrica59-62. A evaporao de uma soluo destes polmeros na superfcie do transdutor resultar em uma membrana rgida que insolvel em gua e em solventes orgnicos, e cuja porosidade e permeabilidade podem ser controladas pelo ajuste da concentrao de polmero e da molcula molde na soluo que ser evaporada. Uma grande vantagem desta tcnica a simplicidade para construo dos sensores. Por outro lado, a sntese do polmero linear muito trabalhosa e consome bastante tempo. Ademais, difcil controlar e direcionar a conformao adotada pelo polmero durante a solidificao63. Uma variao do uso de polmeros pr-formados para obteno de membranas, a tcnica de precipitao pela inverso da fase (phase inversion precipitation) 60,61,64 . Neste tipo de metodologia primeiramente preparada uma soluo orgnica contendo um polmero linear e a molcula molde. A seguir, um deter-

minado volume colocado em uma superfcie plana (que serve como base para se obter membranas uniformes) a qual, a seguir, colocada em gua (troca de fase) para promover a coagulao a uma temperatura adequada. Uma vez realizada a coagulao do polmero contendo a molcula molde, este mantido em gua a fim de se retirar todo excesso de solvente orgnico, usado na preparao da mistura polmero/molcula molde. O polmero resultante (que se apresenta na forma de membrana) submetido extrao da molcula molde. Com base nesta metodologia, Kobayashi e colaboradores64 desenvolveram um sensor piezeltrico para determinao de cafena, no qual a membrana foi obtida pela tcnica de precipitao pela inverso da fase, empregando o polmero PANco-AA (poli-acrilonitrila-co-acrlico). Polimerizao in situ A sntese dos MIP in situ comumente realizada por meio de eletropolimerizao sobre superfcies condutoras, tal como ouro65,66 ou grafite67. Os MIP preparados por esta tcnica no requerem tratamento especial do material resultante, podendo ser imediatamente usados aps a extrao da molcula molde. Esta tcnica bastante atraente devido facilidade da preparao, a qual realizada por sucessivas varreduras cclicas de potencial, em solues contendo o monmero e a molcula molde. Na polimerizao in situ podem ser obtidos filmes muito finos, com boa reprodutibilidade, em uma ampla gama de substratos condutores, tornando-se conveniente para integrao da etapa de imobilizao em um processo automtico de produo em massa16. Por outro lado, devido ao fato de que polmeros obtidos por meio deste mtodo no foram ainda estudados a fundo, em relao possibilidade de estarem sendo de fato molecularmente impressos, seu uso menos comum que aqueles baseados em monmeros derivados de MAA e VP21. Adicionalmente, a eletropolimerizao limita sua aplicao para construo de sensores que possuam transdutores com superfcies condutoras, como no caso dos eletroqumicos e piezeltricos. Sensores pticos e membranas condutomtricas estaro fora deste alcance, porm outras tcnicas de imobilizao do MIP in situ podero vir a serem desenvolvidas para este tipo de sensores. Em 1999, Malitesta e colaboradores65 relataram o primeiro sensor obtido pela eletropolimerizao de orto-fenilenodiamina na presena de glicose (molcula molde), na superfcie de um eletrodo de platina, pertencente a um dispositivo piezeltrico. No mesmo ano, Panasyuk e colaboradores66 relataram a eletropolimerizao de fenol na superfcie de eletrodos de ouro na presena de fenilalanina (molcula molde), na construo de um sensor de capacitncia. Recentemente, Weetall e Rogers67 descreveram a eletropolimerizao de uma mistura equimolar de resorcinol e orto-fenilenodiamina na presena do cido 2,4 diclorofenoxiactico (2,4-D) na superfcie de grafite HB usado para desenho, para realizao de medidas voltamtricas empregando a voltametria de onda quadrada. Outra alternativa interessante aos polmeros no condutores (MAA e VP), e que tem sido empregada na construo de sensores usando a tcnica de eletropolimerizao in situ, a preparao de MIP usando polmeros condutores68-72. Este mtodo torna-se bastante adequado, considerando-se a capacidade que os polmeros condutores possuem para detectar molculas, usando a cavidade gerada por uma molcula dopante, de forma semelhante ao que ocorre nos MIP convencionais. No caso particular do polipirrol, a formao dos stios de ligao seletiva est baseada na sobre-oxidao irreversvel que sofre o polipirrol em potenciais mais altos que aqueles nos quais ocorre a entrada e sada reversvel da molcula dopante, conhecido como efeito doping/undoping. Durante o processo de sobre-oxidao, a molcula dopante (molcula molde) expelida da estrutura

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polimrica. Esta nova estratgia de impresso molecular elimina a etapa de extrao da molcula molde46. Filmes com impresso molecular empregando monocamadas auto-organizadas As monocamadas auto-organizadas com impresso molecular podem ser imaginadas como nano-estruturas bidimensionais rgidas, organizadas ao redor de uma molcula molde46. A preparao destas monocamadas relativamente fcil, envolvendo a adsoro simultnea do mercaptano (alcanotiol) e da molcula molde em superfcie metlica (geralmente ouro), com posterior dessoro da molcula molde. A formao da monocamada seletiva somente ser possvel se ocorrer formao de um complexo estvel entre a molcula molde e o alcanotiol46. Exemplo deste tipo de imobilizao foi apresentado por Piletsky e colaboradores 73, que desenvolveram um sensor amperomtrico para determinao seletiva de colesterol, usando uma monocamada auto-organizada de hexadecil-mercaptano na superfcie de eletrodos de ouro contendo stios seletivos para colesterol. Uma importante considerao acerca destes sensores biomimticos devese ao fato de que as cavidades seletivas so formadas sem necessidade da sntese convencional dos MIP. Isto significa que preparar os sensores biomimticos por meio de monocamadas no requer o emprego de monmeros, reagentes de ligao cruzada e iniciadores radicalares. Apesar disso, devido formao de cavidades seletivas, os referidos sensores podem figurar perfeitamente entre os sensores biomimticos, tais como aqueles modificados com MIP. As pequenas espessuras das monocamadas auto-organizadas com impresso molecular fornecem um meio timo para minimizar os problemas relacionados s barreiras difusionais. Contudo, a principal desvantagem que estas monocamadas impressas apresentam, a falta de estabilidade da organizao das molculas na superfcie do eletrodo, ocorrendo rapidamente a perda total das propriedades seletivas de reconhecimento molecular46. Este fato tem sido explicado como sendo conseqncia da difuso lateral de molculas atravs das monocamadas. No intuito de solucionar este problema, Mirsky e colaboradores74 propuseram um procedimento alternativo, que chamaram de spreaderbar75. Neste procedimento, a obteno das monocamadas realizada por meio da co-adsoro de duas molculas na superfcie do eletrodo, uma delas correspondendo s da matriz (um alcanotiol de cadeia longa) e a outra, a uma molcula molde com estrutura similar do analito, porm contendo grupos tiis, para permitir que ocorra a ligao na superfcie do eletrodo. Neste tipo de arranjo, as molculas molde no so dessorvidas da superfcie do eletrodo, obtendo-se uma monocamada mista com poros que apresentam a mesma morfologia da molcula molde e, por sua vez, adequada para o analito. Devido formao de nano-tunis onde o analito pode-se encaixar perfeitamente, a diferena notada entre os sensores preparados com monocamadas impressas bidimensionais e os sensores construdos usando a tcnica spreader-bar, que estes ltimos apresentam maior estabilidade, j que o problema da difuso lateral diminudo. Filmes com impresso molecular empregando o processo sol-gel Materiais sol-gel com impresso molecular podem ser preparados a partir de uma soluo orgnica contendo os precursores sol-gel e a molcula molde. Trabalhos relacionados ao uso de matrias sol-gel com impresso molecular ainda so relativamente escassos76-79, e basicamente filmes de TiO2 tm sido empregados. Este o caso dos sensores para determinao dos cidos 4clorofenoxiactico e 2,4-D, desenvolvidos por Lahav e colaboradores77. Estes sensores esto baseados no uso de transdutores de efeito de campo (FETs), sobre os quais foram depositados filmes

de TiO 2 molecularmente impressos com os respectivos cidos carboxlicos (usados como molculas molde). Para preparao dos materiais sol-gel, utilizou-se uma soluo orgnica (etanol/tolueno) de butxido de titnio (IV) e o cido carboxlico correspondente. Esta soluo contendo o complexo butxido de titnio (IV)/ carboxilato foi depositada sobre a porta de SiO2 do FET, seguida pela polimerizao sol-gel da mistura, resultando no filme de TiO2 impresso com o carboxilato correspondente. O tratamento do filme com soluo de amnia a 1% (v/v) resulta na eliminao do carboxilato e na formao dos stios seletivos no filme de TiO2. Como pode ser observado, so muitas as possibilidades de acoplamento dos MIP em superfcies transdutoras e cabe ao qumico optar por aquela que for mais conveniente para a aplicao desejada. CONFIGURAES USADAS PARA OBTENO DA RESPOSTA ANALTICA EM SENSORES BIOMIMTICOS Em biossensores o sinal analtico gerado pela interao entre o analito e o elemento de reconhecimento; aps isto, o transdutor encarregado de converter este sinal em um sinal de sada quantificvel que, em muitos casos, eltrico. O mesmo princpio aplicado se um MIP usado como elemento de reconhecimento em substituio da biomolcula, como mostrado na Figura 2.

Figura 2. Esquema comparativo entre o mecanismo de resposta de um biossensor (imunossensor) e um sensor biomimtico (MIP-sensor)

Nos sensores biomimticos baseados em MIP, determinadas variaes nas propriedades de um ou mais parmetros fsico-qumicos do sistema aps a interao com o analito podem ser usadas para deteco. Alternativamente, algumas propriedades especficas do analito, tais como fluorescncia ou atividade eletroqumica, podem ser exploradas na construo do sensor. Em outros casos, em situaes onde nenhuma das alternativas anteriores possvel, ou visando ainda um aumento na resposta do sensor, algumas molculas ou grupos funcionais chamadas de elementos reportadores podem ser incorporados dentro do prprio polmero, para gerar diretamente um sinal fsico-qumico aps a interao com o analito. Resposta analtica baseada na interao analito/elemento receptor seletivo Os dispositivos que tm sido bastante usados na construo de sensores baseados em MIP referem-se queles transdutores de onda

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acstica sensveis a variaes de massa, tais como os SAW e as QCM, estas ltimas em particular tm-se tornado muito teis na construo de sensores biomimticos. As QCM consistem de um fino disco de quartzo coberto com eletrodos de ouro em ambos dos lados, que pode ser colocado em oscilao usando o efeito piezeltrico. Para construo do sensor, uma fina camada de MIP pode ser depositada em um dos lados do disco. O acmulo de analito no MIP resultar em uma variao na massa que, por sua vez, causar uma diminuio na freqncia de oscilao que pode ser facilmente quantificada pelo detector de freqncia; desta forma, o sinal analtico neste tipo de sensores obtido diretamente por meio da interao analito/MIP. Entre as razes pelas quais este tipo de transdutor tem tido tanto sucesso na construo de sensores baseados em MIP esto seu relativo baixo custo, sua robustez, sua facilidade de uso e, principalmente, a facilidade de acoplamento dos MIP superfcie das QCM. Neste sentido, a literatura relata desde o uso de matrizes a base de MIP, obtidas por procedimentos comuns (polimerizao direta) empregando polmeros a base de acrlico80, passando pela eletrossntese (polimerizao in situ) da membrana com impresso molecular sobre a superfcie da QCM65, at o uso de finas camadas de material com impresso molecular obtida pelo processo sol-gel81. Outro princpio de transduo que tambm pode utilizar a interao analito/elemento receptor seletivo, para obteno do sinal analtico, o condutomtrico39,82,83. Neste tipo de sensores condutomtricos, dois eletrodos so separados por um MIP preparado geralmente na forma de membrana. A ligao do analito ao polmero produz uma variao na condutividade do sistema, que proporcional concentrao de interesse. Sensores usando a variao direta da capacitncia do sistema eletroqumico aps a interao entre o analito e o MIP tm sido amplamente descritos na literatura51,53,66,84. A construo destes sensores tem sido realizada diretamente pela eletropolimerizao66,84 do MIP sobre a superfcie do eletrodo de trabalho na presena da molcula molde, ou por meio da fotopolimerizao usando radiao UV51,53. Visto que eletrodos de ouro tm sido empregados, a primeira etapa para obteno das camadas receptoras seletivas consiste na formao de uma monocamada auto-organizada usando molculas de mercaptanas. Neste tipo de dispositivos a interao do analito na superfcie dos eletrodos modificados provoca uma queda na capacitncia do sistema, como conseqncia do deslocamento de molculas polares de gua da superfcie do eletrodo por molculas menos polares do analito84. Entre os outros sistemas transdutores que tambm permitem o aproveitamento da interao analito/MIP tm-se a transduo impedimtrica, potenciomtrica, incluindo os transistores de efeito de campo de on seletivo (ISFET)46. Resposta analtica baseada nas propriedades inerentes do analito Resposta analtica deste tipo obtida quando o analito exibe propriedades qumicas inerentes, como fluorescncia ou atividade eletroqumica. Transdutores que se tornam altamente viveis para este tipo de configurao so aqueles baseados em fibras pticas. Desta forma, membranas ou MIP polimerizados in situ podem ser imobilizados na superfcie de fibras pticas. Neste tipo de sensores, aps a interao com o analito fluorescente, um feixe de luz correspondente ao comprimento de onda de excitao pode ser irradiado por meio das fibras pticas e entrar em contato com as molculas fluorescentes ligadas ao MIP, as quais emitiro fluorescncia no comprimento de onda caracterstico, podendo ser medido pelo sistema de deteco como sendo proporcional concentrao de analito na amostra. Nestes dispositivos alm da seletividade inerente ao MIP, so obtidos ganhos em sensibilidade devido ao aumento do rendi-

mento quntico do analito retido na cavidade. Exemplos destes tipos de sensores so relatados na literatura50,85. Um problema que pode surgir quando a fluorescncia do analito usada para obteno do sinal analtico, reside no fato de que as molculas molde comumente no so totalmente extradas do polmero, o que gera um sinal de fundo elevado, resultando em uma diminuio da sensibilidade. Para contornar este problema o MIP pode ser obtido usando-se uma molcula no fluorescente com estrutura muito prxima do analito21. No caso do analito apresentar atividade eletroqumica, as tcnicas de amperometria e voltametria podem ser empregadas para se obter sinal analtico nos sensores biomimticos baseados em MIP. Porm, consideraes importantes em relao difuso das espcies em direo ao eletrodo de trabalho e soluo de medida devem ser consideradas, a fim de evitar a passivao da superfcie do eletrodo46. Desta forma, a porosidade da camada de MIP, seja qual for a natureza do elemento de reconhecimento, essencial para fornecer os canais necessrios para a difuso das espcies e as reaes de transferncia de eltrons sobre a superfcie do eletrodo. A obteno do sinal analtico neste tipo de sensores envolver um primeiro passo de extrao seletiva do analito (incubao), seguido pela transferncia de eltrons na superfcie do eletrodo16. Contudo, um outro experimento no poder ser realizado imediatamente a seguir, pois o sensor no apresentar sinal at que a superfcie do transdutor esteja livre dos produtos adsorvidos, independentemente da reversibilidade de ligao do analito ao MIP. No intuito de contornar este problema e aproveitando a facilidade de preparao dos MIP, assim como seus baixos custos, tm sido construdos sensores descartveis, usando eletrodos de carbono obtidos pela tcnica de screen-printed. Neste sentido, Kroger e colaboradores40 tm demonstrado o uso de eletrodos de carbono screen-printed impressos com o herbicida, cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D). O sinal analtico foi obtido por voltametria de pulso diferencial. Para isto, primeiramente foi realizada a incubao do sensor em soluo do herbicida 2,4-D por 1 h, aps o qual foi retirado, enxaguado, transferido para uma clula eletroqumica para quantificao do 2,4-D, ligado no sensor e, finalmente ,descartado. Outra configurao verstil a preparao de compsitos contendo partculas de MIP em uma matriz slida43, a qual aps o uso pode ser facilmente polida para se retirar os produtos da reao eletroqumica da superfcie do sensor. Se o analito por si s no apresenta nenhuma propriedade inerente que possa ser medida, h a possibilidade de marcar o analito tornando-o com caractersticas pticas ou eletroqumicas ou, ento, pode-se empregar um agente competitivo (nonrelated probes)43,86 que se ligue ao MIP. Neste ltimo caso, a adio do analito na soluo de medida promove o deslocamento do agente competitivo ligado ao MIP, resultando em um sinal mensurvel. Por ex., na determinao do cido 2,4 diclorofenoxiactico (2,4D) por mtodo eletroqumico84 e fluorescente87, 2,4 diclorofenol (DCP) e 7-carboximetoxi-4-metilcumarina (CMMC) foram usados, respectivamente, como agentes competitivos (nonrelated probe) (Figura 3).
Cl O Cl 2,4-D COOH Cl CH3 DCP CMMC Cl OH O O O COOH

Figura 3. Estruturas qumicas de molculas que tm sido comumente usadas como nonrelated probe na determinao eletroqumica ou ptica do cido 2,4 diclorofenoxiactico (2,4-D). DCP: 2,4 diclorofenol e CMMC: 7carboximetoxi-4-metilcumarina

Vol. 28, No. 6

Polmeros Biomimticos em Qumica Analtica

1093

Resposta analtica baseada nas propriedades introduzidas ao receptor sinttico seletivo Uma forma alternativa de se obter sinal analtico nos sensores biomimticos, explorar alguma mudana fsico-qumica, no prprio material sinttico impresso molecularmente2,21,88,89. Para isto o material sinttico dever ser preparado na presena de um elemento ou grupo reportador, que ser encarregado de emitir, gerar ou ainda alterar algum sinal fsico-qumico que pode ser relacionado interao da cavidade seletiva com o analito. Este tipo de configurao extremamente promissor, pois independe de alguma propriedade especial do analito, facilitando, desta forma, a construo de sensores e estendendo sua aplicao para uma gama de compostos. Um exemplo deste tipo de configurao foi relatado por Jenkins e colaboradores49. Os autores descrevem a construo de um optrodo altamente sensvel ao produto da hidrlise do agente de arma qumico Soman, o metilfosfonato de pinacolina (PMP). O sensor foi construdo usando-se uma fibra ptica sobre a qual o MIP contendo o elemento reportador luminiscente (Eu3+) foi copolimerizado. A obteno do sinal analtico baseia-se na formao do complexo luminescente entre os ons Eu3+ e o analito, o qual foi monitorado a 610 nm. Este sensor apresentou-se bastante sensvel para determinao de PMP, mostrando um limite de deteco da ordem de ng L-1. Os sensores mostrados anteriormente fornecem sinais analticos bidimensionais, que fornecem pouca ou nenhuma informao em relao composio da amostra. Embora isto seja normalmente compensado pela elevada seletividade dos MIP, uma estratgia diferente o uso de mecanismos transdutores inteligentes, os quais geram sinais com maior contedo de informao. Uma forma de se obter isto pode ser explorando a grande especificidade molecular de espectros de absoro na regio espectral do infravermelho mdio (3500 500 cm -1 ). Desta forma, a combinao de MIP e espectrofotometria FTIR (Fourier Transform Infrared) permitir resolver problemas analticos onde apenas o emprego de MIP no o bastante, como por ex., no caso de amostras com matrizes complexas, ou quando analitos com estrutura muito semelhantes esto presentes na amostra. A caminho disto, um sistema sensor para determinao de 2,4-D foi relatado por Jakusch e colaboradores90. Os autores combinaram a tecnologia MIP e espectroscopia de onda evanescente na regio do IV. O sistema sensor foi preparado depositando-se um filme de MIP seletivo para 2,4-D sobre um cristal de ZnSe, que serviu como elemento de atenuao da refletncia total, o qual foi colocado em uma cela de fluxo. O sinal analtico foi obtido diretamente pelo espectrofotmetro FTIR logo aps acumulao do 2,4-D na camada de MIP. Protocolos empregados para realizao das medidas Na aplicao de sensores baseados em MIP vrios protocolos para obteno do sinal analtico tm sido propostos, visando a correlao da quantidade de analito na amostra com a resposta fornecida pelo transdutor. Um resumo dos protocolos mais usados nos ltimos 10 anos pode ser observado na Figura 4, e podem ser divididos em dois grupos, o primeiro, que o mais comumente empregado, refere-se quele no qual no necessria a extrao prvia da molcula molde para realizao da medida69,74. O segundo, que mais elaborado, baseia-se na extrao prvia da molcula molde, seguida pela incubao do sensor na amostra contendo o analito e, finalmente, pela sua determinao, que pode ser realizada no mesmo meio de incubao ou em um meio diferente, no qual a medida pode ser realizada direta ou indiretamente, por meio de reaes competitivas40,43. Neste ltimo caso, deve-se frisar que a determinao indireta do

analito empregada quando o mesmo no apresenta propriedades eletroqumicas. Desta forma, a incubao realizada num meio contendo o agente competidor (eletroativo), onde a adio do analito (no eletroativo) ao meio promove o deslocamento do agente competidor e o conseqente sinal analtico.

Figura 4. Protocolos empregados na realizao das medidas usados na determinao de diversos analitos usando MIP-sensores

Sensores que permitem realizar a medida diretamente na soluo de incubao so aqueles baseados em transduo piezeltrica, em medidas de capacitncia, em medidas condutomtricas e em medidas fluorimtricas, quando o MIP dopado com grupos reportadores. Sensores que realizam a determinao em um meio diferente ao da incubao so aqueles baseados na transduo amperomtrica, voltamtrica e fluorescente, podendo esta ser realizada direta ou indiretamente (por reaes competidoras). Sensores biomimticos baseados em MIP relatados na literatura As Tabelas a seguir mostram as caractersticas mais importantes de sensores baseados em MIP, usando transduo eletroqumica (Tabelas 2-4), piezeltrica (Tabela 5) ou ptica (Tabela 6), relatados na literatura. A alta seletividade e estabilidade dos MIP os tornam alternativas promissoras em detrimento s enzimas, aos anticorpos e receptores naturais usados na tecnologia de sensores. Monitoramentos ambientais e remotos so considerados como reas particularmente atraentes para aplicao de sensores baseados em MIP. Contudo, os fatores que limitam o desenvolvimento destes sensores so a ausncia de um protocolo geral para preparao dos MIP; o pobre desempenho dos MIP em meio aquoso e dificuldade na converso do evento de ligao (MIP-analito) em um sinal mensurvel. Porm, com os progressos adicionais na cincia dos polmeros estes problemas podero ser solucionados, presenciando o nascimento de uma nova gerao de sensores biomimticos. Visto que os MIP promovem uma mudana na massa da fase sensora nos sensores biomimticos, aqueles baseados em QCM tm

1094

Tabela 2. Sensores eletroqumicos baseados em MIP descritos na literatura: transduo potenciomtrica e condutomtrica
Tipo de transduo Potenciomtrico (ISE) Eletropolimerizao in situ de polipirrol em eletrodo de carbono vtreo Filmes de TiO2 obtidos pelo processo sol-gel adio do analito Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps re-usvel aps tratamento (Incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Tempo de resposta de apenas 5 min. O sensor com soluo aquosa ao 1% (v/v) de amnia Tempos de resposta < 3 min. Estabilidade de 30 dias. Aceitvel repetibilidade das medidas e na preparao de vrios sensores Tempo de resposta de 5 min 54 Interao Analito/MIP Sem extrao do Altamente seletivo, template e medida direta LD=20 mol L-1 aps adio do analito 69 Estratgia de acoplamento ao transdutor Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref.

Analito

Template

Nitrato

Nitrato de sdio

cido 4-clorofenoxiActico (4-CFA) e cido 2,4-D

cido (4-CFA) ou cido 2,4-D

Potenciomtrico (FET)

77

Herbicidas a base de triazinas

Derivados de triazina

Potenciomtrico (FET)

Filmes preparados sobre a superfcie dos FETs, atravs da co-polimerizao de acrilamida e MAA Filmes preparados sobre a superfcie dos FETs, atravs da co-polimerizao de acrilamida e cidos m-acrilamidafenilbornico Ocluso de partculas de MIP obtidas pelo mtodo de polimerizao em bulk Filmes preparados sobre superfcies de vidro, atravs da polimerizao, respectivamente, de DEAEM, MAA, AA ou viniltetrafenilboronato, com EDMA e AIBN Membrana flexvel obtida pela tcnica do sanduche, atravs da fotopolimerizao de MAA com TEDMA, AIBN e OUA Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP

Interao Analito/MIP

Nucleotdeos e monosacardeos

Os respectivos nucleotdeos ou monosacardeos Condutomtrico

Potenciomtrico (FET)

94

Tarley et al.

ons benzil-trifenilfosfnio

Cloreto de benziltrifenilfosfnio

Tempo de resposta longo (> 1 h)

39

L-fenilalanina; 6aminopropil-luracil; atrazina ou cido silico

L-fenilalanina; 6aminopropil-luracil; atrazina ou cido silico

Condutomtrico

Boa seletividade e estabilidade (tempo de vida de 4 meses), pobre reprodutibilidade das medidas e da preparao dos filmes Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Tempo de vida de 3 a 6 meses. Tempos de resposta na ordem de min Determinao de misturas complexas de cidos haloacticos em guas de bebidas

48

Atrazina

Atrazina

Condutomtrico

82

cidos halo-acticos: monocloroactico; monobromoactico; dicloroactico; dibromoactico e tricloroactico

cido tricloroactico

Condutomtrico

Ocluso de partculas de MIP em Interao Analito/MIP PVC (polmero inerte) e dibutilftalato (plastificante). Os MIPs foram obtidos pelos mtodos de polimerizao em bulk e de expanso em multi-etapas

83

Quim. Nova

Template: molcula molde; L.D.: Limite de deteco; 2,4-D: cido 2,4-diclorofenoxiactico; MAA: cido meta-acrlico; DEAEM: (dietilamino)etil metacrilato; AA: alilamina; EDMA: etilenoglicol dimetacrilato; AIBN: 2,2-azo (bis)-2-isobutironitrila; TEDMA: trietilenoglicol dimetacrilato; OUA: oligouretano acrilato; PVC: cloreto de polivinila.

Tabela 3. Sensores eletroqumicos baseados em MIP descritos na literatura: medidas de capacitncia, impedncia e corrente
Tipo de transduo Capacitncia Monocamadas auto-organizadas (SAMs) usando a tcnica de spreader-bar Eletropolimerizao de fenol entre SAMs de 4-mercaptofenol e 1-octanotiol, antes e depois da polimerizao, respectivamente sobre ouro Eletropolimerizao de o-fenilenodiamina sobre eletrodo de ouro. Aps acoplamento de 1-dodecanotiol para aumentar a densidade da camada sensora e torn-la mais isolante Filmes preparados pela tcnica de grafting photopolimerization (Benzofenona, AMPS, MBA) sobre eletrodos de ouro cobertos com hexadecanotiol. Filmes preparados pela tcnica de grafting photopolimerization (Benzofenona, AMPS, MBA) sobre eletrodos de ouro cobertos com hexadecanotiol. Filmes preparados sobre a superfcie de um fio de ouro, atravs da eletropolimerizao de acrilamida e cido m-acrilamidafenilbornico Ocluso de partculas de MIP (sintetizado pelo mtodo de polimerizao em bulk, com MAA e EDMA) em gel e agarose Pasta de carbono modificada com partculas de MIP obtidas pelo mtodo de polimerizao em bulk, a partir da polimerizao de 4vinilfenilboronato com EDMA e AIBN Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Pouco seletivo. Tempo de resposta longo (1 h) Interao Analito/MIP Sem extrao do template e medida direta aps adio do analito Tempo de resposta de 3 min Estratgia de acoplamento ao transdutor Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref. 74

Vol. 28, No. 6

Analito

Template

cido barbitrico

cido tiobarbitrico

L-fenilalanina

L-fenilalanina

Capacitncia

66

Glicose

Glicose

Capacitncia

Tempo de resposta de 20 min Pouca estabilidade operacional (10 h). Resposta linear entre 0,1 e 20 mmol L-1

84

Creatinina

Creatinina

Capacitncia

Re-usvel. Altamente estvel (6 meses) e seletivo. Tempo de resposta 15 min

51

Herbicidas a base de triazinas, desmetrin, metribuzina, atrazina e terbumeton Impedncia

Desmetrin

Capacitncia

Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao)

Tempo de resposta de 5 min. Realizadas em meio aquoso. Estvel por 6 meses

53

Polmeros Biomimticos em Qumica Analtica

Nucleotdeos: AMP, GMP, CMP, e UMP

Os respectivos nucleotdeos

Interao Analito/MIP

Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao). Resposta eletroqumica do analito Extrao do template, incubao com o analito, ligao competitiva de outra espcie sem atividade eletroqumica e medida Resposta eletroqumica do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito

Facilmente regenervel e altamente seletivo

94

Morfina

Morfina

Amperomtrico

Tempo de resposta longo (24 h). L.D. 0,05 g mL-1

36

Frutosil-valina

Frutosil-valina

Amperomtrico

Tempo de resposta 4 min. Altamente seletivo

44

1095

Template: molcula molde; L.D.: Limite de deteco; AMPS: cido 2-acrilamido-2-metil-1-propano sulfnico; MBA: N,N-metilenodiacrilamida; AMP: adenosina 5-monofosfato; GMP: guanosina 5-monofosfato; CMP: citosina 5-monofosfato; UMP: uridina 5-monofosfato; MAA: cido metacrlico; EDMA: etilenoglicol dimetacrilato; AIBN: 2,2-azo (bis)2-isobutironitrila.

1096

Tabela 4. Sensores eletroqumicos baseados em MIP descritos na literatura com transduo voltamtrica
Tipo de transduo Voltamtrico Filmes de 3-amino-propiltrietoxisilano e template na superfcie de microeletrodos de ouro Resposta eletroqumica do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito Tempo de resposta suficientemente rpido para tornar o sistema reversvel. Altamente seletivo para o MIP de catecol 95 Estratgia de acoplamento ao transdutor Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref.

Analito

Template

Catecol e catecolaminas

Catecol, dopamina ou epinefrina

Colesterol

Colesterol

Voltamtrico

SAM bidimensional de hexadecilmercaptano

Resposta eletroqumica do [Fe(CN)6]3-

Extrao do template, Tempo de resposta de 5 min. incubao com o analito, Boa repetibilidade na uso de ferrocianeto de preparao dos sensores potssio como uma nonrelated probe e medida direta Extrao do template, incubao com o analito e HGA (nonrelated probe), troca de soluo e medida indireta Extrao do template, incubao com o analito, troca de soluo, adio de ligante competitivo no eletroqumico e medida Descartveis. Longo tempo de resposta (30 a 60 min)

73

2,4-D

2,4-D

Voltamtrico

Ocluso de partculas MIP entre a superfcie dos eletrodos screen-printed e um filme de agarose

Resposta eletroqumica do cido 2,5-diidroxifenilactico (HGA)

84

Clenbuterol

Clenbuterol

Voltamtrico

Compsito de grafite em p, n-eicosano e partculas de MIP obtidas pelo mtodo de polimerizao em bulk, a partir da polimerizao de MAA com EDMA e AIBN SAM bidimensional de cistamina e carbodiimida cclica em fios de ouro Membranas obtidas na superfcie de eletrodo de carbono vtreo, aps evaporao da soluo de poli-fosfazeno (polmero pr-formado) em THF Resposta eletroqumica do analito Resposta eletroqumica do analito

Resposta eletroqumica do clenbuterol

Boa repetibilidade nas medidas e na preparao dos sensores. Aplicado em amostras de fgado de gado. Protocolo muito elaborado

43

Tarley et al.

Fenoxinaftaleno quinona Voltamtrico

Fenoxinaftaleno quinona

Voltamtrico

Extrao do template e Tempo de resposta de 25 min medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template, incubao com o analito, troca de soluo e medida Extrao do template, incubao com o analito, troca de soluo e medida Tempo de resposta curto 1 min

96

Rifamicina SV

Rifamicina SV

63

cido vanililmandlico (VMA) Voltamtrico

VMA

Voltamtrico

Filme depositado sobre eletrodo de Resposta eletroqumica carbono vtreo usando a tcnica de do analito spin-coating, atravs da fotopolimerizao com MAA, EDMA e DPP Filme obtido pela fotopolimerizao Resposta eletroqumica de MAA com EDMA eAIBN, depositado do analito sobre ouro modificado com alilmercaptano e 1-butanotiol Eletropolimerizao de resorcinol e o-fenilenodiamina sobre grafite comercial HB Eletrodo de gota de mercrio modificado com partculas de MIP obtidas pela co-polimerizao de cido p-aminobenzico e dicloroetano Resposta eletroqumica do polmero Resposta eletroqumica do polmero

Tempo de resposta 2 min Pouco seletivo.

55

Atrazina

Rifamicina SV

Extrao do template e Tempo de vida til 3 dias ou medida direta aps adio do 12 determinaes sucessivas. analito (incubao) Pouco seletivo Extrao do template e medida direta aps adio do analito (Incubao) Extrao do template, acumulao do MIP na gota de Hg, troca de soluo, incubao e medida Alta sensibilidade quando comparado com o modificado com NIP Tempo de resposta 1 min. Altamente sensvel. LD. 0,34 nmol L-1

97

2,4-D

2,4-D

Voltamtrico

67

Diquat (Herbicida)

Diquat

Polarogrfico

98

Quim. Nova

Template: molcula molde; 2,4-D: cido 2,4-diclorofenoxiactico; MAA: cido meta-acrlico; EDMA: etilenoglicol dimetacrilato ; AIBN: 2,2-azo (bis)-2-isobutironitrila; THF: tetra-hidrofurano; DPP: 2,2-dimetoxi2-fenilacetofenona; L.D.: Limite de deteco.

Tabela 5. Sensores piezoeltricos baseados em MIP descritos na literatura

Estratgia de acoplamento ao transdutor Eletropolimerizao in situ de o-fenilenodiamina sobre eletrodo de Pt pertencente uma QCM Filmes preparados sobre a superfcie de um dos eletrodos de Au da QCM, pela adio de 5 L da soluo de polimerizao de MMA, EDMA e V-65 Filmes preparados pela adio de de 5 L da soluo de Interao Analito/MIP polimerizao de MMA, EDMA e V-65, sobre um dos eletrodos de Au da QCM previamente cobertos com Nylon Filmes preparados pela adio da mistura polimrica superfcie de uma QCM Membranas obtidas pela tcnica de precipitao pela inverso da fase e fixadas mecanicamente em uma QCM Eletropolimerizao de acrilamida e cido m-acrilamidafenilbornico, sobre a superfceo de ouro de uma QCM Eletropolimerizao de acrilamida e metacrilato de sdio, sobre a superfcie de Au de uma QCM Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito Tempo de resposta de 17 min. Tempo de vida til 1 ms Tempo de resposta > 30 min. LD. 200 g L-1. Pouco seletivo. Aplicao em amostras de Phormidium tenue Limite de deteco (LD) 10 g L-1 Monitoramento da degradao de leo de mquinas automotivas Tempo de resposta de 15 min. Pouca seletividade Boa seletividade. Tempo de resposta entre 10 e 12 min. Pouco sensveis Extrao do template, Altamente seletivo. Tempos de incubao em soluo do resposta de 15 min herbicida, troca de meio, seca em fluxo de Ar e medida de ressonncia realizada em Ar Extrao do template e medida direta aps adio do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Tempo de resposta de 25 min. LD. 0,35 nmol L-1. Anlise de gua de torneira Baixa repetibilidade nas medidas (pouca estabilidade). Boa repetibilidade na construo dos sensores. Altamente sensvel Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Limite de deteco na faixa de ppm. Tempo de resposta 5 min. Resposta reversvel Respostas reversveis. Avaliao da qualidade e grau de torrefao de amostras de caf Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref. 65

Analito

Template

Vol. 28, No. 6

Glicose

Glicose

2-metil-isoborneol (MIB) e geosmin

MIB

56

MIB e geosmin

MIB

57

Misturas de leos automotivos

leos frescos e leos usados

27

Cafena

Cafena

64

Nucleotdeos: AMP, Os respectivos GMP, CMP e UMP nucleotdeos

94

Herbicidas a base de triazinas

Derivados de triazina

54

Polmeros Biomimticos em Qumica Analtica

Microsistina-LR

Microsistina-LR

Ocluso de partculas de MIP em PVC. Os MIPs foram obtidos pela polimerizao de AMPSA, UAEE, EDMA e AIBN Ocluso de partculas de MIP em PVC. Os MIPs foram obtidos pela polimerizao de AMPSA, MAA, EDMA e AIBN

Interao Analito/MIP

99

Nanodrol

ster de 4-bifenilcarbonato de nanodrol

Interao Analito/MIP

37

Hidrocarbonetos aromticos policclicos (PAH)

Naftaleno

Filmes preparados sobre os dispositivos piezoeltricos, atravs de spin-coating da mistura de polimerizao contendo bisfenol A, p,p-di-isocianodifenilmetano e floroglucinol Filmes preparados sobre a superfcie da QCM, pela adio da soluo de polimerizao de MAA, divinil-benzeno e AIBN

100

Derivados de xantina (xantina, cafena e teofilina), e extratos de caf

Cafena ou o extrato de caf adequado

100

1097

Template: molcula molde; MAA: cido meta-acrlico; EDMA: etilenoglicol dimetacrilato ; V-65: 2,2-azo bis-(2,4-dimetil)valeronitrila; AMP: adenosina 5-monofosfato; GMP: guanosina 5-monofosfato; CMP: citosina 5-monofosfato; UMP: Uridina 5-monofosfato; L.D.: Limite de deteco.

1098

Tabela 5. Continuao.
Estratgia de acoplamento ao transdutor Membranas obtidas pela tcnica da estampa (stamping procedure) usando uma mistura de bisfenol A, p,p-di-isocianodifenilmetano e floroglucinol Ocluso em poli-isobutileno de partculas de MIP obtidas pelo mtodo bulk e na forma de microprolas. Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Tempo de resposta 5 a 12 s Altamente reversveis Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Resposta reversvel. Tempo de resposta de 40 min. Altamente seletivo para saccharomices cerevisiae 100 Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref.

Analito

Template

Fermentos e bactrias liofilizadas

Saccharomyces cerevisiae (SC)

Vapores de Hidroquinona e fenol compostos orgnicos: tolueno, benzeno, tricloroetileno, tetracloreto de carbono e heptano Eletropolimerizao de N,N-metileno-bis-acrilamida no eletrodo de Au da QCM. Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao) Extrao do template e medida direta aps adio do analito

41

L-histidina e D-histidina

L-histidina ou D-histidina

Altamente seletivo, inclusive, no reconhecendo o estreoismero (L ou D). Tempo de resposta de 10 min Tempo de resposta 22 min. Boa seletividade Tempo de resposta 3 h

101

Sorbitol

Sorbitol

Eletropolimerizao de o-fenilenodiamina no eletrodo de ouro de uma QCM. Membranas obtidas pela tcnica da estampa (stamping procedure) usando uma mistura de polimerizao de bisfenol A, p,p-di-isocianodifenilmetano e tri-isocianato. Filmes preparados sobre os dispositivos piezoeltricos, atravs de spin-coating da mistura de polimerizao de EDMA, MAA e AIBN. Ocluso em PVC de microprolas de MIP obtidas pela polimerizao por precipitao. Filmes preparados sobre as respectivas QCM, atravs da tcnica de spin-coating Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP Interao Analito/MIP

Interao Analito/MIP

102

Vrus do tabaco, TMV (tobacco mosaic viruses)

TMV

103

Tarley et al.

Vrus do tabaco, TMV (tobacco mosaic viruses)

TMV

Deteco qualitativa de TMV em folhas infetadas Tempo de resposta 12 min. Altamente seletivo Arranjo de sensores para aplicao em monitoramento on-line de processos de adubagem qumica

103

Eritromicina

Eritromicina

42

Componentes de uma adubagem qumica: gua, 1-propanol, etilacetato e limoneno Eletropolimerizao de m-aminofenol em um dos eletrodos de ouro da QCM Ocluso em PVC de partculas de MIP obtidas pelo mtodo bulk pela polimerizao de MAA, EGDMA e AIBN

gua, 1-propanol, etilacetato e limoneno

104

Uracila de 5-fluoro- Tegafur 1-(tetrahidro-2-furil) (Tegafur)

Interao Analito/MIP

Extrao do template e medida direta aps adio do analito Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito (incubao)

Tempo de resposta 7 min. Boa seletividade Potencial aplicao em amostras de soro e urina Tempo de resposta 30 min

105

Nicotina

Nicotina

106

Hidrocarbonetos aromticos policclicos (PAH)

Antraceno, benzoFilmes preparados sobre dispositivos piezoeltricos, antraceno, criseno, pireno atravs da adio de um pequeno volume da mistura de ou benzo-perileno polimerizao contendo bisfenol A, p,p-di-isocianatodifenilmetano e floroglucinol

50

Quim. Nova

Template: molcula molde; AMPSA: cido 2-acrilamido-2-metil-1-propanossulfnico; UAEE: ster etlico do cido urocnico; EDMA: etilenoglicol dimetacrilato; AIBN: 2,2-azo (bis)-2-isobutironitrila; MAA; cido meta-acrlico: SAW: surface acoustic wave; L.D.: Limite de deteco.

Tabela 6. Sensores pticos baseados em MIP descritos na literatura

Tipo de transduo ao transdutor ptica (fluorescente) entre o feixe de fibras pticas e uma rede de nylon relao ao D(-) ptica (fluorescente) planas de quartzo, atravs de adio da mistura de polimerizao contendo bisfenol A, p,p-di-isocianatodifenilmetano e floroglucinol. ptica (luminescncia) contendo estireno, divinilbenzeno e AIBN. do analito ptica na soluo de polimerizao complexo Eu-PMP Filmes preparados pela imerso da fibra Luminescncia do Extrao do template e medida direta aps adio Limite de deteco 7 ppt (partes por trilho). Tempo de resposta de 30 min 49 do analito do analito medida direta aps adio Filmes preparados sobre guias de onda Fluorescncia nativa Extrao do template e Altamente seletivos 50 fluorescente do analito marcado marcado com reagente medida direta aps adio Ocluso de partculas de MIP Fluorescncia do analito Extrao do template e O sensor apresenta estreoespecificidade para reconhecimento do ismero L(-) em 85 Estratgia de acoplamento Resposta analtica Protocolo empregado Caractersticas ou aplicaes Ref.

Vol. 28, No. 6

Analito

Template

L-fenilalanina

Dansil-L-fenilalanina

Hidrocarbonetos

Antraceno, benzoantra-

aromticos

ceno, criseno, pireno,

policclicos (PAH)

perileno ou

benzo-perileno

Produtos de

Complexo Eu-PMP (1:1)

hidrlise do Soman

(arma qumica):

Pinacolil-metilfos-

fonato (PMP) ptica (luminescncia) contendo estireno, divinilbenzeno e AIBN. (Pesticida) ptica na soluo de polimerizao complexo Eu-Inseticida Filmes preparados pela imerso da fibra Luminescncia do Extrao do template e medida direta aps adio do analito Tempo de resposta de 15 min. Resposta reversvel. Limite de deteco 10 ng L-1 52

Inseticidas e

Complexo (1:1):

pesticidas

Eu-Inseticida ou

organofosforados

Eu-Pesticida

e organo-

tiofosforados ptica (fluorescente) planas de quartzo, atravs de adio da mistura de polimerizao contendo bisfenol A, p,p-di-isocianatodifenilmetano e floroglucinol. ptica (quimiluminescente) Capilares de vidro miodificados com 3-metacriloxipropil-trimetoxisilano e preenchidos com soluo de polimerizao contendo trimetacrilato de trimetilpropano, 4-vinilpiridina e AIBN. ptica (interferometria) Filmes preparados sobre guias de ondas planas de vidro, atravs da adio da mistura de polimerizao.contendo etileno-dimetacrilato, dietil-4-vinilbenzamidina e AIBN. Interao Analito/MIP Extrao do template e medida direta aps adio do analito Arranjo de sensores. Tempo de resposta 30 min 108 Chemiluminiscencia do 2,4-D marcado com peroxidase Extrao do template e medida direta aps adio do analito Altamente sensvel. Faixa de resposta entre 22,5 pmol L-1 e 450 nmol L-1 107 Filmes preparados sobre guias de onda Fluorescncia nativa do analito Extrao do template e medida direta aps adio do analito Altamente seletivos e sensveis 100

Hidrocarbonetos

Mistura de PAHs com 2

Polmeros Biomimticos em Qumica Analtica

aromticos

e 4 anis: Naftaleno e

policclicos

criseno, Naftaleno e

(PAH)

pireno

2,4-D (herbicida)

2,4-D

cidos (2R,3R)- e

cidos (2R,3R)-(-)-di-o-

(2S,3S) di-o-

benzoil-tartrico; ou

benzoil-tartrico

(2S,3S)-(+)-di-o-benzoil-

tartrico

1099

Template: molcula molde; 2,4-D: cido 2,4-diclorofenoxiactico; AIBN: 2,2-azo (bis)-2-isobutironitrila; THF: tetraidrofurano; DPP: 2,2-dimetoxi-2-fenilacetofenona.

1100

Tarley et al.

Quim. Nova

a configurao mais adequada e promissora para o desenvolvimento de sensores, evitando protocolos demorados para realizao dos experimentos. Contudo, sensores pticos baseados em mudanas de cor tambm podero ser construdos, visto que alguns trabalhos relatados na literatura, j reportaram a preparao de MIP que podem ser usados com esta finalidade91-93. CONCLUSES E TENDNCIAS Este trabalho descreve os avanos recentes no emprego da tecnologia de polmeros com impresso molecular (MIP) na construo de sensores qumicos. Esta tecnologia apresenta-se como uma ferramenta promissora para o desenvolvimento de sensores qumicos, principalmente no que diz respeito seletividade e estabilidade. Muitos sensores tm sido descritos, usando diferentes estratgias para imobilizao dos MIP na superfcie dos transdutores, utilizando diversos fenmenos fsico-qumicos para obteno do sinal analtico e empregando os mais diversos protocolos para realizao das medidas. Sensores eletroqumicos so mais comuns, contudo os piezeltricos permitem a determinao direta do analito evitando o emprego de protocolos muito elaborados para obteno do sinal analtico. Por outro lado, sensores pticos ainda so escassos, e a maioria deles baseados em fluorescncia, porm muitas pesquisas tm sido direcionadas com a finalidade de preparar filmes de MIP com propriedades pticas, incluindo simples mudanas de cor, os quais podem ser empregados na construo de optrodos, acoplando-os mecanicamente na superfcie das fibras pticas. Apesar das caractersticas promissoras que estes sensores apresentam, algumas delas ainda devero ser melhoradas para que os mesmos passem a adquirir algumas caractersticas desejveis dos biossensores. Muitos destes sensores apresentam respostas no lineares, mesmo quando usados com escala logartmica, tempos de resposta extremamente longos ou, ainda, protocolos de medidas bastante elaborados limitando sua popularidade. Pode-se concluir que a tecnologia de polmeros com impresso molecular oferece uma nova ferramenta na procura de sensores qumicos, sem dvida nenhuma, mais estveis, robustos e seletivos. Porm, para serem aplicados em amostras reais, seria desejvel desenvolver sensores com tempos de resposta curtos e com protocolos de medidas simples. Atingindo-se estes propsitos, a tecnologia MIP aliada de sensores qumicos poder, de fato, oferecer a to esperada metodologia simples, de baixo custo e confivel para deteco de muitos analitos em amostras reais, que possa ser produzida em larga escala. AGRADECIMENTOS Ao CNPq e FAPESP pelo auxlio financeiro. C.R.T. Tarley agradece FAPESP pela concesso da bolsa de Ps-Doutorado (Processo no 04/00615-6). REFERNCIAS
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Verli, H.; Barreiro, E. J.; Quim. Nova 2005, 28, 95. Haupt, K.; Mosbach, K.; Biochem. Soc. Trans. 1999, 27, 344. Piletsky, S.; Alcock, S.; Turner A. P. F.; Trends Biotechnol. 2001, 19, 9. Bruggemann, O.; Haupt, K.; Ye, L.; Yilmaz, E.; Mosbach, K.; J. Chromatogr., A 2000, 889, 15. Ye, L.; Corack, P. A. G.; Mosbach, K.; Anal. Chim. Acta 2001, 435, 187. Ye, L.; Mosbach, K.; React. Funct. Polym. 2001, 48, 149. Matsui, J.; Okada, M.; Tsuruoka, M.; Takeuchi, T.; Anal. Commun. 1997, 34, 85. Ye, L.; Corack, P. A. G.; Mosbach, K.; Anal. Commun. 1998, 36, 35. Haginaka, J.; Sanbe, H.; J. Chromatogr., A 2001, 913, 141. Quaglia, M.; De Lorenzi, E.; Sulitzky, C.; Massolini, G.; Sellergren, B.; Analyst 2001, 126, 1495.

11. Nilsson, S.; Schweitz, L.; Andersson, L. I.; Electrophoresis 1997, 18, 884. 12. Bruggemann, O.; Freitag, R.; Whitcombe, M. J.; Vulfson, E. N.; J. Chromatogr., A 1997, 781, 43. 13. Matsui, J.; Kato, T.; Takeuchi, T.; Suzuki, M.; Yokoyama, K.; Tamiya, E.; Karube, I.; Anal. Chem. 1993, 65, 2223. 14. Matsui, J.; Miyoshi Y.; Matsui, R.; Takeuchi, T.; Anal. Sci. 1995, 11, 1017. 15. Koster, E. H. M.; Crescenzi, C.; Den Hoedt, W.; Ensing, K.; De Jong, G. J.; Anal. Chem. 2001, 73, 3140. 16. Merkoi, A.; Alegret, S.; Trends Anal. Chem. 2002, 21, 717. 17. Ansell, R.; Kriz, D.; Mosbach, K.; Curr. Opin. Biotechnol. 1996, 7, 89. 18. Lavignac, N.; Allender, C.; Brain, K.; Anal. Chim. Acta 2004, 510, 139. 19. Haupt, K.; Analyst 2001, 126, 747. 20. Andersson, L. I.; J. Chromatogr., B: Biomed. Sci. Appl. 2000, 745, 3. 21. Haupt, K.; Mosbach, K.; Chem. Rev. 2000, 100, 2495. 22. Yano, K.; Karube, I.; Trends Anal. Chem. 1999, 18, 199. 23. Dickert, F. L.; Hayden, O.; Fresenius J. Anal. Chem. 1999, 364, 506. 24. Al-Kindy, S.; Bada, R.; Surez-Rodrguez, J. L.; Daz-Garca, M. E.; Crit. Rev. Anal. Chem. 2000, 30, 291. 25. Ramstrom, O.; Skudar, K.; Haines, J.; Patel, P.; Bruggemann, O.; J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 2105. 26. Kroger, S.; Piletsky, S.; Turner, A. P. F.; Mar. Pollut. Bull. 2002, 45, 24. 27. Dickert, F. L.; Forth, P.; Lieberzeit, P. A.; Fresenius J. Anal. Chem. 2000, 366, 802. 28. Reynolds, J. G.; Hart, B. R.; JOM 2004, 56, 36. 29. Alvarez-Lorenzo, C.; Concheiro, A.; J. Chromatogr., B: Biomed. Sci. Appl. 2004, 804, 231. 30. Tarley, C. R. T.; Sotomayor, M. D. P. T.; Kubota, L. T.; Quim. Nova, no prelo. 31. De La Guardia, M.; Microchim. Acta 1995, 120, 243. 32. Wang, J.; J. Pharm. Biomed. Anal. 1999, 19, 47. 33. Andersson, L. I.; Mandenius, C. F.; Mosbach, K.; Tetrahedron Lett. 1988, 29, 5437. 34. Piletsky, S. A.; Parhometz, Y. P.; Lavryk, N. V.; Panasyuk, T. L.; Elskaya, A. V.; Sens. Actuators, B 1994, 18-19, 629. 35. Hedborg, E.; Winquist, F.; Lundstrom, I.; Andersson, L. I.; Mosbach, K.; Sens. Actuators, A 1993, 36-38, 796. 36. Kriz, D.; Mosbach, K.; Anal. Chim. Acta 1995, 300, 71. 37. Percival, C. J.; Stanley, S.; Braithwaite, A.; Newton, M. I.; McHale, G.; Analyst 2002, 127, 1024. 38. Liang, C.; Peng, H.; Bao, X.; Nie, L.; Yao, S.; Analyst 1999, 124, 1781. 39. Kriz, D.; Kempe, M.; Mosbach, K.; Sens. Actuators, B 1996, 33, 178. 40. Kroger, S.; Turner, A. P. F.; Mosbach K.; Haupt, K.; Anal. Chem. 1999, 71, 3698. 41. Fu, Y.; Finklea, H. O.; Anal. Chem. 2003, 75, 5387. 42. Zhang, Z.; Liu, Y.; Long, Y.; Nie, L.; Yao, S.; Anal. Sci. 2004, 20, 291. 43. Pizzariello, A.; Stredansky, M.; Stredanska, S.; Miertus, S.; Sens. Actuators, B 2001, 76, 286. 44. Yamasaki, T.; Ohta, S.; Yanai, Y.; Sode, K.; Anal. Lett. 2003, 36, 75. 45. Yamasaki, T.; Meng, Z.; Mosbach, K.; Sode, K.; Electrochemistry 2001, 69, 969. 46. Blanco-Lpez, M. C.; Lobo-Castan, M. J.; Miranda-Ordieres, A. J.; Tun-Blanco, P.; Trends Anal. Chem. 2004, 23, 36. 47. Hedborg, E.; Winquist, F.; Lundstrom, I.; Andersson, L. I.; Mosbach, K.; Sens. Actuators, A 1993, 37-38, 796. 48. Piletsky, S. A.; Piletskaya, E. V.; Panasyuk, T. L.; Elskaya, A. V.; Levi, R.; Karube, I.; Wulff, G.; Macromolecules 1998, 31, 2137. 49. Jenkins, A. L.; Uy, O. M.; Murray, G. M.; Anal. Chem. 1999, 71, 373. 50. Dickert, F. L.; Tortschanoff, M.; Bulst, W. E.; Fischerauer, G.; Anal. Chem. 1999, 71, 4559. 51. Panasyuk-Delaney, T.; Mirsky, V. M.; Wolfbeis, O. S.; Electroanalysis 2002, 14, 221. 52. Jenkins, A. L.; Yin, R.; Jensen, J. L.; Analyst 2001, 126, 798. 53. Panasyuk-Delaney, T.; Mirsky, V. M.; Ulbricht, M.; Wolfbeis, O. S.; Anal. Chim. Acta 2001, 435, 157. 54. Pogorelova, S. P.; Bourenko, T.; Kharitonov, A. B.; Willner, I.; Analyst 2002, 127, 1484. 55. Blanco-Lpez, M. C.; Lobo-Castan, M. J.; Miranda-Ordieres, A. J.; Tun-Blanco, P.; Biosens. Bioelectron. 2003, 18, 353. 56. Ji, H. S.; McNiven, S.; Ikebukuro, K.; Karube, I.; Anal. Chim. Acta 1999, 390, 93. 57. Ji, H. S.; McNiven, S.; Lee, K. H.; Saito, T.; Ikebukuro, K.; Karube, I.; Biosens. Bioelectron. 2000, 15, 403. 58. Yoshimi, Y.; Ohdaira, R.; Iiyama, C.; Sakai, K.; Sens. Actuators, B 2001, 73, 49. 59. Wang, H. Y.; Kobayashi, T.; Fujii, N.; Lagmuir 1996, 12, 4850. 60. Wang, H. Y.; Kobayashi, T.; Fukaya, T.; Fujii, N.; Lagmuir 1997, 13, 5396. 61. Kobayashi, T.; Wang, H. Y.; Fujii, N.; Anal. Chim. Acta 1998, 365, 81. 62. Yoshikawa, M.; Izumi, J.; Ooi, T.; Kitao, T.; Guiver, M. D.; Robertson, G. P.; Polym. Bull. 1998, 40, 517.

Vol. 28, No. 6

Polmeros Biomimticos em Qumica Analtica

1101

63. Gutierrez-Fernandez, S.; Lobo-Castan, M. J.; Miranda-Ordieres, A. J.; Tun-Blanco, P.; Carriedo, G. A.; Graca-Alonso, F. J.; Fidalgo, J. I.; Electroanalysis 2001, 13, 1399. 64. Kobayashi, T.; Murawaki, Y.; Ressy, P. S.; Abe, M.; Fujii, N.; Anal. Chim. Acta 2001, 435, 141. 65. Malitesta, C.; Losito, I.; Zambonin, P. G.; Anal. Chem. 1999, 71, 1366. 66. Panasyuk, T. L.; Mirsky, V. M.; Piletsky, S. A.; Wolfbeis, O. S.; Anal. Chem. 1999, 71, 4609. 67. Weetall, H. H.; Rogers, K. R.; Talanta 2004, 62, 329. 68. Piletsky, S. A.; Turner, A. P. F.; Electroanalysis 2002, 14, 317. 69. Hutchins, R. S.; Bachas, L. G.; Anal. Chem. 1995, 67, 1654. 70. Vidal, J. C.; Garca-Ruiz, E.; Castillo, J. R.; Microchim. Acta 2003, 143, 93. 71. Spurlock, L. D.; Jaramillo, A.; Praserthdam, A.; Lewis, J.; Brajter-Toth, A.; Anal. Chim. Acta 1996, 336, 37. 72. Deore, B.; Chen, Z.; Nagaoka, T.; Anal. Sci. 1999, 15, 827. 73. Piletsky, S. A.; Piletskaya, E. V.; Sergeyeva, T. A.; Panasyuk, T. L.; Sens. Actuators, B 1999, 60, 216. 74. Mirsky, V. M.; Hirsch, T.; Piletsky, S. A.; Wolfbeis, O.; Angew. Chem., Int. Ed. 1999, 38, 1108. 75. Mirsky, V. M.; Trends Anal. Chem. 2002, 21, 439. 76. Makote, R.; Collinson, M.; Chem. Mater. 1998, 10, 2440. 77. Lahav, M.; Kharitonov, A. B.; Katz, O.; Kunitake, T.; Willner, I.; Anal. Chem. 2001, 73, 720. 78. Zayats, M.; Lahav, M.; Kharotonov, A. B.; Willner, I.; Tetrahedron 2002, 58, 815. 79. Lahav, M.; Kharitonov, A. B.; Willner, I.; Chem. Eur. J. 2001, 7, 3992. 80. Haupt, K.; Noworyta, K.; Kutner, W.; Anal. Commun. 1999, 36, 391. 81. Dickert, F. L.; Hayden, O.; Anal. Chem. 2002, 74, 1302. 82. Sergeyeva, T. A.; Piletsky, S. A.; Brovko, A. A.; Slinchenko, E. A.; Sergeeva, L. M.; Elskaya, A. V.; Anal. Chim. Acta 1999, 392, 105. 83. Suedee, R.; Srichana, T.; Sangpagai, C.; Tunthana, C.; Vanichapichat, P.; Anal. Chim. Acta 2004, 504, 89. 84. Cheng, Z.; Wang, E.; Yang, X.; Biosens. Bioelectron. 2001, 16, 179. 85. Kriz, D.; Ramstrom, O.; Svensson, A.; Mosbach, K.; Anal. Chem. 1995, 67, 2142.

86. Piletsky, S. A.; Terpetschnik, E.; Andersson, H. S.; Nicholls, L. A.; Wolfbeis, O. S.; Fresenius J. Anal. Chem. 1999, 364, 512. 87. Haupt, K.; Mayes, A. G.; Mosbach, K.; Anal. Chem. 1998, 70, 3936. 88. Haupt, K.; Chem. Commun. 2003, 2, 171. 89. Ye, L.; Haupt, K.; Anal. Bioanal. Chem. 2004, 378, 1887. 90. Jakusch, M.; Janotta, M.; Mizaikoff, B.; Mosbach, K.; Haupt, K.; Anal. Chem. 1999, 71, 4786. 91. Sasaki, D. Y.; Alam, T. M.; Chem. Mater. 2000, 12, 1400. 92. Syu, M. J.; Deng, J. H.; Nian, Y. M.; Anal. Chim. Acta 2004, 504, 167. 93. Mohr, G. J.; Citterio, D.; Demuth, C.; Fehlmann, M.; Luzi, J.; Lohse, C.; Moradian, A.; Nezel, T.; Rothmaier, M.; Spichiger, U. E.; J. Mater. Chem. 1999, 9, 2259. 94. Sallacan, N.; Zayats, M.; Bourenko, T.; Kharitonov, A. V.; Wilner, I.; Anal. Chem. 2002, 74, 702. 95. Morita, M.; Iwasaki, Y.; Horiuchi, T.; Niwa, O.; Denki Kagaku 1996, 64, 1239. 96. Lahav, M.; Katz, E.; Willner, I.; Langmuir 2001, 17, 7387. 97. Shoji, R.; Takeushi, T.; Kubo, I.; Anal. Chem. 2003, 75, 4882. 98. Prasad, B. B.; Arora, B.; Electroanalysis 2003, 15, 108. 99. Chianella, I.; Piletsky, S. A.; Tothill, I. E.; Chen, B.; Turner, A. P. F.; Biosens. Bioelectron. 2003, 18, 119. 100. Deickert, F. L.; Hayden, O.; Halikias, K. P.; Analyst 2001, 126, 766. 101. Liao, H.; Zhang, Z.; Nie, L.; Yao, S.; J. Biochem. Biophys. Methods 2004, 59, 75. 102. Feng, L.; Liu, Y.; Tan, Y.; Hu, J.; Biosens. Bioelectron. 2004, 19, 1513. 103. Deickert, F. L.; Hayden, O.; Bindeus, R.; Mann, K. J.; Blaas, D.; Waigmann, E.; Anal. Bioanal. Chem. 2004, 378, 1929. 104. Deickert, F. L.; Lieberzeit, P. A.; Achatz, P.; Palfinger, C.; Fassnauer, M.; Schmid, E.; Werther, W.; Horner, G.; Analyst 2004, 129, 432. 105. Liao, H.; Zhang, Z.; Li, H.; Nie, L.; Yao, S.; Electrochim. Acta 2004, 49, 4101. 106. Tan, Y.; Yin, J.; Liang, C.; Peng, H.; Nie, L.; Yao, S.; Bioelectrochemistry 2001, 53, 141. 107. Surugiu, I.; Svitel, J.; Ye, L.; Haupt, K.; Danielsson, B.; Anal. Chem. 2001, 73, 4388. 108. Nopper, D.; Lammershop, O.; Wulff, G.; Gauglitz, G.; Anal. Bioanal. Chem. 2003, 377, 608.