Resumo Enzimas imobilizadas so amplamente utilizados para variedade de aplicaes.

Com base no tipo de aplicao, o mtodo de imobilizao e material de suporte pode ser seleccionado. O enzimas imobilizadas podem ser separados a partir do mistura reaccional e reutilizada e tambm imobilizada, a fim de evitar que a enzima de ser exposto a condies severas, de alta agentes de temperatura, surfactantes, e oxidantes etc. as enzimas imobilizadas so tambm amplamente utilizado na indstria de alimentos, indstria farmacutica,biorremediao, indstria de detergentes, txtil indstria, etc. Imobilizao de enzimas melhora a estabilidade operacional e tambm devido ao aumento da carga de enzima que provoca a difuso controlada. Vrias centenas de enzimas esto imobilizados e utilizados para vrias indstrias de grande escala. Tcnica de imobilizao reduz os custos de tratamento de efluentes e esta documento analisa os mtodos e aplicaes da enzimas imobilizadas. Introduo Uma enzima derivada de uma cultura de clulas ou organismo que catalisa reao metablica nos organismos vivos e / ou converses de substrato em diversas reaes qumicas. O enzimas so o potencial catalisador trabalha em leve temperatura, presso, o pH, a especificidade do substrato sob condies de reaco apropriadas e para a produo de produtos desejados, sem quaisquer produtos intermdios contaminaes para estas enzimas so utilizadas em vantagens variedade de aplicaes, tais como cosmticos, indstria de papel, indstria txtil, indstria de alimentos, indstria farmacutica, lavanderia e em detergentes etc [1-5]. a biotecnolgica Mtodo de produo de enzima caro, da novo mtodos tm sido implementados para reduzir o custo. O enzimas tm vrias outras limitaes, como a baixa estabilidade, altamente sensvel s condies do processo e estes problemas podem ser ultrapassados pela imobilizao tcnicas [6-8]. Enzimas imobilizadas so utilizadas desde 1916, quando Nelson e Griffin descoberto que invertase quando absorvido em carvo tem a capacidade de hidrolisar a sacarose [9]. A possibilidade de enzima imobilizada para a sua reutilizao e estabilidade foi identificado por Grubhofer e Schelth, relatou o covalente a imobilizao de vrias enzimas [10]. O ensaio repetido pode ser feito com o imobilizada enzima que reduz o custo de ensaio e a reutilizao de processo enzima tambm muito simples e pode ser alcanado atravs da tcnica de ultrafiltrao. No dia anterior o imobilizao de enzimas so realizadas usando mtodo biotecnolgico, mas agora devido ao rpido crescimento da nanotecnologia, a interao sinrgica de dois tecnologias, o desenvolvimento de enzimas imobilizadas em vrios nanomateriais utilizando mtodos convencionais tais como ligao covalente e adsoro [36] (Tabela1). B M Brena e F Batista tm enzima classificada imobilizao imobilizao de enzimas como Irreversvel e mtodos de imobilizao de enzimas reversveis. Imobilizao de enzima irreversvel inclui covalente vinculativo e Armadilha. enzima reversvel imobilizao inclui adsoro, ligao inica, ligao de afinidade e ligao de metal [2]. imobilizao de enzima pelo processo enzimtico foi recentemente identificado pelos pesquisadores, a fim de evitar a imobilizao dura.

Enzima Mtodos de imobilizao Ligao covalente: A ligao covalente um mtodo convencional para imobilizao, que pode ser conseguido por ligao directa com a enzima e o material atravs da ligao covalente ligao [37]. A ligao covalente forte e estvel e o material de suporte de enzimas inclui poliacrilamida, vidro poroso, de agarose e slica porosa [38]. Mtodo covalente de imobilizao usada principalmente quando um processo de reaco no necessita de enzimas na produto, este o critrio para escolher covalente mtodo de imobilizao. Esta ligao covalente do enzima com o material de apoio envolve dois principais etapas, tais como, a ativao do material de suporte por a adio do composto reactivo e o segundo uma a modificao da estrutura do polmero a activar a matriz (Figura 1). O passo de activao produz o grupo electrof em o material de suporte, de modo que os pares de material de apoio / reage com os nuclefilos fortes sobre as protenas [2]. Por exemplo, o glutaraldedo o mtodo de activao, em Nesta reaco o grupo de amina reage com o activada matriz [39]. A ligao covalente normalmente formado entre o grupo funcional na matriz de suporte e superfcie da enzima que contm o aminocido resduos. Os resduos de aminocidos envolvidos na ligao covalente so o grupo sulfidrilo de cistena, grupo hidroxilo de serina e treonina [40, 41]. O ligao entre a enzima e o material de suporte pode ser conseguida quer atravs de ligao directa ou atravs o brao espaador. A potencialidade do uso do brao espaador que ele proporciona o maior grau de mobilidade para as enzimas, portanto, as enzimas apresentam maior actividade quando comparada com a ligao directa. Armadilha: As enzimas so ocludo no sinttico ou natural redes polimricas, que uma membrana permevel que permite que os substratos e os produtos a passar, mas mantm a enzima dentro da rede, o aprisionamento pode ser conseguida pelo gel, que retm fibras e microencapsulao [42]. A vantagem de aprisionamento de imobilizao de enzimas rpido, barato e leve condies necessrias para o processo de reao. O desvantagem que a limitao na transferncia de massa. O matriz de suporte protege as enzimas microbianas contaminao , protenas e enzimas da micro ambiente [43] . Mtodo de microencapsulao que o molculas de enzima so encapsulados dentro esfrica membranas semipermeveis com uma controlada selectiva permeabilidade [ 44 ] . Este mtodo oferece a grande rea de superfcie entre o material polimrico e o enzima . A desvantagem deste mtodo a inactivao de enzima durante o encapsulamento [ 42 ] . Adsoro : Este um mtodo simples de preparar um imobilizado enzimas e os materiais utilizados para a adsoro est carvo ativado , resinas de troca Alumina , Ion , este mtodo barato e fcil de usar e desvantagem uma fora de ligao fraca entre o transportador eo

enzima [ 45 ] . Este mtodo vem sob transportadora ligada imobilizao e o processo de imobilizao reversvel . A adsoro o mais fcil e mais antiga tcnicas de imobilizao [ 46 ] . A interao entre a enzima e a superfcie da matriz por meio fraco foras de ligao sal, ligaes de hidrognio , hidrofbica ligaes, ligaes inicas e foras de van der Waals . com base em as acusaes da matriz e os arranjos de protena a fortemente ligados , mas no distorcida enzima ser formado [47] . A vantagem de adsoro da enzima passo de activao mnimo e, como resultado do mnimo activao , no reagentes necessrios . a maneira barata e fcil de imobilizao .

Ionic Encadernao: A ligao entre a enzima envolvida e o material de apoio ligaes de sal. A natureza deste no imobilizao covalente o processo vai ser revertido pela mudando a polaridade da temperatura e da fora inica condies. Este princpio semelhante protena-ligando interaces princpios utilizados em cromatografia [48].

Afinidade de ligao : A imobilizao da enzima ligada matriz atravs de interaces especficas . Os dois mtodos esto sendo seguidos na imobilizao de afinidade. O primeiro mtodo a activao do material de suporte que contm o ligando de afinidade acoplada , de modo a que a enzima ir ser adicionada . A vantagem deste mtodo a enzima no est exposto a todas as condies qumicas severas . O segundo mtodo , a enzima modificada a uma outra molcula que tem a capacidade de se ligar no sentido de uma matriz [ 49 ] .

Imobilizao do metal ligado : Em metlica ligada imobilizao de enzimas , os sais de metal so precipitados sobre a superfcie dos suportes e que tem o potencial para se ligarem com os grupos nuclefilos sobre a matriz . A precipitao do io meatl sobre o transportador pode ser conseguido por aquecimento . Este mtodo simples e a actividade das enzimas imobilizadas relativamente alta ( 30-80 % ) . O transportador e a enzima pode ser separada por diminuio do pH , portanto, um processo reversvel [ 64 ] . A matriz e a enzima pode ser regenerado , pelo processo .

APLICAES

Aplicao Biomdica :

Enzimas imobilizadas so utilizadas em medicina desde 1990 [ 50,51 ] , as enzimas imobilizadas so utilizadas para o diagnstico e tratamento de doenas no campo da medicina . A deficincia metablica inato pode ser superado mediante a substituio das enzimas encapsuladas (por exemplo , enzimas encapsuladas por eritrcitos ) em vez de metabolitos de resduos , o RBC actua como um veculo para as drogas de enzimas exgenas e as enzimas so biocompatvel na natureza , portanto, no h resposta imunolgica [ 52 ] . A encapsulao da enzima atravs da electroporao uma maneira mais fcil de imobilizao em campo biomdico e um processo reversvel para que a enzima pode ser regenerada [ 53 ] . As enzimas , quando combinado com os biomateriais que fornece sistemas biolgicos e funcionais . Os biomateriais so utilizados na aplicao de engenharia de tecidos para a reparao do defeito . A vantagem da imobilizao de enzimas em biomdico que as enzimas livres so consumidas pelas clulas e no activa para uma utilizao prolongada , por conseguinte, as enzimas imobilizadas permanece estvel , para estimular o crescimento e para reparar o defeito . O tratamento do cncer a entrega de enzimas para os sites oncognicos foram melhoradas com novos mtodos. As nanopartculas e nanoesferas so muitas vezes utilizados como transportadores de enzimas para a entrega de agentes teraputicos .

Aplicao indstria de alimentos: Na indstria alimentar, as enzimas purificadas so usadas, mas durante a purificao das enzimas desnaturar. Por isso, a tcnica de imobilizao faz com que as enzimas estveis. As enzimas imobilizadas so utilizadas para a produo de xaropes. Imobilizada betagalactosidase usado para a hidrlise da lactose em soro de leite para a produo de fermento de padeiro. A enzima ligada matriz de slica porosa, atravs de ligao covalente. Este mtodo no preferencialmente utilizado devido ao seu custo e a outra tcnica desenvolvida pela Valio, em 1980, a enzima galactosidase foi ligado a resina (grau alimentar), por meio de reticulao. Este mtodo foi utilizado para os diversos fins, tais como confeitos e sorvetes.

Produo de Biodiesel : Biodiesel steres monoalqulicos de cidos graxos de cadeia longa . O biodiesel produzido atravs de triglicridos ( leo vegetal , gordura animal ) , com a esterificao do lcool ( metanol , etanol ) , na presena do catalisador . A produo do catalisador uma desvantagem s exigncias de elevada energia , a recuperao do glicerol e do lado da reaco que possam afectar a poluio . Da a produo biolgica de combustveis lquidos com lipases hoje em dia tem uma grande considerao com uma melhoria rpida [55] . Lipase catalisa a reaco com menos exigncias de energia e as condies suaves necessrios . Mas a produo de lipase

de elevado custo , por conseguinte, a imobilizao da lipase que resulta no uso e estabilidade [ 56 , 57 ] repetido . A imobilizao da lipase inclui vrios mtodos de aprisionamento , o encapsulamento , formao de ligaes cruzadas , a adsoro e a ligao covalente . Mtodo de adsoro de imobilizao amplamente utilizado nos ltimos anos em relao a uma ligao covalente , e o aprisionamento de reticulao [ 58 ] . Na produo biolgica de biodiesel a metanol inactiva a lipase , portanto, o mtodo de imobilizao uma vantagem para a produo de biodiesel [ 59 ] . O baixo custo de lipase, candida sp como origem de uso industrial mais [60] . Os portadores nanoestruturados so com alta porosidade [61] , material natural de carvo ativado [62] , celite , zelita [63] . Os veculos para lipase imobilizao por ligao covalente de bagao de azeitona [64 ] , as resinas [65 ] , Espuma de poliuretano [66 ] , a quitosana [67 ] , slica [68 ] e magnticos nanoestruturas [69] , quando comparada com o material suporte natural quitosana usado para a ligao da enzima , a lipase imobilizada mantm a sua estabilidade durante 10 ciclos de leo de bagao , esterificao , mantendo 80 % de actividade residual.

Tratamento de guas residuais : O consumo crescente de novos corpos d'gua e gua so misturados com gua poluda resduos industriais e os tratamentos de guas residuais so necessrios no presente. As fontes de efluentes de corantes so a indstria txtil , indstria de papel , indstria de couro e os efluentes so ricos em corantes de corantes. Estes efluentes so ameaa para o meio ambiente e at mesmo em baixa concentrao , cancergeno. Hoje em dia, as enzimas so usadas para degradar os materiais da tintura . As enzimas utilizadas nos tratamentos de guas residuais so preoxidases , lacase , redutases azo . Estas enzimas , devido a condies adversas tais como temperaturas extremas , baixo ou alto de pH e fora inica elevada pode perder a sua actividade , para superar este problema de enzimas imobilizadas so utilizadas . As peroxidases de rbano so aprisionadas em esferas de alginato de clcio , este mtodo ainda em investigao escala de laboratrio [ 71 ] . A enzima lacase imobilizada tem a capacidade de degradar corantes corante anthracinoid , Lancet azul e vermelho Ponceau [ 72 ] . Adsoro mtodo amplamente utilizado devido sua regenerao fcil. Durante o mtodo de imobilizao covalente a mudana conformacional na enzima ocorre o que ir afectar a actividade da enzima [ 73 ] . Na nica enzima nanopartculas , a enzima protegida por uma substncia de espessura nanomtrica , uma vez que proporciona uma grande rea de superfcie . SEN tem a capacidade de manter a sua actividade durante as condies extremas . SEN tambm usado na remoo de metais pesados a partir de guas residuais [ 74 ] . Lipase tem a capacidade para hidrolisar o leo e gorduras de cidos gordos de cadeia longa e de glicerol . A lipase imobilizada de grande interesse para a hidrlise de leos e gorduras para o tratamento das guas residuais da indstria de alimentos. A desvantagem dos mtodos convencionais de tratamento a biodegradabilidade lenta , o leo e as gorduras so absorvidas na superfcie das lamas [ 75 ] . Os pesquisadores esto se concentrando agora em tratamento com lipase imobilizada . A lipase imobilizada sobre o sol-gel de alginato / clcio ,

com o tamanho de 82m , lipase imobilizada . Lipase imobilizada operado durante 100 dias em lamas contnua , sem qualquer problema , no produziu espuma no reactor.

Indstria Txtil : As enzimas derivadas de origem microbiana so de grande interesse na indstria txtil . As enzimas , tais como a celulase , amilase , liccase , pectinases , cutinases , etc, e estes so utilizados para vrias aplicaes txteis tais como lavagem , biopolishing , desengomagem , acabamento de denim , o tratamento de l , etc Entre estes enzimas celulase tem sido amplamente utilizada a partir do perodo de mais para at agora. As indstrias txteis agora virou-se para enzima processo em vez de usar produtos qumicos dura que afeta a poluio e causa danos aos tecidos [77] . O processamento de tecidos com enzimas requer temperaturas elevadas e um aumento de pH , as enzimas livres no capaz de suportar as condies extremas . Assim , a imobilizao de enzimas para este processo capaz de suportar, no extremo e capaz de mantm a sua actividade durante mais de 5-6 ciclos . Polimetil Methacrylateis ligado covalentemente com celulase . Neste mtodo, a nanopartcula sintetizado com celulase como ncleo da partcula [ 78-80 ] . Endoglucanase um componente de enzima celulase , endoglucanase microencapsulado com goma arbica um polmero natural, com a propriedade biodegradvel utilizado como uma matriz para encapsulamento de endoglucanase . A encapsulao de endoglucanase impedido de manter a sua actividade na presena de detergentes.

Indstria de Detergentes : A indstria de detergentes tambm emprega enzimas para remoo de manchas . As enzimas utilizadas em detergentes indstria so protease , que usado para remover as manchas de sangue , ovo, grama e suor humano . Amilase usado para remover as manchas de base de amido , como batatas , molhos, chocolate. Lipase usada para remover as manchas de leo e gorduras e tambm usado para remover as manchas em punhos e golas . A celulase utilizado para tecidos de algodo com base , a fim de melhorar o amolecimento , cor e brilho para remover as manchas de solo [ 82 , 83 ] . Hoje em dia, os agentes de limpeza Biotech so amplamente utilizados nas indstrias de detergentes . Quando comparado com os detergentes detergentes sintticos de base biolgica tem boa propriedade de limpeza [84] . Os detergentes base de enzimas podem ser utilizados em baixa quantidade quando comparados com o detergente sinttico , aumentou a biodegradabilidade , no afecta o ambiente funciona bem em baixa temperatura , e estas so as vantagens de enzimas na

indstria de detergentes . As enzimas imobilizadas so tambm utilizadas em enzimas imobilizadas . Proteases hidrolisar as protenas , e protease no pode ser utilizada para base de queratina de l e seda tecido que causam dano adverso para o vesturio . Assim, protease directamente no pode ser utilizada para peas de vesturio de l e da seda , protease perde a sua estabilidade na presena de agentes tensioactivos e de agentes oxidantes , por conseguinte, a protease imobilizada por ligao covalente com o Eudragit S - 100 utilizando acoplamento de carbodiimida [ 85 ] . A protease imobilizado tratado com l para 72h com 100U a 40oC a enzima livre foi degradada a l, mas a enzima imobilizada manteve 76% da resistncia trao de l [86] . Protease imobilizadas pelo mtodo de aprisionamento com gel polyacryamide , a enzima manteve a sua actividade durante cerca de 6 ciclos com tempo de incubao de 20 min a 55 C, para cada ciclo , por este mtodo de imobilizao , a actividade da protease mantida por cerca de 83 % da actividade inicial aps seis ciclos [ 87 ] . A imobilizao da lipase realizada de modo a evitar que a lipase a partir de aco e inibio da protease surfactante lipase est imobilizada na acrylamine prolas de vidro revestidas com zircnia com o tamanho de 55 nm . A actividade mxima foi encontrada para a lipase imobilizada com o pH de 6,5 e para enzima livre de 7,5.

Propriedades de Imobilizados : Enzimas A estabilidade das enzimas imobilizadas baseia-se na temperatura e no tempo. A actividade da enzima mantida ao longo de sries de ciclos . Devido imobilizao , as propriedades das enzimas ser alterada : tal como a actividade cataltica em relao matriz de suporte . A alterao nas propriedades da enzima na enzima imobilizada devido enzima e do substrato reage no microambiente Tudo o que diferente a partir da reaco do substrato enzimtico no ambiente de soluo a granel . O aussi troca devido alterao na conformao tridimensional da protena Quando ligado com a matriz de suporte . Estes troca conformacional so em menor escala e tese de cmbio ocorrem nos sistemas enzimticos limitados [89]. Imobilizao de enzimas melhora a estabilidade e aussi operacional devido ao aumento da carga de enzima Tudo o que provoca a difuso controlada . A estabilizao , como resultado de , o nmero de ligaes que se formam entre a enzima e o substrato da matriz . Quando a enzima imobilizada age sobre os substratos macromoleculares , enzimas ativas do site no ble para acessar com os substratos , portanto, a atividade da enzima Perde TIC

Concluso

Imobilizao de enzimas amplamente explorado em vrias indstrias tcnicas indstria de alimentos, indstria farmacutica, biorremediao, indstria de detergentes, indstria txtil e assim por diante. Este mtodo utilizado devido s TIC vantagem tcnica e econmica. Grande nmero de enzimas imobilizadas ter-sido e usado em vrios processos larga escala. Este mtodo de estabilizao pode reduzir o custo das enzimas. Imobilizao de enzimas Fornece estabilidade operacional para enzimas