PRACTICA N 11

ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS
Capacidades a Lograr: 1. Conoce los factores que influyen en la estabilidad de los principios activos contenidos en un preparado farmacutico. 2. Conoce y aplica mtodos para predecir la estabilidad de medicamentos. 3. Conoce el tratamiento de los datos experimentales obtenidos en un estudio de estabilidad acelerado usando como modelo cido acetil-saliclico (AAS).

Cintica en soluciones acuosas: El trmino estabilidad de una forma farmacutica se refiere al periodo durante el cual se mantienen las condiciones de idoneidad, potencia, calidad y pureza, determinadas en la preparacin inicial de dicha forma farmacutica. Se considera como vida til de un producto, el tiempo transcurrido desde la fecha de manufactura de la formulacin hasta que su actividad qumica o biolgica no sea menor que un nivel predeterminado de la potencia establecida originalmente (generalmente se acepta un 90%) y que sus caractersticas fsicas no hayan cambiado apreciablemente o en forma perjudicial. Para predecir la velocidad y el curso de las reacciones de degradacin de los principios activos, el formulador debe recurrir a la informacin que le proporcionan las reacciones de la cintica qumica. Uno de los factores ms relevantes en la determinacin de la estabilidad de un frmaco en solucin es el pH del medio y, en general, puede decirse que la velocidad de degradacin ser mayor a ciertos valores de pH y menor a otros. Generalmente es posible determinar un valor de pH donde la velocidad de degradacin es mnimo, lo que es lo mismo, donde la estabilidad es mxima. Este valor de pH se conoce como pH de mxima estabilidad (pH ME). El pH ME es uno de los parmetros que deben determinarse en la etapas preliminares de la caracterizacin fsico-qumica de un nuevo principio activo. Pero a pesar de ser un parmetro muy importante en la estabilidad de medicamentos, debe decirse que ste es slo uno de los mltiples factores que entran en juego para decidir las caractersticas definitivas de las formas farmacuticas que sern puestas en el mercado. Experimentalmente el procedimiento consiste en realizar un estudio cintico de la degradacin de frmacos a distintos valores de pH, mantenidos constantes por medio del uso de soluciones tampones de capacidad adecuada. Como resultado de dicho estudio se obtiene una serie de

valores de constantes de velocidad de degradacin, para cada valor de pH, denominados, constantes aparentes u observadas (Kobs). Al graficar los valores del logaritmo de Kobs versus pH se obtiene una curva denominada perfil de pH (PpH) del frmaco o sustancia en estudio. En este grfico es posible observar una zona donde la constante de degradacin es mnima, esto es, donde el pH = pH ME. El estudio de hidrlisis de steres (ejemplo: procana, nitrato de amilo) y amidas (ejemplo: procainamida y cloramfenicol) puede seguirse mediante cintica qumica. La degradacin penicilina y oxitetraciclina, la oxidacin de cido ascrbico y la prdida de actividad biolgica de la 1-epinefrina son otros ejemplos de estudios de degradacin que pueden hacerse utilizando cintica qumica. La cantidad de droga activa remanente a cualquier tiempo, puede ser determinada por el farmacutico formulador despus del estudio experimental de la constante de velocidad de una reaccin en particular. Si la velocidad de reaccin es directamente proporcional a la concentracin de los reactantes se trata de una reaccin de primer orden. La cantidad de Principio activo (p.a.) que reacciona depende de la cantidad en la que est presente y puede ser expresada matemticamente como:

dc Kc dt
donde dc es la diferencia de concentracin del p.a., K es la constante de degradacin, dt es la diferencia de tiempo y -dc/dt es la velocidad a la cual la concentracin disminuye.

Si esta ecuacin es integrada entre los lmites de concentracin c1 a tiempo t1 y c2 a tiempo t2, toma la siguiente forma:

2 . 302 c 1 K log t t c 2 1 2
La constante K, es la constante especfica de la reaccin o constante de velocidad. Para una reaccin de primer orden se expresa en unidades de tiempo reciproco. El decaimiento radioactivo, la inversin de la sacarosa y la hidrlisis cida de la procana son reacciones da primer orden. La velocidad de reaccin puede ser descrita en trminos de vida media tanto como referida a la constante de velocidad. La vida media t1/2, es el tiempo en el cual se degrada la mitad de la concentracin inicial de p.a. Para una reaccin de primer orden Se llama reaccin de segundo orden a aquella en que la velocidad de reaccin es proporcional a la concent cual la concentracin disminuye es:

 dcA dcB K c A c B dt dt
el valor de K depende de las unidades en la cual est expresada la concentracin. Si por convencin la concentracin es expresada en moles/litro, K tiene la dimensin de litro/mol tiempo. Algunas reacciones no son afectadas por la concentracin, por ejemplo las reacciones fotoqumicas dependen de la cantidad de luz o del nmero de fotones absorbidos y son independientes de la cantidad de p.a. presente.

Influencia de la Temperatura. Muchos productos farmacuticos son almacenados en el refrigerador ya que se reconoce generalmente que un incremento en la temperatura aumenta la velocidad de degradacin del p.a.. Para estudiar la estabilidad de un producto determinado debe considerarse de manera importante la ecuacin de Arrhenius que en su forma integrada se expresa como:

k Ea ( T T ) 2 2 1 log K . 303 R T T 1 2 1 2
en la cual K2 y K1 son las constantes de velocidad a las temperaturas absolutas T 2 y T1 respectivamente, R es la constante de los gases (1.987 cal /K mol), y Ea es la energa de activacin. Esta energa de activacin es la cantidad de energa requerida para poner una molcula del reactivo inicial en un estado activado capaz de reaccionar para llegar a un producto final. La energa requerida para lograr el estado activado es el factor determinante en la velocidad de reaccin. Cuando la energa de activacin es alta, la velocidad de reaccin a una temperatura dada disminuye, ya que las molculas capaces de reaccionar son pocas. Aunque la forma integrada de la ecuacin de Arrhenius es la ms utilizada, tambin puede emplearse la forma exponencial

Ea LogK Constante 2 . 303 R

es decir graficando log. de K en la ordenada versus 1/T en la abscisa se obtiene una lnea recta con una pendiente Ea.

Ea Ea , es decir , permitiendo calcular la energa de activacin 4.58 2.303 R

Cuando se desarrolla un nuevo producto, puede estudiarse la estabilidad a temperatura ambiente por meses o aos, sin embargo ms importante es estudiar la estabilidad en condiciones aceleradas utilizando la ecuacin de Arrhenius, usando temperaturas superiores a la temperatura ambiente y si son favorables la produccin es iniciada continuando con estudios de estabilidad a temperaturas o a temperatura ambiente por periodos prolongados.

EXPERIENCIA PRCTICA ESTABILIDAD DEL ACIDO ACETIL SALICILICO (AAS) EN SOLUCION ACUOSA Este trabajo prctico est diseado con fines didcticos. Para ello se ha elegido el AAS (PM180.16), muy inestable en las condiciones experimentales que aqu se plantean, de forma tal que se pueda evaluar su degradacin dentro del tiempo establecido para la prctica. Se trabajar primero con los pH 1, 2, 3 y 4, y luego con los pH 6, 7, 8 y 9. A. Determinacin del producto de degradacin El AAS se degrada hidrolticamente a cido-saliclico (AS) y cido actico. El cido saliclico puede ser medido colorimtricamente como un complejo frrico a 525 nm. 1. El reactivo para el anlisis se prepara disolviendo 4 g de nitrato frrico con 9 moles de agua en 100 mL. de HCl 0.12 N. 2. El complejo formado se cuantifica utilizando un espectrofotmetro a 525 nm.

B. Curva de calibracin Se prepara una solucin madre de 0.005 M de AS. Para favorecer la disolucin del AS, se debe agregar en primer trmino 5 mL de etanol absoluto y luego enrasar con agua destilada hasta 100 mL. Se preparan las disoluciones sealadas en la siguiente tabla:

Alcuota de solucin madre 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0

Volumen final (mL)

Factor de dilucin

Molaridad

10.0 10.0 10.0 10.0 10.0

10.00 5.00 3.33 2.50 2.00

0.0005 0.0010 0.0015 0.0020 0.0025

De cada solucin se toma 01 mL, se agrega sobre 5 mL de nitrato frrico y al cabo de 5 minutos se determina la absorbancia a 525 nm.

C. PROCEDIMIENTO: 1. Con el objeto de obtener las Kobs a diferentes pH se trabaja a los siguientes valores de pH: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9.

2. Para cada uno de los pH se procede de la siguiente manera: se pesan 200 mg de AAS y se transfieren cuantitativamente a un baln aforado de 100 mL y se agrega 5 mL de etanol absoluto. 3. Agregar aproximadamente 60 mL de la solucin tampn asignada (pH 1,2,3) PRECALENTADA a 55C y luego enrasar a 100 mL con solucin tampn agitando hasta disolucin completa. Preparar en forma rpida la solucin. NO OLVIDAR QUE LA DEGRADACION ESTA OCURRIENDO MIENTRAS SE MANIPULA LA SOLUCION.

4. Del matraz que corresponde al tiempo "cero" retirar inmediatamente 01 mL y aadirlo en un tubo de ensayo que contiene 5mL de Fe(NO3)3 S.R. Los otros matraces se colocan inmediatamente en el bao termo-regulado a 50 C, hasta alcanzar los tiempos establecidos, luego se procede en idntica forma que para el tiempo "cero".

5. Agitar en vrtex y despus de 5 minutos determinar la absorbancia a 525 nm. Corregir con un blanco compuesto de 5 mL de FeNO3 S.R y de un mL del tampn correspondiente.

Tabla de datos.
pH Tiempo (min.) de muestreo Absorbancia Cantidad de A.S. Cantidad de A.A.S. Cantidad remanente de A.A.S. Kobs Log Kobs

0 1.0 15 30 0 2.0 30 60 0 3.0 60 120 0 4.0 30 60 0 5.0 30 60 0 6.0 30 60 0 7.0 30 60 0 8.0 30 60 0 9.0 15 30

D. Tratamiento de los datos 1. Graficar el porcentaje de AAS remanente versus tiempo en coordenadas cartesianas para cada uno de los pH en estudio. Identificar el orden de la cintica supuesta.

2. De la pendiente del grfico anterior, determinar la constante de velocidad de degradacin (Kobs). Precisar las unidades de las constantes observadas (Kobs).

3. Graficar las Kobs obtenidas v/s pH en papel semi-logartmico o alternativamente en coordenadas cartesianas.

4. Sealar en el grfico anterior el pH de mxima estabilidad del medicamento en estudio.

5. Calcular la vida til que tendra la solucin de AAS al pH de mxima estabilidad.

Lo que se determina en la lectura de datos no es directamente la cantidad de AAS, si no que este es hidrolizado hasta AS y es de esta forma que forma el complejo coloreado violeta con el Fe
+++

. Por lo que es necesario hacer la conversin de AS a AAS que es materia de anlisis.

Tenemos que el peso molecular de los compuestos y a la vez es la equivalencia: AAS es 180.16 g y el del AS es 138,12 g

+H

+ CH3COOH

ACIDO ACETIL ACIDO SALICILICO SALICILICO Datos experimentales simulados, proporcionados para el desarrollo de la prctica.

Curva de Calibracin

Abs 0,0966 0,1868 0,2857 0,4199 0,4556

Cc.(mg/mL) 0,069 0,138 0,207 0,276 0,345

Datos experimentales obtenidos (tericos) para realizar los clculos respectivos.

Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 1 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,117224601 0,102746761 10,2746761 13,40201018 15 0,142408147 0,122770253 12,27702531 16,01382044 30 0,162302976 0,138588675 13,85886746 18,07713265 Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 2 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,10516009 0,093154242 9,315424177 12,15078786 30 0,111150454 0,097917193 9,791719295 12,77205436 60 0,162302976 0,138588675 13,85886746 18,07713265 Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,228956516 15 5,214860644 30 5,203582791 Kobs= 0,0008 min-1

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 186,5979898 5,228956516 183,9861796 5,214860644 181,9228674 5,203582791

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 187,8492121 5,235639578 187,2279456 5,232326835 181,9228674 5,203582791

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,235639578 30 5,232326835 60 5,203582791 Kobs= 0.0005 min -1

Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 3 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) AAS res. (mg) Ln.AAS rem. B 0 0,102662347 0,091168281 9,116828068 11,89174446 188,1082555 5,237017624 30 0,145214697 0,125001747 12,50017471 16,3048905 183,6951095 5,21327737 60 0,178383061 0,151373985 15,13739847 19,74481399 180,255186 5,194373547 Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 4 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,111150454 0,097917193 9,791719295 12,77205436 30 0,176091261 0,14955177 14,95517695 19,50712916 60 0,252479606 0,210288309 21,02883091 27,42943945 Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 6 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,110412488 0,097330435 9,73304347 12,6955192 15 0,158717167 0,13573759 13,57375903 17,70524491 30 0,227798086 0,190663979 19,0663979 24,8696948

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,237017624 60 5,21327737 120 5,194373547 Kobs= 0.0004 min -1

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 187,2279456 5,232326835 180,4928708 5,19569128 172,5705605 5,150806199

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,232326835 30 5,19569128 60 5,150806199 Kobs= 0.0014 min -1

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 187,3044808 5,232735532 182,2947551 5,205624911 175,1303052 5,165530298

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,232735532 30 5,205624911 60 5,165530298 Kobs= 0.0011 min-1

Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 7 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) AAS res. (mg) Ln.AAS rem. B 0 0,082974238 0,075514223 7,551422256 9,849871371 190,1501286 5,247813911 15 0,200359836 0,168847767 16,88477669 22,02404698 177,975953 5,181648446 30 0,320335154 0,264240402 26,42404019 34,46680482 165,5331952 5,10917175 Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 8 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,11303951 0,099419186 9,941918603 12,96797028 15 0,211419218 0,177641105 17,76411055 23,17102633 30 0,348802774 0,286875069 28,68750691 37,41920971 Determinacin de la Cantidad de A.A.S. remanente en el tiempo a pH pH 9 Tubo(min) Absorvancia Cc. mg/mL A.S. A.S. (mg) AAS degra(mg) B 0 0,13717319 0,118607927 11,86079272 15,47089788 15 0,20411998 0,171837465 17,18374649 22,41401512 30 0,301029993 0,248890827 24,88908266 32,46464764

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,247813911 30 5,181648446 60 5,10917175 Kobs= 0.0022 min-1

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 187,0320297 5,231279884 176,8289737 5,175183015 162,5807903 5,091175049

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,231279884 30 5,175183015 60 5,091175049 Kobs= 0.002 min-1

AAS res. (mg) Ln.AAS rem. 184,5291021 5,217807186 177,5859849 5,179454914 167,5353524 5,121194388

Clculo de las Kobs. Tiempo Ln AAS res. 0 5,217807186 15 5,179454914 30 5,121194388 Kobs= 0.0032 min-1

Obtener el valor de la constante K mnima, que corresponde al pH de mayor estabilidad y calcular el T 90:

REALIZAR SUS CALCULOS Y PRESENTAR SUS RESULTADOS apoyndose de grficos en papel milimtrico. Responda Segn las ecuaciones de cintica propuestas, qu otros mtodos existen para determinar la estabilidad de un medicamento? Sustente sus respuestas.