Problemas Centrifugacin 1.

Cunto tiempo tardar en sedimentar una partcula esfrica de coeficiente de sedimentacin 105 S que estuviese inicialmente a 5 cm del eje del rotor y distase 10 cm del fondo del tubo? La velocidad de giro del rotor es de 4000 rpm. 2. Dadas las siguientes velocidades de rotacin, calcule la velocidad angular en las unidades apropiadas: a) 2400 rpm; b) 1000 rps 3. Una partcula subcelular es capaz de sedimentar en su totalidad cuando se le somete a una centrifugacin diferencial de 10 minutos en un rotor angular de radio mximo de 9 cm y radio mnimo de 5 cm que gira a 800 rpm. Qu coeficiente de sedimentacin tiene la partcula? 4. Para aislar la fraccin microsmica de una muestra determinada se deseara realizar una centrifugacin a 100000 x g durante 60 minutos. A cuntas rpm se utilizar un rotor de las caractersticas que se indican a continuacin? Rotor TFT 55.38 de Kontron
Max. rpm 65.000 RCF rmax 364200 rmin 196200 Tubes Volume 12x38,5 ml Total capacity (ml) 462 Rotor material Titanium

5. Se desea utilizar un rotor Beckman tipo 60 Ti a 44000 rpm durante 30 minutos; sin embargo en el momento de realizar la centrifugacin no se dispone de dicho rotor. Por el contrario, se dispone de dos rotores: el tipo 70Ti y el tipo 30, cuyas caractersticas se muestran en la tabla. Podra utilizar cualquiera de estos rotores para realizar la centrifugacin? A cuntas rpm deberan ser utilizados?
Rotor designation Type Type Type Type Type Type 70Ti 60Ti 55.2Ti 50.2Ti 42.1 30 Tube number and volume (ml) 8 x 38,5 8 x 38,5 10 x 38,5 12 x 38,5 8 x 38,5 12 x 38,5 Rotor material Ti Ti Ti Ti Al Al Maximum speed (rpm) 70 000 60 000 55 000 50 000 42 000 30 000

rmin (cm) 4.0 3.7 4.7 5.4 3.9 4.9

rmax (cm) 9,2 9,0 10,0 10,8 9,9 10,5

RCFmax (g) 504 000 362 200 338 200 301 900 195 200 105 700

6.

Al centrifugar la fraccin microsomal de un homogeneizado de rata a 40000 x g en un rotor SS-34 (rmax = 11 cm y rmin = 7 cm) durante dos horas se obtuvo un sedimento que contena la totalidad de una determinada partcula subcelular A. A cuntas rpm debera girar un rotor Ti 865 (rmax = 12 cm y rmin = 9 cm) para poder lograr una sedimentacin equivalente de la partcula A en 20 minutos? Qu valor de coeficiente de sedimentacin, expresado en unidades Svedberg, tienen las partculas A?

7. Una protena se centrfuga durante noventa minutos a 40000 rpm. A distintos tiempos se obtienen fotografas con ptica Schlieren. (sistema ptico que al atravesar la muestra recoge diferencias de refraccin del fluido producto de cambios en la densidad del medio de estudio.) Las distancias del mximo al eje de giro son: ------------------------------------------------------------------------------------t (min) 20 30 40 50 60 d (cm) 5,87 6,02 6,20 6,36 6,54 ------------------------------------------------------------------------------------Calclese el coeficiente de sedimentacin 8. Necesita alcanzar 20000 x g para sedimentar una determinada fraccin subcelular. Qu tipo de centrfuga utilizara?. Si solo dispone de un rotor para tubos de 50 ml, con radio de 8 cm, a qu velocidad (rpm) debe ajustarse la centrfuga? 9. Un procedimiento de ultracentrifugacin exige centrifugar 10 horas en un rotor determinado, con un campo centrfugo mximo (es decir, medido al fondo del tubo) de 150 000 x g. Si el fondo del tubo est a 9.8 cm del eje, qu velocidad se requiere? 10. Para el procedimiento del problema anterior, el investigador se encontr con que, debido a un deterioro del rotor, solo se poda utilizar hasta 30 200 rpm. Proporcione, razonndolo, un procedimiento alternativo de ultracentrifugacin para poder usar ese rotor bajo esas limitaciones. 11. Una de las aplicaciones de la centrifugacin isopcnica es el clculo de la composicin de bases del DNA. Se ha encontrado que la densidad de flotacin de un DNA es funcin del contenido en pares citosina-guanina, segn la ecuacin de Rolfe y Meselson: d = 0.100 (G+C) + 1.658 donde d es la densidad y G+C es la fraccin de guanina + citosina (tanto por uno) a) Sabra explicar al razn de esta dependencia? b) Sabiendo que la densidad de flotacin de DNA del fago T1 de E. coli en cloruro de cesio es 1.7057, calcule su composicin en bases.

12. Hallar el coeficiente de sedimentacin de una protena que, centrifugada a 60 000 rpm a 20 C, manifiesta en el registro ptico un desplazamiento de 2 mm cada 8 minutos. La distancia media de la protena al eje de rotacin es de 5.86 cm. 13. Cunto tiempo habr que centrifugar para sedimentar todos los ncleos en un rotor angular de radio mximo 8 cm y radio mnimo 4 cm que se halla sometido a un campo centrfugo de 700 g? Coeficiente e de sedimentacin de ncleos : 5-6 x 106 S 14. Explique qu es eso de Svedberg, Qu propiedades de una partcula afectan su valor?