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Cintica enzimtica A cintica enzimtica a parte da Enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas bem como os fatores que a influenciam.
Temperatura tima
Desnaturao
Pode afetar de vrios modos: 1. Ionizao de aa no stio ativo 2. Alterao na ionizao de grupos que mantm a estrutura terciria Valores extremos de pH a enzima desnatura irreversivelmente
pH timo
pH timo ambiente
Pepsina estmago (pH de 1 a 2)
pH timo da pepsina = 1,6 Glicose-6-fosfatase: clulas do fgado (pH 7,2) pH timo = 7,8
Aumentando a concentrao de enzima, observamos um aumento na velocidade de reao, onde E1 < E2 < E3 < E4.
Para uma reao no enzimtica simples com um nico substrato relao linear entre a atividade enzimtica e a concentrao do substrato.
Para uma reao enzimtica, h geralmente uma relao hiperblica entre a velocidade de reao e a concentrao de substrato
Todos os stios ativos na enzima esto ocupados pelo substrato enzima saturada
Equao de Michaelis-Menten
Km tem unidades de concentrao a concentrao de substrato necessria para atingir metade da velocidade mxima (V0 = Vmx)
ENZIMA A
S
ENZIMA B
P1
P2
Qual enzima mais eficiente?
V0 = Vmx . [S] KM
Em altas [S] [S] >>> Km Km torna-se desprezvel , a equao fica simplificada : V0 = Vmx . [S] KM + [S]
V0 = Vmx
1/2 =
[S] KM + [S]
KM + [S] = 2 [S]
Km = [S]
Grfico 1/V0 versus 1/[S] Determinao mais exata dos valores de Vmx e Km
10 8
1/Vmax
1/vo
-30 -20 -10
6 4 2
10
20
30
40
50
-1/KM
1/[sacarose]
1/Vmax=2,136
Vmax=0,468umoles/min
KM= 0,0456 M
- 1/KM= -21,92
Inibidores enzimticos so molculas que interferem com a catlise, diminuindo ou interrompendo as reaes enzimticas Ex.: frmacos, antibiticos, conservantes de alimentos e venenos
Reversveis
Irreversveis
O inibidor competitivo compete com o substrato pelo stio ativo da enzima Muitos tm estrutura qumica similar do substrato formando um complexo EI que no leva formao de produtos
Sem inibidor
Com inibidor
Com inibidor
Sem inibidor
Km aumenta A [S] necessria para atingir a Vmx maior O inibidor ocupa o stio ativo
lcool desidrogenase
metanol
fgado
formaldedo
Txico cegueira
Tratamento Etanol Compete pelo stio ativo da enzima, reduzindo a formao de formaldedo
Liga-se reversivelmente a enzima em local diferente do stio ativo Liga-se tanto enzima livre como ao complexo ES
Impede a catlise por mudar a forma ativa da enzima Exemplo: metais pesados (mercrio e chumbo) ligam-se a grupos sulfidrlicos
Cintica da inibio no-competitiva: Vmx diminui Uma alta [S] no consegue levar toda a enzima sob a forma ES O inibidor diminui a quantidade de enzima ativa Km para o substrato no se altera No afeta a ligao da enzima e do substrato
Com inibidor
Sem inibidor
Inibio competitiva
Inibio nocompetitiva
Inibio incompetitiva
I se combina com um grupo funcional da enzima essencial para sua atividade. Podem promover a destruio do grupo funcional Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.
inativador
Enzima + inibidor
Ligao covalente
Enzima inativa
Enzima +
Inibidor suicida
Catlise parcial
So enzimas que apresentam uma atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a certos sinais
Tipos de enzimas reguladoras: Enzimas alostricas Enzimas reguladas por modificao covalente So reversveis Geralmente, so protenas com subunidades mltiplas
So reguladas por meio de ligaes no-covalentes e reversveis com compostos regulatrios molculas pequenas ou cofatores
negativos
positivos
Alm do stio ativo, possuem um ou mais stios regulatrios (alostricos) para ligarem o modulador O modulador induz mudanas na conformao da enzima
Mudana de conformao
A ligao de uma molcula de substrato em uma subunidade induz mudanas estruturais que resultam em alteraes nas afinidades dos stios vazios
A ligao de um modulador positivo: aumenta a afinidade dos stios vazios pelo substrato A ligao de um modulador negativo: diminui a afinidade dos stios vazios
Grupos qumicos so ligados covalentemente em um ou mais resduos de aminocidos da molcula Altera as propriedades locais da enzima e introduz uma mudana na conformao
Ex.: fosforilao/defosforilao