DIAGNSTICO DE LA PROBLEMTICA ACTUAL DE ENFERMEDADES EN EL
CULTIVO DE UCHUVA Physalis peruviana L. EN EL DEPARTAMENTO DE
ANTIOQUIA
LUZ ANGELA SILVA TAMAYO
TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar al ttulo de
MICROBIOLOGA AGRICOLA Y VETERINARIA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE MICROBIOLOGA AGRCOLA Y VETERINARIA Bogot, D. C. (19 de Septiembre de 2006) 1
NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946
La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral catlica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia.
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DIAGNSTICO DE LA PROBLEMTICA ACTUAL DE ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE UCHUVA Physalis peruviana L. EN EL DEPARTAMENTO DE ANTIOQUIA
LUZ ANGELA SILVA TAMAYO
APROBADO
Nombre, Ttulo profesional Nombre, Ttulo profesional Director Asesor
DIAGNSTICO DE LA PROBLEMTICA ACTUAL DE ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE UCHUVA Physalis peruviana L. EN EL DEPARTAMENTO DE ANTIOQUIA
LUZ ANGELA SILVA TAMAYO
APROBADO
Nombre, Ttulo profesional Nombre, Ttulo Profesional Decano Acadmico Director de Carrera
4 Este trabajo esta dedicado primero que todo a Dios, a mis padres quienes con su esfuerzo, ejemplo y dedicacin hicieron no solo de mi, sino de cada uno de sus hijos unas personas de bien, a mi hija quien me regalo la alegra ms grande al llegar a mi vida y es el eje central de todo lo que hago y a mi amor quien hizo parte fundamental de este proyecto, gracias por todo tu tiempo y apoyo.
Los amo.
5 Este proyecto se llevo a cabo gracias a la unin y al esfuerzo de dos entidades en particular la Universidad Nacional sede Medelln, quienes me acogieron, orientaron y brindaron todos los recursos econmicos durante el proyecto, en especial la fitopatologa Lucia Afanador Kafury codirectora del proyecto quien sigui paso a paso todo mi proceso, muchas gracias por tu tiempo y dedicacin y la Pontificia Universidad Javeriana, universidad a la que orgullosamente pertenezco y quienes me ensearon todo lo que hoy da se como profesional, mil gracias. Agradezco tambin y muy especialmente a mi Directora Maria Clemencia Forero De la Rotta, quien me apoyo y oriento tambin durante todo el proyecto, brindndome todo su conocimiento.
Reconocimientos tambin a la empresa exportadota Caribbean Exotics quienes me colaboraron en todo el proceso de campo que se llevo a cabo en el corregimiento de Santa Elena, ya que permitieron que trabajara en su cultivo durante casi un ano y al director de los Uchuveros del municipio de La Unin el seor Erasmo Garca, quien me gui durante todos mis recorridos y facilito la entrada en mas del 20% de los cultivos de la zona.
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INTRODUCCION
La uchuva (Physalis peruviana L.) es una especie frutcola que se ha venido destacando como un producto de exportacin por excelencia, ocupando en la actualidad el segundo lugar, despus del banano, en las exportaciones de frutas colombianas con un promedio de 600 ha cultivadas con gran tendencia a crecer y con ingresos de US$ 5.000.000 en exportaciones. La uchuva es una de las frutas ms promisorias para el desarrollo de ciertas regiones altas en el pas, como Cundinamarca, Boyac, Antioquia, entre otras. Adems es un cultivo con una gran ventaja comparativa para Colombia, que como pas tropical puede garantizar un suministro constante en los mercados internacionales.
Cada da la uchuva tiene una mayor importancia como fruto de exportacin no solo por el lugar que ocupa, sino por la constante apertura del mercado extranjero lo cual incrementa la importancia estratgica de este cultivo en el pas. El xito de este producto en las exportaciones est basado en el manejo oportuno de todos los factores productivos y el cumplimiento de las exigencias que los mercados imponen, dentro de las cuales una de las que ha cobrado gran importancia es el manejo integrado de plagas y enfermedades, aspecto fundamental para obtener un producto de excelente calidad bajo los estndares exigidos por los mercados de exportacin.
Dadas estas circunstancias, los agricultores tienen que afrontar durante la etapa de produccin uno de los aspectos de mayor importancia como es el manejo las enfermedades ocasionadas por hongos, bacterias, nematodos. Adems, la uchuva es atacada por algunos insectos-plaga que afectan el capacho, el fruto, y las hojas, ocasionando en algunos casos la prdida en rendimientos y en la calidad del producto final. Debido a la carencia de informacin actualizada y confiable sobre problemas fitosanitarios que estn afectando a los cultivos existentes, se requiri desarrollar proyectos de investigacin tendientes a hacer de este cultivo una actividad productiva, rentable, competitiva y sostenible.
Por todo lo anterior, este proyecto busca identificar las principales enfermedades en los cultivos de Uchuva ubicados en la zona del departamento de Antioquia, por medio de muestreos de diferentes tejidos de las plantas en que se sospeche la presencia de enfermedades, buscando as una mayor produccin y mejor calidad en este cultivo.
7 MARCO TEORICO
Generalidades
La uchuva (P. peruviana) bien conocida por los Incas, es originaria del Per (Legge, 1974), aunque existen indicios de que proviene del Brasil y fue aclimatada en los altiplanos del Per y Chile (CRFG, 1997). Es una planta silvestre o semi-silvestre que crece entre Colombia y Chile a una altura entre 1500 y 3000 m.s.n.m; es considerada como una fruta tropical con extraordinarias propiedades nutricionales y medicinales. La especie P. peruviana es la mas conocida del gnero y se caracteriza por tener un fruto azucarado y buenos contenidos de vitaminas A y C, adems de hierro y fsforo. (Fischer y Almanza, 1993).
Actualmente es producida en Colombia y ocupa el primer lugar en la produccin mundial seguido por Sudfrica y Kenya. De acuerdo con Fischer, (2000), fue introducida por los espaoles en Sudfrica hace ms de 200 aos y es el segundo pas de mayor produccin, y de all la uchuva ha sido distribuida a Kenia, Zimbabwe, Australia, Nueva Zelanda, Hawai y la India, donde se est cultivando comercialmente. Si embargo, hoy se le encuentra sembrada en casi todos los altiplanos de los trpicos, (Verheij y Coronel, 1991) y en varias partes de los subtrpicos, incluyendo Malasia, China y el Caribe, entre otros (Fischer, 2000).
En el ao 1982 la FAO la caracteriza como una especie muy tolerante que, a pesar de ser originaria de regiones tropicales se adapta bien al clima mediterrneo y se acomoda a cualquier tipo de suelo. La uchuva es apta como planta de cobertura para proteger los terrenos de la erosin, sobre todo por su crecimiento vigoroso y expansin rpida sobre el suelo. En Nueva Zelanda se cultiva en suelos pobres y secos para limitar el crecimiento de la planta y segn Klinac (1986), los suelos frtiles contribuyen al desarrollo vegetativo exuberante, mientras con poca fertilidad se induce a la produccin de frutos. Se debe tener especial cuidado ya que la uchuva por su rpido y expandido crecimiento, se convierte fcilmente en maleza, si se le deja propagar descontroladamente. (Fischer, 2000).
La uchuva es clasificada por Prez (1986), como maleza comn en las tierras fras de Colombia, mientras que Romero (1991) destaca su ventaja por ser muy rstica, crecer en toda clase de suelos, prefiriendo los rastrojos y lugares sombreados. El National Research Council (1989) la describe como una planta pionera para suelos recientemente formados y todava sin vegetacin y destaca su robustez, y habilidad de adaptacin; adems menciona que esta predestinada para ser cultivada en reas 8 marginales. Tambin se siembra en asociacin con otros cultivos para un uso mas efectivo de la tierra, con frutales como la curuba, feijoa, tomate de rbol y las hortalizas, arveja y frjol o tambin con tubrculos, maz y cereales.
Actualmente se cultivan tres tipos de uchuva originarias de Colombia, Kenia y Sudfrica, pero la colombiana se caracteriza por tener una mejor coloracin y mayor contenido de azcares, caractersticas que la hace ms apetecible en los mercados internacionales. (Fischer, 2000)
La mayor rea cosechada de uchuva en Colombia se encuentra en el departamento de Cundinamarca, con 267 hectreas, equivalentes al 84.5% del total de rea cosechada en el pas. En el ao 2000 se iniciaron los registros de los cultivos de uchuva en los departamentos de Antioquia y Boyac, con reas de 28 y 15 hectreas, respectivamente, que equivalen al 13.6% del rea cultivada (Fischer, 2000).
Importancia econmica
La uchuva ha tenido gran auge en los mercados mundiales dadas sus caractersticas de fruta tropical extica que la hacen llamar fruta de oro. En los mercados nacionales es una fruta escasamente conocida por las amas de casa de la clase alta y muy poco por otros estratos sociales, o poco valorada por estos, debido a que siempre se ha conocido como maleza, ignorando su alto valor nutritivo, sus grandes propiedades medicinales y el gran aprecio de que goza en los mercados internacionales, donde genera divisas que alcanzan los 5 millones de dlares anuales, ocupando el segundo puesto despus del banano, en las exportaciones de frutas colombianas. Segn la Corporacin Colombiana Internacional, en 1998 Colombia exporto 1.655 toneladas de frutas exticas, de las cuales la uchuva participo con el 60% de este volumen.
La participacin de Colombia en los mercados internacionales le ha permitido al exportador ocupar un lugar de importancia teniendo en cuenta que el reto de eficiencia y competitividad les exige trabajar sobre la base del mejoramiento de calidad y tecnificacin de sus sistemas de produccin. Las exigencias del mercado internacional obligan a que el empresario garantice la calidad del producto en trminos fitosanitarios y de empaque, adems de asegurar la continuidad de la oferta para que haya permanente abastecimiento. (Rodrguez y Botia, 2000)
Entre los problemas mas importantes de la comercializacin se destacan: El rechazo del producto para el mercado externo por problemas fitosanitarios y de calidad, tamao y color. 9 Ausencia de programas de investigacin para mejorar el proceso productivo en trminos de adopcin de tecnologas que redunden en productos de alta calidad para mantener su actual situacin en el mercado exterior. (Rodrguez y Botia, 2000).
Taxonoma
La uchuva (P. peruviana ), que pertenece a la familia de las Solanceas y al gnero Physalis, cuenta con ms de ochenta variedades que se encuentran en estado silvestre y que se caracterizan porque sus frutos estn encerrados dentro de un cliz acreciente o capacho. Bernal en 1986, afirm que el gnero incluye unas 100 especies herbceas perennes y anuales originarias de Amrica. Sin embargo, en Colombia, primer productor mundial de uchuva, aun no se han seleccionado variedades y solamente se conocen ecotipos o plantas procedentes de diferentes regiones o pases, que se diferencian por el tamao, el color y el sabor, la forma del cliz y el porte de la planta.
Propagacin
En Colombia los estudios dedicados a la propagacin de esta planta son poco conocidos, por ello no se ha logrado la unificacin de conceptos y criterios tcnicos en busca de un mejoramiento gentico del fruto, que logre la aceptacin nacional y el favorecimiento de la calidad de exportacin. Este producto pertenece a las frutas exticas conocidas, que por sus caractersticas organolpticas ha adquirido elevados precios en el mercado internacional. (Fischer, 2000)
Las formas mas conocidas para reproducir la uchuva son: la va sexual, en donde se emplean semillas; y la va asexual, que involucra diferentes mtodos y partes de la planta. (Almanza, 2000). La mejor va reproductiva es por semilla la cual vara en su tiempo de germinacin dependiendo de la forma de obtencin, almacenamiento y tratamientos a que sea sometida (Bernal, 1965). En la propagacin por semilla se requiere desarrollar semilleros que permitan su germinacin y su posterior transplante a los sitios de siembra.
Agroecologa
Suelo: Para un buen desarrollo de la planta, los suelos que han mostrado mejores resultados son aquellos que poseen una estructura de tipo granular y una textura areno arcillosa. En algunos cultivos del pas se ha encontrado que la planta responde bien a las aplicaciones de materia orgnica. El suelo donde se desarrolla la uchuva debe ser rico 10 en elementos nutritivos con buenos contenidos de Nitrgeno, fsforo y Potasio, adems buen contenido de elementos menores y un pH que puede oscilar entre 5,7 y 7,0.
Clima
En Colombia la uchuva prefiere sitios entre 1800 y 2800 m.s.n.m. con una temperatura promedio anual entre los 13 y 18 C, cuando es muy alta puede afectar la floracin y fructificacin. En suelos calientes (22-29 C), las ramas tienden a crecer longitudinalmente produciendo un aumento en el nmero de frutos, en suelos con una temperatura mayor, como en las laderas expuestas directamente al sol, se aumenta la cada prematura de frutas y hojas por una senescencia anticipada.
Pese a que esta planta es considerada como susceptible a las heladas, se ha observado alguna tolerancia cuando son ligeras (Moncada, 1988), sin embargo tambin se ha observado que despus de una baja de temperatura pueden ocurrir rebrotes de las ramas basales; entre tanto, las plantaciones no prosperan cuando las temperaturas nocturnas son constantemente menores a los 10 C (Fischer, 2000). La precipitacin debe oscilar entre 1000 a 2000 mm bien distribuidos a lo largo del ao, con una humedad relativa del 70 al 80%. Las precipitaciones demasiado altas, conllevan a un crecimiento vegetativo exuberante y atrasan la fructificacin; una alta humedad durante la poca de cosecha deteriora el fruto y le causa rajaduras, adems este tipo de estrs puede estancar el crecimiento. La humedad del terreno debe ser permanente, sin llegar a sobrepasar la capacidad de campo, ya que la uchuva es susceptible a encharcamientos (Piza Bermdez, 1989), estos pueden causar la muerte del sistema radical y posteriormente la de la planta. As, en zonas de alto riesgo de humedad se recomiendan los suelos tipo arcillo-arenoso con un buen drenaje y enriquecidos con un alto porcentaje de materia orgnica.
La fructificacin de la uchuva parece ser fomentada por una alta radiacin solar; sin embargo la planta tambin crece en asociacin con un bosque abierto, bajo cierta sombra. En cuanto al fotoperodo la planta es aparentemente neutral. (Bernal, 1986). Es recomendable construir una barrera contra los vientos fuertes (Lpez, 1998) ya que en la poca de floracin estas se pueden caer; adems la uchuva se muestra susceptible al volcamiento. (Moncada, 1988).
Produccin
Desde el transplante hasta la primera cosecha transcurren en promedio 90 das, dependiendo de la altitud; en zonas ms altas este perodo es mas largo. Una vez se 11 inicia la cosecha, la produccin de uchuva en Colombia es continua a lo largo del ao, lo cual permite realizar recolecciones semanales y en ocasiones dos por semana, dependiendo de los grados de madurez y de los requerimientos del mercado; con un adecuado manejo agronmico, especialmente en lo relacionado con las practicas de fertilizacin, podas, controles fitosanitarios y suministro de agua el cultivo puede alcanzar una vida productiva hasta de dos aos (Zapata, 2002).
Enfermedades limitantes del cultivo de uchuva
La problemtica fitopatologica se presenta en las planta desde los primeros estados de desarrollo hasta la fase de poscosecha, con posibilidades de tener una alta incidencia en los costos de produccin. Cuando las prdidas son crticas, los organismos causales de tales enfermedades adquieren importancia econmica y se vuelven objeto de observacin y estudio; es tambin cuando el diagnstico que permite identificar la etiologa de las enfermedades resulta primordial para adoptar medidas de control (Blanco 2000).
De acuerdo con Blanco (2000), las enfermedades que con mayor frecuencia se presentan en el cultivo de uchuva son: mancha gris, muerte descendente, esclerotiniosis, mal del semillero, secamiento descendente de pice del cliz y nemtodos.
Mancha Gris
La enfermedad conocida como mancha gris de hojas y cliz es causada por el hongo Cercospora sp. y se presenta con mayor intensidad en pocas de alta humedad y se considera como la principal enfermedad foliar de la uchuva (Moncada, 1988 y Blanco, 1992).
Los sntomas pueden aparecer indistintamente en cualquier parte de la lmina foliar preferentemente en el rea que delimita el pice, como tambin en el capacho, en forma de manchas de forma angular o redonda, de un tamao de 2 a 5 mm inicialmente de color verde claro; por el haz el borde de la lesin se torna amarillento y su parte central adquiere un color marrn de aspecto seco y quebradizo. Se observa que generalmente la infeccin ocurre primero en las hojas ms viejas y avanza hacia el follaje nuevo. Las infecciones severas ocasionan una defoliacin y prdida de frutos; es una enfermedad limitante de la produccin (Blanco, 2000).
12 Muerte descendente
La enfermedad es ocasionada por el hongo Phoma sp. que se puede localizar en los tallos, hojas, capachos y frutos de las plantas en cualquier estado de desarrollo. En las hojas los primeros sntomas se presentan como manchas oscuras muy pequeas, que ocurren cuando se presenta alta humedad y temperatura baja, luego las lesiones se pueden unir dando origen a grandes manchas necrticas de forma irregular (Zapata, 2002).
Este hongo se encuentra en la uchuva atacando principalmente los tallos, en donde se forman lesiones alargadas que producen la muerte descendente de los mismos. Aparecen manchas en forma de zonas poco definidas que van desde color verde plido hasta el amarillento, las cuales gradualmente se delimitan con mayor claridad, apareciendo en el centro de las mismas un color gris ceniza, donde se encuentran los picnidios o cuerpos fructferos del microorganismo (Blanco, 2000).
Las lesiones tambin se encuentran presentes en el cliz o capacho, mostrando los mismos sntomas que ocasionan en las hojas; la mancha avanza en forma irregular, tomando una coloracin caf claro en los primeros estados, que luego se torna ms oscura. El fruto tambin puede ser atacado por el patgeno, mostrando que la enfermedad en la mayora de los casos se inicia en el punto de insercin del fruto con el pednculo. Generalmente la lesin rodea el tejido y avanza hasta el extremo opuesto del fruto, la mancha se torna mas oscura y cuando se presenta alta humedad se desarrolla un micelio de color blanco (Zapata, 2002).
Marchitez de las ramas
A pesar de que Moncada en 1988 menciona que esta enfermedad es muy similar a la muerte descendente, atribuye su causa a complejo fungoso, de donde se han aislado los hongos Gloesporium sp y Phoma sp; sin embargo Forero de la Rotta et all en el 2005 atribuye como agente causal del marchitamiento y muerte de las plantas, al microorganismo Fusarium oxysporum Schlechtendahl.
Esclerotiniosis
Tambin se conoce con el nombre de moho blanco, pudricin blanca algodonosa, enfermedad del esclerocio y pudricin dura (Blanco, 2000). Es causada por el hongo Sclerotinia sclerotiorum, se manifiesta por la presencia de lesiones de apariencia hmeda, con reas de tejido decolorado que se vuelven de color plomizo-marrn y estn 13 cubiertas por un micelio blanco algodonoso, presente en diferentes partes de la planta pero con mas frecuencia en el tallo principal a nivel del cuello de la planta (Blanco, 2000).
La mdula central del tallo se destruye y el vaco se llena con un micelio blanco que posteriormente se transforma en esclerocios duros y negros de 0.5 a 1.0 cm de largo; la planta se adormece completamente y el tallo se quiebra a nivel del suelo, cuando los esclerocios germinan, forman capas miceliales y pequeos apotecios en forma truncada desde los cuales las ascosporas son liberadas y se transportan por el viento e infectan las hojas y los tallos de muchas de las dicotiledneas cultivadas y malezas (Blanco, 2000).
Mal del semillero
Los hongos, Pythium sp., Rhizoctonia sp. y Fusarium sp, producen sntomas muy similares en cualquiera de las fases de desarrollo de la plntula, sin embargo al parecer el primero de ellos es el ms importante (Zapata, 2002). Los sntomas producidos por la enfermedad en los semilleros varan con la edad y la etapa de desarrollo de las plntulas, pero el sntoma mas comn es la pudricin de las races y/o de los tallos, sin embargo tambin se presenta amarillamiento y necrosis de las plntulas, acompaadas de depresiones en la base de los tallos. El mal de semillero se puede presentar en todos los cultivos que requieran de la prctica de germinacin de la semilla, desarrollo de las plntulas y su posterior transplante al campo. Cuando el ataque de la enfermedad es temprano y la humedad en los semilleros es excesiva, las prdidas pueden llegar a ser del 100%.
Moho gris
Agente causal Botrytis sp, causan sntomas que consisten e manchas necrticas de forma irregular que al colocarlos en condiciones de cmara hmeda desarrollan un micelio de color gris, que puede cubrir completamente el fruto; tambin afecta eventualmente las hojas. (Zapata, 2002).
Carbn de la hoja:
El agente causal es atribuido al hongo Entyloma australe Schlechtendahl. registrado desde 1975 por Molina y recientemente evaluado en campo por Forero de La Rotta et all en el 2005. 14 Las lesiones ocasionadas por este hongo en hojas, se inician con manchas circulares o angulares clorticas y bordes definidos. conforme el microorganismo avanza en el tejido vegetal, la mancha toma una coloracin caf en el centro que se va extendiendo en forma de pstula en la superficie de la hoja rodeado de un halo clortico bien definido, en algunas ocasiones se evidencia alrededor de la lesin una coloracin prpura como resultado de las antocianinas producidas en respuesta por la planta, Especialmente en estados finales de dao se hace referencia al desprendimiento de los tejidos enfermos que con el tiempo se contraen y forman ampollas; En ambos casos, en el envs de las hojas se observa la produccin de estructuras reproductivas del hongo por la coloracin blanquecina que toma. Microscpicamente se observ micelio hialino con produccin de basidiosporas y teliosporas. (Forero De La-Rotta, 2005)
Enfermedades de poscosecha
De acuerdo con Rao y Subramonian (1976) el secamiento descendente del cliz es atribuido al complejo de hongos Cladosporium sp. y Alternaria sp.; en este caso inicialmente el pice cambia de turgencia, se acartona, se vuelve seco y spero al tacto; el color verde amarillento normal en esta poca de maduracin del fruto se torna plida y translcida y se produce un secamiento gradual del cliz en direccin de la base, en esta fase el fruto como tal no es afectado. Posteriormente el cliz se seca completamente y los frutos caen al suelo en su mayora; en frutos con cliz, Sharma y Khan (1978) reportan la presencia de estructuras de Cladosporium sp. y Alternaria sp., adems mencionan que en frutos inoculados con Alternaria sp. se produce una decoloracin inicial del tejido y ms tarde lesiones oscuras hasta de 1cm de dimetro, seguidas por la formacin de una masa fungosa de color verde olivceo; el hongo Cladosporium sp. produce lesiones caf oscuras de 0.5 a 1 cm de dimetro.
Mancha grasienta
Las prdidas causadas por enfermedades bacterianas en uchuva son generalmente de menor importancia que las causadas por hongos y virus. Sin embargo, en algunos casos, los cultivos se ven seriamente limitados en su crecimiento a causa de un patgeno bacteriano muy destructivo en diferentes etapas de la planta (Billing, 1987).
El organismo causal es posiblemente Xanthomonas sp. no se conoce el mecanismo de diseminacin de la enfermedad, ni los factores climticos favorables para su desarrollo. El dao consiste en la presencia de manchas pequeas que en pocos das se tornan grandes y decoloran el tejido dando la apariencia de papel parafinado o engrasado. El patgeno no afecta el fruto, pero deteriora su apariencia reduciendo la calidad para el 15 mercado externo; como el producto con destino al mercado nacional se consume sin capacho, este dao no reviste importancia. Hasta ahora no se conocen mtodos de control en campo (Zapata, 2002).
Marchitez bacterial
El organismo causal Ralstonia solanacearum Schlechtendahl. (Smith) Yabunchi et al. puede atacar muchas especies de la familia de las Solanceas, se disemina fcilmente por herramientas, por el agua de riego o por las lluvias.
El sntoma de la enfermedad en condiciones de campo, consiste en la marchitez de la planta, con una mayor evidencia en las horas de mayor temperatura. Cuando se inicia el sntoma, la planta no muestra clorosis. Sin embargo despus de tres o cuatro das calurosos los tejidos se tornan amarillos y luego se mueren. La enfermedad se puede presentar e cualquier estado de desarrollo del cultivo; inicialmente solo una o pocas plantas muestran los sntomas pero si las condiciones son favorables para el desarrollo de la enfermedad se puede diseminar al resto del cultivo. Al realizar un corte del tallo de plantas fuertemente afectadas por la enfermedad se pueden observar rayas angostas de color oscuro que corresponden a los haces vasculares infectados (Zapata, 2002).
La enfermedad se puede transmitir fcilmente mediante herramientas utilizadas para las podas, labores de desyerba y la cosecha. Cuando la enfermedad se presenta, las plantas no tienen capacidad de recuperacin y no existe control para combatirla (Zapata, 2002).
Ojo de gallo
El organismo causal es de etiologa desconocida, sin embargo todas las caractersticas del patgeno llevan a suponer que es de origen bacterial. Debido a su baja incidencia no se conoce la importancia de los daos que ocasiona, ni las estrategias de manejo. En condiciones de campo la enfermedad se presenta afectando principalmente las hojas, como manchas necrticas de color marrn oscuro, rodeadas de un halo clortico y formando en el centro un punto de color claro asemejando la forma de un ojo (Zapata, 2002).
Los nemtodos como patgenos
La importancia econmica de los nemtodos en el cultivo de uchuva, no solo se debe a la amplia distribucin eco-geogrfica como fauna nativa del suelo, potencialmente capaz 16 de invadir con severidad y adaptarse a un monocultivo causando directamente en las plantas lesiones, clorosis, deformaciones de los rganos y prdida de vigor, sino tambin, a que en el sitio donde se inicia el ataque se convierte en puerta de entrada para hongos, bacterias y virus que pueden llegar a causar daos mas severos que aquellos ocasionadas por el nemtodo mismo (Blanco, 1992).
Nemtodos formadores de ndulos en uchuva
El nemtodo reportado como agente causante de enfermedades en uchuva es el denominado nemtodo del ndulo de la raz, Meloidogyne sp. Estos nemtodos son polfagos y se encuentran desde zonas fras hasta zonas clidas; sus daos son particularmente serios en suelos arenosos. Los ataques de los nemtodos favorecen las infecciones por bacterias, hongos y otros patgenos que pueden llegar a causar daos ms severos que aqullos ocasionados por los mismos nemtodos (CIP, 1996)
Existen diversas formas de manejar la enfermedad, las que reducen la poblacin de los nemtodos y sus daos; rotacin de cultivos con cereales, perodos de barbecho con ruptura del suelo y abonamiento con grandes cantidades de materia orgnica. El tratamiento con fumigantes de suelo puede ser muy costoso (Blanco, 2000). Para el control cultural se deben tener en cuenta las siguientes recomendaciones: conocer la poblacin del nemtodo problema y sus hospederos, rotacin de cultivos, estricto control de malezas, en lo posible utilizar cultivos trampa y solarizar el suelo mediante barbechos.
17 Formulacin del problema y justificacin:
Formulacin del problema:
El departamento de Antioquia es una de las zonas productoras de uchuva importantes en Colombia y debido a la carencia de informacin actualizada sobre problemas fitosanitarios, se realizo la evaluacin de los agentes causales y la incidencia de estos, haciendo referencia a la importancia que desde el punto de vista econmico estn ocasionando las enfermedades en uchuva y al desconocimiento por parte de los productores, asistentes tcnicos y comunidad en general de su forma de manejo dado que la etiologa de algunas de las enfermedades en uchuva aun no se conoce claramente, adems es necesario conocer la relacin de las mismas con el estado de desarrollo de las plantas o su estado fenolgico.
Justificacin de la investigacin:
Colombia esta reconocido actualmente como un pas productor potencial de uchuva, y gracias a esto su produccin es continua a lo largo del ao, sumado a lo anterior las exportaciones de esta fruta tropical se han incrementado alrededor de 50% en los ltimos aos, por esta razn han merecido importancia todos aquellos inconvenientes que se pueden generar en la produccin del fruto especialmente las plagas y enfermedades que afectan la produccin. Una de las zonas productoras de uchuva en Colombia es la regin de Antioquia principalmente los municipios de Santa Elena y La Unin, de la cual la informacin que se tiene es muy poca y no es actualizada. Este trabajo se centr en el estudio de los diferentes agentes causales de enfermedades en la uchuva, consistente en el aislamiento, identificacin y pruebas de patogenicidad para la confirmacin de signos y sntomas asociados con la enfermedad en cultivos de los municipios productores del departamento de Antioquia y conocer su incidencia de acuerdo con el estado de desarrollo de las plantas.
18 Objetivos:
Objetivo general:
Conocer las principales enfermedades que se presentan en los cultivo de uchuva (Physalis peruviana L.) localizados en la zona productora de Antioquia y su relacin con el estado fenolgico de las plantas.
Objetivos especficos:
Conocer la etiologa de los agentes causales de las enfermedades y describir los sntomas de las enfermedades ocasionadas por hongos, bacterias y nemtodos desde semillero, hasta poscosecha. Demostrar la patogenicidad de los microorganismos aislados. Conocer la incidencia de las enfermedades de acuerdo con el estado fenolgico de las plantas.
Materiales y mtodos.
Localizacin del Estudio
La fase de reconocimiento y anlisis del estado fitosanitario de los cultivos de uchuva, se llevo a cabo en 14 fincas productoras de los municipios de La Unin y en el corregimiento de Santa Elena, Departamento de Antioquia. El municipio de La Unin, est localizado a una altura de 2500 m.s.n.m., tiene una temperatura media de 13C y la precipitacin media anual es de 2000 mm. El municipio de Santa Elena presenta una altitud de 2500 m.s.n.m; con una temperatura media aproximada de 18-20C, limita al norte con Guarne, al este con Rionegro, por el sur con La Ceja y al oeste con Medelln.
La fase de aislamiento, identificacin y multiplicacin de los agentes fitopatgenos se llev a cabo en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Medelln, localizado en la ciudad de Medelln a una altura de 1550 m.s.n.m, y una temperatura promedio entre 18 y 28 C .
Evaluacin preliminar de la zona de estudio
En las zonas productoras se realizaron 5 visitas con el fin de determinar de forma preliminar la situacin fitosanitaria de los cultivos y planear la estrategia de muestreo a seguir. En esta primera fase del estudio, se adelant el diagnstico de las enfermedades mediante un anlisis previo de las condiciones del cultivo, en donde se colect la 19 informacin relacionada con variedad utilizada por el agricultor, tipo de suelo, temperatura de la zona, altitud, edad del cultivo, distancia de siembra, las prcticas de riego, fertilizacin y la aplicacin de plaguicidas.
La fase siguiente consisti en identificar las posibles enfermedades presentes en el cultivo mediante la observacin detallada de sntomas y caractersticas asociadas a estas en tallos, ramas, hojas, flores, frutos y en los casos necesarios en races. Esta informacin fue consignada en un formato elaborado especficamente para ello (Anexo 1).
Colecta y procesamiento de muestras en campo
La colecta de material vegetal con posibles sntomas de enfermedad se realiz en 14 fincas, con base en 100 plantas para las fincas localizadas en el municipio de Santa Elena y 1000 plantas para la finca propiedad de Caribbean Exotics en La Unin. Cada muestra de hojas, tallo, flores, frutos o races correspondientes a un tipo diferente de sntoma, fue empacada en papel toalla y luego en bolsa plstica. Las muestras una vez colectadas, se almacenaron en una nevera porttil para mantener las condiciones de humedad y baja temperatura para evitar el deterioro de los tejidos. Luego se llevaron al Laboratorio de Sanidad Vegetal para su procesamiento.
En aquellas plantas con posibles sntomas de enfermedades causadas por nemtodos, se tomaron muestras de raz y de suelo, para ser utilizados en la extraccin e identificacin de los mismos.
A cada muestra se le abri una ficha de identificacin en la cual se consign toda la informacin correspondiente a el tipo de suelo, la temperatura de la zona, la altitud, la edad del cultivo, la distancia de siembra, las prcticas de riego, fertilizacin y la aplicacin de plaguicidas, tambin se consigno el tipo de sntomas colectado y las observaciones macro y microscpicas que se hacan durante el proceso de aislamiento e identificacin de cada una.
Esta fase del estudio fue realizada con la colaboracin y asesora del presidente de la Asociacin de Uchuveros del municipio de La Unin, el seor Erasmo Garca y la coordinadora de la empresa exportadora Caribbean Exotics en el corregimiento de Santa Elena, la seora Andrea Rodrguez.
20 Aislamiento e identificacin de Agentes Fitopatgenos
Aislamiento de Bacterias
En los casos en los cuales se sospech enfermedad de origen bacteriano, de los rganos afectados se tom una porcin de tejido que comprenda una zona enferma y sana. El tejido fue luego desinfestado en hipoclorito de sodio al 1% por un tiempo de 2 minutos y luego se lavo con agua destilada estril. La muestra se deposit sobre una gota de agua estril en un portaobjetos previamente flameado y se macer con la ayuda de un bistur. La suspensin resultante, se dejo en reposo por 10 minutos y luego se sembr en medio agar nutritivo (AN), utilizando un estriado por agotamiento de tal manera que permitiera una dilucin de las bacterias presentes y el desarrollo de colonias individuales.
Las cajas de Petri se incubaron a una temperatura de 25-28oC por un tiempo de 24 a 48 horas. Transcurrido el tiempo de incubacin, se tomaron las colonias individuales y se repicaron nuevamente en AN utilizando la misma tcnica. Una vez asegurada la pureza de las colonias bacterianas, estas se almacenaron a 4C en viales con agua destilada estril. Cada cultivo bacteriano fue luego caracterizado mediante una prueba de tincin de Gram, KOH al 3% y observacin de las caractersticas macro y microscpicas tales como: color de la colonia, aspecto y tiempo de crecimiento.
Aislamiento de Hongos
Las muestras que presentaban sntomas de marchitamiento vascular, manchas foliares o con evidentes signos de enfermedad causada por hongos, se incubaron durante 3-6 das en cajas plsticas acondicionadas con una rejilla y agua en el fondo a manera de cmaras hmedas, para estimular la esporulacin y el desarrollo de estructuras reproductivas y vegetativas que permitieran la identificacin de los hongos presentes.
Simultneamente a la incubacin en cmara hmeda, se hizo aislamiento e identificacin de los hongos de cada una de las muestra con sntomas de posibles enfermedades fungosas. El aislamiento consisti en cortar porciones de tejido sano y enfermo de aproximadamente 0.5 cm, desinfestacin en etanol al 70% por 1 minuto y en hipoclorito de sodio al 1% por dos minutos, seguido de lavado en agua destilada estril y siembra en medio de cultivo PDA Papa Dextrosa Agar (PDA acidificado). Los tejidos aislados se dejaron en incubacin a una temperatura de 25- 28C, por un tiempo de 5 a 10 das y se efectuaron revisiones peridicas a fin de evidenciar caractersticas micro y macroscpicas de los hongos resultantes. 21 Posteriormente, las colonias obtenidas se purificaron mediante la siembra de un bloque de Agar con micelio en medio PDA acidificado, obtenido a partir del borde de la colonia desarrollada. Una vez purificados los hongos, cada uno se almaceno en papel filtro a una temperatura de 4C.
Para determinar el mejor medio para el crecimiento y esporulacin de los hongos aislados, se realiz una prueba preliminar en los medios de cultivo PDA, Agar avena, Agar Marthur y Agar jugo V8. Para este ensayo se sembraron los hongos en los diferentes medios de cultivos y se evalu la rata de crecimiento y la esporulacin que presentaron escogiendo as el medio en el cual obtenan un mejor desarrollo.
El mejor medio fue utilizado para la multiplicacin masiva de cada hongo con el fin de obtener inculo suficiente para las pruebas de patogenicidad.
La identificacin de los hongos, se hizo con base en la observacin macroscpica de caractersticas como produccin de pigmentos en el medio de cultivo, tipo de micelio producido, textura, tamao de las colonias, tipo y velocidad de crecimiento, entre otros, adems de las observaciones al microscopio del tipo de micelio, presencia o ausencia de cuerpos fructferos y tipo de espora.
Para la extraccin de nemtodos se utiliz la tcnica del Embudo de Baermann en combinacin con el empleo de tamices para la separacin de huevos y estados juveniles de los nematodos presentes en la muestra. Este ensayo se llevo a cabo en Agrolab; Asistencia Agroindustrial de la ciudad de Medelln.
Pruebas de patogenicidad de bacterias y hongos:
Para las pruebas de patogenicidad se utilizaron plntulas de uchuva de tres meses de edad y frutos verdes de la variedad usada por los productores de la zona. Las inoculaciones se llevaron a cabo en la casa de malla de la Unidad Experimental Paysand perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln, localizada en el corregimiento de Santa Elena, bajo una temperatura promedio de 18 a 20 y humedad relativa alta, adems se sometieron a condiciones de cmara hmeda.
Preparacin de inculo e inoculacin de bacterias
Para la preparacin del inculo, cada bacteria fue crecida en medio AN por un periodo de 48 horas y una temperatura de 25 - 28 C. Con los cultivos resultantes se prepararon suspensiones acuosas. 22
Las suspensiones acuosas se prepararon depositando 20 mililitros de agua destilada estril sobre la colonia obtenida, seguido de la remocin de la misma con un portaobjetos estril. De la suspensin resultante se prepar una dilucin 1:10 y sta se utiliz como solucin de trabajo para la inoculacin.
La inoculacin se hizo mediante aspersin de la suspensin bacteriana en 15 frutos de uchuva. Cada fruto con capacho fue asperjado individualmente con la ayuda de un atomizador plstico hasta humedecerlo completamente. Una vez inoculados los frutos con capacho, se colocaron en una caja plstica con tapa y acondicionada con una rejilla y agua destilada en el fondo, para garantizar condiciones de humedad. Las cajas con los frutos se incubaron a temperatura ambiente 25 - 28 C. por un perodo de 14 das, haciendo observaciones cada 3 das. Una vez identificado el gnero bacteriano como el agente causal de la enfermedad, se realizo una caracterizacin final e identificacin de gneros y especies por medio de reacciones bioqumicas y crecimiento en medios selectivos y especficos. Este anlisis se llevo a cabo en Agrolab; Asistencia Agroindustrial en la ciudad de Medelln.
Preparacin de inculo e inoculacin de hongos
La preparacin de inculo se hizo a partir de cultivos de cada hongo crecidos por 10 das en el mejor medio para esporulacin de cada uno de ellos. Se prepararon suspensiones acuosas de micelio y/o esporas mediante la adicin a cada caja petri de 100 mililitros de agua destilada ms 0.1% de tween 20, seguido de la remocin del micelio y las esporas con un portaobjeto estril y filtracin de la solucin resultante a travs de un pedazo de muselina.
La concentracin de propgulos (esporas o micelio) fue determinada en un hemocitometro y se ajusto hasta obtener una lectura final de 1x10 -6 esporas por mililitro y de 1x104 propgulos por mililitro. Las suspensiones acuosas de cada hongo fueron utilizadas para la inoculacin de plntulas de tres meses de edad, 25 para cada hongo y de 24 frutos con capacho verdes de uchuva.
Inoculacin
En el caso de patgenos foliares y del fruto, la inoculacin se hizo por aspersin con un atomizador plstico de la suspensin acuosa de esporas. Para los patgenos de la raz, el mtodo de inoculacin consisti en hacer un corte en las puntas de las races de cada 23 planta, seguido de la inmersin de stas en una suspensin de las esporas del hongo por un tiempo de 30 minutos y luego de la siembra en materos con suelo esterilizado.
Aquellos hongos en los cuales no se logr esporulacin, fueron inoculados mediante el mtodo de disco de Agar con micelio. Los discos de Agar con micelio, se cortaron a partir de colonias activas del hongo y luego se depositaron dos discos sobre el haz de la hoja, uno a lado y lado de la nervadura central.
Despus de inoculadas, las plantas fueron cubiertas con una bolsa plstica para mantener condiciones de humedad alta y favorecer la germinacin de las esporas y promover el proceso de penetracin e infeccin de los hongos. Las bolsas fueron mantenidas por tres das y despus se abrieron parcialmente, al quinto da se removieron totalmente y las plantas se dejaron sobre las mesas de la casa de malla. (Figura 1).
Figura 1. Condiciones de inoculacin e incubacin de plntulas de uchuva con cada uno de los patgenos evaluados. A: Detalle del mtodo de inoculacin por disco de Agar; B: Detalle del mtodo de inoculacin por aspersin; C: Plntulas cubiertas con bolsa plstica a manera de cmara hmeda
La evaluacin de aparicin y desarrollo de sntomas en las plantas inoculadas se hizo semanalmente durante 6 semanas.
Trabajo de campo
La fase de campo consisti de dos etapas: una primera etapa de reconocimiento de las enfermedades ms importantes del cultivo, seleccin de las fincas para el muestreo y determinacin del nmero de plantas para conocer la incidencia de cada enfermedad. La segunda etapa correspondi a la toma de muestras de tejido enfermo para corroborar la presencia de cada una de las enfermedades identificadas durante la primera etapa.
El muestreo y evaluacin de las enfermedades reconocidas como ms importantes para el cultivo se hizo sobre el 20% del rea sembrada en cada zona: 14 cultivos 24 correspondiente a 14 fincas en el municipio de La Unin, pertenecientes a productores pequeos y un nico cultivo en el municipio de Santa Elena, el cual pertenece a la empresa Caribbean Exotics, compaa exportadora de fruta.
En cada uno de las fincas productoras del municipio de La Unin se evalu sobre una poblacin de 100 plantas, la incidencia de cada una de las enfermedades previamente reconocidas de acuerdo con el estado fenolgico de la planta. En todos los casos se seleccionaron cultivos que se encontraban en diferentes estados de desarrollo; para este efecto se establecieron las siguientes fases de acuerdo con el estado vegetativo o productivo de las plantas:
Etapa 0: Plntulas de 0 1 mes Etapa 1: Plantas en inicio de produccin Etapa 2: Plantas en plena produccin Etapa 3: Plantas en baja produccin Etapa 4: Frutos en poscosecha
La evaluacin sobre las plantas se hizo determinando sobre el tallo el nmero de ramas, hojas, capachos y frutos afectados por la enfermedad en relacin con los aparentemente sanos o el total de los tejidos de la planta. En el caso de las plantas que presentaron marchitamientos vasculares se midi la cantidad de plantas con los sntomas de la enfermedad sobre las 100 plantas evaluadas. En el cultivo de la finca de propiedad de la empresa Caribbean Exotics, el muestreo se hizo de manera aleatoria en todas las 9000 plantas del cultivo y se midi la incidencia en 1000 de estas plantas, siguiendo la misma metodologa que se utiliz en los cultivos de La Unin.
Resultados y discusiones:
Fase de Reconocimiento
La fase de reconocimiento en las fincas seleccionadas para el estudio dio como resultado la identificacin preliminar de seis posibles enfermedades en hojas, fruto y en planta en general. La sintomatologa asociada a estas enfermedades estuvo caracterizada por: a) Mancha gris de forma angular a redondeada en hojas, con tamaos de 2 a 5 mm, las cuales tienen inicialmente un color verde claro o grisceo, luego la lesin se torna amarilla en el borde y en la parte central se torna de color marrn y con una consistencia seca y quebradiza (Figura 2)
25
A. B. C.
Figura 2. Caractersticas principales de la sintomatologa en hojas y frutos de plantas de uchuva afectadas por mancha gris. A: Sntoma en capacho del fruto; B. Sintomatologa en hojas grado de infeccin severa; C. Sntomas caractersticos en hojas de tres tamaos y edades diferentes.
b) dormidera o marchitamiento vascular en plantas, clorosis general y necrosis de los haces vasculares observados en cortes transversales hechos en la parte basal de los tallos (Figura 3).
A. B. C. Figura 3. Plantas de uchuva afectadas con dormidera o marchitamiento. A: planta presentando el sntoma tpico de dormidera o marchitamiento; B: detalle de un corte transversal en tallo, en el que se observa la necrosis en haces vasculares; C: clorosis y marchitamiento.
c) muerte descendente, caracterizada por manchas necrticas de forma irregular y centro gris en hojas. En los frutos, la enfermedad se inicia en el pednculo y luego avanza hasta necrosarlos completamente (Figura 4). En el envs de las hojas, la lesin presenta el desarrollo de estructuras negras a manera de cuerpos fructferos semejantes a picndios.
Figura 4. Sintomatologa tpica de muerte descendente en frutos. Ntese el desarrollo de manchas necrticas avanzando en el capacho del fruto.
26 d) manchas en hojas de color caf oscuro a negro, forma irregular y borde amarillento. En frutos las manchas son de forma redondeada y presentan anillos concntricos (Figura 5).
A. B. Figura 5. Manchas en hojas y frutos de uchuva. A: manchas de color caf oscuro y anillos concntricos en frutos; B: manchas oscuras en hojas y con halos clorticos.
e) manchas oscuras de color morado en hojas y frutos (Figura 6).
A. B. C.
Figura 6. Sntomas tpicos de mancha morada en hojas y frutos de uchuva. A: manchas en hojas y fruto; B: manchas en fruto y C: detalle de los sntomas en el capacho del fruto.
e) mancha grasienta en frutos, caracterizada por la presencia de reas de aspecto grasoso en el capacho las cuales le dan a este un aspecto parafinado o apergaminado (Figura 7).
Figura 7. Frutos de uchuva con sntomas de Mancha Grasienta en la parte superior del capacho.
27 Muestras representativas de cada una de las posibles enfermedades fueron procesadas en el laboratorio segn se describe en la seccin de materiales y metodologa. La informacin correspondiente a cada muestra se presenta de forma amplia en el Anexo 3.
Aislamiento e identificacin de agentes fitopatgenos
Aislamiento de Bacterias
Las plantas con sntomas de marchitamiento vascular y mancha grasienta fueron procesadas para evaluar la presencia de bacterias asociadas a este tipo de sintomatologa.
De las muestras con sntomas de marchitamiento se obtuvo en su mayora el crecimiento de un hongo de micelio blanco algodonoso y crecimiento rpido. Las muestras con sntomas de mancha grasienta presentaron crecimiento bacteriano en medio AN. Las bacterias resultantes presentaron colonias de color blancas puntiformes mucosas, convexas con borde continuo, superficie lisa. El anlisis de los cultivos puros de stas dio como resultado bacilos muy cortos Gram negativos, KOH positivas este se pudo identificar por medio de reacciones bioqumicas entre las cuales se utiliz Lisina TSI, Citrato, SIM, MRVP, Urea entre otros.
Aislamiento de Hongos
Las muestras con sntomas de dormidera o marchitamiento, mancha gris, muerte descendente, macha foliar y mancha morada fueron procesadas para evaluar la presencia de hongos asociados a este tipo de enfermedades.
La incubacin en cmara hmeda y crecimiento en medio de cultivos de los tejidos con cada una de estas sintomatologas dio como resultado lo siguiente:
Mancha gris en hojas y frutos
Se observo el desarrollo de un crecimiento micelial de color gris sobre las lesiones en hojas y frutos. La observacin al microscopio de los micropreparados del micelio y estructuras reproductivas, indic la presencia de conidias y micelio tpicos del hongo Cercospora sp. Se observan conidioforos de color pardo oscuro que se desarrollan a partir de estromas inmersos en el tejido del capacho del fruto. A partir de los conidioforos se desarrollan conidias hialinas, filiformes o en forma de mazo y con dos o ms septos. 28 Las colonias del hongo en medio de cultivo Agar V8 presentan un crecimiento lento (0.25 cm/da), son compactas, de color blanco cuando jvenes y a medida que maduran se tornan de color gris y una tonalidad palo de rosa hacia el centro de sta. El crecimiento radial es muy bajo y presenta un aspecto abultado o de crecimiento haca arriba (Figura 8).
Figura 8. Colonia tpica de Cercospora sp en medio de cultivo Agar V8
El hongo Cercospora sp. pertenece a la clase Deuteromycetes, Orden Moniliales, Familia Monilicea, gnero Cercospora. En uchuva ha sido reportado por Blanco, (2000) y Moncada (1988) produciendo manchas en forma angular o redonda, de un tamao de 2 a 5 mm, inicialmente son de color verde claro o gris; por el haz el borde de la lesin se torna amarillento y su parte central adquiere un color marrn de aspecto seco y quebradizo.
Marchitamiento vascular o dormidera
Las muestras con sntomas de dormidera o marchitamiento fueron procesadas para evaluar la presencia de hongos asociados a este tipo de enfermedad; adems de los sntomas descritos anteriormente, en el momento de la recoleccin se realizaron cortes en la base del tallo, donde se observ que en los haces vasculares presentaron coloraciones oscuras como consecuencia de la obstruccin de los mismos, por las microconidias y micelios que produce el microorganismo. En medio de cultivo PDA se obtuvo el crecimiento de un hongo con colonias de color blanco con un ligero pigmento rosado perteneciente a la clase Deuteromycete, con dos tipos de conidias (macro y microconidias) hialinas y septadas, micelio hialino y septado, caractersticas que lo ubican en el gnero Fusarium y muy posiblemente en la especie F.oxysporum (Figura 9). Esta enfermedad se registra por primera vez en los cultivos ubicados en la zona de Antioquia y recientemente fue reportado por Forero de La-Rotta (2005) en la zona productora de Cundinamarca y Boyac, ocasionando sntomas similares a los encontrados en este estudio.
29
A. B. Figura 9. Caractersticas microscpicas 40X de Fusarium oxyporum obtenido de la parte basal de tallos y races de uchuva. A. Macroconidias. B. Microconidias y macroconideas.
Las macroconidias son fusiformes y moderadamente curvas, con un tamao de 3 a 5 m, con dos a tres septas, paredes delgadas y una clula basal alongada y una apical atenuada. Las microconidias son ovales, cilndricas, rectas o curvas, unicelulares, sin septos y tienen un tamao de 2.2 - 3.5 m.
Igualmente, el hongo presenta clulas de paredes engrosadas que actan como estructuras de resistencia denominadas clamidosporas, pueden ser terminales o intercalares, globosas, se encuentran solitarias o en pares formadas a partir de la condensacin del contenido de las hifas y las conidias, su tamao vara de 5 a 15 m de dimetro. Con estas estructuras el hongo sobrevive en condiciones ambientales desfavorables y en ausencia de plantas hospedantes.
Las macroconidias y las microconidias de F. oxysporum se pueden encontrar en los vasos del xilema, pero las microconidias son mas predominantes en tejidos infectados.
Microscpicamente el hongo presenta colonias de crecimiento rpido (1 cm/da), con micelio generalmente areo, abundante y algodonoso de color blanco y que luego se torna de color prpura o violeta, tonalidad que tambin es observada en el medio de cultivo (Figura 10).
A. B.
Foto 10. Colonia tpica de de Fusarium oxysporum en medio de cultivo PDA: A: colonia pura; B: colonia no purificada desarrollndose a partir de fragmentos de tallo de uchuva.
30 Muerte descendente
De las muestras de plantas que presentaban sntomas de muerte descendente se aisl un hongo que se clasifico taxonmicamante dentro del genero Phoma sp con colonias de color caf oscuro, crecimiento algodonoso y con una tasa de crecimiento de 0.5 cm/da. El micelio es de color negro con tonalidades grisceas (Figura 11).
Foto 11. Colonia tpica del hongo Phoma sp. Aislado a partir de hojas y frutos de uchuva
A medida que la colonia madura, se observa el oscurecimiento del micelio y el desarrollo de puntos negros distribuidos de forma homognea en el medio.
La observacin al microscopio de micropreparados del hongo, indico la presencia de conidias pequeas unicelulares, hialinas, septadas, de forma elptica a ovalada que surgen de una clula poco diferenciada presente en la cavidad de un picnidio en forma de un brotamiento repetitivo monopolar. Los picndios tienen forma globosa o subglobosa y nacen generalmente solitarios pudiendo estar reunidos en un estroma, son separados, esferoides; pigmentados o hialinos, con paredes delgadas simples o de varias clulas densas, la capa externa forma una pared especializada diferente. Su descripcin corresponde a la citada por Blanco (2000).
El microorganismo tambin se encontr en los capachos del fruto de uchuva; los picndios estn sumergidos en el tejido, son erupentes o con cuello corto que rompen la epidermis y las conidias se desarrollan a partir de conidiforos cortos o rudimentarios. Las fialides son hialinas, indistinguibles de las clulas internas de la pared picnidial. Clulas conidigenas enteroblsticas (sin segmentacin) en forma de botella (Figura 12).
Microscpicamente Phoma sp presenta un crecimiento optimo en el medio de cultivo Agar avena medio en el cual esporul mas rpidamente que en PDA y con una tasa de crecimiento de 0.5 cm/da.
31 Las caractersticas arriba descritas, permitieron ubicar a este hongo dentro del gnero Phoma, perteneciente a la clase Coelomycetes, Orden: Sphaerosipdales, Familia: Sphaeropsidales.
Figura 12. Conidias tpicas del hongo Phoma sp aislado de plantas de uchuva con sntomas de muerte descendente, en un objetivo de 40 X.
Mancha foliar y en frutos
De aquellas plantas con sntomas de manchas foliares y en frutos se obtuvo el crecimiento de un hongo de color grisceo, algodonoso, con un borde blanco y de crecimiento rpido (0.7 mm/da). Microscpicamente se observaron conidias de color marrn, obclavadas u ovoides, multicelulares, con septas transversales y longitudinales. El tamao de las esporas es grande y fcil de observar bajo el microscopio. Los conidiforos son simples o ramificados, septados, con una cicatriz de espora terminal o a veces lateral (Figura 13).
Estas caractersticas permitieron identificar a este hongo en el gnero Alternaria, clase Deuteromycete, perteneciente al grupo semi arborescente. Los conidiforos son altamente ramificados, las conidias son formadas en cadenas ramificadas y su tamao vara entre 30-65 m de largo por 10-15 m de ancho, posee 3-7 septos transversales y 0-3 longitudinales (Figura 13).
A. B. C. Figura 13. Caractersticas de la colonia, conidias y conidioforos tpicos de Alternaria sp. aislada de hojas y frutos de uchuva. (A) Conidia y conidioforo (B) detalle de las conidias de Alternaria; C: colonia del hongo en medio PDA. 32 Mancha morada
De aquellas muestras que presentaban manchas de color morado en hojas y frutos se obtuvo el crecimiento de un hongo con un crecimiento miceliar semialgodonoso superficial en el medio de cultivo PDA; con una coloracin gris claro a blanco en el margen de avance. A medida que la colonia envejece, se observan puntos negros a partir de los cuales se desarrollan masas de esporas de color rosado a salmn (Figura 14 A).
Las esporas son abundantes y vistas al microscopios son hialinas, unicelulares, ovaladas, oblongadas o cilndrica con los extremos redondeados y un tamao que vara entre 7-8 micras y 3-4 micras de ancho (Figura 14 B).
A. B.
Foto 14. Colonia y conidias tpicas de Colletotrichum spp. aislado de hojas y frutos de uchuva. A: Colonia de Colletotrichum sp; B. Esporas y micelio del hongo.
Las caractersticas observadas permitieron ubicar a este hongo dentro del gnero Colletotrichum, divisin Deuteromycota, orden Melanconiales, familia Melanconiaceae.
Evaluacin de medios de cultivo
La evaluacin de medios de cultivo para el crecimiento y esporulacin de los hongos obtenidos de cada muestra indic al medio PDA como el ms ptimo para el crecimiento y esporulacin de los hongos F. oxysporum y Alternaria spp. , el medio Agar V8 result mejor para el crecimiento de Cercospora spp., pero no para su esporulacin, el medio Agar avena result ser el ms ptimo para el crecimiento y esporulacin del hongo Phoma spp. y Agar Marthur fue el medio ms adecuado para el hongo Colleotrichum spp. (Tabla 1)
Tabla 1. Evaluacin de los medios de cultivos PDA, Agar V8, Agar avena y Agar Marthurs en el crecimiento y esporulacin de Fusarium spp., Alternaria spp., Phoma sp, Cercospora sp y Colletotrichum spp. aislados de tejidos de uchuva. 33
Hongo Medio de cultivo Fusarium Oxysporum Agar PDA (Agar, papa, dextrosa) Cercospora sp Agar V8 Alternaria sp Agar PDA(Agar, papa, dextrosa) Phoma sp Agar Avena Colletotrichum sp Agar MRS Medio de cultivo seleccionado para el crecimiento de cada hongo.
Pruebas de patogenicidad:
Material Vegetal
Para obtener las mejores condiciones ambientales que favorecieran el desarrollo de las plantas de uchuva a utilizar en las pruebas de patogenicidad, se construyeron unas estructuras en plstico y PVC. Dentro de cada estructura se colocaron de forma separada las plantas inoculadas con cada uno de los patgenos a evaluar.
Estas estructuras permitieron mantener separados cada uno de los tratamientos y evitaron la contaminacin cruzada entre patgenos, permitiendo adems un mejor desarrollo y crecimiento de las plantas por el incremento de la temperatura dentro de ellas (Figura 15).
Las plantas fueron mantenidas bajo estas condiciones por un periodo de tres meses, tiempo en el cual se hizo la inoculacin. Durante este tiempo las plantas fueron fertilizadas cada 4 das.
Figura 15. Plntulas de uchuva de 60 das de edad, crecidas bajo condiciones de casa de malla en la zona de Santa Elena.
34 Inoculacin de bacterias
La inoculacin de la cepa bacterial obtenida a partir de frutos de uchuva con sntomas de mancha grasienta fue negativa en dos de los ensayos realizados, no hubo desarrollo de los sntomas tpicos de la enfermedad y los frutos mostraron al cabo de 8 das un deterioro visible y el crecimiento de hongos saprofitos.
En un tercer ensayo de inoculacin, se logr el desarrollo de manchas de aspecto grasiento sobre los frutos inoculados. El cliz o capacho del fruto present una consistencia semejante al papiro o al papel parafinado, el fruto no sufri ningn cambio ni present el desarrollo de sntomas asociados con la enfermedad (Figura 16). Bajo las condiciones naturales del cultivo, la bacteria afecta nicamente el capacho del fruto sin afectar ste directamente. Sin embargo, este se constituye en un factor suficiente para el rechazo del mismo y no pasa a ser considerado como ptimo para la exportacin, razn que hace a esta enfermedad una de las ms importantes econmicamente.
A. B. Foto 16. A. Inoculacin artificial de frutos de uchuva con Xanthomonas spp. aislada de frutos con sntomas de mancha grasienta. A: Frutos de uchuva inoculados con la bacteria bajo condiciones de cmara hmeda. B: Detalle de un fruto en el cual se observa el desarrollo de los sntomas de mancha grasienta sobre el capacho.
A partir de los frutos que desarrollaron los sntomas bajo condiciones de inoculacin artificial, se realiz el reaislamiento de la bacteria, obtenindose colonias con las mismas caractersticas morfolgicas descritas inicialmente. Posterior al aislamiento y purificacin de la bacteria, sta fue sometida a una serie de pruebas bioqumicas a fin de confirmar su identidad. Las pruebas realizadas y los resultados obtenidos se indican en la Tabla 2.
El proceso de identificacin mediante pruebas bioqumicas se llev a cabo en los laboratorios de la empresa Agrolab; Asistencia Agroindustrial de la ciudad de Medelln. Los resultados de estas pruebas permitieron determinar las siguientes caractersticas macroscpicas: Colonias blancas puntiformes, de consistencia mucosas, convexas con borde continuo y superficie lisa. Microscpicamente se observaron bacilos muy cortos, 35 Gram Negativos. Las pruebas bioqumicas llevaron a ubicar a la bacteria dentro del gnero Xanthomonas, resultados que concuerdan con lo reportado en la literatura para cultivos de uchuva en el departamento de Antioquia, zona en la cual esta enfermedad no es considerada limitante, ya que solo se presenta de forma espordica en el cultivo.
Tabla 2. Resultado de las pruebas bioqumicas realizadas en cultivos bacteriales obtenidos de frutos de uchuva con sntomas de mancha grasienta.
Tipo de Prueba Respuesta Oxidasa - Gelatinasa + Arg. hidrolasa - Amilasa ND Crec. Amarillo en Agar nutritivo 30 C + Crecimiento mucoide + cido sulfhdrico - Indol - Movilidad + Anaerobiosis - Catalasa + Malonato + Citrato + MRVP -/-/- TSI -/-/- Caseinasa - Simbologa: Positivo: +, Negativo: -, No Determinado: ND.
Pruebas de patogenicidad para hongos
Marchitamiento Vascular
Las plantas inoculadas fueron evaluadas semanalmente durante seis semanas. Los primeros sntomas fueron observados a los seis das en las plantas inoculadas con el hongo F. oxysporum, presentndose en stas prdida de turgencia en las hojas, clorosis, acaparamiento y marchites en comparacin con los controles (Figura 17). El hongo entra en contacto con las races de la planta a travs de su micelio y esporas, estructuras que pueden penetrar los tejidos e invadir las clulas de las raz produciendo 36 una pudricin radicular, luego se mueve hacia el tejido vascular por colonizacin intracelular a los vasos del xilema. Este patgeno coloniza por crecimiento del micelio o por medio del transporte pasivo de microconidias. Como la infeccin progresa, los tallos se palidecen y el xilema es obstruido por toxinas que producen una oxidacin y al realizar en el tallo un corte transversal, este presenta en los haces vasculares una coloracin amarillenta o marrn. Las races tambin presentan pudriciones de coloracin oscura, Fusarium sp, es un habitante natural del suelo, pero en este caso se cre artificialmente esta condicin.
A. B. Figura 17. Plantas de uchuva inoculadas con F. Oxysporum mediante el mtodo de corte del pice de la raz. A: Control (izquierda) y planta inoculada con el hongo (derecha); B: Detalle de una planta inoculada con el hongo, mostrando sntomas severos de marchitamiento y clorosis.
En el departamento de Antioquia no se haba reportado la presencia de F. oxysporum en cultivos de Uchuva, algunos estudios realizados por Corpoica La Selva Zapata (2000), reportan plantas con la misma sintomatologa pero se lo atribuyen a la bacteria Ralstonia solanacearum. En el presente estudio, F. oxysporum estuvo siempre asociado con plantas que presentaban marchitamiento y necrosamiento de los haces vasculares, logrndose aislar de cada una de las plantas evaluadas.
La especie F. oxysporum se caracteriza por atacar diversos tipos de plantas econmicamente importantes en distintos pases en diferentes regiones, causando marchitamientos vasculares y muerte de las plantas; se caracteriza por producir colonias de rpido crecimiento, con una tasa diaria cercana a un centmetro en medio de PDA A 25C, la morfologa de las colonias es muy variable.
Una de las dificultades para evitar su diseminacin consiste en que el hongo coloniza el sistema vascular antes de la expresin de los sntomas externos, esto en cuanto a la propagacin y la otra fuente de diseminacin es el suelo contaminado, en donde el hongo puede sobrevivir muchos aos a travs de las clamidosporas. El agua tambin puede ser un agente de diseminacin del hongo, debido a su capacidad para sobrevivir en ese elemento y por ltimo el aire puede transmitir el patgeno en suelo contaminado. 37 En este caso, la forma de diseminacin ms frecuente es la del suelo, por eso, esta enfermedad es tan limitante ya que su control es muy complejo. La temperatura es uno de los factores ambientales que mayor influencia tiene en el desarrollo de la enfermedad y en la expresin de los sntomas, as como la nutricin de la planta. La temperatura ptima para el desarrollo del patgeno est entre 25 30C. Esta enfermedad segn los productores es la enfermedad ms limitante y preocupante para ellos, ya que no conocen mtodos para controlarla y les causa grandes prdidas econmicas.
Mancha gris en hojas y frutos
Las plantas inoculadas con el hongo Cercospora sp presentaron los primeros sntomas de la enfermedad a los 15 das despus de la inoculacin. Los sntomas fueron inicialmente observados como manchas pequeas redondeadas y bien delimitadas, inicialmente con una coloracin griscea y posteriormente se tornaron de color marrn claro y halos concntricos. A medida que avanza la enfermedad, esta causa el secamiento total de las hojas y finalmente su muerte, observndose en este momento el desarrollo de puntos de color negro y la presencia de micelio de color gris sobre las lesiones, lo que corresponde a conidiforos y conidias desarrolladas en el envs de la hoja (Figura 18).
A. B. Figura 18. Hojas de uchuva mostrando el desarrollo de sntomas de la enfermedad mancha gris. A: Sntomas iniciales; B: Sntomas avanzados en los que se observan las lesiones bien desarrolladas con anillos concntricos.
La infeccin se inici a partir de esporas que germinaron sobre los tejidos, al parecer el tubo germinativo penetra a las hojas, por la apertura de los estomas, posteriormente el hongo se desarroll sobre el parnquima foliar.
Bajo condiciones de campo, las lesiones aparecen especialmente despus de una temporada de lluvia, en la cual la temperatura oscila entre 17 y 20C. La diseminacin de las conidias se lleva a cabo por corrientes de aire y al ser depositadas sobre las hojas hmedas se da inicio al proceso de infeccin. Se observa adems, que la infeccin 38 inicia de abajo hacia arriba y de adentro hacia fuera, en el follaje ms viejo afectando los brotes de las ramas, el follaje y los capachos. Los capachos severamente afectados pueden caer progresivamente hacia los extremos de las ramas, causando la infeccin en stas y finalmente su muerte.
La enfermedad causada por Cercospora sp se desarrollo mejor en tiempo clido y con alta humedad relativa, la diseminacin de los conidios se lleva a cabo por corrientes de aire y al ser depositados en las hojas hmedas, se concluy que el las lesiones aparecen especialmente despus de las pocas lluviosas, pero los agricultores opinan que esta enfermedad es muy controlable con funguicidas aplicados a tiempo y que no representa para ellos un problema mayor.
Muerte descendente
El hongo aislado de plantas con sntomas de muerte descendente fue identificado como Phoma spp. y fue encontrado afectando hojas y frutos de uchuva, por lo tanto una vez fue aislado y purificado se llevaron a cabo las pruebas de patogenicidad utilizando plntulas y frutos desprendidos.
Los resultados de la inoculacin en planta fueron negativos en los dos ensayos realizados, a los 20 das despus de la inoculacin, las plantas presentaron un amarillamiento general pero no hubo desarrollo de lesiones u otro sntoma tpico sobre hojas y tallos. En fruto, la enfermedad se observ cuatro das despus de la inoculacin, observndose manchas circulares de color pardo grisceo, en contraste con los controles los cuales se encontraban totalmente sanos. A los siete das se hizo una nueva evaluacin y se observ que las manchas se tornaron de mayor tamao y de un color pardo oscuro, presentando adems el desarrollo de picndios (Figura 19).
Las primeras lesiones desarrolladas en el fruto se fueron extendiendo hasta tomar gran parte de este, produciendo lceras oscuras.
A. B. 39 Foto 19. Frutos de uchuva presentando el desarrollo de sntomas causados por el hongo Phoma spp. A: Control sin desarrollo de sntomas; B: Frutos mostrando lesiones iniciales de la enfermedad y un ligero amarillamiento producido por el ataque del hongo.
Phoma sp tienen una mayor diseminacin cuando se presenta una alta humedad relativa y una temperatura baja, se puede decir que es la menos severa y se puede combatir con fungicidas sin que cause mayores daos en el cultivo.
Los hongos Alternaria sp y Colletotrichum sp aislados a partir de hojas y frutos con sntomas de mancha foliar y mancha morada respectivamente, fueron igualmente inoculados sobre plntulas y frutos de uchuva a fin de probar su patogenicidad. Los resultados de estas pruebas fueron negativos ya que no se logr el desarrollo de sntomas de estas enfermedades en las plantas y frutos inoculados, lo que llev a concluir que muy posiblemente estos hongos estn presentes como saprfitos, colonizando los tejidos de hojas y frutos atacados previamente por hongos o bacterias fitopatgenas.
En las pruebas con Alternaria sp las plntulas inoculadas y los controles se tornaron de un color morado. Las plntulas inoculadas con Colletotrichum sp, solo presentaron una clorosis general (Figura 20).
A. B.
Foto 20. Plntulas de uchuva inoculadas con los hongos Alternaria spp. y Colletotrichum spp. A: Plantas inoculadas con el hongo Alternaria spp. mostrando sntomas de coloracin morada en hojas; B: Plntulas inoculadas con Colletotrichum spp. mostrando clorosis general.
Trabajo de campo:
Para la estimacin de los porcentajes de incidencia y la comparacin de las dos localidades se aplicaron tablas de contingencia, enfrentando la ubicacin con la presencia de las enfermedades, para cada estrato o piso vegetal, enfermedad, y etapa de desarrollo del cultivo. Se parti de la hiptesis nula de homogeneidad en los niveles de incidencia, segn lo cual, al nivel poblacional, los dos municipios tienen la misma incidencia de las enfermedades evaluadas, y las diferencias observadas se deben al efecto del muestreo. Esta hiptesis se rechaz si la probabilidad de la prueba X2 fue 40 menor o igual a 0,05 (nivel de significancia), en cuyo caso se concluy que la incidencia era diferente entre las dos localidades al nivel poblacional.
Resultados
En la Tabla 3 se presentan los resultados de incidencia de las enfermedades para cada una de las enfermedades, por ubicacin y estado de desarrollo del cultivo, en cada una de las estructuras observadas.
En la Tabla 4 se presentan los resultados de la aplicacin de las pruebas de Chi- cuadrado,
Los resultados del anlisis se presentan por separado para cada una de las estructuras vegetales analizadas. Se observa que a nivel de follaje predomina Cercospora y Fusarium. Las diferencias entre localidades por el nivel de incidencia de estas enfermedades se observa en los estados 3 y 4, segn lo cual en Santa Elena se present mayor incidencia en general para las dos enfermedades. Fusarium se manifiesta en toda la planta, pero Cercospora en los dos estratos bajos.
En el capacho se presentan especialmente Cercospora, Phoma y Xanthomonas. Tanto Cercospora como Poma se presentan con diferencias significativas entre municipios en los estados 3 y 4 y en los estratos bajos (1 y 2), y fue en el municipio de Santa Elena donde se hizo mayor la incidencia de estas enfermedades con respecto a la Unin. Las diferencias por el ataque de Xanthomonas se presentaron en todos los estados de desarrollo del cultivo y en los estratos altos de la planta (2 y 3). Fue en la Unin donde la incidencia de Xanthomonas se hizo mayor.
Para el efecto de los tallos, ramas y ramitas, los resultados fueron similares, en cuanto que se observ la presencia de Fusarium con diferencias entre localidades para todos los estados de desarrollo del cultivo y a lo largo de toda la planta. Fue en Santa Elena donde los niveles de incidencia se hicieron mayores.
41
Tabla 3. Niveles de incidencia de diferentes enfermedades que atacan el cultivo de Uchuva, en dos ubicaciones y cinco estados de desarrollo de las plantas
Enfermedad Ubicacin Estado Hoja Capacho Tallo Rama Ramita Cercospora La Union La Union 0 Cercospora La Union 1 19,33 21,33 0,00 0,00 0,00 Cercospora La Union 2 44,67 44,67 0,00 0,00 0,00 Cercospora La Union 3 37,33 35,33 0,00 0,00 0,00 Cercospora La Union 4 45,33 43,33 0,00 0,00 0,00 Cercospora Santa Elena 0 1,33 1,33 0,00 0,00 0,00 Cercospora Santa Elena 1 21,33 19,33 0,00 0,00 0,00 Cercospora Santa Elena 2 39,33 38,00 0,00 0,00 0,00 Cercospora Santa Elena 3 62,67 62,67 0,00 0,00 0,00 Cercospora Santa Elena 4 63,33 64,00 0,00 0,00 0,00 Phoma La Union 0 Phoma La Union 1 0,00 18,00 0,00 0,00 0,00 Phoma La Union 2 0,00 32,67 0,00 0,00 0,00 Phoma La Union 3 0,00 24,00 0,00 0,00 0,00 Phoma La Union 4 0,00 31,33 0,00 0,00 0,00 Phoma Santa Elena 0 0,00 0,67 0,00 0,00 0,00 Phoma Santa Elena 1 0,00 15,33 0,00 0,00 0,00 Phoma Santa Elena 2 0,00 27,33 0,00 0,00 0,00 Phoma Santa Elena 3 0,00 38,67 0,00 0,00 0,00 Phoma Santa Elena 4 0,00 41,33 0,00 0,00 0,00 Fusarium La Union 0 Fusarium La Union 1 34,00 0,00 34,00 34,00 34,00 Fusarium La Union 2 54,00 0,00 54,00 54,00 54,00 Fusarium La Union 3 74,00 0,00 74,00 74,00 74,00 Fusarium La Union 4 89,00 0,00 89,00 89,00 89,00 Fusarium Santa Elena 0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Fusarium Santa Elena 1 37,00 0,00 37,00 37,00 37,00 Fusarium Santa Elena 2 63,00 0,00 63,00 63,00 63,00 Fusarium Santa Elena 3 97,00 0,00 97,00 97,00 97,00 Fusarium Santa Elena 4 100,00 0,00 100,00 100,00 100,00 Xanthomonas La Union 0 Xanthomonas La Union 1 0,00 7,33 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas La Union 2 0,00 15,33 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas La Union 3 0,00 19,33 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas La Union 4 0,00 28,67 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas Santa Elena 0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas Santa Elena 1 0,00 1,33 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas Santa Elena 2 0,00 2,67 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas Santa Elena 3 0,00 3,33 0,00 0,00 0,00 Xanthomonas Santa Elena 4 0,00 4,67 0,00 0,00 0,00
42
Tabla 4. Resultados de la prueba Ji-cuadrado (probabilidad o valor P) para la comparacin de la incidencia de enfermedades en las hojas de las plantas de uchuva, por estado de desarrollo del cultivo y por tercio de la planta
43 Tabla 5. Comparacin de los niveles de incidencia de enfermedades del capacho de la uchuva por estado de desarrollo del cultivo y tercio de la planta
Tabla 6. Comparacin de los niveles de incidencia de enfermedades del tallo, ramas y ramitas de la uchuva por estado de desarrollo del cultivo y tercio de la planta
Enfermedad Estado Tercio Probabilidad Fusarium 1 1 0,6575 Fusarium 1 2 0,6575 Fusarium 1 3 0,6575 Fusarium 2 1 0,1965 Fusarium 2 2 0,1965 Fusarium 2 3 0,1965 Fusarium 3 1 0,0001 Fusarium 3 2 0,0001 Fusarium 3 3 0,0001 Fusarium 4 1 0,0006 Fusarium 4 2 0,0006 Fusarium 4 3 0,0006 44 Valores menores o iguales a 0,05 indican diferencias significativas en la incidencia entre las dos localidades.
Conclusiones:
En el departamento de Antioquia, ms especficamente en el Municipio de la Unin y en el corregimiento de Santa Elena, zonas en las cuales se realiz el estudio, las enfermedades ms limitantes en el cultivo de uchuva son el marchitamiento vascular, causado por F.oxysporum, la mancha gris, causada por Cercospora sp y la muerte descendente o mal de tierra, causado por Phoma sp. Presentando una menor incidencia la enfermedad de la mancha grasienta ocasionada por Xanthomonas spp.
Las tres enfermedades encontradas se consideran de gran importancia econmica, debido a que el ataque se da en frutos incidiendo de forma directa en su calidad y por consiguiente en la posibilidad de su exportacin.
El marchitamiento vascular ocasionado por el hongo F. oxysporum es una enfermedad limitante desde que inicia la produccin de la planta a los 4 o 5 meses y hasta los 10 meses, perodo en el cual sta baja.
La mancha gris ocasionada por el hongo Cercospora sp y la muerte descendente causada por Phoma sp son enfermedades que se presentan en cualquier fase de desarrollo de la planta de uchuva, especialmente despus de los tres meses de edad, siendo ms severas en las pocas de alta pluviosidad.
Con esta investigacin se logro obtener informacin actualizada y detallada de los agentes causales de enfermedades que afectan los cultivos de uchuva (P. peruviana) en el departamento de Antioquia y su incidencia de acuerdo con el estado de desarrollo de las plantas. Los resultados obtenidos permitirn a los agricultores y productores de uchuva, trazar un plan de manejo que integre diferentes medidas de control para lograr una mayor productividad y calidad del producto dedicado en su totalidad a los mercados internacionales.
El desconocimiento de estas enfermedades y sus causas por parte de los productores y tcnicos del cultivo en esta regin fue evidente. Aspecto que da una gran importancia a este estudio, ya que permite tener un conocimiento general de la problemtica fitosanitaria del cultivo y transmitir ste a los agricultores para que sean aplicadas las medidas ms adecuadas para su control. 45
Se concluye que en cuanto a la incidencia en Santa Elena se present mayor incidencia en general para Fusarium. Cercospora, Phoma y Xanthomonas.
F. oxysporum se manifiesto en toda la planta, encambio Cercospora en los dos estratos bajos; y en el capacho se presentan especialmente Cercospora, Phoma y Xanthomonas.
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47
Anexos:
Anexo 1. Formato para el diagnstico de enfermedades en el cultivo de uchuva (Physalis peruviana L.)
Finca Fecha:
Nombre del productor Ubicacin de la finca Telfono
Condiciones climticas recientes Altitud Temperatura promedio
Fecha de recoleccin de la muestra Fecha de recepcin de la muestra
Nombre de la Finca Vereda Municipio Depto
Tipo de suelo o sustrato Arenoso Arcilloso Franco
Libre exposicin Hidropona Invernadero Otro
Que se enva? Suelo Raz Tallo Hojas Flores Fruto Planta completa
Nombre del cultivo Nombre de la variedad Distancia de siembra Tipo de Asocio Edad
48
Descripcin de los sntomas
Que enfermedades ha habido en el lote?
Que cultivo exista antes en el lote
Que enfermedades present este?
Topografa del lote Plano Pendiente Quebrado
rea o nmero de plantas cultivadas
rea o nmero de plantas con el problema (%)
Productos aplicados en el cultivo Nombre Dosis Fecha de Aplicacin
Observaciones de cmara hmeda?
Observacin de colonias en medio de cultivo?
Observaciones microscpicas
Microorganismo
49
INTRODUCCION......................................................................................................................................... 7 MARCO TEORICO...................................................................................................................................... 8 Generalidades ............................................................................................................................................ 8 Importancia econmica............................................................................................................................. 9 Taxonoma ................................................................................................................................................ 10 Propagacin ............................................................................................................................................. 10 Agroecologa ............................................................................................................................................ 10 Clima.......................................................................................................................................................... 11 Produccin ............................................................................................................................................... 11 Enfermedades limitantes del cultivo de uchuva................................................................................... 12 Mancha Gris.............................................................................................................................................. 12 Muerte descendente ................................................................................................................................ 13 Marchitez de las ramas............................................................................................................................ 13 Esclerotiniosis.......................................................................................................................................... 13 Mal del semillero ...................................................................................................................................... 14 Moho gris .................................................................................................................................................. 14 Carbn de la hoja: .................................................................................................................................... 14 Enfermedades de poscosecha ............................................................................................................... 15 Mancha grasienta..................................................................................................................................... 15 Marchitez bacterial ................................................................................................................................... 16 Ojo de gallo............................................................................................................................................... 16 Los nemtodos como patgenos........................................................................................................... 16 Nemtodos formadores de ndulos en uchuva.................................................................................... 17 Formulacin del problema y justificacin: ............................................................................................ 18 Formulacin del problema: ..................................................................................................................... 18 Justificacin de la investigacin: ........................................................................................................... 18 Objetivos: .................................................................................................................................................. 19 Objetivo general: ...................................................................................................................................... 19 Objetivos especficos: ............................................................................................................................. 19 Materiales y mtodos............................................................................................................................... 19 Evaluacin preliminar de la zona de estudio ........................................................................................ 19 Colecta y procesamiento de muestras en campo ............................................................................... 20 Aislamiento e identificacin de Agentes Fitopatgenos ..................................................................... 21 Aislamiento de Bacterias ........................................................................................................................ 21 Aislamiento de Hongos ........................................................................................................................... 21 Pruebas de patogenicidad de bacterias y hongos: .............................................................................. 22 Preparacin de inculo e inoculacin de bacterias ............................................................................. 22 Preparacin de inculo e inoculacin de hongos ................................................................................ 23 Inoculacin ............................................................................................................................................... 23 Trabajo de campo .................................................................................................................................... 24 Resultados y discusiones: ...................................................................................................................... 25 Fase de Reconocimiento......................................................................................................................... 25 Aislamiento e identificacin de agentes fitopatgenos....................................................................... 28 Aislamiento de Bacterias ........................................................................................................................ 28 Aislamiento de Hongos ........................................................................................................................... 28 Mancha gris en hojas y frutos ................................................................................................................ 28 Marchitamiento vascular o dormidera................................................................................................... 29 Muerte descendente ................................................................................................................................ 31 Mancha foliar y en frutos......................................................................................................................... 32 Mancha morada........................................................................................................................................ 33 Evaluacin de medios de cultivo ........................................................................................................... 33 Pruebas de patogenicidad: ..................................................................................................................... 34 Material Vegetal ........................................................................................................................................ 34 Inoculacin de bacterias ......................................................................................................................... 35 50 Pruebas de patogenicidad para hongos................................................................................................ 36 Marchitamiento Vascular......................................................................................................................... 36 Mancha gris en hojas y frutos ................................................................................................................ 38 Muerte descendente ................................................................................................................................ 39 Trabajo de campo: ................................................................................................................................... 40 Conclusiones: .......................................................................................................................................... 45 Referencias: .............................................................................................................................................. 46 Anexos: ..................................................................................................................................................... 48 Anexo 1. Formato para el diagnstico de enfermedades en el cultivo de uchuva ........................... 48 (Physalis peruviana L.) ............................................................................................................................ 48
51 DIAGNSTICO DE LA PROBLEMTICA ACTUAL DE ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE UCHUVA Physalis peruviana L. EN EL DEPARTAMENTO DE ANTIOQUIA Luz Angela Silva Tamayo Introduccin La uchuva (Physalis peruviana L.) es una especie frutcola que se ha venido destacando como un producto de exportacin por excelencia. El xito de este producto en las exportaciones : manejo oportuno de todos los factores productivos cumplimiento de las exigencias que los mercados imponen, como el manejo integrado de plagas y enfermedades. Los agricultores tienen que afrontar durante la etapa de produccin con el manejo de las enfermedades ocasionadas por hongos, bacterias, nematodos. Este proyecto busca identificar las principales enfermedades en los cultivos de Uchuva ubicados en la zona del departamento de Antioquia. Generalidades La uchuva (P. peruviana) es originaria del Per (Legge, 1974), aunque existen indicios de que proviene del Brasil y fue aclimatada en los altiplanos del Per y Chile (CRFG, 1997). Es una planta silvestre o semi-silvestre que crece entre Colombia y Chile a una altura entre 1500 y 3000 m.s.n.m; Actualmente es producida en Colombia y ocupa el primer lugar en la produccin mundial seguido por Sudfrica y Kenya Importancia econmica La mayor rea cosechada de uchuva en Colombia Cundinamarca, con 267 hectreas, En el ao 2000 se iniciaron los registros de los cultivos de uchuva en los departamentos de Antioquia y Boyac, con reas de 28 y 15 hectreas, respectivamente, que equivalen (Fischer, 2000). La uchuva (Physalis peruviana L.) es una especie frutcola que se ha venido destacando como un producto de exportacin por excelencia, ocupando en la actualidad el segundo lugar, despus del banano, en las exportaciones de frutas colombianas con un promedio de 600 ha cultivadas con gran tendencia a crecer y con ingresos de US$ 5.000.000 en exportaciones. Taxonoma pertenece a la familia de las Solanceas y al gnero Physalis, cuenta con ms de ochenta variedades que se encuentran en estado silvestre y que se caracterizan porque sus frutos estn encerrados dentro de un cliz acreciente o capacho. Propagacin Las formas mas conocidas para reproducir la uchuva son: la va sexual, en donde se emplean semillas; y la va asexual, que involucra diferentes mtodos y partes de la planta. (Almanza, 2000). La mejor va reproductiva es por semilla la cual vara en su tiempo de germinacin dependiendo de la forma de obtencin, almacenamiento y tratamientos a que sea sometida (Bernal, 1965). Agroecologa Suelo: Para un buen desarrollo de la planta, los suelos que han mostrado mejores resultados son aquellos que poseen una estructura de tipo granular y una textura arenoarcillosa. El suelo donde se desarrolla la uchuva debe ser rico en elementos nutritivos con buenos contenidos de Nitrgeno, fsforo y Potasio, adems buen contenido de elementos menores y un pH que puede oscilar entre 5,7 y 7,0. Clima En Colombia la uchuva prefiere sitios entre 1800 y 2800 m.s.n.m. con una temperatura promedio anual entre los 13 y 18 C, cuando es muy alta puede afectar la floracin y fructificacin. La precipitacin debe oscilar entre 1000 a 2000 mmbien distribuidos a lo largo del ao, con una humedad relativa del 70 al 80%. Produccin Desde el transplante hasta la primera cosecha transcurren en promedio 90 das, dependiendo de la altitud; en zonas ms altas este perodo es mas largo. Una vez se inicia la cosecha, la produccin de uchuva en Colombia es continua a lo largo del ao. Enfermedades limitantes del cultivo de uchuva Mancha Gris La enfermedad conocida como mancha gris de hojas y cliz es causada por el hongo Cercospora sp. y se presenta con mayor intensidad en pocas de alta humedad y se considera como la principal enfermedad foliar de la uchuva. Muerte descendente La enfermedad es ocasionada por el hongo Phoma sp. que se puede localizar en los tallos, hojas, capachos y frutos de las plantas en cualquier estado de desarrollo. En las hojas los primeros sntomas se presentan como manchas oscuras muy pequeas, que ocurren cuando se presenta alta humedad y temperatura baja, luego las lesiones se pueden unir dando origen a grandes manchas necrticas de forma irregular (Zapata, 2002). Esclerotiniosis Tambin se conoce con el nombre de moho blanco, pudricin blanca algodonosa, enfermedad del esclerocio y pudricin dura (Blanco, 2000). Es causada por el hongo Sclerotinia sclerotiorum, se manifiesta por la presencia de lesiones de apariencia hmeda, con reas de tejido decolorado que se vuelven de color plomizo-marrn y estn cubiertas por un micelio blanco algodonoso, presente en diferentes partes de la planta pero con mas frecuencia en el tallo principal a nivel del cuello de la planta (Blanco, 2000). Mal del semillero Los hongos, Pythium sp., Rhizoctonia sp. y Fusarium sp, producen sntomas muy similares en cualquiera de las fases de desarrollo de la plntula, sin embargo al parecer el primero de ellos es el ms importante (Zapata, 2002). el sntoma mas comn es la pudricin de las races y/o de los tallos, sin embargo tambin se presenta amarillamiento y necrosis de las plntulas, acompaadas de depresiones en la base de los tallos. Moho gris Agente causal Botrytis sp, causan sntomas que consisten e manchas necrticas de forma irregular que al colocarlos en condiciones de cmara hmeda desarrollan un micelio de color gris, que puede cubrir completamente el fruto; tambin afecta eventualmente las hojas. (Zapata, 2002). Carbn de la hoja: El agente causal es atribuido al hongo Entyloma australe Schlechtendahl. registrado desde 1975 por Molina y recientemente evaluado en campo por Forero de La Rotta et all en el 2005. Las lesiones ocasionadas por este hongo en hojas, se inician con manchas circulares o angulares clorticas y bordes definidos. conforme el microorganismo avanza en el tejido vegetal, la mancha toma una coloracin caf Mancha grasienta El organismo causal es posiblemente Xanthomonas sp. no se conoce el mecanismo de diseminacin de la enfermedad, ni los factores climticos favorables para su desarrollo. El dao consiste en la presencia de manchas pequeas que en pocos das se tornan grandes y decoloran el tejido dando la apariencia de papel parafinado o engrasado. El patgeno no afecta el fruto, pero deteriora su apariencia reduciendo la calidad Marchitez de las ramas A pesar de que Moncada en 1988 menciona que esta enfermedad es muy similar a la muerte descendente, atribuye su causa a complejo fungoso, de donde se han aislado los hongos Gloesporium sp y Phoma sp; sin embargo Forero de la Rotta et all en el 2005 atribuye como agente causal del marchitamiento y muerte de las plantas, al microorganismo Fusarium oxysporum Schlechtendahl. Marchitez bacterial El organismo causal Ralstonia solanacearum Schlechtendahl. (Smith) Yabunchi et al. El sntoma de la enfermedad en condiciones de campo, consiste en la marchitez de la planta, despus de tres o cuatro das calurosos los tejidos se tornan amarillos y luego se mueren. Al realizar un corte del tallo de plantas fuertemente afectadas por la enfermedad se pueden observar rayas angostas de color oscuro que corresponden a los haces vasculares infectados (Zapata, 2002). Formulacin del problema: El departamento de Antioquia es una de las zonas productoras de uchuva importantes en Colombia y debido a la carencia de informacin actualizada sobre problemas fitosanitarios, se realizo la evaluacin de los agentes causales y la incidencia de estos, haciendo referencia a la importancia que desde el punto de vista econmico estn ocasionando las enfermedades en uchuva J ustificacin de la investigacin: Una de las zonas productoras de uchuva en Colombia es la regin de Antioquia principalmente los municipios de Santa Elena y La Unin: la informacin que se tiene es muy poca y no es actualizada. Este trabajo se centr en el estudio de los diferentes agentes causales de enfermedades en la uchuva, y en conocer su incidencia de acuerdo con el estado de desarrollo de las plantas. Los nemtodos como patgenos La importancia econmica de los nemtodos en el cultivo de uchuva, no solo se debe a la amplia distribucin eco-geogrfica como fauna nativa del suelo, sino tambin, a que en el sitio donde se inicia el ataque se convierte en puerta de entrada para hongos, bacterias y virus que pueden llegar a causar daos mas severos que aquellos ocasionadas por el nemtodo mismo (Blanco, 1992). Objetivos Objetivo general: Conocer las principales enfermedades que se presentan en los cultivo de uchuva (Physalis peruviana L.) localizados en la zona productora de Antioquia y su relacin con el estado fenolgico de las plantas Objetivos especficos: Conocer la etiologa de los agentes causales de las enfermedades y describir los sntomas de las enfermedades ocasionadas por hongos, bacterias y nemtodos desde semillero, hasta poscosecha. Demostrar la patogenicidad de los microorganismos aislados. Conocer la incidencia de las enfermedades de acuerdo con el estado fenolgico de las plantas. Localizacin del Estudio La fase de reconocimiento y anlisis del estado fitosanitario de los cultivos de uchuva, se llevo a cabo en 14 fincas productoras de los municipios de La Unin y en el corregimiento de Santa Elena, Departamento de Antioquia. El municipio de La Unin, est localizado a una altura de 2500 m.s.n.m., tiene una temperatura media de 13C y la precipitacin media anual es de 2000 mm. El municipio de Santa Elena presenta una altitud de 2500 m.s.n.m; con una temperatura media aproximada de 18-20C. El proyecto se realizo en tres etapas: una primera etapa de reconocimiento de las enfermedades ms importantes del cultivo, aislamiento identificacin y pruebas de patogenicidad del agente causal de cada una, seleccin de las fincas para el muestreo. La segunda etapa correspondi a la toma de muestras de tejido enfermo para corroborar la presencia de cada una de las enfermedades identificadas durante la primera etapa . la tercera en la determinacin del nmero de plantas para conocer la incidencia de cada enfermedad por estado fonolgico de la planta. Materiales y mtodos Aislamiento de Bacterias En los casos en los cuales se sospech enfermedad de origen bacteriano, de los rganos afectados se tom una porcin de tejido que comprenda una zona enferma y sana. El tejido fue luego desinfestado en hipoclorito de sodio al 1% por un tiempo de 2 minutos luego se lavo con agua destilada estril. La muestra se deposit sobre una gota de agua estril en un portaobjetos previamente flameado y se macer. La suspensin resultante, se dejo en reposo por 10 minutos y luego se sembr en medio agar nutritivo (AN), utilizando un estriado por agotamiento de tal manera que permitiera una dilucin de las bacterias presentes y el desarrollo de colonias individuales. Las cajas de Petri se incubaron a una temperatura de 25-28oC por un tiempo de 24 a 48 horas. Transcurrido el tiempo de incubacin, se tomaron las colonias individuales y se repicaron nuevamente en AN utilizando la misma tcnica. Una vez asegurada la pureza de las colonias bacterianas, estas se almacenaron a 4C en viales con agua destilada estril. Cada cultivo bacteriano fue luego caracterizado mediante una prueba de tincin de Gram, KOH al 3% y observacin de las caractersticas macro y microscpicas tales como: color de la colonia, aspecto y tiempo de crecimiento. Aislamiento de Hongos Las muestras que presentaban sntomas de marchitamiento vascular, manchas foliares o con evidentes signos de enfermedad causada por hongos, se incubaron durante 3-6 das en cmaras hmedas, para estimular la esporulacin y el desarrollo de estructuras reproductivas y vegetativas que permitieran la identificacin de los hongos presentes. Simultneamente,se hizo aislamiento e identificacin de los hongos de cada una de las muestra con sntomas de posibles enfermedades fungosas. El aislamiento consisti en cortar porciones de tejido sano y enfermo de aproximadamente 0.5 cm, desinfestacin en etanol al 70% por 1 minuto y en hipoclorito de sodio al 1% por dos minutos, seguido de lavado en agua destilada estril y siembra en medio de cultivo PDA Papa Dextrosa Agar (PDA acidificado). Los tejidos aislados se dejaron en incubacin a una temperatura de 25- 28C, por un tiempo de 5 a 10 das y se efectuaron revisiones peridicas a fin de evidenciar caractersticas micro y macroscpicas de los hongos resultantes. Posteriormente, las colonias obtenidas se purificaron mediante la siembra de un bloque de Agar con micelio en medio PDA acidificado, obtenido a partir del borde de la colonia desarrollada. Una vez purificados los hongos, cada uno se almaceno en papel filtro a una temperatura de 4C. Extraccin de nematodos Para la extraccin de nemtodos se utiliz la tcnica del Embudo de Baermann en combinacin con el empleo de tamices para la separacin de huevos y estados juveniles de los nematodos presentes en la muestra. Este ensayo se llevo a cabo en Agrolab; Asistencia Agroindustrial de la ciudad de Medelln. Pruebas de patogenicidad Para las pruebas de patogenicidad se utilizaron plntulas de uchuva de tres meses de edad y frutos verdes de la variedad usada por los productores de la zona. Las inoculaciones se llevaron a cabo en la casa de malla de la Unidad Experimental Paysand perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln, localizada en el corregimiento de Santa Elena, bajo una temperatura promedio de 18 a 20 y humedad relativa alta, adems se sometieron a condiciones de cmara hmeda. Preparacin de inculo e inoculacin de bacterias Para la preparacin del inculo, cada bacteria fue crecida en medio AN por un periodo de 48 horas y una temperatura de 25 - 28 C. Con los cultivos resultantes se prepararon suspensiones acuosas. la suspensin resultante se prepar una dilucin 1:10 y sta se utiliz como solucin de trabajo para la inoculacin. La inoculacin se hizo mediante aspersin de la suspensin bacteriana en 15 frutos de uchuva. Una vez inoculados los frutos con capacho, se colocaron en una caja plstica con tapa y acondicionada con una rejilla y agua destilada en el fondo, para garantizar condiciones de humedad. Las cajas con los frutos se incubaron a temperatura ambiente 25 - 28 C. por un perodo de 14 das, haciendo observaciones cada 3 das. Una vez identificado el gnero bacteriano, se realizo una caracterizacin final e identificacin de gneros y especies por medio de reacciones bioqumicas y crecimiento en medios selectivos y especficos. Preparacion del inoculo La preparacin de inculo se hizo a partir de cultivos de cada hongo crecidos por 10 das en el mejor medio para esporulacin de cada uno de ellos. Se prepararon suspensiones acuosas de micelio y/o esporas mediante la adicin a cada caja petri de 100 mililitros de agua destilada ms 0.1% de tween 20, seguido de la remocin del micelio y las esporas con un portaobjeto estril y filtracin de la solucin resultante a travs de un pedazo de muselina. Inoculacin En el caso de patgenos foliares y del fruto, la inoculacin se hizo por aspersin con un atomizador plstico de la suspensin acuosa de esporas. Para los patgenos de la raz, el mtodo de inoculacin consisti en hacer un corte en las puntas de las races de cada planta, seguido de la inmersin de stas en una suspensin de las esporas del hongo por un tiempo de 30 minutos y luego de la siembra en materos con suelo esterilizado. Aquellos hongos en los cuales no se logr esporulacin, fueron inoculados mediante el mtodo de disco de Agar con micelio. Los discos de Agar con micelio, se cortaron a partir de colonias activas del hongo y luego se depositaron dos discos sobre el haz de la hoja, uno a lado y lado de la nervadura central. Despus de inoculadas, las plantas fueron cubiertas con una bolsa plstica para mantener condiciones de humedad alta y favorecer la germinacin de las esporas y promover el proceso de penetracin e infeccin de los hongos. Resultados Mancha gris: Manchas de forma angular a redondeada en hojas, con tamaos de 2 a 5 mm, las cuales tienen inicialmente un color verde claro o grisceo, luego la lesin se torna amarilla en el borde y en la parte central se torna de color marrn y con una consistencia seca y quebradiza. Mancha gris Se observo el desarrollo de un crecimiento micelial de color gris sobre las lesiones en hojas y frutos. Las conidias son hialinas, filiformes o en forma de mazo y con dos o ms septos. Prueba de patogenicidad Las plantas inoculadas presentaron los primeros sntomas de la enfermedad a los 15 das despus de la inoculacin. manchas pequeas redondeadas y bien delimitadas, inicialmente con una coloracin griscea y posteriormente se tornaron de color marrn claro y halos concntricos. Colonia de Cercospora sp Dormidera o marchitamiento vascular en plantas Se observo clorosis general y necrosis de los haces vasculares observados en cortes transversales hechos en la parte basal de los tallos Dormidera o marchitamiento vascular en plantas Colonias de color blanco con un ligero pigmento rosado perteneciente a la clase Deuteromycete, con dos tipos de conidias (macro y microconidias) hialinas y septadas, micelio hialino y septado, caractersticas que lo ubican en el gnero Fusarium y muy posiblemente en la especie F.oxysporum Pruebas de patogenicidad Los primeros sntomas fueron observados a los seis das en las plantas inoculadas con el hongo F. oxysporum, presentndose en stas prdida de turgencia en las hojas, clorosis, acaparamiento y marchites en comparacin con los controles En el departamento de Antioquia no se haba reportado la presencia de F. oxysporum en cultivos de Uchuva, algunos estudios realizados por Corpoica La Selva Zapata (2000), reportan plantas con la misma sintomatologa pero se lo atribuyen a la bacteria Ralstonia solanacearum. En el presente estudio, F. oxysporum estuvo siempre asociado con plantas que presentaban marchitamiento y necrosamiento de los haces vasculares, logrndose aislar de cada una de las plantas evaluadas. Colonia de Fusarium Muerte descendente Se caracterizada por manchas necrticas de forma irregular y centro gris en hojas. En los frutos, la enfermedad se inicia en el pednculo y luego avanza hasta necrosarlos completamente En el envs de las hojas, la lesin presenta el desarrollo de estructuras negras a manera de cuerpos fructferos Muerte descendente se aisl Phoma sp con colonias de color caf oscuro,crecimiento algodonoso y con una tasa de crecimiento de 0.5 cm/da. El micelio es de color negro con tonalidades grisceas. Conidias pequeas unicelulares, hialinas, septadas, de forma elptica a ovalada Muerte descendente En fruto, la enfermedad se observ cuatro das despus de la inoculacin, observndose manchas circulares de color pardo grisceo, en contraste con los controles los cuales se encontraban totalmente sanos. A los siete das se hizo una nueva evaluacin y se observ el desarrollo de picndios Colina de Phoma sp Mancha grasienta en frutos se caracterizada por la presencia de reas de aspecto grasoso en el capacho las cuales le dan a este un aspecto parafinado o apergaminado Prueba de patogenicidad Luego de la inoculacin, se logr el desarrollo de manchas de aspecto grasiento sobre los frutos inoculados. El cliz o capacho del fruto present una consistencia semejante al papiro o al papel parafinado, el fruto no sufri ningn cambio ni present el desarrollo de sntomas asociados con la enfermedad Las pruebas bioqumicas llevaron a ubicar a la bacteria dentro del gnero Xanthomonas, Tipo de Prueba Respuesta Oxidasa - Gelatinasa + Arg. hidrolasa - Amilasa ND Crec. Amarillo en Agar nutritivo 30 C + Crecimiento mucoide + cido sulfhdrico - Indol - Movilidad + Anaerobiosis - Catalasa + Malonato + Citrato + MRVP -/-/- TSI -/-/- Caseinasa - Simbologa: Positivo: +, Negativo: -, No Determinado: ND. Trabajo de campo: Incidencia por estado fonolgico y zona. Para la estimacin de los porcentajes de incidencia y la comparacin de las dos localidades se aplicaron tablas de contingencia, enfrentando la ubicacin con la presencia de las enfermedades, para cada estrato o piso vegetal, enfermedad, y etapa de desarrollo del cultivo. Se parti de la hiptesis nula de homogeneidad en los niveles de incidencia, segn lo cual, al nivel poblacional, los dos municipios tienen la misma incidencia de las enfermedades evaluadas, y las diferencias observadas se deben al efecto del muestreo. Esta hiptesis se rechaz si la probabilidad de la prueba X2 fue menor o igual a 0,05 (nivel de significancia), en cuyo caso se concluy que la incidencia era diferente entre las dos localidades al nivel poblacional. Resultados Se observa que a nivel de follaje predomina Cercospora y Fusarium. Las diferencias entre localidades por el nivel de incidencia de estas enfermedades se observa en los estados 3 y 4, segn lo cual en Santa Elena se present mayor incidencia en general para las dos enfermedades. Fusarium se manifiesta en toda la planta, pero Cercospora en los dos estratos bajos. En el capacho se presentan especialmente Cercospora, Phoma y Xanthomonas. Tanto Cercospora como Phoma se presentan con diferencias significativas entre municipios en los estados 3 y 4 y en los estratos bajos (1 y 2), y fue en el municipio de Santa Elena donde se hizo mayor la incidencia de estas enfermedades con respecto a la Unin. Las diferencias por el ataque de Xanthomonas se presentaron en todos los estados de desarrollo del cultivo y en los estratos altos de la planta (2 y 3). Fue en la Unin donde la incidencia de Xanthomonas se hizo mayor. Para el efecto de los tallos, ramas y ramitas, los resultados fueron similares, en cuanto que se observ la presencia de Fusarium oxysporum con diferencias entre localidades para todos los estados de desarrollo del cultivo y a lo largo de toda la planta. Fue en Santa Elena donde los niveles de incidencia se hicieron mayores. Conclusiones: En el departamento de Antioquia, ms especficamente en el Municipio de la Unin y en el corregimiento de Santa Elena, zonas en las cuales se realiz el estudio, las enfermedades ms limitantes en el cultivo de uchuva son el marchitamiento vascular, causado por F.oxysporum, la mancha gris, causada por Cercospora sp y la muerte descendente o mal de tierra, causado por Phoma sp. Presentando una menor incidencia la enfermedad de la mancha grasienta ocasionada por Xanthomonas spp. El marchitamiento vascular ocasionado por el hongo F. oxysporum es una enfermedad limitante desde que inicia la produccin de la planta a los 4 o 5 meses y hasta los 10 meses, perodo en el cual sta baja. La mancha gris ocasionada por el hongo Cercospora sp y la muerte descendente causada por Phoma sp son enfermedades que se presentan en cualquier fase de desarrollo de la planta de uchuva, especialmente despus de los tres meses de edad, siendo ms severas en las pocas de alta pluviosidad. El desconocimiento de estas enfermedades y sus causas por parte de los productores y tcnicos del cultivo en esta regin fue evidente. Se concluye que en cuanto a la incidencia en Santa Elena se present mayor incidencia en general para Fusarium. Cercospora, Phoma y Xanthomonas. F. oxysporum se manifiesto en toda la planta, encambio Cercospora en los dos estratos bajos; y en el capacho se presentan especialmente Cercospora, Phoma y Xanthomonas.