ANLISIS DE FARMACOS: DETERMINACIN SIMULTANEA DE ACETAMINOFEN, ACIDO ACETIL SALICILICO y CAFEINA EN UN COMPRIMIDO

Esteban Lpez; Lizeth Becerra; David Colorado Universidad Icesi Facultad de Ciencias Naturales Departamento de Ciencias Qumicas Laboratorio de Anlisis Instrumental Santiago de Cali (Colombia) - 06 de noviembre de 2013

INTRODUCCION Un medicamento1 es la presentacin farmacutica que contiene frmacos o drogas, destinadas hacia la prevencin, diagnstico y tratamiento de las patologas, en el presente informe se analiz un frmaco cuya presentacin es la de comprimido, llamado Sevedol2. Sevedol es un analgsico y antipirtico, y comnmente se prescribe para los fuertes dolores de cabeza asociados con la migraa. Este medicamento cumple su accin farmacolgica gracias a sus principales componentes activos: cido Acetilsaliclico (AAS), Acetaminofn y Cafena. Para la determinacin y cuantificacin de estos compuestos activos se debe emplear un mtodo que permita su separacin, para evitar interferencias en los anlisis; para el presente informe se emple la tcnica de HPLC para la determinacin simultanea de estos compuestos activos en un comprimido de Sevedol. La tcnica de HPLC posee esta ventaja gracias al uso de una columna de cromatografa3, que permite la separacin de los compuestos gracias a su diferencia en el momento dipolar de la molcula, debido a que, generalmente, y para el presente informe, la columna est compuesta de una fase estacionaria apolar (solido) y una fase mvil polar (liquido); los compuestos son transportados por la fase mvil y son

retenidos por la fase estacionaria segn la afinidad de cada compuesto por cada una de las fases. Por lo tanto, la separacin de los compuestos activos en un comprimido de Sevedol se da gracias a la polaridad de cada uno, es decir que el compuesto ms polar ser el ms retenido por la fase polar y el ltimo en salir de la columna, por el contrario, el compuesto ms apolar ser fcilmente transportado por la fase apolar y el primero en salir de la columna.

Figura 1 Esquema de un equipo de HPLC

Figura 2 Retencin de compuestos por diferencia de polaridad en una columna cromatogrfica

RESULTADOS Para poder determinar la cantidad de compuesto activo en un comprimido de Sevedol, se realizaron curvas de calibracin para cada compuesto activo por separado a partir de muestras estndar de cada compuesto activo: cido Acetilsaliclico Tiempo de Concentracin rea retencin 0,25 5944 1,37 0,75 29148 1,41 0,5 19320 1,33 1 56723 1,36 0,125 5920 1,23 Estndar 31479 1,64
Tabla 1: determinacin por HPLC de la muestra estndar de AAS

350000 300000 250000 200000 150000 100000 50000 0 0

Area

y = 283248x - 26734 R = 0.9313 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Concentracion (mg/L)
Grafico 2 Curva de calibracin: rea Vs Concentracin obtenida por HPLC para el Acetaminofn

Cafena Concentracin 0,125 0,75 0,5 1 0,25 Estndar rea 32798 159476 108069 305457 39864 115021 Tiempo retencin 2,15 2,18 2,15 2,15 2,16 2,15

60000 50000 40000 30000 20000 10000 0 0

Area

Tabla 3: determinacin por HPLC de la muestra estndar de Cafena

y = 56617x - 6312.8 R = 0.9279 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

400000 300000 200000 100000

Area

Concentracion (mg/L)
Grafico 1: Curva de calibracin: rea Vs Concentracin obtenida por HPCL para el cido Acetilsaliclico

Acetaminofn Concentracin 0,125 0,75 0,5 1 0,25 Estndar rea 31707 149962 102139 288430 37618 126365 Tiempo retencin 1,88 1,91 1,88 1,88 1,9 1,88

y = 300860x - 28819 R = 0.9333 0 0.5 1 1.5

Concentracion (mg/L)
Grafico 3: Curva de calibracin: rea Vs Concentracin obtenida por HPCL para la Cafena

Tabla 2: determinacin por HPLC de la muestra estndar de Acetaminofn

Para la preparacin de la muestra problema se tom un comprimido entero de Sevedol (0,7311g), se macero y se tomaron 0,1014g del comprimido, los cuales se disolvieron en 100ml de fase mvil (metanol); es decir 1014mg/L de Sevedol (dilucin 1). Para facilitar la determinacin simultanea de los compuestos, se realiz una segunda dilucin de la muestra problema

con el objetivo de disminuir la concentracin de los analitos. Se tom entonces 450L de la muestra problema y se llev a un matraz aforado de 100ml completando el volumen hasta el aforo con fase mvil (dilucin 2). Una vez obtenidas las curvas de calibracin para cada uno de los compuestos activos, se realiz el anlisis por HPLC de la muestra problema (dilucin 2), se obtuvieron los siguientes resultados: Muestra Problema Tiempo rea retencin 10109 0,96 162098 1,88 119674 2,14
Tabla 4: determinacin por HPLC de la muestra problema

que con la ecuacin 1, podemos determinar la concentracin de cafena en el comprimido de Severo a partir del rea obtenida por HPLC, la cual es registrada en el cromatograma. Reemplazando y por el rea obtenida para la Cafena en la tabla 4, y despejando x se obtuvo:

Para poder determinar la cantidad, en mg, de Cafena por comprimido de Sevedol se tuvieron en cuenta las diluciones realizadas en la preparacin de la muestra problema, as como el peso de la muestra de Sevedol tomada: ( )

Para la identificacin de cada compuesto activo se emple el tiempo de retencin4, el cual es caracterstico para cada compuesto, debido a que el tiempo de retencin va ligado con la afinidad del compuesto por la fase estacionaria. Por lo tanto, en la tabla 4, el tiempo de retencin de 2,14 corresponde a la Cafena (Vase: tabla 3); de la misma manera, el tiempo de retencin de 1,88 corresponde al Acetaminofn (Vase: tabla 2) y por ltimo, y casi que por diferido, el tiempo de retencin de 0,98 corresponde al AAS (Vase: tabla 1). Se emplearon entonces las ecuaciones de las curvas de calibracin, incluidas en los grficos 1, 2 y 3. As, para determinar la concentracin de Cafena, se emple la ecuacin del grafico 3:

Nota: Comp = Comprimido de Sevedol

Por una regla de tres se puede obtener la cantidad de Cafena en un comprimido de Sevedol, ya que un solo comprimido de Sevedol pesa 0,7311g, as:

)(

Donde, segn el grafico 3, la variable y corresponde al rea y la variable x corresponde a la concentracin; es decir

De la misma manera que con la Cafena, se realiz el procedimiento matemtico para poder determinar la cantidad por comprimido de Sevedol para el Acetaminofn y el AAS:

Para Acetaminofn:

En resumen, la cantidad de cada componente activo por unidad de comprimido de Sevedol es:

Teniendo en cuenta las disoluciones realizadas para la muestra problema, se obtuvo: ( )

ANALISIS DE RESULTADOS Debido a que la separacin en la columna cromatogrfica se da por la diferencia de afinidad de los compuestos activos hacia las fases que componen la columna, son las interacciones electrostticas y fuerzas de Van Der Waals las que determinaron la retencin de los compuestos dentro de la columna, ya que la presin a la se inyectaron las muestras en el equipo de HPLC es la misma para todas las muestras. Como se coment con anterioridad, segn los tiempos de retencin obtenidos en el cromatograma para la muestra problema (Vase: tabla 4), se predijo que la primera sustancia en salir de la columna fue el AAS, seguido del AC y por ltimo la Cafena.

Para obtener (Acetaminofn) comprimido: (

la

cantidad de por unidad )(

AC de )

Para AAS:

Teniendo en cuenta las disoluciones: ( )

Figura 2 cido Acetilsaliclico

De la misma forma que con la Cafeina y el AC, se determina la cantidad de AAS por unidad de comprimido: ( )( )

Figura 3 - Acetaminofn

Figura 4 Cafena

El orden en el que los compuestos activos salen de la columna tambin se infiri a partir de su estructura qumica. As, el AAS posee dos grupos carbonilo ( ), un grupo hidroxilo ( ) y un oxgeno en forma de ter ( ), que, segn la caractersticas del solvente usado como fase mvil, en este caso, metanol, facilita la formacin de enlaces de hidrogeno5; los cuales son los enlaces no inicos ms fuertes. Es decir, que la fuerte interaccin entre el AAS y la fase mvil disminuyeron su tiempo de retencin. Adems, estos grupos funcionales se encuentran expuestos, y las molculas de agua se enlazan sin problemas de repulsin electrosttica, debido, por ejemplo, a grupos apolares como lo es el metilo. Los enlaces de hidrogeno no solo se forman con el oxgeno, sino tambin con el nitrgeno y el flor; en el caso del AC, su estructura posee un grupo carbonilo, un grupo hidroxilo y una amina secundaria ( ); por lo tanto, en trminos prcticos, se dedujo que, a comparacin con el AAS, el AC posee un sitio menos de unin para las molculas de agua por enlaces de hidrogeno, lo que, en comparacin al AAS, disminuye su afinidad por la fase mvil en relacin con el ASS. En el caso de la Cafena, se pudo observar que posee dos grupos carbonilos, lo que en relacin al ASS y al AC, se infiri entonces que este compuesto posee el menor nmero de sitios para la formacin de enlaces de

hidrogeno con el metanol (fase mvil); pues aunque se observ que presenta algunos tomos de nitrgeno, estos hacen parte de un ciclo (heterociclo), por lo cual, en cierta medida, debido a que el ciclo es aromtico, los enlaces que forma el nitrgeno con los tomos de carbono completan su octeto6, y como lo sugiere la Regla del octeto (Lewis 1917) estos tomos de nitrgeno ser muy estables, es decir, poco reactivos. Adems, por un lado, debido a que los enlaces de hidrogeno son enlaces covalentes, los tomos que conforman este tipo de enlace comparten sus electrones de la capa de valencia; y debido a que los tomos de nitrgeno en la Cafena ya tiene completo su octeto, no tendern a formar enlaces de hidrogeno con facilidad. Por otro lado, la Cafena es la molcula con ms grupos metilo de entre los compuestos activos analizados, estos grupos metilo, al ser apolares, tambin generan repulsin de las molculas de agua que son polares, dificultando la formacin de enlaces de hidrogeno con los grupos carbonilo aledaos a los grupos metilo en la Cafena. Por cuanto a los posibles errores durante la prctica, se consideraron dos factores determinantes: la preparacin de las disoluciones (estndar y problema) y la deteccin de las muestras analizadas por parte del equipo de HPLC. Como se explic en el tem que corresponde a los resultados, la muestra problema se tuvo que disolver considerablemente debido a que la concentracin de los compuestos activos por comprimido de Sevedol es relativamente alta; esto porque el equipo de HPLC usado emplea un detector UVVis, y por lo tanto su funcionamiento est regido, en gran parte, por la ley de Lambert-Beer7. Por lo tanto, para que la relacin lineal entre absorbancia y concentracin sea considerable, se

emplean muestras con concentraciones entre y . Por ejemplo, para el AC, en la muestra problema, empleando la ecuacin 2, se obtuvo una concentracin de:

comprimido sobre uno de los lados originados por la fractura. Tambin, para evitar errores en las determinaciones individuales de cada compuesto, la muestra problema debi ser analizada. Como mnimo, por triplicado; permitiendo detectar mrgenes de error o un comportamiento estadstico de los datos. CONCLUSIONES El objetivo de diluir considerablemente la muestra problema es poder acoplar los datos experimentales a una relacin lineal de la Ley de Lambert-Beer, para evitar complicaciones con el lmite de cuantificacin. La diferencia de polaridad entre las molculas analizadas es un factor determinante en el tiempo de retencin de los compuestos dentro de la columna cromatogrfica. Los errores durante la prctica tambin pudieron ser ocasionados por factores fisicoqumicos y termodinmicos del sistema en la columna cromatogrfica. REFERENCIAS 1. J. C. Mena Aguilar; Farmacologa; Universidad Nacional Autnoma de Mjico. 2.http://www.sopecard.org/peru/src/produc tos/30856_210.htm | Visitada el dia 05 de noviembre del 2013. 3. M. Valcrcel Cases, A. Gomez Henz; Tecnicas Analiticas de Separacion; REVERTE; Barcelona; 1988; pp. 437 441. 4.http://www.ulpgc.es/hege/almacen/dow nload/39/39360/separaciones_por_cromat

Se emple el peso molecular del AC, que es de 151,169g/mol, para expresar esta concentracin en molaridad (mol/L), es decir: ( )

Es decir, que el objetivo de diluir considerablemente la muestra problema para incrementar la relacin lineal entre absorbancia y concentracin si se cumpli; se emple el AC como ejemplo porque es el compuesto mayoritario en el comprimido de Sevedol. Sin embargo, el problema que s pudo haber afectado los resultados obtenidos es que el comprimido de Sevedol presenta en su campa ms externa una cubierta colorida, que indica que el compuesto del que est fabricado est cubierta presenta interaccin con la radiacin en la regin visible; posiblemente est recubierta haga parte de los excipientes del medicamento. El inconveniente con esto es que el equipo de HPLC, al usar un detector UV-Vis pudo haber captado la absorbancia por parte de estos excipientes coloridos, incrementando la concentracin reportada por el equipo en cada muestra problema analizada. Para evadir este error se pudo haber tomado la muestra de comprimido solo en el centro de este, es decir, fracturar el comprimido y con un instrumento punzante, como una esptula, raspar el

ografia_1.pdf | Visitada el dia 05 de noviembre del 2013 5.http://www.ugr.es/~olopez/estruct_macro mol/fuerzas/EH.PDF | Visitada el dia 06 de noviembre del 2013. 6.http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archiv ero/Teoriasdeenlace_20194.pdf | Visitada el dia 06 de noviembre del 2013. 7.https://www.google.com.co/url?sa=t&rct =j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja &sqi=2&ved=0CCkQFjAA&url=http%3A%2F %2Fabsorcionatomica.blogspot.com%2F2009%2F08%2Fli mitaciones-de-la-ley-de-lambertbeer.html&ei=PXODUsHdPMP7kQfl6IBw&u sg=AFQjCNGJkFXPFQith9SstX_U4Dy9yHbYQ | Visitada el dia 06 de noviembre del 2013.