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Cdigo: OUADOC033 Rev. Nro. 2

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Resumen de Modificaciones

Revisin Nro.
1

Fecha de emisin
04/03/2010

Breve descripcin de las modificaciones

Emisin del documento. Se reordenan numerales y se unifica con criterios de armado de documentos OUAPRO001. Se ordena alfabticamente punto 4 Definiciones. Se nombran y numeran tablas segn aparicin. Se ordenan los pasos de la validacin. Se actualizan los conceptos de veracidad y exactitud. Se ordenan los conceptos de precisin. Se agrega linealidad y no linealidad de un mtodo.

05/09/12

Fecha Elaborado Revisado Aprobado 28/06/12 04/07/12 05/09/12

Cargo Asistente Tcnico Directora Ejecutiva Comit de Acreditacin

Nombre Mauricio Roldn Liliane Somma ---------

Firma

Acta N 123

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1.

OBJETIVO

Establecer una directriz para sistematizar el desarrollo de las actividades de los laboratorios para la validacin de mtodos de ensayo.

2.

ALCANCE

Esta directriz es aplicable a todos los mtodos de ensayo incluidos en el alcance de los laboratorios de ensayo acreditados ante el OUA y los laboratorios que solicitan su acreditacin. Nota 1: Esta directriz debera ser utilizada por los evaluadores y expertos tcnicos que actan en los procesos de acreditacin y por los responsables de los laboratorios. Nota 2 : Esta directriz es aplicable a los mtodos de ensayo. No se establece consideraciones para el muestreo, la manipulacin y el transporte de muestras.

3.

REFERENCIAS
CEA-ENAC-LC/02 Expresin de la incertidumbre de medida en las calibraciones. G-ENAC-09 Gua para la expresin de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos. G-ENAC-04 Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos. ISO/IEC Guide 43-1 a 2. Proficiency testing by interlaboratory comparisons.

JCGM 100:2008 GUM 1995 with minor corrections. Evaluation of measurement data Guide to the expression of uncertainty in measurement. JCGM 101:2008 Evaluation of measurement data Supplement 1 to the Guide to the expression of uncertainty in measurement propagation of distributions using a Monte Carlo method. JCGM 102:2011 Evaluation of measurement data Supplement 2 to the Guide to the expression of uncertainty in measurement Extension to any number of output quantities. JCGM 104:2009 Evaluation of measurement data An introduction to the Guide to the expression of uncertainty in measurement and related documents. JCGM 200:2008 International vocabulary of metrology Basic and general concepts and associated terms (VIM). JCGM 200:2008 Corrigendum International vocabulary of metrology Basic and general concepts and associated terms (VIM). JCGM 200:2012 International vocabulary of metrology Basic and general concepts and associated terms (VIM) 3rd edition 2008. Version with minor corrections. Bureau International des Poids et Mesures. The International System of Units (SI). 8 th edition 2006.

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UNIT-ISO 9000. Sistemas de Gestin de la Calidad. Fundamentos y vocabulario. UNIT-ISO/IEC 17025 Requisitos generales para la competencia de los laboratrios de ensayo y de calibracin. UNIT-ISO 15189 Laboratorio de anlisis clnicos Requisitos particulares para la calidad y la competencia. UNIT-ISO/IEC 17043 Evaluacin de la conformidad. Requisitos generales para los ensayos de aptitud.

4.

DEFINICIONES

4.1 Caracterstica de desempeo: parmetro de calidad que puede atribuirse a un mtodo de ensayo. 4.2 Criterio de desempeo: requisito para una caracterstica de desempeo de acuerdo a la cual puede juzgarse que el mtodo de ensayo satisface con el propsito y genera resultados confiables 4.3 4.4 Especificidad: capacidad de un mtodo para medir solamente lo que se intenta medir. Exactitud: proximidad entre el resultado de una medicin y el valor del mensurando.

Exactitud = Veracidad + Precisin 4.5 Incertidumbre: parmetro, no negativo, caracterizando la dispersin de los valores atribuibles al mensurando, basndose en la informacin utilizada. 4.6 Intervalo de trabajo: conjunto de los valores de magnitudes de una misma naturaleza que un mtodo de ensayo puede medir con una incertidumbre especificada, en condiciones determinadas. Se denomina, tambin, intervalo de medicin o rango

4.7 Lmite de cuantificacin: es la menor cantidad de mensurando que puede ser determinada con un nivel aceptable de veracidad y precisin. 4.8 Lmite de deteccin: es la menor cantidad que puede ser distinguida del blanco con cierto nivel de confianza especificado. 4.9 Linealidad: capacidad de un mtodo para obtener resultados de ensayos proporcionales a la cantidad de mesurando, en un rango de operacin determinado. 4.10 Material de referencia (MR): material con una o ms propiedades con valores suficientemente homogneos y claramente establecidos como para poder ser utilizados en la calibracin de un equipo, la evaluacin de un mtodo de ensayo o la asignacin de valores a materiales. 4.11 Material de referencia certificado (MRC): material de referencia, acompaado de un certificado otorgado por una autoridad, en el cual uno o ms valores de sus propiedades han sido certificados mediante un procedimiento que establece su trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la que se expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre y el nivel de confianza correspondiente. 4.12 Mensurando: magnitud particular sometida a medicin.

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4.13 Mtodo alternativo: mtodo que ha sido validado por comparacin con el mtodo de referencia que corresponda, de acuerdo a un estndar aceptado y es reconocido formalmente como equivalente al mtodo de referencia por un organismo competente de acuerdo a datos experimentales obtenidos, por ejemplo mediante ensayos colaborativos. 4.14 Mtodo basado en norma: mtodo descrito en un procedimiento interno del laboratorio, que est basado claramente en un mtodo normalizado y que no supone una modificacin tcnica respecto del mtodo de referencia que ponga en cuestin su validez tcnica. Debe mantenerse actualizado en relacin con el mtodo de referencia en que se fundamentan. 4.15 Mtodo desarrollado: mtodo de ensayo desarrollado por el laboratorio o por un fabricante o proveedor de equipos, de medios de cultivo etc., de forma unilateral y que no dispone del reconocimiento de los mtodos normalizados o de los mtodos alternativos. 4.16 Mtodo de referencia: mtodo investigado a fondo, que describe con claridad y exactitud las condiciones y los procedimientos necesarios para medir los valores de una o ms propiedades y que ha demostrado tener una exactitud y precisin apropiadas para el uso que pretende hacerse del mismo, de manera que puede utilizarse para evaluar la exactitud de otros mtodos empleados para realizar la misma medicin y, en particular, para caracterizar un material de referencia. En general se trata de un mtodo normalizado. 4.17 Mtodo normalizado: mtodo publicado como norma internacional, regional o nacional, o por organizaciones tcnicas reconocidas (Ej: ISO, IEC, COPANT, AMN, UNIT, AOAC, APHA, etc.). 4.18 Modificacin de mtodo normalizado o alternativo: mtodo normalizado o alternativo que es modificado significativamente para atender a requisitos especficos. 4.19 Precisin: proximidad entre valores obtenidos por medicin de replicados en el mismo o similar material bajo condiciones especificadas. Nota: Precisin es un trmino general para evaluar la dispersin de resultados entre ensayos independientes, que son repetidos sobre una misma muestra, muestras semejantes o patrones, en condiciones definidas. 4.20 Repetibilidad: es el grado de concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas de un mismo mensurando, efectuadas bajo las mismas condiciones de ensayo. Se puede definir como la precisin bajo condiciones de repetibilidad. Condiciones de repetibilidad: condiciones bajo las cuales resultados de ensayos independientes son obtenidos con el mismo mtodo, en materiales presumiblemente idnticos, en el mismo lugar, con el mismo equipo, por el mismo operador, en intervalos cortos de tiempo. 4.21 Precisin intermedia: se refiere a la precisin evaluada sobre la misma muestra, muestras idnticas al patrn, utilizando el mismo mtodo, en el mismo laboratorio, pero definido exactamente cuales son las condiciones a variar (Ver 6.1.2). La precisin intermedia se puede definir como una medida bajo un conjunto de condiciones de precisin intermedia de medicin. Condiciones de precisin intermedia: condiciones bajo las cuales se obtiene los resultados de rplicas con el mismo mtodo, en materiales presumiblemente idnticos y uno o ms factores como tiempo, equipo, operador, varan dentro de un mismo laboratorio.

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4.22 Reproducibilidad: es el grado de concordancia entre los resultados de las mediciones de un mismo mensurando, efectuadas bajo condiciones variadas de ensayo. Se puede definir como la reproducibilidad bajo condiciones de reproducibilidad. Condiciones de reproducibilidad: condiciones bajo las cuales se obtiene resultados replicados en materiales presumiblemente idnticos, en diferentes lugares, con diferentes operadores utilizando equipos diferentes. 4.23 Recuperacin: fraccin de analito que se agrega a una muestra de ensayo antes del anlisis.

Nota: El objetivo de la recuperacin es evaluar la eficiencia del mtodo para detectar todo el analito presente en una muestra. 4.24 Robustez: sensibilidad que presenta un mtodo ante pequeas variaciones en las condiciones de ensayo. 4.25 Selectividad: capacidad de un mtodo para determinar con un nivel aceptable de exactitud y precisin el mensurando de inters en la presencia de otros componentes en una matriz bajo las condiciones de ensayos establecidos. 4.26 Sensibilidad: Es una caracterstica que demuestra la variacin de la respuesta en funcin de la concentracin del mensurando. 4.27 Sesgo: estimacin del error sistemtico de medicin, determinado como la diferencia entre el valor ms probable y el valor experimental. 4.28 Validacin: confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica prevista. 4.29 Valor verdadero convencional (de una magnitud): valor atribuido a una magnitud particular, y aceptado a veces por convencin, porque la representa, con una incertidumbre apropiada, para un fin dado. 4.30 Veracidad: concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor de referencia aceptado por convencin como verdadero. 4.31 Verificacin: confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos especificados.

5.

DESCRIPCIN

Es fundamental que los laboratorios dispongan de criterios objetivos para demostrar, por medio de la validacin, que los mtodos de ensayo que ejecutan conducen a resultados confiables y adecuados a las caractersticas de desempeo establecidas. La realizacin de actividades de validacin de los mtodos de ensayo utilizados por el laboratorio, contempla la satisfaccin de las necesidades del cliente y la adecuacin para realizar los ensayos previstos. El objetivo de la validacin es confirmar la aptitud de los mtodos, as como la capacidad del laboratorio, para la ejecucin de ciertos ensayos bajo sus condiciones operativas habituales. Ello

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significa que la validacin debera realizarse para confirmar que el laboratorio puede aplicar correctamente el mtodo de ensayo antes de utilizarlo como mtodo de ensayo de rutina. La validacin se basa en la comparacin de los resultados obtenidos con los criterios de desempeo establecidos para el procedimiento empleado para las caractersticas seleccionadas. La metodologa y la extensin de la validacin no son siempre las mismas y deberan ser establecidas individualmente. A continuacin se presenta un detalle de las distintas consideraciones a realizar para llevar a cabo la validacin de un mtodo de ensayo, en cuanto al personal, la extensin de la validacin, planificacin y pasos posteriores de la validacin, e informe de validacin. 5.1 Personal El laboratorio debera designar a una persona en carcter de Responsable Calificado para la supervisin del trabajo y con la autoridad necesaria para tomar las decisiones apropiadas durante la realizacin de la validacin o a quien le asignen la responsabilidad de la validacin. El operador que lleva a cabo las actividades de validacin debera ser competente en el rea de estudio y necesitara tener conocimiento suficiente sobre la matriz de ensayo en estudio. 5.2 Extensin de la validacin La extensin de la validacin debera ser determinada por el Responsable Calificado (Ver 5.1) de manera confiable y cientfica. La siguiente tabla establece la extensin de las actividades de validacin de acuerdo al mtodo de ensayo a emplear por el laboratorio. DESCRIPCIN DEL MTODO DE ENSAYO VALIDACIN REQUERIDA Confirmacin de las caractersticas de desempeo publicadas de acuerdo con el requisito del apartado 5.4.2 de la norma UNIT-ISO/IEC 17025 Puede requerirse validacin solamente si se han hecho algunos cambios, de acuerdo con el requisito del apartado 5.4.4 de la norma UNIT-ISO/IEC 17025 para mtodos no normalizados Validacin completa Validacin completa Confirmacin de las caractersticas de desempeo publicadas, pero se requiere una validacin ms completa que la establecida por el apartado 5.4.5 de la norma UNIT-ISO/IEC 17025

Mtodos normalizados publicados o mtodos alternativos

Mtodo desarrollado por el laboratorio Mtodo publicado en la literatura cientfica sin ninguna informacin de desempeo Mtodos publicados en la literatura cientfica con informacin de desempeo

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Cambios en la implementacin de un mtodo previamente validado por ej.: cambios en el equipo, en los reactivos, en el ambiente del laboratorio o en el personal Mtodo normalizado publicado que se aplica a diferentes matrices, para diferentes rangos de concentracin, para diferentes mensurandos o mtodo normalizado publicado usado para un propsito similar pero condiciones diferentes Mtodo normalizado publicado no vigente o previamente validado que vuelve a usarse Ensayos ad hoc o especiales Kits de ensayo comerciales evaluados mediante ensayos colaborativos Kits de ensayo comerciales cuya informacin de desempeo no est disponible, es incompleta o no es aplicable Tabla I 5.3 Planificacin de la validacin

La extensin de la validacin variar para demostrar que los cambios no tienen un impacto significativo en las caractersticas de desempeo Se requiere validacin y la extensin variar, por ej.: si se tiene propiedades similares a las de las matrices y de los mensurandos representativos Confirmacin de las caractersticas de desempeo previamente establecidas La extensin de la validacin est fijada por las circunstancias Confirmacin de las caractersticas de desempeo publicadas pero puede requerirse una validacin completa si se efecta cualquier cambio en el uso Validacin completa

En el desarrollo de las actividades de validacin, se recomienda la siguiente secuencia de trabajo: definir la aplicacin, objetivo y alcance del mtodo de ensayo establecer las caractersticas de desempeo a evaluar especificar los criterios que debe cumplir el mtodo de ensayo

verificar si las especificaciones de los equipos a utilizar son compatibles con lo exigido por el mtodo de ensayo en estudio Nota: Los equipos empleados para las actividades de validacin deben cumplir con las especificaciones pertinentes para el mtodo de ensayo, funcionar correctamente y estar confirmados metrolgicamente. seleccionar los materiales (por ejemplo, patrones y reactivos) de la calidad requerida elaborar un procedimiento para la validacin

5.4 Pasos posteriores a la planificacin de la validacin A continuacin se resume de manera esquemtica los pasos siguientes a la planificacin de la validacin, necesarios para llevar a cabo la validacin propiamente dicha.

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hacer los ensayos preliminares de validacin

ajustar los requisitos, de ser necesario (por ejemplo: puede obtenerse una repetibilidad del 7 % en vez del 5 % establecido y, de todas maneras, se considera el mtodo adecuado) realizar los ensayos completos de validacin realizar los clculos relacionados con el ensayo (Ver Anexos 6.1). realizar un anlisis de errores (Ver Errores de medicin 5.5). elaborar el informe de validacin (Ver 5.6).

redactar un procedimiento operacional que permita la implantacin del mtodo, de manera clara y sin ambigedades, en la rutina diaria del laboratorio. 5.5 Errores de medicin Cada ensayo tiene asociado errores de medicin, dadas por las condiciones de operacin y manipulacin, condiciones ambientales, errores instrumentales, de apreciacin en la medida, etc. 5.6 Informe de validacin Las actividades de validacin de cada mtodo de ensayo deberan estar debidamente documentadas, a travs del informe de validacin, de forma de posibilitar la trazabilidad de todas las actividades realizadas. Cada validacin debera ir acompaada de un informe cuyo ttulo se debera redactar de una forma similar a la siguiente: Informe de validacin de (designacin del mensurando) en (tipo de matriz .mediante (metodologa de ensayo que se ha validado). Dicho informe debera ser preparado por el operador que ha realizado la validacin, mientras que el Responsable Calificado sera quien lo revise y apruebe. El Informe de Validacin debera considerar los siguientes puntos, cuando corresponda: objetivo y alcance del mtodo material a ensayar acondicionamiento de las muestras detalle de insumos, reactivos y materiales de referencia lista de equipos, instrumentos y dispositivos resultados de las caractersticas de desempeo estudiadas registro de las condiciones de los ensayos, grficos representativos (curva de calibracin, registros de correlacin) y clculos necesarios personal involucrado en las actividades de validacin del mtodo evaluacin de los resultados de la validacin, de la cual resultan conclusiones y la decisin sobre la aptitud del mtodo para su aplicacin justificacin, por parte del Personal Responsable Calificado del mtodo de ensayo, de los cambios a los criterios fijados fijacin de criterios para la revalidacin.

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5.7 Ejecucin de los resultados de validacin Es esencial establecer criterios objetivos para la aceptacin de un estudio de validacin y luego llevar a cabo el mismo segn una secuencia apropiada. Bsicamente cada validacin de un mtodo de ensayo consta de cuatro etapas: 1. Especificacin de los requisitos que debe cumplir el mtodo de ensayo (por ejemplo: lmite de deteccin <1 mg/L, intervalo lineal mayor a 2 rdenes de magnitud, incertidumbre de los resultados <20%). 2. Determinacin de las caractersticas de desempeo del mtodo de ensayo bajo las condiciones establecidas. 3. Comparacin de los resultados obtenidos por las actividades de validacin con los requisitos especificados. 4. Decisin sobre la aptitud del mtodo de ensayo para el uso previsto. Nota: Para facilitar la decisin final de las caractersticas a evaluar se recomienda tener en cuenta la informacin establecida en las Tablas.

6.

ANEXOS

6.1 ANEXO I Estudio particular de las caractersticas de las desempeo a evaluar Es necesario considerar que las caractersticas de desempeo que deberan evaluarse durante las actividades de validacin varan de acuerdo con el tipo de mtodo de ensayo con la finalidad de facilitar la decisin final de considerar el mtodo como validado. La totalidad de las caractersticas de desempeo que pueden ser evaluadas en una validacin completa para un mtodo de ensayo son las siguientes: veracidad precisin (repetibilidad, (precisin) reproducibilidad intermedia, reproducibilidad) exactitud (exactitud = veracidad + precisin) especificidad selectividad linealidad intervalo de trabajo sensibilidad lmite de deteccin lmite de cuantificacin robustez incertidumbre recuperacin

Para cada mtodo de ensayo se seleccionarn las caractersticas a evaluar. Se puede tomar como orientacin la siguiente tabla:

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Caractersticas de desempeo a evaluar en base al tipo de ensayo Tipo de ensayo Cualitativo Cuantitativo X X X X X X X X X X X

Caracterstica Exactitud Precisin Especificidad / selectividad Robustez Sensibilidad / linealidad y nolinealidad / intervalo de trabajo Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Incertidumbre Tabla II 6.1.1 Veracidad

Las metodologas habitualmente utilizadas para evaluar la veracidad son, entre otras: uso de materiales de referencia (MR) participacin en comparaciones interlaboratorios (CIL) para LE / control externo para LA realizacin de ensayo de recuperacin uso de mtodos normalizados (previamente validados con los requisitos de la ISO/IEC 17025)

La veracidad, cuando se aplica a una serie de resultados de ensayo, implica una combinacin de componentes de errores aleatorios y sistemticos; se cuantifica con el sesgo, y se puede evaluar la veracidad del mtodo, por medio del clculo del error relativo, expresado en porcentaje. (La veracidad puede demostrarse mediante la aplicacin de test estadsticos como la prueba Z, dependiendo de la cantidad de determinaciones que se realizaron para el estudio de la misma). La determinacin del sesgo es importante en el establecimiento de la trazabilidad a los patrones reconocidos. 6.1.2 Precisin

Habitualmente se determina para circunstancias especficas de ensayo. En general se estudia mediante la repetibilidad, la reproducibilidad y la precisin intermedia, siendo usualmente expresadas por la desviacin estndar. (Se puede considerar la posibilidad de expresar a la precisin en sus tres condiciones como %RSD). Tanto la repetibilidad como la reproducibilidad son, generalmente, dependientes de la concentracin del mensurando y, de este modo, deberan ser determinadas para un rango de concentraciones. En algunos casos debe establecerse la relacin entre la precisin y la concentracin del mensurando.

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La repetibilidad toma en cuenta las condiciones de ensayo bajo las cuales se efectan los anlisis, que son: mismo procedimiento de ensayo mismo operador mismo equipo usado bajo las mismas condiciones mismo local repeticiones efectuadas en un corto intervalo de tiempo.

La repetibilidad puede ser expresada cuantitativamente en trminos de la caracterstica de la dispersin de los resultados y puede ser determinada por medio del ensayo de patrones, material de referencia o adicin a blanco en varias concentraciones en el intervalo de trabajo. Se sugieren 7 o ms repeticiones para el clculo de la desviacin estndar para cada concentracin, llamado desviacin estndar de repetibilidad. Se puede expresar como %RSD de repetibilidad. La reproducibilidad es considerada importante cuando un laboratorio busca la verificacin del desempeo de sus mtodos en relacin a los datos de validacin obtenidos por medio de comparacin interlaboratorios. Las condiciones especficas de operacin para determinar la precisin intermedia son las siguientes: diferentes operadores diferentes equipos diferentes tiempos. No se tiene porque cambiar todas estas condiciones a la vez, dependiendo de las condiciones con la que cuenta el laboratorio o tal vez la rutina con la cual se realiza el ensayo. Por ej.: no todos los laboratorios tienen distintos equipos para la determinacin del mismo analito. Por lo tanto con solo cambiar uno de estos factores se estara en condiciones de precisin intermedia. Esta medida de la precisin es reconocida como la ms representativa de la variabilidad de los resultados en un laboratorio y, como tal, ms aconsejable para ser usada. Para determinar la precisin intermedia de un mtodo, se efectan mediciones por duplicado, o en ensayo nico, sobre la muestra, en las condiciones predefinidas, pues existen varios mtodos para estudiar este tipo de precisin. Cuando es aplicable, este procedimiento es repetido sobre otras muestras, abarcando otros niveles de concentracin. Se determina un RSD% de precisin intermedia y se define un criterio de aceptacin, quedando a criterio del laboratorio utilizarlo Un mtodo simplificado para estimar la precisin intermedia se basa en la ejecucin de n mediciones (n 15), en condiciones predefinidas, sobre: una misma muestra muestras presumiblemente idnticas patrones o materiales de referencia.

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En la siguiente tabla, se presenta un resumen de la determinacin de la repetibilidad, reproducibilidad y precisin intermedia. .Repetibilidad, reproducibilidad y precisin intermedia Ensayar: Patrones, materiales de referencia o muestras blanco fortificadas a varias concentraciones a lo largo del intervalo de trabajo a) Mismo operador, equipo, laboratorio, perodo corto

Repeticiones independientes

Qu calcular a partir de los datos?

Comentarios

Determinar la desviacin estndar de cada concentracin

b) Operadores y equipos diferentes, mismo laboratorio, perodo 7 extendido (precisin intermedia)

Determinar la desviacin estndar de cada concentracin

c) Operadores, equipos y laboratorios diferentes, perodo extendido

Determinar la desviacin estndar de cada concentracin

Determinar la desviacin estndar de la repetibilidad de cada concentracin (RSD%rep) Determinar la desviacin estndar de la (precisin intermedia) reproducibilidad intralaboratorio de cada concentracin (RSD%repro) Determinar la desviacin estndar de la reproducibilidad interlaboratorio de cada concentracin. Requiere estudio de colaboracin

Tabla III 6.1.3 Especificidad y selectividad

Una muestra, de manera general, est constituida por los mensurandos, la matriz y otros componentes que pueden tener algn efecto en la medicin, pero que no se desea cuantificar. La especificidad y la selectividad estn relacionadas con la deteccin. La selectividad es la aptitud de un mtodo para medir o evaluar selectivamente un mensurando dentro de una matriz compleja. La especificidad es la aptitud de un mtodo para medir exclusivamente el mensurando.

Para poder disear la metodologa de evaluacin ms apropiada es necesario comprender los diferentes mecanismos que causan interferencias cuando se determina el mensurando de inters. El mtodo de ensayo puede tener diferentes desempeos debido a que los reactivos, la matriz u otros componentes alteran la sensibilidad del sensor que mide el mensurando de inters o porque estos componentes afectan directamente a la respuesta. Al mismo tiempo pueden ocurrir errores constantes debido a interferencias y errores proporcionales debido al denominado efecto matriz.

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Las metodologas empleadas para evaluar la especificidad y la selectividad son: adicin de patrn ensayo de mltiples componentes o cambios en el pretratamiento, la separacin o la deteccin. 6.1.4 Linealidad y No Linealidad de un mtodo

La relacin entre el mesurando y la respuesta genera un tipo determinado de relacin, que puede ser lineal o no-lineal, incluso puede haber casos en los que se presenten rangos determinados dentro del intervalo de operacin lineales y el resto no serlo. Es preciso determinar la relacin entre el mensurando y su respuesta, a travs de todos los parmetros involucrados, as como del coeficiente de correlacin involucrado en cada relacin de dependencia ensayado. Cualquiera sea el caso de relacin encontrada para el ensayo en particular, es preciso determinar: La ecuacin de relacin El coeficiente de correlacin ( r) El grfico

A continuacin se presentan algunas relaciones posibles a ensayar, con: y la variable dependiente o respuesta, x la variable independiente o mensurando, y las constantes: ai R siendo i = 1 a n N U {0} y b R. Relacin lineal:

b y a a 1x 0

2 b y a x a x a Relacin cuadrtica: 2 1 0 Notar que si a 2 0 , se convierte en la ecuacin lineal presentada en el caso anterior.

Relacin polinmica:

i b y a i x 0

Notar que si n=2 se convierte en ecuacin

cuadrtica y si n=1 lineal. Por lo tanto, es el caso ms genrico que abarca los dos primeros casos presentados.
x b y a e i
i

n 0

Relacin exponencial:

Notar que es el caso ms genrico, al igual

que la relacin polinmica presentada.

i b log a x El logaritmo puede ser en base neperiana cy i 0 n

Relacin logartmica:

(e), en base 10, o cualquier otra considerada. Para esto, es importante el sumando a la derecha cumpla la definicin de logaritmo, de manera de tener significado la expresin presentada.

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6.1.5

Intervalo de trabajo

Para cualquier mtodo cuantitativo, existe un intervalo de concentraciones del mensurando en el cual el mtodo puede ser aplicado. En el lmite inferior del intervalo de concentracin, los factores limitantes son los valores de los lmites de deteccin y de cuantificacin. En el lmite superior, los factores limitantes dependen del sistema de respuesta del equipo de medicin. Dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo de respuesta lineal y dentro de ste la respuesta de la seal tendr una relacin lineal con el mensurando. La extensin en este intervalo puede ser establecida durante la evaluacin del intervalo de trabajo. El intervalo lineal de trabajo de un mtodo de ensayo es el intervalo de trabajo en el que la relacin entre la concentracin del mensurando y la respuesta presentan linealidad, con la precisin y exactitud ensayadas, bajo las condiciones especificadas para el ensayo. Para ensayos de deteccin, el lmite inferior del rango est dado por el lmite de deteccin, en tanto que para ensayos de cuantificacin, el lmite inferior est dado por el lmite de cuantificacin. Metodologas para la determinacin del intervalo de trabajo e intervalo lineal N de Replicas Matriz - Blanco con adicin de concentraciones variadas del mensurando o, - Blanco de la muestra con adicin de concentraciones variadas del mensurando. Observacin: preparar diferentes concentraciones de modo independiente y las alcuotas de la misma solucin madre. Procedimiento Objetivo: identificar inicialmente, el intervalo lineal aproximado y los lmites superior e inferior del intervalo de trabajo. - Colocar en el eje x las concentraciones del mensurando y en el eje y las respuestas de las mediciones. - Ir a la etapa (2).

Etapa (1): 7 (siete)

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Objetivo: determinar el intervalo de trabajo y confirmar la linealidad. - Colocar en el eje x las concentraciones del mensurando y en el eje y las respuestas de las mediciones. - Verificar visualmente la existencia de valores dispersos que puedan interferir en - Materiales de referencia la regresin (antes de remover los (diferentes concentraciones), en Etapa (2): dispersos hacer determinaciones en las el intervalo lineal o proximidades de las concentraciones). - Blanco de la muestra con 7 (siete) en el - Calcular los coeficientes de la recta de adicin de concentraciones intervalo lineal regresin. variadas del mensurando, en el - Calcular y hacer el grfico de los valores intervalo lineal. de los residuos para cada valor de x (residuo es la diferencia entre el valor observado y el valor calculado por la ecuacin de la recta de regresin). La distribucin aleatoria en torno de la lnea recta confirma la linealidad. - Ir a etapa (3). Etapa (3): Objetivo: determinar el lmite de cuantificacin (LQ), que efectivamente Blanco de la muestra con forma el lmite ms bajo del intervalo de adicin de concentraciones trabajo. variadas del mensurando, - Expresar el LQ como la concentracin 7 (siete) prximas al LD ms baja del mensurando que puede ser determinada con un nivel aceptable de incertidumbre. Tabla IV Observaciones: Blanco: Blanco de la muestra: 6.1.6 Sensibilidad

agua destilada o desionizada matriz de la muestra sin el mensurando de inters.

Para una respuesta lineal dentro del intervalo de trabajo, la sensibilidad puede ser expresada por la pendiente de la recta de regresin de calibracin, y se determina simultneamente con las metodologas para la evaluacin de la linealidad. La sensibilidad depende de la naturaleza del mensurando y de la tcnica de deteccin utilizada. 6.1.7 Lmite de deteccin

Para la validacin de un mtodo de ensayo, es normalmente suficiente proporcionar una indicacin del nivel en que la deteccin del mensurando puede realizarse. En general esto puede obtenerse a partir de la curva de calibracin y corresponde con: blanco + 3s y 0 + 3s (en la cual s es la desviacin estndar). En la siguiente tabla se presentan las metodologas para las evaluaciones cuantitativas del lmite de deteccin.

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Evaluacin del lmite de deteccin (LD) N de Replicas Matriz Clculos LD = X + ts donde: X = media de los valores de los blancos de la muestra; t es la abscisa de la distribucin de Student, dependiente del tamao de la muestra y del grado de confianza y, s = desviacin estndar de los blancos de la muestra Observaciones La media y la desviacin estndar de los blancos de la muestra son dependientes de la matriz. Vlido solamente cuando los valores de los blancos presentan una desviacin estndar diferente de cero.

Blanco de la muestra

Tabla V Se calcula la varianza (s2) y la desviacin estndar (s) de las mediciones por duplicado. La frmula para el clculo del LD es: LD = t(n1, 1 ) . (s) El LD para cada mensurando debe ser expresado en las unidades apropiadas, de acuerdo con lo establecido en el mtodo de ensayo. Se debe identificar la matriz usada para evaluar el LD. 6.1.8 Lmite de cuantificacin

Para los ensayos cuantitativos es necesario asegurar que el mtodo de ensayo informa resultados que slo son atribuibles al mensurando. El lmite de cuantificacin (LQ) se toma como 10 veces la desviacin estndar. Algunas veces es tambin denominado lmite de determinacin. En la prctica, corresponde normalmente al patrn de calibracin de menor concentracin (excluido el blanco). Este lmite, despus de haber sido determinado, debe ser ensayado para averiguar si la exactitud y la precisin conseguidas son satisfactorias, a travs del mtodo de adiciones de concentraciones conocidas. La siguiente tabla presenta un resumen del mtodo de determinacin del lmite de cuantificacin. Evaluacin del lmite de cuantificacin (LQ) N Replicas 7 Matriz Blanco de la muestra Determinacin LC = X + 10s, donde: X = media de los valores de los blancos s = desviacin estndar de los blancos

Tabla VI

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6.1.9

Robustez

La robustez evala la sensibilidad que el mtodo de ensayo presenta a las pequeas variaciones en las condiciones operativas. Un mtodo se dice robusto si se revela prcticamente insensible a pequeas variaciones que puedan ocurrir cuando ste est siendo ejecutado. Para determinar la robustez de un mtodo de ensayo, se puede recurrir al test de Youden. Se trata de un test que permite no slo evaluar la robustez del mtodo, sino tambin ordenar la influencia de cada una de las variaciones en los resultados finales, indicando cul es el tipo de influencia de cada una de esas variaciones. La siguiente tabla presenta un ejemplo de los efectos de las modificaciones en diversos factores de influencia. Para esto se realiza 8 ensayos separados para determinar los efectos de la variacin de las 7 diferentes etapas, en el mtodo de ensayo. Las 8 mediciones pueden ser realizadas en un orden aleatorio. Ejemplo de variacin en los factores para la determinacin de la robustez Factor Tiempo de agitacin Tamao de muestra Concentracin cida Temperatura de calentamiento Tiempo de calentamiento Agitacin pH Tabla VII 6.1.10 Incertidumbre de los resultados La incertidumbre caracteriza la dispersin de los valores atribuibles al mensurando, basndose en la informacin utilizada para obtener los resultados. En los documentos presentados en el Anexo II se encuentra informaciones detalladas sobre incertidumbre de las mediciones. Nominal 10 min 5g 1M 100 C 5 min si 6,0 Variacin 12 min 10 g 1,1M 95C 10 min no 6,5

6.2 ANEXO II Herramientas alternativas y adicionales para la validacin

En algunas oportunidades no es econmica o tcnicamente factible llevar a cabo los estudios de validacin, por lo cual el laboratorio debe emplear herramientas alternativas y adicionales que le permitan demostrar que ha efectuado la confirmacin de que los mtodos empleados son aptos para el uso especfico. 6.2.1 Comparacin de mtodos (Utilizado para determinacin de veracidad)

Consiste en la comparacin de los resultados obtenidos por un nuevo mtodo con los conseguidos con un mtodo de referencia. El objetivo es estudiar el grado de proximidad de los resultados obtenidos por los dos mtodos de ensayo.

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Los ensayos son efectuados por duplicado, utilizando los dos mtodos de ensayo, por separado, sobre las mismas muestras, en un intervalo restringido de concentraciones o en todo el intervalo de concentraciones en que se pretende validar el mtodo. Existen varias tcnicas estadsticas para comparar los resultados obtenidos. 6.2.2 Programas interlaboratorios

La Gua ISO/IEC 43-Parte 1 distingue entre los usos de comparaciones interlaboratorios para ensayo de aptitud para la determinacin del desempeo del laboratorio, como para otros propsitos tales como: establecer la eficacia y la comparabilidad de nuevos mtodos de ensayo comprobar el desempeo de mtodos establecidos determinar las caractersticas de desempeo de un mtodo. Los ensayos de colaboracin son una forma especial de ensayo para evaluar el desempeo de un mtodo en las condiciones normales de trabajo en varios laboratorios, por medio de ensayo de muestras homogneas preparadas cuidadosamente.