UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA Prof: Maria S.R.B.

Figueiredo

CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS EM AMOSTRAS VEGETAIS

OBJETIVOS: Identificar a presena de amido em extratos vegetais; Diferenciar aldoses e cetoses em extratos vegetais; Demonstrar as propriedades redutoras dos carboidratos.

1. REAO DE COLORAO EM MEIO CIDO: 1.1 - Reao de Seliwanoff (distino entre cetoses e aldoses): Fundamento: A reao baseia-se na formao de furfural e hidroximetilfurfural por ao do cido clordrico concentrado sobre as cetoses e hexoses, com a conseqente formao de um complexo de colorao vermelha ocorrida entre o resorcinol e estes derivados furfricos. O aparecimento de colorao vermelha mais rpido para as cetoses do que para as aldoses. Para a distino necessrio controlar o tempo de aquecimento. Reativos: cido clordrico 70% reativo de Seliwanoff (resorcinol 0,5% em etanol a 95%) soluo de amido 0,5% (polissacardeo) soluo de glicose 0,5% (monossacardeo) soluo de sacarose 0,5% (oligossacardeo) soluo de frutose 0,5% (monossacardeo) soluo problema gua destilada Procedimento: 1) Em 7 tubos de ensaio pipetar respectivamente: 2 gotas de amido, 2 gotas de glicose, 2 gotas de sacarose, 2 gotas de frutose, 2 gotas de gua destilada, 2 gotas de soluo problema1 (suco de ............../.................), 2 gotas de soluo problema 2 (fcula de batata/maizena). 2) Acrescentar a cada um dos tubos 1 mL de cido clordrico 70%. 3) Adicionar 0,5 mL do reativo de Seliwanoff. Agitar. 4) Levar simultaneamente todos os tubos no banho-maria fervente, controlando o tempo de aparecimento da colorao (notar rpido aparecimento de cor para as cetoses e a colorao tardia para as aldoses).

2. REAES DE REDUO: 2.1 - Reao de Benedict (Reao geral) Fundamento: Os acares redutores (que possuem grupamento aldedico e cetnicos livres) em meio alcalino e em presena de ons cpricos, se oxidam e os ons metlicos se reduzem, produzindo um preciptado de xido cuproso, cuja colorao varia de vermelho-amarelo a esverdeado (teste positivo). Os ons cpricos nesta reao esto complexados com citrato de sdio do reativo de Benedict. Esta reao no distingue monossacardios redutores de oligossacardios redutores.

Reativos: reativo de Benedict: dissolver a quente 173 g de citrato de sdio e 100 g de carbonato de sdio em 600 mL de gua. Esfriar e completar o volume para 850 mL com gua destilada. Dissolver 17,3 g de sulfato de cobre pentaidratado em 100 mL de gua destilada. Adicionar esta soluo, vagarosamente, e sob agitao constante sobre a soluo de citratocarbonato. Completar o volume para 1 litro. soluo de amido 0,5% (polissacardeo) soluo de glicose 0,5% (monossacardeo) soluo de sacarose 0,5% (oligossacardeo) soluo de maltose 0,5% (dissacardeo) soluo problema gua destilada Procedimento: 1) Em 7 tubos de ensaio pipetar respectivamente: 10 gotas de amido, 10 gotas de glicose, 10 gotas de sacarose, 10 gotas de maltose, 10 gotas de gua destilada, 10 gotas de soluo problema1 (suco de ............../.................), 10 gotas de soluo problema 2 (fcula de batata/maizena). 2) Acrescentar a cada um dos tubos 1 mL do reativo de Benedict. 3) Ferver em banho-maria durante 3 a 4 minutos. 4) Comparar os resultados com o tubo branco.

2.2 - Reao de Barfoed (pesquisa de monossacardeos redutores): Fundamento: A reao de Barfoed tambm se baseia na reduo do cobre, porm, ao contrrio da reao de Benedict, efetuada em emio cido. Nestas condies o cobre reduzido a quente pelos monossacardeos, com formao de xido cuproso. Os dissacardeos redutores do reao positiva aps um tempo de aquecimento bem mais prolongado. O teste positivo quando ocorre formao de precipitado vermelho de xido cuproso. Reativos: reativo de Barfoed: dissolver 13,3 g de acetato de cobre em 200 mL de gua destilada. Adicionar 1,8 mL de cido actico glacial. soluo de amido 0,5% (polissacardeo) soluo de glicose 0,5% (monossacardeo) soluo de sacarose 0,5% (oligossacardeo) soluo de maltose 0,5% (dissacardeo) soluo problema gua destilada Procedimento: 1) Em 7 tubos de ensaio pipetar respectivamente: 5 gotas de amido, 5 gotas de glicose, 5 gotas de sacarose, 5 gotas de maltose, 5 gotas de gua destilada, 5 gotas de soluo problema1 (suco de ............../.................), 5 gotas de soluo problema 2 (fcula de batata/maizena). 2) Acrescentar a cada um dos tubos 2 mL do reativo de Barfoed. 3) Ferver em banho-maria durante 5 minutos. 4) Comparar os resultados com o tubo branco.

3. REAO DE POLISSACARDEOS: 3.1 Reao do Iodo: Fundamento: O iodo em soluo produz reao colorida com polissacardeo, sendo que apresenta cor vermelho-castanho com glicognio e azul com amido. A cadeia de amilose forma uma espiral cujas dimenses internas permitem que a molcula de iodo se deposite em seu interior, sendo esse complexo iodoamilose o responsvel pela colorao. O aparecimento de uma colorao azul caracterstico de teste

positivo para amido. Esta colorao estvel, sendo devida a um complexo iodo-polissacardeo, destrudo facilmente pelo calor. Reativos: reativo de lugol diludo: 0,5 g de iodo, 1 g de iodeto de potssio e q.s.p. 100 mL de gua destilada. Diluir esta soluo em 1:5 (concentrao final 0,1%). soluo de amido 0,5% (polissacardeo) soluo de glicose 0,5% (monossacardeo) soluo de maltose 0,5% (dissacardeo) soluo problema gua destilada Procedimento: 1) Em 6 tubos de ensaio pipetar respectivamente: 2 gotas de amido, 2 gotas de glicose, 2 gotas de maltose, 2 gotas de gua destilada, 2 gotas de soluo problema1 (suco de ............../.................), 2 gotas de soluo problema 2 (fcula de batata/maizena). 2) Acrescentar a cada um dos tubos 2 gotas de lugol diludo. 3) Comparar os resultados com o tubo branco.

4. RESULTADOS
Testes/Amostras Seliwanoff Benedict (mono ou oligossacardeos) Barfoed
(Identifica somente monossacardeos) Ppto Vermelho Azul intenso (amido) Vermelho rpido: cetoses
Vermelho/ amarelo,/ esverdeado Amido Glicose Sacarose Frutose Maltose gua Amostra 1 Amostra 2

XXXX

XXXX

XXXX

Iodo

XXXXXX XXXX

Legenda:
Amostra 1: ................................; Amostra 2:...........................................;

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA RELATRIO DA AULA PRTICA CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS EM AMOSTRAS VEGETAIS Nomes: .............................................. .............. ..............................................................

Data: ..........................

RESULTADOS Testes/Amostras Seliwanoff Benedict (mono ou oligossacardeos) Barfoed

(Identifica somente monossacardeos) Ppto Vermelho Azul intenso (amido) Vermelho rpido: cetoses
Vermelho/ amarelo,/ esverdeado Amido Glicose Sacarose Frutose Maltose gua Amostra 1 Amostra 2

XXXX

XXXX

XXXX

Iodo

XXXXXX XXXX

Legenda: Amostra 1:

Amostra2 :

CONCLUSO E DISCUSSO Com base nos resultados obtidos conclua: a que tipo de carboidrato pertencem as amostras da tabela, e justifique cada resposta. Exemplo: 1. Amido: Selliwanoff reao lenta; Benedict negativo; Barfoed negativo: Lugol positivo Indica: Polissacardeo, amido, no redutor contendo aldose. Justificativa: Amido, pois o teste de lugol com colorao azul especfico para este polissacardeo; aldose porque o Selliwanoff apresentou reao lenta, condizente com presena de aldoses; no monossacardeo nem oligossacardeo redutor , pois tanto o teste de Benedict quanto o Barfoed de apresentaram resultados negativos respectivamente. 2. Glicose 3. Sacarose: 4. Frutose: 5. Maltose: 6. gua: 7. Amostra 1 8. Amostra 2: