Sei sulla pagina 1di 7

Quim. Nova, Vol. 33, No.

10, 2226-2232, 2010 CROMATOGRAFIA GASOSA ULTRARRPIDA: UMA VISO GERAL SOBRE PARMETROS, INSTRUMENTAO E APLICAES#

Reviso

Rodrigo Sequinel, Rafael Rodrigues Hatanaka, Carlos Eduardo Gualtieri, Danilo Luiz Flumignan e Jos Eduardo de Oliveira* Centro de Monitoramento e Pesquisa da Qualidade de Combustveis, Biocombustveis, Petrleo e Derivados, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista, Araraquara SP / Departamento de Qumica Orgnica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista, CP 355, 14801-970 Araraquara SP, Brasil Juliano Passaretti Filho Departamento de Qumica Analtica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista, CP 355, 14801-970 Araraquara SP, Brasil Recebido em 30/6/10; aceito em 21/9/10; publicado na web em 27/10/10

ULTRA FAST GAS CHROMATOGRAPHY: AN OVERVIEW OF THE MAIN PARAMETERS, INSTRUMENTATION AND APPLICATIONS. Since the introduction of GC there has been an ongoing interest in reducing time of analysis resulting in new terms and denitions such as ultra fast gas chromatography (UF-GC). One of the most used denitions describes UF-GC as a technique that combines the employment of short narrow bore column with very fast temperature programming rates producing chromatographic peaks in the range of 50 ms and allowing separations times in 1-2 min or less. This paper summarizes the analytical approaches, the main parameters involved and the instrumentation towards UF-GC. Keywords: ultra fast gas chromatography; resistive heating; high sampling frequency detectors.

BREVE HISTRICO DA REDUO DO TEMPO DE ANLISE EM CROMATOGRAFIA GASOSA As primeiras teorias e alguns dos princpios bsicos relacionados reduo do tempo de anlise em cromatograa gasosa (CG) foram estabelecidos por volta de 1960, quando Scott em 1958 utilizou colunas empacotadas longas com dimetro interno (d.i.) reduzido capazes de atingir desempenho de 10 pratos efetivos por segundo em uma separao cromatogrca, o que constituiu um grande avano para a poca.1 Outro exemplo clssico, foram os estudos de Jonker et al., que conseguiram separaes ultrarrpidas de quatro alcanos lineares (C1 a C4) em 150 ms com a utilizao de colunas do tipo empacotadas LiChrosorb Si-60, com 32 mm de comprimento.2 Inicialmente ambos os trabalhos no tiveram uma grande repercusso, sendo que no incio da dcada de 80 outros trabalhos ainda viriam a ser publicados relatando as tentativas de aumentar a velocidade de separaes cromatogrcas, com a utilizao de colunas empacotadas.1,3 Um dos motivos para esta falta de reconhecimento estava no fato de que as colunas empacotadas utilizadas, algumas das quais preenchidas com partculas de dimetro relativamente grande, exigiam condies drsticas de presso para obteno de separaes mais rpidas, por vezes resultando em prejuzo na ecincia da separao.4,5 Alm disso, o principal objetivo em uma anlise cromatogrca era, na poca, obter a melhor resoluo para diferentes substncias em uma mistura ou mesmo separar um par crtico de componentes em uma amostra complexa. A introduo das colunas capilares por Golay, em 1957, veio a suprimir algumas das limitaes relacionadas utilizao das colunas empacotadas em separaes cromatogrcas complexas e foi o grande passo em direo obteno de cromatogramas com melhor resoluo.6,7 Em 1962, Desty et al. demonstraram a potencialidade de colunas capilares com d.i. reduzido para realizao de separaes rpidas.8 Outro trabalho relevante foi o de Gaspar et al.,
*e-mail: jeduardo.unesp@yahoo.com.br # Este trabalho dedicado ao Prof. Dr. Hans Viertler por ocasio do seu 70 aniversrio.

que conseguiram separaes rpidas de uma mistura no complexa de hidrocarbonetos em uma coluna tubular de vidro Pirex de 85 cm x 65 m (d.i.), recoberta com fase estacionria de 1% de esqualano em hexano.9 De fato, a introduo das colunas capilares foi um marco na histria da cromatograa. O sucesso da utilizao das colunas capilares e seu constante aprimoramento com o surgimento de novas fases estacionrias zeram com que os problemas de resoluo cromatogrca aos poucos fossem resolvidos, sendo consolidada a CG de alta resoluo no nal dos anos 70 e 80.7 Entretanto, at 1980 a problemtica relacionada ao aumento de velocidade em CG no estava atrelada somente a limitaes relacionadas s colunas. Havia tambm uma srie de adaptaes que deveriam ser feitas nos equipamentos existentes at ento, o que praticamente inviabilizava o amadurecimento da ideia. Outra grande limitao estava relacionada ao tempo total gasto em um processo analtico, no qual a separao cromatogrca no era determinante, pois representava apenas uma pequena parcela quando comparada ao tempo necessrio para preparao da amostra e posterior tratamento dos dados obtidos do cromatograma. Assim, a proposta de separaes rpidas em CG permanecia como um desao experimental, visto que o aumento da velocidade da separao no causaria uma reduo signicativa no tempo total de anlise.2,10,11 Em decorrncia da modernizao dos cromatgrafos, do desenvolvimento de novas fases estacionrias e do desenvolvimento de softwares avanados para tratamentos de dados cromatogrcos, naturalmente os estudos relacionados ao aumento da velocidade em CG se tornaram viveis e receberam maior destaque no mundo acadmico. O contnuo crescimento do nmero de amostras a serem analisadas por cromatograa e os casos em que os resultados das anlises deveriam estar disponveis em um curto intervalo de tempo fortaleceram esta tendncia. O principal benefcio seria a reduo no tempo total de anlise, que acarretaria em uma reduo de custos no processo analtico e o consequente aumento de produtividade para realizao de anlises de rotina. Em 1985, Leclercq e Cramers apresentaram os resultados de suas pesquisas direcionadas teoria do aumento de velocidade em CG.12

Vol. 33, No. 10

Cromatograa gasosa ultrarrpida

2227

Neste artigo os autores discutem detalhadamente a minimizao do tempo de anlise para solucionar problemas de separao cromatogrca com um nmero mnimo de pratos tericos requeridos. Mais tarde, outros autores tambm apresentaram estudos tericos relacionados otimizao da tcnica.4,5,13-15 Uma abordagem mais detalhada das equaes que fundamentam a tcnica ser apresentada adiante. De fato, os usurios de cromatograa passaram a questionar algumas das condies experimentais convencionalmente utilizadas e chegaram concluso que a resoluo cromatogrca poderia ser reduzida para um valor apenas suciente (um valor limite que no causasse prejuzos para a identicao dos compostos presentes na amostra). Neste caso, haveria uma reduo no tempo de anlise em CG. A partir dos estudos tericos de Cramers, dentre outros autores anteriormente citados, constatou-se que os trs pilares da separao rpida so:8,12,16 1. Minimizao da resoluo cromatogrca para um valor apenas suciente, de modo a reduzir o nmero de pratos tericos requeridos para uma dada separao. Em termos prticos, duas das opes so: reduzir o comprimento da coluna e empregar altas velocidades do gs de arraste. 2. Maximizao da seletividade do sistema cromatogrco: em separaes rpidas, as propriedades da coluna so essenciais para melhorar a distino entre pares crticos de componentes de uma amostra (com tempos de reteno prximos). 3. Proposio de alternativas que reduzam o tempo de anlise, mantendo a resoluo constante: determinados parmetros podem ser explorados caso o tempo de anlise em uma resoluo mnima aceitvel ainda exceda o tempo desejado. Ex: a reduo do d.i. da coluna compensa a inevitvel perda da resoluo quando da diminuio do comprimento da coluna. As trs armaes gerais no so independentes e o direcionamento para atingir separaes rpidas resulta de uma intercalao de vrios parmetros cromatogrcos, os quais sero apresentados em maiores detalhes neste trabalho. DEFINIES O aumento de velocidade em CG pode ser interpretado sob diferentes pontos de vista. Se por um lado uma separao rpida de amostras complexas pode ser obtida na faixa de alguns minutos, para uma mistura simples a separao pode ser nalizada em alguns milissegundos.2,5,16 Assim, os conceitos que fundamentam o aumento de velocidade no podem ser estabelecidos somente em relao diferena no tempo total de anlise. Alm do tempo necessrio para realizar a separao, outros parmetros cromatogrcos devem ser considerados para denir os conceitos relacionados ao aumento de velocidade em CG. Dagan e Amirav17 introduziram um fator para quanticar o aumento de velocidade (Speed Enhancement Factor SEF) e a partir deste subdividiram a CG em trs categorias. Desta subdiviso provm expresses como: cromatograa gasosa rpida (CG-R), cromatograa gasosa muito rpida (CG-MR) e cromatograa gasosa ultrarrpida (CGUR), alm da convencional (CG-C). O fator de aumento de velocidade no necessariamente reete a exata reduo do tempo de anlise, mas normaliza as separaes em funo da CG-C que, segundo os autores, caracterizada pela utilizao de coluna de 30 m com d.i. reduzido, de modo que o uxo do gs de arraste na coluna seja de 1 mL min-1 (correspondente a He com velocidade linear de 34 cm s-1) . Este fator denido em funo do produto de outros dois fatores: o fator de reduo do comprimento da coluna multiplicado pelo fator que relaciona o aumento da velocidade do gs de arraste em relao CG-C. Para os autores, a CG-UR, por exemplo, apresenta um fator de aumento de velocidade na faixa de 400 a 4000 vezes em relao CG-C.17

Van Deursen et al.18 sugeriram uma denio baseada na largura do pico meia altura e no tempo total de anlise. Neste caso, considerando a largura do pico, seria considerado tambm o grau de separao por tempo de cada componente da amostra. Nesta classicao as separaes, realizadas em CG-UR, estariam limitadas faixa dos subssegundos e largura dos picos de aproximadamente 10 ms. Blumberg e Klee adotaram uma forma objetiva para avaliar o aumento de velocidade e classicaram os diferentes tipos de CG com base na largura dos picos cromatogrcos.19 Mais tarde, Magni et al. apresentaram uma denio mais detalhada, divergindo das anteriores.19 Segundo esta denio, outros fatores como as dimenses da coluna e a taxa de aquecimento tambm devem ser considerados para diferenciar as modalidades de CG. De acordo com a Tabela 1, separaes ultrarrpidas somente seriam obtidas em colunas com dimenses bastante reduzidas e com altas taxas de aquecimento, resultando em picos com largura entre 0,05 e 0,2 s.19
Tabela 1. Principais parmetros que caracterizam as diferentes modalidades de cromatograa gasosa segundo Magni et al.. Adaptada da ref. 19 Classicao segundo Magni et al.19 Comprimento coluna (m) Dimetro interno (mm) Tempo de anlise (min) Taxa de aquecimento (0C/min) Largura pico (s) CG-UR 2 a 10 CG-R 5 a 15 CG-CC* 5 0,25 3 a 15 5 a 40 1a5 CG-C 25 a 30 0,25 a 0,32 10 a 60 1 a 10 1 a 10

0,05 a 0,10 0,10 a 0,25 1 60 0,05 a 0,2 10 15 a 60 0,5 a 2

*Cromatograa gasosa com coluna curta.

Dentre todas as modalidades de CG, a CG-UR proporciona o maior fator de aumento de velocidade quando comparada CG convencional, visto que o tempo total de anlise pode ser reduzido para o limite de poucos minutos ou menos. Embora os termos CG-UR e CG-R, dentre outros, sejam usualmente encontrados na literatura, na verdade no h uma posio acadmica consolidada a respeito dessas classicaes. Tais divergncias permitem uma viso bastante subjetiva por parte dos usurios de cromatograa no momento de classicar o tipo de modalidade utilizada em seus trabalhos, principalmente em relao CG-UR. PRINCIPAIS PARMETROS ENVOLVIDOS NA REDUO DO TEMPO DE ANLISE Em cromatograa gasosa a ecincia do processo de separao inuenciada por uma srie de fatores, dentre os quais se pode citar: tempo de reteno, comprimento da coluna, temperatura da coluna, presso do gs de arraste, complexidade da amostra, tcnica de injeo, entre outros.6,20 Ateno especial deve ser dada a tais parmetros quando se pretende aumentar a velocidade de uma separao cromatogrca, de modo que a resoluo cromatogrca possa ser reduzida a um valor mnimo, encurtando o tempo de anlise sem, no entanto, comprometer a identicao dos pares crticos de componentes da amostra. Leclercq e Cramers partiram de uma srie de dedues matemticas para relacionar o tempo de anlise em separaes cromatogrcas com os parmetros anteriormente citados.12 Os autores conseguiram chegar a uma equao nal do tempo de anlise (Equao 1) em CG tomando como ponto de partida a equao de pratos tericos, de

2228

Sequinel et al.

Quim. Nova

Golay-Giddings, e a equao de relao de uxo, de Hagen-Poiseuille, ambas para colunas capilares:12,16 (1)

lado, separaes ultrarrpidas, que chegam a promover uma reduo de dez ou mais vezes no tempo total de anlise podem requerer uma adaptao signicante dos cromatgrafos convencionais. Neste caso, amostradores automticos de alta velocidade, sistemas para rpido aquecimento da coluna e detectores com altas taxas de aquisio de dados so itens obrigatrios.11,24,26 Amostradores e injetores Aparentemente, os amostradores e injetores so os mesmos utilizados em CG-C. So preferveis os amostradores automticos de alta velocidade para diminuir o mximo possvel o tempo necessrio para completar um ciclo analtico tempo total entre uma injeo e outra, incluindo resfriamento da coluna e tempo de amostragem. Dos injetores convencionais, em princpio todos poderiam ser aplicados em CG-UR: Split/Splitless, Programmable Temperature Vaporizer PTV,17,19,25,27-30 alm do sistema de injeo direto na coluna Cold On-Column.31,32 O fator limitante do sistema Cold On-Column est relacionado ao d.i. da coluna analtica que, em muitos casos, torna obrigatria a conexo desta com uma pr-coluna de maior d.i..8 O sistema com amostrador em headspace tambm j foi aplicado na modalidade ultrarrpida.18 A injeo de volumes em escala nanomtrica pode ser uma ferramenta muito til em sistemas ultrarrpidos, nos quais so usadas colunas com menor capacidade de processamento da amostra (d.i. reduzido). Neste caso, seriam necessrias pequenas adaptaes nos amostradores automticos utilizados em CG-C como, por exemplo, a utilizao de seringas com mbolo na agulha (plunger-in-needle syringe).33,34 Coluna cromatogrca e sistema de aquecimento da coluna

onde tR o tempo de reteno, k o fator de reteno, F dada em funo do fator de reteno, n a viscosidade dinmica, po a presso na sada do sistema, Dm,o o coeciente de difuso do soluto na fase mvel em relao presso na sada, dc o d.i. da coluna capilar. O nmero de pratos tericos requeridos para a separao, Nreq, dado em funo do fator de separao () de dois picos, do fator de reteno e, principalmente, em funo da resoluo (Rs) para um par crtico de componentes da amostra. De acordo com a Equao 1, redues signicativas no tempo de anlise podem ser obtidas, principalmente, com a utilizao de colunas de dimenses reduzidas e com o aumento da presso ou aplicao de vcuo na sada do sistema.12,16 Ainda com base nesta equao, h uma relao direta entre tR e o termo referente fase gasosa: tR [n/po Dm,o]. Este termo tem um valor mnimo para o hidrognio, que apresenta menor viscosidade e maior coeciente de difuso quando comparado (na mesma temperatura) com outros gases usualmente utilizados em CG, tais como hlio e nitrognio. Alm disso, um coeciente de difuso relativamente alto confere ao hidrognio um desempenho melhor do que os outros gases quando so utilizadas velocidades lineares maiores.4,12,21 Aproximaes matemticas diferentes evidenciam tambm a inuncia de outros parmetros, conforme a Equao 2:4 (2)

onde 36 o valor constante para separao do par crtico com resoluo de 1,5 na linha de base, H a altura equivalente a um prato terico, uo a velocidade linear do gs de arraste na sada da coluna e f2 o fator de correo da compressibilidade do gs de arraste.4 Os autores ainda estenderam seus estudos a respeito da reduo do tempo de anlise, propondo novas equaes matemticas. Segundo esses estudos, todas as dedues usadas at chegar s equaes nais mostram uma complexa dependncia do tempo de anlise com a presso, de modo que as condies timas para estas equaes so aproximadas e, assim, puramente matemticas. Relaes explcitas s poderiam ser obtidas sob condies extremas, quando as razes de presso de entrada e sada do sistema forem muito baixas ou muito altas ou ainda quando a inuncia da fase estacionria for negligencivel.4,5 Na modalidade CG-UR tambm deve ser considerado que a determinao de timas taxas de aquecimento tm inuncia direta na qualidade da separao e velocidade da anlise. Assim, no somente altas taxas de aumento de temperatura, como tambm curtos perodos de resfriamento e retomada da temperatura da coluna devem ser levados em considerao para a realizao de anlises mais rpidas.22-25 CARACTERSTICAS DO SISTEMA CG-UR O aumento de velocidade no necessariamente depender de substituio ou mesmo adaptao dos equipamentos convencionais de CG, mas nem sempre os equipamentos convencionais so compatveis com a velocidade requerida. Para propor uma reduo de duas a quatro vezes no tempo total necessrio para realizar uma anlise cromatogrca, a utilizao de colunas de dimenses reduzidas acompanhada por simples alteraes feitas em alguns parmetros cromatogrcos, tais como aumento na taxa de aquecimento e otimizao da velocidade do gs de arraste, podem ser sucientes. Por outro

As colunas capilares utilizadas em CG-UR possuem dimenses reduzidas, em geral com comprimento variando de 2 a 10 m, d.i. de 0,05 a 0,1 mm e espessura do lme da fase estacionria a partir de 0,05 m, conforme mostra a Tabela 1. Colunas de dimenses reduzidas so fundamentais para a diminuio no tempo de anlise e obteno de cromatogramas bem resolvidos, constituindo o primeiro passo em direo a separaes ultrarrpidas.4,8,15,16,18,19,28,35 A variao do d.i. em uma coluna cromatogrca promove um balano entre dois fatores: a ecincia da coluna (determinada pelo nmero de pratos tericos - N) e a capacidade da coluna (relacionada quantidade de amostra que pode acomodar a coluna sem causar distoro ou perda de resoluo dos picos). A otimizao de um destes fatores requer o sacrifcio do outro, de modo que o balano entre os dois vai depender das necessidades analticas. Em se tratando de cromatograa gasosa ultrarrpida, a utilizao de colunas com d.i. reduzido (narrow bore columns) proporciona aumento no nmero de pratos tericos, gerando picos mais estreitos, com larguras inferiores a 0,2 s, e surge como alternativa para compensar a perda de resoluo em decorrncia da diminuio do comprimento da coluna.4,11,15,36,37 Separaes ultrarrpidas so facilitadas tambm com a utilizao de colunas com no depsito de fase estacionria (Tabela 1), onde a resistncia oferecida no processo de transferncia de massa nesta fase praticamente insignicante quando comparada quela da fase gasosa.4,15 Com relao s altas taxas de programao de temperatura da coluna usadas em CG-UR, uma das opes a utilizao de sistemas dedicados ao aquecimento, no qual a coluna do tipo narrow bore colocada em um mdulo ultrarrpido (ultra fast module UFM), conhecido como gaiola. Em uma das concepes deste sistema a coluna montada com o elemento aquecedor (resistncia eltrica) e com o sensor de temperatura, todos envolvidos por um revestimento

Vol. 33, No. 10

Cromatograa gasosa ultrarrpida

2229

de teon (ou bra cermica) constituindo um conjunto de pouca massa trmica Figura 1.19,28,29,38,39

Em CG, a temperatura afeta de forma signicativa os aspectos cinticos e termodinmicos relacionados ao equilbrio existente entre a fase mvel-analito-fase estacionria, alterando, dentre outros parmetros citados nas Equaes 1 e 2, a seletividade da fase estacionria e o espalhamento das zonas cromatogrcas, provocando, consequentemente, variaes no desvio padro dos tempos de reteno dos componentes da amostra. Deste modo, quando altas taxas de aquecimento so necessrias para promover separaes ultrarrpidas, o programa de temperatura deve ser controlado com grande preciso.22,42,52 Detectores A alta velocidade com que os componentes separados na coluna chegam ao detector um fator importante a ser considerado em CGUR, de modo que a ecincia da separao da coluna no seja comprometida pelo tempo de resposta do detector. O processamento de bandas cromatogrcas com largura de 50 ms na linha de base requer detectores com alta frequncia de amostragem, acima de 200 Hz.16,53 Quanto maior a frequncia de aquisio, maior ser a capacidade do detector para responder s mudanas de sinal provenientes das substncias que eluem da coluna. Dentre os detectores usualmente empregados em CG, os detectores de ionizao em chama (DIC) e espectrmetro de massas (EM) so, de longe, os mais utilizados na modalidade ultrarrpida, sendo que o primeiro facilmente encontrado nos modernos equipamentos de CG com frequncia de aquisio de dados de at 300 Hz.19,28 O detector de massas torna-se especialmente vantajoso quando so utilizados sistemas sem varredura total da amostra (Non-Scanning), tal como os espectrmetros de massas com analisadores por tempo de vo (ATV),35 ainda que alguns analisadores quadrupolo venham sendo utilizados.51 Um sistema EM-ATVpode processar aproximadamente 500 espectros completos por segundo e proporciona exatido na deteco de picos com largura na ordem dos milissegundos, sem distoro dos dados espectrais.16,35 Em contrapartida, a alta taxa de aquisio de dados acompanhada pela perda da sensibilidade em ATV, que pode ser contornada com a gerao de feixes moleculares supersnicos (Sonic Molecular Beam SMB). Os sistemas SMB apresentam bom desempenho em CG-UR, pois requerem altas taxas de uxo em sua interface para gerar o feixe supersnico que, por sua vez, provoca uma queda de energia trmica no sistema, intensicando o sinal do on molecular.15,17,27,35,57-59 A alta velocidade com que os cromatogramas so obtidos em CG-UR muitas vezes exige que compostos coeludos sejam adequadamente resolvidos no detector EM com o auxlio de programas de deconvulao (deconvolution software). So programas que usam algoritmos matemticos para inverter os efeitos de entrelaamento de dados e so capazes de identicar componentes individuais em uma amostra minimamente separada na fase cromatogrca. Muitos dos trabalhos que envolvem CG-UR encontrados na literatura lanam mo desta estratgia para auxiliar na identicao dos componentes da amostra.27,35,51 A utilizao de outros detectores, como o nitrognio-fsforo (DNF), fotomtrico de chama (DFC), fotoionizao (DFI), captura de eltrons (DCE) e condutividade trmica (DCT) vai depender da frequncia de aquisio dos mesmos e da congurao fsica interna de seus dispositivos.54-56 Apesar de serem dotados de eletrnica rpida, alguns destes detectores, por exemplo, o DCT e DFI, ainda apresentam clulas com grande volume interno e acabam no sendo adequados para a realizao de anlises ultrarrpidas. CAMPOS DE APLICAO A CG-UR pode ser empregada para realizao de anlises qualitativas e quantitativas em todos os campos de aplicao da cro-

Figura 1. (A) Sistema dedicado de aquecimento resistivo da coluna (Thermo Fisher Scientic Inc.). (B) Detalhe do revestimento da coluna capilar: 1- elemento aquecedor; 2- coluna capilar; 3- bra cermica; 4- sensor de temperatura

Desta forma, nenhum aquecimento do forno exigido e so utilizadas as interfaces convencionais de injetor e detector do cromatgrafo convencional (Figura 2). O sistema modular para o aquecimento resistivo direto da coluna permite alcanar maiores velocidade de aquecimento quando comparado ao forno cromatogrco convencional de circulao a ar. Em se tratando de CG-UR este mdulo imprescindvel para a obteno de separaes cromatogrcas no limite de alguns segundos.19,28,40

Figura 2. Mdulo de aquecimento ultrarrpido instalado no forno de um cromatgrafo convencional (Thermo Fisher Scientic Inc.)

A ideia do aquecimento resistivo direto da coluna surgiu na dcada de 60, mas teve sua eccia experimental comprovada somente a partir dos anos 90, quando diferentes propostas deste sistema foram publicadas na literatura.40-50 A partir do trabalho de Ehrmann et al.40 e das patentes de Mustacich et al.47-49e Magni et al.50 foram concebidos os diferentes mdulos de aquecimento ultrarrpidos comercializados atualmente, projetados para comportar colunas de vrios comprimentos e que podem ser instalados tanto em cromatgrafos convencionais quanto em sistemas portteis de anlise cromatogrca. Esses mdulos de aquecimento resistivo da coluna permitem atingir taxas de aquecimento de at 20 oC s-1, sendo que o resfriamento da coluna rpido, indo de 350 a 50 C em cerca de 1 min. Por no necessitar do aquecimento do forno do cromatgrafo, o consumo de energia menor (200 W) quando comparado ao modo convencional.44-46,51

2230

Sequinel et al.

Quim. Nova

matograa capilar, sendo especialmente interessante nos casos em que a amostra contm componentes com pontos de ebulio muito diferentes. Vrios trabalhos tm sido publicados com a utilizao da tcnica, sendo que alguns destes sero apresentados com maiores detalhes a seguir.2,17-19,25,27-32,38,39,43 Em 1982, Jonker et al. conseguiram obter a separao de nalcanos (C1-C4) naquela que viria a ser a separao cromatogrca mais rpida da poca utilizando colunas empacotadas, nalizada em menos de 0,15 s. As condies cromatogrcas utilizadas foram: coluna empacotada: 32 x 1,19 mm d.i.; 10 m de tamanho de partcula, Lichrosorb Si-60; presso de entrada 64 bar; gs de arraste hlio, 1,5 L injetado no modo splitless.2 Em se tratando de amostras complexas, Dagan e Amirav17 discutiram a capacidade de um sistema CG-EM em realizar anlises de classes diferentes de substncias qumicas, em diferentes velocidades (CG-R; CG-MR; CG-UR). O principal objetivo era diminuir o tempo de residncia das molculas termolbeis na coluna e assim minimizar seu grau de dissociao que, neste caso, poderia ocasionar o alargamento de algumas bandas ou, ainda, provocar o aparecimento de novas bandas cromatogrcas com tempo de reteno menores. Sete esteroides no derivados foram analisados e, dentre estes, a cortisona, a corticosterona e o -estradiol puderam ser quanticados somente por cromatograa gasosa ultrarrpida, j que nas modalidades rpida e muito rpida essas molculas sofriam dissociao. Para a modalidade ultrarrpida, as condies cromatogrcas foram: gs de arraste hlio a 500 cm/s, temperatura do injetor a 280 oC para uma coluna megabore de 50 cm x 0,53 mm d.i. a 235 oC. A separao foi nalizada em apenas 8 s, com esperada perda de resoluo. Para contornar essa perda de resoluo, a espectrometria de massas com ionizao eletrnica em SMB foi utilizada, favorecendo a sintonizao da massa de cada fragmento, minimizando os problemas de superposio dos picos e permitindo a identicao e quanticao dos componentes.17 No mesmo trabalho, os autores conseguiram realizar a separao de alguns frmacos e de pesticidas da classe dos carbamatos tambm por CG-UR, ressaltando a utilizao da tcnica para outros tipos de substncias instveis ou termolbeis. Como no caso anterior, apesar da perda de resoluo quando comparada s modalidades rpida e muito rpida, os autores justicaram a opo pela modalidade ultrarrpida devido aos problemas de dissociao que impediam a quanticao.17 Davis et al. reportaram a separao de 7 solventes de laboratrio por CG-UR, com a utilizao de coluna de slica fundida com 1 m x 0,1 mm d.i. (0,1 m de espessura de lme). Para identicao dos analitos foi utilizada a tcnica de espectrometria de massas com ionizao de impactos de eltrons em SMB e ATV para contornar os problemas de resoluo cromatogrca.27 Van Deursen et al. utilizaram o sistema de aquecimento resistivo direto da coluna para obter separaes ultrarrpidas de 10 diferentes hidrocarbonetos por cromatograa gasosa. Neste trabalho, tambm foram relatados problemas de sobreposio de picos cromatogrcos, sendo necessria a utilizao de um programa de deconvulao para realizar a identicao de tais picos por espectrometria de massas.18 Bicchi et al. conseguiram obter separaes ultrarrpidas de leos essenciais de diferentes complexidades. Os pares mais crticos dos componentes de cada amostra foram separados aps um estudo detalhado para se escolher a fase estacionria mais seletiva, a m de compensar a perda de resoluo devido ao uso de colunas curtas e altas taxas de aquecimento. Com este estudo e com a utilizao de detector DIC com alta frequncia de aquisio de dados (300 Hz aquisies a cada 6 ms) os cromatogramas obtidos apresentaram boa resoluo para identicao das espcies. A Figura 3 mostra que praticamente no h diferena no perl cromatogrco quando so comparados os cromatogramas do leo essencial de slvia obtidos por CG-C e CG-UR.19

Figura 3. Pers cromatogrcos obtidos para o leo essencial de slvia por CG-C (a) e CG-UR (b). Condies cromatogrcas: (a) coluna SE 54: 25 m; 0,25 d.i.; 0,3 m; razo de split: 30; H2 a 47,8 cm s-1; programao de temperatura: 50 oC (1 min); 3 oC min-1 at 250 oC. (b) coluna SE 54: 5 m; 0,1 d.i.; 0,1 m; razo de split: 300; H2 a 69,3 cm s-1; programao de temperatura: 50 oC (0,1 min); 150 oC min-1 at 250 oC. Adaptada de ref. 19

Praticamente na mesma poca, Facchetti e Cadopi tambm relataram a possibilidade da separao de diferentes classes de leos essenciais com a utilizao de diferentes tipos de fases estacionrias. Para todas as classes de leos os autores realizaram comparao dos dados obtidos por CG-UR e CG-C e constataram redues de aproximadamente 30-40 vezes no tempo de anlise. Foi avaliada ainda a repetibilidade do sistema ultrarrpido para o leo de lavanda em coluna OV5 5 m x 0,1 mm d.i. x 0,1 m, enfatizando a identicao inequvoca dos componentes do leo essencial.29 Os autores tambm aplicaram a CG-UR na determinao de hidrocarbonetos de petrleo em gua potvel e solo. Alm da reduo de aproximadamente 5 vezes no tempo de anlise, o mtodo ultrarrpido foi mais sensvel quando comparado ao mtodo convencional de anlise.38 Em outro trabalho, as normas internacionais ASTM D 658460 e EN 1410561 foram adaptadas para a determinao ultrarrpida dos teores de glicerina livre e total em biodiesel puro (B100). Para isso foi realizada uma srie de alteraes nos parmetros cromatogrcos recomendados em cada uma das normas, de modo a reduzir em mais de 6 vezes o tempo de anlise, que era de aproximadamente 30 min. Dentre as alteraes necessrias, a principal foi a incluso do mdulo de aquecimento resistivo (Figuras 1 e 2) que possibilitou alcanar uma razo de aquecimento de 80 C min-1. A Figura 4 mostra o cromatograma obtido, bem como as condies cromatogrcas utilizadas. Os autores, entretanto, no relataram a velocidade do gs de arraste utilizada.32 Krokosov et al. propuseram outro sistema de aquecimento capaz de atingir rpidas programaes de temperatura. Neste sistema, a coluna recoberta por tubos coaxiais de ao inoxidvel, preenchidos com leo parafnico de viscosidade e estabilidade trmica apropriados. Em uma das aplicaes do sistema desenvolvido pelos autores, vrias substncias pertencentes classe dos fenis foram separadas e reveladas por DIC em menos de 1 min, evidenciando que a resoluo obtida possibilitou a identicao de todos os componentes presentes em uma mistura de 11 substncias fenlicas.25

Vol. 33, No. 10

Cromatograa gasosa ultrarrpida

2231

Ficarra et al. estudaram a performance de 4 catalisadores (NaOCH3, BF3, H2SO4, KOH) para realizar a transestericao de gordura animal proveniente do tecido adiposo subcutneo de sunos. O rendimento da reao de transestericao foi obtido pela determinao do perl composicional de steres metlicos de cidos graxos por CG-UR. A separao completa de todos os steres presentes na amostra foi realizada em pouco mais de 2 min, utilizando-se o mdulo de aquecimento resistivo (Figuras 1 e 2). As condies cromatogrcas utilizadas foram: coluna Carbowax de 5 m x 0,1 mm d.i. x 0,2 m (envolta pelo mdulo ultrarrpido). Injetor PTV/Split (1:150) a 240 C. Programao de temperatura: 150 C (10 s); 102 C min-1 at 240 C (2,3 min). Foi utilizado hlio como gs de arraste a 0,5 mL min-1 (uxo constante). DIC de alta frequncia a 240 C.30
Figura 4. Cromatograma obtido na anlise dos teores de glicerina livre e total em amostras de biodiesel. 1- Glicerol, 2- Butanotriol (padro interno), 3- Mono-olena, 4-Tricaprina (padro interno). Condies cromatogrcas: coluna SE-54 com 3 m x 0,32 mm d.i. x 0,05 m e sistema de injeo no modo PTV/On-Column. A programao de temperatura adotada foi: 85 C por 0,3 min; 80 C min-1 at 270 C 32

CONCLUSO Em princpio, a cromatograa a gs ultrarrpida pode ser empregada em todos os campos de aplicao da cromatograa gasosa convencional, mas com algumas ressalvas. O acentuado aumento de velocidade alcanado pelo aumento da presso, pela utilizao de colunas com dimenses reduzidas e por altas taxas de aquecimento geralmente acompanhado pela concomitante perda de resoluo. No caso de amostras pouco complexas, a resoluo pode ser facilmente diminuda a um valor mnimo exigido, sem que haja problemas na identicao de pares crticos de componentes na amostra, ao passo que na separao de amostras mais complexas por CG-UR a perda de resoluo pode dicultar a identicao desses pares crticos. Dentre os trabalhos reportados na literatura, que fazem meno aplicao desta modalidade de cromatograa, quase todos lanam mo de alguma estratgia para contornar os problemas de resoluo cromatogrca de amostras complexas. Essas estratgias vo desde a utilizao da EM-ATV e sistemas SMB para auxiliar a interpretao de cromatogramas com resoluo insatisfatria, at mesmo ao emprego de programas especcos de deconvulao para realizar o tratamento de dados. Uma soluo mais condizente com os preceitos cromatogrcos seria a realizao de um estudo prvio detalhado, para escolher a fase estacionria de maior seletividade para a amostra a ser analisada por CG-UR. Enm, os principais conceitos relacionados CG-UR, assim como alguns aspectos tcnicos referentes instrumentao e acessrios utilizados, ainda podem ser exaustivamente explorados a m de tornar vivel a aplicao desta modalidade de CG em anlises de rotina. AGRADECIMENTOS Aos representantes da Thermo Fisher Scientic Inc. por cederem imagens referentes ao mdulo UFM-GC; aos apoios nanceiros da FUNDUNESP (Fundao para o Desenvolvimento da Unesp), CAPES (Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior) e do CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientco e Tecnolgico) s pesquisas, na forma de auxlios e bolsas. REFERNCIAS

Povolo et al. aplicaram a CG-UR no estudo da pureza de gorduras (triacilglicerois) presentes em amostras de leite de vaca. A potencialidade da tcnica para este tipo de aplicao foi ressaltada pelos autores, que obtiveram um desvio padro relativo (DPR) abaixo dos 2% para praticamente todos os triacilglicerois presentes na amostra. A Figura 5 traz uma comparao entre os cromatogramas obtidos por CG-C e CG-UR e as condies em que as anlises foram realizadas.31

Figura 5. Comparao entre as modalidades CG-C e CG-UR. (a) coluna HP-1 de 4 m x 0,32 mm d.i. x 0,1 m. Injetor On-Column. As condies do forno foram: 60 C (2 min); 35 C min-1 at 340 C (2 min). Gs de arraste: hidrognio a 5 mL min-1 (uxo constante). DIC a 350 C. (b) Coluna HP-1 de 2,5 m x 0,32 mm d.i. x 0,05 m. Injetor PTV/Split (1:30). Programao de temperatura: 150 C (0,5 min); 60 C min-1 at 340 C (0,5 min). Gs de arraste: hidrognio a 3 mL min-1 (uxo constante). DIC de alta frequncia a 350 C. Os nmeros de 24 a 54 correspondem ao tamanho da cadeia carbnica dos triacilglicerois encontrados na gordura do leite. Adaptada de ref. 31

1. Dandeneau, R.; Hawkes, S.; Chromatographia 1980, 13, 686. 2. Jonker, R. J.; Poppe, H.; Huber, J. F. K.; Anal. Chem. 1982, 14, 2447. 3. Lewis, D. A.; Vouros, P.; Karger, B. L.; Chromatographia 1982, 15, 117. 4. Cramers, C. A.; Leclercq, P. A.; J. Chromatogr., A 1999, 842, 3. 5. Cramers, C. A.; Janssen, H.; van Deursen, M. M.; Leclercq, P. A.; J. Chromatogr., A 1999, 856, 315. 6. Collins, C. H.; Braga, G. L.; Bonato, P. S.; Fundamentos de Cromatografia , UNICAMP: Campinas, 2006; Lanas, F. M.; Cromatograa Gasosa, Acta: So Carlos, 1993.

2232

Sequinel et al.

Quim. Nova

7. Pereira, A. S.; Aquino Neto, F. R.; Quim. Nova 2000, 23, 370. 8. Matisov, E.; Domotorov, M.; J. Chromatogr., A 2003, 1000, 199. 9. Gaspar, G.; Vidal-Madjar, C.; Guiochon, G.; Chromatographia 1982, 15, 125. 10. Ettre, L. S.; LCGC 2001, 19, 120. 11. Hinshaw, J. V.; LCGC 2001, 19, 170. 12. Leclercq, P. A.; Cramers, C. A.; J. High Resolut. Chromatogr. Chromatogr. Commun. 1985, 8, 764. 13. Blumberg, L. M.; J. High Resol. Chromatogr. 1997, 20, 597. 14. Blumberg, L. M.; J. High Resol. Chromatogr. 1997, 20, 679. 15. Leclercq, P. A.; Cramers, C. A.; Mass Spectrom. Rev. 1998, 17, 37. 16. Korytr, P.; Janssen, H. G.; Matisov, E.; Brinkman, U. A.; Trends Anal. Chem. 2002, 21, 558. 17. Dagan, S.; Amirav, A.; J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1996, 7, 737. 18. van Deursen, M.; Beens, J.; Janssen, H. G.; Leclercq, P. A.; Cramers, C. A.; J. Chromatogr., A 2000, 878, 205. 19. Bicchi, C.; Brunelli, C.; Cordero, C.; Rubiolo, P.; Galli, M.; Sironi, A.; J. Chromatogr., A 2004, 1024, 195. 20. Lanas, F. M.; McNair, H. M.; Quim. Nova 1983, 6, 6. 21. http://chromatographyonline.findanalytichem.com/lcgc/article/ articleDetail.jsp?id=564647, acessada em Outubro 2010. 22. Blumberg, L. M.; Klee, M. S.; J. Microcolumn Sep. 2000, 12, 508. 23. Blumberg, L. M.; Klee, M. S.; Anal. Chem. 2000, 72, 4080. 24. Dorman, F. L.; Overton, E. B.; Whiting, J. J.; Cochran, J. W.; GardeaTorresdey, J.; Anal. Chem. 2008, 80, 4487. 25. Krkosov, Z.; Kubinec, R.; Jurdakova, H.; Blasko, J.; Ostrovski, I.; Sojak, L.; Sevcik, J.; Chem. Pap. 2008, 62, 135. 26. Eiceman, G. A.; Gardea-Torresdey, J.; Overton, E.; Carney, K.; Dorman, F.; Anal. Chem. 2004, 76, 3387. 27. Davis, S. S.; Makarov, A. A.; Hughes, J. D.; Rapid Commun. Mass Spectrom. 1999, 13, 237. 28. Bicchi, C.; Brunelli, C.; Cordero, C.; Rubiolo, P.; Galli, M.; Sironi. A.; J. Chromatogr., A 2005, 1071, 3. 29. Facchetti, R.; Cadoppi, A.; Rev. Anal. 2005, 16, 63. 30. Ficarra, A.; Fiego, D. P.; Minelli, G.; Antonelli, A.; Food Chem. 2010, 121, 809. 31. Povolo, M.; Pelizzola, V.; Contarini, G.; Eur. J. Lipid. Sci. Technol. 2008, 110, 1050. 32. Cavagnino, D.; Munari, F.; Pisani, S.; Anais XII Congresso Latino Americano de Cromatografia e Tcnicas Relacionadas Colacro , Florianpolis, Brasil, 2008. 33. Luong, J.; Gras, R.; Jennings, W.; J. Sep. Sci. 2007, 30, 2480. 34. Pierone, D.; 10 Edio do Congresso Analitica Latin America, So Paulo, Brasil, 2009.

35. Mastovska, K.; Lehotay, S. J.; J. Chromatogr., A 2003, 1000, 153. 36. Amirav, A.; Tzanani, N.; Wainhaus, S. B.; Dagan, S.; Eur. Mass Spectrom. 1998, 4, 7. 37. Dmtrov, M.; Kirchner, M.; Matisov, E.; Zeeuw, J.; J. Sep. Sci. 2006, 29, 1051. 38. Facchetti, R.; Cadoppi, A.; LCGC Europe 2005, 18, 338. 39. http://www.analiticaweb.com.br/newsletter/07/10132.pdf, acessada em Outubro 2010. 40. Ehrmann, E. U.; Dharmasena, H. P.; Carney, K.; Overton, E. B.; J. Chromatogr. Sci. 1996, 34, 533. 41. Jain, V.; Phillips, J. B.; J. Chromatogr. Sci. 1995, 33, 55. 42. Phillips, J. B.; Jain, V.; J. Chromatogr. Sci. 1995, 33, 541. 43. Overton, E. B.; Carney, K. R.; Roques, N.; Dharmasena, H. P.; Field Anal. Chem. Tech. 2001, 5, 97. 44. Sloan, K. M.; Mustacich, R. V.; Eckenrode, B. A.; Field Anal. Chem. Tech. 2001, 5, 288. 45. van Deursen, M.; Beens, J.; Cramers, C. A.; J. High Resol. Chromatogr. 1999, 22, 509. 46. van Deursen, M.; Janssen, H. G.; Beens, J.; Rutten, G.; Cramers, C. A.; J. Microcolumn Sep. 2001, 13, 337. 47. Mustacich, R. V.; US pat. 5,782,964 1998. 48. Mustacich, R. V.; US pat. 6,490,852 2002. 49. Mustacich, R. V.; James, F. E.; US pat. 6,682,699 2004. 50. Magni, P.; Zilioli, G.; Facchetti, R.; US pat. 7,228,067 2007. 51. Dallge, J.; Vreuls, R. J. J.; van Iperen, D. J.; van Rijn, M.; Brinkman, U. A.; J. Sep. Sci. 2002, 25, 608. 52. Cavalli, E. J.; Guinchard, C.; J. Chromatogr. Sci. 1995, 33, 573. 53. Hinshaw, J. V.; LCGC 2003, 21, 268. 54. Del Grande, M.; comunicao pessoal (Qumico de Aplicao Sinc do Brasil). 55. Gonalvez, M.; comunicao pessoal (Qumico de Aplicao Instrulab Instrumentos para Laboratrio). 56. Pieroni, D.; comunicao pessoal (Manager for Liquid and Gas Chromatography Products Nova Analtica Importao e Exportao Ltda). 57. Dagan, S.; Amirav, A.; J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1995, 6, 120. 58. Dagan, S.; Amirav, A.; Eur. Mass Spectrom. 1998, 4, 15. 59. Quintella, C. M.; Quim. Nova 1996, 19, 660. 60. American Society for Testing Materials; ASTM D 6584: Determination of Free and Total Glycerin in B-100 Biodiesel Methyl Esters By Gas Chromatography, West Conshohocken, 2008. 61. Comit Europen de Normalisation; EN 14105: Fat and oil derivatives Fatty Acid Methyl Esters (FAME) Determination of free and total glycerol and mono-, di-, triglyceride contents, Brussels, 2003.