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FERMENTAO EM ESTADO SLIDO DE DIFERENTES RESDUOS PARA A OBTENO DE LIPASE MICROBIANA

rica Mara Dantas 1 Luciana Cristina Lins de Aquino2 RESUMO A fermentao em estado slido destaca-se no aproveitamento de resduos agroindustriais para a sntese de diversos compostos de interesse industrial e de elevado valor agregado. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de resduos agroindustriais (torta de mamona, torta de babau, sementes de abbora, casca de abacate e borra de caf) para a obteno de lipase microbiana utilizando o microrganismo Aspergillus niger. Nos experimentos fermentativos estudou-se a influncia do teor de agua do substrato (35 a 65%b.u.) e avaliou-se a cintica de produo de lipase. O extrato enzimtico obtido nos processos foi avaliado quanto ao efeito do pH (entre 2,0 e 8,0) e da temperatura (entre 30 e 70 oC) na atividade lipoltica. Maior produo de lipase (24,6 U g-1) foi obtida quando utilizado como fonte de carbono a torta de babau contendo um teor de gua de 45%b.u. durante 168 horas de fermentao. A lipase obtida a partir deste resduo obteve maior atividade enzimtica (3278 U g-1) em pH 2,0 e temperatura de 30 C. Atravs deste trabalho verificou-se que os resduos: sementes de abbora, cascas de abacate, torta de babau, torta de mamona e borra de caf demonstraram potencial para a obteno de lipase microbiana acdica. Palavras-chave: Lipase, Fermentao em estado slido, Resduo agroindustrial.

SOLID STATE FERMENTATION OF DIFFERENT RESIDUES TO OBTAIN MICROBIAL LIPASE

ABSTRACT The solid state fermentation have been used agroindustrial residues for the synthesis of various high value compounds. The objective of this study was to evaluate the potential of agroindustrial residues (castor oil cake, babassu oil cake, pumpkin seeds, avocado rind and coffee grounds) to obtain microbial lipase using the microorganism Aspergillus niger. In the fermentations was evaluated the effect of moisture content in the substrate (35 to 65% w.b.) and the kinetics of lipase production. It was evaluated the effect of pH (between 2.0 and 8.0) and temperature (between 30 and 70 C) on the hydrolytic activity of enzymatic crude extract. The higher production of lipase (24.6 U g-1) was obtained when used babassu cake, as a carbon source, containing 45% w.b. of moisture content for 168 hours of fermentation. A lipase presented higher enzymatic activity (3278 U g-1) at pH 2.0 and temperature of 30 C. Through this work it was found that the waste: pumpkin seeds, avocado rind, babassu oil cake, castor bean cake and coffee grounds have shown potential for obtaining acidic microbial lipase. Keywords : Lipase, Solid state fermentation, Agroindustrial residue.

Protocolo 103.039 de 12/09/2009 1 Graduado em Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Sergipe, Av. Marechal Rondon, s/n, Jardim Rosa Elze, CEP 49000-000, So Cristvo, Se. Email: em_cv@hotmail.com 2 Professora Doutora do Curso de Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Sergipe, Av. Marechal Rondon, s/n, Jardim Rosa Elze, CEP 49000-000, So Cristvo, Se. Email: aquinoluciana@hotmail.com

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INTRODUO As atividades agropecurias e de processamento de produtos agropecurios tm proporcionado srios problemas de poluio no solo, em guas superficiais e em guas subterrneas. Os resduos slidos de agroindstrias (bagaos, tortas, restos de frutas e hortalias, etc.) so provenientes de usinas sucro-alcooleiras, matadouros, indstrias do processamento de carnes (vsceras e carcaa de animais), frutas e hortalias (bagao, tortas, refugo e restos), indstria da celulose e papel (resduos da madeira, lodo do processo de produo e do tratamento de guas residurias), curtumes (aparas de couro e lodo do processo e tratamento de guas residurias) e outros. Muitos frutos comestveis so processados para fabricao de sucos naturais, sucos concentrados, doces em conserva, polpas e extratos, os quais possuem sementes que so, muitas vezes, descartadas e poderiam ser utilizadas para minimizar o desperdcio de alimentos (Vargas, 2004). O descarte de resduos representa um crescente problema devido ao aumento da produo. Os maiores impactos ambientais provocados por resduos slidos orgnicos so decorrentes da fermentao do material, podendo ocasionar a formao de cidos orgnicos (chorume lquido de elevada DBO formado com a degradao do material orgnico e a lixiviao de substncias txicas) com gerao de maus odores e diminuio do oxignio dissolvido em guas superficiais (Graminha et al., 2008). Devido a quantidade de nutrientes disponveis nos resduos slidos agroindustriais estes podem ser convertidos em produtos comerciais ou matrias-primas para processos secundrios. Neste contexto a fermentao em estado slido (FES) desempenha um papel de destaque no aproveitamento de resduos slidos visando a sntese de diversos compostos de alto valor agregado e de grande interesse industrial. A FES aplicada para produo de alimentos, biopesticidas, e substncias qumicas diversas. O grande potencial principalmente na produo de enzimas atravs de fungos filamentosos, os quais tm recebido a maioria das atenes nas pesquisas, pois apresentam capacidade de crescimento em baixos nveis de gua (Couto e Sanroman, 2006; Rodriguez et al., 2006; Pinheiro, 2006; Graminha et al., 2008; Sun e Xu, 2008 ). Recentemente alguns pesquisadores utilizaram resduos de alimentos provenientes de restaurantes para a produo de

glicoamilases microbianas (Wang et al., 2008). Resduos provenientes da produo de biodiesel, tais como torta de pinho manso e de mamona tambm tem sido aproveitada para a obteno de lipases e proteases microbianas (Mahatan et al., 2008; Godoy et al., 2009). As lipases (triglicerol acil-hidrolases, E.C. 3.1.1.3), so enzimas de origem animal, vegetal ou microbiana, definidas como hidrolases de steres contendo cidos graxos de cadeia longa, saturados ou insaturados, com doze ou mais tomos de carbono. Dependendo da fonte, podem ter massa molecular variando entre 20 a 75 kDa, atividade enzimtica em pHs entre 4,0 a 9,0 e em temperaturas variando desde a ambiente at 70 C (Coelho et al., 2001). As lipases microbianas constituem um importante grupo de enzimas biotecnolgicamente valiosas, principalmente, pela versatilidade de suas propriedades e fcil produo de massa. Essas enzimas so diversificadas na suas propriedades enzimticas e especificidade a substratos tornando-se muito atrativas para aplicaes industriais na obteno de vrios produtos tais como: alimentos, detergentes, produtos farmacuticos, cosmticos, produtos txteis e fbricas de papel (Sharma et al., 2001; Pelizer et al., 2007). Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de vrios resduos agroindustriais para a obteno de lipase microbiana atravs de fermentao em estado slido (FES) utilizando o microrganismo Aspergillus niger MATERIAIS E MTODOS O microrganismo Aspergillus niger foi adquirido da coleo de culturas do Instituto Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro, Brasil), mantido sob refrigerao (4 C) em tubos de ensaio inclinados contendo meio BDA (gar batata dextrose). Os resduos utilizados foram: sementes de abbora (35% de lipdeos), cascas de abacate (11% de lipdeos), torta de babau (2,6% de lipdeos), torta de mamona (0,6% de lipdeos) e borra de caf (15% de lipdeos). Estes foram secados em estufa a 80 C por 24 horas, posteriormente triturados e armazenados at sua utilizao. As fermentaes foram realizadas em placas de petri contendo os resduos (100 g) e 1 mL de suspenso de esporos (7,2 x 106 clulas mL-1), mantidos temperatura em torno de 30C. Inicialmente para avaliar a influncia do teor de gua na produo da enzima lipase realizou-se experimentos com cada resduo

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contendo teores de gua de 35%, 45%, 55% e 65% b.u. durante 96 horas de fermentao. A enzima produzida foi extrada com gua destilada, centrifugada durante 10 min e o extrato bruto enzimtico (EBE) foi utilizado para a determinao da atividade enzimtica. A cintica de produo de lipase foi realizada atravs de fermentaes utilizando cada resduo no teor de gua pr-determinado. De tempos em tempos retirou-se uma amostra do material com gua destilada e determinou-se a atividade enzimtica. O extrato bruto enzimtico (EBE) obtido nestes processos foi utilizado para os experimentos subseqentes de caracterizao bioqumica. A determinao da atividade enzimtica foi realizada atravs da mistura de 1 mL do extrato bruto enzimtico, 1 g de leo de oliva e 4 mL tampo fosfato de sdio (pH 6,0, 50 mM), mantendo-se sob agitao 130 rpm, temperatura de 30C durante 60 min. A reao foi paralisada pela adio 15 mL de acetona:etanol (1:1 em volume) e a atividade foi medida pela titulao dos cidos graxos liberados com soluo de KOH 50mM usando fenolftalena como indicador. Um branco contendo o mesmo meio reacional sem o extrato enzimtico foi titulado para a determinao da quantidade pr-existente de cidos graxos livres no substrato empregado. A atividade enzimtica foi calculada segundo a Equao 1 (Pinheiro et. al., 2006).

oliva comercial e tampes na concentrao de 100 mM, em diferentes valores de pH (2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0). As solues foram mantidas temperatura de aproximadamente 30 C, sob agitao (130 rpm), durante 60 min e a atividade enzimtica foi calculada. Para avaliar o efeito da temperatura, a soluo contendo extrato bruto enzimtico (EBE), leo de oliva e tampo (onde se obteve maior atividade lipoltica) foi mantida sob agitao em temperaturas de 30 C; 40 C; 50 C; 60 C e 70 C durante 60 min. A atividade enzimtica foi determinada como descrito anteriormente. RESULTADOS E DISCUSSO Inicialmente avaliou-se a influncia do teor de gua dos substratos, entre 35% e 65%, na produo de lipase atravs da FES. O teor de gua um fator bastante significativo nas propriedades fsicas do substrato. Elevado teor de gua causa a diminuio da porosidade do substrato, diminuindo assim a troca de gases. Por outro lado baixo teor de gua pode acarretar na diminuio do crescimento microbiano e conseqente menor produo de enzima (Mahanta et al., 2008). Os resultados obtidos esto apresentados na Figura 1. O teor de gua dos substratos influenciou de maneira significativa a atividade hidroltica do EBE ao longo da fermentao. Foi verificado que houve maior produo de lipase quando empregado cascas de abacate (10 U g-1) e sementes de abbora (24 U g-1 ) com teor de gua de 35% e torta de babau (25 U g-1) e borra de caf (13 U g-1) com teor de gua de 45%. Quando utilizado torta de mamona como substrato obteve-se mxima atividade enzimtica (19 U g-1) nos resduos contendo teor de gua de 35% e 45% b.u. . A cintica de produo de enzima foi verificada durante a fermentao dos resduos cascas de abacate, torta de babau e torta de mamona contendo teor de gua de 35% b.u.; e sementes de abbora e borra de caf contendo teor de gua de 45% b.u.. Os resultados esto encontram-se na Figura 2. As fermentaes dos resduos foram conduzidas at ser observado a queda ou estabilidade da atividade hidroltica no EBE. No processo fermentativo utilizando torta de mamona obteve-se mxima atividade enzimtica em 96 horas de fermentao (23 U g-1). Nas fermentaes com cascas de abacate e sementes de abbora obteve-se mxima atividade enzimtica de 15,5 U g-1 e 20 U g-1 respectivamente, em 144 horas de fermentao.

U=

[(Va Vb ) M 1000 Vd ] Vc t
m

(1) Onde: U - Atividade enzimtica da lipase (Ua g-1); Va- Volume final de KOH gasto para titular apenas os cidos graxos liberados do leo de oliva, aps a reao de transesterificao enzimtica usando o extrato bruto enzimtico (mL); Vb- Volume de KOH gasto para titular os cidos graxos pr existentes encontrados no leo de oliva (0,2 mL); M - Concentrao da soluo de KOH utilizada na titulao (M); t - tempo de reao (min); Vc - Volume de leo de oliva utilizado (mL); Vd- Volume de soluo de extrao (mL); m - Massa do substrato (g). Para avaliar a influncia do pH na atividade da enzima, preparou-se solues contendo o extrato bruto enzimtico, leo de

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Quando utilizados como torta de babau e borra de caf obteve-se mxima atividade hidroltica
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de 25 U g-1 e 20 U g-1, respectivamente, em 168 horas de fermentao.

Atividade hidroltica (U g-1)

25 20 15 10 5 30 40 50 60 70 Borra de caf Torta de babau Torta de mamona Semente de abbora Casca de abacate

Teor de agua (% base seca)

Figura 1. Influncia do teor de gua do substrato na produo da enzima lipase

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Atividade hidroltica (U g-1)

20 Borra de caf 15 Torta de babau Torta de mamona 10 Semente de abbora Casca de abacate 5 0 50 100 150 200 250

Tempo (horas)

Figura 2. Cintica de produo enzimtica atravs de FES utilizando diferentes resduos agroindustriais Atravs dos resultados constatou-se que o tempo de fermentao variou significativamente com o tipo de substrato utilizado. Apesar da torta de babau conter 2,6% de lipdeos, obtevese maior atividade hidroltica (24,6 U g-1) quando empregado este resduo como substrato. Uma hiptese para este resultado seria que a presena de outros nutrientes pode ter contribudo para o crescimento do microrganismo. Alm disso, como o teor de agua do substrato um fator importante para o crescimento microbiano em fermentao em estado slido, pode ter ocorrido maiores perdas de gua durante a fermentao dos demais resduos testados neste trabalho. Em comparao com pesquisadores que utilizaram resduos para a produo de lipase verificou-se que Ul-Haq et al. (2002) obtiveram mxima atividade enzimtica de 26,0 U g-1 utilizando farelo de trigo e o fungo Rhizopus oligosporous e Gombert et al. (1999) obtiveram mxima atividade enzimtica de aproximadamente 6,0 U g-1 utilizando torta de babau e Penicillium restrictum. Os resduos testados neste trabalho demonstraram potencial para a produo de lipase. Experimentos foram realizados para determinar o pH timo de atividade enzimtica do EBE obtido atravs da FES dos diferentes resduos. As reaes foram realizadas em

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diferentes tampes com pHs variando entre 2,0 e 8,0. Os resultados obtidos esto apresentados na Figuras 3 e 4.

Atividade hidroltica (U g-1)

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 1 3 5 pH

Torta de babau Torta de mamona Casca de abacate

Figura 3. Influncia do pH na atividade hidroltica do EBE obtido a partir de torta de babau, torta de mamona e cascas de abacate. Os resultados demonstraram que a atividade hidroltica do extrato bruto enzimtico (EBE) produzido a partir dos resduos agroindustriais diminuiu com o aumento do pH, sendo o valor mximo obtido em pH 2,0, o que demonstrou o carter acdico da enzima. Os EBEs obtidos a partir de borra de caf, torta de babau, torta de mamona, sementes de abbora e cascas de abacate demonstraram mxima atividade hidroltica (em pH 2,0) de 2000 U g-1, 3278 U g-1; 789 U g-1 e 2603 U g-1, respectivamente. De maneira geral os pesquisadores tm obtido lipases microbianas com mxima atividade enzimtica em pH prximo a neutralidade (Kamini et al, 1998; Hiol et al., 2000; Abbas et al., 2002; Diaz et al., 2006).
Atividade hidroltica (U g-1)
3000 2500 2000 1500 1000 500 0 1 pH 6 Borra de caf Semente de abbora

Apesar disto, alguns autores tm produzido lipase microbiana com carter acdico, tais como Mahadik et al., 2002 os quais obtiveram lipase a partir de farelo trigo utilizando Aspergillus niger, com mxima atividade enzimtica em pH 2,5, Mahadik et al., 2004 obtiveram lipase acdica por fermentao submersa em pH 5,5 utilizando Aspergillus niger e Mehtra et al., 2009 obtiveram lipase por fermentao submersa utilizando Aspergillus niger com mxima atividade enzimtica em pH 2,5 e temperatura de 50 C. Definido o pH onde obteve-se mxima atividade lipsica, a etapa seguinte foi avaliar a influncia da temperatura. A mistura reacional EBE, leo de oliva e tampo acetato de sdio pH 2,0 foi mantida sob agitao em diferentes temperaturas variando entre 30 C e 70 C durante 60 min e a atividade hidroltica foi determinada com descrito anteriormente. Os resultados esto demonstrados nas Figuras 5 e 6.
Atividade hidroltica (U g-1)
3500 3100 2700 2300 1900 25 45 65 Temperatura (C) Borra de caf Torta de babau Casca de abacate

Figura 5. Influncia da temperatura na atividade hidroltica do EBE obtido a partir de borra de caf, torta de babau e cascas de abacate.
Atividade hidroltica (U g-1)
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 25 45 Temperatura (C) 65 Torta de mamona Semente de abbora

Figura 4. Influncia do pH na atividade hidroltica do EBE obtido a partir de borra de caf e sementes de abbora.

Figura 6. Influncia da temperatura na atividade hidroltica do EBE obtido a partir de torta de mamona e sementes de abbora.

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O EBE obtida a partir da borra de caf, torta de mamona, cascas de abacate, sementes de abbora e torta de babau demonstrou mxima atividade enzimtica (em pH 2,0) nas temperaturas de 40 C; 50 C; 40 C; 70 C e 30 C, respectivamente. Os resultados esto em acordo com outros pesquisadores, os quais obtiveram lipases microbianas com mxima atividade enzimtica em temperaturas de 35 C (Hiol et al., 2000); 30 C (Ul-Haq et al., 2002); 37 C (Kamine et al., 1998); 45 C (Mahadik et al, 2002) e 50 C (Koblitz e Pastore, 2006). CONCLUSES Apesar de serem produzidas na maioria das pesquisas lipases com carter bsico, nas condies propostas neste trabalho, a enzima produzida a partir dos resduos sementes de abbora, cascas de abacate, torta de babau, torta de mamona e borra de caf, apresentou maior atividade hidroltica em pH 2,0, o que caracterizou a provvel produo de lipase acdica. Maior produo enzimtica (25 U g-1) foi obtida na fermentao em estado slido de torta de babau contendo um teor de gua de 45% durante 168 horas. Dentre os resduos testados, a lipase obtida a partir de torta de babau foi a que apresentou maior atividade hidroltica (3278 U g-1) em pH 2,0 e temperatura de 30 C. Os resduos agroindustriais, sementes de abbora, cascas de abacate, torta de babau, torta de mamona e borra de caf, os quais tradicionalmente so descartados em lixos ou solo apresentaram potencial para a obteno de lipase acdica. Com exceo da torta de mamona e da torta de babau (provenientes do processamento de biodiesel e de indstrias de refino de leos), no h relatos na literatura consultada do emprego dos demais resduos testados neste trabalho como substrato para a obteno de lipase microbiana. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS Abbas, H.; Hiol, A.; Deyris, V.; Comeau, L. Isolation and characterization of an extracellular lipase from Mucor sp strain isolated from palm fruit. Enzyme and Microbial Technology, v. 31, p. 968975, 2002. Coelho, M. A. Z.; leite, S. G. F.; Rosa, M. D. F.; Furtado, A. A. L. Aproveitamento de resduos agroindustriais: produo de enzimas a partir da casca de coco verde.

Boletim do Ceppa, v. 19, n. 01, p. 3342, 2001. Couto, S. R.; Sanroman, M. A. Application of solid-state fermentation to food industry A review. Journal of Food Engineering, v. 76, p. 291302, 2006. Diaz, J. C. M.; Rodrguez, J.A.; Roussos, S.; Cordova, J.; Abousalham, A.; Carriere, F.; Baratti, J. Lipase from the thermotolerant fungus Rhizopus homothallicus is more thermostable when produced using solid state fermentation than liquid fermentation procedures. Enzyme and Microbial Technology, v. 39, p.10421050, 2006. Godoy, M.G.; Gutarra, M.L.E; Maciel, F.M.; Shayany P.F.; Bevilaqua, J.V.; Machado, O.L.T.; Freire, D.M.G. Use of a low-cost methodology for biodetoxification of castor bean waste and lipase production. Enzyme and Microbial Technology, v. 44, p. 317 322, 2009. Gombert, A. K.; Pinto, A.L.; Castilho, L.R.; Freire, D.M.G. Lipase production by Penicillium restrictum in solid-state fermentation using babassu oil cake as substrate. Process Biochemistry, v. 35, p. 8590, 1999. Graminha, E.B.N.; Gonalves, A.Z.L.; Pirota, R.D.P.B.; Balsalobre, M.A.A; Gomes, E.R.S. Enzyme production by solid-state fermentation: Application to animal nutrition. Animal Feed Science and Technology, v. 144, p. 122, 2008. Hiol, A.; Jonzo, M.D.; Rugani, N.; Druet, D.; Sarda, L.; Comeau, L.C. Purification And Characterization Of An Extracellular lipase from a thermophilic Rhizopus oryzae strain isolated from palm fruit. Enzyme and Microbial Technology, v. 26, p. 421430, 2000. Ul-Haq, I.; Idrees, S.; Rajoka M. I. Production of lipases by Rhizopus oligosporous by solid-state fermentation. Process Biochemistry, v. 37, p. 637641, 2002. Kamini, N. R.; Mala, J. G. S.; Puvanakrishnan, R. Lipase production from Aspergillus niger, by solid-state fermentation using gingelly oil cake. Process Biochemistry, v. 33, n. 05, p. 505-511, 1998. Koblitz, M. G. B.; Pastore, G. M. Purification and biochemical characterization of an extracellular lipase produced by a new strain of rhizopus sp. Cincia Agrotcnica, v. 30, n. 03, p. 494-502, 2006. Mahadik, N. D.; Puntambekar, U. S.; Bastawde, K. B.; Khire, J. M.; Gokhale, D.

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V.;. Production of Acidic Lipase By Aspergillus niger in Solid State Fermentation. Process Biochemistry, v. 38, p.715, 2002. Mahadik, N.D.; Bastawde, K.B.; Puntambekar, U.; Khire, J.M.; Gokhale, D.V. Production of acidic lipase by a mutant of Aspergillus niger NCIM 1207 in submerged fermentation. Process Biochemistry, v.39, p. 20312034, 2004. Mahanta, N.; Gupta, A.; Khare, S. K. Production of protease and lipase by solvent tolerant Pseudomonas aeruginosa PseA in solid-state fermentation using Jatropha curcas seed cake as substrate. Bioresource Technology, v. 99, p.17291735, 2008. Mhetras, N. C.; Bastawde, K. B.; Gokhale, D. V. Purification and characterization of acidic lipase from Aspergillus niger NCIM 1207. Bioresource Technology, v. 100, p.14861490, 2009. Pinheiro, T. L. F. Produo de lipases por fermentao em estado slido e fermentao submersa utilizando Penicillium verrucosum como microorganismo. Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Misses Rio Grande do Sul. 2006. (Dissertao de Mestrado). Pelizer, L. H.; Pontieri, M. H.; Moraes, I. O. Utilizao de resduos agro-industriais em processos biotecnolgicos como perspectiva

de reduo do impacto ambiental. Journal of Technology Management and Innovation, v. 02, n. 01, 2007. Rodriguez, J. A.; Mateos, J.C.; Nungaray, J.; GonzaLez, V.; Bhagnagar, T.; Roussos, S.; Cordova, J.; Baratti, J. Improving lipase production by nutrient source modification using Rhizopus homothallicus cultured in solid state fermentation. Process Biochemistry, v. 41, p. 22642269, 2006. Sharma, R.; Chistib, Y.; Banerjee, U. C. Production, purification, characterization, and applications of lipases. Biotechnology Advances, v. 19, p. 627662, 2001.[ Sun, S. Y.; Xu, Y. Solid-state fermentation for whole-cell synthetic lipase production from Rhizopus chinensis and identification of the functional enzyme. Process Biochemistry, v. 43, p.219224, 2008. Vargas, G. D. L. P. Estudo da produo de lipase por Penicillium simplicissimum utilizando torta de soja como substrato, Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Misses Rio Grande do Sul. 2006. (Dissertao de Mestrado). Wang, Q.; Wang, X.; Wang, X.; Ma, H. Glucoamylase production from food waste by Aspergillus niger under submerged fermentation. Process Biochemistry, v. 43, p.280286, 2008.

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