Introduccin a la BIOQUMICA: BIOELEMENTOS, BIOMOlCULAS Y P OTENAS

Nmero atmico: corresponde al nmero de protones (Z), que es igual al nmero de electrones, debido a la naturaleza neutra del ncleo atmico. Elementos istopos: son elementos que tienen el mismo nmero atmico (Z), pero distinta masa, debido a que su nmero de neutrones es igualmente distinto. Suelen ser inestables, es decir, tienden a desintegrarse. Algunos istopos importantes son los istopos del hidrgeno (hidrgeno, deuterio y tritio), el istopo 1 del carbono o los istopos del uranio. Bioelementos: d!cese de aquellos elementos que componen o integran las biomol"culas. #ales elementos pueden clasi$icarse en% & 'ioelementos m(s abundantes% son el ), *, + y ,. -stos elementos suele $ormar orbitales h!bridos, con la $inalidad de poder establecer un mayor nmero de enlaces. .os orbitales h!bridos m(s $recuentes en la bioqu!mica son los sp/. 0e esta manera, un electrn de un orbital s promociona al orbital p siguiente, quedando los electrones dispuestos segn el 1rincipio de 2(3ima 2ultiplicidad de )und. #ambi"n son muy abundantes el $s$oro y el azu$re. & ,tros bioelementos abundantes% son el +a, 4, *l, *a y 2g. & ,ligoelementos% son elementos que se encuentran en proporciones muy ba5as (in$eriores al 6718), pero que no por ello de5an de ser indispensables para la 9ida. Algunos e5emplos son el Zn, :, ;e o ;.

Enlace inico: es aquel enlace en el que se produce una trans$erencia de electrones. ,curre entre iones de carga opuesta (+a<<*l&+a*l). -sto se produce debido a la =egla del ,cteto, por la cual un elemento tiende siempre a adoptar la con$iguracin electrnica estable del gas noble m(s cercano, que es aquella en el que todos sus orbitales est(n llenos.

Enlace covalente: es aquel enlace en el que los electrones son compartidos por los (tomos implicados. 1ueden distinguirse dos tipos de enlace co9alente% & -nlace apolar% se dice que un polo se da cuando es posible marcar e3tremos di$erenciados debido a la distribucin de las cargas. -l enlace co9alente apolar se produce cuando los elementos que $orman la mol"cula tienen una electronegati9idad similar, es decir, tienden a atraer electrones con la misma $uerza. #ambi"n ocurre cuando el (tomo central se encuentra saturado y todos los enlaces son iguales (como en el metano). & -nlace polar% se produce cuando uno de los (tomos tiende a captar los electrones que se comparten. -sto depende de la electronegati9idad, la tendencia de un (tomo a atraer hacia s! los electrones compartidos en un enlace co9alente. -n caso de que, en un enlace, la electronegati9idad de los (tomos sea distinta, la carga se desplazar( hacia el de electronegati9idad mayor, pasando a constituirse cada uno en un polo, con densidad de carga opuesta.

El agua: el agua es una mol"cula caracter!stica del enlace co9alente polar. -l agua es una mol"cula de $rmula )>, que es el disol9ente $undamental del medio interno. -l agua mantiene su estado l!quido en condiciones est(ndar gracias al puente de hidrgeno. Puente de hidrgeno: interaccin electrost(tica entre un (tomo electronegati9o ($undamentalmente +, ,, S, o ;) en una mol"cula, y un (tomo de hidrgeno unido a otro (tomo electronegati9o, y localizado en otra mol"cula. .a $uerza de un puente de hidrgeno es 16 9eces in$erior a la de un enlace co9alente normal. -l puente de hidrgeno permite que cada mol"cula de agua se una a otras $ormando unos caracter!sticos tetraedros, los cuales al cristalizar (al solidi$icar), crean un espacio hueco interno que permite que el hielo $lote.

Otras caractersticas del agua: & 1unto de ebullicin% es apro3imadamente de 166?*@/A/4. Se debe al escape de mol"culas de agua inducida por el calor. -st( in$luido por la presin, de manera que puede 9ariar m!nimamente de manera directamente proporcional a "sta. Bn punto de ebullicin tan alto es anormal, ya que mol"culas de peso parecido (*) ) hier9en a temperaturas ba5!simas. -sto se

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debe al puente de hidrgeno, que el agua establece consigo misma y con otras mol"culas con (tomos electronegati9os. ;uerza cohesi9a% consiste en la capacidad de $ormar puentes de hidrgeno consigo misma y con otras mol"culas. -l peso molecular del comple5o resultante produce que la in$luencia de la gra9edad impida el escape de mol"culas. *onstante diel"ctrica ele9ada. Bna constante diel"ctrica, representada por "psilon ( ), es una propiedad que parte de una $rmula que describe la atraccin entre dos cargas cuando entre ellas hay una sustancia denominada diel"ctrico. .a $rmula es ;@CqD >, donde es una constante que depende de cada sustancia. -n el caso del agua, es @E6, siendo esta la m(s ele9ada de todas las conocidas y, desde luego, muy superior a la de mol"culas de peso similar como el **l (@>). .a solubilidad se relaciona con esta propiedad. Alto calor espec!$ico% se de$ine como el calor que hay que suministrar para pro9ocar un #@1?*. -l agua por tanto necesita de un gran calor para aumentar su temperatura, y una 9ez absorbido, cede este calor tambi"n de manera lenta. -sta propiedad es $undamental para la $uncin de termostato dentro del medio interno. 0isol9ente uni9ersal% se debe a su capacidad de $ormar puentes de hidrgeno con las sustancias a las que disuel9e. *ar(cter an$tero% el agua puede comportarse como (cido y como base. Se debe a su grado de ionizacin. -l agua se disocia liberando protones y grupos hidro3ilo. -l hecho de que el o3!geno tenga electrones no enlazantes y su alta electronegati9idad atraen a estos protones $ormando iones hidronio. -l grado de ionizacin es muy ba5o y apro3imadamente de 1 mol"cula cada FG16E.

Interacciones hidrofbicas: propiedad que tienen las mol"culas no polares de asociarse entre ellas en presencia de una sustancia acuosa. Se deben en ltimo t"rmino a la entrop!a. -l aceite, que es insoluble en agua, puede ordenarse ligeramente al suministrarle energ!a. Sin embargo, la tendencia uni9ersal al desorden, 9ol9er( a su estado inicial. .as interacciones hidro$bicas tienen importancia en el conte3to de las interacciones prote!na&prote!na, y en los l!pidos constituyentes de la membrana unitaria. Fuer as de van der !aals: son $uerzas de estabilizacin molecular que $orman un enlace qu!mico no co9alente en el que participan dos tipos de $uerzas% & .as $uerzas de dispersin% se debe a la $ormacin de dipolos por el giro de los electrones. .a presencia de este dipolo produce la polarizacin de (tomos contiguos (dipolos inducidos) estableci"ndose atracciones de tipo electrost(tico entre los dipolos cercanos. & .as $uerzas de repulsin% se produce una repulsin electrost(tica entre las nubes electrnicas de (tomos contiguos. *omo resultado de estas dos $uerzas se delimita la distancia m!nima permitida entre dos ncleos atmicos contiguos, distancia que se conoce como radio de 9an der Haals. 0os (tomos se atraen hasta que la distancia entre ellos sea igual a sus radios de 9an der Haals. .a energ!a del enlace es de 1 a > IcalDmol.

Otras interacciones no covalentes: son interacciones carga&carga, carga&dipolo, dipolo&dipolo, carga&dipolo inducido y dipolo&dipolo inducido. "ustancias anfip#ticas: son a la 9ez polares y no polares. -stas mol"culas suelen recibir el nombre de detergentes. .a parte apolar tiene carga neutra y no interacciona con agua, mientras que la parte polar tiene densidad de carga y s! reacciona con agua. -sto e3plica el poder limpiador de los detergentes% su parte apolar reacciona con la grasa, mientras que la parte polar reacciona con el agua. .os $os$ol!pidos de la membrana celular tienen tambi"n car(cter antip(tico. p$ del agua: el agua se disocia de esta manera% >)>,)/,<<,)&, donde 4a@J)/,<K J,)&KDJ)>,K>, como todos son constantes, entonces ello 9ale 16&AG16&A@16&1 @4L -l agua mantiene una constante de molaridad de FF7M2 (1666gD1Egmol), por lo tanto, si para FF2 hay 16&Aprotones, para 16N, habr( dos protones, es decir, que la constante de disociacin es de > mol"culas por cada 1666666666. -l p) se de$ine como p)@log 1DJ)/,<K, siendo el p) del agua de log 1D16&A@A. #ambi"n se cumple que J)<K@16&p). .a ci$ra natural del p) humano se mantiene en el rango A7/M&A7 M oscilando en una concentracin de 6n2. -sto se puede mantener de la siguiente manera% -l p4 se de$ine como el logaritmo de la in9ersa de la constante de disociacin% p4@&log4 a, donde para un (cido d"bil monoprtico, 4a se de$ine como% A)A&<)< 4a@JA&K J)<KDJA)K, despe5ando, )<@ 4aJA)KDJA&K. p)@p4<log JA&KDJA)K. Si JA&K@JA)K, entonces p)@p4. -sto es lo que ocurre cuando se dibu5a la disociacin de un (cido en una gr($ica%

Siendo 4a@JA&K J)<KDJA)K, "sta no puede medirse para (cidos $uertes, dado que estar!amos en una situacin en la que JA)K tender!a a 6 y no se puede di9idir por 6. -n (cidos d"biles, se establece una correspondencia% & 4a grande, JA&KOOJA)K & 4a media, JA&KPJA)K & 4a ba5a, JA&KQQJA)K 1or tanto, cuando el p) es ba5o, es decir, cuando el (cido se disocia en su gran mayor!a, la 4a alcanzar( 9alores altos, 5usto al contrario que el p4. %isoluciones tampn: si se obser9a la gr($ica superior se obser9a que en los e3tremos, para 9ariaciones del p) grandes, apenas se producen 9ariaciones de la disociacin. -sto se debe a que las altas concentraciones de protones o iones hidro3ilo desplazan $uertemente el equilibrio. Sin embargo, en la zona del p4, para 9ariaciones m!nimas de la acidez, se obtienen importantes cambios de disociacin. Bna disolucin tampn es un sistema compuesto de un (cido y su base con5ugada en igual concentracin, de manera que la adicin de un (cido o un (lcali pro9oque 9ariaciones m!nimas sobre el equilibrio. -sto ocurre cuando el p)Pp4. Son $undamentales a la hora de mantener la homeostasis en el medio interno. &mino#cidos: biomol"culas constituyentes de las prote!nas. Se caracterizan por poseer un grupo amino (+)>) y un grupo (cido (*,,)), as! como por tener un carbono asim"trico (e3cepto la alanina), y ser de $orma (e3cepto la glicocola).

Isomera de los amino#cidos 'aa(: los amino(cidos poseen dos tipos de isomer!a% & Rptica% se debe al enantiomor$ismo. .os amino(cidos son capaces de des9iar la luz polarizada, debido a su car(cter asim"trico. -sto nos permite di9idir a los amino(cidos en de3trgiros (si la

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des9!an hacia la derecha), o le9giros (si la des9!an hacia la izquierda). -n la naturaleza se encuentran ambos tipos. -structural% di9ide a los amino(cidos en $ormas . (tambi"n S), y $ormas 0 (=), segn su tipo de giro al ordenar sus mol"culas de menor a mayor peso molecular, cuando el ) queda en el plano trasero. .a isomer!a estructural es independiente de la ptica. #odos los amino(cidos del organismo son de tipo ..

)lasificacin *+ de los amino#cidos: & Amino(cidos no polares o hidro$bicos% Slicina, Talina, Alanina, .eucina, :soleucina, 2etionina, 1rolina, ;enilalanina y #ript$ano. & Amino(cidos polares sin carga% #reonina, Serina, Asparagina y Slutamina. & Amino(cidos polares con posibilidad de carga% .isina, Arginina e )istidina. & Amino(cidos ac!dicos% los grupos = poseen carga neta negati9a, a p)@A. Son el (cido Asp(rtico y el (cido Slut(mico. #ambi"n se ionizan de esta manera la tirosina y la ciste!na. &mino#cidos no proteicos: adem(s de los >6 amino(cidos corrientes se conocen unos 1F6 amino(cidos m(s, que se encuentran en c"lulas o te5idos de $orma libre o combinada. .a mayor!a son precursores de los &amino(cidos. Se pueden clasi$icar en% & 1recursores importantes o intermediarios del metabolismo% &alanina, homociste!na, homoserina, citrulina y ornitina. & Amino(cidos con con$iguracin 0% (cido 0&glut(mico, 0&alanina, 0&serina. & 1ropios de plantas y hongos% cana9anina, (cido -nclico, &cianoalanina. &mino#cidos raros: son aquellos que resultan de la modi$icacin de un amino(cido est(ndar una 9ez que se ha ensamblado la prote!na% & &hidro3iprolina & F& hidro3ilisina. & M&+&metil lisina & &carbo3iglutamato & 0esmosina & Selenociste!na. )omportamiento #cido,base de los amino#cidos: cuando un amino(cido se disuel9e en agua se $orma un in dipolar denominado zLitterion. .os amino(cidos pueden comportarse, dependiendo del p), como (cidos o como bases, ya que pueden ionizarse sus dos radicales% amino y (cido. -sto est( !ntimamente ligado con la $uncin homeost(tica de las prote!nas. 1or ello se dice que los amino(cidos son an$teros, y a menudo se denominan an$olitos. Protenas: el enlace peptdico:

"ecuenciacin de las protenas: se trata de un procedimiento que trata de determinar de manera $iable el orden de amino(cidos de una prote!na (la secuencia). *onsta de 9arios pasos% 1) A la hora de determinar una secuencia de amino(cidos, se debe primero saber si la prote!na contiene m(s de una secuencia, y, en este caso, separarlas% & Si las cadenas no poseen enlaces co9alentes trans9ersales, se separan con una disolucin (cida, b(sica o altamente salina. & Si contienen enlaces como puentes disul$uro (S&S), "stos deben ser escindidos. -l procedimiento principal es la o3idacin con (cido per$rmico de los azu$res a grupos sul$hidrilo, y posterior alquilacin de los mismos para dar lugar a compuestos S&carbo3imetilados.

>) )idrlisis completa% tras la puri$icacin, se somete a la prote!na a hidrlisis completa que suele realizarse mediante cale$accin en medio (cido. -l procedimiento habitual es )*l a 16F?* durante 9arias horas. #al proceso puede a$ectar a algunos amino(cidos, pro9ocando por e5emplo la destruccin del tript$ano. /) 0eterminacin del e3tremo +&terminal% e3isten tres procedimientos% & 1or reacti9o de Sanger (>& dinitro $luorobenceno o 0+;'). & 1or cloruro de dansilo. & 1or reacti9o de -dman. ) 0eterminacin del e3tremo *&terminal% & 1or hidracinlisis. & 1or borohidruro de litio. & 1or enzima carbo3ipeptidasa% esta enzima ataca al *,,) #erminal, al que separa de la cadena principal. Bna 9ez separado al *&terminal, ataca al nue9o radical e3tremo, lo que puede suponer un problema. F) 1rimera $ragmentacin mediante proteasas espec!$icas% rompen por el lado + o por el lado * de 43. Algunas proteasas habituales son la tripsina y la pepsina. M) Separacin y an(lisis de p"ptidos. -n este punto, se puede recurrir a tres 9!as distintas% & Sen bidimensional% separa la prote!na en $uncin de la relacin carga&masa. Bna primera separacin lateral dispone los amino(cidos en $uncin de su masa y otra 9ertical, en $uncin de su punto isoel"ctrico. & -spectrometr!a de masas% la prote!na se con9ierte en un in que se mue9e en el campo electromagn"tico en $uncin de su carga y de su masa. & +ue9a separacin y an(lisis. Se utilizan otras enzimas que hidrolicen la prote!na dando lugar a otros $ragmentos y mediante superposicin se obtiene la secuencia completa de la prote!na. Si la superposicin da lugar a error o son posibles mltiples combinaciones, se puede hidrolizar y analizar la prote!na nue9amente. Punto isoel-ctrico: se de$ine como el punto en el que la cantidad de aniones es igual a la cantidad de cationes, es decir, el 9alor del p) para el que un amino(cido es neutro respecto a la carga. p)@p41p4> D>

1ara determinar el punto isoel"ctrico de una prote!na, se procede a separar sus amino(cidos con carga en los siguientes grupos% & Srupo +a (amino(cidos neutros cuando no est(n disociados) p4@ 7>. o *arbo3ilo #erminal. o Ucido asp(rtico. o Ucido glut(mico. & Srupo +b% o *iste!na o #irosina. & Srupo 1a (protonados cuando no est(n ionizados)%

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o Amino #erminal. o .isina. o Arginina. Srupo 1b% histidina

Siendo% & Cn@ &+D1<16p4&p). & Cp@ 1D1<16p)&p4. E"./0).0/& P/I1&/I& %E 2&" P/O.E3N&": es la secuencia lineal de amino(cidos que integran una prote!na, es decir, la estructura que indica los amino(cidos que la $orman y el orden en que se encuentran unidos. 0etermina tanto la especi$icidad de la prote!na como sus estructuras superiores. .a caracter!stica de esta con$ormacin es su disposicin caracter!stica

-l enlace pept!dico es el nico que inter9iene en esta estructuras. *on los >6 amino(cidos posibles, el nmero de combinaciones que se $orman es de >6n, donde n@n? de amino(cidos de la cadena. Evolucin de las protenas: las prote!nas e9olucionan mediante cambios en sus secuencias aminoac!dicas. .as prote!nas homlogas de dos especies suelen estar relacionadas e9oluti9amente y desempeVar la misma $uncin. 0e esta manera, sus cadenas polipept!dicas pueden tener longitud y composicin muy similares. & 2uchas posiciones de la secuencia de amino(cidos est(n ocupadas por el mismo residuo en todas las especies. 1or ello se les denomina residuos in9ariables. & -n otras posiciones e3iste una 9ariacin considerable en los amino(cidos de una especie a otra, por lo que se denominan residuos 9ariables. 0entro de estos residuos 9ariables podemos distinguir dos ni9eles de cambio% o *ambios conser9adores% conser9an la naturaleza de la cadena lateral. o *ambios no conser9adores. -l nmero de residuos que di$ieren en prote!nas homlogas entre dos especies cualesquiera es proporcional a la di$erencia $ilogen"tico entre ambas. ,tro concepto importante en la e9olucin es la duplicacin de los genes% e3isten prote!nas ($erredo3ina) cuyas dos mitades muestran claras homolog!as, lo que sugiere que el gen para la mol"cula completa surgi por duplicacin de un solo gen codi$icador de una mitad de la misma. 1utaciones en la secuencia aminoacdica: algunas prote!nas e3perimentan cambios mutacionales por la sustitucin de amino(cidos espec!$icos que pueden alterar su estructura y su $uncin con consecuencias positi9as o negati9as. Bn e5emplo de mutacin es la anemia $alci$orme, en la que una mutacin lle9a a adoptar la estructura hemoglobina en lugar de la habitual hemoglobina A. )onfiguraciones de #tomos alrededor del enlace peptdico: & ;orma trans% se produce si los * se sitan orientados hacia distintas direcciones. & ;orma cis% se produce cuando los * se disponen en el mismo lado. $ibridacin 4 resonancia: el enlace pept!dico puede considerarse un h!brido de resonancia%

E"./0).0/& "E)0N%&/I& %E 2&" P/O.E3N&": el t"rmino estructura secundaria hace re$erencia a la con$ormacin local de algunas partes del polip"ptido. -s la con$ormacin espacial que adopta la estructura primaria para ser estable, y es consecuencia directa de la capacidad de giro de los enlaces tanto *&+ como *&*. #ales giros est(n de$inidos segn los (ngulos de =amachandran%

0onde est(n de$inidos @&M6? y @& F, &F6? -3isten dos estructuras secundarias destacables% la &h"lice y la &l(mina, descubiertas por 1auling y *orey. -3iste adem(s otra estructura distinta% la h"lice de col(geno. Algunas prote!nas que tienen pre$erentemente estructura secundaria son las queratinas y la $ibro!na de la seda. ,h-lice: es resultado del enrollamiento del esqueleto polipept!dico alrededor de un e5e longitudinal imaginario, disponi"ndose los grupos = hacia la cara e3terior de la h"lice. 0entro de la &h"lice podemos de$inir el giro de h"lice% unidad repetiti9a. ,cupa alrededor de F7 A a lo largo del e5e longitudinal. *ada giro de &h"lice comprende /7M amino(cidos. -l giro de la &h"lice es de3trgiro. .as prote!nas pueden presentar h"lices le9giras no muy largas. .a &h"lice puede $ormarse tanto con 0&amino(cidos como con .&amino(cidos, siendo imposible mezclarlos dentro de una misma &h"lice, ya que uno romper!a la estructura regular constituida por los amino(cidos del otro tipo.

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.a &h"lice se 9e in$luida por el concurso de una serie de interacciones% & 1uentes de hidrgeno% de naturaleza intercatenaria, se $orman entre el grupo +) de un enlace pept!dico, y el grupo W*@, del cuarto amino(cido que lo sigue. *ada 9uelta de la &h"lice se une a las 9ueltas adyacentes mediante /& puentes de hidrgeno, lo que con$iere a la h"lice una estabilidad considerable. & ;uerzas de 9an der Haals% se producen por la interaccin de mol"culas en el interior de la h"lice. -llo pro9oca que e3ista una estrecha relacin entre el di(metro de la h"lice y el radio de 9an der Haals. & #amaVo o 9olumen de las cadenas = laterales adyacentes% los grupos = 9oluminosos impiden la $ormacin de la &h"lice. & :nteracciones entre cadenas laterales separadas /& residuos. Se establecen interacciones inicas e hidro$bicas. & 1resencia de prolina e hidro3iprolina% en la prolina, el (tomo de + $orma parte de un anillo r!gido, y la rotacin alrededor del enlace +& * no es posible, siendo por tanto un $actor desestabilizante de la h"lice. -l (tomo de + de la prolina en un enlace pept!dico no contiene adem(s radicales hidrgeno que puedan $ormar puentes con otros residuos. & 1resencia de glicina% la glicina no es habitual en las &h"lices ya que tiene m(s $le3ibilidad con$ormacional que otros residuos, tendiendo a $ormar estructuras arrolladas muy distintas a la &h"lice. & :nteraccin entre residuos amino(cidos en los e3tremos de la &h"lice y dipolo el"ctrico inherente a esta estructura% es desestabilizante un in positi9o cerca del +&terminal, de la misma manera que un in negati9o cerca del *&terminal. ,l#mina: es resultado de la conser9acin de la estructura primaria zigzagueante en 9arias prote!nas que se asocian entre s! estableciendo uniones mediante enlaces de hidrgeno intercatenarios, en los que participan todos los enlaces pept!dicos, con$iriendo una gran estabilidad a la estructura. .as cadenas aminoac!dicas pueden unirse de dos $ormas% & 1aralela% si ambas se encuentran en $orma +)>&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&*,,) & Antiparalela% si las secuencias adyacentes tienen sentido opuesto. .as estructuras se aseme5an aunque el per!odo de repeticin es mayor en la paralela y los puentes de hidrgeno se $orman de manera distinta.

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$-lice de col#geno: el col(geno es la prote!na m(s abundante en la mayor!a de organismos 9ertebrados. Se encuentra en el te5ido con5unti9o (tendones, cart!lagos, matriz sea). -l col(geno est( compuesto por glicina (/F8(, alanina (118) y prolina e hidro3iprolina (>18). -l col(geno suele estar $ormado por secuencias amino(cidas de $orma Slicina&1rolina&AlaD1roD1ro,). .a h"lice de col(geno tiene como unidad b(sica la mol"cula de tropocol(geno, una triple h"lice $ormada por tres cadenas polipept!dicas de unos 1666 amino(cidos (cadenas ), de disposicin le9gira y con / residuos por 9uelta. #ales cadenas se enrollan entre s! a derechas (superenrollamiento de3trgiro), mediante puentes de hidrgeno establecidos entre grupos +) y grupos W*@, o grupos ,) de la hidro3iprolina. #ambi"n se produce la hidro3ilacin de la lisina. Slo los residuos de Slicina pueden acomodarse entre las estrechas uniones de las cadenas , siendo los dem(s radicales = muy 9oluminosos. .os residuos de prolina permiten el marcado enrollamiento. Estabilidad 4 dure a de la h-lice de col#geno: las mol"culas de tropocol(geno se empaquetan 5untas $ormando una $ibra de resistencia notable. -l entrecruzamiento de mol"culas de tropocol(geno se lle9a a cabo mediante la o3idacin de cadenas laterales de la lisina para dar lugar a aldeh!dos que pueden posteriormente reaccionar con otras mol"culas de lisina o con otros aldeh!dos para dar lugar a un entrecruzamiento co9alente. .os entrecruzamientos sucesi9os pro9ocan que el col(geno sea menos el(stico y m(s quebradizo. Xsta es una e3plicacin de que las estructuras seas de los ancianos sean m(s r!gidas que las de los 59enes, as! como la piel sea menos el(stica.

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Patologa del col#geno: e3isten en$ermedades relacionadas con el col(geno% & -n$ermedades que se deben a la sustitucin de un residuo con un grupo = grande distinto de la glicina, lo que puede originar osteog"nesis imper$ecta y s!ndrome de -hler&0anlos. & -scorbuto% debilitamiento de las $ibras del col(geno por $allo en la hidro3ilacin de prolina e hidro3iprolina debido a la carencia de Titamina *. ,5ueratinas: en 9ertebrados constituyen la pr(ctica totalidad del peso seco de cabellos, lana, uVas, garras, caVones de las plumas, cuernos, pezuVas y capa e3terna de la piel. & -structura primaria% rica en serina, glutamatos y cisterna. .os residuos amino(cidos se disponen de tal manera que cada residuo hidro$bico est( separado por otros dos. & -structura secundaria% se $orma una h"lice de3trgira de &Cueratina. & -structuras terciaria% dos hebras de &Cueratina orientadas en paralelo se enrollan unas sobre otras $ormando un enrollamiento superhelicoidal le9giro debido al establecimiento de interacciones hidro$bicas entre residuos en posicin a, b, c, d, que quedan en el mismo lateral de la h"lice. & -structura cuaternaria% los enrollamientos superhelicoidales se combinan $ormando proto$ilamentos (> dobles cadenas), proto$ibrillas (> proto$ilamentos) y $ilamentos intermedios ( proto$ibrillas). #ales enrollamientos son el(sticos y $le3ibles pero en los distintos te5idos la queratina se endurece mediante la introduccin de enlaces disul$uro cruzados entre ciste!nas.

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Fibrona de la seda: es una prote!na que producen las araVas y los gusanos cuando $orman el capullo. 1oseen gl(ndulas donde la $ibro!na se encuentra disuelta y es e3pulsada en pequeVas gotas. .a seda se $orma por la combinacin de $ibro!na y sericina. 1ara romper los capullos, los insectos $abrican proteasa coconasa. Bna seda similar es producida por los peces de la $amilia de los mi3ines. .a composicin de la $ibro!na es% & *omposicin b(sica% (Sly&Ser&Sly&Ala&Sly&Ala)n donde n@n? de 9eces que se repite esta secuencia. -sta composicin da como resultado una $ibra $uerte y relati9amente e3tensible. A su 9ez, las $ibras son tambi"n $le3ibles porque los enlaces entre las l(minas slo implican las interacciones de 9an der Haals. .as cadenas se unen mediante enlaces co9alentes $ormando una &l(mina. & *omposicin secundaria% en determinadas regiones e3isten residuos amino(cidos distintos, tales como #yr, Tal, Arg y Asp que permiten que en estas zonas se $ormen &h"lices de car(cter local. E"./0).0/& .E/)I&/I& %E 2&" P/O.E3N&": disposicin espacial que adopta la prote!na por plegamiento de la estructura secundaria, dando lugar a con$ormaciones globulares o tambi"n $ibrosas. -s de esta estructura terciaria de la que dependen las $unciones biolgicas de la prote!na. Aunque la estructura secundaria no sigue un patrn general s! se pueden distinguir% & 0ominios% zonas modulares bien de$inidas de una prote!na que, o bien tienen una $uncin espec!$ica (dominio $uncional), o bien constituyen un componente estructural dentro de una prote!na (dominio estructural). .os dominios pueden clasi$icarse en $amilias que se $ormaron por duplicacin gen"tica (dominios e9oluti9os). .os dominios est(n unidos entre s! mediante hebras de cadena polipept!dica. & 2oti9os% $ragmentos pequeVos de amino(cidos dentro de la secuencia de la prote!na o de una estructura, que se mantienen bien conser9ados y est(n presentes en prote!nas di$erentes. *on $recuencia son importantes para la estabilidad y $uncin de las prote!nas. Se les denomina tambi"n estructuras secundarias ya que muy $recuentemente se componen de &h"lices y &l(minas. Algunos moti9os importantes son% o .a h"lice&9uelta&h"lice. o -l dedo de Zn2+% estructuras proteicas compuestas por una $ormacin parablica en cuyo punto medio se encuentra un (tomo de cinc, unido a ciste!nas yDo histidinas. ;acilita la unin a (cidos nucleicos espec!$icos. o .a cremallera de leucina% se $orma por interacciones hidro$bicas establecidas entre leucinas cuando coinciden dos $ragmentos ricos en leucina de dos prote!nas, que se unen. ;acilita asimismo la interaccin con el A0+.

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Interacciones responsables de la formacin de la estructura terciaria: 1) 1uentes salinos% interacciones carga&carga entre grupos de cadenas laterales cargadas. >) 1uentes de hidrgeno% se establecen si quedan hidrgenos libres a5enos al enlace amida. /) :nteracciones de 9an der Haals% entre grupos moleculares sin carga. ) -$ecto hidr$obo% las mol"culas hidr$obas quedan dispuestas hacia el interior de la prote!na al darse el plegamiento terciario. #ales mol"culas se unen mediante interacciones hidro$bicas. .os amino(cidos no polares se colocan en la parte intermedia, mientras que los amino(cidos polares se sitan en la cara e3terna, en contacto con el agua. F) 1uentes disul$uro% se $orman entre los grupos S) de la ciste!na. -n la $ormacin de enlaces disul$uro inter9ienen% & -nzima disul$uro isomerasa% e3amina los puentes de hidrgeno $ormados y rompe aquellos que se encuentren en lugares no indicados. & 1rote!nas del choque t"rmico ()S1)% o *haperonas% son prote!nas que se unen a otras prote!nas que acaban de ser sintetizadas en el comple5o ribosomal y $acilitan su plegamiento, ensambla5e y transporte celular. .os cambios en la con$ormacin tridimensional de las prote!nas pueden estar a$ectados por 9arias chaperonas que traba5en coordinadas. o *haperoninas% prote!nas en las que se introducen otras prote!nas reci"n sintetizadas a medida que son sintetizadas en el ribosoma. -n su interior e3perimentan una seria de cambios que les con$ieren su estructura. E"./0).0/& )0&.E/N&/I& %E 2&" P/O.E3N&": es aqu"lla que adoptan muchas prote!nas al $ormar agregados espec!$icos de dos o m(s prote!nas (subunidades), denominadas protmeros. Bna prote!na con mltiples subunidades se denomina mult!mero, mientras que si solo tiene unas pocas se denomina oligmero. .a asociacin cuaternaria puede ser de dos tipos% & )omot!pica% asociacin entre cadenas polipept!dicas id"nticas o casi id"nticas (hemoglobina). & )eterot!pica% interacciones entre subunidades con estructuras muy distintas. .as interacciones por las que los distintos protmeros se mantienen unidos para constituir un mult!mero son del mismo tipo que las que concursan en la estructura terciaria. 2as hemoprotenas: son una serie de prote!nas caracterizadas por poseer el grupo hemo, que contiene hierro. 1ueden clasi$icarse en% & Aqu"llas que ligan o3!geno de manera re9ersible (hemoglobina y mioglobina). & Aqu"llas que ligan y acti9an el o3!geno (citocromos). & Aqu"llas que participan en la trans$erencia electrnica.

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$emoglobina '$b(: se $orma por la unin de cuatro grupos pirrol mediante enlace *&). -sta mol"cula tiene asociados una serie de grupos apolares, que le con$ieren un cierto car(cter apolar. .os enlaces *&) son responsables de un comportamiento hidr$obo. & *uatro metilos. & 0os 9inilos. & 0os propilos. -l hierro tambi"n se asocia, estableciendo seis enlaces (cuatro enlaces co9alentes dati9os con el nitrgeno, uno con la )ysN/ (-A) y otro con la )ys M (;E)). -l hierro se encuentra en estado $"rrico (;e/<) o hierro $erroso (;e><). .a hemoglobina tiene con$ormacin globular constituida por &h"lices.

.a hemoglobina es una prote!na abundante en la sangre (1F6gD.). -3isten c"lulas especializadas (los eritrocitos), encargadas de agrupar la hemoglobina para e9itar una e3cesi9a 9iscosidad de la sangre. )omportamiento de la hemoglobina 4 los gases: & .a hemoglobina libre de gases se denomina deo3ihemoglobina. & *uando la hemoglobina capta un ,> (o3ihemoglobina), lo hacea desplazando el enlace de la )ysN/ para $ormar un enlace con el ,>. o Adem(s de ,>, la hemoglobina puede captar otros gases como *,, +, y S) >, que son t3icos. o #ambi"n puede captar una mol"cula de )>,, en cuyo caso se denomina metehemoglobina. -sa situacin slo se produce cuando el ;e>< se o3ida por contacto con el o3!geno y pasa a ;e/<. Xsto es posible nicamente cuando la sangre abandona su lugar natural, por e5emplo durante una hemorragia. Estructura de la hemoglobina: la hemoglobina se halla compuesta de 1F6 amino(cidos constituyendo E &h"lices, e3istiendo dos subunidades% &globina y &globina, que se disponen de esta manera%

Siendo numerosos los contactos e3istentes entre grupos = pertenecientes a cadenas di$erentes (se $orman d!meros ). 1or tanto se de$ine la $raccin de saturacin como la cantidad de o3!geno que la hemoglobina posee asociado en relacin al total que puede absorber, de$ini"ndose la reaccin% )b< ,>)b,> y siendo ;sat@ )b,>D)b<)b,> que pertenece al inter9alo (6&1). #al $raccin de saturacin est( representada por la cur9a sigmoidea de )ill.

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*uando se une una mol"cula de , >, se producen sutiles cambios con$ormacionales, con ligeros mo9imientos de los anillos de pirrol y de la )ysM . +ormalmente, la combinacin con el o3!geno o3idar!a el hierro $erroso a hierro $"rrico, no obstante, esto no ocurre, ya que el entorno hidr$obo protegido que proporciona el interior de la mol"cula impide esta o3idacin, que s! se da cuando la prote!na entra en contacto con el aire. -ntonces la o3idacin da lugar a 2etahemoglobina.

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EN!IMAS

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.as enzimas son biocatalizadores sintetizados por los seres 9i9os para incrementar la 9elocidad de sus reacciones. Son generalmente prote!nas que catalizan de $orma espec!$ica determinadas reacciones uni"ndose al metabolito a trans$ormar, que recibe el nombre de sustrato. ,tros enzimas, los ribozimas, son de naturaleza nucleica. .a enzima posee una regin espec!$ica donde se acomoda el sustrato, que se denomina centro acti9o. .a super$icie del centro acti9o se encuentra re9estida con residuos amino(cidos cuyos grupos sustituyentes se unen al sustrato catalizando la trans$ormacin qu!mica. .a unin entre enzima y sustrato implica un reconocimiento de tipo est"rico, es decir, relacionado con la $orma y el 9olumen del propio sustrato. 1or ello, la 9ariedad de enzimas es incalculable. .as principales caracter!sticas de las enzimas son% & 0isminuyen la energ!a de acti9acin. & +o cambian el signo ni la cuant!a de la energ!a libre. & +o modi$ican el equilibrio. & Al $inalizar la reaccin, quedan libres y pueden 9ol9er a $uncionar nue9amente. 0ada la naturaleza proteica de la mayor!a de los enzimas, han de ser sintetizadas por el propio organismo, y por ello deben estar determinadas gen"ticamente. 1odificacin de las en imas: la acti9idad catal!tica depende de la integridad de la estructura proteica nati9a. Si se produce desnaturalizacin, o una enzima se disocia en las subunidades que la componen (perdiendo as! su estructura cuaternaria), se pierde la acti9idad catal!tica. Algunas enzimas pueden ser modi$icadas co9alentemente por $os$orilacin, glucosilacin y otros procesos, que por lo general inter9ienen en los procesos de regulacin. )omponentes de una en ima: las enzimas pueden clasi$icarse en dos grupos% & -nzimas constituidas por una o 9arias cadenas polipept!dicas. & 0e tipo heteroprote!na (holoenzima)% $ormada por una parte proteica (apoenzima) y un componente qu!mico no proteico adicional denominado co$actor. -l co$actor puede ser% o Bno o 9arios iones met(licos (;e><, 2g><, 2n><, Zn><). o 2ol"culas org(nicas comple5as denominadas coenzimas cuando se unen d"bilmente al apoenzima (+A0<, ;A0<) o grupos prost"ticos si se unen $uertemente al apoenzima por enlaces co9alentes. Se pueden eliminar por di(lisis. Algunas enzimas pueden requerir tanto coenzimas como iones met(licos para su acti9idad. .os coenzimas actan como transportadores transitorios de grupos $uncionales espec!$icos. )ofactores en im#ticos: un co$actor enzim(tico es una mol"cula esencial que acompaVa necesariamente al apoenzima para que la cat(lisis tenga lugar. -3isten co$actores comunes para mltiples reacciones enzim(ticas (A#1), es decir, no e3iste tanta especi$icidad como con los enzimas. .os enzimas que se unen a co$actores se denominan holoenzimas. -l co$actor puede ser% & :n met(lico% se unen a la enzima mediante enlaces co9alentes, con las cadenas laterales de amino(cidos. -ste tipo de enzimas se denominan metaloenzimas. .os iones actan de manera parecida a los coenzimas, con$iriendo a la metaloenzima nue9as propiedades. .os principales co$actores met(licos son los oligoelementos (2g, Zn, ;e, +i, 4, *u, 2n). & ,rg(nicos% o Srupos prost"ticos% se ligan $irmemente al enzima por enlaces co9alentes. +o son susceptibles a una di(lisis. o *oenzimas% co$actores unidos por enlace no co9alente y por ello d"bil y susceptible a la di(lisis. Al igual que las enzimas, las coenzimas no se modi$ican de manera re9ersible durante la cat(lisis. , no se modi$ican, o bien se recuperan. .os coenzimas tambi"n se denominan cosustratos y actan en numerosas reacciones distintas. Algunos coenzimas destacados son el +A0< y el +A01<. -n +A0< inter9iene en reacciones de tipo =ed&,3 y es principio acti9o de la nicot!n amida, una 9itamina. Sin nicotinamida no se producen reacciones =ed&,3. Nomenclatura 4 clasificacin: muchos enzimas han sido designados aVadiendo el su$i5o asa al sustrato sobre el que actuaban. ,tras enzimas se denominaban con nombres no relacionados con su sustrato. -sto ha lle9ado a que a 9eces la misma enzima tenga 9arios nombres, o a que 9arias

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enzimas tengan el mismo. 1or esta razn, la *omisin de -nzimas ha adoptado una clasi$icacin sistem(tica. -ste sistema di9ide a las enzimas en seis grupos% & ,3idorreductasas% cat(lisis de reacciones de tipo =ed&,3, con trans$erencia de electrones. & #rans$erasas% reacciones de trans$erencia de grupos. & )idrolasas% reacciones de hidrlisis. & .iasas% adicin de grupos por enlaces d"biles, o $ormacin de dobles enlaces por eliminacin de grupos. & :somerasas% reacciones de isomerizacin. & .igasas% $ormacin de enlaces *&*, *&S, *&, y *&+ mediante reacciones de condensacin acopladas a la rotura del A#1. 1or esta razn, cada enzima es designada por tres nombres% & Bn nombre generalmente corto y apropiado para su uso habitual (creat!n quinasa). & +ombre sistem(tico que identi$ica la reaccin que cataliza% A#1 creat!n $os$otrans$erasa. & Bn nmero de clasi$icacin, que la identi$ica un!9ocamente. Se compone de cuatro nmeros, que representan respecti9amente, la clase, la subclase, la sub&subclase y la enzima. 1ecanismo de accin de los en imas: la cat(lisis enzim(tica es esencial para los seres 9i9os, ya que numerosas reacciones ocurrir!an de manera demasiado lenta sin ella. .a mayor!a de las mol"culas biolgicas son muy estables a p) neutro, temperatura estable y ambiente acuoso. 2uchas reacciones qu!micas son poco probables por tanto en estas circunstancias. .as enzimas proporcionan un ambiente espec!$ico dentro del cual la reaccin determinada es energ"ticamente m(s $a9orable, $ormando un intermediario, un estado de transicin o estado acti9ado, muy inestable, que propicia la consecucin de la reaccin. .a reaccin tiene lugar en el centro acti9o. )entro activo: es con $recuencia un bolsillo o hendidura que se encuentra rodeado por cadenas laterales de amino(cidos que $acilitan la unin del sustrato e inter9ienen en la cat(lisis. .a estructura terciaria de las prote!nas hace posible que en este bolsillo, el sustrato se a5uste de manera muy estrecha, lo que es una de las e3plicaciones a la minuciosa especi$icidad de la cat(lisis enzim(tica. *uando el sustrato se une a la enzima, y antes de que se liberen los productos, se $orma el comple5o enzima&sustrato (-S). *uando S se une al centro acti9o de -, decimos que se ha producido un choque e$ecti9o. Slo este tipo de choques dan lugar a la $ormacin del comple5o -S. -n este caso se considera que S ha alcanzado un estado de transicin o estado acti9ado, del que depende la consecucin de la reaccin. *uantos m(s comple5os -S se $ormen, mayor ser( la 9elocidad de la reaccin. .os modelos para la unin espec!$ica son dos% & 2odelo del a5uste inducido% implica un cambio con$ormacional. -ste mecanismo $ue postulado por 4oshland en 1NFE. 0e$iende que la unin del sustrato puede inducir un cambio de con$ormacin en el enzima que distorsiona tambi"n al sustrato unido colaborando a lle9ar al comple5o -S al estado de transicin. -ste cambio de con$ormacin se denomina acoplamiento inducido de la enzima al sustrato y del sustrato a la enzima, ya que la enzima no acepta simplemente al sustrato sino que le induce a un cambio%

&

2odelo de la lla9e&cerradura% es una hiptesis anterior, postulada en 1EN por ;ischer. Segn este modelo, la enzima acomoda al sustrato espec!$icamente de la misma manera que una cerradura lo hace con su lla9e, sin que se produzca modi$icacin con$ormacional ni del centro acti9o ni del sustrato. *omo consecuencia, se $orma un intermediario.

)&.62I"I" EN7I16.I)&: )at#lisis #cido,base: muchas reacciones bioqu!micas suponen la $ormacin de intermedios cargados que tienden a descomponerse r(pidamente segn las reglas del equilibrio (cido base en las especies

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reacti9as que los componen. Xsta circunstancia impide la reaccin. 1or ello, los intermedios cargados deben ser estabilizados. -sto se consigue mediante la trans$erencia de protones a o desde el sustrato para $ormar una especie que se descompone m(s $(cilmente en productos que en reacti9os. & *at(lisis (cido&base espec!$ica% en reacciones no enzim(ticas, las trans$erencias de protones slo utilizan los iones deri9ados del agua ()<, ,)&). & *at(lisis (cido&base general% se producen trans$erencias de protones que son $acilitados por otra clase de mol"culas. -n reacciones no enzim(ticas slo se obser9a en soluciones acuosas, cuando el intermedio se descompone en reacti9os antes de la trans$erencia de protones a o desde el agua, en reacciones enzim(ticas. -n di9ersos (cidos org(nicos ocurre esta situacin. Tarias cadenas laterales de amino(cidos pueden actuar como donadores y aceptores de protones en el centro acti9o, propiciando incrementos e3ponenciales de la 9elocidad (de 16>& 16F). )at#lisis covalente: este tipo de cat(lisis implica la $ormacin de un enlace co9alente transitorio entre el enzima y el sustrato. Bn e5emplo son las reacciones de hidrlisis A&', que en presencia de un catalizador co9alente Y $orman un intermedio A&Y&' unido por enlaces co9alentes sobre el que luego acta el agua. 0e esta manera, se altera la ruta de la reaccin y se produce cat(lisis slo si la nue9a ruta tiene una energ!a de acti9acin in$erior que la que se produce sin cat(lisis. 0i9ersas cadenas laterales de amino(cidos y grupos $uncionales de algunos co$actores sir9en como nucle$ilos en algunas enzimas para la $ormacin de enlaces co9alentes con los sustratos. .os comple5os co9alentes siempre e3perimentan una reaccin adicional para regenerar el enzima libre. Orden de la reaccin: se denomina orden de la reaccin a la suma de las potencias de la concentracin resultantes. 1uede emplearse para el c(lculo de la 9elocidad de reaccin. & =eacciones de orden 1. Son reacciones A'. -n ellas, 9@IJAK, y 4@TDA t&1. & =eacciones de orden >% son reacciones o >A'. -n ellas, 9@IJAK>, y I@TDA> t&12&1. o A<'1<a. -n ellas, 9@IJAKJ'K, y I@TDAG'. & =eacciones de orden /% tienen la $orma >A<'1<a. -n ellas, 9@IJAK>J'K, y I@TDA>G' t&12&>. Al determinar e3perimentalmente la 9elocidad de la reaccin, se obser9a que "sta es directamente proporcional a la concentracin de los reacti9os, ele9adas a un e3ponente que es el orden parcial de la reaccin% 9@IJAKa, donde a@ orden parcial de la reaccin con respecto al reacti9o A. )IN8.I)& EN7I16.I)&: los enzimas son estabilizadores biolgicos, cuya $uncin es aumentar la 9elocidad de la reaccin sin modi$icar el equilibrio de "sta. 1ara ello, se 9ale de la disminucin de la energ!a de acti9acin. -n la reaccin se de$inen tres estados% & -stado basal% es el punto de partida de la reaccin. & -stado de transicin% momento molecular $ugaz en el que acontecimientos tales como la rotura y $ormacin del enlace, o el desarrollo de la carga, han lle9ado al preciso momento en que es tan probable el colapso con desplazamiento hacia los reacti9os como hacia los productos. & -nerg!a de acti9acin% es la di$erencia entre el estado basal y el estado de transicin. -s in9ersamente proporcional a la 9elocidad de reaccin. -3isten, segn las reglas de .e *hattelier, dos maneras de modi$icar la energ!a de acti9acin% o Aumentar la temperatura, incrementando el mo9imiento t"rmico de las mol"culas y con ello su energ!a. o AVadir un catalizador% las reacciones biolgicas se producen por la adicin de enzimas espec!$icos, que pro9ocan la unin -S. .os enzimas no alteran el equilibrio, sino que pro9ocan esta unin disminuyendo la energ!a de acti9acin.

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Efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de reaccin:

)in-tica de e9uilibrio r#pido: suponiendo una reaccin enzim(tica%

-s una cin"tica estacionaria porque la J-SK se mantiene constante, hasta que se consume la mayor parte del sustrato. *onsideraciones sobre la constante de equilibrio 4s son% & -n el caso de que 4s sea ba5a, la enzima y el sustrato tienen gran a$inidad, y se $orman m(s comple5os J-SK. -sto se 5usti$ica dado que si 4s es pequeVa, I1PI>. & -n el caso de que la 4s sea alta, disminuye la a$inidad entre enzima y sustrato, con lo que se $ormar(n menos comple5os J-SK. )in-tica del estado estacionario: en esta circunstancia, I/ no tiene por qu" tener 9alores despreciables respecto a I1 y I>. -l equilibrio estacionario se consigue cuando la concentracin J-SK se $orma a la misma 9elocidad a la que se disocia. 1artiendo de una reaccin similar al caso anterior%

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-n esta cin"tica, se ha tenido en cuenta I/, que recibe el nombre de constante catal!tica. Supone una medida directa de la produccin de productos en condiciones ptimas, ya que segn la $rmula, la 9elocidad m(3ima se alcanza al multiplicar I/ por la enzima total. /epresentaciones de la cin-tica en im#tica: tengamos primero en cuenta un bre9e comentario acerca de las constantes de equilibrio% & 4m% mide la a$inidad de la enzima con el sustrato. 1ara que la cat(lisis sea e$icaz, 4m debe apro3imarse al 9alor de JSK, lo que ocurre cuando T@Tm(3D>. -sta es la base de la representacin de la ecuacin de 2ichaelis 2enten, una cur9a e3ponencial. 4m est( relacionada con los 9alores relati9os de I 1 y I> respecto a I/. -n el caso de 4m muy alta, no e3iste una gran tendencia a $ormar comple5os J-SK. & I/% tambi"n llamada Icat, incorpora las constantes de 9elocidad de una ecuacin de mltiples pasos, entre -S y -<1. Su 9alor depende de los pasos del proceso que sean limitantes de la 9elocidad. -s una medida directa de la produccin catal!tica de producto en condiciones ptimas. Se mide en s&1. *onstituye una medida del nmero de mol"culas de S recambiadas por mol"culas de - y por segundo. =especto a las representaciones, e3isten dos representaciones%

Z la representacin de .ineLea9er&'urI% permite una determinacin mucho m(s precisa de la Tm(3, la cual slo puede ser obtenida apro3imadamente a partir de una gr($ica de To $rente a JSK. -s muy til para distinguir entre ciertos tipos de mecanismos de reacciones enzim(ticas y para analizar la inhibicin. =ecibe el nombre de representacin doble rec!proca. -n ella, la ecuacin de 2ichaelis 2enten se in9ierte%

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)in-tica con m#s de un sustrato: la mayor!a de las reacciones bioqu!micas catalizadas por enzimas comportan la reaccin de dos o m(s sustratos, a menudo con la $ormacin de mltiples productos. 1ara simpli$icar estas reacciones, se utiliza la $rmula del equilibrio r(pido I /QQI>,I1. -n este caso, se denomina =epresentacin de *leland. +o e3isten enzimas que se unan a un nico sustrato, sino que su especi$icidad y re9ersibilidad es relati9a. -3isten dos tipos de cin"tica con dos sustratos% & *in"ticas secuenciales% o ,rdenadas% la unin de sustratos es ordenada. Bn sustrato debe unirse a la enzima necesariamente antes que el siguiente. .a unin de cada sustrato imprime al enzima un cambio con$ormacional que lo hace adecuado para albergar el nue9o sustrato.

Al azar% la unin de sustratos es aleatoria. *ualquiera de los sustratos puede ser el primero en unirse a la enzima. 1ara la consecucin de la reaccin no importa el orden de unin ni de liberacin

&

*in"tica de tipo 1ing&pong% la enzima se une a un sustrato, liberando un producto. 0espu"s, se une a otro sustrato y libera un nue9o producto. -l primer sustrato modi$ica la con$ormacin tridimensional del enzima, a menudo mediante la adicin de un $ragmento de S1, dando lugar a una $orma de la enzima modi$icada (;) que se puede unir al segundo sustrato.

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Inhibicin en im#tica: la 9elocidad de una reaccin enzim(tica puede ser alterada mediante una sustancia que se denomina e$ector. -ste e$ector puede actuar como acti9ador (si aumenta la 9elocidad) o como inhibidor (si la disminuye). .os inhibidores enzim(ticos son agentes moleculares que inter$ieren en la cat(lisis, haci"ndolas m(s lentas o incluso deteniendo las reacciones. .a inhibicin puede ser% & =e9ersible% comporta una unin no co9alente del inhibidor, que siempre puede re9ertirse mediante su eliminacin. & :rre9ersible% el inhibidor se une a la enzima de manera co9alente, es decir, estable, incapacit(ndolo de$initi9amente. Suele deri9arse de la accin de 9enenos o to3inas. Inhibicin reversible parcial: es aqu"lla en la cual el comple5o -S puede $ormar productos. .a presencia del inhibidor no impide que se $orme producto, por lo que el enzima toda9!a es catal!ticamente acti9o. & :nhibicin competiti9a% el inhibidor se parece al sustrato de la reaccin, y por ello compite con el mismo por el centro catal!tico del enzima. -l inhibidor se coloca 5unto al enzima dando lugar al comple5o -:. -ntre sustrato e inhibidor se producen choques, la mayor parte de ellos inespec!$icos. 0urante el tiempo en que el inhibidor est( unido a la enzima "sta no est( disponible para la cat(lisis.

&

:nhibicin no competiti9a% en ella, el inhibidor se une a un segundo lugar de la super$icie del enzima, distinto del centro acti9o al que se une el sustrato. -l mecanismo de actuacin pasa por modi$icar la I/ o Icat. 4s y 4i no cambian y son iguales dos a dos, segn la reaccin global. .a 4m aparente se mantiene constante. A medida que se aumenta la J:K, la Tm(3 desciende.

Talores altos de la 4i indicar(n alta a$inidad por el inhibidor. A medida que se aumente la cantidad del inhibidor, aumentar( el 9alor de la 4m aparente y con ello la inhibicin ser( m(s e$ecti9a. -n este tipo de inhibicin se produce una 9ariacin en los 9alores de la 4s, y por ello se necesita una mayor cantidad de sustrato para alcanzar la Tm(3. -n una gr($ica del .ineLea9er& 'urI% o

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&

0onde la adicin de enzima aumenta el 9alor de 4m y por ello disminuye la a$inidad por el sustrato. 1ara mayores 9alores de 4m, 4i desciende, y cuanto m(s pequeVa sea la 4i, mas e$ecti9a es la inhibicin. :nhibicin mi3ta% es pr(cticamente igual a la anterior, slo que los 9alores de 4s y 4i cambian dependiendo del camino seguido. .as a$inidades son di$erentes si la : se une a - o a -S, y si S se une a - o -:. Se 9er( me5or con un dibu5o%

&

:nhibicin incompetiti9a% se produce cuando el inhibidor slo puede unirse a -S. -n este caso%

:nhibicin *ompetiti9a +o competiti9a 2i3ta :ncompetiti9a

Tm(3 *onstante 0isminuye 0isminuye 0isminuye

4m aparente Aumenta *onstante Aumenta 0isminuye

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Influencia del p$ en la cat#lisis en im#tica: las enzimas tienen un inter9alo de p) ptimo, como cualquier prote!na, en que su acti9idad es m(3ima. *uando los 9alores del p) e3ceden por e3ceso o por de$ecto a los de este inter9alo, la acti9idad se 9e disminuida. .a mayor parte de las enzimas son ptimas a p) cercano al neutro. .a e3cepcin la constituyen los enzimas de la digestin estomacal, acti9as a p) (cido (>&/) como la pepsina, o enzimas intestinales cuyo p) ptimo es b(sico (E).

Influencia de la temperatura en la cat#lisis en im#tica: al aumentar la temperatura, la acti9idad enzim(tica tambi"n aumenta, disminuyendo la energ!a de acti9acin, al producirse un mayor nmero de choques e$ecti9os. .as part!culas tienen m(s 9elocidad y por ello m(s energ!a, con lo que m(s mol"culas logran la transicin al estado acti9ado y la $ormacin del comple5o -S. & Bn aumento de 16?* de la temperatura suele duplicar la 9elocidad, aumentando la acti9idad al doble. & .a temperatura es ptima hasta 6&F6?*, a partir de esos 9alores, las enzimas comienzan a desnaturalizarse. -sto ocurre en organismos animales. -3isten e3cepciones como las arqueobacterias termoacid$ilas, en cuyos organismos la temperatura ptima puede ser incluso de A6&E6?* (pinococus $uriosis). Insoen imas: tambi"n se denominan isozimas. Son enzimas que aparecen en m(s de una $orma molecular en la misma especie. .as di$erentes $ormas de la enzima catalizan la misma reaccin pero poseen propiedades cin"ticas y composicin distinta. -l caso m(s claro es el de la .actato deshidrogenasa, la piru9ato deshidrogenasa o la he3oquinasa. .a .0) posee mltiples iso$ormas. #odas ellas contienen cuatro subunidades de dos clases de polip"ptidos% 2 (en el msculo), y ) (en el corazn), codi$icados por dos genes di$erentes. -3isten numerosas posibilidades de combinacin di$erente. /egulacin de la actividad en im#tica: en el metabolismo celular e3isten grupos de enzimas que $uncionan con5untamente en rutas secuenciales para realizar un proceso determinado. -stos procesos de denominan 9!as metablicas y se caracterizan porque el producto de una reaccin es sustrato de la siguiente. -n una 9!a metablica e3iste al menos un enzima que $i5a la 9elocidad de la secuencia global. -s habitual que catalice la reaccin m(s lenta. -stos enzimas se denominan enzimas reguladores, y la reaccin que catalizan, reaccin limitante. Sracias a estos mecanismos, la 9elocidad de la 9!a se regula adapt(ndose a las necesidades de la c"lula. -3isten dos modos principales de regulacin% por enzimas alost"ricos y por modi$icacin co9alente. En imas alost-ricos: son enzimas que poseen mltiples centros acti9os, a los que se unen los e$ectores. -n bioqu!mica, se denomina prote!nas alost"ricas a las que presentan dos $ormas o con$ormaciones inducidas por uno o m(s e$ectores. -l mismo concepto se aplica a los enzimas, que e3isten en dos $ormas, la $orma m(s acti9a y la $orma m(s inacti9a.

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-3isten dos tipos de enzimas alost"ricos% & )omotrpicos% si el sustrato y el e$ector son id"nticos. & )eterotrpicos% si el e$ector es una mol"cula distinta del sustrato. .a acti9idad enzim(tica se puede regular% & 1or cambios en la cantidad de enzima total% esta regulacin es de tipo gen"tico y est( relacionada con los mecanismos de transcripcin y traduccin de los enimas. -ste proceso slo es realizable a medio y largo plazo. Atendiendo a "l, los enzimas se clasi$ican en% o *onstituti9os% siempre est(n presentes en la misma cantidad (como los enzimas solubles del *iclo de 4rebs en la matriz mitocondrial). o :nductibles% se induce a la $ormacin de m(s enzima mediante inductores. o =epresores% se induce a la $ormacin de menos enzima mediante represores del A0+. -ste $enmeno tiene mucha importancia en los microorganismos ya que tienen que estar continuamente adapt(ndose a los cambios en el medio. -n los mam!$eros la importancia es menor, ya que las c"lulas est(n protegidas por el medio interno del organismo. & 1or cambios en la cantidad de sustrato% como se ha 9isto, la JSK es directamente proporcional a la 9elocidad de la reaccin. -n ocasiones, la propia $ormacin de producto puede actuar como inhibidora del enzima. 1odificacin covalente: en este caso, se modi$ica la acti9idad mediante un cambio en la mol"cula enzim(tica. -ntre los grupos modi$icadores se encuentran mol"culas con gran potencial de trans$erencia de grupos $os$ato, acilo y metilo. Seneralmente estos grupos se unen co9alentemente y se separan del enzima regulador mediante otras enzimas. .os mecanismos principales son% & ;os$orilacin&des$os$orilacin% en este caso la enzima puede pasar de acti9a a inacti9a mediante la adicin y sustraccin de un grupo $os$ato en un sitio adecuado. -stas modi$icaciones est(n catalizadas por las prote!n quinasas y las prote!n $os$atasas. .a modi$icacin del enzima a$ecta a la cat(lisis de 9arias maneras% o *ambiando la con$ormacin tridimensional (glucgeno $os$orilasa). o 2odi$icando la a$inidad por el sustrato (:socitrato deshidrogenasa $os$orilada). o 2odi$icando las interacciones entre los protmeros estructurales mediante la $os$orilacin del sitio de unin (en prote!nas del citoesqueleto). -5emplos principales de este tipo de enzimas los constituyen% o 1rote!n quinasa A% dependiente de A21 c!clico. o 1rote!n quinasa '% dependiente de S21 c!clico. o 1rote!n quinasa *% dependiente de diacil glicerol. o A21 1rote!n quinasa% depende del A21. o *a&*almodulinasa% depende del comple5o *a&*almodulina. & Adenilacin, acetilacin y uridilacin% los lle9an a cabo enzimas adenilantes. -l enzima queda unido a un grupo A21 o similar. & -nzimas multi$uncin% poseen dos dominios con una acti9idad enzim(tica di$erente. & -nzimas comple5os% se componen de 9arias subunidades, cada una de las cuales cumple un paso espec!$ico de una reaccin nica. & *omple5os multienzim(ticos% compuestos por subunidades, cada una de las cuales cataliza una reaccin enzim(tica di$erente. & Zimgenos% e3isten enzimas que si se sintetizan en la $orma acti9a causan la digestin del te5ido en el que se producen. 1or esta razn, se elaboran en una $orma inacti9a, el zimgeno o precursor de enzima, que debe modi$icarse por proteolisis para producir el enzima acti9o. .os e5emplos mas claros los constituyen las enzimas digesti9as de secrecin estomacal (pepsingeno) o pancre(tica (quimiotripsingeno, tripsingeno, proelastasa, procarbo3ipeptidasa). -stas enzimas rompen las prote!nas que se adquieren mediante la ingesta. .a acti9acin por proteolisis suele ser irre9ersible. -stas enzimas son luego modi$icadas por prote!nas inhibidoras que se unen muy $irmemente al centro acti9o. .ratamiento de $ill '*:*;(: se basa en la unin cooperati9a de la hemoglobina con el o3!geno. -sta unin de la idea de que la enzima se une a m(s de una mol"cula de sustrato, es una unin cooperati9a. -3isten dos tipos de cin"tica%

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& &

*in"tica hiperblica% si a medida que aumenta JSK aumenta T. *in"tica sigmoide% si la unin de JSK $a9orece la unin de la siguiente mol"cula. A medida que se une un sustrato, la a$inidad de la enzima por "ste se hace mayor (cooperati9idad positi9a). )ill obser9 esto comparando las cur9as de saturacin de mioglobina y hemoglobina%

)ill determina la e3istencia de una nue9a I, la I7, resultado de una reaccin

A partir de n, se determina el grado de cooperati9idad% & n@1 la mol"cula se une de $orma no cooperati9a. .a cin"tica ser( de tipo hiperblico. .a unin de una mol"cula del sustrato no in$luye en la unin de las siguientes. & nO1 la cooperati9idad es positi9a. .a unin de una mol"cula del sustrato $a9orece la unin de las siguientes. .a cin"tica ser( sigmoide. & nQ1 la cooperati9idad ser( negati9a. .a unin de una mol"cula del sustrato di$iculta la unin de las siguientes.

1odelo del reservorio: se re$iere a la situacin en la cual un metabolito puede ser trans$ormado por m(s de una enzima. -sta situacin se denomina encruci5ada metablica. -l e5emplo m(s claro es el del piru9ato. -l metabolito en s! es sintetizado por un nico camino, que comienza desde el metabolito A.

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-ste metabolito 0, puede estar contenido en un reser9orio, para hacerse una idea, una especie de piscina metablica. *uando 0 alcanza un determinado ni9el en su concentracin, rebasa a tra9"s de unos ori$icios presentes en la pared del recipiente. .a concentracin que rebasa depender( del tamaVo del ori$icio y de su altura. -l tamaVo del ori$icio es Tm(3 y la altura es la 4m.

.ratamiento de &dair '*:<=(: Adair ampl!a la cin"tica enzim(tica al tratar la unin de la enzima al sustrato en mltiples etapas%

& Si I1@I>@I/@I , entonces no e3iste cooperati9idad. .a cin"tica es hiperblica. & Si I1OI>OI/OI , entonces e3iste cooperati9idad positi9a, y la cin"tica es sigmoide. & Si I1QI>QI/QI , entonces e3iste cooperati9idad negati9a +o todas las enzimas que se unen a m(s de un sustrato tienen que ser alost"ricas. .ratamiento de 1onod '*:>*,*:>=(: se denomina tambi"n modelo concertado o modelo sim"trico. 2onod descubri los enzimas alost"ricos, que se denominaron de esta manera al poseer dos centros distintos, uno para el sustrato y otro para el e$ector. -n realidad este es el caso de los enzimas alost"ricos heterotrpicos. 1osteriormente se descubrir!an los enzimas alost"ricos homotrpicos, en los que el sustrato y el e$ector eran id"nticos. .os enzimas alost"ricos est(n $ormados por la unin de

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9arias subunidades distintas denominadas monmeros, con unin cooperati9a y $uncionalmente id"nticas. Se supone que cada enzima puede e3istir en dos $ormas distintas% & #ensa% menos acti9a. & =ela5ada% m(s acti9a. #odas las enzimas su$ren la transicin de una con$ormacin a otra, de manera simult(nea, es decir, las subunidades se encuentran o bien todas en la $orma # o bien en la $orma =. Si cambia una subunidad, lo hacen todas. -n general, las dos con$ormaciones est(n en el equilibrio. .a unin sucesi9a de sustrato a enzimas en la $orma # hace m(s probable la transicin a la $orma =. -sta circunstancia se denomina estado concertado. S se desplaza de una $orma menos acti9a a otra m(s acti9a. -sta circunstancia es una cooperati9idad positi9a.

& &

Si . toma 9alores e3tremos (.@6, .[), la cin"tica es hiperblica, no cooperati9a, ya que en el caso de .@6, #@6, y en .[, =@6. -n el caso de que . tome 9alores intermedios, la cin"tica ser( sigmoide, y la cooperati9idad positi9a.

*ambio con$ormacional% alteracin en la $orma, habitualmente de la estructura terciaria, debido a alteraciones en el medio ambiente, por la unin de un ligando a un receptor, o por la unin de un sustrato a una enzima. .a mayor parte de los $(rmacos tienen este mecanismo de actuacin. -l ligando se une a un receptor en la membrana plasm(tica, que tendr( como consecuencia una acti9idad celular que lle9a al cambio con$ormacional en la enzima. 1odelo de ?oshland '*:>>(: se denomina modelo secuencial. -n este modelo, la unin de sustrato induce el cambio de con$ormacin en una de las subunidades, una transicin alost"rica similar a la del modelo de 2onod. -l cambio con$ormacional en una subunidad $a9orece un cambio similar en la subunidad ane3a, y por ello hace m(s probable la unin de una nue9a mol"cula de sustrato.

Se denomina modelo general a una solucin integrati9a entre los dos modelos.

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/elacin de saturacin: se de$ine como la concentracin necesaria para conseguir una saturacin del N68 y una saturacin del 168. 0elimita el grado de saturacin de una cur9a con respecto a una hip"rbole.

@itaminas: aunque se denominen 9itaminas, no todas son aminas. 1or ello, en ingl"s pasaron de llamarse 9itaminas a la nue9a $orma, 9itamins. Bna 9itamina es un comple5o org(nico que el organismo no puede sintetizar, y de la que se requieren pequeVas cantidades, lo cual no quiere decir que no sean importantes. -l aporte continuo de 9itaminas en la ingesta es imprescindible, ya que las 9itaminas actan como coenzimas que participan en miles de reacciones. 2uchas 9itaminas son productos de la modi$icacin de coenzimas, aunque e3isten coenzimas no 9itam!nicos (bases nitrogenadas). .os amino(cidos esenciales, pese a no poder ser sintetizados por el organismo, no se consideran 9itaminas, debido a que su ingesta es mucho mayor en 9olumen. -3isten dos tipos de 9itaminas% & .iposolubles% Se deben asimilar simult(neamente a grasas. Si una persona tiene problemas biliares tendr( un de$ecto en la asimilacin de grasas y por tanto de las 9itaminas liposolubles. -stas 9itaminas se acumulan en el h!gado, que acta como tampn. Sin embargo, el e3ceso de 9itaminas es t3ico. & )idrosolubles% se acumulan en el riVn.

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METABOLISMO "E LOS #L$CI"OS

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Introduccin al metabolismoA )iclos 9umicos: la comple5idad de los seres 9i9os parece estar reVida con el segundo principio de la termodin(mica (principio de la entrop!a), segn el cual el Bni9erso tiende al m(3imo desorden. .os organismos no son a5enos a este principio, sino que deben su orden a un intercambio qu!mico continuo con el medio. -ste intercambio recibe el nombre de metabolismo. Xste es un proceso per$ectamente corrdinado y $inamente regulado. -sto es posible gracias a los enzimas y su capacidad de regular la 9elocidad de la reaccin. .as $unciones del metabolismo se pueden di9idir en cuatro grupos% & ,btencin de energ!a, ya sea a partir del alimento o de la luz solar. & *on9ertir los nutrientes en las mol"culas simples estructurales de las biomol"culas. & ;ormacin de grandes biomol"culas a partir de estos monmeros. & S!ntesis y degradacin de biomol"culas con $unciones especiales. *iclo qu!mico del *arbono% el *arbono es el elemento qu!mico m(s abundante en los seres 9i9os. .a $uente de *arbono es 9ariable en cada organismo% & *,> atmos$"rico (organismos auttro$os)% son los capaces de realizar la $otos!ntesis. & *arbono org(nico (organismos hetertro$os)% son los que degradan estos compuestos al *, > y )>, utilizados por los auttro$os. -3iste por tanto un ciclo entre ambos grupos.

*iclo qu!mico del +itrgeno% & .as c"lulas animales utilizan la degradacin de los amino(cidos para obtener +itrgeno. & .as plantas son capaces de obtener el nitrgeno a partir de la o3idacin de los nitritos. & .as bacterias nitri$icantes son capaces de $i5ar el +> atmos$"rico. & .as bacterias desnitri$icantes son capaces de trans$ormar el nitrito en +>.

-l ,3!geno tambi"n di9ide a los organismos% & .os que necesitan el ,3!geno para o3idar los compuestos org(nicos y obtener as! energ!a libre (organismos aerobios). & .os que no necesitan el ,3!geno para obtener energ!a, y para los que "ste puede llegar a ser t3ico (organismos anaerobios). & .os que cambian su metabolismo para adaptarse a condiciones aerobias o anaerobias (organismos $acultati9osle9aduras).

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-l $lu5o que sigue la -nerg!a en el mundo 9i9o no es ciclable, sino unidireccional, perdi"ndose gran parte de la misma en cada intercambio que se produce. .as reacciones metablicas son encadenadas, de manera que el producto de una reaccin es sustrato de la siguiente%

donde A, ' y *, son las enzimas espec!$icas que catalizan cada reaccin. -stos con5untos de reacciones se denominan 9!as metablicas, las cuales se de$inen como con5untos de reacciones en cadena que se inician y terminan en un compuesto \importante]. 1uede considerarse importante un compuesto que% & 1roceda del e3terior. & Sea un producto $inal. & Sea inicio de otra 9!a metablica. .as 9!as metablicas pueden ser de dos tipos% & *atabolismo% reacciones de degradacin, que lle9an a la s!ntesis de A#1 y +A01). .a manera de empleo de energ!a de los seres 9i9os es A#1<) >,A01<1i (A#1asa), con )Q, y S@A7/IcalDmol@/67FI^Dmol. & Anabolismo% constituido por las reacciones de bios!ntesis de compuestos org(nicos, con gasto de -nerg!a. .os dos procesos est(n coordinados, aunque tienen regulacin independiente%

-n ocasiones las 9!as metablicas se encuentran separadas $!sicamente (compartimentacin), lo que e9ita ciclos intiles. .a separacin por membranas lle9a al transporte como modo de regulacin y un aumento de la e$iciencia metablica, al agrupar las enzimas y seVales que inter9ienen dentro de una misma 9!a en el mismo compartimento.

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&.P: el A#1 es la moneda energ"tica uni9ersal. +o es ni el que m(s energ!a es capaz de trans$erir, ni el que menos energ!a requiere para su $ormacin. -s precisamente por su car(cter intermedio por lo que parece que la e9olucin ha $a9orecido su uso.

2os glcidos: son los componentes m(s abundantes de la bios$era. -llo se debe a la gran cantidad de almidn o glucgeno que necesitan los organismos para la obtencin de energ!a. .os glcidos cumplen 9arias $unciones% & ;uente de energ!a qu!mica. & ;uente de carbono org(nico. & Almacenamiento de energ!a qu!mica. & ;uncin estructural en la c"lula. -l nombre de carbohidratos es un nombre que se les atribuye errneamente por ser su $rmula emp!rica (*)>,) n, lo cual es incorrecto porque esta composicin no es el resultado de hidratar un carbono, sino de una disposicin di$erente de los (tomos que ya se 9er( m(s tarde. -n los glcidos aparecen ocasionalmente tambi"n otros elementos distintos. -n los glcidos distinguimos% & 2onosac(ridos% se componen de una cadena polialcohlica de al menos /*. .os monosac(ridos poseen siempre un grupo carbo3ilo (*@,), el cual puede ser de tipo aldeh!do ()&*@,), o de tipo cetona (*@,), lo que nos lle9a a clasi$icar a los monosac(ridos en polihidro3ialdeh!dos (1)A) y polihidro3icetonas (1)*). & ,ligosac(ridos% $ormados por la unin de > a 16 monosac(ridos mediante enlace ,& glucos!dico. Son m(s importantes los disac(ridos y los trisac(ridos. & 1olisac(ridos% unin de numerosos monosac(ridos. 1onosac#ridos: propiedades $isicoqu!micas principales% & #odos los compuestos que poseen un carbono asim"trico (*_), tienen acti9idad ptica, esto es, des9!an la luz polarizada hacia la derecha o hacia la izquierda. & :somer!a% o -nantiomer!a% d!cese de dos glcidos que son im(genes especulares uno del otro. -n este caso, uno des9iar( la luz polarizada hacia la derecha y otro hacia la izquierda. o -stereoisomer!a% d!cese de todos los componentes posibles con un determinado n? de carbonos asim"tricos, donde -@>n, siendo n@n? de *_. o -pimer!a% son ep!meros aqu"llos compuestos que se di$erencien en la posicin de un solo grupo asim"trico. o 0iastereoisomer!a% son diastereoismeros todos los compuestos que no son im(genes especulares el uno del otro y son ismeros pticos.

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37

Pro4eccin de $aBorth: a partir de F carbonos, no se presentan las cadenas abiertas. )aLorth enunci la manera en que los azcares de F o m(s (tomos de carbono se ciclan dando lugar a mol"culas similares a los anillos del $urano (pentagonales) o del pirano (he3agonales). Al ciclarse, el *arbono 1 queda con9ertido en carbono anom"rico, e3istiendo dos anmeros de cada monosac(rido, el anmero y el anmero .

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-n la ciclacin, es importante la in$luencia de los enzimas, que slo admiten la $orma piranosa o la $orma $uranosa a la hora de desempeVar su acti9idad catal!tica. )aLorth trata de determinar la con$ormacin espacial de estos anillos, y concluye que se presentan dos $ormas% de silla y de na9e o baVera. Adem(s, como los sustituyentes se encuentran en posicin a3ial y ecuatorial, se ilustra la manera m(s e3acta de dibu5ar la glucosa%

%erivados de los monosac#ridos: podemos destacar algunos deri9ados importantes de los monosac(ridos% & Slucsidos% compuestos que resultan de la reaccin entre dos *&,) con liberacin de ) >,. 1or e5emplo, la reaccin entre el ,) del carbono anom"rico de la glucosa y el etanol, para dar 1& metil 0&glucosa. & Xsteres $os$ricos% el mismo tipo de enlace pero con un $os$ato y a ni9el del *arbono F (Slucosa M&;os$ato). & Slucosaminos% unin de un grupo aminado (+)>), al *arbono > (+&acetil glucosamina). & Azcares (cidos% resultan de la o3idacin del *arbono, dando lugar a un (cido. -n el caso de la glucosa, la o3idacin del *arbono 1 da lugar a (cido glucnico, y la del *arbono M, a (cido Slucurnico. -ste principio permite medir los ni9eles de glucosa a partir de la reaccin de ;ehling% Slucosa<>*u><Ucido gluclico<>*u<, en medio b(sico. .a reaccin de ;ehling demuestra adem(s el car(cter reductor del *arbono anom"rico.

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%isac#ridos% oligosac(ridos $ormados por la unin de dos monmeros% & 2altosa% $ormada por la unin de dos glucosas por enlace ,&glucos!dico (1 )%

&

.actosa% nico disac(rido engullido por los mam!$eros reci"n nacidos. -s uno de los constituyentes de la leche. -st( $ormado por la unin de &galactosa y &glucosa por enlace (1 ).

&

Sacarosa% $ormada por la unin de glucosa y $ructosa mediante enlace (1>).

.a sacarosa tiene un giro de3trgiro de <MF?. .a adicin de enzima sacarasa o in9ertasa lo cambia a un giro le9giro de & 6?. Polisac#ridos% pol!meros de monosac(ridos unidos por enlace ,&glucos!dico. Se di9iden en dos grandes categor!as% & 0e reser9a% o Almidn. o Slucgeno. & -structurales%

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o o

*elulosa. 2ure!na.

Almidn% el almidn es insoluble en agua $r!a. -n agua caliente se hincha. -n agua hir9iendo se solubiliza la parte amilosa. -l almidn se compone de dos cadenas polisac(ridas% & Amilosa% pol!mero de glucosas unidas por enlaces (1 ). Suele $ormar h"lices de E a 16 residuos por 9uelta. .a amilosa se rompe por la accin de isozimas amilasas y &amilasas, dando lugar a un polisac(rido menor% la de3trina. 1osteriormente la de3trina da lugar a maltosa. & Amilopectina% es un pol!mero de glucosas unidas por enlace (1 ) con rami$icaciones $ormadas por enlaces (1M), que a su 9ez tienen unas 1> glucosas unidas por enlace (1 ). .as amilasas hidrolizan parcialmente la amilopectina, ya que son incapaces de romper los enlaces (1M). -stas cadenas quedan en $orma de de3trinas que ser(n atacadas en el intestino por las enzimas (1M) glucosidasas.

Slucgeno% el glucgeno es un pol!mero de glucosas unidas por enlace (1 ) con continuas rami$icaciones en posicin(1M) que se presentan cada E&16 glucosas. .as amilasas rompen los enlaces (1 ) mientras que las rami$icaciones son atacadas por (1M) glucosidasas.

*elulosa% es un pol!mero de glucosas unidas por enlace (1 ). 1ara ser digerida son necesarias enzimas que rompan ese enlace (celulasas), que no posee ningn mam!$ero. .os herb!9oros se encuentran en simbiosis con algunas bacterias de su tracto digesti9o que s! poseen celulasas. .as celulosas $orman cadenas paralelas que se pueden unir mediante puentes de hidrgeno para $ormar agregados cristalinos muy ordenados y r!gidos.

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,tros polisac(ridos% & 1eptidoglucano o mure!na% compuesto por +&acetil glucosamina y (cido +&acetil mur(mico, de tal manera que se $orman enlaces aminos. & Ucido hialurnico% $orma parte del l!quido intersticial como el humor 9!treo o el l!quido sino9ial. Se $orma por unin de (cido glucurnico y +&acetil glucosamina. & *ondroit!n sul$ato% importante componente del cart!lago. Se $orma por unin de de (cido hialurnico y glucosamina. & )eparina% pol!mero de glucosamina con muchos grupos sul$ato. -s un potente inhibidor de la trombina. Enlaces glucosdicos: m(s de la mitad de las prote!nas est(n glucosiladas, es decir, alguno de sus amino(cidos est( unido a un oligosac(rido. -sto in$luye en sus caracter!sticas $uncionales. -l enlace se establece de dos maneras% & -nlace +&glucos!dico% se establece entre el grupo +)> de la cadena lateral de una Asn y un grupo ,).

&

-nlace ,&glucos!dico% entre grupos hidro3ilo del oligosac(rido y grupos hidro3ilo de la treonina o la serina.

-3isten enzimas +&glucosidasas y ,&glucosidasas que rompen estos enlaces. 2uchas prote!nas necesitan este proceso para ser acti9as (p"ptido seVal). ,tro caso importante es el de las inmunoglobulinas, cuya parte constante de la cadena pesada est( muy glucosilada.

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Cluclisis: degradacin de una glucosa para dar lugar a dos mol"culas de (cido l(ctico, en ausencia de ,>. .a energ!a qu!mica asociada a los enlaces de la glucosa se utiliza en gran medida para sintetizar A#1. .a glucosa se puede con9ertir en otros productos como etanol, por el transcurso de otros procesos catablicos. .a gluclisis es una 9!a antigua, dado su car(cter anaerobio. -sta $orma $ue retenida por los organismos y puede producirse en organismos aerobios como $orma de preparacin para la o3idacin total de la glucosa. -s tambi"n una 9!a de urgencia para obtener A#1 en poco tiempo. #iene importantes interacciones con otras 9!as. -s adem(s una 9!a de la que se conocen bien sus componentes y su regulacin. Sin embargo, en la $ermentacin alcohlica uno de los componentes (el *,>), est( m(s o3idado que el otro (el etanol), y por ello debe de haber procesos =ed&,3. .a bioqu!mica naci cuando '`che obser9 la $ermentacin por le9aduras y )arder y Zoung determinaron la necesidad de $os$ato para ello, aislando el primer intermediario de la gluclisis, la $ructosa 1&M di$os$ato. -mbden propuso que la he3osa se di9id!a en dos triosas, lo que luego $ue demostrado por 2eyerho$$. .a gluclisis consta de 11 reacciones, que se enuncian primero de manera global y luego ampliada% 1) Slucosa<A#1Slucosa M&;os$ato<A01. 2) Slucosa M&;os$ato ;ructosa M&;os$ato 3) ;ructosa M&;os$ato<A#1;ructosa 1&M di$os$ato<A01. 4) ;ructosa 1&M di$os$ato0ihidro3iacetona $os$ato<Sliceraldeh!do /&;os$ato. F) *on9ersin de la dihidro3iacetona $os$ato en gliceraldeh!do /&;os$ato. 6) Sliceraldeh!do /&;os$ato<+A01&/ di$os$oglicerato<+A0) 7) 1&/ di$os$oglicerato<A01/ $os$ogliceraldeh!do<A#1 8) / $os$ogliceraldeh!do> $os$oglicerato. 9) > $os$oglicerato$os$oenol piru9ato. 10) ;os$oenol piru9ato<A011iru9ato<A#1. 11) 1iru9ato<+A0).actato<+A0. -ste proceso tiene la m(3ima e$iciencia. +o se puede pasar de glucosa a lactato en menos reacciones. .a gluclisis es la suma de dos etapas% & -ntrada de glucosa a la c"lula y $os$orilacin. & 0egradacin de la glucosa M&1. -l ob5eti9o de esta 9!a es la s!ntesis de A#1.

Hexokinasa(HK)
D-Glucosa (Glc)

S?@&1M7A I^Dmol

-D-Glucosa-6-Fosfa o (G6P)

!eacci"n 1 #$% #D%

.a he3oquinasa posee dos centros acti9os% & -l centro acti9o de la glucosa, en el que transcurre la reaccin S<1i SM1, con S?@1/7E I^Dmol. *omo esta reaccin no es espont(nea, se hace necesario el segundo centro acti9o% & -l centro acti9o del A#1, en el que se produce su hidrlisis A#1<) >,A01<1i, con S?@& /67FI^Dmol. Ahora, la suma de ambas reacciones da el balance energ"tico $inal, es decir, S?@& 1M7AI^Dmol. -3isten cuatro isozimas he3oquinasas, siendo las principales la he3oquinasa comn y la he3oquinasa& o glucoquinasa.

43

4m para la glucosa -speci$icidad para $os$orilacin =egulacin alost"rica Tariacin en concentracin

)e3oquinasa 16 2 *ualquier he3osa :nhibida por Slucosa M&;os$ato +o 9ar!a con cambios de dieta

Slucoquinasa 16 m2 Slucosa +o inhibida por Slucosa M&1 :nducida por insulina

.a $os$orilacin de todos los compuestos intermedios de la gluclisis es una 9enta5a e9oluti9a enorme, ya que la membrana es impermeable a los "steres $os$ricos y por ello "stos no escapan de la c"lula.

-D-Glucosa 6-Fosfa o (G6P)

Fosfo&lucosa iso'e(asa
S?@17A I^Dmol

)-D-F(uc osa 6-Fosfa o (F6P)

!eacci"n 2

.a isomerizacin a una cetohe3osa se produce ya que la rotura siempre se producir( en el enlace entre los carbonos 1? y >? despu"s del enlace *@,. As!m esa rotura en una $ructosa dar( lugar a dos triosas.

)-D-F(uc osa 6-Fosfa o (F6P)

Fosfof(uc o*uinasa (PFK-1) +-D-F(uc osa 1,6--ifosfa o (F1,6BP)

S?@&1 7> I^Dmol

!eacci"n 3 #$% #D%

%i

H2. 44

)-D-f(uc osa 1,6--ifosfa o (F1,6BP)

S?@&>/7N I^Dmol

#l/olasa (ALDO)

D-&lice(al/e01/o

3fosfa o (GADP)

Di0i/(oxiace ona fosfa o (DHAP)

!eacci"n 4

$(iosa fosfa o iso'e(asa Di0i/(oxiace ona fosfa o (DHAP) D-&lice(al/e01/o 3-fosfa o (GADP) (TPI)
S?@A7M I^Dmol

!eacci"n 5

&lice(al/e01/o 3-fosfa o Glice(al/e01/o 3-Fosfa o (GADP) /es0i/(o&enasa (GAP) 1,3--ifosfo&lice(a o (1,3BPG)

S?@M7/ I^Dmol

!eacci"n 6 2#D3 + %i 2#DH + H3 45

2#D3 + %i 2#DH + H3

1ara el transcurso de esta reaccin, la enzima Sliceraldeh!do /&$os$ato deshidrogenasa ()S&-), reacciona con el grupo aldeh!do del gliceraldeh!do%

Fosfo&lice(a o *uinasa 1,3--ifosfo&lice(a o (1,3BPG) 3-fosfo&lice(a o (3PG) (PGK)

S?@&1E7E I^Dmol

!eacci"n 7 #D% #$%

#D%

#$%

-sta reaccin y la anterior $uncionan como un par, y por ello S? hace que "sta sea re9ersible

46

Fosfo&lice(a o 'u asa 3-fosfo&lice(a o (3PG) (PGAM) 2-fosfo&lice(a o (2PG)

S?@ 7 I^Dmol

!eacci"n 8

2-fosfo&lice(a o (2PG)

S?@17A I^Dmol

4nolasa (ENO)

Fosfoenol5i(u6a o (PEP)

!eacci"n 9 H2.

H2. %i(u6a o *uinasa (PK)

S?@&/17 I^Dmol

Fosfoenol 5i(u6a o (PEP)

%i(u6a o (Pyr)

!eacci"n 10 #D% #$%

47

%i(u6a o (Pyr)

S?@&>F I^Dmol

7ac a o /es0i/(o&enasa (LDH)

7ac a o (Ac-CoA)

!eacci"n 11 2#DH + H3 2#D3

.uego el balance $inal de toda la gluclisis es% 1) Slucosa>.actatoa S?@&1NMI^Dmol 2) >A01<>1i>A#1<>)>, S?@M1 I^Dmol, siendo la suma S?@&1/F I^Dmol -sta 9!a transcurre en el citoplasma. -l piru9ato puede con9ertirse en lactato slo parcialmente o incluso nada. ,tros caminos alternati9os del piru9ato son el ciclo del (cido c!trico o la $ermentacin. -n el caso de que la 9!a acabe en piru9ato, el balance es% Slucosa<>A01<>1i<>+A0>1iru9ato<>A#1<>+A0)<>) S?@&116 I^Dmol, y como se debe mantener que J+A0)KDJ+A0K@cte, se deber( o3idar el +A0). .a $ermentacin alcohlica transcurre igual que la gluclisis hasta el piru9ato, en el que ocurre lo siguiente%

Cluconeog-nesis: $ormacin de glucosa a partir de sustratos que no son espec!$icamente glcidos. .a 9!a transcurre de manera distinta a la gluclisis, dado que "sta contiene tres reacciones

48

irre9ersibles (1, / y 16). .a gluconeog"nesis es una 9!a compartimentadaa transcurre en la mitocondria, en el citoplasma e incluso en el =et!culo -ndoplasm(tico. .os principales pasos son los siguientes% -l primer paso parte de piru9ato que puede proceder de lactato, de amino(cidos o de otras 9!as m(s improbables. -ste primer caso consiste $undamentalmente en la reduccin del piru9ato para $ormar $os$oenol piru9ato, y 9encer as! la irre9ersibilidad de la reaccin 16. 1ara ello, el piru9ato debe penetrar en la mitocondria, donde se encuentra la enzima que iniciar( una intrincada 9!a para dar como producto $inal $os$oenol piru9ato. .a cuestin es la siguiente% 1) -l piru9ato se introduce en la mitocondria y lle9a a cabo la siguiente reaccin%

>) -l o3aloacetato se trans$orma en malato, un compuesto que s! posee un e$ecti9o transportador en la membrana mitocondrial. -n el citoplasma su$rir( la reaccin in9ersa%

/) -l malato que ya ha salido de la mitocondria y se encuentra en el citoplasma, puede trans$ormarse en $os$oenol piru9ato por la siguiente reaccin%

-l balance $inal es%

49

1iru9ato<A#1<S#1;os$oenol piru9ato<S01<*,>a S?@67N I^Dmol, aunque en condiciones intracelulares, la ci$ra sube hasta &>F I^Dmol. @a alternativa para la g-nesis de N&%$ citoplasm#tico: este con5unto de reacciones permite que a partir de +A0) mitocondrial se genere +A0) en el citoplasma. -3iste una 9!a alternati9a, que tendr!a un paso > distinto. -llo se debe a que el lactato es un importante precursor gluconeog"nico, pero debe seguir esta 9!a para poder ser utilizado. -n ella, el o3aloacetato sintetizado en la mitocondria tras el paso 1, se con9ertir!a a aspartato%

-l esquema general de la estrategia que sigue el piru9ato para con9ertirse en $os$oenol piru9ato es el siguiente%

Z a partir de aqu! continan las reacciones de igual manera que en la gluclisis pero en sentido contrario, hasta que se alcanza la siguiente reaccin irre9ersible, es decir, hasta que se llega a la $ructosa 1&M bi$os$ato, en la reaccin /.

Ahora tiene lugar la reaccin id"ntica a la de la gluclisis (reaccin >), es decir

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Z por ltimo, la ltima de las reacciones irre9ersibles, la que con9ierte la glucosa M&$os$ato en glucosa%

.uego el balance es% >1iru9ato< A#1<>S#1< )>,<>+A0)<>)Slucosa< A01<>S01<M1i<>+A0a S?@& A I^Dmol .os intermedios pueden ser obtenidos por distintas 9!as, como ya se ha descrito, as!, se obtienen a partir de% & Alanina<&cetoglutamatoPiruvato<Slutamato. & Aspartato<&cetoglutamatoODaloacetato<Slutamato & Slicerol<A#1Slicerol&;os$ato<A01a Slicerol&;os$ato<+A0%ihidroDiacetona, fosfato<+A0) & .os (cidos grasos que tienen un nmero de carbonos impar, dan lugar en la h"lice de .ynen a propionil *oenzima A, que luego se trans$orma en "uccinil )oen ima &.

51

@isin general del metabolismo de la glucosa: el orden del metabolismo responde a la necesidad de los seres 9i9os de adaptarse a los cambios del medio. -l control metablico se puede e5ercer a dos ni9eles% & A ni9el de la e3presin g"nica. -s un mecanismo a largo plazo. & A ni9el de la cantidad de enzimas. 1uede regularse de muchas y muy comple5as maneras. & A ni9el de control alost"rico&modi$icacin co9alente. .os enzimas de esta 9!a son constituti9os, es decir, est(n siempre presentes en el organismo en abundancia. Si 9ar!an en su cantidad, lo hacen a medio y largo plazo (la piru9ato quinasa 9ar!a segn la dieta, igual que la glucosa M&$os$atasa y la $os$oenol piru9ato carbo3iquinasa, que lo hace en unas horas). .os cambios moment(neos en la acti9idad enzim(tica responden a la acti9idad de enzimas reguladores que no dependen tanto de la JSK como de otra regulacin (alosterismo).

52

53

*omo se obser9a, el balance energ"tico total es A#1<) >,A01<1i, lo que signi$ica que si las dos reacciones $uncionan como un ciclo, se consume mucho A#1, y por ello recibe el nombre de ciclo intil. .a regulacin permite que determinadas reacciones $uncionen slo hacia uno de los dos lados, dependiendo de las concentraciones de determinados e$ectores. .os puntos de control potenciales son precisamente las tres reacciones irre9ersibles (1,/ y 16 en la gluclisis). & -l A21 c!clico (A21c) es uno de estos e$ectores. Se caracteriza por que el $os$ato establece dos enlaces en "ster. Slo se $orma como mensa5ero, en este caso, para acti9ar o inhibir esta 9!a.

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.a prote!n quinasa A es un heterotetr(mero. -st( constituida por dos centros catal!ticos, y dos reguladores. -n esta $orma es inacti9a. -l A21c modi$ica su con$ormacin de la siguiente manera%

Z as! ya es acti9a. .a prote!n quinasa A (1rot4A), tiene una importante $uncin, que es la de inhibir a la piru9ato quinasa, de esta manera%

1E.&BO2I"1O %E2 C20)ECENO: el glucgeno es un pol!mero de glucosa muy rami$icado (9er $oto en p(gina E). -l glucgeno hep(tico es el principal almac"n energ"tico. Clucogenolisis: es la reaccin por la cual se despolimeriza el glucgeno y se obtiene energ!a que se utiliza para la s!ntesis de A#1. *onsta de tres pasos% 1) -l glucgeno reacciona con $os$ato inorg(nico ()1, ), por accin de la enzima glucgeno $os$orilasa. -sta reaccin es irre9ersible, y pro9oca la rotura del ltimo enlace ,&glucos!dico, liberando una Slucosa 1&;os$ato. .a reaccin es% Slucgeno<;os$atoSlucgeno (con n&1 glucosas)<glucosa 1&;os$ato. -nz% glucgeno $os$orilasa% utiliza como coenzima el pirido3al $os$ato, una 9itamina de la que, dada la ele9ada concentracin de este enzima, acta como reser9a. -sta 9itamina es $undamental en las reacciones ping&pong. -l mecanismo $unciona hasta que se llega a cuatro glucosas antes de un enlace (1M), que es incapaz de romper. 2) *uatro restos antes de la rami$icacin, se para la glucgeno $os$orilasa. -ntonces acta el enzima desrami$icante, que rompe la rami$icacin y la enlaza a la cadena principal. -sta acti9idad se denomina transglicosidasa. A su 9ez, el enzima posee tambi"n acti9idad (1M) glicosidasa, que le permite romper el enlace (1M). /) .a glucosa 1&;os$ato debe con9ertirse en glucosa M&;os$ato. -sto se realiza mediante un con5unto de reacciones% a. Bn enzima $os$orilado ($os$oglucomutasa), trans$iere su $os$ato a la glucosa 1&;os$ato, dando lugar a glucosa 1&M di$os$ato, quedando la enzima des$os$orilada.

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b. -l ;os$ato 1 pasa nue9amente al enzima quedando esta $os$orilada (lo necesita para ser acti9a), y glucosa M&$os$ato. -ste es otro caso de cat(lisis co9alente. .a enzima glucgeno $os$orilasa est( regulada tanto de manera alost"rica como co9alente. .a propia enzima e3iste en dos $ormas% & .a $orma a, $os$orilada a ni9el de la serina por una prote!n quinasa y con gasto de A#1. & .a $orma b, la m(s acti9a, des$os$orilada. -l ciclo de regulacin es el siguiente%

.a enzima adenilato ciclasa es una prote!na integral de la membrana, cuyo centro acti9o se encuentra orientado hacia el citoplasma. -sta enzima est( en ltima instancia controlada por las hormonas pancre(ticas% & Slucagn% los receptores &adren"rgicos de las catecolaminas inducen una modi$icacin en el receptor, que reconoce al tr!mero 1rote!na S, $ormado por tres unidades (, , ) y un S01, unido a la subunidad . -sta $orma es inacti9a. 1ara acti9arse, debe producirse una separacin de la subunidad unida a un S#1. Xsta estructura se mue9e por la membrana hasta que encuentra la adenilato ciclasa, acti9(ndola. -n el msculo se degrada glucgeno a ni9el de una catecolamina con receptores &adren"rgicos, que aunmentan la J*a><K citoplasm(tica. -ste in se liga a la calmodulina, $ormando un comple5o alost"rico que acti9a la $os$orilasa b&quinasa. & :nsulina% la glucgeno sintasa e3iste en dos $ormas% la $os$orilada (inacti9a) y la des$os$orilada (acti9a). -ste enzima es inhibido por prote!n quinasa A y acti9ada por Slucosa M&;os$ato.

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Clucogenog-nesis: es pr(cticamente el proceso in9erso. 1) Se inicia con la reaccin contraria a la /, es decir% Slucosa M&;os$atoSlucosa 1&;os$ato -nz% $os$oglucomutasa. >) .a glucosa 1&$os$ato reacciona con el B01 (Brid!n tri$os$ato), para $ormar B01& glucosa<1iro$os$ato. .a reaccin se escribe as!%

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Siempre que se $orme un piro$os$ato, las enzimas piro$os$atasas lo con9ierten en dos $os$atos% 11i<)>,>1i, con S?@&>F I^Dmol, con lo que se desplaza la reaccin hacia la derecha. 3) Ahora, el B01S es aVadido al glucgeno mediante enlace (1 ), con el concurso de la enzima glucgeno sintasa. +o $orma enlaces (1M). 4) 1recisamente, el enzima rami$icante tiene acti9idad (1 ) glicosidasa, es decir, corta oligmeros y los desplaza, $ormando un enlace (1M), constituyendo una rami$icacin. -s ob9io que estas reacciones necesitan de un glucgeno inicial que sir9a como cebador. Si no, ba dnde se unir!a el B01Sc. A partir de esto se plantea la duda de cmo se sintetiza el primer glucgeno en el $eto. 1arece ser que es a partir de una prote!na, la glicogenina, que posee un resto hidro3ilo y tiene acti9idad sintasa%

-sta reaccin es repetida por la glicogenina hasta que se obtiene un pol!mero de unas E glucosas, momento en el que ya entra en accin la glucgeno sintasa. @3& %E 2&" PEN.O"&": es una 9!a citoplasm(tica, cuyos principales ob5eti9os son% & ,btencin de equi9alentes reducidos (+A01)), para la s!ntesis de ciertas biomol"culas. & ;ormacin de =ibosa F&;os$ato para la s!ntesis de nucletidos. & ,tra $orma de degradacin de la glucosa. -sta 9!a posee dos partes, la $ase o3idati9a, y la $ase no o3idati9a.

Fase oDidativa: siempre se inicia con Slucosa M&;os$ato.

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-l balance es% Slucosa M&;os$ato<>+A01<>)>,=ibosa F&;os$ato<>+A01)<>)< Fase no oDidativa: no parte del producto $inal de la $ase anterior, la ribosa F&;os$ato, sino de la ribulosa F&;os$ato. -l esquema de reacciones es el siguiente%

Z el balance $inal es% /=ibosa F&;os$ato>;ructosa M&;os$ato<Sliceraldeh!do /&;os$ato -3iste la posibilidad de que esta 9!a $uncione como un ciclo, al sintetizarse intermedios glicol!ticos o gluconeog"nicos, por e5emplo, a partir del producto $inal Sliceraldeh!do /&;os$ato%

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& &

.a 9!a ocurre en su rama o3idati9a cuando se necesitan =ibosas F&;os$ato. .a 9!a $unciona como ciclo cuando las necesidades de +A01) (por e5emplo para la s!ntesis de l!pidos) son superiores a las de pentosas. -l balance es% Slucosa M&;os$ato<1>+A01<A)>,M*,><1>+A01)<1>)<<1i

-3isten te5idos donde el ciclo es muy acti9o (gl(ndula mamaria) o donde apenas ocurre (msculo). -l s!ndrome de HorniIe&4orsaIo$$ consiste en la carencia de transcetolasa. .a de$iciencia de Slucosa M& ;os$ato deshidrogenasa lle9a al d"$icit de +A01). @a alternativa de la fructosa: =eacti9o ;ructosa ;ructosa M&;os$ato ;ructosa 1&;os$ato 1roducto -ntra ;ructosa M&;os$ato A#1 ;ructosa 1&;os$ato A#1 0ihidro3iacetona $os$ato Sliceraldeh!do /&;os$ato Sale A01 A01 -nzima )e3oquinasa ;ructoquinasa

@a alternativa de la galactosa: =eacti9o Salactosa Salactosa ;os$ato 1roducto Salactosa 1&;os$ato 1& Slucosa 1&;os$ato -ntra Sale -nzima A#1 A01 Salactoquinasa B01glucosa B01galactosa Salactosa 1&;os$ato B01 seridil trans$erasa. .a carencia de este enzima origina acmulos de galactosa 1&;os$ato (galactosemia), retraso mental, hepatomegalia y cataratas cong"nitas. ;os$oglucomutasa

Slucosa 1&;os$ato

Slucosa M&;os$ato

@a alternativa de la manosa: =eacti9o 2anosa 2anosa M&;os$ato 1roducto 2anosa M&;os$ato ;ructosa M&;os$ato -ntra A#1 Sale A01 -nzima )e3oquinasa 2anosa M&1 isomerasa

%egradacin de los disac#ridos: son hidrolizados por enzimas disacaridasas en la luz del intestino delgado de la siguiente manera% & 2altosa<)>,>Slucosa -nz% maltasa & .actosa< )>,Salactosa<Slucosa -nz% lactasa & Sacarosa< )>,;ructosa<Slucosa -nz% sacarasa.

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-l +A0) sintetizado en la gluclisis puede seguir unas reacciones denominadas lanzaderas% 2an adera del Clicerol,Fosfato:

2an adera del 1alato,&spartato:

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&cetil )oen ima &: -l acetil coenzima A (Ac*oA) procede de la degradacin de los tres grandes principios inmediatos% glcidos, l!pidos y prote!nas. -l piru9ato, en el comple5o 1iru9ato deshidrogenasa de la mitocondria $orma Acetil *oenzima A segn la siguiente reaccin%

-l sistema piru9ato deshidrogenasa es un comple5o que cuenta con cinco enzimas% -nzima -1% piru9ato deshidrogenasa ->% dihidrolipoil transacetilasa -/% dihidrolipoil deshidrogenasa - y -F% reguladores *oenzima #iamina piro$os$ato (#11) Ucido lipoico *oenzima A ;A0, +A0

.a reaccin por la cual se lle9a a cabo la $ormacin de Acetil *oenzima A es el siguiente%

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-l sistema tambi"n puede estar regulado por modi$icacin co9alente. Xsta ocurre al ni9el de -1 (piru9ato deshidrogenasa), que puede estar des$os$orilada (acti9a) o $os$orilada (inacti9a). .a enzima responsable de su $os$orilacin es la 10)&quinasa, mientras que la responsable de la des$os$orilacin es la 10) $os$atasa.

-l A#1 se asocia al in magnesio $ormando el comple5o A#1&2g. .uego las 9ariaciones en la concentracin de A#1 son directamente proporcionales a las 9ariaciones en 2g><. )iclo de ?rebs o del #cido ctrico: $ue propuesto por )ans 4rebs en 1N/A como 9!a $inal comn del metabolismo, permitiendo la o3idacin completa $inal a *, > y )>,, en presencia de ,>. -l proceso tiene lugar siempre en la matriz mitocondrial. -n "l% Acetil *oenzima A)S&*oA<>*,> -ste proceso est( ligado a la $ormacin de equi9alentes reducidos, que pasar(n a la cadena respiratoria. .os antecedentes del ciclo $ueron sentados por el descubridor de la Titamina *% Sent. Sydrgyi.

63

64

;AS- 0- =-S-+-=A*:R+ 0-. ,YA.,A*-#A#,

65

METABOLISMO "E LOS LPI"OS Y BIOQUMICA "E LAS MEMB ANAS BIOL%#ICAS

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.os l!pidos son un con5unto de biomol"culas muy heterog"neas, constituidas por esqueletos carbonados asociados a hidrgeno, y, en menor medida, a o3!geno, $s$oro, nitrgeno y azu$re. Son de una 9ariedad enorme, siendo su nica caracter!stica comn el car(cter hidro$bico. Son solubles en disol9entes apolares. +o hay que con$undir l!pido con grasa. .as grasas son slo un tipo de l!pidos. )lasificacin de los lpidos: & #riacilglic"ridos o grasas% glicerol<(cidos grasos. & ;os$ol!pidos% consituyentes de las membranas biolgicas. o -s$ingol!pidos. o Slicero$os$ol!pidos. & Slicoes$ingol!pidos% o -s$ingomielina o *erebrsidos. o Sanglisidos & *"ridos & -steroles & :soprenoides & -icosanoides% o 1rostaglandinas o #rombo3anos o .eucotrienos. 6cidos grasos: son mol"culas compuestas por un esqueleto carbonado de longitud 9ariable% corta (QE*), media (E&>6*) o larga (O>6*). Su estructura general es la siguiente%

-ste (cido graso se encuentra saturado. #odos sus carbonos tienen sus cuatro 9alencias saturadas, e3ceptuando lgicamente al grupo polar, el grupo carbonilo. .os carbonos seValados como , y , (>, / y n)son los carbonos m(s importantes de la cadena, ya que sobre ellos ocurren los procesos de o3idacin. -n la naturaleza tambi"n se dan (cidos grasos insaturados, es decir, que presentan algn doble enlace. .os dobles enlaces pueden ser en posicin cis o trans, aunque en la naturaleza slo se presentan dobles enlaces cis%

.as $rmulas respecti9as del (cido graso saturado y del insaturado ser!an%

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1) *)/&(*)>)E&*,,&. Ucido decanoico. 2) *)/&*)@*)&(*)>)F&*,,&. Ucido cis&E nonanoico. .os dobles enlaces en posicin trans se dan en procesos arti$iciales, como deshidrogenaciones. Slo se presentan en el aparato digesti9o de algunos animales, como las 9acas. -3iste una relacin directa entre el consumo de (cidos grasos con dobles enlaces trans y las en$ermedades cardio9asculares, dado que estas instauraciones impiden la eliminacin de estas biomol"culas. Propiedades de los #cidos grasos: & Solubilidad% se mide en mg de (cido graso disueltos en g de agua (mgDg). 0isminuye al aumentar el nmero de (tomos de carbono. As!, la solubilidad de un (cido 1>%6 es 676M/ mgDg, mientras que la de un (cido 1E%6 es de 6766/ mgDg. -sta solubilidad es ba5!sima, ya que grupos polares como la glucosa se disuel9en a razn de 1166 mgDg. 1or tanto los (cidos grasos son pr(cticamente insolubles en agua. .as insaturaciones no a$ectan a la solubilidad. & 1unto de $usin% aumenta segn aumenta el nmero de (tomos de carbono. -l punto de $usin se 9e disminuido por la presencia de insaturaciones. -sto se debe a que las cadenas de (cidos grasos establecen interacciones moleculares tipo 9an der Haals entre s!, que aumentan a medida que aumenta la longitud de la cadena. .a presencia de insaturaciones des9!a la cadena, hace que no sea recta, y no se $orman estas $uerzas de 9an der Haals.

.os (cidos grasos saturados siempre son slidos a temperatura ambiente, mientras que los insaturados pueden ser l!quidos. .riacilglic-ridos: son la reser9a energ"tica de las c"lulas. Btilizados por los animales como mol"cula energ"tica. Se componen de un glicerol, esteri$icado con tres (cidos grasos.

.a cantidad de energ!a que se obtiene de la combustin de 1g de (cido graso es muy superior a la que se obtiene de la glucosa. -l F68 de la energ!a del h!gado y el corazn pro9iene de los #AS. Son muy abundantes en la dieta, donde constituyen cerca de un N68 de los l!pidos totales. #ambi"n son abundantes los $os$ol!pidos y el colesterol. .as 9enta5as energ"ticas de los #AS son las siguientes%

68

& & &

Alta e$iciencia energ"tica% aporta el doble de energ!a que el glucgeno. .os hidrgenos tienen mayor poder reductor que en los glcidos, donde los hidrgenos se encuentran unidos a o3!geno. Se acumulan en 9olmenes pequeVos, sin agua, gracias a las interacciones hidro$bicas. 1 g de glcido requiere > g de agua para ser almacenado. +o necesitan ningn tipo de disol9ente.

Fosfolpidos: $amilia que comprende los glicero$os$ol!pidos y los es$ingol!pidos. 1) Slicero$os$ol!pidos% deri9an del (cido $os$at!dico, una mol"cula de glicerol /&$os$ato esteri$icada con dos (cidos grasos en posiciones 1 y >. .a $rmula es la siguiente%

0onde Y es un sustituyente que puede ser% & -tanolamina, con lo que se $orma una $os$atidil etanolamina. & Serina, con lo que se $orma una $os$atidil serina. & Slicerol, con lo que se $orma un $os$atidil glicerol. & *olina, con lo que se $orma una $os$atidil colina. -stos cuatro l!pidos son los m(s abundantes en las membranas biolgicas. >) -s$ingol!pidos% deri9an de la *eramida 1&;os$ato, un deri9ado de un aminoalcohol llamado es$ingosina $os$orilado en la posicin 1.

0onde Y slo puede ser una etanolamina o una colina. Clicoesfingolpidos: deri9an de la ceramida, que a su 9ez deri9a de la es$ingosina $os$orilada y esteri$icada por un solo (cido graso. -l sustituyente Y siempre es un glcido, dando lugar a los distintos tipos de glicoes$ingol!pidos que e3isten% & Slucosa% glucocerebrsidos. *onstituyentes de las membranas e3cepto en las neuronas. & Salactosa% galactocerebrsidos% propios de membranas de neuronas. & 0isac(ridos y trisac(ridos en sucesin lineal% globsidos. & 1olisac(ridos, rami$icados o no% ganglisidos. .os ganglisidos son determinantes antig"nicos de los grupos sangu!neos. -n su metabolismo puede haber anormalidades que producen en$ermedades gra9es. #ambi"n pueden producirse de$ectos en la degradacin de los l!pidos que llegan a la membrana al eliminar los restos gluc!dicos que los acompaVan.

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)-ridos: est(n $ormados por la unin de un (cido graso a un alcohol mono9alente de cadena larga. -l e5emplo m(s claro es el de la cera de las abe5as%

.as ceras tienen un $uerte car(cter hidro$bico. Son biomol"culas de reser9a para el plancton. =ecubren ho5as, impidiendo la e9aporacin de agua en plantas tropicales. .a lanolina es una cera particular presente en la lana de o9e5as y cabras. Se utiliza en cosm"tica. Esteroles: deri9an del colesterol, un tetraciclo hidrocarbonato r!gido%

.os esteroles dan lugar a dos deri9ados% & )ormonas esteroideas. & Sales biliares.

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Isoprenoides: son deri9ados del isopreno, una mol"cula que tiene la siguente $rmula, y a partir de la cual se $orman, por condensacin, las 9itaminas liposolubles A, ', 0, - y 4.

.a 9itamina - es un antio3idante natural de radicales libres. .a 9itamina 0/ $a9orece la adsorcin de calcio por parte de los huesos. .a 9itamina 4 est( implicada en la $ormacin del epitelio. Eicosanoides: son una amplia $amilia de l!pidos que deri9an del (cido araquidnico, un (cido graso >6% (F,E,11,1 ), es decir el todo&cis&F,E,11,1 eicosatetradeceno. -l (cido araquidnico suele estar asociado a un glicerol de la siguiente manera%

;rente a determinados est!mulos acta la enzima ;os$olipasa A>, que rompe el enlace "ster y de5a el (cido araquidnico y el glicerol libres. -l (cido araquidnico queda de "sta manera%

& & &

.as prostaglandinas inter9ienen en procesos in$lamatorios. .os trombo3anos son imprescindibles para la coagulacin de la sangre. Son abundantes en las plaquetas. .os leucotrienos inhiben la contraccin de los msculos pulmonares. Bn incremento en leucotrienos lle9a a ataques de asma. Son abundantes en los leucocitos.

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%ICE".IEN %E 2O" 23PI%O": el 68 de nuestra dieta est( constituida por l!pidos, que son en un N68 triacilglic"ridos, y en menor medida, $os$ol!pidos y colesterol.

-3isten dos 9!as para la digestin de los l!pidos% & T!a e3gena% los l!pidos que ingerimos llegan al estmago, son digeridos en el duodeno y absorbidos a ni9el del yeyuno y el !leon. A partir de aqu! salen contenidos en 9es!culas llamadas quilomicrones (C), que son transportados por el sistema circulatorio hasta los te5idos peri$"ricos (corazn y msculos), donde ceden los #AS y dem(s l!pidos. Tuel9en al h!gado en $orma de quilomicrones = para regenerar el pool de #AS en "l. & T!a endgena% el h!gado sintetiza "l mismo los triacilglic"ridos, el colesterol y los l!pidos que se almacenan en 9es!culas T.0., que 9ia5an a los te5idos donde ceden los #AS y dem(s l!pidos, 9ol9iendo al h!gado en $orma de 9es!culas .0.. *uando los te5idos tienen un e3ceso de l!pidos liberan #AS y colesterol en $orma de 9es!culas )0., que 9ia5an al h!gado para ser metabolizados. -l gasto de l!pidos de cada te5ido depende de sus $unciones y su acti9idad metablica. -l te5ido adiposo acumula #AS, que en ayuno, pasan a la sangre y sir9en de alimento a las c"lulas. -l transporte de #AS desde el te5ido adiposo se realiza por prote!nas albminas. %igestin de los .&C: cuando los #AS llegan al estmago, el 168 son digeridos en ese rgano. -sto indica que e3isten lipasas g(stricas capaces de romper los #AS en dos posiciones, liberando el (cido graso en posicin 1 y /, quedando como resultado un monoacil glicerol y tres (cidos grasos libres. +o obstante, la digestin principal se produce en el duodeno% 1) -l h!gado produce sales biliares que se acumulan en la 9es!cula biliar. 0urante la digestin son liberadas al duodeno. .as sales biliares son deri9adas del colesterol, y son capaces de introducirse entre las cadenas laterales de los #AS produciendo una disgregacin de los l!pidos que recibe el nombre de emulsi$icacin. -sta separacin de las cadenas $acilita la hidrlisis de los #AS y los hace m(s accesibles a los enzimas digesti9os. >) .a lipasa pancre(tica hidroliza a los #AS. -s sintetizada en el p(ncreas y secretada al duodeno durante la digestin. )idroliza los (cidos grasos 1 y / de $orma an(loga a la lipasa g(strica. .a lipasa pancre(tica es un enzima cuyo centro acti9o, en condiciones normales, se hall bloqueado por la prote!na .:0, y por tanto no puede hidrolizar a los #AS. Bna prote!na accesoria, la colipasa, se une a la lipasa pancre(tica pro9ocando un cambio en la con$ormacin tridimensional que $acilita la unin del enzima a los #AS. -n la acti9acin por el sustrato, la prote!na .:0 simplemente se desplaza, de5ando libre el centro acti9o.

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%igestin de los fosfolpidos: los $os$ol!pidos son hidrolizados a su llegada al duodeno por cuatro tipos de $os$olipasas% & ;os$olipasa A1% libera el (cido graso en la posicin . & ;os$olipasa A>% libera el (cido graso en la posicin >. & ;os$olipasa 0% libera el $os$ato y el sustituyente. & ;os$olipasa -% libera el sustituyente.

%igestin del colesterol: el colesterol que ingerimos es un "ster de colesterol que es hidrolizado en el duodeno por enzima esterasa. -l colesterol libre se puede di$undir a las c"lulas segn el $enmeno de absorcin% & .os (cidos grasos se di$unden libremente en la c"lula (entericito) por transporte pasi9o. & 2onoacilglicerol% entra en la c"lula por un transportador de tipo A'*. & Slicerol% entra a la c"lula por un transportador. -l glicerol pasa a la sangre hasta llegar al h!gado, donde es metabolizado. & *olesterol% entra a tra9"s de un transportador. o -n el caso de que el glicerol no sea digerido, 9uel9e a salir por otro transportador distinto al de entrada. o -l colesterol libre que queda en la c"lula es trans$ormado en "ster de colesterol (-*) por la enzima lecitina colesterol acil trans$erasa (.*A#). Al esteri$icarse el colesterol queda dentro de la c"lula. .a .*A# introduce en el colesterol un (cido graso procedente de la lecitina, una $os$atidil colina. -ste (cido graso es el => y se une al ,) terminal. Ahora, unas enzimas ;'A1 transportan todos los restos de un sitio de la c"lula hasta el ret!culo endoplasm(tico. -n el =- son sintetizados los #AS y los $os$ol!pidos. Xstos, 5unto con el colesterol, migran al aparato de Solgi. -n el aparato de Solgi, todos ellos son introducidos en los Cuilomicrones, unas 9es!culas que necesitan de la actuacin de una prote!na, la prote!na de trans$erencia de l!pidos al quilomicrn (2#1). .os quilomicrones pasan a la lin$a y a la sangre, y del torrente sangu!neo, a los di$erentes te5idos para alimentar a las c"lulas.

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@esculas de transporte: est(n constituidas por una monocapa lip!dica o micela entre la que hay mol"culas de colesterol libre y prote!nas asociadas a la monocapa. -n el interior de la 9es!cula hay sobre todo #AS y "steres del colesterol. .as 9es!culas son .0., T.0., )0. y Cuilomicrones. .os m(s grandes son los quilomicrones. .o que di$erencia a cada part!cula son distintos $actores% 0ensidad (gDm.) (&)(<) #amaVo (<)(&) 2asa (I0a) (<)(&) *ontenido en #AS (<)(&) ;os$ol!pidos (&)(<) Xsteres colesterol Cuilomicrones Q67NF 1>666 T.0. Q176>M E66 .0. Q176M/ >F6 )0. O176M/ F6&1>6

NF8 A

F6&MF8 1F 16

A8 1F

/8

del /

/F% ya que portan e3cesos de te5idos hacia el h!gado 6 -nriquecimiento 1> de colesterol en los te5idos

.as prote!nas acompaVantes de las 9es!culas tienen $unciones muy determinadas% & 1rote!nas acompaVantes de los quilomicrones% o '& E% ensambla5e. o Apo&*::% acti9ador de la lipoprote!na lipasa que hidroliza los triacilgic"ridos. o Apo&-% ligando del receptor que internaliza las 9es!culas en el h!gado. & 1rote!nas acompaVantes de las .0.% Apo&'&166. -s un ligando para internalizar las .0. en el h!gado (endocitosis dependiente de receptor). .a hipercolesterolemia $amiliar es una mutacin que inacti9a al receptor de .0. por lo que no se capta el .0. circulante y aumenta su concentracin en sangre. 0e esta manera se $orman placas de ateroma que taponan arterias y causan serios desrdenes cardio9asculares. /egulacin de la digestin: los adipositos tienen un gran tamaVo, y son capaces de almacenar en su interior una gran cantidad de #AS en 9es!culas monocapa, recubiertas por una prote!na, la perlipina, que impide que la enzima lipasa sensible a hormonas entre en la 9es!cula e hidrolice los #AS. .a

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hidrlisis de los #AS para obtener energ!a slo se realiza en caso de que la concentracin de glucosa en sangre sea muy ba5a. -n este caso, el p(ncreas segrega hormona glucagn, responsable de la acti9acin de la Adenilato ciclasa, un enzima que cataliza la reaccin A#1 A21c<>11i. -l A21c acti9a la 1rote!n Cuinasa A (9"ase #ema /, p(gina >1). .a prote!n quinasa A $os$orila la perlipina, con lo que se disgrega la micela, y $os$orila a la lipasa, acti9(ndola. -ntonces se digieren los #AS. .os (cidos grasos resultantes salen de la c"lula y se unen en grupos de 16, que se asocian a la albmina y 9ia5an a los distintos te5idos cediendo (cidos grasos cuando $uere necesario.

.os (cidos grasos resultantes entrar(n por di$usin pasi9a a la c"lula y su$rir(n trans$ormaciones para su entrada en la mitocondria, donde se produce la o3idacin en grupos de dos carbonos, $orm(ndose equi9alentes reducidos (Ac*oA, +A0) y ;A0)>). *ada uno de los grupos de dos carbonos se o3ida a Ac*oA $ormando dos equi9alentes% 1+A0) y 1;A0)>. -stos coenzimas pasar(n a la cadena respiratoria donde se produce energ!a segn la )iptesis Cuimiosmtica de 2itchell. OFI%&)IEN %E 2O" 6)I%O" C/&"O": los (cidos grasos son trans$eridos a la c"lula por 9es!culas T.0. y quilomicrones. .a primera etapa de su o3idacin comprende tres pasos%

.a adenilacin y la acilacin la lle9an a cabo la Acil *oA ligasa. -3isten di$erentes tipos% & Acil *oA ligasa para (cidos grasos de cadena muy larga% se encuentra en el ret!culo endoplasm(tico y la membrana e3terna de la mitocondria. & Acil *oA ligasa para (cidos grasos intermedios y cortos% se encuentra en la matriz.

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/) -ntrada de Acil *oA en la mitocondria. .a o3idacin se produce en la matriz. .a entrada depende de la longitud del (cido graso. .os (cidos cortos ( &E*), y de longitud media (E&1>*) di$unden directamente a la mitocondria. .oas (cidos grasos largos requieren un proceso m(s complicado, que pasa por lo siguiente%

.os (cidos grasos entran por la porina al espacio intermembrana. All!, gracias al comple5o *arnitina Acil&trans$erasa :, con su centro acti9o hacia el espacio intermembrana, el (cido graso toma una carnitina y se con9ierte en Acil *arnitina, =equiere carnitina y se libera *oA. .a acil carnitina es sustrato de la translocasa, que slo puede hacer penetrar a "ste compuesto en la matriz. -ste tipo de transporte es un antiporte, ya que a la 9ez que introduce acil carnitina saca al espacio carnitina. -l malonil *oA, que inhibe la carnitina acil trans$erasa :, es a su 9ez el primer intermediario de la s!ntesis de (cidos grasos. 0e esta manera, se e9ita que una c"lula realice a la 9ez la s!ntesis y la degradacin y se delimita un pool de acil *oA citoplasm(tico, dedicado a la s!ntesis, y un pool mitocondrial, dedicado a la o3idacin. ,oDidacin de los #cidos grasos: dentro de la matriz, se produce la o3idacin del Acil *oA, siendo la m(s comnmente estudiada la o3idacin que acontece al carbono . *omprende cuatro pasos% 1) 0eshidrogenacin% la lle9a a cabo la enzima Acil *oA deshidrogenasa. -s una prote!na que lle9a en su centro acti9o ;A0. Se $orma un compuesto con un doble enlace tipo trans entre los carbonos y %

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-3isten tres iso$ormas de la Acil *oA deshidrogenasa% & 1ara (cidos grasos de cadena muy larga. & 1ara (cidos grasos de cadena intermedia. & 1ara (cidos grasos de cadena corta. >) )idratacin% la lle9a a cabo la enzima -noil hidratasa. Se $orma un compuesto hidratado%

/) +ue9a deshidrogenacin% en este caso la lle9a a cabo un enzima distinto, la hidro3iacil deshidrogenasa%

) =uptura tilica%

1ara los (cidos grasos de cadena larga, la tarea de la enoil hidratasa, hidro3iacil deshidrogenasa y tiolasa la lle9a a cabo un comple5o tri$uncional de la membrana interna, un heterooct(mero $ormado por cuatro subunidades (donde reside la acti9idad enoil hidratasa e hidro3iacil deshidrogenasa) y cuatro subunidades (que poseen acti9idad tiolasa). -sto aumenta la e$icacia de la &o3idacin. & 1ara los (cidos grasos de cadena media y corta (Q1>*), las reacciones las lle9an a cabo enzimas independientes disueltos en la matriz mitocondrial. .os Ac*oa resultantes 9an al ciclo de 4rebs, donde producen /+A0), 1;A0) > y 1S#1. .as especies producen energ!a a tra9"s de la cadena respiratoria, un con5unto de prote!nas de la membrana interna de la mitocondria. 1osee las siguientes subunidades%

&

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Se translocan / protones hacia el espacio intermembrana, que regresan a la matriz a $a9or del gradiente, a tra9"s del comple5o ;6;1 A#1asa, sintetiz(ndose 1A#1 por cada tres protones. .uego el +A0)16)</A#1, y ;A0)>M)<>A#1 )#lculo de la eficiencia energ-tica de la oDidacin de #cidos grasos: & Ucido graso de cadena 1M%6. Se $ragmenta en E compuestos de >*, es decir, se obtienen E Ac*oA. 1ara ello se producen A roturas. *ada rotura da lugar a 1+A0) y 1;A0)>. .uego% o EAc*oAE(/+A0)<1;A0)><1S#1)E(1>A#1)NMA#1 o A+A0)>1A#1 o A;A0)>1 A#1 #otal 1/1 A#1. )ay que restar 1A#1 por la acti9acin, as! que 1/6 A#1. & Ucido graso de cadena larga />%6. Se $ragmenta en 1M Ac*oA y se producen 1F ciclos% o 1MAc*oA1>(1MA#1)@1N>A#1 o 1F+A0) FA#1 o 1F;A0)>/6A#1 #otal >MA A#1 menos uno por la acti9acin >MM A#1. & Ucido graso de cadena corta E%6. Se producen Ac*oA y / ciclos% o Ac*oA EA#1 o /+A0)NA#1 o /;A0)>MA#1 #otal M/ A#1 menos uno por la acti9acin, M> A#1. .uego el procedimiento es el siguiente% & Se halla el nmero de Ac*oA, que es igual a la mitad de (tomos de carbono. Bn Ac*oA produce 1> A#1. & Se halla el nmero de ciclos, igual a la mitad de nmero de carbonos menos 1. *ada ciclo produce 1 +A0) y 1;A0)>. & Se resta si procede 1A#1 por la acti9acin. Si se encuentra en $orma de Acil necesita ser acti9ado. Si se encuentra en $orma de Acil *oA ya ha sido acti9ado. & Se cuentan las insaturaciones% o Si la insaturacin se encuentra en un carbono impar, se pierde 1;A0) > en la o3idacin. -llo se debe a que la acil deshidrogenasa no reconoce a este tipo de compuestos, por ello acta la enzima 32 enoil isomerasa, que transporta este enlace hasta la posicin /&> y en $orma cis. -ste proceso requiere dos etapas, una hidratacin y una deshidrogenacin, con lo que el gasto neto es 1;A0)>. o Si la insaturacin se encuentra en un carbono par, se requiere una mol"cula e3tra de +A01), que desde el punto de 9ista energ"tico equi9ale al +A0), luego hay que restar 1+A0). -sto se debe a que se producen roturas normales hasta llegar al doble enlace. -ntonces ocurren una deshidrogenacin, una hidratacin con inter9encin de la 32 enoil isomerasa, que con gasto de +A01, que reduce a uno de los dos dobles enlaces adem(s de transportar el otro a la posicin /. :nter9iene despu"s nue9amente

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la 32 enoil isomerasa que transporta el doble enlace de la posicin / a la >. A partir de ah! se produce la &o3idacin normal. BIO"3N.E"I" %E 2O" 6)I%O" C/&"O": la s!ntesis de (cidos grasos comprende tres etapas% & S!ntesis del palmitato (1M%6)% es la base para la s!ntesis de todos los (cidos grasos. #iene lugar en el citosol. & -longacin del palmitato. ,curre en el =- y la mitocondria. & Saturacin% #iene lugar en el =-. "ntesis del palmitato: es una etapa muy comple5a. -n las bacterias requiere ocho enzimas distintas. -n hongos la lle9a a cabo un heterod!mero M M en el que se incluye la acti9idad de los ocho enzimas. -n animales es un d!mero con dos subunidades que contienen las ocho acti9idades necesarias para $ormar el palmitato.

-3iste acti9idad cooperati9a entre las dos subunidades del d!mero. .a s!ntesis del palmitato se lle9a a cabo a partir de otros (cidos grasos menores a los que se trans$ieren los >* del 2alonil *oA. .a s!ntesis del 2alonil *oA es lle9ada a cabo por la Acetil *oA carbo3ilasa, una de las enzimas m(s importantes de la ruta biosint"tica. AVade 1* a 1Ac*oA, consumiendo A#1%

-l enzima posee biotina como coenzima. .a reaccin tiene dos pasos% 1) *arbo3ilacin de la biotina% -&'iotina<A#1<*,>-&'iotina&*,>. 2) #rans$erencia de *,> al Ac*oA% -&'iotina&*,>-&biotina<2alonil *oA. -l enzima posee tres dominios $uncionales% & Bnin biotina. & *arbo3ilasa. & #ranscarbo3ilasa. A partir de aqu!, se procede a la s!ntesis del palmitato. *omprende 9arias etapas% 1) -sta etapa la lle9a a cabo la cetoacil sintetasa. -s la encargada de aVadir los >* del 2alonil *oA al (cido graso. .os intermediarios de las reacciones de s!ntesis est(n siempre unidos a la prote!na A*1 (portadora de grupos acilos), nunca se encuentran libres. .a A*1 es una prote!na de AA amino(cidos que tiene una $os$opante!na y un S) al que se unen los intermediarios% a. -l Ac*oA, 5unto a su A*1 es trans$erida al centro acti9o de la cetoacil sintetasa. b. -l enzima capta una mol"cula de 2alonil *oA unida a la A*1.

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c. Se trans$iere el grupo *)/&*@, al *1 y se pierde el grupo ,&*@, en $orma de *,>.

>) )idrogenacin% se lle9a a cabo siempre mediante +A0). .a enzima que cataliza el paso es la cetoacil deshidrogenasa%

/) 0eshidratacin% la lle9a a cabo la enzima cetoacil deshidratasa%

) 0eshidrogenacin% la enzima que cataliza este paso se llama enoil deshidrogenasa%

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0espu"s, una tiolasa rompe el enlace con A*1 y lle9a la mol"cula de (tomos de *arbono al centro acti9o de la cetoacil sintetasa, que comenzar( el ciclo de nue9o hasta producir el (cido graso 1M%6. .a reaccin global es la siguiente% A2alonil *oA<1Ac*oA<1 +A01)Uc. Sraso (1M%6). Elongacin del #cido graso: a partir del (cido palm!tico se aVaden unidades de > (tomos de carbono hasta conseguir la longitud deseada. .a elongacin puede producirse% & -n la mitocondria% se realiza a partir de la adicin de Ac*oA. & -n el =-% se realiza a partir de 2alonil *oA. .a elongacin segn la mol"cula que se encuentre en e3ceso.

Introduccin de insaturaciones en la mol-cula: la introduccin de insaturaciones es lle9ada a cabo por enzimas desaturasas. Slo introducen doble s enlaces si 3OF y el carbono se encuentra saturado%

-n animales, las desaturasa pueden introducir insaturaciones en posiciones 4,5,6,9 pero nunca en posiciones 12,15. .os (cidos grasos con insaturaciones en estas posiciones son $undamentales por ser caracter!sticos de los $os$ol!pidos, y deben ser ingeridos en la dieta. .as plantas s! que poseen desaturasas para estas posiciones.

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Papel del &c)o&: en todas las elongaciones 5uega un papel importante el Ac*oA, localizado en la mitocondria. .a s!ntesis ocurre en el citosol. 1or esta razn, el Ac*oA debe ser sacado de la mitocondria mediante una lanzadera, la lanzadera del citrato. -l transporte en la membrana interna de la mitocondria requiere transportadores espec!$icos, ya que el Ac*oA no di$unde simplemente, sino que debe $usionarse a una mol"cula de ,3aloacetato por accin de la enzima citrato sintasa, con lo que se pierde *oA. -sta es tambi"n la primera reaccin del *iclo de 4rebs. -l producto es el citrato, que s! tiene transportador en la membrana interna, con lo que puede pasar al citoplasma, donde la citrato liasa rompe el citrato en o3aloacetato y acetil *oA. -l o3aloacetato producido debe 9ol9er a la mitocondria. 1ara ello es necesaria su reduccin a malato, que lle9a a cabo la malato deshidrogenasa (ltimo paso del *iclo de 4rebs). -l malato tiene transportador que le permite entrar a la mitocondria, donde se o3idar( a o3aloacetato por accin de la misma enzima.

_.os te5idos que no poseen malato deshidrogenasa descarbo3ilan al malato para dar lugar a piru9ato. Xste tiene un transportador en la membrana interna de la mitocondria. 0entro de la mitocondria, el piru9ato se con9ierte a o3aloacetato por el enzima piru9ato carbo3ilasa, con gasto de A#1. /egulacin del metabolismo de los lpidos: la liplisis y la lipog"nesis son dos procesos e3cluyentes. +o pueden ocurrir a la 9ez en la misma c"lula. 1or esta razn requieren de unos ni9eles de organizacin% & A ni9el celular% la reaccin de la Acetil *oA carbo3ilasa es un paso limitante para la s!ntesis, as! como el comple5o *arnitina Acil #rans$erasa :, inhibido por 2alonil *oA, tanto en su acti9idad como en su e3presin. & A ni9el org(nico% se regulan la Acetil *oA carbo3ilasa y la lipasa sensible a hormonas, que se localiza en el te5ido adiposo y es responsable de la hidrlisis de los #AS, que luego migran a los distintos te5idos. -l control se realiza gracias a hormonas% o .a insulina inter9iene en un e3ceso de glucosa en sangre. ;a9orece la lipog"nesis. o -l glucagn inter9iene en ba5os ni9eles de glucosa y mo9iliza los (cidos grasos para obtener energ!a usando la liplisis. .a acetil *oA carbo3ilasa tiene dos iso$ormas% una $orma acti9a como pol!mero, y una $orma inacti9a como monmero $os$orilado. .a transicin a la $orma acti9a la cataliza la prote!n $os$atasa >e, que es acti9ada por insulina e inhibida por glucagn%

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.a lipasa sensible a hormonas tambi"n tiene dos con$ormaciones, la con$ormacin inacti9a, y la acti9a ($os$orilada). .a inacti9acin est( catalizada por una prote!n $os$atasa, mientras que la acti9acin la cataliza la prote!n quinasa A, acti9ada por glucagn.

"ntesis de los .&C: se parten de las reser9as de glicerol presentes en el h!gado. -l glicerol es $os$orilado en la posicin / por la Slicerol /&quinasa, con gasto de A#1. -l resultado es el glicerol /& ;os$ato. A efl se aVaden en pasos sucesi9os dos (cidos grasos en posicin 1 y >, dando lugar a un diacil glicerol $os$orilado. A partir de aqu!, una (cido $os$at!dico $os$atasa puede eliminar el grupo $os$ato en posicin / dando lugar a un diacil glicerol al que se aVade un tercer (cido graso $ormando un #AS. 1E1B/&N&" BIO2ECI)&": est(n constituidas por una bicapa lip!dica con prote!nas peri$"ricas o inmersas en ella. Su composicin 9ar!a de organismo a organismo y de membrana a membrana (no es igual la membrana plasm(tica que la membrana mitocondrial. Sus principales componentes son% & .!pidos% o ;os$ol!pidos. o *olesterol% se encuentra en la membrana plasm(tica. Tar!a segn la capa de l!pidos. & 1rote!nas% o :ntegrales% tienen un segmento incluido en la membrana. )ay que usar detergentes para separarlas. o 1eri$"ricas% unidas a $os$ol!pidos por cargas electrost(ticas o a otras prote!nas. Se separan $(cilmente con un aumento de la concentracin salina. .as membranas no son est(ticas. Sus componentes est(n su5etos a una serie de mo9imientos. .os mo9imientos principales son circular, lateral, y el mo9imiento $lip&$lop, que consiste en el paso de

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$os$ol!pidos de una monocapa a la contraria, gracias a las enzimas $lipasas. Se debe a la asimetr!a de las membranas. .os tipos de transporte son los siguientes% %ifusin simple: es una di$usin que se produce a $a9or del gradiente. Slo es posible para pequeVas mol"culas hidro$bicas (*,>, +>) o mol"culas polares sin carga (, >). #ambi"n pueden pasar algunas mol"culas polares como la urea o el etanol. -n la di$usin simple se cumple la ley de ;icI%

-3iste una relacin lineal entre el gradiente de concentracin y la 9elocidad de transporte. Al aumentar el gradiente de concentracin aumenta la 9elocidad. -ste $enmeno no es saturable. .as caracter!sticas principales del transporte por di$usin simple son% & -s inespec!$ico% transporte mol"culas de cualquier tipo. & -s bidireccional, independiente de cualquier cosa que no sea el gradiente. & -s equilibrati9o% tiende a equilibrar las concentraciones a ambos lados de la membrana. & +o es saturable% la 9elocidad de este transporte llega hasta el in$inito si la di$erencia de concentraciones es in$inita. & +o es inhibible & +o es regulable. & +o requiere energ!a.

.ransporte mediado: se realiza a $a9or del gradiente. 1or ello, no se requiere gasto energ"tico. -s propio de mol"culas polares grandes, iones met(licos y productos de desecho. -l transporte lo lle9an a cabo prote!nas del tipo de las permeasas. & #ransporte pasi9o% se realiza a $a9or del gradiente y por ello no necesita de aporte energ"tico. & #ransporte acti9o% se realiza en contra del gradiente y por ello necesita de un aporte energ"tico. .as principales caracter!sticas del transporte pasi9o son% & -s espec!$ico% cada transportador transporta a un nmero determinado de mol"culas. -l transporte se realiza por prote!nas integrales. *ada membrana posee su con5unto espec!$ico de prote!nas transportadoras. & 1uede ser% o 'idireccional% en $uncin del gradiente de concentracin.

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&

& &

o Bnidireccional (bombas de protones). 1uede ser% o -quilibrati9o% como la permeasa de la glucosa del eritrocito. o +o equilibrati9o (como las bombas de protones, que crean gradientes). -s saturable, alcanza una Tm(3ima determinada por la 4m segn la $rmula 9@Tm(3JSKD1<4m -s susceptible a inhibicin, como en el caso del transportador de glucosa%

& & &

-s susceptible a la inacti9acin qu!mica (con )g*l>) -s susceptible a regulacin por endocitosis% en respuesta a la insulina, las 9es!culas con la glucosa que est(n en el citoplasma se $usionan con la membrana para captar m(s glucosa del medio. 1uede requerir energ!a (si es acti9o) o no (pasi9o)

.ransporte pasivo: puede ser de 9arios tipos% & #ipo \carrier]% como el transportador de la glucosa en el eritrocito. Se trata de un uniporte de la glucosa a $a9or del gradiente de concentracin. .a prote!na que lo lle9a a cabo es una prote!na integral de membrana de pm@ F I0a, muy glucosilada muy abundante (constituye hasta el >8 de las prote!nas de membrana). .a 4m por la glucosa es de 17F m2, siendo la concentracin normal de glucosa en sangre F m2. -st( codi$icada por cinco genes distintos en los humanos% o Slut 1% se e3presa en eritrocitos, cerebro y adipocitos. o Slut >% se e3presa en el h!gado. o Slut /% se e3presa en el msculo $etal. o Slut % se e3presa en el corazn y en los msculos. o Slut F% se e3presa en el intestino delgado. -l transporte pasi9o por tipo \carrier] tiene una estructura molecular $ormada por 1> repeticiones que atra9iesan la membrana. #odos los $ragmentos transmembrana son &h"lices. .os residuos se disponen en estos segmentos, que poseen un lugar de unin de alta a$inidad por el sustrato en su capa e3terna. Al unirse el sustrato, induce un cambio con$ormacional del transportador quedando el lugar de unin hacia el interior, y perdi"ndose a$inidad. 0e esta manera, el sustrato se suelta. Al salir ocurre lo mismo, en sentido contrario. & *anales de tipo pasi9o% -uporinas% son las responsables de la entrada de agua en la c"lula. Son estructuras r!gidas $ormadas por cuatro subunidades, cada una de ellas con seis &h"lices transmembrana $ormando un canal hidro$!lico por el que pasa el agua. .ransporte activo: se realiza sobre numerosas mol"culas tales como el A#1 y otros compuestos donadores de energ!a. -n animales la +a<D4< A#1&asa saca +a< e introduce 4< en la c"lula para crear un gradiente. -n plantas y hongos, la A#1asa genera un gradiente de protones. .os gradientes inicos tienen como $uncin incorporar alimentos en la c"lula y e3ocitar sustancias de desecho. -sto se lle9a a cabo mediante transporte acti9o secundario. .a energ!a para transportar una mol"cula en contra del gradiente es suministrada por otra mol"cula que pasa a $a9or del gradiente, ya sea en sinporte o en antiporte. 1rincipalmente, el transporte acti9o puede realizarse mediante% & *anales de tipo acti9o% o *anales sensibles a ligando (como el receptor de la acetilcolina)% se encuentra en la sinapsis de tipo e3citatorio. -st( $ormado por cuatro subunidades, cada una de las

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cuales posee cuatro &h"lices transmembrana. Se disponen asoci(ndose cinco unidades para $ormar el canal (, , , , ). 1osee dos sitios de unin al sustrato. #odas las subunidades de5an e3puesta hacia el centro del canal la &h"lice nmero dos. -sta &h"lice tiene como caracter!stica la localizacin central de la leucina, encargada de cerrar el canal. *omo esta leucina est( presente en las cinco &h"lices se crea un entorno muy hidr$obo, que mantiene cerrado el canal. Al unirse la acetilcolina al receptor, las &h"lices nmero dos giran, orient(ndose hacia otro lugar, produci"ndose la apertura del canal.

*anales sensibles a potencial% son importantes para la $ormacin del potencial de accin. Son el canal de +a< y el canal de 4<. -l canal de 4< est( $ormado por cuatro subunidades id"nticas con seis &h"lices transmembrana. Su composicin es de una &h"lice motora de potencial de membrana, un segmento 1, que $orma el poro, y un dominio +&terminal que cumple las $unciones reguladoras. -l canal de +a< es muy similar pero consta de cuatro repeticiones. #odo est( codi$icado por un nico gen que $orma todo el canal.

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=especto a las di$erencias con el canal de sodio, "ste se encuentra codi$icado por un gen. Se trata de una estructura de dos &h"lices unidas por un segmento con enlaces pept!dicos, cuyo grupo carbonilo se une al in. 0etermina la especi$icidad. -l in tiene que reaccionar con los cuatro carbonilos y la distancia de interaccin tiene que se e3acta. *omo el potasio es mayor que el sodio, y las distancias son e3actas, el potasio no puede pasar por el canal.

-l segmento cuatro tiene sensor de 9olta5e. .a &h"lice, al percibir un cambio de 9olta5e, girar( a$ectando al segmento 1, acarreando a los o3!genos, y el canal se abrir(, permitiendo el paso de un in. -l e3tremo + terminal es un e3tremo regulador \ball], que inacti9a al canal. -l proceso es el siguiente% el inicio de un potencial de accin (desencadenado por e5emplo por la entrada de sodio) lle9a a que la membrana se despolarice. 1asado un tiempo, el dominio + regulador, tapa el poro, impidiendo la entrada de sodio. 1oco despu"s ocurre la repolarizacin de la membrana.

&

*anales sensibles a la presin% est(n $ormados por una prote!na con dos &h"lices de membrana. Se disponen en cinco subunidades. 1oseen un poro que se encuentra cerrado cuando las subunidades 1 interaccionan entre s!. Al aplicar presin en la membrana, se desplaza la &h"lice nmero 1 y se $orma un hue9o por el que pasan los iones, principalmente sodio.

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.ransporte activo primario: requiere una energ!a adicional para el transporte de la mol"cula. -sta energ!a puede proceder de $uentes 9ariadas% & .uz & -nerg!a qu!mica procedente de las reacciones =ed&,3 (como la energ!a utilizada en la cadena respiratoria). & -nerg!a en $orma de A#1% o -n los transportadores A'*, que mue9en mol"culas org(nicas. o -n transportadores A#1asas (;6;1 A#1asas y T6T1 A#1asas), que mue9en iones. ;undamentalmente "stos son los tipos de transportadores acti9os posibles. -l transporte acti9o primario es un transporte en contra del gradiente de concentracin. & #ransportadores A'*% se trata de estructuras que poseen 1> segmentos transmembrana. 1resentan dos sitios de unin al A#,, los llamados M&A y 1>. 1ara el transporte se consume energ!a gracias al acoplamiento de dos hidrlisis de A#1. -ste transporte es habitual en los pero3isomas, para introducir (cidos grasos. -n eucariotas todos los A'* se encuentran codi$icados por un gen, mientras que en las bacterias, cada una de las partes est( codi$icada por un gen distinto, como los tres genes de la permeasa a la histidina.

&

1arece ser que los transportadores A'* $uncionan mediante $lipasas, es decir, mo9iendo componentes org(nicos de un lado a otro de la membrana. -structura A#1asa% posee 16 segmentos transmembrana, con un sitio de unin al A#1 en el segmento citoplasm(tico *> (unidad F). 1osee adem(s un e3tremo regulador que se sita en el dominio *&terminal. Su $uncionamiento es mediante un ciclo catal!tico comple5o que supone un cambio con$ormacional del enzima. Xste puede encontrarse en dos $ormas% o -nzima -1% hacia el interior est( e3puesto un in de alta a$inidad por el enzima. Se $orma de esta manera un comple5o enzima&in. 0espu"s el enzima se $os$orila, gener(ndose un intermediario $os$orilado de alto 9alor energ"tico. .a $os$orilacin del residuo induce a su 9ez un cambio con$ormacional en el enzima. o -nzima ->% se pierde a$inidad por el in, que pasa al medio e3terno, quedando un enzima -> $os$orilado, que se de$os$orila y se 9uel9e inestable, 9ol9iendo a la con$ormacin -1.

1or $os$orilacin de un amino(cido del centro acti9o del enzima, queda cercano el centro de unin del A#1. .a energ!a del A#1 se emplea para inducir el cambio con$ormacional en -1 a ->.

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)iclo cataltico de la )a<G,&.Pasa: esta A#1asa posee dominios * y +, en *1, *>. & .a -1 tiene dos sitios de unin al calcio, con ele9ada a$inidad. .a unin de calcio es anterior a la de A#1, produci"ndose una $os$orilacin a ni9el de un (cido asp(rtico de un centro acti9o cercano. & .a -> posee sitios de unin con calcio hacia el e3terior con menor a$inidad por el calcio, que se libera de esta manera. & -l dominio A es un centro particular que promue9e la hidrlisis del intermediario de$os$orilado ->, muy inestable, para que 9uel9a a pasar a -1. 1osee tambi"n sitios de unin con calcio en segmentos transmembrana del p"ptido.

-n el proceso que tiene lugar en el =-, el enzima implicado en la rela5acin muscular unido a la membrana del ret!culo mue9e >*a >< desde el citosol al =-. -n el =-, el calcio se une a la prote!na calsoquestrina, que puede ligar hasta / iones por su alta a$inidad por el *a ><. *on la contraccin, se abren canales de *a>< dependientes de potencial, saliendo el *A>< al citosol, contray"ndose el msculo. -l *a>< es eliminado del citososl por la *a >< A#1asa permitiendo la rela5acin del msculo. -sta enzima tiene una ele9ada a$inidad por calcio (4m@16&A2). )a<G,&.Pasa de la membrana plasm#tica: tiene como $uncin la e3traccin del *a>< celular mediante la energ!a del A#1. -n este caso las concentraciones de *a>< necesitan de un transporte muy potente, debido al enorme gradiente de las concentraciones (671 2 en el citoplasna y 17Em2 en el medio e3tracelular). Su ob5eti9o es mantener los ni9eles del *a >< intracelular muy ba5os, debido al papel que tiene "ste como segundo mensa5ero. 0eterminadas hormonas inducen aumentos de la J*a ><K citoplasm(tica para que "ste acti9e enzimas dando lugar a una respuesta celular. -l *a >< debe ligarse pre9iamente a su transporte a prote!nas de la $amilia de las calmodulinas, que pueden ser transportadas por la *a><&A#1asa.

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$<,?<,&.Pasa: es propia de c"lulas del estmago. -l proceso es el siguiente%

.ransporte activo secundario: es un transporte que requiere energ!a en $orma de gradiente de concentracin. -ste transporte est( mediado por prote!nas transportadores que mue9en +a < desde el e3terior celular al interior, a $a9or del gradiente. 0e esta manera, este transporte termodin(micamente $a9orable puede apro9echarse para mo9er otra mol"cula en el mismo sentido del +a < (sinporte) o en sentido contrario (antiporte). 1or tanto el transporte puede ser de dos tipos% & Sinporte% es propio de los procesos de incorporacin de nutrientes, como el sinporte de la glucosa en el intestino delgado. -l transporte consta de dos centros, uno en contacto con la ca9idad intestinal, donde se lle9a a cabo el sinporte de la glucosa, y otro en la membrana en contacto con la sangra, donde e3iste una +a<D4< A#1asa que se encarga de introducir >4 < a la 9ez que saca /+a< generando un gradiente de concentracin%

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&

Antiporte% es propio de los procesos de salida del *a>< de la c"lula. Se produce sobre todo en c"lulas del te5ido muscular liso (card!aco), en cuya membrana plasm(tica, un antiportador saca *a>< en antiporte con +a<. -ste es el mecanismo que "stas c"lulas utilizan para deshacerse del *a>< y de esta manera rela5arse. o -3iste otro antiporte, el de +a<D)< intracelular. *uando las c"lulas su$ren procesos de acidosis, un antiporte puede introducir +a< en la c"lula mientras que e3trae )< de ella.

METABOLISMO "E LOS COMPUESTOS NIT O#ENA"OS

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.os compuestos nitrogenados no se encuentran en el centro del metabolismo energ"tico, aunque s! conectados con "l. Sus $unciones son di$erentes. -l nitrgeno es un compuesto esencial de la 9ida, ya que se encuentra en numerosas biomol"culas, especialmente prote!nas (ya que $orma parte de los >6 amino(cidos proteicos) y nucletidos. -s el componente mayoritario de la atms$era, aunque en $orma inerte. 1or ello necesita de sucesi9as modi$icaciones para poder ser utilizado por los seres 9i9os. -ste con5unto de reacciones es el denominado ciclo del +itrgeno% /ecambio proteico general 'estimacin en un organismo de H; Ig(:

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.as prote!nas constituyen el F6 8 del peso seco del organismo, y el >6 8 del peso corporal total. Se encuentran distribuidas de la siguiente manera% & /6 8 en el msculo. & >68 en el hueso y los cart!lagos. & 16 8 en la piel. & >6 8 en otros te5idos y $luidos. Funciones de las protenas: & -structurales y motoras (col(geno, elastina, prote!nas motoras). & =egulacin de procesos biolgicos (hormonas). & *at(lisis (enzimas). & 0e$ensa (inmunoglobulinas). & -quilibrio de $luidos% las prote!nas retienen agua. & -quilibrio (cido&base% tampones (hemoglobina). & #ransporte (lipoprote!nas, prote!nas de membrana). & ;uente de energ!a. & ;uente de amino(cidos. /egulacin de la cantidad de protenas: & 0igestin de prote!nas. & Asimilacin de amino(cidos. & =egulacin de la cantidad de prote!nas por bios!ntesis y degradacin selecti9a. & 1rote!nas intracelulares y e3tracelulares. & 1apel del h!gado en el metabolismo y distribucin de las prote!nas. 1ecanismo de la digestin: la digestin es el proceso de con9ersin de las prote!nas en amino(cidos, que son utilizados en la s!ntesis de nue9as prote!nas o de otras biomol"culas. -sta digestin se lle9a a cabo por dos procesos% & ;ragmentacin paulatina de las prote!nas en p"ptidos menores% este paso es lle9ado a cabo por endopeptidasas, que cortan por la parte central de la prote!na. & .iberacin de amino(cidos singulares a partir de los p"ptidos menores% este proceso lo lle9an a cabo las e3opeptidasas, que atacan a los e3tremos de los p"ptidos. -stas e3opeptidasas pueden ser aminopeptidasas o carbo3ipeptidasas. .a digestin de las prote!nas se lle9a a cabo a ni9el de dos rganos% & 0igestin g(strica% en el estmago e3iste una secrecin de (cido clorh!drico ()*l) que permite la desnaturalizacin de las prote!nas y que se de el ambiente ptimo para la acti9idad de las enzimas digesti9as. -l estmago es responsable de la secrecin del pepsingeno, un zimgeno que se acti9a a p) (cido dando lugar a pepsina, en un proceso autocatal!tico. .a pepsina es una endopeptidasa. 0e esta manera, se obtienen los p"ptidos menores. & 0igestin intestinal% en el intestino inter9ienen dos tipos de zimgenos% o .os zimgenos intestinales% enteropeptidasa. o .os zimgenos pancre(ticos% tripsingeno, quimiotripsingeno, proelastasa, procarbo3ipeptidasas (A y '). .a presencia de la enteropeptidasa acti9a el paso de tripsingeno a tripsina, un proceso tambi"n autocatal!tico y acti9ador de la transicin hacia las $ormas acti9as de todos los zimgenos pancre(ticos. 0e esta manera, se acti9an las enzimas digesti9asg -ndopeptidasas% tripsina, quimiotripsina y elastasa. -3opeptidasas% carbo3ipeptidasa A (con a$inidad por los amino(cidos arom(ticos 1he, #y, #rp), y carbo3ipeptidasa ' (con a$inidad por los amino(cidos b(sicos (.ys, Arg, )ys). -n la mucosa intestinal hay aminopeptidasas intracelulares. .os productos de la digestin pueden ser absorbidos por la mucosa intestinal y pasar al sistema circulatorio. A tra9"s de la 9ena ca9a, llegan al h!gado, que se encarga de la retencin de los amino(cidos para su posterior distribucin. .os amino(cidos rami$icados (Tal, .eu, :.eu) se distribuyen directamente mediante la circulacin. -sta es

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la razn de que el ni9el de amino(cidos rami$icados aumente en sangre en mayor medida que los dem(s tras la ingesta. $omeostasis de las protenas: se denomina homeostasis proteica a la regulacin del equilibrio entre los procesos antagnicos de la bios!ntesis y la degradacin. & .a bios!ntesis tiene lugar en los ribosomas, ya sea libres en el citoplasma o anclados al =-=, siguiendo el programa del A0+. .as prote!nas sintetizadas poseen una secuencia seVal tambi"n proteica que indica un!9ocamente su destino. & .os mecanismos de la degradacin son comple5os. .as prote!nas pueden ser degradadas% o A ni9el de los lisosomas% estos org(nulos contienen enzimas hidrolasas que son ptimas a p) (cido, por lo que necesitan de una bomba de protones que mantengan constante un p) &M. o A ni9el del proteosoma% son grandes comple5os proteicos con acti9idad proteol!tica dependiente de A#1. 1ara la proteolisis, la prote!na debe unirse a la ubiquitina, la seVal de la muerte proteica, una prote!na de AM aa. -ste marca5e gasta A#1. .a 9elocidad de con5ugacin con la ubiquitina depende del resto amino terminal. +ormalmente un p"ptido necesita hasta cuatro ubiquitinaciones para ser reconocido por el proteosoma. -sta degradacin tambi"n requiere A#1. 1etabolismo del grupo amino: el amonio es una mol"cula t3ica y por esta razn, su transporte en el organismo se debe hacer unido a otras estructuras. -sta to3icidad se debe a su ionizacin

-l amonio, por estar cargado, no entra en las c"lulas. Sin embargo, el +) /, al no estar cargado, s! puede entrar en las c"lulas y dar lugar a amonio t3ico. -l aumento de amonio tiene di9ersos e$ectos% & 0esplazamiento del equilibrio de la glutamato deshidrogenada. & 0eplaccin o 9aciado del &cetoglutarato del ciclo de 4rebs. & Aumento de la bios!ntesis de glutamina. & Aumento de (lcalis metablicos.

0e esta manera, el ciclo se 9ac!a de &cetoglutarato y el organismo entra en un d"$icit energ"tico importante. -l glutamato acta como neurotransmisor e3citatorio y si se acumula en el cerebro puede pro9ocar anomal!as sin(pticas y alcalizacin del medio. -l transporte de amonio se realiza en $orma de amino(cidos, principalmente alanita y glutamina (F68). .a alanita se sintetiza por transaminacin con glutamato a partir de piru9ato. .a s!ntesis de glutamina se 9e en la p(g . -l transporte para la e3crecin se hace en $orma de urea. )oen ima de los grupos amino: el PiridoDal fosfato: los grupos amino utilizan como coenzima para sus reacciones el pirido3al $os$ato, un deri9ado de la 9itamina 'M. -l pirido3al $os$ato posee un grupo aldeh!do, que reacciona $uertemente con aminas primarias, un grupo nitrogenado positi9o, y un grupo $os$ato.

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-l pirido3al $os$ato en la enzima suele estar unido co9alentemente a una amina primaria de una lisina que se encuentre en el centro acti9o. -l pirido3al $os$ato puede con9ertirse en $os$ato de pirido3amina al reaccionar con un grupo amino. -st( presente en dos tipos de reacciones% & #ransaminaciones. & -liminaciones% o 0escarbo3ilaciones. o =upturas aldlicas. o y eliminaciones. .ransaminacin: la transaminacin se lle9a a cabo mediante enzimas transaminasas. Se trata de la trans$erencia del grupo amino desde el $os$ato de pirido3al a un amino(cido. .os mecanismos son los siguientes% 1) Aldimina interna<aaAldimina e3terna. -l amino(cido se une al $os$ato de pirido3al. .a aldimina interna tiene por tanto enzima asociado, mientras que la e3terna no. >) -s un con5unto de reacciones%

Se empobrecen los enlaces alrededor de los carbonos ya que las cargas positi9as atraen a los electrones. -n el caso de la entrada de un nue9o ceto(cido, la reaccin se realiza al re9"s, de esta manera%

"ntesis de glutamina:

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1or su papel cla9e en el control de la utilizacin del +itrgeno dentro de la c"lula, este mecanismo se encuentra $inamente regulado. -l acmulo de determinados amino(cidos la regula negati9amente, aunque sin llegar a suprimir su acti9idad. .o mismo ocurre con el A#1 y el A21. -n el cerebro e3iste una isozima de la glutamina sintetasa. -l cerebro elimina el glutamato cuando se encuentra en e3ceso para que no transmita seVales e3citatorias. .a glutamina acta tambi"n como un importante donador de amonio a los rganos. Papel de la glutaminasa en el e9uilibrio #cido,base del medio interno: en casos de acidosis metablica se acumulan protones en el medio interno. 2ediante la glutaminasa se produce glutamato y amoniaco, desplazando la reaccin hacia la $ormacin de amonio (una base) que es e3cretado por la orina, eliminando as! el e3ceso de protones. .ransporte del Nitrgeno hasta el hgado: su ob5eti9o es la s!ntesis de urea. -l nitrgeno es en9iado desde los te5idos en $orma de glutamina%

-n los te5idos ocurre la reaccin de la glutamina sintetasa. Bna 9ez en el h!gado, la gluamina se con9ierte nue9amente en glutamato y amonio, que 9an al ciclo de la urea. Si el msculo se encuentra en e5ercicio, necesita energ!a, parte de la cual es $ruto de la proteolisis. .os amino(cidos resultantes por transaminacin ceden amonio al &cetoglutarato dando lugar as! a glutamato. -l glutamato se transamina con piru9ato . *omo el msculo utiliza glucosa, sintetiza lactato o piru9ato que por transaminacin incorporan el amonio, dando lugar a la alanina, que en el h!gado da lugar nue9amente a glutamato. -l piru9ato puede quedar en $orma de glucosa que puede ser reutilizada en el h!gado o en9iada al cerebro. -n el ciclo de *ori, el pir9ato se trans$orma en lactato, y no en alanina. Biosntesis de la urea:

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-ste $ue el primer ciclo descubierto en bioqu!mica, y $ue descubierto tambi"n por )ans 4rebs. ,curre en la mitocondria y el citosol. .os puntos limitantes son las incorporaciones de amonio. -ste amonio es donado por amino(cidos tales como glutamina, aspartato y glicina. .a entrada de amonio al ciclo se produce de 9arias maneras% 1) A ni9el de la reaccin de s!ntesis del *arbamil ;os$ato (en la mitocondria). -sta reaccin es catalizada por la *arbamil ;os$ato sintetasa 1, una enzima de la matriz mitocondrial del h!gado. Bsa > moles de A#1 ya que la reaccin transcurre en dos pasos% a. Acti9acin con *,>.

b. 1ara proporcionar energ!a al enlace *,>&+)>.

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-ste paso 1 es $undamental en el ciclo de la Brea ya que constituye su principal medio de regulacin. >) A ni9el de la citrulina% la citrulina se comporta como transportador de amonio. ,curre a ni9el de la reaccin de la ,rnit!n transcarbamilasa /) -ntrada de amonio en el citosol% se produce en $orma de aspartato. .a citrulina sale al citosol y reacciona con el aspartato para $ormar Arginina&succinato. 1ara energizar el enlace, necesita un mol de A#1 que se hidroliza a A21 y 11i. .as piro$os$atasas son muy acti9as y rompen el piro$os$ato, dando lugar a >1i. -sto hace que la reaccin sea irre9ersible, ya que el 11i se elimina muy r(pidamente. /egulacin del ciclo de la 0rea: la regulacin tiene lugar a ni9el de la carbamil $os$ato sintetasa, que se regula por un metabolito, el +&acetil glutamato. Xste es imprescindible para que se de la reaccin, y es un producto de la unin de glutamato y Acetil *oA, catalizado por la +&acetil glutamato sintetasa. .a arginina tambi"n potencia la reaccin por ser sustrato directo de la s!ntesis de Brea. -n el caso de que haya una alta JAc*oAK, entonces "sta actuar( como sustrato del ciclo de 4rebs, dando lugar a A#1. -n el caso de que abunde el glutamato, entonces ser( importante la s!ntesis de urea como producto de e3crecin. -l ciclo de la Brea conecta con el ciclo de 4rebs mediante intermediarios como malato, $umarato y o3aloacetato. Fuente de amonio para el ciclo de la 0rea: la principal $uente de amonio es el glutamato, que por transaminacin trans$iere el grupo amino al glutarato

.a enzima glutamato deshidrogenasa es e3clusi9a de los hepatocitos, donde se localiza en la matriz mitocondrial. 1resenta dos sistemas de regulacin% & =egulacin alost"rica% como se obser9a, la e5ercen A#1, S#1, A01 y S01. Son indicadores del estado energ"tico del hepatocito. -stados energ"ticos ba5os $a9orecen la reaccin. & =egulacin estequiom"trica% 9arias reacciones cuantitati9amente importantes compiten por &cetoglutarato, intermediario del ciclo de 4rebs y de transaminaciones. 2uchas enzimas tienen a$inidad por "l y lo eliminan. -n los organismos esta reaccin $unciona hacia los productos por poco S01 que haya. Slo en los tubos de ensayo se desplaza hacia la s!ntesis de glutamato. 1etabolismo de los amino#cidos: para el metabolismo de los compuestos nitrogenados e3isten cuatro coenzimas principales% & #etrahidro$olato. & Titamina '1> (cobalamina). & S&Adenosil 2etionina.

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&

#etrahidrobiopterina.

6cido flico: el (cido $lico es una mol"cula comple5a constituida por glutamato, (cido aminobenzoico, piracina y pirimidina. .os carbonos M y A y los nitrgenos F y E son reducidos para con9ertirlos en Acetil *oA. -l (cido $lico debe con9ertirse para con9ertirse en un coenzima $uncional, el tetrahidro$olato.

-l tetrahidro$olato reducido cede y acepta grupos de un (tomo de carbono en cualquier grado de 3ido&reduccin. *apta el carbono unido al nitrgeno F yDo al nitrgeno 16. una 9ez unido al tetrahidro$olato, el (tomo de carbono puede su$rir trans$ormaciones. ",adenosil metionina '"&1(: deri9a de la metionina, un amino(cido sul$uroso y metilado. -3iste un metabolito relacionado, la homociste!na, que carece de grupo metilo. .a con9ersin de metionina A SA2 ocurre con inter9encin del A#1.

-ste nuclesido tiene energizado el enlace entre el azu$re y el metilo. -s un muy buen donador de metilos, y por ello se establece un ciclo con la S&adenosil homociste!na, es decir, la SA2 sin metilar%

@itamina B*<: consta de un ncleo similar a una por$irina. -n su interior se dispone un (tomo de cobalto. A partir de la homociste!na se obtiene metionina gracias al transporte de un grupo metilo. -ste

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transporte lo lle9a precisamente a cabo la 9itamina '1>, capaz de captar un metilo del tetrahidro$olato y d(rselo a la homociste!na para que se genere metionina. Biosntesis de amino#cidos esenciales: los amino(cidos esenciales son aquellos que no podemos sintetizar y por ello deben ser ingeridos. Son los mismos para todo el reino animal. Sus s!ntesis son comple5as, mucho m(s que los no esenciales, ya que% & =equieren F o m(s pasos, en comparacin con los / pasos que supone la s!ntesis de los no esenciales. & 1ara la s!ntesis se necesita un donador de electrones, el +A01), que es abundante en 9egetales pero no en animales. .a e3plicacin e9oluti9a de la p"rdida de la capacidad de s!ntesis e3iste en la relati9a $acilidad de su obtencin en el entorno. -n las sociedades humanas actuales, pueden darse de$ectos de amino(cidos en determinadas zonas. -stos amino(cidos son los siguientes% -senciales Arginina )istidina .eucina :soleucina .isina 2etionina ;enilalanina #reonina #ript$ano Talina +o esenciales Alanina Asparagina Aspartato *iste!na Slutamato Slutamina Slicina 1rolina Serina #irosina

1etabolismo de los amino#cidos no esenciales: estos amino(cidos se sintetizan a partir de las 9!as del metabolismo energ"tico% el *iclo de 4rebs y la o3idacin de los (cidos grasos. & Alanina, aspartato y glutamato se sintetizan y se degradan por transaminacin en 9!as re9ersibles, dando lugar a piru9ato, o3aloacetato y &cetoglutarato. & Asparagina y glutamina% necesitan un grupo amino. Se degradan por desaminacin liberando amonio. & Serina% se sintetiza a partir de /&$os$oglicerato y glutamato. & Slicina% se sintetiza a partir de serina. & *iste!na% se sintetiza a partir de metionina y serina. & 1rolina% se sintetiza a partir de glutamato. & Arginina% es semiesencial, ya que no es su$iciente con la que se sintetiza mediante el ciclo de la urea, a partir de arginina&succinato.

*uando se produce una en$ermedad que a$ecta al transporte de amino(cidos, se acumula ciste!na (casi toda la ciste!na se encuentra $ormando d!meros de cistina) y es e3cretada por el riVn. -sta

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en$ermedad se llama cistinuria. Si se produce cistinosis, el d!mero de ciste!na, que es insoluble, se acumula en los lisosomas. -n los mam!$eros, todos los amino(cidos pueden dar lugar a intermediarios de las 9!as energ"ticas. 1or ello, el e3ceso de prote!nas ingeridas 9a a las 9!as energ"ticas. .os amino(cidos pueden ser glucog"nicos yDo cetog"nicos. -n general, todos los amino(cidos son ambas, o slo glucog"nicos, a e3cepcin de la lisina y la leucina que son slo cetog"nicos.

0egradacin de los amino(cidos arom(ticos% los amino(cidos arom(ticos son la $enilalanina, la tirosina y el tript$ano. Sus 9!as son las siguientes.

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1ara el primer paso de su degradacin, estos amino(cidos requieren o3igenasas y tetrahidrobiopterina, un transportador de electrones. .as o3igenasas tienen $uncin mi3ta (hidro3ilasas y monoo3igenasas). .a biopterina se parece al (cido $lico, y es acti9a en $orma de tetrahidrobiopterina (donador de protones, de poder reductor). 0e hecho es la propia dihidro$olato reductasa la que cataliza el paso de dihidrobiopterina a tetrahidrobiopterina.

-l mismo gasto de tetrahidrobiopterina y de , > se aplica a los anteriormente 9istos pasos de tirosina a 0,1A (tirosina hidro3ilasa) y de tript$ano a S&)idro3iptemina (el precursor del (cido nicot!nico), por enzima tript$ano hidro3ilasa. 1etabolismo del triptfano: es un metabolismo comple5o. -s el amino(cido m(s escaso. 0a lugar a serotonina, melatonina y (cido nicot!nico. & -n condiciones normales, el F68 del (cido nicot!nico se produce a partir de tript$ano. -l resto ha de ser ingerido. -l de$ecto de (cido nicot!nico pro9oca pelagra, una dermopat!a. & -l e3ceso de otros productos del metabolismo tambi"n tiene consecuencias. -l e3ceso de serotonina pro9oca una sensacin de tranquilidad, mientras que el de melatonina, un antio3idante, es un inductor del sueVo. & -l d"$icit de serotonina pro9oca hiperacti9idad, piroman!a. .as 9!as de la con9ersin del tript$ano en serotonina y en melatonina ocurren en el cerebro. #ambi"n entran en el cerebro otros amino(cidos arom(ticos y rami$icados, por lo que hay competencia y disminuye la s!ntesis de melatonina. Bna dieta rica en glcidos pro9oca la secrecin de insulina y la retencin de amino(cidos, por lo que el tript$ano queda solo en el cerebro. &lteraciones 4 defectos en el metabolismo de los amino#cidos: & Si e3iste un de$ecto en la $enilalanina hidro3ilasa, es decir, la que permite el paso de $enilalanina a tirosina, se acumula la $enilalanina y se inhibe la con9ersin de 0,1A en melanina. 1or ello, los indi9iduos tienen poca pigmetnacin, escasa mielinizacin de las neuronas y e3crecin de (cidos. -ste s!ndrome se denomina $enilcetonuria. & .a de$iciencia en la degradacin del (cido homogent!sico pro9oca una anomal!a que es gen"tica, autosmica y recesi9a. Se caracteriza por el color oscuro de la orina. & -l mal $uncionamiento de las c"lulas cerebrales, con la imposibilidad de sintetizar dopamina, da lugar a rigidez y temblores (en$ermedad de 1arIinson). -l tratamiento con dopamina me5ora a

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los en$ermos pero no los cura. Adem(s, se debe suministrar al mismo tiempo un inhibidor para que la dopamina no sobrepase la barrera hematoce$(lica y penetre en el te5ido cerebral. 1etabolismo de las porfirinas: las por$irinas son un grupo de biomol"culas cuyo grupo $uncional est( $ormado por la unin de una por$irina a una prote!na y un metal (quelato). Si este metal es el hierro, entonces se denominan hemoprote!nas. .os compuestos prote!na&por$irina est(n relacionados con el metabolismo de ,> y el transporte de electrones, esto es, con las reacciones =ed&,3. -st(n implicados en la $otos!ntesis. Algunas mol"culas con por$irinas son% & -nzimas respiratorias (citocromos) & 'iomol"culas con $uncin transportadora y almacenadota de ,> (hemoglobina, mioglobina). & -nzimas en las que inter9iene ,> (catalasas, pero3idasas). .a por$irina es un tetrapirrol, un compuesto con dobles enlaces con5ugados a lo largo de la mol"cula. .os pirroles se unen por enlaces simples. -l color 9iene determinado por el grado de resonancia. .a por$irina puede tener di9ersos sustituyentes% & =adicales etilo y propilo en los cuatro pirroles% entonces es una uropor$irina. & =adicales metilo y propilo en los cuatro pirroles% copropor$irina. & Si tiene radicales metilo y propilo en dos pirroles y metilo y 9inilo en los otros dos, entonces es protopor$irina. Biosntesis de las porfirinas: requiere de dos co$actores, el (cido pantot"nico (un deri9ado de la Acetil *oA) y la pirido3ina. Ambos son 9itaminas. Se di9ide en dos partes% 1) S!ntesis del por$obilingeno% la s!ntesis se inicia a partir de glicina y Succinil *oA. -n esta reaccin, el grupo amino de la glicina se acti9a por la presencia de pirido3al $os$ato. -l producto es un intermediario inestable que se descarbo3ila inmediatamente, dando lugar al F&amino le9ulinato, el cual por salida de agua y protones, dar( lugar $inalmente al por$obilingeno.

>) -l por$obilingeno sale de la mitocondria. Bna desaminasa pro9oca la salida de un grupo amino. Se unen cuatro por$obilingenos $ormando uropor$obilingeno 1. Xste tiene un acetilo y un propilo, por ello, una isomerasa cambia los grupos acetilo y propio de lugar, para $ormar uropor$obilingeno :::, la serie mayoritaria que da lugar a las dem(s por$irinas. .a ltima reaccin se produce en la mitocondria con hierro en presencia de la enzima $erroquelatasa, y tiene como ob5eti9o $ormar un grupo hemo.

.a carencia de (cido pantot"nico o 9itamina 'M producir( $alta de s!ntesis del grupo hemo (anemia). -l su$i5o geno indice incoloro, mientras que ina, indica coloreado. /egulacin de la biosntesis del grupo hemo: ,ala sintasa: el grupo hemo es $undamental y se sintetiza en todas las c"lulas, siendo cuantitati9amente importante en precursores de los eritrocitos (hemoglobina) y los hepatocitos (citocromo)% & -l eritroblasto sintetiza hemoglobina para toda la 9ida de la c"lula (1>6 d!as). & -l hepatocito necesita cantidades 9ariables a lo largo de su 9ida.

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1or esta razn, el h!gado necesita una regulacin muy $ina. -sta regulacin di$iere a la de la bios!ntesis de otras hemoprote!nas. .a lle9a a cabo la &ala sintasa. -n animales e3isten dos enzimas, codi$icados en genes distintos% ala S1 y ala S>. .a hemina es un producto natural de hemo que lle9a hierro en $orma $errosa, porque el hierro $"rrico, en contacto con ,> se o3ida. & Ala S1% es ubicual. .a hemina disminuye la 9ida media de su A=+m e impide su entrada en la mitocondria. .a &ala sintasa hace una 9ida media muy corta. & Ala S>% est( solo en c"lulas eritroides. .a hemina bloquea el transporte de hierro a la c"lula y la captacin de glicina. -l hierro aumenta la bios!ntesis de Ala S> y la hemina la s!ntesis de globinas.

%egradacin del grupo hemo: es importante el hecho de qe la bilirrubina es capaz de degradar compuestos que se sintetizan a partir de Succinil *oA y glicina. -l EF 8 del hemo que se degrada procede de la hemoglobina. Si se rompen eritrocitos, entonces la hemoglobina se une a una prote!na de la sangre, la heptoglobina, por a$inidad, no co9alentemente. -s un compuesto muy 9oluminoso que impide que la hemoglobina se pierda por 9!a renal. .a 9ida media de la heptoglobina es de cinco d!as. *uando se une el comple5o )p&hb, dura poco m(s de una hora. -s captado por el h!gado o el bazo y desaparece heptoglobina, lo que permite la separacion de globina y el grupo hemo.

-l grupo hemo es captado por una de estas dos prote!nas para e9itar la eliminacin por 9!a renal. -el comple5o hemope3ina&hemo es captado por el h!gado, a di$erencia del comple5o albmina&hemo. .a albmina acta como reser9orio y la hemope3ina como donador. %egradacin del compleJo hemopeDina,hemo: "ste comple5o su$re una rotura mediante una o3igenasa de $uncin mi3ta. & -l grupo hemo se escinde dando lugar a hierro, *, > y bili9erdina. -sta bili9erdina se o3ida nue9amente a bilirrubina y pasa a la sangre. & .a albmina, un bolsillo hidro$bico muy abundante en la sangre, transporta a la bilirrubina al h!gado o a participar en el metabolismo. o Si 9uel9e al h!gado se con5uga con (cido glucurnico, $ormando diglucuronato de bilirrubina, que se secreta al intestino. .a en$ermedad de Silbert se debe a un de$ecto en la con5ugacin que pro9oca altos 9alores de bilirrubina no con5ugada. -sto puede pro9ocar ictericia, sobre todo en reci"n nacidos. .a bilirrubina no es soluble y puede pasar la barrera hematoence$(lica y entrar en el cerebro. Se trata con barbitricos (estimulantes de la s!ntesis de citocromos en el h!gado) y con BT.

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.a bilirrubina en el intestino se con9ierte en serobilingeno y otros productos coloreados, que dan color a las heces. -l color alterado de las heces puede indicar trastornos metablicos% & )eces claras% dis$uncin biliar. & ,rina oscura% presencia de bilirrubina en la orina. & *olor amarillento de la piel. .as en$ermedades que deri9an de la 9!a de las por$irinas se denominan por$irias. -3isten por$irias hematopoy"ticas, hep(ticas, 9ampirismo ($otosensibilidad y necesidad de hemo), 1or$iria cutanea tarda (locura del rey ^orge), o 9ariegate porphyria (habitual en Sud($rica).

1E.&BO2I"1O %E 2O" N0)2EE.I%O"A .os nucletidos est(n constituidos por bases nitrogenadas, un azcar pentosa y $os$ato. .as bases nitrogenadas son compuestos pricos o pirimid!nicos%

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-l A0+ contiene >&deso3irribosa y no ribosa ya que la presencia de dos hidro3ilos contiguos contribuye a desestabilizar la mol"cula, y por esta razn, el A0+ es m(s estable que el A=+, destinado a ser destruido tras su utilizacin. Funciones de los nucletidos: & Son las mol"culas sillares con las que se construyen los (cidos nucleicos. & 1articipan en el metabolismo energ"tico, dada su alto potencial de trans$erencia de grupos (A#1). & Son mediadores $isiolgicos (A21c, *21*, A01 en agregacin plaquetaria, adenosina como 9asodilatador). & *omponentes de coenzimas (+A0, ;A0, *oA). & :ntermediarios acti9ados (B01S, SA2). & -$ectores alost"ricos. %istribucin de nucletidos en la c-lula: los nucletidos suelen encontrarse en la $orma F&nucletido, siendo por supuesto el nucletido m(s abundante el A#1, en concentracin del rango milimolar (m2) dentro de la c"lula. Sin embargo, los deso3irribonucletidos se encuentran en concentraciones muy ba5as y siempre relacionados con la di9isin celular. #odos los nucletidos con $unciones distintas de la celular son ribonucletidos. .a bios!ntesis de los nucletidos se halla regulada de manera muy precisa y $ina. /utas biosint-ticas: e3isten dos tipos de 9!as% & T!as de no9o% la mayor!a de organismos es capaz de sintetizar su$icientes nucletidos de purina y pirimidina para sus necesidades a partir de precursores simples, de ba5o peso molecular. -stas 9!as de no9o son esencialmente id"nticas en todo el mundo biolgico. & T!as de recuperacin% utilizan purinas y pirimidinas pre$ormadas. .as anomal!as en este tipo de 9!as dan ligar a cuadros patolgicos muy gra9es. %egradacin de los #cidos nucleicos: la recuperacin o reutilizacin de bases nitrogenadas se realiza a partir de las mol"culas que son liberadas por la degradacin de los (cidos nucleicos. -sta degradacin puede ser% & :ntracelular. & #ras la muerte celular. & 1or digestin de (cidos nucleicos de la dieta% en animales representa la ruta principal de importacin de bases y nuclesidos. -n la cat(lisis participan endonucleasas, que dirigen los

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(cidos nucleicos en el intestino delgado para dar lugar a mononucletidos. -n el caso de que las bases no sean utilizadas para las 9!as de recuperacin, son degradadas a (cido rico o & ureidopropionato. *uando ingerimos (cidos nucleicos, unas endonucleasas rompen las estructuras dando lugar a nucletidos. Sobre ellos, las $os$odiesterasas dan lugar a nuclesidos y $os$ato, y las $os$orilasas con9ierten el nuclesido en ribosa y base nitrogenada.

BIO"3N.E"I" %E NO@O %E P0/IN&": emplea una serie de precursores de ba5o peso molecular del anillo pur!nico, a saber% glicina, > nitrgenos procedentes de glutamina, 1 de aspartato, > carbonos del tetrahidro$olato y 1 del *,>. *omprende cuatro pasos% & S!ntesis de purinas (1=11:21) & S!ntesis de A#1 y S#1 a partir de :21. & =egulacin. & Btilizacin de nucletidos de adenina en la bios!ntesis de coenzimas. %e fosforribosil pirofosfato a #cido inosnico: el F&$os$o &0&ribosil 1&piro$os$ato o 1=11, es un deri9ado acti9ado de la ribosa F&$os$ato que participa tanto en 9!as de s!ntesis de no9o como de recuperacin. .a reaccin de s!ntesis es =ibosa F&1<A#11=11<A21, catalizada por 1=11 sintetasa, y se encuentra inhibida por altas JpurinaK. 1osteriormente, el 1=11 se con9ierte en $os$orribosil amina. -l resto se ensambla sobre este compuesto.

.as c"lulas de los 9ertebrados poseen 9arias enzimas multi$uncionales. .a bios!ntesis de :21 es regulada en un principio por retroalimentacin. .a 1=11 sintetasa se inhibe por 9arios purinucletidos, como A21, A01 y S01.

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"ntesis de &.P 4 C.P a partir de I1P: el :21 es el primer pur!n nucletido que se $orma, y es un punto de rami$icacin a partir del cual se sintetizan los nucletidos de adenina y guanina. -l primer paso es la s!ntesis de A21 y S21, 9!as que se autoinhiben. Bna alta JS#1K desplaza la 9!a hacia la s!ntesis de nucletidos de adenina, mientras que una alta JA#1K la desplaza hacia los nucletidos de guanina.

.os nucletidos suelen ser acti9os en el metabolismo en $orma de tri$os$atos. 1or ello, A21 y S21 deben con9ertirse en nucletidos tri$os$ato mediante dos reacciones sucesi9as de $os$orilacin. -stas reacciones est(n catalizadas por quinasas espec!$icas que son A#1 dependientes% S21<A#1S01<A01 A21<A#1>A01 Suanilato quinasa. Adenilato quinasa.

.a $os$orilacin de A01 a A#1 se da en el metabolismo energ"tico tambi"n por $os$orilacin o3idati9a y por $os$orilaciones a ni9el de sustrato. -l A#1 es el donador de $os$ato para la con9ersin del S01 y otros nucletidos di$os$ato a ni9el de tri$os$ato . S01<A#1S#1<A01 +uclesido di$os$oquinasa.

-sta enzima trans$iere grupos $os$ato del A#1 en la s!ntesis de todos los nucletidos tri$os$ato.

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/egulacin de la biosntesis de nucletidos de purina:

BIO"3N.E"I" %E NO@O %E N0)2EE.I%O" %E PI/I1I%IN&: los tres nucletidos de pirimidina se sintetizan secuencialmente. .a primera reaccin est( altamente regulada y catalizada por la *arbamil ;os$ato Sintetasa ::. & *arbamil $os$ato sintetasa :% sintetiza el carbamil $os$ato a e3pensas de *, > y +) , con gasto de >A#1. -ste es un proceso metablico de gran importancia en la bios!ntesis de la urea. Se produce en las mitocondrias hep(ticas. & *arbamil $os$ato sintetasa ::% la s!ntesis es id"ntica sal9o que en lugar de un grupo +) , el donante de amonio es la glutamina. -s un proceso metablico utilizado en la s!ntesis de pirimidinas y se localiza en el citosol de todas las c"lulas.

-l primer paso para la s!ntesis es la $ormacin de una base libre, a partir de la cual se construyen los nucletidos de manera no rami$icada.

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@as de recuperacin de las pirimidinas: los nucletidos de pirimidina tambi"n son sintetizados mediante 9!as de recuperacin gracias e enzimas $os$orilasas y quinasas, al igual que los pur!n nucletidos.

)ompleJos multien im#ticos: en la s!ntesis de nucletidos, tanto pur!n nucletidos como pirimid!n nucletidos, 9arias acti9idades son catalizadas por un comple5o multienzim(tico. -ste proceso tiene un sentido $isiolgico% & *analizacin de reacciones en el espacio. & =egulacin con5unta. & -stabilidad. 1urinas Sintetizadas sobre 1=11 =egulada por S#1, A#1 Senera :21A21DS21 =equiere energ!a 1irimidinas -l 1=11 se aVade despu"s =egulada por B#1, *#1 Senera ,21B21D*21 =equiere energ!a

Biosntesis 4 metabolismo de desoDirribonucletidos 'dN.P(: los deso3irribonucletidos son mucho menos abundantes que los ribonucletidos (F a 16 9eces menos), y se utilizan casi e3clusi9amente para la s!ntesis de A0+. Xste se di$erencia del A=+ por el azcar y por una de las bases nitrogenadas. .a bios!ntesis de los deso3irribonucletidos comprende dos procesos% & *on9ersin de ribosa en deso3irribosa. & *on9ersin de uracilo en timina.

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/ibonucletido reductasa: Bna nica enzima, la ribonucletido di$os$ato reductasa (r+01 reductasa) es la responsable de reducir a los cuatro ribonucletidos a su $orma de deso3irribonucletido%

-sta enzima reduce el hidro3ilo del carbono > a un hidrgeno mediante radicales libres. .a r+01 reductasa contiene residuos catal!ticos tioles con acti9idad =ed&,3 y un radical libre tirosina estabilizado por un comple5o ;e&,3!geno. .a inhibicin por dihidro3iurea se debe a que "sta destruye el radical libre. .a r+01 reductasa es un tetr(mero $ormado por% & > subunidades , que $orman la unidad =1. *ontienen tioles con acti9idad =ed&,3. Son sitios alost"ricos, donde se regula la especi$icidad de la enzima. & > subunidades , que $orman la unidad => y contienen el radical libre estabilizado por ;e&,. -l $uncionamiento de la r+01 reductasa es el siguiente% & -l electrn desapareado del radical libre tirosina se trans$iere desde la => hasta una ciste!na de =1. & Se desplaza un (tomo de hidrgeno del carbono /. & -l radical que queda en */ pro9oca la eliminacin del ,) del carbono >. & .a deso3irribosa se $orma por reduccin del carbono > por los WS) de =1. & -l (tomo de hidrgeno arrancado por el radical #yr 9uel9e al */. .os electrones para la reduccin de los ribonucletidos pro9ienen en ltimo lugar del +A01), pero son canalizados a la r+01 reductasa por coenzimas poco comunes% la tiorredo3ina y la glutarredo3ina. /egulacin de la actividad de la rN%P reductasa: la ribonucletido reductasa es una enzima con una regulacin muy $ina, que slo se acti9a en la di9isin celular. #iene > clases de sitios alost"ricos% & Sitios de acti9idad% in$luyen en la e$iciencia catal!tica. & Sitios de especi$icidad% determinan el sustrato (A01, S01, *01, o B01). .os sitios de especi$icidad tienen ba5a a$inidad para el A#1 o el dA#1.

"ignificado de la variacin uracilo,timina: -l A0+ y el A=+ se di$erencian en una base. 2ientras que el A0+ contiene timina, el A=+ contiene uracilo. -sto se debe a que la citosina se desmantela espont(neamente y $orma uracilo. .as enzimas de reparacin del A0+ reconocen la mutacin y reemplazan el uracilo por citosina. Ahora bien, no pueden distinguir entre un uracilo original y un uracilo procedente de citosina, y por ello, el uracilo se sustituye por un equi9alente metilado% la timina. 0e esta manera no se producen 9ariaciones que a$ecten a la 9ida, ya que para "sta, el A0+ debe ser estable.

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Biosntesis de desoDirribonucletidos de timina: los timidilatos (d#21) se sintetizan a partir del dB21, al cual se puede llegar por distintas 9!as% & .a reduccin y $os$orilacin del B01. & .a desaminacin de un nucletido d*21.

.a timidilato sintasa es una enzima que cumple un papel importante ya que posee como coenzima un tetrahidro$olato (+F,+16 metileno tetrahidro$olato) que cede un grupo de 1* y un par de electrones para reducir el carbono a ni9el de metilo. .a s!ntesis de este compuesto se lle9a a cabo a partir de tetrahidro$olato.

-s el nico caso conocido en el que el tetrahidro$olato acta simult(neamente como donador de carbono y de electrones. Se trans$iere hidrgeno del *M al metileno, que se con9ierte en metilo. .imidilato sintasa como diana de 9uimioterapia: los procesos de quimioterapia se basan en e3plotar la di$erencia bioqu!mica entre los procesos patolgicos y el hu"sped. 2uchos agentes quimioterap"uticos se han descubierto por azar ensayando an(logos de metabolitos normales. .a e$icacia de la mayor parte de "stos 9iene limitada por e$ectos secundarios, selecti9idad incompleta, y sobre todo, desarrollo de resistencia al agente. Al actuar la timidilato sintasa como un enzima responsable de la s!ntesis de nucletidos de timina, inhibir a "sta equi9ale a inhibir la s!ntesis del A0+ de manera espec!$ica, y que no a$ecta a c"lulas que no se di9iden muy r(pidamente. #odo esto la hace ideal para el tratamiento del c(ncer. & -l F&$luorouracilo (;Bra) y su deso3irribonuclesido (F&$luoro deo3iuridina, ;dBrd) son potentes inhibidores de la s!ntesis de A0+. -l ;dBrd slo se une a la enzima en presencia del + F,+16 metileno tetrahidro$olato.

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.a F&$luoro deo3iuridina mono$os$ato (;dB21) es un an(logo de dB21 que se une irre9ersiblemente a la timidilato sintasa. & -l (cido $lico o la trimetoprima tienen 16666 9eces m(s a$inidad por la timidilato sintasa de algunas bacterias que por la humana. & .a aminopterina y el metotre3ato tienen 166 9eces m(s a$inidad por la timidilato sintasa que el tetrahidro$olato. .as reacciones son m(s o menos selecti9as. Al ser compuestos e3tremadamente t3icos en ni9eles a partir de concentraciones muy ba5as, la quimioterapia es muy agresi9a, y slo debe usarse en casos en que no e3ista otro remedio. %EC/&%&)IEN %E P0/IN&" K &NO1&23&" %E2 1E.&BO2I"1O %E 2&" P0/IN&": el catabolismo de todas las purinas tiene como punto $inal el (cido rico, el cual es e3cretado mediante la orina. .a mayor!a de los animales continan o3idando el anillo pur!nico hasta obtener alanto!na o (cido alantoico, que se e3creta o se o3ida hasta urea o amoniaco. -l (cido rico es una mol"cula muy insoluble, y por ello no puede encontrarse en altas concentraciones. .os animales uricot"licos (a9es y reptiles) lo e3cretan directamente en $orma de (cido rico, mientras que los dem(s animales deben o3idarlo hasta urea, mucho m(s soluble.

&

-l (cido rico y los uratos son muy insolubles. -sto es una adaptacin m(3ima al ambiente seco para la e3crecin del nitrgeno. -l (cido rico es un buen antio3idante. Algunas teor!as seValan que la anmala longe9idad humana se debe al (cido rico, que impide que nos o3idemos tan r(pido como deber!amos. -limina radicales libres de la circulacin. .a insolubilidad de los uratos puede ser una di$icultad para el metabolismo. .a hiperucemia, el ni9el de (cido rico en sangre ele9ado crnico, a$ecta a un 67/ 8 de la poblacin mundial. -sta hiperucemia deri9a en ataques de gota. & -l aumento del urato en sangre, si se prolonga, pro9oca que "ste precipite como cristales de urato sdico en el l!quido sino9ial de las articulaciones, produciendo una artritis muy dolorosa, que puede lle9ar a una degeneracin gra9e de las articulaciones. & .a gota puede resultar de una sobreproduccin de nucletidos de purina, que lle9a a un e3ceso de s!ntesis de (cido rico, o bien a un de$ecto en su e3crecin. & Se conocen 9arias alteraciones gen"ticas que lle9an a una sobreproduccin de pur!n nucletidos y por tanto de (cido rico. .a causa m(s $recuente es sin embargo un de$ecto en la e3crecin. +o obstante, no se desarrolla gota sin un de$ecto gen"tico que se mani$iesta desde la in$ancia.

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.os s!ntomas son dolores intensos del dedo gordo del pie, seguido de hinchazn, in$lamacin, $iebre y episodios limitados de artritis. A menudo se presenta de noche. .os ataques duran de unos d!as a unas semanas. -l tratamiento de la gota puede hacerse con alopurinol, un precursor de la alo3antina, que inhibe a la Yantina o3idasa. -sta inhibicin pro9oca la acumulacin de hipo3antina y 3antina, mucho m(s solubles y $(ciles de e3cretar que el (cido rico.

&nomalas en im#ticas en tres tipos de gota: & +i9eles ele9ados en la 1=11 sintetasa% pro9oca una bios!ntesis aumentada de nucletidos de purina y de pirimidina, tanto por ser sustratos de las reacciones como por e$ectos alost"ricos. & 1"rdida de retroinhibicin en la 1=11 amidotrans$erasa. -sto pro9oca una mayor produccin de purinas y por tanto una mayor s!ntesis de (cido rico. & S!ndrome de .esch&+yhan% d"$icit de )S1=#. .a hipo3antina&guanina $os$orribosil trans$erasa es una enzima encargada de la siguiente reaccin%

-s una en$ermedad ligada al se3o. -l gen estructural de )S1=# est( en el cromosoma Y. A$ecta sobre todo a niVos. 1ro9oca artritis gotosa gra9e, dis$unciones del sistema ner9ioso con desrdenes del comportamiento y del aprendiza5e, comportamiento hostil y agresi9o y de$iciencia mental. A menudo el comportamiento agresi9o se dirige contra el propio en$ermo. +o e3iste tratamiento y los indi9iduos rara 9ez sobrepasan los >6 aVos de edad. Inmunodeficiencia severa combinada '")I%(: carencia de &%&: esta inmunode$iciencia suele estar causada por una anomal!a hereditaria en la adenos!n desaminasa. -sto conduce, como puede 9erse en el dibu5o (p(g. E) a una acumulacin de adenosina y en consecuencia de dA#1, un potente inhibidor de la replicacin.

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-l dA#1 es un inhibidor de la di9isin de los lin$ocitos # y '. 1or esta razn, los indi9iduos no tienen inmunidad. Se han desarrollado terapias g"nicas para la insercin de genes enzim(ticos en los lin$ocitos. -l riesgo de c(ncer con estas terapias es alto. %eficiencia de PNP: es una inmunode$iciencia mucho menos gra9e, resultado de la carencia de otra enzima de la degradacin de las purinas% la pur!n nuclesido $os$orilasa (1+1). Xsta lle9a a la acumulacin de dS#1, que a$ecta tambi"n a la replicacin del A0+, pero menos gra9emente que el e3ceso de dA#1. Slo destruye los lin$ocitos #, no los '. %EC/&%&)IEN %E 2O" N0)2EE.I%O" %E PI/I1I%IN&: las 9!as catablicas de las pirimidinas son m(s sencillas que las de las purinas. .as 9!as metablicas comprenden principalmente reacciones de reduccin, y los intermediarios son relati9amente solubles, por lo que pocas anomal!as a$ectan a estas rutas.

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IN#ENIE A #ENTICA

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Ingeniera gen-tica: es la t"cnica que permite secuenciar, aislar y manipular el A0+. Antiguamente, el estudio del genoma deb!a abordarse desde dos perspecti9as separadas% & .a bioqu!mica% permit!a el aislamiento y estudio de las prote!nas. & .a gen"tica cl(sica% permit!a el estudio de los genes. Actualmente, la gen"tica actual es capaz de pasar de una a otra, pudiendo proceder de la prote!na al gen, o del gen a la prote!na. )lonacin: supone la creacin de copias de A0+ id"nticas a partir de un modelo, un A0+ comple5o. Sobre este A0+ se lle9an a cabo distintos procedimientos% & *orte% el corte se realiza con enzimas endonucleasas de restriccin, $undamentalmente tipo ::. -stas enzimas cortan la secuencia de A0+ por puntos espec!$icos, lo que permite cortar por secuencias conocidas. & :nsercin% este A0+ se inserta a su 9ez en un 9ector, gener(ndose una mol"cula h!brida denominada A0+ recombinante. & -l A0+ recombinante se introduce en una c"lula hu"sped (-. coli) cuya maquinaria biolgica se utiliza para la generacin de mltiples copias del mismo. .a multiplicacin suele darse de manera e3ponencial y muy r(pida. .as t"cnicas de introduccin pasan por hacer a estas c"lulas hu"sped \competentes]. +o obstante, el sistema es e$iciente hasta cierto punto. -ntre 9arios millones de c"lulas competentes slo algunas incorporar(n el A0+ recombinante, por lo que se hacen igualmente necesarias t"cnicas de separacin o de seleccin. En imas utili adas en Ingeniera Cen-tica: & -ndonucleasas de restriccin% los enzimas de restriccin suelen ser bacterianos. Su $uncin natural es digerir A0+ e3geno. -3isten tres tipos% o .as endonucleasas : y ::: son comple5os multienzim(ticos que reconocen la secuencia de A0+ e3geno y cortan a una distancia de hasta 1666 pb de dicha secuencia. +ecesitan adem(s A#1. 1or todo ello no nos resultan muy tiles, ya que necesitamos un enzima que corte la secuencia que nos interesa, no una distancia de 1666 pb. o .as endonucleasas :: son unidades nicas que cortan en una secuencia de reconocimiento sin gasto de A#1. Se suelen nombrar con 9arias letras que se re$ieren al organismo en que se aisl, y un nmero romano que indica el orden en que se aisl. .as secuencias de reconocimiento se denominan secuencias palindrmicas y suelen estar $ormadas por &M pb. .os cortes pueden ser de dos tipos%

& & & & & & &

Siempre que e3iste una endonucleasa, e3iste una enzima de modi$icacin (metilasa) que metila nucletidos del A0+ propio impidiendo que la endonucleasa acte sobre ellos. -n general, un gen tiene una secuencia determinada siempre, lo que nos permite elaborar mapas de restriccin, indicando el enzima adecuado para cada gen. A0+ ligasa% une dos $ragmentos de A0+. A0+ polimerasa% rellena huecos en A0+ de doble cadena aVadiendo nucletidos en sentido /7. #ranscriptasa in9ersa% sintetiza A0+ a partir de A=+m. 1olinucletido quinasa% aVade un grupo $os$ato al W,) en posicin F7. #rans$erasa terminal% cataliza la unin de nucletidos al e3tremo /7 de una secuencia de A0+. Se utiliza tambi"n para aVadir nucletidos marcados radiacti9amente. ;os$atasa alcalina% es responsable de eliminar grupos $os$ato del e3tremo de mol"culas como nucletidos, prote!nas y alcaloides. -3onucleasa :::% es responsable de la eliminacin de nucletidos del e3tremo /7.

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&

-3onucleasa $ago

Estrategias 9ue facilitan la clonacin: & Sitios de clonacin mltiple (polylinIers)% son segmentos cortos de A0+ que contienen mltiples (habitualmente >6 o m(s pb) sitios de restriccin, que en ocasiones solapan. -stos sitios de restriccin est(n sintetizados a partir de endonucleasas y se insertan en una mol"cula de A0+ principal. 0e esa manera permiten crear sitios de corte espec!$icos en una mol"cula de A0+ que no se conoce bien. & *reacin de e3tremos cohesi9os% los e3tremos cohesi9os, al ser colas simples, reaccionan me5or que los e3tremos romos. .a enzima trans$erasa terminal, aVade una serie de nucletidos al e3tremo /7 (cola de 1oli A), de tal manera que a partir de un e3tremo romo se obtiene uno cohesi9o. 2ediante A0+ polimerasa : se puede completar la mol"cula. .a trans$erasa terminal acta me5or sobre segmentos cortos simples, por lo que su actuacin puede ir precedida de un corte mediante endonucleasas. @ectores: los 9ectores mantienen un $ragmento de A0+ incluido en su interior. 0e esta manera, se hace m(s $(cil su introduccin en una c"lula hu"sped y se $acilita su replicacin. -3isten distintos tipos de 9ectores en $uncin del A0+ a clonar% Tector 1l(smido ;ago &;ago 11 *smico 'A* ZA* #amaVo (Ib) >6 >F&166 F /66 1666

Pl#smidos: son dobles cadenas de A0+ de $orma circular. Su tamaVo oscila entre 1&166 Ib. Su relacin con la c"lula puede ser parasitaria, o tambi"n simbitica. Suelen codi$icar prote!nas responsables de la resistencia a antibiticos, pudiendo pasar de unas c"lulas a otras, mediante la trans$ormacin. *odi$ican tambi"n prote!nas que $acilitan este paso. Se mantienen independientes del cromosoma. 1ara que un pl(smido sea utilizado como 9ector debe ser optimizado% & 1oseer entre &M Ib. & *ontener un origen de replicacin, un $ragmento de unos 166 pb al que se unen los mecanismos de replicacin de la c"lula hu"sped. & 1uede conser9ar otros genes de seleccin as! como una regin de clonacin. Seneralmente, los pl(smidos m(s utilizados son el pl(smido bacteriano (-. coli) y el pl(smido de la le9adura. Algunas prote!nas que pueden quererse sintetizar, necesitan acti9aciones post& traduccionales para ser acti9as (glucosilaciones), que no se dan en bacterias. 1or esta razn se utiliza el pl(smido de le9adura, que posee% & Bn origen de replicacin denominado secuencia de replicacin autnoma (A=S) & Secuencias centrom"ricas (*-+) & 2arcador de seleccin% suele ser un gen de alguna ruta biosint"tica (B=A&/). & ,rigen de replicacin (,=:) & Bn gen de resistencia a ampicilina. .-cnicas de introduccin del pl#smido en la c-lula: una 9ez obtenido el A0+ recombinante, en este caso en el pl(smido, se procede a introducirlo en una c"lula hu"sped. -ste proceso puede lle9arse a cabo mediante% & #rans$ormacin% se modi$ica el potencial de membrana gracias a cationes (*a ><, =b<, .i<), seguido de un choque t"rmico ( >?*). & -lectroporacin% consiste en un pulso de alto 9olta5e que se suministra a la c"lula. Se utiliza para incorporar A0+ muy grande. -s m(s e$iciente aunque generalmente no es necesario recurrir a este mecanismo.

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.-cnicas de seleccin de c-lulas: algunas c"lulas incorporar(n el pl(smido y otras no, por lo que se har( necesario poseer t"cnicas selecti9as e$icientes. -3isten di$erentes $ormas de separar las c"lulas trans$ormadas de las no trans$ormadas% & *omo el pl(smido contiene el gen de la resistencia a ampicilina, si se culti9a la muestra en un medio rico en esta sustancia, slo sobre9i9ir(n las c"lulas que lo hayan incorporado. .a entrada de un pl(smido suele impedir por lo general la entrada de m(s, de tal manera que podemos inocular a una muestra distintos pl(smidos a la 9ez y separar luego las c"lulas hu"sped en grupos segn el tipo que hayan incorporado. & .as c"lulas trans$ormadas se culti9an en un medio m!nimo (con componentes esenciales como +)/, *, sales y oligoelementos). Slo las c"lulas trans$ormadas son capaces de crecer en este tipo de medio. #ambi"n puede darse el caso de que algunos pl(smidos se recombinen con A0+ a clonar y otros no. -n este caso, las t"cnicas de separacin son las siguientes% & Seneralmente, el pl(smido original tiene m(s de un gen de resistencia. *uando se inserta el A0+ a clonar, se hace sobre uno de estos genes, de tal manera que las c"lulas que hayan incorporado el pl(smido original siempre ser(n resistentes a una sustancia m(s que las trans$ormadas con el recombinante. 0e esta manera, puede contarse con un pl(smido que posea genes de resistencia a ampicilina y a colchicina. Si se inserta el A0+ a clonar sobre el gen de resistencia a la colchicina, podremos separar luego en un medio rico en colchicina las c"lulas de cada tipo. & ,tro m"todo es el de la e3istencia de un pl(smido original con un $ragmento del gen lac&Z (promotor y parte +&terminal de la &galactosidasa). -l A0+ a clonar se inserta en medio de este gen. Se trans$ormar(n o incluir(n en c"lulas cuyo cromosoma principal contenga el resto del gen. 0e esta manera, las c"lulas que hayan trans$ormado el pl(smido original sintetizar(n la &galactosidasa completa y por tanto acti9a, mientras que las que hayan incorporado el pl(smido recombinante sintetizar(n &galactosidasa parcial y por tanto inacti9a. 1ueden separarse despu"s en un medio rico en Y&SA., una sustancia que por accin de la & galactosidasa da un producto de color azul. 1or tanto, tendremos una parte de la muestra azul (pl(smido original) y otra blanca (pl(smido recombinante). )iclo ltico 4 lisog-nico del fago, : el genoma del $ago& es peculiar. -s un genoma lineal que posee en sus e3tremos F7 y /7 unos sitios especiales denominados sitios *,S que reaccionan entre s! $ormando una mol"cula circular. -l $ago& posee una cola que reacciona con la membrana bacteriana permitiendo un ancla5e mec(nico y la insercin de su genoma. -ste genoma puede seguir dos ciclos, dependiendo de las condiciones nutricionales% & .isog"nico% en condiciones nutricionales des$a9orables, el A0+ 9iral puede introducirse en el A0+ bacteriano, quedando all! silenciado. Se replica 5unto con el A0+ bacteriano, esperando un momento de condiciones propicias para iniciar el ciclo l!tico. & .!tico% el 9irus utiliza la maquinaria $isiolgica celular para replicar su A0+ as! como para sintetizar sus elementos estructurales (c(psida). Bna 9ez generados los nue9os 9irus, se rompe o lisa la en9oltura de la bacteria, quedando "stos libres en el medio. 0eteccin de $agos% se realiza mediante ensayo de placas de lisis. .os $agos, al contrario que las bacterias, no $orman colonias, por lo que su seleccin es distinta. 1ara ello se dispone una placa llena de bacterias hu"sped susceptibles al $ago $ormando un c"sped continuo. Se aVade una dilucin del $ago, cubri"ndose a continuacin la placa con un medio de culti9o (agar) e incub(ndose. .os $agos in$ectan a unas cuantas bacterias, realizando el ciclo l!tico y liberando m(s $agos, que in$ectan a las c"lulas contiguas, en una reaccin en cadena. Aparecen de esta $orma zonas en la placa que corresponden a las bacterias muertas por in$eccin. -l agar tiene la $uncin de restringir el mo9imiento del $ago, de $orma que "ste puede in$ectar a una sola c"lula. .os agu5eros resultantes son las llamadas placas de lisis y nos permiten ubicar al $ago para recogerlo. -l nmero de $agos debe ser lo su$icientemente ba5o para que no se con$undan las placas. )smidos: los csmidos son 9ectores arti$iciales parecidos a los pl(smidos. Sus sitios destacados son% & Bn origen de replicacin. & Bn gen de resistencia a antibiticos.

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Bn sitio de clonacin mltiple que admite la insercin de numerosos $ragmentos de A0+ separados por secuencias cos. Al digerir los $ragmentos con enzimas de restriccin, como son m(s grandes que el 9ector, no se pueden cerrar y quedan de $orma lineal% -l csmido es una mezcla de pl(smido y $ago, ya que apro9echa el mecanismo de replicacin de los pl(smidos y la e$iciencia in$ecti9a de los 9irus. Si hay empaquetamiento del A0+, se aVaden prote!nas que se unen a las secuencias cos, y cada uno de estos $ragmentos se ensambla para $ormar $agos recombinantes. -stos csmidos se inyectan por medio del $ago a bacterias, y quedan casi con9ertidos en pl(smidos. .a in$eccin del $ago es mucho m(s e$iciente que la trans$ormacin por el tamaVo del csmido y por la interaccin entre el $ago y las prote!nas de membrana bacterianas. .a di$erencia es de 16M trans$ormacionesDg de A0+ $rente a 16N placas de lisisDg. ,tros $agos pueden ser utilizados como 9ectores% el m(s grande es el $ago 11, que admite un A0+ de hasta 166 Ib. )romosomas bacterianos artificiales 'B&)(: son pl(smidos diseVados para la clonacin de A0+s muy largos. -ntre sus componentes destacan el ,=:&* (muy estable) y genes que dirigen la replicacin, procedentes de un pl(smido natural de gran tamaVo. *odi$ica para las prote!nas del pl(smido ;actor ;, que admite $ragmentos muy largos. Su principal des9enta5a estriba en la introduccin en la c"lula, la cual debe realizarse por electroporacin y es por tanto menos e$iciente que la trans$ormacin. .as c"lulas hu"sped, adem(s, no pueden ser bacterias normales, sino que deben ser bacterias mutantes con alteraciones en la pared celular que permitan la insercin. )romosomas artificiales de levadura 'K&)(: en ellos, el 9ector de partida tiene% & Bn origen de replicacin (A=S). & Bna secuencia de replicacin autnoma. & Bna regin centrom"rica% $acilita la unin a las $ibras del huso mittico para la separacin correcta de las c"lulas hi5as. 1) -l procedimiento es una digestin enzim(tica por 'am ) :, que crea un cromosoma lineal con e3tremos telom"ricos, unas secuencias que lo protegen de la degradacin por nucleasas y que permiten que se pueda replicar completamente hasta los dos e3tremos. >) 2(s tarde, su$re una nue9a digestin, esta 9ez por -co = :, lo que lo di9ide en dos brazos. 1or tanto hacen $alta dos marcadores, uno para el brazo derecho y otro para el izquierdo. /) 1or otro lado, $ragmentos de A0+ genmico se 9an generando por digestin ligera con -co = :. Se necesitan marcadores para asegurarse que al unir los $ragmentos de A0+ genmico al 9ector por medio de enzimas ligasas y luego trans$ormar, el cromosoma se mantiene completo (con brazo izquierdo, $ragmento intermedio y brazo derecho). .a trans$ormacin en este caso es un proceso complicado, ya que no se puede hacer con la c"lula completa, sino que hay que digerir enzim(ticamente su en9uelta y luego introducir los elementos de trans$ormacin. .os $ragmentos deben tener al menos 1F6 Ib para ser estables, aunque admiten cantidades superiores. &I"2&1IEN.O %E 0N CEN: un gen es una parte muy pequeVa del cromosoma, por lo que su aislamiento con una buena resolucin es un proceso comple5o. *onsta de dos pasos% & *onstruccin de una genoteca. & :denti$icacin del gen. )onstruccin de una genoteca: una genoteca es un con5unto de clones en el que est( representado la totalidad o un con5unto de genes de un organismo. )ay tres tipos principales% & Senmica% contiene todas las secuencias del genoma en $ragmentos. Si la genoteca es genmica, lo m(s comn es que los distintos $ragmentos se encuentren en distintas mol"culas de 9ector, por lo que, al incluir intrones, su tamaVo es mayor y es m(s di$!cil encontrar clones nicos con genoma completo. -s til cuando se quiere conocer la estructura del gen y de las secuencias reguladoras. & 0e A0+c% contiene slo las secuencias que se e3presan como A=+m. Si la genoteca es de A0+c no hay iintrones, por lo que los genes se encuentran completos, sin interrupciones. ,riginan $ragmentos m(s cortos, que ocupan un solo clon. 1or esta razn, la genoteca de A0+c es m(s di$!cil de construir que la genmica, pero e3cluye a los intrones. Bn gen completo se incluye en una regin menor y sin secuencias reguladoras.

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0e e3presin% contiene slo los clones que producen prote!nas, que se transcriben y traducen. -s m(s $(cil de construir en eucariontes a partir de un A0+c que a partir de genomas enteros. .as genotecas genmicas y de A0+c poseen seVales para que se transcriban y traduzcan los genes. )ay que tener en cuenta que en el A0+ hay promotores, e3ones (representados en prote!nas) e intrones (que se transcriben pero no se traducen). -l A0+c es la copia de un A=+m. )onstruccin de una genoteca genmica: se parte del A0+ cromosmico. 1) -n primer lugar, el A0+ es digerido parcialmente por un enzima de restriccin para producir $ragmentos de di$erentes tamaVos. .a cadena del A0+ cromosmico lineal tiene mltiples sitios de corte para un enzima. Se elige una gama de tamaVos para los $ragmentos que sea compatible con el 9ector de clonacin que asegure que pr(cticamente todas las secuencias est"n representadas. Bna digestin total destruir!a el A0+ en muchos trozos pequeVos que no ser!an adem(s cmodos de mane5ar. 1ara ello, el enzima slo digiere y obtiene $ragmentos de un tamaVo de unas >F Ib, para empaquetarse en un $ago. .os $ragmentos que e3cedan este tamaVo o que sean demasiado pequeVos para ser clonados son eliminados por centri$ugacin o electro$oresis. +o todos los $ragmentos constituyen un gen, sino que "ste puede estar di9idido en 9arios $ragmentos segn el enzima. >) A continuacin, el 9ector se digiere con el mismo enzima o con otro compatible y se liga con los $ragmentos. /) .a mezcla de A0+ ligado se introduce en pl(smidos o en $agos. ) .os pl(smidos o $agos se introducen en bacterias. *ada bacteria producir( colonias con el mismo A0+ recombinante. -n el caso de los $agos, cada placa de lisis corresponder( a un $ragmento de A0+ clonado, y no necesariamente con un gen. Bna 9ez realizado el proceso, hay que identi$icar el clon que contiene el $ragmento de inter"s. )onstruccin de una genoteca de &%Nc: las genotecas de A0+c son copias en A0+ de los A=+m. 1ara construirlas se sigue un proceso largo% 1) Se a!slan los A=+m de distintos te5idos u organismos, apro9echando la caracter!stica de que la mayor!a incluyen colas de monmeros (colas de poli A) en el e3tremo /7 de su cadena. -ste A=+m total se hace pasar a tra9"s de una matriz que contiene una columna de oligonucletidos sint"ticos de timina, de modo que quedan retenidos los $ragmentos de A=+m que se desean. A continuacin se la9a la columna para eliminar los $ragmentos que no se desean y se eluyen los A=+m necesarios. >) Bna 9ez obtenido el A=+m, se produce a sintetizar el A0+c. 1ara hacerlo, hay que tener en cuenta algunos puntos% a. .as polimerasas necesitan un cebador o iniciador. 1or ello, el oligonucletido sint"tico de timidita que interacciona con el A=+m se utiliza como cebador. b. Se tiene que utilizar una transcriptasa in9ersa. c. Bna 9ez conseguida una primera cadena de A0+, hay que conseguir la complementaria. 1ara ello, en primer lugar hay que tratar el h!brido A0+&A=+ con (lcali o con A=+asas que destruyan el A=+ sin daVar el A0+. d. -l enzima A0+ polimerasa, que sintetiza la cadena complementaria, tambi"n necesita un cebador, por lo que a la cadena molde de A0+ se le aVaden en los e3tremos otros oligonucletidos (deso3iguanosina y deso3icitidina). /) Bna 9ez acta el enzima, se obtiene una cadena doble de A0+c con colas. -sta cadena debe ser introducida en un 9ector y debe ser protegida contra la accin de enzimas de restriccin. 1or esta razn se metila. Bna 9ez metilada, se le aVaden e3tremos oligonucletidos que contienen secuencias de restriccin del enzima que se 9aya a utilizar, con ayuda de A0+ ligasas. 0e esta manera, tenemos un A0+c que se puede ligar y que se introduce en un $ago, que posteriormente se inyectar( a bacterias que contienen el $ragmento clonado, y cada una de las cuales producir( un A=+m. )onstruccin de una genoteca de eDpresin: el A0+ que se introduce en un 9ector procedente de otro organismo se transcribe y traduce en prote!nas, que se separan de acuerdo con sus propiedades. 1ara construir esta genoteca hace $alta un 9ector que incluya delante del gen% & Bn promotor de la transcripcin. & Bn lugar de unin al ribosoma.

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1artimos de A0+ o A0+c, que se digiere mediante enzimas de restriccin. & -n su punto /? se inserta un promotor del opern lac, por lo que en bacterias se produce la prote!na. & Adem(s de secuencias promotoras, se encuentra el gen de la &galactosidasa. -n los 9ectores se inserta el gen deseado despu"s del de la &galactosidasa. 1or tanto, cuando se transcribe y traduce, se obtiene una prote!na&$usin, codi$icada h por el $ragmento insertado y h por el gen de la &galactosidasa. -s una prote!na m(s estable, que la c"lula reconoce como propia. 0espu"s de haber obtenido $agos recombinantes, se produce la in$eccin. -s despu"s del empaquetamiento in Titro y la in$eccin donde, en las placas de lisis, se detecta el A0+ y las prote!nas. &n#lisis de una genoteca: las genotecas se analizan mediante t"cnicas que permiten distinguir un clon entre 9arios. & .a mayor!a se basan en la hibridacin, capacidad que tienen los (cidos nucleicos de $ormar dos cadenas complementarias que interaccionan entre s! mediante puentes de hidrgeno. Si tenemos un $ragmento de A0+ y lo sometemos a altas temperaturas o lo introducimos en un medio alcalino, las dos cadenas se separan al de5ar de interaccionar. -ste proceso se conoce como desnaturalizacin del A0+. -s hasta cierto punto re9ersible, ya que si se reestablecen las condiciones normales, las cadenas se 9uel9en a unir en un proceso conocido como renaturalizacin, anillamiento o hibridacin del A0+. & .a absorcin de luz en cadenas dobles y sencillas es di$erente. -l A0+ de cadena doble absorbe menos luz que el de cadena simple. Si hay una preparacin de A0+ de cadena doble que se desnaturaliza, tal preparacin 9a absorbiendo m(s luz a medida que las dos cadenas se separan. .a #2 (temperatura de $usin)% es la temperatura a la cual la mitad de las mol"culas de la muestra se han disociado. 0epende de 9arios $actores como las condiciones de temperatura, p), $uerza inica y la propia secuencia de A0+ (recordemos que las uniones S&* son m(s $uertes que las A&#, y por tanto, a mayor nmero de pares S&*, mayor es la temperatura de $usin). & Se pueden $ormar h!bridos A0+&A0+ y A0+&A=+ si sus secuencias son complementarias. Si se calientan estas cadenas se obtendr(n cadenas simples, las cuales se pueden hacer pasar por un $iltro de nitrocelulosa para que se separen. -l $iltro a continuacin se seca y se radia con BT. -n "l se quedan pegadas las cadenas listas para ser procesadas. A continuacin, un $ragmento de unos >6 nucletidos complementarios al $ragmento de A0+ que se busca (la sonda) se marca radiacti9amente y se incuba con el $iltro. .a sonda hibrida con su $ragmento, por lo que se puede la9ar el resto y obser9arse la sonda mediante autorradiogra$!a. &n#lisis de bacteriasLfagos con placas de lisisLcolonias: en cada placa o colonia se encuentra representado un $ragmento de genoteca, y se necesitan tantas como nmero de genes. -l proceso consiste en% 1) -n primer lugar, se presiona con un papelD$iltro de nitrocelulosa la placa de agar con muchas colonias bacterianas indi9iduales, cada una de las cuales contiene un A0+ recombinante distinto. Algunas c"lulas se adhieren al $iltro produciendo una r"plica en la placa. >) -l papel se incuba en condiciones alcalinas, con el $in de lisar las c"lulas, liberar y desnaturalizar el A0+. /) -l $iltro que contiene las cadenas sencillas se irradia y seca para $i5arlas. ) -l A0+ sencillo se hibrida con una sonda marcada radiacti9amente. F) -l A0+ que ha hibridado con la sonda se puede detectar mediante autorradiogra$!a, y se puede identi$icar la secuencia completa de este clon. M) 1or ltimo, se retorna a la placa inicial y se escogen los elementos de la posicin indicada por la sonda para continuar. -s necesario que la sonda sea espec!$ica e interaccione solamente con un tipo de $agoDbacteria. )onstruccin de una sonda especfica: el diseVo de sondas es un proceso complicado, por la ele9ada especi$icidad que se requiere. .a sonda debe ser complementaria al gen que buscamos. -n caso de conocer la secuencia de este gen, se elige un $ragmento y se sintetiza el complementario. -l problema es que muy pocas 9eces se conoce esta secuencia. Si se tiene una prote!na y se desea identi$icar su gen, hay que diseVar una sonda para "ste. -sta sonda debe tener, por consideraciones

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estad!sticas, al menos >6 nucletidos, dado que con cuatro bases, hay >6 posibles secuencias, 161> probabilidades de encontrar una secuencia id"ntica, y, al tener el genoma humano /G16 N pb, una secuencia de >6 nucletidos deber!a ser nica. *uanto m(s grande sea el genoma, m(s espec!$ica ha de ser la sonda. -l problema de aislar un A0+ a partir de una prote!na es que el cdigo gen"tico es degenerado, y por esta razn, se han de diseVar todas las secuencias posibles (generalmente unas E). 1ara reducir las probabilidades, se busca una regin de la prote!na en la que el cdigo sea menos degenerado. Bna 9ez sintetizadas todas las probabilidades, se mezclan para $ormar una solucin denominada sonda degenerada. .a correcta deber!a estar incluida en tal solucin e hibridar con el gen de inter"s. .as sondas tienen su aplicacin en di9ersos campos% & 0iagnstico de en$ermedades gen"ticas. & 0eteccin de mutaciones. & 0eteccin de c(nceres e in$ecciones. &n#lisis de una genoteca de eDpresin: en el caso de una genoteca de e3presin, la sonda no puede hibridar con el A0+, ya que se trata de un an(lisis de prote!nas. Son necesarios por tanto otros elementos (anticuerpos) para este an(lisis. -l procedimiento es el siguiente% 1) Se presiona sobre el con5unto de prote!nas con un papel de nitrocelulosa. >) .as prote!nas unidas a la nitrocelulosa se culti9an con anticuerpos primarios marcados, que reconocen las prote!nas y se unen a ellas. /) A continuacin se la9a el papel y se incuba de nue9o con un anticuerpo secundario marcado radiacti9amente, que reconoce el primario y se une a "l. ) Se realiza una autorradiogra$!a del papel en la que se obser9an las prote!nas marcadas con los anticuerpos. .as genotecas no tienen que ser siempre de A0+c, sino que dependen del organismo. -n le9aduras, por e5emplo, la escasez de intrones no o$rece di$erencia entre las genotecas de A0+c y de e3presin. -n humanos, la genoteca de A0+c se hace necesaria para la s!ntesis de las prote!nas. Aunque el an(lisis m(s habitual sea con anticuerpos, se pueden utilizar tambi"n otros ligandos espec!$icos marcados. /eaccin en cadena de la polimerasa 'P)/(: la 1*= es una t"cnica alternati9a de clona5e por la que se obtienen mltiples copias de un $ragmento de A0+ sin necesidad de construir una genoteca. -s aplicable para ampli$icar una secuencia de A0+ siempre que se conozca una parte de la secuencia de los e3tremos F7 y /7 y de la secuencia que se quiera ampli$icar. -l procedimiento es el siguiente% 1) Se diseVan dos oligonucletidos sint"ticos, cada uno complementario a las secuencias de las hebras opuestas de A0+ (un oligonucletido F7/7 complementario de la cadena superior y otro /7F7 complementario de la in$erior, situados a los e3tremos del $ragmento a clonar). -stos oligonucletidos actuar(n como cebadores de la replicacin. >) A continuacin se somete el A0+ a ciclos est(ndar de calentamiento y en$riamiento, empezando por un calentamiento a N ?* para desnaturalizar las dos cadenas. -n el momento en que "stas se encuentran desnaturalizadas, se introducen los oligonucletidos sint"ticos y r(pidamente se ba5a la temperatura para que se produzca la hibridacin de las dos cadenas de A0+ con sus dos $ragmentos correspondientes. 0ebido a la alta a$inida entre las dos hebras iniciales, se deber( introducir una alta cantidad de oligonucletidos para asegurar la hibridacin. 3) Bna 9ez se ha producido la hibridacin, se introduce una A0+ polimerasa termoestable (#A* polimerasa) y una gran cantidad de nucletidos al medio. .a #A* polimerasa cataliza la s!ntesis de $ragmentos F7/7 complementarios a las cadenas iniciales, utilizando como cebadores los oligonucletidos sint"ticos. ) A medida que se construyen m(s cadenas, se 9a repitiendo el proceso. Se lle9an a cabo los primos tres ciclos de temperatura hasta >F o /6 9eces, con lo que se aumenta el nmero de $ragmentos de $orma e3ponencial. A la 9ez, 9an quedando restos de las cadenas iniciales de A0+ sin complementar, ya que se sintetiza slo el $ragmento deseado. -l $ragmento ampli$icado se introducir( en un 9ector. 1or esta razn, se sintetizan oligonucletidos que tienen una secuencia complementaria al inicio del $ragmento que se desea reproducir, y otra no complementaria, que contiene una secuencia de reconocimiento de una endonucleasa de restriccin. .a 1*= es una t"cnica muy e3tendida en la actualidad y tiene aplicacin en numerosos campos%

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0eteccin de la presencia del T:) y otros patgenos con un largo per!odo de latencia y que por tanto no se detectan al principio de la in$eccin. .os m"todos tradicionales necesitan una gran cantidad de A0+ y arro5an $alsos positi9os y negati9os. .a 1*= es mucho m(s precisa, aunque tambi"n puede producir equ!9ocos. 0eteccin de mutaciones y diagnstico de en$ermedades gen"ticas. 1or e5emplo, si se sospecha que e3iste una delecin, se toma una pequeVa muestra y se ampli$ica la regin de inter"s. -mpleando simult(neamente cebadores de oligonucletidos mltiples con el producto de la 1*= se obtienen productos de longitudes distintas (1*= mltiple). Se repite el procedimiento con una muestra normal. Se realiza electro$oresis en gel y tincin con bromuro de etidio, de manera que en la muestra normal se obtienen tres $ragmentos ordenados por tamaVo. Si en el paciente hay una delecin, "sta no se ampli$icar( y en la electro$oresis $altar( una regin (no habr( banda). 1uede ocurrir que una delecin no a$ecte al nmero de bandas, sino que pro9oque cambios en las secuencias de enzimas de restriccin. 1ara detectar estas ltimas hay que hacer un an(lisis de restriccin.

"outhern: una 9ez que se ha clonado un gen, se puede hacer una r"plica en papel de todos los $ragmentos de restriccin determinados por hibridacin, en $orma de un patrn, y comparar as! distintos patrones entre s!. Se pueden comparar muestras muy comple5as. -l procedimiento es% 1) Se digiere la muestra de A0+ mediante enzimas de restriccin para obtener distintos $ragmentos. >) .os $ragmentos se separan mediante electro$oresis en gel, por orden de tamaVo. /) Se trans$iere el A0+ a un $iltro de nitrocelulosa con nylon, poniendo el gel y el $iltro entre dos tacos de papel de $iltro e introduciendo todo el con5unto en una solucin alcalina en su parte ba5a. .a solucin entra por capilaridad y arrastra los $ragmentos de A0+, desnaturaliz(ndolos. -stos $ragmentos se $i5an a la membrana de nitrocelulosa en la misma posicin en la que estaban en el gel. Se obtiene as! una r"plica en papel de la estructura de los $ragmentos en el gel. ) Se pueden construir y $ormar sondas marcadas radiacti9amente. Se sumerge la membrana de nylon en una solucin con las sondas, que hibridan con el $ragmento deseado. A continuacin, los $ragmentos que han hibridado se detectan por autorradiogra$!a. -sta t"cnica se ha utilizado para comparar A0+ y comprobar si dos muestras son distintas. Siempre cambian las secuencias de un indi9iduo a otro (1 cambio por F66 bases). .os cambios pueden ser silenciosos (en intrones) o a$ectar a secuencias de restriccin, nicas para cada persona. 1ara realizar la comparacin, se $ragmenta el A0+ con enzimas de restriccin y se realiza una electro$oresis con los $ragmentos de distintas personas. *omo el nmero de bandas es muy grande, se utiliza slo una regin espec!$ica. Se realiza una r"plica a una membrana y se incuba "sta con una sonda, que se une a los $ragmentos correspondientes de esta regin. -l patrn de cada banda ser( distinto, y al realizar la autorradiogra$!a, se 9er(n aquellas bandas a las que se ha unido la sonda. Si son iguales en dos carriles, la muestra pertenece a la misma persona. -sta t"cnica se aplica tambi"n a A=+ (northern, mediante sondas) y prote!nas (Lestern, mediante di$erencia de potencial y anticuerpos). &n#lisis de la eDpresin de mltiples genes 'microchips(: para estudiar los genes que se e3presan en distintos te5idos, en distintas $ases de crecimiento, se recurre a la nanotecnolog!a (chips de A0+). Bn chip es una placa (>3> cm.) en la que se dispone una representacin de todos los genes de un organismo o de muchos de ellos. 1) Bna 9ez que se conoce la secuencia completa del genoma del organismo, se sintetizan $ragmentos de "l, cada uno de los cuales corresponde a un gen. Bna 9ez sintetizados los $ragmentos, se colocan en distintas posiciones del chip. #ambi"n se puede sintetizar directamente el A0+ sobre la super$icie slida. >) 1ara 9er qu" tipo de genes se e3presan en determinadas situaciones del crecimiento, se a!slan mensa5eros (representantes de los genes que se e3presan) en cada situacin. /) .uego, mediante una reaccin catalizada por la transcriptasa in9ersa, se sintetiza el A0+c correspondiente, el cual se trata con un marcador $luorescente. .os A0+c $luorescentes pueden mezclarse y usarse como sondas que hibridar(n cada una con las secuencias complementarias del microchip, siendo "stas los genes que se e3presan en cada caso.

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)recimiento de c-lulas en cultivoA EDpresin g-nica de levaduras: las le9aduras absorben luz a una determinada longitud de onda, que crece al agotar los nutrientes del medio. .as le9aduras e3presan distintos genes en $uncin del medio en que habitan. & *uando la glucosa es ele9ada, la le9adura crece y la 9a consumiendo, a medida que realiza $ermentacin alcohlica produciendo etanol. & *uando disminuye la concentracin de glucosa, el crecimiento se ralentiza ya que el metabolismo se adapta a la utilizacin de etano. 1ara obser9ar qu" genes se e3presan en los medios de glucosa y etanol, se a!slan los A=+m y se recurre a la hibridacin con chips de A0+% & *uando se est( terminando la glucosa, hay prote!nas ribosmicas que ya no son tan necesarias. Su s!ntesis es reprimida. 2ientras tanto, se e3presan algunas prote!nas mitocondriales. & 2(s tarde, agotada la glucosa, se inducen otras prote!nas. .a e3presin de los genes que regulan el metabolismo de la le9adura se puede comparar en distintos momentos. Si hay genes en el chip de los que no se conoce su $uncin, las t"cnicas de chip de A0+ pueden ser9ir de orientacin para la in9estigacin de la $uncin. "ecuenciacin del &%N: la secuenciacin del A0+ se puede lle9ar a cabo por dos medios, el qu!mico (m"todo de 2a3am y Silbert) y el enzim(tico (reacti9o de Sanger). -l m(s utilizado en la actualidad es el enzim(tico, adaptado a la secuenciacin autom(tica. -l m"todo cl(sico se desarroll durante los aVos E6. 1-todo de 1aDam 4 Cilbert: necesita t"cnicas muy sensibles para separar las part!culas por tamaVos (electro$oresis). Se basa en el empleo de reacciones qu!micas para $ragmentar el A0+. -l proceso es el siguiente% 1) 2arcamos los e3tremos de A0+ con un nucletido tri$os$ato que porte $s$oro radiacti9o (1_). -l procedimiento se realiza mediante una polinucletido quinasa que transporta el 1_ al e3tremo F7 de todas las cadenas de A0+. ,btenemos una doble cadena con los e3tremos F7 marcados. >) -sta doble cadena se corta cerca de uno de los e3tremos con una enzima de restriccin, de modo que slo un e3tremo queda marcado por el 1_. /) -l A0+ se desnaturaliza, por lo que la cadena marcada y la no marcada se separan. .a cadena marcada es la nica detectable. ) Se separa la cadena de A0+ marcada en cuatro tubos que contienen igual cantidad de A0+ entre s!. -n cada tubo se aVaden compuestos qu!micos di$erentes que $ragmentan el A0+ detr(s de algunas bases nitrogenadas distintas. a. -l primero, detr(s de S. b. -l segundo, detr(s de S o A. c. -l tercero, detr(s de S, * o #. d. -l cuarto, detr(s de S o *. 0ichos compuestos se encuentran en concentraciones tan e3tremas que consiguen que la probabilidad de que la mol"cula de A0+ se rompa en un solo punto sea mayor que de romperse en 9arios. As!, se obtienen $ragmentos de A0+ muy pequeVos, de di$erentes longitudes, algunos marcados en F7 y otros no. F) Se someten los $ragmentos a electro$oresis en gel, haciendo correr el contenido de cada al!cuota por un carril di$erente. Se realiza una autorradiogra$!a que permite 9er qu" $ragmentos est(n marcados. 0e la lectura de dicha electro$oresis se puede deducir la secuencia del A0+. Se lee de los $ragmentos m(s pequeVos (aba5o) a los m(s grandes (arriba) obser9(ndose las marcas en cada carril. 1-todo de "anger: en este caso se obtienen tambi"n $ragmentos de A0+ que se di$erencian en una base y que se corren en un gel. & -ste m"todo permite obtener directamente la secuencia F7 /7 de la cadena de A0+. Btiliza deso3irribonucletidos tri$os$ato y dideo3irribonucletidos tri$os$ato (dd+#1) que pueden realizar una reaccin de polimerizacin al unirse al grupo W,) del nucletido precedente. & -l A0+ a secuenciar se utiliza como hebra molde y se hibrida con un cebador corto, marcado con radiacti9idad o $luorescencia. .a A0+ polimerasa aVade a la cadena el nucletido

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correspondiente al complementario de la hebra molde. Sin embargo, necesita disponer de un W ,) /7 libre para establecer el enlace, en el que inter9ienen nucletidos tri$os$ato y en el que se desprende 11i. & .a polimerizacin se realiza en cuatro tubos de ensayo distintos, a los que se aVade la hebra molde, nucletidos tri$os$ato y uno de los dd+#1. .a A0+ polimerasa comienza a actuar, pero al unirse a la cadena un dd+#1, la reaccin se paraliza. *omo la proporcin de dd+#1 es ba5a y el nucletido utilizado por la polimerasa es aleatorio, en unos casos la reaccin se interrumpir( en un momento y en otros, en otro. Se obtiene as! una mezcla de cadenas de distinta longitud. & A continuacin se corren las cuatro al!cuotas en carriles paralelos de electro$oresis en gel, de modo que los $ragmentos se separan por tamaVo. -l lugar que ocupan en el gel determina el nmero de nucletidos, y el carril en el que se encuentran, el ltimo nucletido. -sta t"cnica permite la secuenciacin de cadenas de entre >66&F66 b de $orma autom(tica. .a secuencia es legible porque los deso3irribonucletidos est(n marcados con di$erentes colores en $uncin de su base nitrogenada. )ay que tener en cuenta que la electro$oresis se lle9a a cabo en un gel capilar, que aumenta su resolucin, y que la lectura del gel se realiza con un detector de rayos l(ser, con el que se obtiene un cromatograma espec!$ico. +o obstante, cuando se quieren secuenciar genomas completos, hay que hacer 9arias reacciones, siguiendo dos estrategias% & Se subclonan $ragmentos solapantes del A0+ inicial en un 9ector cada uno (pl(smidos). Se utiliza un oligonucletido iniciador que se una a las secuencias del 9ector. *on el mismo iniciador se leen cada una de las secuencias solapantes, y cuando se han obtenido todas, se unen entre s!. & ,tra estrategia es utilizar un primer que se une en F7 a cada $ragmento. *uando se conoce la secuencia, se diseVa un oligonucletido similar a ella. Al $inal se unen todos los $ragmentos. "ecuenciacin autom#tica del &%N: los oligonucletidos cortos usados como cebadores para la s!ntesis de A0+ pueden unirse a una mol"cula $luorescente que con$iere a todos los $ragmentos terminados en este nucletido un color determinado. .os cuatro dd+#1 se aVaden a un nico tubo. .os $ragmentos coloreados resultantes se separan por tamaVo mediante electro$oresis en un nico gel, contenido en un tubo capilar, que permite separaciones m(s rapidas. #odos los $ragmentos de una longitud determinada migran a tra9"s del gel en un solo pico. -l color asociado a cada uno de ellos se detecta por rayo l(ser. .a secuencia del A0+ se lee determinando la secuencia de los colores de los picos segn 9an pasando por el detector y la in$ormacin obtenida se en9!a directamente a un ordenador que determina la secuencia. /EP2I)&)IEN Estructura del &%N: segn el modelo de Hatson y *racI, el A0+ est( compuesto por dos cadenas polinucleot!dicas dispuestas de $orma antiparalela. .as cadenas de azcar $os$ato se orientan hacia el e3terior, mientras que las bases nitrogenadas miran hacia el interior, $ormando pares A@# y Si* mediante puentes de hidrgeno. .as bases se disponen paralelas entre s! y caso perpendiculares al e5e longitudinal de la h"lice, que es de3trgira y tiene un di(metro de unos >6 A, incluyendo cada 9uelta unos 16F pb. -ntre las $ormas del A0+ se encuentran% & ;orma '% es la habitual, descrita anteriormente. Se dedu5o a partir de la di$raccin de rayos Y. & ;orma A% se puede obser9ar en condiciones de deshidratacin. -s similar a la ' ya que su giro es de3trgiro y tiene los mismos pares de bases nitrogenadas, que sin embargo no se disponen perpendicularmente a la h"lice, sino $ormando un (ngulo de >6?. -s m(s ancha que la ' con una menor distancia entre sus bases y un mayor nmero de pb por 9uelta. & ;orma Z% es otra $orma estructural, m(s estrecha y alargada. -s la nica $orma le9gira. Sus cadenas adoptan un plegamiento en zig&zag. -n condiciones $isiolgicas, la mayor parte del A0+ est( en $orma '. +o obstante, el A0+ no es una estructura est(tica. *ualquier modelo distinto al ' sugiere un mecanismo de replicacin en el que cada hebra parental pueda ser9ir de molde para una h"lice hi5a completa. .a propia estructura del A0+ conlle9a problemas para la replicacin% & -l hecho de que sea una doble h"lice supone que debe ser desenrollada para la replicacin. -l proceso por el que se desenrolla es gradual.

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.as bases interaccionan entre s! y tienen tendencia a acercarse una 9ez separadas, por lo que necesitan prote!nas que las separen.

)aractersticas generales de la replicacin: la replicacin es% & Semiconser9ati9a% no se sintetiza una doble h"lice nue9a, sino que cada hebra sir9e de molde para la $ormacin de una cadena h!brida. & 'idireccional% la replicacin comienza desde unos puntos $i5os (or!genes de replicacin) altamente regulados. A partir de estos puntos, el A0+ comienza a replicarse en ambas direcciones. & Antiparalela% las dos hebras se sitan de manera antiparalela. .as A0+ polimerasas slo actan en sentido /7F7, por lo que en este sentido, la s!ntesis es continua. -n el sentido F7/7, la s!ntesis es semidiscontinua. )ay 9arias A0+ polimerasas que inter9ienen en el proceso, cada una de las cuales tiene una $uncin di$erente. -ste proceso debe lle9arse a cabo con e3traordinaria $idelidad para e9itar errores. 1or ello, e3isten mltiples mecanismos de control y reparacin de errores que reducen el nmero de $allos a 1D1616 nucletidos. )ar#cter semiconservativo: cada una de las cadenas de la doble h"lice inicial sir9e de molde para la $ormacin de una cadena h!brida. -sta teor!a, ya e3puesta de manera terica, $ue con$irmada por el e3perimento de 2eselson&Stahl% 1) Se culti9an bacterias -. coli durante muchas generaciones en un medio que slo contiene nitrgeno pesado (1F+) de modo que todo el nitrgeno en el A0+ era pesado, lo cual quedaba demostrado por una sola banda en centri$ugacin. >) Se trans$ieren estas bacterias a un medio que slo contiene nitrgeno ligero ( 1 +). -l A0+ aislado de una primera generacin de c"lulas $orm una nica banda en el gradiente de *s*l en una posicin que indicaba que los A0+ eran h!bridos entre las dos $ormas de nitrgeno. /) .a hiptesis de la replicacin semiconser9ati9a se con$irm en la siguiente etapa del e3perimento. Se permiti que las bacterias 9ol9ieran a doblar su nmero en el medio con nitrgeno ligero. -l A0+ de esta segunda generacin mostr dos bandas, una con una densidad igual a la del A0+ ligero y otra igual a la del A0+ h!brido. )ar#cter bidireccional: e3isten 9arios mecanismos de replicacin en el origen% & *recimiento unidireccional de cadenas simples desde dos or!genes de replicacin. & *recimiento unidireccional de las dos dobles cadenas desde un nico origen. & *recimiento bidireccional desde un nico origen. 0e $orma general, a partir de un punto surgen dos horquillas de replicacin, que 9an creciendo en 9arias direcciones. .os otros mecanismos son minoritarios. & =eplicacin de un pl(smido% el pl(smido es una mol"cula de A0+ bicatenario circular. -n "l, la replicacin a9anza en dos direcciones a partir de un nico origen de replicacin, de tal $orma que cuando las horquillas llegan al otro lado del pl(smido, hay dos mol"culas circulares hi5as que se separan. .a zona que se puede replicar desde un origen de replicacin se llama replicn. Su tamaVo se puede a9eriguar midiendo los o5os adyacentes. -n pl(smidos slo hay un replicn. & =eplicacin en eucariotas% el proceso es ligeramente distinto al e3istir mltiples or!genes de replicacin, debido al gran tamaVo del genoma y la necesidad de realizar el proceso en poco tiempo. .a replicacin se inicia en todos los or!genes de replicacin. 0esde cada punto a9anzan las horquillas en dos direcciones, y se 9an uniendo con las horquillas que 9an a9anzando desde or!genes contiguos. Al principio se cre!a que el a9ance era unidireccional, aunque luego se comprob que no, mediante un e3perimento% 1) Bna c"lula que est( replicando su A0+ de $orma acti9a se pone en un medio rico en timidina tritiada, de tal manera que la incorpora a su genoma. *omo la acti9idad espec!$ica es muy alta, la seVal de autorradiogra$!a ser( muy $uerte. >) 1asado un cierto tiempo de marca5e (pulso) se disminuye la concentracin de timidina tritiada, de modo que la c"lula la incorporar( a su A0+ en menor cantidad. .a autorradiogra$!a ser( por tanto menos n!tida.

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Si el crecimiento $iera unidireccional, la marca siempre estar!a en el mismo e3tremo de los or!genes de replicacin. o Si el crecimiento $uera bidireccional, la marca ser!a m(s $uerte en un punto nico y disminuir!a a ambos lados. *omo la imagen tomada $a9orec!a la segunda opcin, se comprob que la replicacin era bidireccional. Si se mide la distancia desde la burbu5a hasta los e3tremos se obser9a que es constante, por lo que la incorporacin de bases se realiza en los e3tremos. Si se linealiza el A0+ de un 9irus, la distancia desde el origen de la burbu5a hasta los e3tremos es siempre la misma, porque hay un origen de replicacin nico que no cambia de sitio. o )ar#cter semidiscontinuo en sentido =M NM: desde el ,ri&*, las burbu5as a9anzan a izquierda y derecha y las cadenas nue9as se 9an sintetizando a la 9ez% & Bna cadena se sintetiza de $orma continua, sin interrupciones. -s la cadena conductora, cuya s!ntesis en F7/7 transcurre en la misma direccin que el mo9imiento de la horquilla de replicacin. & ,tra cadena, llamada cadena rezagada, se sintetiza de $orma discontinua. 0ebido al mecanismo de accin de las polimerasas, la cadena rezagada se sintetiza en direccin opuesta a la de apertura de la horquilla. 1ara su s!ntesis se necesitan 9arios pasos% o Al necesitar la A0+ polimerasa un cebador, un enzima (A=+ polimerasa) sintetiza un corto $ragmento de A0+ que sir9e como inciiador. o .a A0+ polimerasa elonga la cadena, complementaria a la molde, hasta el siguiente cebador, que suele encontrarse a 166&>66 bases de distancia. -stos $ragmentos mi3tos de A0+&A=+ se denominan $ragmentos de ,IazaIi. o A continuacin, otra A0+ polimerasa 9a retirando el A=+ sustituy"ndolo por A0+, de $orma que se obtienen muchos $ragmentos de A0+ separados. o 1or ltimo, una A0+ ligasa une todos los $ragmentos de A0+ entre s!. /eacciones en im#ticas: & A0+ polimerasa% e3isten numerosas A0+ polimerasas, y todas ellas requieren un primer o cebador (A0+ o A=+) que proporcione un W,) /7. .a trans$erasa terminal constituye la nica e3cepcin. -s necesario siempre disponer de un molde tambi"n. .a reaccin $undamental es un ataque nucleo$!lico deI grupo /7 W,) del nucletido en el e3tremo /7 de la cadena en crecimiento, sobre el $s$oro (1) en F? del deso3irribonucletido F7 tri$os$ato entrante. 'dN1P(nG'dN.P( 'dN1P(nG*GPPi .a procesi9idad es el nmero de nucletidos aVadidos antes de disociarse. & A0+ ligasa% para que el A0+ no se encuentre $ragmentado, la ligasa une $ragmentos de A0+ con W,) /7 y $os$ato F7 libres entre s!. o -n primer lugar, se une el A#1 o +A0 al enzima para $ormar un intermedio A21D+A0& enzima liber(ndose 11i (A#1) o +2+ (+A0). o A continuacin, se une el A0+ con $os$ato F7, para $ormar un comple5o -nzima& A21D+A0&1 F7&A0+. o 1or ltimo, entra el $ragmento de A0+ W,) /7, de $orma que quedan unidos los dos $ragmentos y se libera el A21 o +A0. &%N NM,O$G&%N =M,P &%N NM O,P,O =M &%NG &1PLN&% Fidelidad: la copia del A0+ ha de ser estrictamente $iel al original. .os mecanismos de correcin ayudan a ello. Se basan en la geometr!a de los pares de bases de las mol"culas, que suele ser similar. .a geometr!a se altera si el apareamiento no es correcto. *ada 9ez que se introduce un nucletido, el enzima comprueba la geometr!a de la mol"cula para 9er si el nucletido introducido es el correcto. Algunos errores no pueden ser corregidos, pero para ello e3isten otros mecanismos que actan una 9ez terminada la s!ntesis. & Bna pare5a es la A@#. .a secuencia por la que empieza a $ormarse la horquilla de replicacin es rica en pares A@#, ya que son m(s $(ciles de separar. & ,tra pare5a es la Si*.

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.a acti9idad e3onucleasa se encarga de asegurar el correcto apareamiento de las bases. #odas las polimerasas tienen esta acti9idad, que se localiza en un dominio distinto al de polimerizacin. .a geometr!a de pares de bases incorrectos puede e3cluirlos del centro acti9o, como ocurre en la A0+ polimerasa :. Etapas 4 mecanismo de la replicacin: la replicacin es un proceso comple5o en el que inter9ienen m(s de >6 enzimas, agrupadas en una estructura denominada replisoma. Su $uncin est( condicionada por la bidireccionalidad del A0+ y por el hecho de que sea una doble h"lice. Son% & )elicasas% son los enzimas encargados de separara las dos cadenas. 0ebido a la alta a$inidad que e3iste entre las dos cadenas, la rotura necesita A#1. & #opoisomerasas% el hecho de separar las dos cadenas de A0+ de la doble h"lice pro9oca tensiones y torsiones que a su 9ez generan superenrollamientos. .as topoisomerasas se sitan por delante de las polimerasas y e9itan este superenrollamiento. & 1rote!nas de unin a A0+ (SS'S)% e9itan que se 9uel9an a unir las dos hebras de A0+ una 9ez separadas, estabiliz(ndolas. & 1olimerasas% son las encargadas de lle9ar a cabo el proceso de la s!ntesis de A0+ y de la reparacin de los posibles errores. )ay 9arios tipos, cada uno de los cuales tiene una $uncin distinta. #odos necesitan un cebador. & 1rimasas% enzimas que sintetizan un corto $ragmento de A=+ que sir9e como cebador para el comienzo de la s!ntesis de A0+. & .igasas% unen $ragmentos /7 ,) y F7 1 de A0+ para $ormar uno slo. .ipos de &%N polimerasas en EA coli: en -. coli e3isten cinco tipos de A0+ polimerasas. .a : y la ::: son las me5or conocidas y caracterizadas% & .a A0+ polimerasa : inter9iene en el proceso para eliminar el iniciador y sintetizar el $ragmento correspondiente, y para eliminar $ragmentos en los que haya un error y sintetizarlos de nue9o correctamente. -st( $ormada por una subunidad. & .a A0+ polimerasa :: lle9a a cabo el proceso de polimerizacin principal. -s un comple5o muy grande de m(s de diez tipos distintos de subunidades. & .as A0+ polimerasas ::, :T y T inter9ienen en procesos de reparacin. #odas lle9an a cabo la reaccin de polimerizacin en sentido F7 /7 y tienen acti9idad e3onucleasa correctora /7F7. .a A0+ polimerasa : posee tambi"n acti9idad e3onucleasa correctora en F7/7. & 1rocesi9idad% es el nmero de nucletidos aVadidos antes de que se disocie la polimerasa. .a A0+ polimerasa :: tiene hasta FG16F nucletidos, mientras que la : tiene una procesi9idad de /& >66. .a :: tiene una procesi9idad intermedia (16 ). & +mero de recambio% es el nmero de nucletidos aVadidos por minuto y por mol"cula de enzima. .a ::: tiene una capacidad de s!ntesis mayor, por lo se necesita un nmero m(s pequeVo. .a de la : es mucho menor, pero su abundancia en la c"lula compensa su e$ecti9idad. &%N polimerasa I: es una enzima $ormada por un nico polip"ptido. +o es el enzima principal de la replicacin. =ealiza una multitud de $unciones de limpieza, recombinacin y reparacin. -stas acti9idades est(n potenciadas por su acti9idad e3onucleasa F7/7, la cual se di$erencia de la acti9idad /7F7 de la correccin de pruebas. Se encuentra localizada en un dominio $(cilmente separable mediante proteolisis sua9e. Al eliminarse este $ragmento queda un $ragmento restante ($ragmento grande o de 4enIoL), que retiene la s acti9idades de polimerizacin y e3onucleasa /7F7. & .a acti9idad e3onucleasa F7/7 es capaz de reemplazar un segmento de A0+ o A=+ apareado a la hebra molde en un proceso denominado traslado de la mella. -n este proceso, la hebra apareada es simult(neamente degradada por la acti9idad e3onucleasa y reemplazada por la acti9idad polimerasa de la A0+ polimerasa :. -stas acti9idades son importantes en la reparacin y en la eliminacin de cebadores de A=+ durante la replicacin. & .a s!ntesis de A0+ comienza en una mella (un enlace $os$odi"ster roto) con un ,) /7 y un 1 F7 libres. .a polimerasa e3tiende la hebra que no hace de molde y desplaza la mella a lo largo del A0+ (traslado de la mella). -n el sitio donde se disocia la A0+ polimerasa : queda la mella hasta que otro enzima la sella.

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&%N polimerasa III: posee diez tipos de subunidades distintas y m(s de una unidad de cada una. -s mucho m(s comple5a que la A0+ polimerasa :. -s uno de los principales enzimas de la replicacin y tiene m(s de E66 40a. & Sus acti9idades de polimerizacin y correccin (e3onucleasa /7F7) residen en las subunidades y respecti9amente. & .a polimerasa ncleo est( $ormada por la unin de las subunidades , y . -ste ncleo es capaz de polimerizar el A0+, pero tiene procesi9idad limitada. 0os polimerasas ncleo pueden $ormar un comple5o con ayuda de un d!mero de subunidades . -l comple5o dim"rico puede a continuacin asociarse con un nico comple5o de seis subunidades de cinco tipos di$erentes (>7). -ste subcon5unto de catorce subunidades de nue9e tipos di$erentes constituye la A0+ polimerasa :::. 1uede polimerizar A0+, pero con una procesi9idad mucho menor que la necesaria para replicar el cromosoma completo. -l aumento de procesi9idad es resultado de la unin de las subunidades , que se asocian por pares para $ormar una estructura que rodea al A0+, actuando como una abrazadera. *ada d!mero se asocia a un ncleo y se desliza a lo largo del A0+ a medida que a9anza la replicacin, impidiendo la disociacin de la A0+ polimerasa ::: y aumentando la procesi9idad m(s de F66.666 9eces. Origen de replicacin: el origen de replicacin en -. coli se llama ,ri&*. Se encuentra en un lugar $i5o del A0+, muy regulado, de modo que el A0+ solo se replica una 9ez en cada ciclo. -s una zona de >66&>F6 pb con secuencias conser9adas y repetiti9as% & Bna secuencia consenso (1/ pb). & =epeticin consenso, altamente conser9ada (N pb). & 11 secuencias de mutilacin SA#*, donde acta el enzima 0A+ metilasa, que aVade un grupo metilo al +M de la adenina. Slo cuando las dos cadenas de A0+ est(n metiladas en estas secuencias, se pueden unir las prote!nas al ,ri&* e iniciarse as! la replicacin. Bna 9ez concluida, se obtiene la cadena parental metilada y la de nue9a s!ntesis sin metilar, y no se puede iniciar una nue9a ronda de replicacin. -l ,ri&* dirige la replicacin, ya que la A0+ polimerasa slo se une cuando las secuencias est(n metiladas. 1ara iniciar la replicacin en -. coli se necesitan las siguientes prote!nas% & 1rote!na A0+&A% reconoce la secuencia origen, abre el dple3 en unos sitios espec!$icos. & 1rote!na A0+&'% helicasa, desenrolla el A0+. & 1rote!na A0+&*% requerida para la unin de A0+&' en el origen. & 1rote!na )B% tipo histona, cur9a el A0+, estimulando la iniciacin. & 1rimasa (A0+&S)% sintetiza cebadores de A=+. & 1rote!na de unin a A0+ de cadena sencilla (SS')% se une al A0+ de cadena sencilla. & A=+ polimerasa% $acilita la acti9idad de la A0+&A. & A0+ girasa (topoisomerasa ::)% libera la tensin torsional generada por el desenrollamiento. & 0A2 metilasa% metila secuencias F7 (SA#*) en el ,ri&*. Seneralmente, los or!genes de replicacin se caracterizan por ser secuencias nicas con elementos mltiples repetidos (zonas A@#) que son reconocidos por prote!nas multim"ricas. .as prote!nas de unin al origen controlan la iniciacin de la replicacin. Iniciacin: participan al menos ocho enzimas o prote!nas di$erentes. Se encargan de abrir la h"lice del A0+ en el origen y establecen un comple5o pre&cebador para las reacciones posteriores. & -l componente cla9e en el proceso es la A0+&A, un comple5o $ormado por unas >6 mol"culas de prote!na, que se une a las cuatro repeticiones de N pb en el origen. & A continuacin reconoce y desnaturaliza sucesi9amente el A0+ en la regin de las repeticiones de 1/ pb, ricas en A@#. -ste proceso requiere A#1 y la prote!na )B (tipo histona). & A continuacin, la A0+&' se une a esta regin, en una reaccin que requiere a la prote!na A0+&*. 0os he3(meros de A0+&', uno en cada hebra del A0+, actan de helicasa, desenrollando el A0+ de manera bidireccional y creando dos horquillas de replicacin potenciales. Si a la reaccin in Titro se aVade la prote!na de unin al A0+ SS' y la A0+ girasa, miles de pb son r(pidamente desenrollados por las helicasas a partir del origen. 2uchas mol"culas de SS' se unen de manera cooperati9a al A0+ de cadena sencilla manteniendo las

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cadenas separadas e impidiendo la renaturalizacin, mientras la girasa ali9ia la tensin topolgica creada por la helicasa. Elongacin: la $ase de elongacin consiste en dos operaciones distintas pero relacionadas% la s!ntesis de la cadena conductora y la s!ntesis de la cadena rezagada. -n ambas s!ntesis son importantes 9arios enzimas% & .a s!ntesis de la cadena conductora es la m(s sencilla. *omienza con la s!ntesis de un cebador corto (16&M6 nucletidos) de A=+ por la primasa, en el origen de replicacin. A continuacin la A0+ polimerasa ::: adiciona d+#1 a este cebador. Bna 9ez iniciada, la s!ntesis de la hebra conductora es continua, al mismo ritmo que el desenrollamiento del A0+ en la horquilla de replicacin. & .a s!ntesis de la cadena rezagada se realiza a trozos. 1rimero, la primasa sintetiza un cebador de A=+ y la A0+ polimerasa ::: se une a "l, aVadiendo d+#1. A este ni9el, la s!ntesis de los $ragmentos de ,IazaIi parece sencilla. +o obstante, es muy comple5a. .a di$icultad se deri9a de la coordinacin entre la s!ntesis de ambas cadenas, que son producidas por un nico d!mero asim"trico de A0+ polimerasa :::. 1or ello, la hebra rezagada $orma un bucle. .a coordinacin en la s!ntesis de ambas cadenas es necesaria ya que la s!ntesis de los $ragmentos de ,IazaIi en la hebra rezagada pone en peligro comple5as acti9idades enzim(ticas. .a A0+&' (helicasa) y la primasa constituyen una unidad $uncional dentro del comple5o de replicacin, denominado primosoma. .a A0+ polimerasa ::: usa un 5uego de subunidades ncleo para la s!ntesis continua de la hebra conductora, mientras que el otro 5uego de subunidades ncleo circula entre un $ragmento de ,IazaIi y el siguiente sobre el bucle $ormado por la hebra rezagada. & .a s!ntesis continua de la hebra conductora progresa a medida que el A0+ es desenrollado por la helicasa. & .a A0+ polimerasa se une a A0+&' (helicasa), sintetiza un nue9o cebador y a continuacin se disocia. & -l comple5o de carga de la abrazadera de la A0+ polimerasa ::: cataliza la carga de una nue9a abrazadera deslizante en el nue9o cebador de A=+. 2ientras se completa el $ragmento de ,IazaIi que estaba siendo sintetizado. .as dos subunidades ncleo de la A0+ polimerasa ::: que han sintetizado la hebra rezagada liberan el $ragmento de ,IazaIi y la abrazadera usada en su s!ntesis. .as mismas subunidades se unen luego a una nue9a abrazadera deslizante y comienza la s!ntesis de otro $ragmento de ,IazaIi. -l proceso permite la s!ntesis de unos 1666 nucletidos por segundo en cada hebra. Bna 9ez $inalizada la s!ntesis de un $ragmento de ,IazaIi, su cebador de A=+ es eliminado por la acti9idad e3onucleasa F7O/7 de la A0+ polimerasa :, siendo reemplazados por A0+ por el mismo enzima. .a mella restante es sellada por A0+ ligasa. -sta enzima acta $ormando un enlace $os$odi"ster a e3pensas de otro. Se acti9a el $os$ato F7 de la mella. & 1rimeramente, un grupo A21 es trans$erido a un residuo .ys del enzima. & A continuacin, el A21 se trans$iere al 1 F7 de la mella. & -l grupo W,) /7 lle9a a cabo un ataque nucleo$!lico sobre el $os$ato, desplazando A21 y $ormando un enlace $os$odi"ster para sellar la mella. -n la reaccin de la A0+ lgiasa de -. coli, el A21 pro9iene del +A0 <. .as A0+ ligasas aisladas de otras $uentes, 9!ricas y eucariticas, utilizan A#1 en lugar de +A0 < y liberan 11i en lugar de +2+. -n la horquilla de replicacin inter9ienen las siguientes enzimas% & SS'% se une a A0+ de cadena sencilla. & A0+&' (helicasa)% desenrolla el A0+ y constituye el primosoma. & A0+&S (primasa)% sintetiza A=+ cebador y constituye el primosoma. & A0+ polimerasa :::% elonga la cadena nue9a. & A0+ polimerasa :% rellena los huecos y elimina los cebadores. & A0+ ligasa% se encarga de la ligacin de $ragmentos. & A0+ girasa (topoisomerasa ::)% se ocupa del superenrollamiento. .erminacin: el proceso de terminacin ocurre cuando las horquillas de terminacin, que a9anzan en sentidos opuestos, se encuentran en el e3tremo opuesto al ,ri&*. -sta regin terminal contiene una secuencia de >6 pb repetida mltiples 9eces, en un comple5o denominado #-=. .as secuencias #-=

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sir9en de unin a una prote!na (#BS), con acti9idad anti&helicasa, por tanto impide que se abra la cadena. *uando se orienta de manera adecuada, detiene la replicacin. -l comple5o #BS&#-= detiene la replicacin desde una sola direccin y slo acta uno por cada replicacin. 0ado que las horquillas de replicacin a9anzan en sentido opuesto y se detienen al encontrarse, las secuencias #-= no parecen esenciales. -s posible que sir9an para e9itar la sobrerreplicacin por una de las horquillas en caso de que la otra se haya retrasado o detenido. & *uando una u otra horquilla de replicacin topa con un comple5o #BS&#-=, se detiene. .a otra horquilla no se detiene hasta topar con la primera. .os pocos centenares de bases $inales entre estos dos grandes comple5os proteicos son replicados a continuacin. -l resultado son dos cromosomas circulares ligados en el espacio (A0+s concatenados). & .a separacin de los A0+s concatenados en -. coli requiere topoisomerasa :T que corta transitoriamente las dos hebras de uno de los cromosomas, permitiendo que el otro pase a tra9"s de la rotura. .a $ase terminal de la replicacin de otros cromosomas circulares es similar. "imilitudes 4 diferencias entre procariotas 4 eucariotas: en ambos casos, la iniciacin se encuentra altamente regulada en sitios espec!$icos y el mecanismo general est( conser9ado, al igual que la acti9idad enzim(tica, aunque los enzimas di$ieren en tamaVo o nmero de comple5os. .as di$erencias son% *iclo celular Telocidad ,r!genes de replicacin *opias de A0+ polimerasa 1rocariotas ,cupa todo el ciclo =(pida Bno (,ri&*) 1ocas -ucariotas ,cupa la $ase S .enta (por el desensambla5e de la cromatina) 2uchos. Se acti9an de manera ordenada y regulada. 2uchas

Origen de replicacin autnoma '&/"(: consta de 9arios elementos% & -lemento A% es esencial. 1osee secuencias ricas en pares A@#. & -lementos no esenciales pero que $a9orecen el inicio de la replicacin. & *omple5o ,=* de reconocimiento del origen. Se une al elemento A, lo que pro9oca que se unan otras prote!nas, modulando el comienzo de la replicacin. -n este caso no inter9iene la mutilacin. &%N polimerasas eucariticas: e3isten tambi"n cinco tipos de polimerasas eucariticas ( , , , y ), con distinta localizacin celular y distintas $unciones. *aracter!stica 1olimerizacin F7/7 -3onucleasa (correccin de pruebas) /7F7 S!ntesis desde A=+ primer S!ntesis desde A0+ primer A0+ primasa asociada Sensibles a a$idicolina (inhibidor de la s!ntesis de A0+) .ocalizacin celular% S! S! +o +o S! +o S! S! S! +o S! +o +cleo +cleo S! S! +o S! +o +o 2it. S! S! S! S! +o S! +cleo S! S! & S! +o S! +cleo

Aquellas que no tienen acti9idad correctora inter9ienen nicamente en la s!ntesis de cebadores h!bridos A0+&A=+. /eplicacin de virus "@O; en c-lulas eucariotas: el 9irus ST 6 ataca c"lulas eucariotas de mono. :n Titro se puede replicar el A0+ de este 9irus utilizando prote!nas puri$icadas de c"lulas a las que in$ecta y c"lulas de mono. 1) -l proceso comienza con una prote!na de unin al A0+, el ant!geno # (#AS), codi$icada por el A0+ 9!rico, que tiene acti9idad helicasa y separa las dos cadenas de A0+.

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>) 0espu"s se aVade =1A, una prote!na eucaritica de unin a A0+ de cadena sencilla (equi9ale a la prote!na SS'). 3) 0espu"s se aVade la A0+ polimerasa , que tiene acti9idad primasa y sintetiza un $actor iniciador. 4) 2(s tarde se hace necesaria la adicin de =;* o $actor de replicacin # (parecido a la A0+ polimerasa ) que es necesaria para la unin del 1*+A (an(logo de la subunidad de la A0+ polimerasa ::: de -. coli). ;orma una abrazadera circular que potencia la procesi9idad de la polimerasa. 5) Bna 9ez la abrazadera est( bien situada, se aVade A0+ polimerasa , que contina la s!ntesis de la hebra conductora en sentido F7/7. Se lle9a a cabo la s!ntesis de la cadena rezagada, uni"ndose 1rimasa&1olimerasa &=;* para su inicio. Problemas adicionales de c-lulas eucariotas: *( .os telmeros, las estructuras especializadas de los e3tremos de los cromosomas eucariticos consisten generalmente en una secuencia altamente repetida, generalmente #3Sy (hebra a)&*yA3 (hebra b), donde 3 e y aparecen en un inter9alo de 1& . .os telmeros tienen una longitud 9ariable (>6 pb&1F6 Ib), siendo la hebra #S m(s larga que la complementaria, de manera que queda una regin de A0+ de cadena sencilla en el e3tremo /7. -l A0+ telom"rico y sus prote!nas asociadas cumplen dos ob5eti9os% & -9itar la degradacin del A0+ por parte de e3onucleasas. & ;acilitar la s!ntesis de A0+ hasta el $inal del cromosoma. .os e3tremos de un cromosoma lineal no pueden ser replicados por las A0+ polimerasas celulares. .a replicacin del A0+ requiere un molde y un cebador, pero m(s all( del e3tremo no hay molde disponible para el apareamiento del cebador. Sin un mecanismo especial para replicar los e3tremos, los cromosomas se acortar!an en cada generacin. -l problema se soluciona gracias al enzima telomerasa, que incorpora los telmeros a los e3tremos de los cromosomas. .elomerasa: es una ribozima con un A=+ de unos 1F6 nucletidos conteniendo copias de la secuencia *yA3 adecuada. -sta es la parte que acta de molde para la s!ntesis de la hebra #3Sy del telmero. 0e este modo, la telomerasa acta como una transcriptasa in9ersa proporcionando el sitio acti9o para la s!ntesis de A0+ dependiente de A=+. .a s!ntesis del telmero se realiza en sentido /7F7, por lo que, una 9ez sintetizada una copia de la repeticin, el enzima ha de posicionarse nue9amente para reemprender la telos!ntesis. & .a hebra complementaria (*yA3) es probablemente sintetizada por las A0+ polimerasas celulares a partir de un cebador de A=+. & .a regin de cadena sencilla est( protegida por prote!nas de unin espec!$icas en muchos eucariotas in$eriores, especialmente en aquellos con telmeros cortos. -n los eucariotas superiores, con telmeros largos (miles de pb) el e3tremo /7 est( secuestrado en el lazo # (#&loop), una $ormacin terminal en la que el e3tremo de la cadena sencilla se pliega y aparea con su secuencia complementaria en la regin de la doble cadena del telmero. .a $ormacin del lazo # implica la in9asin del A0+ dple3 por el e3tremo /7 de la cadena sencilla del telmero. & -n los mam!$eros, el A0+ del lazo # est( unido a dos prote!nas (#=;&1 y #=;&>) "sta ltima implicada en la $ormacin del lazo #. .os lazos # protegen los e3tremos /7 de los cromosomas haci"ndolos inaccesibles a las nucleasas y a los enzimas que reparan roturas. -n el hombre se ha obser9ado una relacin entre la longitud del telmero y el en9e5ecimiento celular. -n c"lulas germinales con acti9idad telomerasa se mantiene la longitud de los telmeros, pero no as! en c"lulas som(ticas, que carecen de telomerasa. -3iste asimismo una relacin in9ersa entre la longitud de los telmeros en $ibroblastos y la edad del indi9iduo del que proceden. <( ,tro problema es el del superenrollamiento de las cadenas parentales y reci"n sintetizadas. Xste puede ser solucionado, si se dispone de un e3tremo abierto y otro $i5o, permitiendo el giro de una cadena sobre otra. -n caso de que no e3ista posibilidad de rotacin en los e3tremos, se originan 9ueltas y cortes en los superenrollamientos, de $orma que el mo9imiento de una hebra sobre otra permita desenrollar las cadenas

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"uperenrollamientoLrelaJamiento: el A0+ en $orma ' es una estructura estable. )ay una 9uelta cada 167F pb o /M A. -l A0+ se encuentra rela5ado, sin tensiones ni torsiones. & Si hay superenrollamiento negati9o, en una 9uelta hay m(s de 167F pb. & Si hay superenrollamiento positi9o, en una 9uelta hay menos de 167F pb. Bn segmento de E pb contiene ocho 9ueltas de doble h"lice (1 cada 167F pb). Si se eliminase una 9uelta, habr( 1> pb por 9uelta. A consecuencia de este superenrollamiento negati9o, la mol"cula su$rir( una tensin termodin(mica y estructural. -sta tensin es acomodada, en general, por el superenrollamiento, el cual $acilita la separacin de las dos hebras. -n principio, cada 9uelta eliminada deber!a $acilitar la separacin en unos 16 pb. Sin embargo, los puentes de hidrgeno de los pares impiden la separacin de las hebras en distancias tan cortas y el e$ecto slo resulta importante en A0+s largos y con ni9eles superiores de desenrollamiento. .os enzimas que aumentan o disminuyen el grado de desenrollamiento del A0+ se denominan topoisomerasas, y su e$ecto es la modi$icacin del nmero de enlace. 1ueden lle9ar a cabo dos operaciones% & =establecer el nmero de 9ueltas. & Actuar sobre el superenrollamiento de la doble h"lice directamente, cortando una o las dos cadenas. .as topoisomerasas tipo : actan produciendo un corte transitorio en una de las hebras de A0+, haciendo girar uno de los e3tremos alrededor de la hebra intacta y 9ol9iendo a unir los e3tremos. .as topoisomerasas :: cortan ambas hebras. 1ecanismo de accin de las topoisomerasas: & #opoisomerasas :% eliminan un superenrollamiento negati9o. -l enzima se une a la cadena de A0+ y la corta en un punto en que se $orma un enlace $os$otirosina (1&tyr) enzima&A0+. -sta tyr se encuentra en el centro acti9o del enzima. A continuacin, el e3tremo /7 del A0+ pasa por encima de la otra hebra, no cortada, rela5ando el A0+. .a cadena cortada se liga de nue9o en la posicin rela5ada y se disocia en enzima de la doble cadena, que ahora tiene un superenrollamiento negati9o menos. -ste tipo de enzimas aportan estabilidad sin gasto de A#1. & #opoisomerasas :: (girasas)% actan sobre la doble h"lice antes de la replicacin. =equieren A#1. -l enzima es un d!mero. -n cada subunidad hay un dominio de unin a A#1. -n primer lugar se une un A#1 a una de las subunidades que corta la doble h"lice y establece dos enlaces co9alentes 1&tyr. -stos cambios y la unin de la segunda mol"cula de A#1 pro9ocan el mantenimiento de dos enlaces 1&tyr y el paso de una hebra sobre otra. .a rotura se sella y el enzima libera el A0+ rela5ado. *uando la replicacin est( casi terminada y slo queda un $ragmento del cromosoma circular por replicar, se produce la desnaturalizacin del A0+ no replicado. Al separar la doble cadena, se producen superenrollamientos que son eliminados por topoisomerasas ::, con lo cual se separan los cromosomas concatenados y se completa la s!ntesis de cromosomas circulares. 10.&)IONE" EN E2 &%N K 1E)&NI"1O" %E /EP&/&)IEN: el A0+ celular tiene que ser muy estable y conser9ar intactas sus secuencias de bases. -s la nica mol"cula que se repara. -sta reparacin supone un gran gasto de energ!a. .os cambios en el A0+ pueden estar originados por mutaciones por accin de radiaciones, cambios qu!micos espont(neos, intercalacin de compuestos, errores en la replicacin o errores en la recombinacin. 1utaciones: las mutaciones son cambios estables en la secuencia de bases del A0+. )ay tres tipos $undamentales% & Silenciosas% a$ectan a A0+ no esencial o tienen un e$ecto despreciable en la $uncin de un gen. Son caracter!sticos de regiones intrnicas que no codi$ican, o de la tercera base de un codn, gracias al cdigo gen"tico degenerado. & 'ene$iciosas% a$ectan al A0+ que codi$ica para prote!nas, y por ello se e3presan en el $enotipo. +o obstante, el cambio es $a9orable a la $uncionalidad de la prote!na. & 0elet"reas% alteran el $enotipo al a$ectar a regiones codi$icantes, pero per5udican la $uncionalidad de las prote!nas. 1ueden ser% o 1or sustitucin de bases%

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#ransiciones (purina por purina, pirimidina por pirimidina). (A&S, #&*). #rans9ersiones (purina por pirimidina o 9ice9ersa). (A&#, *&S). 1or desplazamiento del marco de lectura% :nserciones 0eleciones

)ambios provocados por mut#genos: & 0esaminaciones% pro9ocadas por el (cido nitroso y sus deri9ados. 1ro9ocan transicin entre bases normales a $ormas raras (citosinauracilo, adeninahipo3antina, guanina3antina). & )idro3ilaciones% causadas por la hidro3ilamina. & 2utilaciones% adicin de grupos metilo por deri9ados del dimetil sul$ato. .a guanina pasa a A&metilguanina. -l cambio de bases origina la $ormacin de puentes de hidrgeno anmalos. .a hipo3antina aparea con la citosina y la A&metilguanina con la timina. -n algunas ocasiones, se producen modi$icaciones espont(neas de las bases sin presencia de agentes mut(genos. -stos cambios originan apareamientos errneos. )ay multitud de puntos y enlaces susceptibles a estos cambios (desaminacin de la citosina en uracilo, despurinacin) & .as radiaciones BT y Y pro9ocan ionizaciones en las bases. .as bases ionizadas tienden a apareamientos anmalos (timina, adenina y citosina ionizadas aparean con la guanina). & *uando se somete el A0+ a radiacin BT, ocurre la dimerizacin de pirimidinas. -ste proceso consiste en la $ormacin de un enlace co9alente entre dos bases pirimid!nicas del A0+, modi$icando su estructura y di$icultando los procesos que sobre ellas ocurren. .os d!meros que se $orman con m(s $acilidad son los de timina. & .a introduccin de bromuro de etidio y otros compuestos que se intercalan entre los pares de bases $a9orecen la aparicin de mutaciones, ya que modi$ican la distancia normal entre bases, alarg(ndola, y pro9ocando que ese espacio sea reconocido como el de dos bases, pro9ocando una adicin. )ambios introducidos en la replicacin: la replicacin es un momento de riesgo para el A0+, que es susceptible de su$rir cambios. +o obstante, la A0+ polimerasa contiene un dominio con acti9idad e3onucleasa y que se encarga de la correccin de errores. .a cadena, una 9ez sintetizada, debe atra9esar este dominio corrector. +o obstante, la capacidad de este dominio es limitada, por lo que hay errores que no se identi$ican. .est de mutagenicidad de &mes: un ensayo desarrollado por 'ruce Ames mide el potencial de un determinado compuesto qu!mico para producir mutaciones en Salmonella typhimurium. 1ara lle9arlo a cabo, se siembran bacterias de una cepa de salmonella con una mutacin que inacti9a un enzima de la ruta biosint"tica de la histidina en un medio de culti9o sin histidina. 1ocas c"lulas pueden crecer en este medio. & .as pequeVas y escasas colonias que crecen en un medio sin histidina poseen retromutaciones espont(neas que permiten operar a la ruta biosint"tica. & #res placas de culti9o id"nticas son inoculadas con un nmero igual de c"lulas. Se aVade a cada placa un disco de papel de $iltro con concentraciones decrecientes de un mut(geno, que deber!a aumentar la tasa de retromutacin y el nmero de colonias. .as (reas claras alrededor del papel de $iltro muestran que la concentracin de mut"geno es tan ele9ada que es letal. & A medida que el mut(geno di$unde desde el papel de $iltro, se diluye hasta concentraciones subletales que inducen la retromutacin. .os mut(genos pueden compararse por su e$ecto sobre la tasa de mutacin. -n ocasiones se prueba la mutagenicidad despu"s de incubar los compuestos con un e3tracto de h!gado. Algunos compuestos slo son mutag"nicos tras este tratamiento. /eparacin del &%N: el ob5eti9o de la reparacin del A0+ es eliminar las mutaciones. Sracias a esta reparacin, menos de una lesin de cada 1666 se trans$orma en mutacin. )ay 9arios tipos% & Apareamiento errneo% aunque las bases presentes son correctas y normales, est(n mal apareadas. & -scisin de bases% hay una base alterada que se debe retirar.

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-scisin nucleot!dica% se lle9a a cabo cuando el daVo es estructuralmente mayor en las bases. =eparacin directa% supone un mecanismo menos $recuente. .as lesiones se reparan sin eliminar la base o nucletido. & =eparacin post&replicati9a% hay una mutacin estable. .a reparacin puede hacerse% o 1or recombinacin. o 1or S,S. -stos mecanismos son iguales en procariotas y eucariotas. *( &pareamiento errneo: la reparacin de apareamientos incorrectos me5ora la $idelidad entre 166 y 1666 9eces. Suelen corregirse de acuerdo a la in$ormacin de la cadena molde, que suele distinguirse porque se encuentra metilada por accin de la 0A2 metilasa (metilacin en +M de adeninas de secuencias F7 SA#*). 0espu"s de la replicacin hay un bre9e per!odo en que la hebra molde est( metilada y la hebra replicada no. Si la hebra replicada se encuentra metilada, no se produce reparacin. Si ninguna de las dos est( metilada, se produce reparacin, pero no $a9orece a ninguna de las dos. -ste mecanismo repara los $allos a una distancia de hasta 1666 pb de una secuencia SA#*. & -n el proceso inter9ienen dos prote!nas% 2ut&S y 2ut&., que $orman un comple5o de unin a todos los pares de bases mal apareados, e3cepto *&*. .a prote!na 2ut&) se une a 2ut&. y a las secuencias SA#* que haya encontrado el d!mero antes $ormado. 2ut&) es una endonucleasa con especi$icidad de secuencia que se mantiene inacti9a hasta que el comple5o encuentra una secuencia SA#* semimetilada. -n estos lugares, 2ut&) cataliza el corte de la cadena no metilada por el lado F7 de la S, marcando la hebra que se ha de reparar. & -l paso del A0+ a tra9"s del comple5o 2ut&S&2ut&. $orma un bucle de A0+. o *uando el desapareamiento se encuentra en el lado F7 del sitio de corte, la hebra sin metilar es desenrollada y degradada en sentido /7 F7 a partir del sitio de corte hasta m(s all( del desapareamiento, siendo despu"s reemplazada por A0+ nue9o. -ste proceso requiere a la A0+ helicasa ::, SS', e3onucleasa B o Y, A0+ polimerasa ::: y A0+ ligasa. o .a ruta para la reparacin de apareamientos incorrectos en el lado /7 del sitio de corte es similar, e3cepto que la e3onucleasa : es reemplazada por la e3onucleasa T::, que degrada A0+ monocatenario en ambos sentidos, o por la e3onucleasa =ec&Z (degrada en sentido F7/7). .a reparacin de apareamientos incorrectos es un proceso muy costoso en energ!a, ya que se consumen >A#1 para la unin del comple5o 2ut&S&2ut&.&2ut&) y otro para las acti9idades helicasa o e3onucleasa. -l mecanismo de accin, dada la le5an!a que puede haber del apareamiento incorrecto a una secuencia SA#* semimetilada, pro9oca que haya que hacer una enorme in9ersin de d+#1 acti9ados para reparar un nico apareamiento incorrecto. <( Escisin de bases: todas las c"lulas contienen unos enzimas, las A0+ glucosilasas, que reconocen lesiones $recuentes del A0+ (desaminaciones) y eliminan la base a$ectada, reponiendo en enlace +&glucos!dico (sitios A1). *ada A0+ glucosilasa suele ser espec!$ica. .os sitios A1 pueden aparecer tambi"n a consecuencia de la hidrlisis espont(nea de los enlaces +&glucos!dicos (aunque "sta se produce muy lentamente). & Bna 9ez que se $orma un sitio A1, un grupo de enzimas ha de repararlo. .a reparacin no se realiza insertando una nue9a base, sino que necesita de endonucleasas A1 que corten la cadena en el sitio A1. .a posicin de la incisin en relacin con el sitio 9ar!a segn el tipo de endonucleasa A1. & A continuacin, se elimina un segmento de A0+ que contiene el sitio A1 y el hueco es rellenado por d+#1 gracias a la accin de la A0+ polimerasa :. .a mella es sellada por A0+ ligasa. N( Escisin de nucletidos: las lesiones que producen grandes distorsiones en la estructura helicoidal se reparan mediante este sistema, que constituye una 9!a de reparacin esencial. & -n ella, un enzima multim"rico hidroliza dos enlaces $os$odi"ster, uno a cada lado de la lesin. o -n -. coli y otros procariotas, el enzima hidroliza el quinto enlace $os$odi"ster en /7 y el octa9o en F7, generando as! un $ragmento de 1>&1/ nucletidos, en $uncin de si la lesin a$ecta a 1 o > bases.

& &

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&

-n humanos y otros eucariotas, el enzima hidroliza el se3to enlace $os$odi"ster en /7 y el 9ig"simo segundo en F7, originando un $ragmento de >A&>N nucletidos. -l oligonucletido es liberado del dple3 y el hueco resultante es rellenado por la A0+ polimerasa : (en -. coli) o A0+ polimerasa (en humanos). .a mella es reparada por A0+ ligasa. o

&B) escinucleasa en EA coli: es el comple5o enzim(tico cla9e de -. coli. Se encuentra $ormado por tres subunidades (B9r A, B9r ' y B9r *). & Bn comple5o de B9r A&B9r ' (A>') e$ecta un barrido del A0+ y se une al lugar de la lesin, con consumo de A#1. & A continuacin, el d!mero de B9r&A (con acti9idad motora) se disocia, de5ando B9r $uertemente unida al A0+ y pro9ocando un doblez en la cadena. & B9r * se une entonces a B9r ' que origina una escisin en el quinto enlace $os$odi"ster en /7. Seguidamente, B9r * corta tambi"n a ni9el del octa9o enlace en F7, resultando un $ragmento de 1>&1/ nucletidos. & -l $ragmento es eliminado por la helicasa B9r 0. -l hueco as! creado es rellenado por la A0+ polimerasa : y sellado por la A0+ ligasa. -sta 9!a constituye la principal 9!a de reparacin de d!meros de timina, $otoproductos y deri9ados de bases. O( /eparacin directa: algunos tipos de lesiones pueden ser reparadas sin eliminar la base o nucletidos ($otorreacti9acin directa de d!meros de pirimidina en ciclobutano). & -sta reaccin es promo9ida por las A0+ $otoliasas. .os d!meros de pirimidina son el producto de una reaccin inducida por la luz. .as $otoliasas, que obtienen su energ!a a partir de la luz, in9ierten la lesin. Seneralmente contienen dos co$actores que absorben luz (;A0)&, $olato). & ,tra reaccin posible es la $ormacin de ,M&metil guanina en presencia de agentes alquilantes, originando una lesin altamente mutag"nica, catalizada por las alquil trans$erasas. .a reparacin la lle9a a cabo la ,M&metil guanina A0+ metil&trans$erasa, que cataliza la trans$erencia de grupos metilo desde la ,Mmetil&guanina hasta uno de sus propios residuos cys. +o es propiamente un enzima, ya que una sola trans$erencia de metilo la inacti9a, aunque no se desecha, ya que $unciona como acti9ador transcripcional. =( /eparacin post,replicativa: las rutas anteriores slo actan en A0+ de doble cadena. .a hebra no daVada suministra la in$ormacin necesaria para restablecer la daVada a su estado original y correcto. +o obstante, en ciertos tipos de lesiones (roturas de la doble cadena, entrecruzamientos) la hebra molde se daVa y no $acilita esta in$ormacin. -ste tipo de lesiones suelen originarse cuando una horquilla de replicacin topa con una lesin no reparada, acaecida por radiaciones ionaizantes u o3idaciones. -n una horquilla de replicacin bloqueada, la reparacin puede seguir dos caminos% por recombinacin o por mecanismo S,S. -n ambos casos inter9iene la =ec A, que cumple $unciones de proteasa, de recombinasa y reguladora de la e3presin g"nica. & =ecombinacin% casi todas las horquillas de replicacin 9an a topar con una lesin o rotura en su trayecto, que no pueden ser superadas por la A0+ polimerasa :::. -n estos casos, la lesin suele quedar en un hueco de cadena sencilla. -l encuentro con una rotura de la hebra de A0+ ocasionar( una rotura en la doble cadena. Ambas situaciones e3igen reparacin por recombinacin. -n condiciones normales, las horquillas bloqueadas se reacti9an por un elaborado sistema% o .a horquilla de replicacin se colapsa al encontrar una lesin en el A0+ o una rotura de cadena. o .os enzimas de la recombinacin promue9en las trans$erencias de hebra necesarias para superar la estructura rami$icada del A0+ en la horquilla de replicacin. Bna lesin en un hueco requiere para su reparacin de =ec ;, =ec , y =ec =. .as roturas de cadena doble son reparadas en una ruta que requiere el enzima =ec'*0. Ambas rutas requieren =ec A.

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&

.os intermedios de recombinacin son procesados por otros enzimas (=u9 A, =u9 ', =u9 *), que procesan intermedios de )olliday. .as lesiones en el A0+ de doble cadena son reparadas por escisin u otras rutas. o .a horquilla de replicacin se restablece con ayuda de enzimas que catalizan la reiniciacin de la replicacin independiente de origen, para completar el proceso. -l proceso en con5unto requiere una ele9ada coordinacin de todos los aspectos del metabolismo del A0+ bacteriano. S,S% para las lesiones que la A0+ polimerasa y el resto de los mecanismos no pueden reparar, e3isten otras enzimas (B9r A, B9r ') que son inducidas a mayores concentraciones durante la respuesta S,S. .a enzima Bmu 0 es inducida a Bmu 07 para $ormar un comple5o con Bmu * y crear una polimerasa especializada (T) que puede actuar superando muchas lesiones que suelen bloquear la replicacin. +o obstante, el apareamiento correcto de las bases es a menudo imposible. -sta polimerasa introduce nucletidos al azar, y por ello, este mecanismo es propenso al error y propio de situaciones de emergencia. *omo resultado, superar una barrera para la replicacin puede cobrarse la 9ida de muchas c"lulas para que sobre9i9an unas pocas c"lulas correctas. o Adem(s de la A0+ polimerasa T, se requieren SS' y =ec A, algunas subunidades de la A0+ polimerasa ::: y la induccin de la A0+ polimerasa :T, muy propensa al error. .a respuesta S,S se encuentra regulada% o -l represor .e3 A inhibe la transcripcin de todos los genes S,S, por lo que la induccin de esta respuesta requiere la eliminacin de .e3 A, el cual se inacti9a cuando cataliza su propia rotura en el enlace Ala&Sly, produciendo dos $ragmentos proteicos m(s o menos iguales. o A p) $isiolgico, esta reaccin requiere =ec A. .a interaccin de =ec A con .e3 A $acilita la reaccin de autorrotura del represor (acti9idad co&proteasa de la =ec&A). .a =ec A proporciona la cone3in entre la lesin del A0+ y la induccin de los genes S,S. Bna gran lesin produce numerosas zonas monohebra que =ec A reconoce, $acilitando entonces la rotura del represor .e3 A. 0urante la induccin de la respuesta S,S en una c"lula se9eramente daVada, la =ec A tambi"n rompe e inacti9a los represores que en caso contrario permiten que ciertos 9irus en estado lisog"nico (latente) se propaguen. o

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#ENTICA MOLECULA

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-n los aVos M6 se desarroll un e3perimento en Yenopus (rana), que pone oocitos de un tamaVo de 1 mm, que luego son $ecundados. ^ohn Surdon tom uno de estos oocitos y lo trat con luz BT para eliminar el ncleo, de5(ndolo as! sin in$ormacin. .a pregunta a responder era bqu" ocurre al e3traer c"lulas epiteliales di$erenciadas (diploides) del intestino del renacua5o, e3traer el ncleo e introducirlo en el oocitoc -n un porcenta5e bastante ele9ado de oocitos se obtu9ieron renacua5os. 0e esta manera se determin que todas las c"lulas del organismo tienen la misma in$ormacin gen"tica. 1or tanto cada c"lula contiene todos los genes (/6.666&F6.666). .a in$ormacin es total. -ntonces, bcmo se produce la di$erenciacinc 0e la misma in$ormacin se di$erencian todos los tipos celulares (hasta >66 en mam!$eros). .a di$erenciacin es posible porque no se sintetizan las mismas prote!nas en cada tipo celular. -n la c"lula e3isten mecanismos comple5os para $a9orecer o reprimir la e3presin de genes. -3isten dos tipos de genes% & *onstituti9os% se e3presan en todas las c"lulas del organismo para sintetizar prote!nas. ,curre con genes del metabolismo muy conser9ados (genes de la gluclisis o de la *#-).

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-spec!$icos% se e3presan slo en algunos te5idos. *uando una c"lula no e3presa un determinado gen, se dice que est( apagada en este gen. -stos mecanismos permiten generar di9ersidad, creando c"lulas especializadas y organismos con homeostasis global. %ogma central de la biologa molecular:

&

Cenes: es di$!cil de$inir correctamente qu" es un gen. -n 1N 6 se dec!a que un gen era una prote!na, pas(ndose posteriormente a las hiptesis \un gen un enzima] o \un gen una prote!na o A=+ $uncional]. *uando hablamos de genes eucariontes, hay que tener en cuenta lo siguiente% & -3isten dos copias de cada gen (dos alelos). Al haber dos copias del A0+, si una de ellas muta y no se repara, se produce un daVo irre9ersible. -3isten dos tipos de mutaciones% o Som(ticas% se producen en un te5ido concreto y por lo tanto no se transmiten a la descendencia. o Serminales% se producen durante la oog"nesis o la espermatog"nesis y por tanto s! se transmiten a la descendencia. & -n la transcripcin de los genes se sintetizan miles de mol"culas de A=+. Al e3istir esta cantidad de copias, si la transcripcin $alla m!nimamente dando 1 A=+ errneo, esto tiene poca trascendencia porque e3iste un grupo general correcto mucho m(s numeroso. +o e3iste por ello reparacin a ni9el de A=+m. .a 9ida del A=+ es corta (es rar!simo que supere lagunas horas). -sto es $undamental para la situacin din(mica de la c"lula. Si dependiera de A0+ como mensa5ero, las $unciones celulares siempre ser!an las mismas. Al depender del A=+, que $lucta $(cilmente, puede 9ariar enormemente la acti9idad celular. -n este sentido, es importante la regulacin, que decide cuales y cu(ntos A=+s se sintetizan para que la c"lula lle9e a cabo $unciones $le3ibles de manera regulada. -3isten 9arios tipos de A=+, a partir de los cuales se sintetizan prote!nas de corta 9ida media. -3iste regulacin a ni9el de prote!nas. -stos tipos de A=+ son% & A=+r (ribosmicos)% son estructurales. Su $uncin es $ormar una parte importante del ribosoma. )ay 9arios tipos de A=+r. & A=+t (de trans$erencia)% 5uegan un papel $undamental en la traduccin. +o son codi$icantes, sino que su $uncin es el transporte de amino(cidos. & A=+m (mensa5eros)% portan la in$ormacin para sintetizar prote!nas. & A=+s pequeVos (A=+sn, A=+sno, A=+s catal!ticos) & 2icro A=+s. & A=+nc. .ranscripcin: la transcripcin consiste en la s!ntesis de una cadena de A=+m a partir del A0+. -l A0+ suele encontrarse en $orma de doble cadena para tener mayor estabilidad. .as cadenas de A0+ tienen una polaridad% la hebra complementaria es antiparalela y siempre se pueden distinguir dos polos, un polo W,) /7, y un polo 1 F7. .a s!ntesis se produce siempre en sentido F7 /7. -l A=+ est( $ormado por ribonucletidos, (r+#1) los cuales tienen un grupo W,) en posicin >, no como los d+#1, que tienen slo o3!geno. -l A=+ utiliza la base Bracilo en lugar de #imina. .os nucletidos $orman enlaces $os$odi"ster para unirse entre s!. *omo hay dos cadenas de A0+, distinguimos% & *adena con sentido o codi$icante% es la que se copia (F7/7). & *adena sin sentido o no codi$icante% es la complementaria (/7F7). #ambi"n se llama cadena molde. .a A0+ polimerasa utiliza esta cadena para copiar la complementaria. *ada tres bases nitrogenadas se traducir( un amino(cido. .os mecanismos de la transcripcin 9ar!an mucho dependiendo de los organismos. .ranscripcin en procariontes: es relati9amente sencilla. .a s!ntesis del A=+ comienza en una porcin de$inida, que se conoce como punto <1. -l primer r+#1 que 9a a ser transcrito de un gen

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estar( en esta posicin. Se elongar( despu"s la cadena de A=+ hasta llegar al sitio de terminacin, el cual no es tan preciso como el de inicio. 1odemos distinguir las siguientes zonas% & =egin F7 B#=% 9a desde <1 hasta el lugar de inicio de la traduccin. #iene un nmero de nucletidos 9ariable. -sta regin no se traduce. & =egin /7 B#=% 9a desde el $inal de la traduccin a la regin de terminacin. o Si hay un nucletido importante que est( m(s all( del lado F7 de la cadena codi$icante, se denomina F7 upstream. o Si hay un nucletido importante en la zona m(s all( del e3tremo /7 de la cadena codi$icante, se denomina /7 doLnstream. Si un nucletido est( situado a 166 nucletidos de <1 upstream, se denominar( posicin &166 upstream. Si un nucletido se sita a 1>6 nucletidos de la regin de terminacin se dir( que est( en posicin <1>6 doLnstream. .ranscripcin en eucariontes: los genes en eucariontes se encuentran interrumpidos, organizados en intrones (que no contienen in$ormacin para la traduccin) y e3ones (que s! debe ser traducidos, aunque puede haber e3ones no codi$icantes). #ras eliminar los intrones, obtenemos%

*omo 9emos, e3isten una regin no traducida que abarca un e3n y la primera parte del siguiente. Bn e3n no es lo que se traduce, sino lo que aparece en un A=+m maduro. Se ha transcrito pero no tiene in$ormacin que 9aya a ser traducida, sino que inter9iene en otras $unciones, generalmente la regulacin. -n el genoma humano, hay genes de hasta 16 M pb. Se sintetiza una gran cantidad de A=+ del cual buena parte se elimina despu"s. Al obser9ar los A=+ nucleares, "stos parecen muy heterog"neos. 1arece ser que no son sino los precursores de los A=+ maduros. &/N polimerasa: la A=+ polimerasa es la encargada de sintetizar la hebra de A=+ a partir de la de A0+. .o hace introduciendo r+#1. -l grupo /7 W,) ataca el enlace (ataque nucleo$!lico) que une los $s$oros 1 y 1 y aVade un nue9o r+#1 $ormando un enlace $os$odi"ster. Bn pol!mero de A=+ est( $ormado por la unin sucesi9a de nucletidos mono$os$ato (r+21) unidos por enlace $os$odi"ster% 'N1P(nGN.P 'N1P(nG*GPPi -l piro$os$ato es muy instable y ser( hidrolizado inmediatamente por las piro$os$atasas (11i >1i). Al quitar el 11i, lo que pro9ocamos es un desplazamiento $uerte de la reaccin $acilitando as! la polimerizacin de manera muy r(pida.

.ranscripcin en EA coli: en procariontes, y por tanto en -. coli, la enzima que se encarga de la s!ntesis del A=+ es la A=+ polimerasa bacteriana, de la cual slo e3iste una 9ariedad, que se encarga de la s!ntesis de todos los A=+s (en -. coli e3isten unos F.666 genes). .a A=+ polimerasa es un enzima multim"rico, un holoenzima, $ormado por las siguientes subunidades y estructuras% & J>7K% es el core o ncleo del enzima. #iene la acti9idad catal!tica, que reside en las subunidades y 7. & A6% es una subunidad de pm@A6 con acti9idad autocatal!tica. .ocaliza en el genoma dnde est(n los genes que tienen que ser transcritos. .a $orma $inal del enzima es J>7KA6. Su 9elocidad catal!tica es de 6 nucletidosDs, siendo "sta una 9elocidad apreciable, pero menor a la de la A0+ polimerasa. *omete algunos errores (1 cada 16 & 16F nucletidos. .a e3istencia de mutaciones a ni9el de A=+ no es muy rele9ante, sino a ni9el del A0+. -l mecanismo de accin de la A=+ polimerasa es una s!ntesis en sentido F7 /7 tomando como patrn la cadena sin sentido del A0+. .a A=+ polimerasa comienza a transcribir en el sitio <1, y acta tambi"n mediante la apertura de burbu5as de transcripcin en el A0+. -l reconocimiento de los genes se lle9a a cabo mediante la

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presencia del promotor. -l promotor es una regin del A0+ que se encuentra antes de la posicin <1. +ormalmente, su estructura est( muy conser9ada%

& .a ca5a ##*ASA se sita en posicin &/F. & .a ca5a #A##AA# (ca5a #A#A) se sita en &1F. -sta secuencia se puede encontrar en muchos lugares de los 7FG16 pb. *onociendo la posicin &1F y la secuencia ##SA*A, se pueden identi$icar los promotores que $orman parte de los genes. .a transcripcin de un gen por la A=+ polimerasa tiene cuatro $ases comunes a todos los organismos% 1. =econocimiento del promotor. >. :nicio de la transcripcin. /. -longacin. . #erminacin. *( /econocimiento del promotor: la A=+ polimerasa se comporta de la siguiente manera con respecto al promotor% Subunidad A6 *ore )oloenzima A0+ inespec!$ico A$inidad Tida media & & 1 1 hora 16& 1 seg A0+ espec!$ico (promotor) A$inidad Tida media & & 1 1 hora 16/ 1 hora

-l core no tiene especi$icidad por el promotor, y A6 no posee a$inidad por el A0+. Sin embargo, al unirse al core, aumenta la a$inidad de tal $orma que el enzima multiplica su a$inidad para unirse al promotor por 16A. -l holoenzima se destaca por dos propiedades% & *apacidad de interaccionar con el A0+ de $orma muy espec!$ica, reconociendo al promotor por sus dos ca5as. #iene gran a$inidad por el sitio que precede a <1. 0e esta manera, la s!ntesis empieza en esta posicin. -l primer triplete siempre es *A#. -l promotor es por tanto $undamental para la transcripcin al colocar a la A=+ polimerasa en su sitio. & ;le3ibilidad $uncional% la subunidad A6 no interacciona con A0+, pero s! lo hace unida al core. .a con$ormacin de A6 depende de muchos $actores. -s una estructura din(mica que se adapta a las $unciones de la c"lula. <( Inicio de la transcripcin: el enzima es capaz de abrir el A0+ y penetrar en la burbu5a de transcripcin iniciando la s!ntesis de A=+. :niciar la transcripcin es un proceso ensayo&error que suele pasar por numerosos $allos (ca!das del enzima tras sintetizar *A#, intentos aborti9os en los que llega a /, o F nucletidos). Seneralmente, una 9ez que se sintetiza una cadena de E&N nucletidos la A=+ polimerasa no se 9a a caer. .as ca!das se producen por $alta de a$inidad. -l inicio en s! mismo es el proceso por el que se abre la burbu5a, y el enzima sintetiza una cadena de E&N nucletidos. Bna 9ez sintetizada esta pequeVa cadena, la enzima pierde la subunidad A6, ya que la acti9idad polimerasa reside en el core, y A6 slo $acilita el reconocimiento y unin al promotor. Bna 9ez incrementada esta a$inidad, la unin al core se hace d"bil y no se mantiene durante mucho tiempo. Al eliminarse A6 el core es m(s estable unido al A0+. N( Elongacin: el core entra en la burbu5a de A0+ y empieza a sintetizar A=+ a una 9elocidad de unos F6 nucletidos por segundo. O( .erminacin: e3isten dos posibilidades de terminacin% & :ntr!nseca% en la zona ;:+ hay unas secuencias muy caracter!sticas%

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&

-l stop se encuentra antes de la regin de terminacin. 0ependiente de % e3iste una prote!na () que acta como seVal uni"ndose a la A=+ polimerasa y haciendo que se suelte.

/egulacin de la transcripcin: & 1or di$erentes $actores % o A6% su $uncin depende de secuencias de consenso en los promotores (las ca5as). -sto es general, la mayor parte de los genes usan este mecanismo. .as siguientes subunidades tipo que obser9aremos reconocen ca5as distintas. o 1E% en genes de motilidad bacteriana y quimiota3is. o />% respuesta al choque t"rmico (a partir de /E&/N?*) o F % en genes relacionados con el metabolismo del nitrgeno. -n estos otros $actores , las secuencias en &/F y &1F son distintas y para A6 ser!an A0+ inespec!$ico. & ;uerza de los promotores% la alteracin de las ca5as puede tener e$ectos sobre el reconocimiento. Alteraciones en una de las bases 9ar!an la secuencia pero pueden ser identi$icados por A6 si no son sustancialmente di$erentes. -stas pequeVas 9ariaciones hacen que el reconocimiento sea menos e$iciente y generan un promotor d"bil que se da en genes de ba5a e3presin (generan un ba5o nmero de A=+m). & 2ediacin por prote!nas reguladoras% acti9adores y represores. -l e5emplo m(s claro es el opern de lactosa. Opern de lactosa: es uno de los paradigmas de la bioqu!mica actual. Se descubri en los aVos M6 por ^acob y 2onod, autor del libro \-l azar y la necesidad]. .os genes son codi$icados en unidades policistrnicas. Bn solo promotor (1.ac) puede sintetizar un A=+ grande que no codi$ica por una nica unidad de transcripcin. -n el caso del opern lac, son tres genes% & .ac Z% codi$ica para &galactosiadas (esencial para consumir lactosa). & .ac Z% codi$ica para permeasa de lactosa. & .ac A% transacetilasa. Acetila la permeasa acti9(ndola. .os tres genes y por consiguiente las tres prote!nas participan en el metabolismo de la lactosa% 2actosa ClucosaGCalactosa En : ,galactosidasaA -l A=+ sintetizado es policistrnico. -n el caso de que haya lactosa en el medio, se e3presar(n las prote!nas. -n el caso de que no haya lactosa, la s!ntesis puede ser interrumpida. & -l promotor consta de tres zonas encargadas de la regulacin de la e3presin del policistrn% o 1romotor con dos ca5as (&/F y &1F). o Zona acti9adora (ZA) o ,perador (Z,) -l opern es el grupo de genes y el promotor m(s las secuencias adicionales que $uncionan con5untamente para la regulacin.

.os operones se encuentran regulados por un solo promotor. .as bacterias emprenden una lucha por el entorno. -n su ciclo 9ital tienen que nutrirse, di9idirse y colonizar espacios. .a ruta de la lactosa

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resulta esencial para las bacterias, que apro9echan la mayor!a de nutrientes del medio, especialmente la glucosa. -n condiciones sin lactosa, si la bacteria est( e3presando este opern, comienza a perder energ!a, por lo que debe silenciarlo. & *erca del opern e3iste otro gen que codi$ica una pequeVa prote!na (.ac :) cuya s!ntesis est( dirigida por otro promotor (1:). -sta prote!na tiene a$inidad por secuencias del operador. As! pues, la zona operadora es ocupada por la prote!na represora, y se paraliza el opern. 1or tanto, la regulacin se realiza por prote!nas de unin al A0+ con a$inidad por el opern, bloqueando $!sicamente la entrada de la A=+ polimerasa al sitio <1. -l promotor de esta secuencia represora es muy d"bil, y por ello la s!ntesis del represor tambi"n lo es. & Si hay lactosa en el medio, "sta entra en la c"lula, que no tiene capacidad para metabolizarla. .a lactosa es capaz de unirse a la prote!na represora .ac : modi$icando su con$ormacin tridimensional y pro9ocando que pierda a$inidad por el operador. .a regin operadora queda libre, y la A=+ polimerasa puede transcribir los genes que degradar(n la lactosa. -l opern posee adem(s una zona acti9adora (ZA) que se utiliza para regulaciones muy $inas del opern. Si a la c"lula llega lactosa y tambi"n glucosa, las bacterias pueden \elegir] cu(l metabolizar. -sta capacidad de eleccin se denomina represin catablica. -n condiciones normales, $unciona as!% & -l promotor de la lactosa es d"bil. Su secuencia no es la consenso. -n el caso de que solo haya lactosa se sintetizan los A=+m. -n la c"lula e3iste una pequeVa prote!na reguladora *A1 que acta como un d!mero y se sintetiza en otra parte del genoma de -. coli. Bne un segundo mensa5ero, el A21c. -sta prote!na puede e3istir de dos $ormas% o Bnida a A21c (acti9a). o +o unida a A21c (inacti9a). .as prote!nas *A1 acti9as se unen a la zona acti9adora del opern. :nteracciona con la A=+ polimerasa, estabiliz(ndola y $i5(ndola de $orma estable mediante interacciones prote!na& prote!na. 1or tanto, la prote!na *A1 acti9a la transcripcin, razn por la cual los ni9eles de A21c son altos en situaciones de ele9ada JlactosaK sin glucosa. Si los ni9eles de A21c son ba5os, la prote!na es inacti9a y hay escasa s!ntesis de A=+m. -n situaciones en que e3iste lactosa y glucosa, la c"lula pre$iere glucosa. -n ese caso, se pone en marcha un mecanismo para disminuir el A21c. & *ondiciones de ba5a JglucosaK y alta JA21cK% o Si hay ba5as concentraciones de lactosa, el represor est( unido, bloqueando al opern o Si hay altas concentraciones de lactosa, el promotor $unciona al m(3imo. & *ondiciones de alta JglucosaK y ba5a JA21cK% o Si hay ba5as concentraciones de lactosa, no se utiliza la lactosa y s! la glucosa. o Si hay altas concentraciones de glucosa, se produce una s!ntesis d"bil, en la que la glucosa impide el $uncionamiento total del opern. .ranscripcin en eucariotas: los eucariotas tienen apro3imadamente 16 9eces m(s genes que -. coli (F6.666 $rente a F.666) y su genoma es mucho mayor (/7FG16 M $rente a F66G16M). 0e todo el A0+ del ncleo, la inmensa mayor!a no codi$ica, siendo slo el >8 A0+ codi$icante. -l resto tiene $uncin reguladora o desconocida. -n los organismos pluricelulares no se compite por nutrientes, sino que se $orman te5idos especializados mediante los procesos de regulacin que permiten adaptarse a las 9ariaciones del entorno. .a transcripcin eucariota se di$erencia de la procariota en% & -n eucariontes hay tres A=+ polimerasas <1 adicional en mitocondrias y cloroplastos. Son A=+ polimerasas especializadas en la transcripcin de un grupo de genes concreto% o A=+ polimerasa :% Se encarga de la transcripcin de la mayor!a de los A=+r (>ES, 1ES y F7ES). Sintetiza productos estructurales de los ribosomas. Su acti9idad es muy importante (alrededor del A68 de la transcripcin total). +o est( muy regulada. o A=+ polimerasa ::% se encarga de la transcripcin del A=+m. .a cantidad de A=+m que hay en cada momento est( muy regulada. #ambi"n transcribe A=+s que pese a ser muy pequeVo desempeVa importantes $unciones. -n bacterias est( la A=+asa (catal!tica). o A=+ polimerasa :::% sintetiza el A=+r FS y algunos A=+s. Su $uncin $undamental es la s!ntesis del A=+t. o A=+ polimerasa mitocondrial% las c"lulas eucariotas tienen dos genomas, el del ncleo y el de la mitocondria, deri9ado del origen e3tracelular de este org(nulo (teor!a de la

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endosimbiosis). Sintetiza A=+m que se traducen en prote!nas mitocondriales (prote!nas de la *#-). o A=+ polimerasa del cloroplasto% e3clusi9a de c"lulas que realizan la $otos!ntesis. & .a transcripcin se realiza en el ncleo, no se realiza en un espacio libre como el citoplasma. .a A=+ polimerasa : se localiza en el nucl"olo, mientras que la :: y ::: est(n en el nucleoplasma. -l entorno est( muy de$inido. & .as unidades de transcripcin corresponden usualmente con un gen, mientras que en procariotas la mayor parte de genes se localizan en operones. & -l reconocimiento de la transcripcin es muy complicado. .as A=+ polimerasas necesitan $actores au3iliares para buscar el promotor, mientras que en procariotas basta con . & .os preA=+ tienen que su$rir un procesamiento bastante comple5o, ya que no son $uncionales Slo el >8 del genoma es codi$icante, y esto pro9oca que la A=+ polimerasa (generalmente la ::) tenga grandes di$icultades para encontrar los genes. Adem(s, los genes est(n interrumpidos por intrones que pueden ocupar 16M pb. 1ara que sea posible la transcripcin, e3isten los siguientes elementos% & Secuencia iniciadora% se sita en posicin <1. & 01- (doLnstream promotor element)% es un elemento de A0+ colocado en /7 (</6). .a A=+ polimerasa :: reconoce esta serie de secuencias. .a ca5a #A#A suele estar en un E68 de los promotores, aunque no todas las secuencias est(n en todos los genes. .as secuencias conser9adas en la parte del promotor son cortas, simples y con gran 9ariabilidad. -stos elementos constituyen el promotor basal o m!nimo. -l promotor aumenta su e$icacia con m(s elementos% & Zona reguladora pro3imal% pr3ima a <1. -s 9ariable de un gen a otro. 0entro de la regin, el nmero de pb es 9ariable. Bna serie de secuencias espec!$icas se encuentran bastante conser9adas. -sta zona sir9e de unin a prote!nas reguladoras $undamentales en la e3presin y el inicio de la transcripcin. -l promotor m!nimo 5unto a la zona reguladora pro3imal constituyen el promotor pro3imal, relati9amente cerca de <1. -n zonas le5anas se sitan otros elementos% & Zona reguladora le5ana% hay elementos implicados en la transcripcin que se encuentran muy le5anos (hasta a 166 Ib de la zona <1). 1ueden tener dos tipos de grupos (enhancers)% o 1otenciadotes% aumentan el ni9el de la transcripcin. o Silenciadores% disminuyen el ni9el de la transcripcin. 1uede haber adem(s zonas reguladoras dentro de los intrones tanto en F7 como en /7. &/N polimerasa II 'eucariota(: su parte catal!tica tiene parecido con la A=+ polimerasa procariota (>7). 7 es una prote!na cuyo *&terminal 5uega un importante papel en la transcripcin. Se denomina *#0 (ZS1#S1S)1A es su secuencia de amino(cidos. -s una diana de $os$orilacin. .a A=+ polimerasa tiene adem(s otras cinco subunidades espec!$icas e3clusi9as. -s una prote!na muy grande (F66 40a). -l mecanismo por el que reconoce al promotor m!nimo es el siguiente% & -l reconocimiento depende de un con5unto de prote!nas au3iliares. +inguna de las subunidades del enzima puede reconocer al promotor, por lo que necesitan de estos $actores generales de transcripcin (#;::) principalmente #;::0, #;::', #;::), #;::-, #;::;, #;::^ y #;::A. o #;::0 est( $ormado por un ncleo proteico (la prote!na #'1) y trece prote!nas au3iliares (#A;s). #1' es una prote!na de unin a la ca5a #A#A. #iene $orma de silla de montar. Su papel es esencial para el reconocimiento y unin al promotor. o #;::'% es una prote!na que interacciona con las #A;s y #'1 y se coloca antes de <1. o Bna 9ez unido todo el comple5o, #;::; interacciona con la polimerasa y la coloca en posicin. o 1osteriormente llegan #;::- y #;::) $ormando un con5unto denominado comple5o de preinicio de la transcripcin. #;::) es un comple5o $ormado por nue9e polip"ptidos, entre los que destacan tres acti9idades% Cuinasa% $os$orila el dominio *#0. )elicasa% abre la hebra de A0+. -s $undamental para originar la burbu5a. A#1 asa% se encarga de la reparacin. -l #;::) $os$orila el dominio *#0 y de esta manera comienza la transcripcin. -sta es la secuencia lgica que se obser9a in Titro, pero in 9i9o es m(s complicado.

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.a transcripcin dependiente del promotor basal es muy d"bil, ya que la $recuencia de inicio de la transcripcin es muy ba5a, debido a que la mayor parte de las 9eces que la A=+ polimerasa intenta ensamblarse no lo consigue y se cae. /egulacin de la transcripcin: la esencia de la regulacin se localiza en la zona reguladora, que puede estar situada pro3imal o distalmente (enhancers), que pueden acti9ar e inhibir la transcripcin. 0entro de la zona reguladora e3iste una serie de moti9os o secuencias de A0+ que son espec!$icas y concretas, aunque se localizan en porciones no $i5as y son e3clusi9as de cada promotor. *ada uno de los elementos conser9ados es reconocido por prote!nas espec!$icas reguladoras de la transcripcin ($actores de transcripcin) que se localizan pro3imalmente, cerca de <1. & Son prote!nas de unin a A0+% se unen de modo espec!$ico a una secuencia de A0+ que reconocen y por la que tienen a$inidad. Se intercalan en el A0+ entrando generalmente por el surco mayor. *ada $actor de transcripcin se une a un moti9o o secuencia concreta de A0+. & Son bimodulares% tienen estructura tridimensional con al menos dos mdulos o dominios di$erentes% o 0ominio 1% es el dominio de unin a A0+ espec!$ico de secuencia. Abundan los amino(cidos b(sicos (Arg, .ys) con carga positi9a. o 0ominio >% es una zona de interaccin prote!na&prote!na. -s transacti9adora porque acti9a $uera de la propia prote!na. Abundan amino(cidos (cidos, con carga negati9a. -l $actor de transcripcin reconoce la zona conser9ada por medio del dominio 1 y se une a ella. -l dominio > acta sobre la maquinaria basal de transcripcin, la cual se coloca en posicin <1 en base a los $actores generales de transcripcin. Al no ser estable, se suelta. .os $actores de transcripcin estabilizan esta maquinaria uni"ndose a una zona cercana a <1 y, por medio de su dominio >, estabiliz(ndola mediante uniones prote!na&prote!na. & =econocen secuencias de A0+ muy 9ariadas% en humanos, el nmero de prote!nas reguladoras supera las 1A66, por lo que el ncleo dedica una parte importante de sus recursos a codi$icar estos $actores. & .a $uncin 9iene mediada por el dominio 1, dotando de especi$icidad al proceso. -l $actor de transcripcin se une por su dominio 1 de manera espec!$ica. Si al mismo promotor se le une un $actor 9ariado en el laboratorio, que mantiene intacto el dominio 1 y 9ar!a el >, la unin se produce de igual manera. As! pues, la especi$icidad y la correcta acti9idad 9ienen dadas por el dominio <1. -l dominio > es lo que necesita la prote!na para interactuar con la maquinaria basal o con otras prote!nas. & .a estructura de los $actores de transcripcin es 9ariada, por lo que se pueden agrupar en $amilias, $ormando estructuras e$icaces de interaccin con A0+% o ;amilia de los dedos de *inc% en estas prote!nas se encuentran colocados estrat"gicamente amino(cidos de *ys que se unen a (tomos centrales de *inc, $ormando estructuras caracter!sticas digiti$ormes. -s una estructura conser9ada. .os dedos de *inc entran por el surco mayor del A0+ e interaccionan con las bases. -sta $amilia es muy abundante. o )omeodominios% $ormados por tres &h"lices que adoptan una dispersin con una de ellas en el e5e longitudinal y dos atra9esadas (perpendiculares). o ;amilia de las cremalleras de leucina% son leucinas que establecen una serie de interacciones entre s!. -s un moti9o $recuente. o Siro&h"lice&giro. -structuralmente, los $actores de transcripcin pertenecen a di$erentes $amilias que se de$inen porque en su zona de unin al A0+ e3isten estructuras conser9adas que son capaces de interaccionar espec!$icamente con secuencias de A0+. -3isten distintos tipos de $actores de transcripcin% & *onstituti9os% aquellos que se e3presan en todas las c"lulas. & -spec!$icos de te5ido% durante el per!odo embrionario, a medida que se $orman las distintas estructuras del embrin, una serie de $actores comienzan a e3presarse y se 9an di$erenciando los tipos celulares. 1or esta razn, quedan incluidos en un determinado tipo de c"lulas, pero no en otro. & :nducibles% pueden encontrarse acti9os e inacti9os. .a acti9acin se puede dar por distintos mecanismos (seVales).

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)ay muchas maneras de regular la acti9idad de los $actores de transcripcin. -ntre ellas se encuentran% & SeVal e3terna. & ;os$orilacin. & 0e$os$orilacin. & Bnin a ligandos. & *ambio de socio. 0e esta manera, el proceso de transcripcin adquiere una gran $le3ibilidad, ya que 9ariando el proceso celular 9ar!a la acti9idad de los $actores de transcripcin. .os elementos de A0+ conser9ados son reconocidos por $actores de transcripcin di$erentes que se unen. -l con5unto en9!a una seVal a la maquinaria basal de transcripcin para in$ormar sobre si el gen se debe transcribir o no. .a zona cercana al promotor $unciona integrando seVales para interaccionar directa o indirectamente con la maquinaria basal de transcripcin. .a di$erenciacin celular se puede entender si se obser9a la zona reguladora, ya que la dotacin de $actores de transcripcin de cada ncleo es di$erente. *ada promotor tiene muchas secuencias conser9adas que son reconocidas por muchos $actores de transcripcin. Adem(s, los mismos moti9os se pueden encontrar en muchos genes, que se pueden poner en marcha en bater!a. .a interaccin con la maquinaria basal de transcripcin no es directa, sino que suele estar mediada por otras prote!nas (co&acti9adores y co&represores), que no tienen capacidad de reconocer y unirse al A0+. .a acti9acin&represin depende de $actores de transcripcin y est( $uertemente condicionada por estas prote!nas. & -n las regiones cercanas a los promotores e3isten secuencias que permiten el acceso a comple5os multiproteicos. .a )A# y la 0A) pertenecen a los co&acti9adores y tambi"n producen cambios en la con$ormacin. & -n las zonas pro3imal y distal del promotor se abren los nucleosomas gracias a la acti9idad de los comple5os multiproteicos. .as secuencias del promotor son reconocidas por $actores multiproteicos que se unen a ellos acetilando histonas y abriendo la cromatina, tras lo cual es monta la maquinaria basal de transcripcin. 1ara silenciar un gen, se necesita una compactacin de la cromatina o la actuacin de co& represores asociados a desacetilasas Enhancers o potenciadores: los enhancers son elementos reguladores adicionales que pueden estar situados a distancias muy le5anas de <1, tanto en F7 como en /7 de la cadena codi$icante, incluso en intrones. Suelen situarse a distancias largas (16&166 Ib). Son elementos discretos de A0+ (>66&/66 pb) cuya nica cualidad es una ele9ada concentracin de elementos de respuesta conser9ados. .os $actores de transcripcin se unen a estos elementos de respuesta, independientemente de si est( cerca del promotor pro3imal o del enhancer. .a $uncin del enhancer es similar a la de los promotores pro3imales, ya que gracias al plegamiento del A0+, suele situarse cerca de ellos. -l A0+ del enhancer interacciona con la maquinaria basal de transcripcin y con elementos del promotor. Bn enhancer es por tanto un promotor le5ano que regula a genes 9ecinos. ,tras prote!nas co&acti9adoras as! como estabilizadoras de <1 $orman una superestructura que permite una alta $recuencia de inicio de la transcripcin. Plegamiento del &%N en eucariotas: el A0+ eucaritico se encuentra e3traordinariamente cerrado $ormando la cromatina. Su grosor no supera la medida del A, aunque alcanza longitudes de >m. -l A0+ se compacta ayudado por histonas $ormando nucleosomas que se empaquetan unidas a prote!nas (cidas para $ormar los cromosomas. .a polimeras accede a la cromatina gracias a prote!nas nucleares que abren la cromatina y permiten la entrada de la polimerasa y $actores de transcripcin. .a apertura de la cadena est( mediada por tres mecanismos% & 2etilacin de bases de deo3inucletidos% se realiza $undamentalmente en zonas con estructura J*pSKn, donde p es un enlace $os$odi"ster. * se metila. .a hipermetilacin hace que la cromatina est" poco condensada y permite as! la transcripcin. & 2odi$icacin de la cromatina% o 1or modi$icacin de histonas% $undamentalmente por acetilacin de las colas. -n el ncleo e3isten dos acti9idades%

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)istona acil trans$erasa% introduce un grupo acetilo en las histonas del nucleosoma. 0e esta manera, la histona cambia su con$ormacin tridimensional y la cromatina se abre (por e5emplo, la prote!na /66). )istona desacetilasa% in9ierte la acti9idad anterior y permite que la cromatina se compacte. 1or remodelacin de la cromatina% e5ercida por comple5os multproteicos con acti9idad A#1asa (por tanto con gasto de energ!a). 0esplaza a los nucleosomas abriendo la cromatina.

)ontrol transcripcional: ya e3plicado el mecanismo de actuacin de los $actores de transcripcin, hay que destacar que la di$erenciacin celular permite la respuesta a seVales e3ternas (hormonas) en un proceso acti9o. -stas seVales e3ternas son responsables ltimos de la e3presin y el silenciamiento de genes. .a in9estigacin sobre los distintos $actores de transcripcin se lle9 a cabo en los aVos A6& E6. Seneralmente, la e3istencia de una estructura con gran cantidad de c"lulas supone la di9isin generando sectores con distintos programas de e3presin g"nica. -sto es posible gracias a la e3istencia de $actores de transcripcin en la c"lula madre. Bn solo $actor de transcripcin puede ser su$iciente para generar una reaccin en cadena que lle9e a una di$erenciacin tisular completa. Bn claro e5emplo es el o9ocito, que contiene $actores de transcripcin maternos, y a partir del cual se generan todas las estructuras del cuerpo. & Bn e5emplo de la importancia de los $actores de transcripcin en la di$erenciacin tisular lo constituye la aniridia, una en$ermedad gen"tica generada por una mutacin en un gen que codi$ica un $actor de transcripcin muy conser9ado e9oluti9amente. -sta mutacin origina $alta de iris. -l gen mutante se localiz en drosophila melanogaster. & Bna 9ez conocido este gen, se e3periment qu" ocurrir!a al e3presarlo en un dominio di$erente (en las patas). A consecuencia de ello aparecieron patas con o5os per$ectos pero intiles al no estar conectados con el cerebro. & Al insertar en las patas el gen humano causante de la aniridia, tambi"n aparecieron o5os. -stos son e5emplos de la importancia reguladora de las prote!nas, en mor$og"nesis y di$erenciacin celular, y del parecido de los genes en distintas especies. .as especies son tan di$erentes entre s! no tanto por di9ersidad gen"tica sino en la regulacin. 1aduracin del &/N eucarionte: la e3istencia de e3ones e intrones da lugar a un pre A=+m como primer producto de s!ntesis de la A=+ polimerasa :: que no es $uncional. -s necesario eliminar las zonas que no deben ser traducidas. -ste proceso se denomina maduracin o procesamiento, y ocurre en el ncleo. -l procesamiento consta de tres $ases% & 2odi$icacin del e3tremo F7 (capping)% consiste en la adicin de un capuchn (cap) en F7. Si poseemos un A=+m que sea F7 ppp&Ap+p+p&&&&, quedan tres $os$atos en F7 al no haberse $ormado enlace $os$odi"ster. A este A=+m se une un S#1, dando lugar a SpppAp+p+j y liber(ndose 11i<1i. Se establece un enlace F7 F7 tri$os$ato entre el S#1 y la citosina. Actan enzimas metilasas sobre guanina y citosina. o 1osteriormente se une un comple5o de prote!nas (*'1) que tapona el e3tremo F7, que es muy inestable y si no se protege, es degradado por las ribonucleasas. 1or tanto, las modi$icaciones en el e3tremo F7 tienen como ob5eti9o dar estabilidad al pre A=+m y al A=+m, lo cual es $undamental para el transporte por el citoplasma y la traduccin. & 2odi$icacin del e3tremo /7 (adicin de la cola de poli A)% este proceso se lle9a a cabo mediante la poli A polimerasa. .a terminacin es un proceso poco preciso, pero al $inal del A=+m hay una secuencia AABAAA (seVal de poliadenilacin). A una distancia 9ariable entre F6&E6 nucletidos hay una zona rica en SB. .a cadena de A=+m se corta a una distancia de unos >F&/6 nucletidos de la ca5a AABAAA, y en ese lugar se aVade la cola de poli A (hasta 166 nucletidos). 1ara la consecucin de la poliadenilacin se necesitan dos acti9idades% o -ndonucleasa% corta la cadena. o 1oli A polimerasa% polimeriza ribonucletidos de adenina. o :nter9endr( tambi"n la prote!na de unin a poli A (1'1) que se une a la cola r(pidamente estabilizando el A=+m. & -liminacin de intrones (splicing)% el nmero de intrones es 9ariable en un gen, y puede ser muy alto. -stos intrones, adem(s, tienen tamaVo 9ariable, y pueden ser enormes. .a traduccin

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se lle9a a cabo por tripletes, y por esta razn, el corte debe ser e3acto. Si el corte 9ar!a aunque slo sea en un nucletido, toda la secuencia queda equi9ocada y 9ar!a la prote!na sintetizada. 1or tanto, se necesita precisin absoluta. .a eliminacin de intrones o splicing atra9iesa por 9arias $ases% o =econocimiento del intrn en el preA=+m% el reconocimiento depende de secuencias espec!$icas%

-l primer borde intrn&e3n se reconoce por la e3istencia de dos nucletidos conser9ados% SB. A una distancia, se coloca la zona de rami$icacin, con A. .as dem(s zonas pueden tener nucletidos 9ariables. 0e A a AS hay de >6&F6 nucletidos. -liminacin% reacciones para eliminar el intrn% la eliminacin consiste en dos reacciones qu!micas de transesteri$icacn por las cuales un enlace "ster se 9a de un sitio a otro%

.a A tiene en su posicin >7 un ,) con el que ataca el enlace e3n1&,. -l e3n1 queda con /7 ,) libre tras la transesteri$icacin. -ste ,) de e3n1 realizar( la segunda transesteri$icacin%

2aquinaria de splicing nuclear% se utiliza para organizar el A=+. *onsta de los siguientes elementos% Sn=+1s (ribonucleoprote!nas pequeVas nucleares)% se sintetizan por la A=+ polimerasa :: o :::. *onstan de% A=+s% B1, B>, BF, B &BM (d!mero). 1rote!nas% relati9amente conser9adas (prote!nas S2S) 1rote!nas de splicing% pertenecen a la $amilia del dominio =S, rico en arginina serina, conser9ado dentro de la estructura tridimensional. .a maquinaria llega a $ormar estructuras de tamaVo parecido a los ribosomas.

Proceso de la ma9uinaria de splicing nuclear: el mecanismo $unciona por pequeVos apareamientos. .a maquinaria localiza los bordes 1 y > y los elimina. & .a =+1 B1 llega a la secuencia SB (borde 1) se aparea con ella. *oloca la =+1 B1 en el borde del splicing 5unto a prote!nas de la $amilia =S. & 1osteriormente llega =+1 B> y se aparea en la zona rica en pirimidinas de5ando a A $uera del apareamiento. & 0espu"s aparecen BF y B &BM con prote!nas =SS que $orman la estructura catal!tica. Se $orma un lazo de $orma que se acercan los bordes intrn&e3n $ormando el centro catal!tico. #ras acabar la cat(lisis se disocia el con5unto. .os A=+ B son los centros catal!ticos (son ribozimas). .as prote!nas contribuyen a la con$ormacin tridimensional. -n la c"lula, la transcripcin se encuentra acoplada a la traduccin, por lo que una 9ez maduro, el A=+m iniciar( la traduccin. A medida que se ha producido la transcripcin, prote!nas del splicing (AS;Ds;>) de la $amilia =S se han unido al A=+m con el ob5eti9o de atraer a la zona a =+1 B. A medida que a9anza la transcripcin, se $orman

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comple5os =+1&prote!nas heterog"neas muy abundantes. -n la zona rica en pirimidinas de los intrones se $orman apareamientos con =+1 B>. Al quedar A libre y transesteri$icarse, se $orma el lazo, acercando a los e3ones. .legan BF y B &BM. Se $orma una estructura conocida como spliceosoma, con tamaVo similar al ribosoma. -l splicing en la naturaleza puede ser de 9arios tipos% & Splicing nuclear% genera A=+m maduro. & Splicing de A=+t% se da en le9aduras y organismos eucariticos sencillos. -s un splicing muy raro y se realiza de un modo completamente di$erente. & Autosplicing% se da en organismos eucariticos in$eriores, caracterizados por la e3istencia de intrones : (preA=+m) e intrones :: (mitocondriales). -ste mecanismo se caracteriza porque la propia estructura secundaria del preA=+m es catal!tica (ribozima) y por ello se produce la autocat(lisis de las reacciones de splicing. /egulacin del splicing 'splicing alternativo(: la maquinaria de splicing puede considerar borde donador y borde aceptor a distintos bordes e3nicos. 1or ello, la secuencia no tiene por qu" ser e3n1& e3n>&e3n/&e3n , sino que puede ser e3n1&e3n>&e3n . 1or este mecanismo, se considera un intrn que lle9a dentro un e3n, y se genera un A=+m di$erente. .as prote!nas traducidas son estructuralmente relacionadas pero con $uncin distinta. -ste proceso se denomina splicing alternati9o, y est( regulado por prote!nas reguladoras del splicing que interaccionan con la maquinaria uni"ndose a A=+m. -l splicing alternati9o puede ser% & *onstituti9o% ocurre en todas las c"lulas. & -spec!$ico de te5ido% la regulacin es post&transcripcional. 0a lugar a A=+m y prote!nas di$erentes en cada te5ido. .a e3istencia de splicing alternati9o permite e3pandir las posibilidades de A=+m di$erentes. -sta capacidad se conoce como e3pansin protemica y con$iere una gran 9ersatilidad en la regulacin de la e3presin g"nica. 2(s del M68 de los genes humanos su$ren splicing alternati9o, dando lugar a 9arias prote!nas. 2uchas patolog!as est(n pro9ocadas por $allos en el splicing, y no en el gen, como se cre!a anteriormente. Edicin de &/Nm: antes de que se produzca la traduccin se produce un $enmeno adicional% la edicin del A=+m. *onsiste en modi$icar el A=+m cambiando algn nucletido. -stos cambios obedecen a in$ormacin no contenida en el genoma, y que es necesaria para la correcta s!ntesis de prote!nas. -n la especie humana, este mecanismo a$ecta a% & 1rote!na Apo '% el gen que la codi$ica tiene numerosos intrones y e3ones. -n el e3n >M hay una secuencia a ni9el de A=+m maduro% *AA. o -n el h!gado, se mantiene el codn *AA, dando lugar a la prote!na Apo ' 166, una prote!na grande (F66 40a) capaz de transportar colesterol y #AS. o -n el intestino se produce edicin, y se sustituye la * por B, dando lugar a BAA, que acta como codn de terminacin. -ste proceso de edicin da lugar a la prote!na Apo ' E, m(s pequeVa (> 6 40a) y slo capaz de transportar #AS. & =eceptor del glutamato% hay c"lulas que contienen un triplete que codi$ica para glutamina (*AS). -l receptor su$re una edicin en la que se sustituye A por S (*SS), codi$icando as! para arginina. -ste cambio pro9oca que el receptor tenga una especi$icidad di$erente por iones, con una repercusin $uncional enorme. Procesamiento en &/N polimerasa I: los A=+r se organizan en una serie de operones. Se trata de un A=+ policistrnico ya que incluye 9arios genes. -3isten >E6 repeticiones en el genoma, localizadas en cinco cromosomas distintos. -n cualquier momento del cicloi celular se pueden localizar al menos F6 mol"culas de A=+ polimerasa : por unidad de transcripcin. 0e esta manera, e3isten hasta 1 666 preA=+ que se sintetizan a la 9ez (>E6GF6).

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.a A=+ polimerasa : tiene que encontrar la posici <1. 1ara lograrlo, necesita dos $actores de transcripcin% & B';&1 & S.&1% compuesto por cuatro prote!nas (#'1</#A;s). -stos $actores se unen a la A=+ polimerasa : muy e$icazmente para que se transcriban numerosos A=+r. -l primer producto de s!ntesis es un pre&A=+m, el que podemos 9er en la $igura superior. -n esta $orma, los tres A=+r se encuentran unidos por secuencias sin sentido. 1or tanto, no es una $orma $uncional, y debe su$rir procesamiento. .a liberacin de los A=+r emplea a una gran cantidad de enzimas. -l procesamiento consta e dos acti9idades% & .iberar los A=+r% gracias a las =+1sno, que procesan A=+r primario. Son ribonucleoprote!nas pequeVas del nuclelo. & 2etilaciones espec!$icas% un A=+r puede tener m(s de 166 nucletidos metilados. Procesamiento en &/N polimerasa III: la A=+ polimerasa ::: es un enzima comple5o $ormado por numerosas subunidades. Sintetiza el A=+r FS, adem(s de los A=+t. Sintetiza tambi"n A=+s. Aunque de los genes de A=+r FS y A=+t e3isten muchas copias, suelen $ormar unidades monocistronicas, e3ceptuando algunos A=+t. Su terminacin no est( muy de$inida. .os promotores suelen estar en posicin F7 doLnstream. Son elementos conser9ados en el interior del gen (promotores intrag"nicos). )ay tres $actores de transcripcin% A, ' ($ormado por #'1<>#A;s :::), y *. #oda esta maquinaria dirige el acoplamiento de la A=+ polimerasa ::: al sitio <1. -l producto de s!ntesis es un preA=+t con e3tremos F7 y /7 que deben ser eliminados. -l procesamiento da elimina estos e3tremos, con lo que el A=+t se pliega en seguida en $orma de tr"bol, por interaccin de nucletidos. -ste procesamiento es comple5o y consta de 9arias $ases% & 2odi$icacin de los e3tremos% el corte de los e3tremos debe ser preciso. .as enzimas que lo realizan son la A=+asa 1 (en F7) y la A=+asa 0 (en /7). & Adicin de **A en /7% lo lle9a a cabo la enzima nucleotidil trans$erasa. & 2odi$icacin de bases% inter9ienen numerosas enzimas, que aVaden una amplia 9ariedad de bases muy importantes en la estructura y $uncin de los A=+t. & #ambi"n se produce eliminacin de intrones si es necesario (en el caso de que la unidad de los A=+t $uera policistrnica). .r#fico ncleo,citoplasma: e3iste un transporte continuo entre citoplasma y el ncleo, no slo de A=+m, sino tambi"n de prote!nas y A=+t. -ste transporte est( altamente regulado a dos ni9eles% & )ay A=+m que tienen localizacin espec!$ica en la c"lula para ser traducidos. 1or e5emplo, los A=+m de mitocondria deben asociarse a prote!nas que los transporten a la mitocondria para ser traducidos. & -stabilidad% no todos los A=+m tienen una estabilidad id"ntica, sino que cada una tiene una 9ida media espec!$ica. .a estabilidad est( controlada por prote!nas que suelen unirse a F7 B#= y /7 B#=. .a 9ida media condiciona la traduccin, ya que si es muy corta puede impedir que "sta se produzc. o .os A=+m con una 9ida media muy corta codi$ican prote!nas especiales que regulan los procesos del ciclo celular. o .os A=+m con una 9ida media m(s larga, codi$ican para prote!nas estructurales. ./&%0))IEN: la traduccin es un proceso din(mico que tiene lugar en el citoplasma sobre miles de A=+m simult(neamente. *onsume una important!sima parte de la energ!a celular, que puede llegar hasta el N68 de la energ!a total. -l nmero de enlaces pept!dicos $ormados es enorme (16 M por segundo). Se sintetizan muchas prote!nas a la 9ez, con una 9elocidad de s!ntesis de unos F amino(cidos por segundo. -n la traduccin inter9ienen los tres grandes tipos de A=+, que son la base de la e9olucin prebitica. El cdigo gen-tico: se desci$r en los aVos M6, aunque ya hab!a sido $ormulado tericamente. Sus principales caracter!sticas son% & #ripletes% la in$ormacin se encuentra contenida en cuatro bases que codi$ican para >6 amino(cidos distintos. Si un nucletido codi$icara un amino(cido, slo habr!a cuatro

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posibilidades. Si dos nucleotidos codi$icaran un amino(cido, slo habr!a diecis"is combinaciones. .a $rmula con tripletes permite M posibilidades distintas. *digo degenerado% al haber M tripletes y slo >6 amino(cidos, se posibilita que un amino(cido est" codi$icado por m(s de un triplete (tripletes sinnimos). )ay amino(cidos que est(n codi$icados hasta por seis codones, y otros slo por uno (met). .a metionina seVala la iniciacin de todas las cadenas polipept!dicas en todas las c"lulas. Seneralmente, los codones sinnimos di$ieren slo en la ltima letra. )ay tres codones de stp% BAA, BAS y BSA. .ectura \sin comas]% una 9ez que se empieza la lectura, hay que ir de tres en tres sin saltar ninguna letra. .a lectura es continua. 1or esta razn, una delecin pro9oca un corrimiento en toda la prote!na. 2arco nico de lectura% no hay solapamiento. -n algunos 9irus s! puede ocurrir. A la hora de sintetizar una prote!na a partir de in$ormacin simple, se debe probar qu" secuencia tiene sentido. Seneralmente, si se empieza donde no es, aparecer(n codones de stop antes o despu"s. -l marco de lectura est( abierto, y e3isten seis posibilidades para comenzar la traduccin. -s casi uni9ersal% es compartido por todos los organismos procariotas y eucariotas. Sin embargo, en las mitocondrias es di$erente. -s uni9ersal para los genomas nucleares.

&/Nt: los A=+t son los 9erdaderos traductores de la in$ormacin gen"tica. Son mol"culas pequeVas (AF&EF nucletidos), que tienen una estructura relati9amente bien conser9ada. Adoptan una estructura secundaria caracter!stica en ho5a de tr"bol con una importante polaridad. 1osee dos zonas imprescindibles% & -l anticodn% tiene una estructura de tres nucletidos que aparea con el codn, siempre en sentido F7/7. -s un apareamiento antiparalelo. & -l e3tremo /7% es capaz de unir amino(cidos. -n el interior de la c"lula adopta una estructura terciaria en $orma de ., tambi"n muy conser9ada, consistente en cruces entre los brazos. 2uchas posiciones de bases se encuentran coner9adas tambi"n, con bases modi$icadas (pseudouridina). -l A=+t su$re modi$icaciones post&traduccionales que a$ectan a su $uncin% & 2odi$icaciones de la uridina (diuridina). & 2odi$icaciones de la adenosina% se sustituye el grupo +)> por *,, modi$ic(ndose a inopina. )antidad de &/Nt en procariotas 4 eucariotas: como e3isten >6 amino(cidos, supuestamente deber!an e3istir >6 A=+t distintos. Sin embargo, el nmero medio de A=+t en bacterias oscila entre /6& 6, y en c"lulas eucariontes animales hay hasta 166 distintos, por encima del nmero de amino(cidos y codones. -3iste as! una gran 9ariabilidad del A=+t en las especies. -n animales, un codn puede ser reconocido por 9arios A=+t. -n bacterias, un A=+t puede reconocer 9arios codones. -sta 9ersatilidad se debe a5ustar $inamente para que no aparezcan $allos. $iptesis del balanceo: segn esta hiptesis postulada por *racI, los A=+t se aparean con los codones del A=+m mediante el anticidn. .a primera base del codn de un A=+m (en F7 /7) se aparea con la tercera base del anticodn. Si el triplete del anticodn slo reconociera un codn mediante apareamiento, tendr!a que e3istir un A=+t distinto para cada codn, y no es as!. Al ser el cdigo gen"tico degenerado, normalmente la tercera base suele ser irrele9ante. -l primer y el segundo apareamiento han de ser por tanto estrictos, para especi$icar el amino(cido. Sin embargo, el tercer apareamiento puede 9ariar con una cierta $le3ibilidad. 1or e5emplo% los anticodones de algunos A=+t contienen el nucletido inosinato (:), cuya base es la hipo3antina, que $orma puentes de hidrgeno con B, * y A, aunque estos apareamientos son m(s d"biles que los habituales Si* y A@#. )ay cierta $le3ibilidad en los apareamientos codn&anticodn. 0e este modo, un solo A=+t es capaz de leer distintos codones (cuando hay hipo3antina, /). Adem(s, se pueden establecer distintas uniones% & Bnin de : a A, B y * (> puentes de hidrgeno). & Bnin de S@B. -n algunos sistemas hay m(s A=+t que codones o al re9"s. #ambi"n puede haber m(s de un A=+t que se una a un codn, produci"ndose pequeVas 9ariaciones en su secuencia o incluso en el anticodn (A=+tala1, A=+t ala>, A=+tala/).

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"istema de carga de amino#cidos: $uncionalmente, el amino(cido se une al e3tremo /7, por e5emplo, el A=+t ala1 ha de unirse a ala en /7, $ormando el ala&A=+t ala1. 0e5a entonces de llamarse A=+t y pasa a llamarse aminoacil&A=+t (en este caso, alanil&A=+t ala1). -l sistema de reconocimiento de los amino(cidos debe ser per$ecto (este A=+t ala1 no puede aparearse con glu o phe). & )ay 9arios A=+t que reconocen el mismo amino(cido. Se agrupan en $amilias (A=+t isoaceptores). -l sistema de carga tiene que reconocer a todos los isoaceptores. & -l proceso es lle9ado a cabo por las aminoacil&A=+t sintetasas (A=S), un sistema multienzim(tico que cataliza la reaccin% aaG&/NtaaG&.P aa,&/NtaaG&1PGPPi. .a accin de las piro$os$atasas permitir( que el proceso sea termodin(micamente $a9orable y la reaccin est" muy desplazada hacia la $ormacin del aminoacil&A=+t. -3isten >6 aminoacil&A=+t sintetasas, que coinciden lgicamente con el nmero de amino(cidos. Son prote!nas que surgieron muy pronto en el proceso e9oluti9o. Su mecanismo de accin tiene dos pasos% o Acti9acin y adenilacin% consiste en un ataque nucleo$!lico del grupo *,,) al 1 del A#1. Se $orma un aa&A21 con liberacin de 11i. -l intermediario se $orma dentro del propio enzima (&/"GaaG&.P &/"'aa,&1P(GPPiA -l proceso se hace en presencia de 2g><. o *arga del A=+t (aminoacilacin)% ataque nucleo$!lico del grupo /7 ,) del A=+t al grupo carbonilo del aa&A21. #rans$erencia del aa al A=+t $ormando el aminoacil&A=+t y liberacin de A21% &/NtaaG&/"'aa,&1P( aa,&/NtaaG&1PG&/"A &/": las prote!nas A=S pueden ser de dos clases% & *lase :% introducen el aa en la posicin >7 ,) de la ribosa. & *lase ::% introducen el aa en la posicin /7 ,) de la ribosa. -structuralmente, las A=S tienen las siguientes caracter!sticas% & Sitio de unin del A#1. & Sitio de unin del amino(cido espec!$ico. & Sitio de reconocimiento a la $amilia de A=+t isoaceptores. -s un enzima muy so$isticado, con sitios de unin muy espec!$icos. .a trans$erencia del aa al A21 pro9oca un cambio con$ormacional en el enzima que permite la entrada del A=+t. A continuacin tiene lugar la reaccin de trans$erencia. -stas enzimas tienen tambi"n acti9idad correctora% & Si equi9ocan el amino(cido, al $ormarse el aa&A21, se hidrolizan. & Si equi9ocan el A=+t, al $ormarse el aa&A=+taa, se hidroliza. -l sitio de unin al A#1 es est(ndar. -l reconocimiento de los A=+t necesita unos criterios de seleccin muy so$isticados, ya que todos se parecen. -stos criterios son relati9amente 9ariables, ya que cada A=S utiliza un mecanismo, $undamentalmente interacciones espec!$icas con el anticodn, aunque tambi"n una seleccin reconociendo otras bases. =ealmente, este proceso en el interior celular se lle9a a cabo mediante choques moleculares al azar entre estas mol"culas, que se encuentran en el citoplsma. Si el choque es incorrecto, la unin se hace inestable y se rompe. Si el choque es correcto, la unin es $uerte y la estructura del enzima cambia estabilizando la interaccin. BIO"3N.E"I" %E P/O.E3N&": es un proceso que emplea el N68 de la energ!a de una c"lula. Se lle9a a cabo en los ribosomas, donde se produce el monta5e en cadena. /ibosomas: los ribosomas son la aut"ntica maquinaria de s!ntesis de las prote!nas. Son estructuras $ormadas por dos subunidades% una grande y otra pequeVa% Subunidad 1rocariontes -ucariontes *. S. A=+r 1rote!nas *. S. A=+r 1rote!nas 2ayor F6S FS, >MS /M M6S FS, F7ES, N >ES 2enor /6S 1MS >1 6S 1ES // -l A68 del ribosoma est( constituido por el A=+r, que es estructural. .os ribosomas presentan una estructura secundaria muy conser9ada, pleg(ndose de $orma muy comple5a. -9oluti9amente, esta mol"cula se encuentra muy conser9ada, en cuanto que lle9a a cabo una $uncin esencial.

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Biosntesis de protenas en procariontes: es casi igual que en eucariontes. .as prote!nas se sintetizan en el ribosoma, el cual se organiza de tal manera que quedan tres huecos en su estructura tridimensional% -, 1 y A. & -n A se coloca el aminoacil&A=+t. & -n 1 se $orma el peptidil A=+t. & -n - salen los A=+t. .a traduccin atra9iesa tres etapas bien de$inidas% iniciacin, elongacin y terminacin. #odas las etapas requieren A=+m, ribosomas y aa&A=+t. -n cada etapa inter9ienen $actores de traduccin. Iniciacin: el ribosoma tiene que reconocer el codn de inicio de la traduccin en el A=+m. 1ara ello, recorre el A=+m en sentido F7/7 hasta encontrar el codn de metionina (ABS), que ser( el e3tremo +&terminal. 2et constituye el codn de inicio en todas las prote!nas, aunque tambi"n hay met internas. -n procariotas, la met inicial se reconoce por una secuencia espec!$ica que la precede% la ca5a de Shine&0algarno (BAASSASS). -sta ca5a es $undamental porque el e3tremo /7 del A=+r 1MS de la subunidad pequeVa termina en su secuencia complementaria (ABB**B**). 1or una interaccin espec!$ica entre estas dos secuencias complementarias, la subunidad pequeVa capta al A=+m y lo coloca en un sitio a una distancia $i5a para ABS. As! pues, es la subunidad pequeVa la que une el A=+m al ribosoma. -3isten dos A=+tmet% & Bno reconoce las met para $ormar met&A=+tmet. & ,tro reconoce a la met iniciadora y la $ormila en +&terminal, dando lugar a $ormil&metionina. $2et&A=+t$2et se une al sitio de inicio del ribosoma y lle9a el primer amino(cido de la cadena que se 9a a sintetizar. #ienen una estructura di$erente. .a $2et&A=+t$2et slo reconoce al codn de inicio. -n la c"lula, los ribosomas pueden encontrarse ensamblados o por separado. .as subunidades se regulan por $actores de inicio de la traduccin (:;)% & :;/% es el $actor antiasociacin del ribosoma. 2antiene las subunidades disociadas e impide la s!ntesis. & :;e% es importante para que el A=+m se coloque sobre la subunidad /6S. 1) *uando las subunidades est(n disociadas, se une el A=+m, de una manera espec!$ica que de5a el codn ABS sobre el sitio 1. *uando se ha unido, se coloca el A=+t en su posicin, cargado con $ormil&metionina. -ste A=+t por s! mismo no interacciona con la subunidad pequeVa, sino que necesita un $actor de traduccin (:; >), una S#1asa, acti9a cuando est( unida a S#1. >) Se produce la entrada en el sitio 1 del :; >&S#1 para $ormar un comple5o de iniciacin de la traduccin. Se aparea con ABS, permitiendo la entrada slo al $2et&A=+t $2et. *uando esto ha sucedido, se hidroliza el S#1, quedando :;> inacti9o. -l primer codn queda en posicin 1 y el siguiente en posicin A, donde entrar(n los aminoacil&A=+t. Elongacin: consta de tres puntos% 1) -l aminoacil&A=+t, que lle9a el amino(cido correspondiente al segundo codn del A=+m lle9a unido una S#1asa (#u) que es un $actor de elongacin. -sto le permite aparearse con el codn en el sitio A. #odos los aminoacil&A=+t que no se aparean bien son reconocidos por el ribosoma y se eliminan. -s un punto de control $undamental. Si el aminoacil&A=+t es el correcto, el #u&S#1 se hidroliza y sale del ribosoma como #u&S01. -n el citoplasma interacciona con una prote!na #s, soltando el S01 y $ormando un comple5o #u&#s, el cual se une a S#1, obteni"ndose #u&S#1 y #s. -l #s es un $actor de elongacin que permite reciclar la A#1asa para que 9uel9a a ser acti9o. >) ;ormacin del enlace pept!dico. -l primer enlace pept!dico se $orma siempre entre metionina y el segundo amino(cido. -l p"ptido queda unido al A=+t de la segunda posicin. -s necesaria una reaccin que genere un enlace pept!dico, catalizada por un enzima (peptidil trans$erasa). -sta acti9idad catal!tica reside en el A=+r >/S. /) #ranslocacin% en este momento, el ribosoma se desplaza un codn hacia el e3tremo /7 del A=+m. -l mo9imiento se produce por una contraccin que es posible gracias a un $actor de elongacin (-;S). -l desplazamiento pro9oca que el A=+t quede en el sitio -, el p"ptido en el sitio 1 y el sitio A 9ac!o con un codn preparado para repetir el proceso, el cual ocurre tantas

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9eces como sea necesario. -l p"ptido $ormado es una estructura con un A=+t y muchos amino(cidos ordenados. .erminacin: hay tres codones que especi$ican seVales de terminacin. -n esta $ase inter9ienen $actores de terminacin que entran en el sitio A% & =;1 (BAA, BAS). & =;> (BAA, BSA) & =;/&S#1 -stas prote!nas tienen una estructura similar al A=+t, lo que les permite entrar en el sitio A. -l con5unto =;1<=;/&S#1 contribuye a la separacin de las subunidades ribosmicas, la salida de A=+m y la hidrlisis del p"ptido, que queda libre. Biosntesis de protenas en eucariontes: es similar a la bios!ntesis en procariontes. .os $actores de inicio, elongacin y terminacin son distintos. & .a $ase de iniciacin es m(s comple5a. -n procariontes se caracteriza por la estructura F7&*a5a de Shine&0algarno&ABS&&. Sin embargo, en eucariontes, la regin F7 no traducida es muy grande (166&>66 nucletidos) y no hay ca5a de Shine&0algarno, por lo que el A=+m no se aparea con el A=+r de 1ES de la subunidad pequeVa. .a di$erenciacin del ABS iniciador 9iene $acilitada por la ca5a 4ozaI (S**A**ABS), una secuencia semiconser9aza. )ay un proceso de \scanning] desde F7 hasta ABS, realizado por la subunidad 6S. *uando el A=+m se une a la subunidad pequeVa lo hace con un gorro y prote!nas de unin a "ste. & Bn $actor de inicio de la traduccin es -:; (equi9alente a los :; procariotas). -:;& es un $actor multim"rico de inicio de la traduccin. -l $actor reconoce el cap F7 sobre el ribosoma. )ace un barrido de toda la zona F7 B#=, haciendo que la subunidad pequeVa se desplace por la regin no codi$icante y, a medida que a9ance, se encuentra con una estructura secundaria que es rota por la acti9idad helicasa de -:;& . & *uando se encuentra el ABS iniciador, se coloca en el sitio 1 y llega el primer A=+t&met que es el iniciador y tiene caracter!sticas estructurales que lo hacen nico. -n eucariontes no est( $ormulado. A partir de aqu! todo el proceso es id"ntico al procarionte, sal9o porque los A=+m eucariontes se traducen con los e3tremos F7 y /7 unidos, lo que $acilita el reciclado de ribosomas. .os e3tremos F7 cap y la cola de poliA est( asociados por -:;& &S. Son las subunidades ribosmicas las que se aparean y se enganchan r(pidamente otra 9ez. /egulacin de la traduccin: & 2ecanismo general% $unciona mediante la $os$orilacin de los $actores de inicio de la traduccin. Bn cambio en estos $actores pro9oca la transicin de un estado acti9o (des$os$orilado) a un estado inacti9o ($os$orilado). *uando los $actores est(n acti9os se produce la bios!ntesis. & 2ecanismos espec!$icos% inter9ienen prote!nas espec!$icas de unin a los e3tremos F7 B#= y /7 B#=. .a $uncin de estas prote!nas es regular la traducibilidad del A=+m. )ay circunstancias en las que muchos A=+m no se traducen. .a circunstancia m(s habitual est( relacionada con las estructuras secundarias de la regin F7 B#=, las cuales son reconocidas por prote!nas reguladoras cuya $uncin es eliminar el hierro (:01)% o Si aumenta ;e, se une a la trans$errina, el :01 est( inacti9a y el A=+m se traduce. o Si disminuye ;e, :01 est( acti9a, uni"ndose al A=+m y bloqueando la traduccin. Bna pequeVa 9ariacin en el ni9el de ;e puede suponer que un A=+m se traduzca o no. 1odificaciones post,traduccionales: una 9ez sintetizada, la prote!na ha de hacerse $uncional, adoptando la estructura adecuada. 1ara ello debe plegarse. -l plegamiento se produce mediante prote!nas chaperonas y chaperoninas. .a estabilidad de la prote!na es importante y est( regulada por el proteosoma.

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ACCI%N &O MONAL

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)omunicacin celular: para la e3istencia de seres pluricelulares, es necesaria la comunicacin entre sus c"lulas. -sta comunicacin intercelular puede darse de $ormas muy distintas% & 1or seVales qu!micas% la c"lula diana debe tener receptores espec!$icos para la seVal. & 1or prote!nas de membrana% una mol"cula unida a la membrana de una c"lula puede interaccionar con el receptor de una c"lula 9ecina. & Bniones SA1% son uniones de tipo canal que permiten el $lu5o de mol"culas de pequeVo tamaVo entre las c"lulas. -n atencin a la distancia a la que estas seVales operan, y a la a$inidad de los receptores, podemos distinguir entre distintos mecanismos de comunicacin% & 0ependiente de contacto% se corresponde con la comunicacin por prote!nas asociadas a la membrana. .a mol"cula se une a un receptor de otra c"lula, estando asociada a su 9ez a la primera c"lula. & Sin(ptica% es la $orma de seValizacin m(s r(pida (ms). Bna c"lula neuronal, por impulso el"ctrico, libera mol"culas (neurotransmisores) que son recibidas en la c"lula diana por receptores espec!$icos. .as c"lulas que inter9ienen en la sinapsis est(n muy pr3imas entre ellas, por lo que la hendidura sin(ptica es pequeVa por lo que los receptores no necesitan una a$inidad muy alta, sino que suelen operar a concentraciones del orden 16& 2. & -ndocrina% la seVal puede originarse en una c"lula le5ana (cm). .as mol"culas en9iadas por la c"lula emisora 9ia5an una larga distancia por el torrente sangu!neo. 1or esta razn, los receptores necesitan una gran especi$icidad y operan a concentraciones a partir de (preguntar). -s adem(s una respuesta m(s lenta (minutos). & 1aracrina% es un subtipo dentro de la seValizacin endocrina% la c"lula diana est( en un entorno pr3imo a la c"lula emisora. .a seVal 9ia5a distancias cortas, por lo que los receptores operan a concentraciones 16& &16&F 2, como ocurre en seValizacin sin(ptica. & Autocrina% es un caso especial de seValizacin. Se produce en c"lulas capaces de emitir seVales recibidas por ellas mismas. ,curre en c"lulas tumorales que se hacen independientes en su crecimiento de los $actores de crecimiento emitidos por otras c"lulas. -stos $actores son sintetizados y emitidos por ellas mismas para aumentar su masa celular. A continuacin procederemos a 9er las principales gl(ndulas endocrinas. Cl#ndulas endocrinas: & )ipot(lamo% se sita en la base del cerebro (gl(ndula neuroendocrina). o Sus neuronas producen seVales que desencadenan la accin hormonal. o Sus hormonas se conocen globalmente como hormonas liberadoras o inhibidoras. Su accin consiste en producir o reprimir hormonas producidas por la gl(ndula pituitaria. & Sl(ndula pituitaria% se encuentra $ormada por dos lbulos% anterior y posterior. 1roduce hormonas tr$icas (A*#), #S), ;S), .), o3itocina, 9asopresina). & Sl(ndula adrenal% est( constituida por% o *orteza% segrega cortisol y aldosterona. o 2"dula% segrega adrenalina. & Snadas% generan los estrgenos, andrgenos y progest(genos. & 1(ncreas% encargado de la homeostasis de glucosa. 1roduce insulina y glucagn. & Sl(ndula paratiroides% produce 1#). )omposicin de las hormonas: las hormonas tienen constituciones qu!micas muy distintas% & 1olipept!dicas% son prote!nas pequeVas, polip"ptidos con pocos amino(cidos y ba5o peso molecular. Seneralmente, se sintetiza una prohormona, la cual ha de su$rir un proceso de maduracin para ser $uncional. A este grupo pertenecen% o )ormonas pancre(ticas. o )ormonas del hipot(lamo. o )ormonas de la pituitaria. & -steroideas% son hormonas cuya estructura deri9a del colesterol. A este grupo pertenecen% o *ortisol. o -stradiol. o #estosterona. & 0eri9adas de la tirosina% son hormonas que deri9an de este amino(cido%

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o o

)ormonas tiroideas #/ y # . Adrenalina y +oradrenalina.

)lasificacin de las hormonas: esta clasi$icacin se puede lle9ar a cabo desde distintos criterios. Antiguamente, cualquier mol"cula qu!mica liberada por una c"lula. Actualmente, el concepto de hormona se restringe a cualquier sustancia emitida por una c"lula que al actuar sobre una c"lula diana induce un cambio. -n este sentido, es 9(lida la clasi$icacin de las hormonas atendiendo a su composicin, pero tambi"n atendiendo a su modo de operar en la c"lula diana% & 1or unin a receptores de la membrana. & 1or unin a receptores intracelulares. Funciones generales de las hormonas: & =eproduccin, crecimiento y desarrollo% o )ormonas se3uales% importantes en el desarrollo de los caracteres se3uales. o )ormonas tiroideas% inter9ienen en el crecimiento y desarrollo del cerebro. o )ormonas del crecimiento. & 2antenimiento del ambiente interno, 9olumen y presin sangu!nea% es una respuesta necesaria para a$rontar situaciones de estr"s (aldosterona), mantener la homeostasis de *a>< en el suero (9itamina 0, 1#)). & 1roduccin, utilizacin y almacenamiento de energ!a% insulina, glucagn, hormonas tiroideas, cortisol. .as hormonas regulan el metabolismo en situaciones determinadas. 0e este modo son responsables de que se den unos u otros procesos a ni9el de rgano. 0espu"s de comer suele aumentar la glucosa en sangre, y el p(ncreas libera una seVal de insulina que se une a receptores de membrana desencadenando seVales que tienen como ob5eti9o el descenso de estos ni9eles. .a accin hormonal suele darse en las siguientes $ases% s!ntesis, secrecin, transporte, deteccin y cambios en el metabolismo celular. Algunas hormonas se secretan a medida que se sintetizan, mientras que otras se almacenan en 9es!culas en espera de un est!mulo para su secrecin% & -n el caso de hormonas polipept!dicas, son solubles en el medio acuoso y son transportadas por el torrente sangu!neo sin otras estructuras asociadas. & -n el caso de hormonas esteroideas, no son solubles en medio acuoso y para ser transportadas necesitan asociarse a prote!nas. Bna 9ez la hormona llega a la c"lula diana y se une a los receptores espec!$icos induciendo un cambio, la hormona su$re un proceso de inacti9acin y es eliminada por el riVn. Perar9ua de la accin hormonal: generalmente, en la accin de muchas hormonas se produce una cascada, que implica a 9arias gl(ndulas. Bn e5emplo de esto son el hipot(lamo y la pituitaria, conectadas por un sistema cerrado. & -n respuesta a est!mulos e3ternos se produce una seVal transportada por neuronas que llega al hipot(lamo induciendo la liberacin de $actores liberadores. -stos compuestos se liberan en cantidades minsculas (ng) porque 9ia5an un espacio muy pequeVo hasta la pituitaria. -stos $actores se unen a receptores espec!$icos de c"lulas diana en la pituitaria. & .as c"lulas diana de la pituitaria, en respuesta a la seVal, producen hormonas tr$icas en mayores cantidades (g) que 9ia5an nue9amente a otras gl(ndulas diana a tra9"s de la sangre% o Si el $actor tr$ico es #S), la gl(ndula diana es el tiroides y se acti9a la secrecin de #/ y# . o .o mismo ocurre con A*#) (gl(ndulas adrenales), .) y SS) (gnadas). -stas hormonas se segregan en concentraciones muy superiores (mg). 1or tanto, se secretan cantidades crecientes de hormonas nggmg. -sta cascada de seValizacin debe estar muy regulada. )ay que secretar la cantidad necesaria para producir el e$ecto y slo el tiempo necesario. 1ara ello e3isten circuitos de control negati9os que, una 9ez producida la seVal y el e$ecto, producen otras seVales que actan inhibiendo las primeras impidiendo que se prolongue su accin. -stos circuitos inhibitorios pueden ser% & .argos% la hormona $inal producida hace que cese la acti9idad del hipot(lamo o la pituitaria. & *ortos% el e$ecto inhibitorio est( producido por la pituitaria sobre el hipot(lamo.

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"ntesis de hormonas: la s!ntesis de hormonas depende de su naturaleza qu!mica% & -n el caso de p"ptidos y prote!nas (insulina y glucagn) son solubles en medio acuoso y se sintetizan como precursores de tamaVo molecular mayor. #iene gran importancia el sistema de la pro&opiomelanocortina. Bn nico gen codi$ica hasta ocho hormonas di$erentes, ya que da lugar a una poliprote!na y, dependiendo del tipo de c"lula en la que se e3prese, la poliprote!na da lugar a unos deri9ados u otros. -sto depende de la dotacin de proteasas que tenga la c"lula, que producen cortes y por tanto hormonas di$erentes segn el te5ido.

/adioinmunoensa4o: es una t"cnica que nos permite a9eriguar la concentracin de hormonas circulantes. *onsiste en% 1) -n una placa de pl(stico se pegan anticuerpos que reconocen la hormona que queremos medir. >) Se aVade una cantidad constante de hormona radiacti9a marcada. /) Se aVade una cantidad de hormona $r!a% a. Si aVadimos poca hormona $r!a, tras la9ar la placa y contar el anticuerpo habr( unido m(s mol"culas de hormona radiacti9a. b. A medida que aumentemos la cantidad de hormona $r!a, la cantidad que se una a anticuerpos ser( mayor. 0e este modo se $abrica una cur9a patrn, que permite e3trapolar la cantidad de hormona. $O/1ON&" E".E/OI%E&": deri9an directamente del colesterol, un tetraciclo con un grupo hidro3ilo en */. -sta mol"cula se almacena en $orma de "steres de colesterol (-*) en gotas. -stos "steres se utilizan para la s!ntesis de hormonas esteroideas, principalmente hormonas se3uales y adrenales% & )ormonas se3uales% o -stradiol% pertenece al grupo general de los estrgenos. o #estosterona% pertenece al grupo de andrgenos. o 1rogesterona% pertenece a los progest(genos. .as dos primeras se producen en las gnadas, aunque marginalmente tambi"n pueden sintetizarse a ni9el de la gl(ndula adrenal. .a progesterona se sintetiza en el o9ario y la placenta y es $undamental para el embarazo. & )ormonas adrenales% dentro del grupo de los corticoides% o *ortisol% pertenece a los glucocorticoides. o Aldosterona% pertenece a los mineralocorticoides. o 1, >F dihidro3i&colecalci$erol, que es metabolito acti9o de la Titamina 0, que se $orma deri9ada del colesterol en la piel, h!gado y riVones. "ntesis de hormonas esteroideas: a partir del colesterol se obtiene la pregnenolona, un precursor comn a las hormonas esteroideas. A partir de la pregnenolona se sintetiza la progesterona, un precursor comn que se encuentra en la corteza adrenal y el cuerpo lteo. .a s!ntesis se produce a ni9el de corteza adrenal y gnadas. Son hormonas no hidrosolubles, y 9ia5an asociadas a prote!nas plasm(ticas. -n su s!ntesis inter9ienen monoo3igenasas u o3idasas de $uncin simple (1& F6). -l paso limitante de la s!ntesis es el corte de la cadena lateral del colesterol en la mitocondria. #odas las

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hormonas esteroideas pierden esta cadena lateral por lo que siempre tienen menos * que el colesterol% & 1rogesterona, cortisol y aldosterona (>1*). & #estosterona (1N*). & -stradiol (1E*). -stos cambios indican que hay prote!nas con acti9idad enzim(tica implicadas en la s!ntesis de estos compuestos. -stas prote!nas son% & :somerasas% cambian dobles enlaces. & 0eshidrogenasas. & .iasas. & )idro3ilasas. -l citocromo 1& F6 tiene un pico de absorcin a F6 nm. .a reaccin que cataliza este tipo de enzimas es /$GN&%P$GO< /O$GN&%PG$<OA Son las monoo3igenasas u o3idasas de $uncin mi3ta, porque o3idan al grupo =) gracias al o3!geno. -l donador de electrones es el +A01). Bno de los (tomos de o3!geno 9a al sustrato y otro al agua. 1or eso se llaman monoo3igenasas. -l +A01) pro9iene principalmente de la 9!a de las pentosas $os$ato. -l citocromo 1& F6 realiza las tres reacciones que permiten cortar la cadena lateral del colesterol en la mitocondria% & )idro3ilacin de *>6 (se gastan >+A01) y >,<) & )idro3ilacin de *>> (el mismo gasto). & Acti9idad liasa que corta la mol"cula &ccin de las hormonas esteroideas: la hormona A*#) acti9a la s!ntesis de cortisol. -l est!mulo procede de la pituitaria, que $abrica una seVal hormonal. .a hormona A*#) se une a un receptor espec!$ico de la corteza adrenal desencadenando una serie de e9entos dentro de la c"lula (segundos mensa5eros)% & -stas seVales tienen como ob5eti9o $ormar colesterol libre a partir de los -* almacenados en $orma de gotas, gracias a la acti9acin de una prote!n quinasa.. -ste colesterol libre entra en la mitocondria de c"lulas de la corteza adrenal. All! se encuentra el 1& F6 que corta su cadena lateral y ocurre una cadena de reacciones que acaban dando cortisol. & -l cortisol se secreta al torrente sangu!neo y e5erce su accin en c"lulas con receptores espec!$icos. 1ara 9ia5ar por la sangre necesita asociarse a prote!nas plasm(ticas (albmina). .os receptores de hormonas esteroideas son prote!nas ubicadas dentro de la c"lula, ya sea en el citosol o 5unto al A0+. *uando se produce la hormona esteroidea, "sta atra9iesa la membrana de la c"lula diana y se une al receptor correspondiente, e5erciendo su accin como un $actor de transcripcin dependiente de ligando. -stos $actores de transcripcin se unen al A0+ en las secuencias promotoras teniendo lugar la transcripcin y la traduccin. 1or tanto, la mayor parte de la accin hormonal esteroidea acti9a la s!ntesis de nue9as prote!nas (la testosterona acti9a la s!ntesis de prote!nas del esperma). Funciones de las hormonas esteroideas: )ormona -stradiol #estosterona *ortisol Aldosterona 1rogesterona ;uncin =egula la secrecin de gonadotropinas en el ciclo o9(rico y mantiene el endometrio. 1articipa en la di$erenciacin de las gl(ndulas mamarias. 1roduce prote!nas del esperma en c"lulas de Sertoli, adem(s de di$erenciacin de caracteres se3uales secundarios. 1ermite adaptarse al estr"s, apoptosis de lin$ocitos #, e$ectos antiin$lamatorios y sobre el metabolismo (a concentraciones altas). 1romuebe absorcin de +a< y eliminacin de 4< en el riVn. Aumenta la presin sangu!nea y la 9olemia. 2antiene el endometrio para la implantacin del cigoto.

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)ortisol: el principal papel del cortisol es asegurar la asequibilidad de glucosa. 1roduce una reduccin moderada del consumo de glucosa por las c"lulas, aunmentando la gluconeog"nesis y reduciendo el consumo de glucosa, ele9ando as! la glucemia. Adem(s tiene otros e$ectos% & Aumento del catabolismo de las prote!nas en casi todos los te5idos (sobre todo msculo), e3cepto el h!gado. Se obtienen as! mayores cantidades de amino(cidos. -n el h!gado se estimula la entrada de amino(cidos que se utilizan como precursores gluconeog"nicos. -n situaciones de ayuno, la glucosa se genera degradando la propia musculatura. & Aumento de la s!ntesis de 1-1*4, una enzima gluconeog"nica que se regula a ni9el de s!ntesis. & 2o9ilizacin de (cidos grasos del te5ido adiposo hacia el plasma, liber(ndose Acetil*oA que permite obtener A#1. .a liberacin de cortisol est( relacionada con situaciones de estr"s, tales como traumatismos, in$ecciones, calor o $r!o intenso, inter9encin quirrgica o en$ermedad. @itamina %: a $inales del s. YT::: y principios del s. Y:Y, en pa!ses con carencia de sol, se produc!a raquitismo por de$iciencia de 9itamina 0, la cual tiene un papel muy importante en la consolidacin del esqueleto. Su s!ntesis est( ayudada por la radiacin BT del sol. -sta radiacin induce la $ormacin de pro9itamina 0 en la piel que es trans$ormada en 1, >F dihidro3i&colecalci$erol ($orma acti9a) por hidro3ilasas del h!gado (,) 1) y el riVn (,) >F), sin que se produzca corte de la cadena lateral. .as hidro3ilasas son monoo3igenasas de $uncin mi3ta. .a 9itamina 0 tiene como $unciones principales% & 2antener la homeostasis de *a><% el *a>< necesita estar presente en el suero a concentraciones de 16 mgD166 m.. -sto es importante porque el *a>< es un catin implicado en procesos $isiolgicos $undamentales como la transmisin del impulso ner9ioso, la coagulacin, la contraccin muscular o la $ormacin del componente mineral del esqueleto (hidro3iapatito). 1or esta razn es $undamental mantener su concentracin idnea, con los siguientes ob5eti9os% o ;a9orecer la captacin de *a>< por el intestino. o ;a9orecer la reabsorcin de *a>< por las c"lulas renales. o ;a9orecer la $ormacin del esqueleto seo. & -l hueso es un te5ido muy acti9o que se $orma y se de$orma continuamente por osteoblastos y osteoclastos, respecti9amente. .a 9itamina 0 $a9orece la accin de los osteoblastos y est( implicada en la de los osteoclastos, lo cual puede parecer una contradiccin, & .as de$iciencias de 9itamina 0 pueden a$ectar al $ol!culo piloso y pro9ocar alopecia e incluso algunos c(nceres. .a homeostasis del *a>< se encuentra regulada tambi"n por otras hormonas como la parati$oidea (1#)) y la calcitonina (tiroidea).

$ormonas tiroideas: el tiroides se encuentra cercano a la tr(quea y $ormado por dos lbulos. 1roduce las hormonas tiroideas #/ y # . -stos lbulos est(n $ormados por c"lulas epiteliales en $orma de $ol!culo, en cuyo interior hay un coloide, la tiroglobulina, una prote!na de alto peso molecular (MF6 40a) que se caracteriza por mltiples residuos tirosina (166&116). -stos residuos deben ser yodados (unos >F) para $ormar las hormonas tiroideas. 1ara ello se necesita una ingestin de yodo 67>&67F mg diarios.

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1ara la actuacin de las proteasas, la tiroglobulina en $orma de coloide se endocita por la c"lula epitelial y se $usiona a un lisosoma primario, que posee proteasas que digieren la tiroglobulina. #/ y # 9ia5an por el capilar hasta el torrente sangu!neo. #/ es cinco 9eces m(s acti9a que # . Ambas hormonas se liberan al torrente, pero # se trans$orma en # por accin de una desoidaza. #odos los pasos son estimulados por la hormona #S) de la hip$isis, principalmente la captacin de : & en contra del gradiente. .as c"lulas tiroideas tienen receptores espec!$icos de #S) en la membrana. .os receptores de hormonas tiroideas son $actores de transcripcin dependientes de ligando, cuyo mecanismo de accin se aseme5a al de las hormonas esteroides. Sus principales $unciones son% & *recimiento y desarrollo% sobre todo del sistema ner9ioso. -l aporte de hormonas tiroideas es $undamental en la gestacin y los rimeros meses de 9ida ya que una diana principal es la produccin de muelita, que de otra manera es de$ectuosa. ,tras $unciones neuronales est(n tambi"n controladas por estas hormonas. & Aumento del consumo de ,> al producir una mayor contraccin cardiaca. )ay organos como las gnadas, el cerebro y el bazo a los que no a$ecta esta propiedad y no aumentan su consumo de ,> por induccin del tiroides. & Aumento de la liplisis en el te5ido adiposo. .os desequilibrios cuantitati9os de hormonas tiroideas son importantes% & -l hipotiroidismo reduce el metabolismo basal pro9ocando letargia, ausencia de sudoracin y apetito reducido. & -l hipertiroidismo acelera el metabolismo basal, aumenta la temperatura corporal, la acti9idad intestinal, induce p"rdida de peso e hiperacti9idad. 0iariamente, se liberan unos E6 g de hormonas tiroideas. Eicosanoides: son una serie de compuestos con una interesante acti9idad en los te5idos (produciendo 9asodilatacin y 9asoconstriccin), sobre el dolor y sobre la agregacin plaquetaria. Se denominan de esta manera porque tienen >6* y su estructura recuerda al (cido prostanoico (ciclopentano<> cadenas ali$(ticas). & 1rostaglandinas% presentan un anillo ciclopentano con cadenas ali$(ticas insaturadas y un ,) en el *1F. & #rombo3anos% presentan un anillo de o3ano. & .eucotrienos% presentan tres dobles enlaces y una estructura abierta. #odos los eicosanoides se sintetizan a partir del (cido araquidnico, que $orma parte de algunos $os$ol!pidos. .a $os$olipasa A acta en los $os$ol!pidos liberando el resto correspondiente, el (cido araquidnico, el cual da lugar a eicosanoides por dos 9!as% & T!a c!clica% comienza por la accin de la prostaglandina sintetasa, dando lugar a prostaglandinas y trombo3anos. & T!a secundaria% implica enzimas que dan lugar a los leucotrienos. .a prostaglandina sintetasa tiene un resto serina importante para la cat(lisis. & .a serina, por accin del (cido acetilsalic!lico se acetila y se inacti9a. *uando no est" acetilada, es acti9a. -ste es el $undamento que 5usti$ica la accin de aspirina, ibupro$eno y otros compuestos que inacti9an las prostaglandinas. )ay drogas que a$ectan a la acti9idad prostaglandina sintetasa. & .os glucocorticoides inhiben la accin de la $os$olipasa A mediante la s!ntesis de prote!na lipocortina, que la inhibe. 0e este modo, no se produce un (cido araquidnico ni eicosanoides. .os eicosanoides presentan un mecanismo de accin paracrino ya que actan en el lugar donde se producen. +o actan uni"ndose a un receptor intracelular sino a un receptor de membrana. .os eicosanoides se producen en todas las c"lulas menos los eritrocitos. -l (cido araquidnico tiene como precursor el (cido linoleico, el cual slo podemos obtener mediante ingesta.

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-icosanoide 1rostaglandinas #rombo3anos .eucotrienos

#e5ido 2astocitos, *orazn, =iVn, ktero 1laquetas 2astocitos, 'as$ilos

-$ecto :nhiben la agregacin plaquetaria, producen 9asodilatacin y 9asoconstriccin, aumentan la contraccin :nducen la agregacin plaquetaria y la 9asoconstriccin :nducen 9asodilatacin y broncoconstriccin

1ecanismo de accin de los receptores de hormonas tiroideas 4 esteroideas: las c"lulas poseen receptores para hormonas deri9adas del colesterol (glucocorticoides, mineralocorticoides, progest(genos, hormonas gonadotrpicas, estradiol, 9itamina 0), #/ y deri9ados de la 9itamina A, $undamentalmente el (cido cis&retinoico. +o todas las c"lulas poseen receptores para este tipo de hormonas. .a especi$icidad de respuesta se debe a que las distintas c"lulas tienen distintos receptores, que se denominan como el nombre de la hormona que e5erce el e$ecto<= (S=% receptor de glucocorticoides). Su mecanismo b(sico de accin es el siguiente% 1) .os receptores pueden estar en el citosol. All! se unen a la hormona y 9ia5an al ncleo donde se unen al A0+, de manera dim"rica en la zona del promotor. -stos son los receptores de hormonas esteroideas. >) .os receptores pueden estar unidos al A0+ en ausencia de hormona. Si no hay hormona, la transcripcin est( inhibida. *uando la hormona se une, acti9a la transcripcin. Son los receptores de 9itamina 0 y hormonas tiroideas. Elementos de respuesta: las secuencias de A0+ a las que se une el comple5o hormona&receptor se llaman elementos de respuesta (=-). .as =- son zonas que pueden estar en regiones reguladoras cercanas o le5anas al inicio de transcripcin. -stas =- permiten que se unan a ellas los $actores de transcripcin del gen. -l =- se nombra por la sigla del comple5o hormonal<=- (S=-% =- de glucocorticoides). .os elementos de respuesta tienen las siguientes caracter!sticas% & -st(n $ormados por dos grupos pequeVos de seis nucletidos separados entre s! por un nmero 9ariable de nucletidos no relacionados (unos ). & Se organizan como% o 1al!ndromos in9ertidos% son secuencias del A0+ en las cuales, la lectura F7 /7 de ambas cadenas es id"ntica. .as secuencias palindrmicas est(n separadas por nucletidos en nmero indeterminado. -l sitio de reconocimiento tiene esta estructura. -l =- est( $ormado por dos mitades que se unen a receptores de $orma dim"rica. A estas secuencias se unen hormonas tiroideas y esteroideas. o =epeticiones directas% es una secuencia de seis nucletidos separados por un nmero de nucletidos de una repeticin id"ntica a la anterior. A estas repeticiones se unen hormonas tiroideas y 9itamina 0. .os comple5os hormona&receptor se unen en $orma de d!meros (homod!meros o heterod!meros). Estructura de los receptores: en ellos se distinguen tres dominios% & 0ominio amino&terminal% en "l hay determinantes que permiten la acti9acin de la transcripcin, as! como prote!nas que interaccionan con $actores generales de la transcripcin. & 0ominio carbo3i&terminal% en "l hay secuencias que permiten la unin del ligando. & 0ominio central% en "l hay determinantes que permiten la unin a A0+ (en el =-). -sta regin se encuentra $ormada por dos dedos de Zinc. -l zinc est( coordinado con cuatro cisternas. o -l primer dedo determina la especi$icidad de unin al A0+. Segn la secuencia de amino(cidos del dedo, se une a un A0+ u otro. .os amino(cidos de su base suelen ser glutamato y glicina, por lo que tienen especi$icidad para el elemento de respuesta a estrgenos. Si por mutag"nesis se sustituyen por serina y glicina, "stos tienen especi$icidad para el =- de glucocorticoides. Se unen por el surco mayor de la doble cadena de A0+. o -l segundo dedo controla la dimerizacin.

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Se ha encontrado un grupo de receptores que en ausencia de hormona, ya se encuentran unidos al A0+, a su zona =- de $orma heterodim"rica. & -n ausencia de hormona, el d!mero de receptor interacciona con una serie de prote!nas, los correpresores, que permiten la interaccin de histonas desacetilasas que compactan la cromatina por lo que no se produce transcripcin. 0e este modo hay represin en la transcripcin del gen. & *uando la hormona se une al receptor, hay un cambio con$ormacional en el receptor. -l cambio desplaza a los correpresores. Su lugar es ocupado por coacti9adores. -stos atraen acetilasas que acetilan las histonas por lo que se descompacta el A0+ y se une la maquinaria basal de transcripcin. *omentar e3perimentos de luci$erasa y temo3i$en. /eceptores de hormonas polipeptdicas: las hormonas polipept!dicas (catecolaminas y hormonas pancre(ticas) e5ercen un papel que depende del tipo de receptor al que se unan. -stos receptores se sitan en la membrana plasm(tica. Son prote!nas que se e3presan en la membrana, de cuatro tipos% & Acopladas a prote!na S% permiten acti9ar o inhibir enzimas o modular la apertura de canales. & *anales inicos% permiten el paso de iones y son capaces de generar un potencial el"ctrico por cambio de potencial de membrana. :mplicados en la transmisin del impulso ner9ioso. & =eceptores con acti9idad enzim(tica% son prote!nas transmembrana con dominios e3tracelulares e intracelulares (con acti9idad catal!tica). #ienen acti9idad tiros!n&quinasa, ser!n& treon!n&quinasa y guanilato&ciclasa. & =eceptores sin acti9idad enzim(tica que se asocian a prote!n quinasas (tiros!n&quinasas) para transmitir la seVal. /eceptores acoplados a protena C: tienen tres elementos% 1) Sensor de la seVal (receptor)% es una prote!na con hasta siete dominios transmembrana (serpentina). a. Su parte e3tracelular tiene determinantes que permiten la unin de ligando. *uando el ligando se une se produce un cambio con$ormacional y se transmite la seVal al interior de la c"lula. b. Su parte intracelular produce la acti9acin de las prote!nas transductoras. 2) #ransductor de la seVal% es una prote!na intermedia entre el receptor y la prote!na que genera el segundo mensa5ero. Ta a transmitir la seVal hasta la prote!na e$ectora. -s la prote!na S, llamada as! porque una de sus subunidades une nucletidos de guanina. Su $orma es trim"rica de esta composicin% JK. .a subunidad puede presentarse de las siguientes maneras% a8 &S01% $orma inacti9a. ;orma un heterotr!mero con las tres subunidades unidas. -8 &S#1% $orma acti9a. *uando la seVal se une al receptor, y se disocian y se intercambia S01 por S#1. -l sentido de este mecanismo de accin es que, al estar ligada a S#1, posee una con$ormacin que permite interactuar acti9ando a la prote!na e$ectora. .a prote!na S tiene una modi$icacin lip!dica que le permite anclarse a la membrana. +o obstante, no es una prote!na transmembrana. /) 1rote!na e$ectora% recibe la seVal y $orma el segundo mensa5ero. -s importante la adenilato ciclasa, que cataliza la reaccin de $ormacin del A21c, un segundo mensa5ero que se $orma en respuesta a hormonas o ligandos. -l A21c es hidrolizado a A21 por las $os$odiesterasas, cuya presencia en la c"lula es de gran rele9ancia y permite una seVal transitoria. As! pues, el A21c es transitorio. .a concentracin oscila en torno a 16 &A 2. Al recibirse un est!mulo, hay un aumento de m(s de cinco 9eces en la concentracin. *uando las subunidades de la prote!na S se encuentran asociadas $ormando el heterotr!mero, la capacidad de disociacin del S01 es ba5a. Al interaccionar el ligando, se produce una modi$icacin en

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la con$ormacin del receptor que $acilita la unin de prote!na S. )ay un cambio en la subunidad por el que aumenta la 9elocidad de salida del S01. .a concentracin de S#1 es 16 9eces mayor a la de S01 en la c"lula y por tanto la probabilidad de que el sitio libre de S01 sea ocupado por S#1 es muy alta. .a subunidad &S#1 se une a la adenilato ciclasa acti9ando la s!ntesis de A21c. .a terminacin puede ocurrir de dos maneras% & 1or accin de la $os$odiesterasa. & .a subunidad tiene acti9idad enzim(tica intr!nseca (S#1asa). )idroliza el S#1 que lle9a unido, $ormando S01, y disoci(ndose de la adenilato ciclasa para $ormar el heterotr!mero. .a terminacin de la seVal es $undamental% & .a to3ina col"rica, producida por el clera, induce una modi$icacin en (post&traduccional). Bsando el +A0, trans$iere un resto A01&ribosa, produciendo ribosilacin de la subunidad y bloqueando su acti9idad S#1asa. 1or tanto, la adenilato ciclasa est( permanentemente acti9ada, pro9ocando una p"rdida masi9a de +a< y)>, (diarrea). & ,tros receptores tienen un mecanismo de accin parecido. .a bacteria pertussis (Sram &) produce la to3ina pertussis, causante de la di$teria. #rans$iere a i (una subunidad capaz de inhibir la acti9idad adenilato ciclasa) un resto de A01 ribosa produciendo una incapacidad del tr!mero para interaccionar con la prote!na e$ectora. &1Pc: es un segundo mensa5ero cuyo papel es acti9ar prote!n quinasas.

.a prote!n quinasa dependiente de A21c est( $ormada por dos subunidades reguladoras (=) y dos catal!ticas (*). .a 14A cataliza la trans$erencia de un $os$ato desde el A#1 a un resto aminoac!dico de una prote!na. 14A es una ser!n&treon!n quinasa. ;os$orila por tanto serina o treonina. -l proceso est( regulado por prote!n $os$atasas celulares que hidrolizan el resto $os$ato, 9ol9iendo a la situacin original. .a $os$orilacin de prote!nas es un proceso de introduccin de cargas negati9as que modi$ican la estructura proteica. .a prote!na intenta estabilizarse mo9iendo los amino(cidos cargados negati9amente (serina) hacia el sitio donde hay cargas positi9as, para neutralizarlas. Bn e5emplo claro lo constituye el mecanismo de actuacin de la glucgeno $os$orilasa quinasa (S;4)% & .a S;4 se acti9a por $os$orilacin. & .a S;4 acti9a por $os$orilacin a la glucgeno $os$orilasa (S;) que degrada el glucgeno. 14A puede adem(s 9ia5ar al ncleo, donde $os$orila $actores de transcripcin, acti9(ndolos. & .os genes con promotores que se acti9an con A21c tienen =- denominados *=-. & .os $actores que se unen a los *=- se denominan *=-', y son prote!nas que se $os$orilan y se unen al A0+ en *=- para modular la e3presin del gen (1-1*4). Otros receptores acoplados a protena C: presentan el mismo mecanismo de $uncionamiento pero son otros receptores, tambi"n de tipo serpentina. Antes, la subunidad se denominaba F, pero ahora se denomina q, y la seVal es transmitida a la $os$olipasa * (1.*) cuyos segundos mensa5eros son el diacilglicerol (0AS) y el inositol tri$os$ato (:1/).

-l 1:1> est( en la membrana plasm(tica. .a acti9acin de 1.* produce la rotura del compuesto. -l :1 / se mue9e dentro de la c"lula 9ia5ando al =-, donde hay un canal sensible a su unin que permite la salida de *a><, aumentando as! la concentracin intracelular de *a><. -l *a>< acti9a otra prote!n quinasa, la 14*. Sin embargo, "ste no es su nico papel, sino que se une a prote!nas ligantes de *a>< & 1rote!nas tampn de *a><, que se unen a "l y permiten su disminucin en concentracin en el citoplasma. .a seVal de subidas en la J*a><K tiene que ser transitoria. & 1rote!nas que median la accin del *a>< como segundo mensa5ero, como la calmodulina, una prote!na de ba5o pm@1A, con dos con$ormaciones di$erentes% o Sin *a>< (inacti9a).

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*on *a>< (acti9a)% posee cuatro sitios de unin a *a><. -ste in induce un cambio en la con$ormacin posibilitando la interaccin entre calmodulinas y otras prote!nas a las que acti9a. -stas prote!nas diana constituyen la ltima respuesta a la J*a><K intracelular. 0estacan prote!nas A#1asas de *a><, $os$odi"ster $os$atasas y prote!n quinasas dependientes de *a><&*almodulina (ser!n&treon!n quinasas) como la *A2 quinasa, abundante en el cerebro y con un importante papel en la memoria espacial. .a liberacin de calcio intracelular est( mediada por% & 'ombas A en la membrana plasm(tica. *on gasto energ"tico (A#1) sacan *a >< $uera de la c"lula. & Antiporte *a><D+a< en la membrana celular. & 0entro de la propia c"lula hay mecanismos que permiten introducir *a >< en el =-. -n la membrana del =- hay una bomba de *a><. .a mitocondria puede actuar como reser9orio. & 1rote!nas ligantes del *a><. o Interacciones hormona,receptor: los receptores son sitios de ele9ada a$inidad por ligandos. Si se incuban hormonas y receptores, "stos se unen por una unin no co9alente de tipo din(mica dependiente de la concentracin. -s din(mica porque la unin puede ir en ambos sentidos. -n el equilibrio hay una constante de asociacin (4a) y de disociacin (4d)

.a interaccin =) se mide por un an(lisis de saturacin abscisas ())&ordenadas (=)). Si por radioinmunoensayo se colocan cantidades crecientes de hormona radiacti9a, "sta se une a sus sitios espec!$icos en el receptor, de5ando de unirse cuando satura los sitios de unin de la preparacin. .a 4d seVala la mitad de la concentracin a la cual se alcanza la saturacin m(3ima. )emos 9isto los tres tipos de receptores% acoplados a prote!na S con subunidad s, 1 y q. 1ara que $uncionen, el ligando se tiene que unir a la parte e3tracelular del receptor.

.oDina col-rica: se trata de comparar el e$ecto del ligando con el de la to3ina col"rica. .a diana de la to3ina col"rica es s. .a to3ina col"rica pro9oca que la adenilato ciclasa est" acti9a constantemente. Anula la acti9idad S#1asa de la c"lula y produce gran cantidad de 14A. .oDina pertussis: la to3ina pertussis acta A01ribosilando i. Acta directamente sobre i, bloqueando la accin del receptor. Si se tiene un ligando que $uncione 9!a este receptor y se aVade primero pertussis, se bloquea la accin del ligando. Si el ligando no $unciona por esta 9!a, al aVadir 1ertussis no se modi$ica la accin del ligando, por lo que "ste sigue $uncionando. Ionforo de )a<G: es un canal que se intercala en la membrana y permite la entrada del *a >< en la c"lula. Si con el ion$oro se imita la accin de un ligando es porque "ste acta 9!a receptores que suben la concentracin de *a>< en la c"lula. +o es necesario acti9ar la $os$olipasa *. 8steres de forbol: son compuestos que se obtienen de plantas y son cancer!genos. Son an(logos estructurales del 0AS y pernean en la membrana. #anto los "steres de $orbol como el 0AS acti9an 14*.

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)atecolaminas: son compuestos que deri9an del amino(cido tirosina. Se sintetizan a ni9el de algunas neuronas espec!$icas (adren"rgicas) o en la m"dula adrenal. .as c"lulas croma$ines de la c"lula adrenal captan tirosina y su$ren modi$icaciones que dan lugar a adrenalina como producto $inal de la 9!a.

0opa, dopamina y noradrenalina pueden $uncionar como neurotransmisores y sintetizarse en neuronas. .a adrenalina $unciona principalmente como una hormon, aunque un pequeVo grupo de neuronas la sintetiza. Funciones de la adrenalina: la m"dula adrenal est( iner9ada por c"lulas ner9iosas que en respuesta a acetilcolina estimulan la produccin de adrenalina que es eliminada en gr(nulos secretores. .a concentracin de adrenalina en reposo es muy ba5a (16 &16 2). -n respuesta a un est!mulo de estr"s inmediato, su concentracin llega a subir 1666 9eces. .a adrenalina aumenta en respuesta a estr"s inmediato y el cortisol en respuesta a un estr"s mantenido. .a adrenalina e5erce su accin en mltiples sitios distintos% & =ela5a los bronquios para captar m(s *,>. & Aumenta la $recuencia e intensidad de los latidos del corazn. & Aumenta la presin sangu!nea. & Se capta m(s ,> que se transporta y sir9e como combustible para los te5idos. & 0ilata las pupilas. & =ela5a los es$!nteres. & Tasoconstriccin de arteriolas en te5idos e3ternos. & Tasodilatacin en arteriolas de los msculos, principalmente de las piernas. & :nhibicin de la secrecin gastrointestinal. .a adrenalina acta uni"ndose a receptores adren"rgicos de la membrana plasm(tica de tipo serpentina, con A dominios transmembrana. .os receptores adren"rgicos son 1, >, 1, >. & *uando se une a receptores de tipo % la adrenalina tiene como prote!na e$ectora la adenilato ciclasa y aumenta los ni9eles de A21c y 14A. Aumenta la $recuencia de latidos cardiacos ( 1) y la dilatacin de los bronquiolos (>). & *uando la adrenalina se une a te5idos que e3presan , estos est(n acoplados a $os$olipasa * y producen como segundos mensa5eros 0AS y calcio. -l receptor produce 14A que inhibe a la quinasa de la cadena ligera de la miosina (2.*4) produciendo rela5acin. -n ocasiones, como cuando tenemos que correr, el msculo necesita A#1 r(pidamente, principalmente a partir de (cidos grasos y de glucosa por lo que necesitamos que estas sustancias est"n disponibles% & .os (cidos grasos est(n almacenados en el te5ido adiposo como #AS. Al unirse a adrenalina se acti9an los receptores , y la 14A con ellos. .a 14A $os$orila y acti9a a la lipasa sensible a hormonas, con lo que se obtienen (cidos grasos que 9an al msculo en e5ercicio. & -l msculo almacena una cantidad limitada de glucgeno, que se degrada en los primeros momentos del e5ercicio. 1ara esta degradacin, la adrenalina se une a los receptores , que acti9a 14A $a9oreciendo la degradacin de glucgeno al actuar sobre la glucgeno $os$orilasa quinasa (S;4). .a adrenalina adem(s inhibe la glucogenog"nesis, ya que 14A, acti9ada por adrenalina, $os$orila a la glucgeno sintetasa, inacti9(ndola. & -l h!gado tiene receptores adren"rgicos de ambos tipos. o % tienen como prote!na e$ectora la $os$olipasa *. Se producen 0AS y calcio. -sto acti9a la 14* que inacti9a a la glucgeno sintetasa en el h!gado, acti9ando la glucogenolisis por calcio&calmodulina al acti9ar a la glucgeno $os$orilasa quinasa. o % se comporta de manera similar a como lo hacen en el msculo.

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-l h!gado produce glucosa para repartir a otros te5idos. .a glucosa es el combustible principal del cerebro. *uando obtenemos glucosa M&$os$ato en el h!gado hay glucosa M&$os$atasa que hace que pase a glucosa y salga del h!gado. .a 9!a acoplada a 14A en el h!gado inhibe la gluclisis. Se acumula glucosa M&$os$ato para pasar a glucosa y repartirse. 1ecanismos implicados en la terminacin de la seQal: & ;os$odiesterasa% ba5a los ni9eles de A21c. & ;os$atasas% de$os$orilan prote!nas. & 'ombas de calcio% disminuyen la J*a><K intracelular. & Acti9idad S#1asa de las subunidades . & 0esensibilizacin de receptores. -n este mecanismo inter9ienen receptores de membrana que poseen en su parte intracelular residuos susceptibles de ser $os$orilados por prote!n quinasas. Al ser $os$orilados, interacciona con ellos una prote!na, la &arrestina. -sto impide la transmisin de la seVal posterior. +o se produce la interaccin con la prote!na S. .a accin del receptor 9a a estar bloqueada hasta que se de$os$orilen los residuos por prote!n $os$atasas. & -ndocitosis de los receptores% los comple5os hormona&receptor est(n en una zona de la membrana donde se $orman 9es!culas de clatrina que se internalizan. -stas 9es!culas pueden seguir 9arios caminos, como la unin a lisosomas. -l receptor puede ser reciclado. EDido ntrico 'NO(: es un gas con una ba5a solubilidad en agua. Se sintetiza a partir de arginina por accin de la 3ido n!trico sintetasa, que presenta analog!as estructurales con los citocromos 1& F6 y que usa o3!geno molecular y co$actores (+A01))

-l 3ido n!trico 5uega un papel importante en% & 2sculo liso cardio9ascular% $ue la primera $uncin del +, que se descubri. -n el msculo liso cardio9ascular inicia la 9asodilatacin. & 1laquetas% limita la adhesin y agregacin plaquetaria, de manera opuesta a los trombo3anos. & S+*% acta como neurotransmisor y 5uega un papel importante en la ereccin y el 9aciado g(strico. & S+1% acta como neurotransmisor. -s importante a ni9el de la lucha contra agentes patgenos. -l +, acta de la siguiente manera% las c"lulas que rodean la luz del 9aso sangu!neo (c"lulas endoteliales) est(n rodeadas por $uera de una capa de msculo liso. Si el msculo se contrae o se rela5a, el 9aso se contrae o se dilata, y el $lu5o sangu!neo es menor o mayor. -s en estas c"lulas endoteliales en las que se $orma el +, en respuesta a distintas seVales (acetilcolina). -stas seVales aumentan la concentracin de *a>< intracelular, acti9ando la 3ido n!trico sintasa. -l +, di$unde hasta la c"lula 9ecina de la capa muscular lisa. -l +, tiene como diana la guanilato ciclasa, que $orma S21c, produciendo la rela5acin.

)ay dos tipos de 3ido n!trico sintetasa% & *onstituti9a% la prote!na est( presente siempre. Se acti9a por *a<>&calmodulina. & :nducible% el ni9el de e3presin de esta prote!na es normalmente ba5o. -n respuesta a est!mulos (inter$ern), sube el ni9el de e3presin. -l +, que produce 5uega un papel importante en la de$ensa de c"lulas in$ectadas por patgenos.

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$ormonas pancre#ticas: las hormonas pancre(ticas regulan la glucemia. .os ni9eles de glucosa en ayuno son de E6mgD166m.. 0espu"s de comer suben hasta 1>6mgD166m.. 0espu"s 9uel9e a ba5ar. Si la glucosa se mantiene ele9ada en sangre durante mucho tiempo puede producir di9ersas patolog!as, como modi$icaciones no enzim(ticas de prote!nas de la retina o el riVn. 1ara mantener la homeostasis de glucosa, la insulina y el glucagn son producidas por el p(ncreas endocrino. & .a acti9idad endocrina del p(ncreas tiene lugar en un rgano celular, los islotes de .angerhans, con c"lulas especializadas (glucagn), (insulina), (someotostatina). & .a acti9idad e3ocrina del p(ncreas est( implicada en la produccin de zimgenos digesti9os.

/eceptores de insulina 4 glucagn: tanto insulina como glucagn se sintetizan en $orma de pre& prohormonas en el =-. #ienen un p"ptido seVal y se cortan en el aparato de Solgi. .a prohormona se corta para dar lugar a la hormona madura. Se corta el p"ptido * y las cadenas que $orman la insulina quedan unidas entre s! por puentes disul$uro. -l glucagn maduro tiene >N amino(cidos. & Slucagn% se une a receptores serpentina con A dominios transmembrana que est(n localizados en la membrana plasm(tica. .a prote!na e$ectora es la adenilato ciclasa. Sigue el mecanismo del receptor &adren"rgico. & :nsulina% los receptores de insulina son prote!nas transmembrana que pertenecen a un grupo de receptores con acti9idad enzim(tica. .os receptores son tetr(meros $ormados por dos tipos distintos de subunidades y . o .as subunidades son e3tracelulares y est(n unidas por puentes disul$uro entre ellos y con las subunidades . o .as subunidades son transmembrana y tienen una parte citoplasm(tica con dominios con acti9idad tiros!n quinasa, que $os$orila restos de tirosina. *uando se une insulina a la subunidad , la unin promue9e un cambio con$ormacional que se transmite desde al interior de la c"lula. -ste cambio tiene como consecuencia la acti9acin del dominio quinasa intracelular, produci"ndose $os$orilacin. Se acti9a la acti9idad tirosina quinasa y las dos subunidades se $os$orilan entre s!. Papel de la fosforilacin de residuos tirosina: & -stabilizar la acti9idad quinasa del receptor% antes de que se una la insulina, en la estructura terciaria del receptor hay un loop de amino(cidos ubicados dentro del sitio catablico. A este sitio tiene que unirse A#1, pero no puede porque est( bloqueado. Al unirse el ligando hay un cambio con$ormacional y los residuos que obstru!an la entrada de A#1 se mue9en. -ntre esos residuos hay tirosina. -ntra A#1 y la tirosina se $os$orila. -l e3ceso de cargas negati9as mue9e los residuos hacia las cargas positi9as. -sta con$ormacin permanece hasta la de$os$orilacin. & Senerar sitios de interaccin prote!na&prote!na% en las prote!nas que inter9ienen en la seValizacin hay residuos implicados en estas interacciones. Son restos de unos 166 amino(cidos. Si este dominio se transmite a otra prote!na, esta prote!na adquiere la acti9idad que el dominio tiene. .as prote!nas con un dominio S)> se unen a restos de $os$otirosina.

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1ecanismo de accin de la insulina: :=S es el sustrato del receptor de insulina. -s una prote!na con dominios S)> que interaccionan con el receptor acti9ado. :=S por s! misma no tiene acti9idad enzim(tica, es una prote!na de ancla5e que acta como una plata$orma que une otras prote!nas. .a quinasa $os$orila a :=S en mltiples sitios de tirosina a :=S se acti9a por interaccin prote!na&prote!na y acta gracias a sus dominios S)>. :=S se une a 1:/ quinasa, que que catalizan la $os$orilacin del anillo de inositol en posicin /.

-l $os$atidil inositol es el sustrato e la $os$olipasa *. -l $os$atidil inositol , F bi$os$ato puede seguir dos caminos% & 1uede usarse por la 1.* dando (cidos grasos e inositol tri$os$ato. & 1uede ser usado por la 1:/ quinasa para dar $os$atidil inositol. -l $os$atidil inositol /, , F tri$os$ato% de $orma gen"rica, este compuesto que se produce por acti9acin de insulina recibe el nombre de segundo mensa5ero. +o se debe con$undir el $os$atidil inositol con el inositol tri$os$ato. .a 1:/ quinasa consta de dos subunidades% & 1EF% le permite anclarse a :=S. & 1:.,% es la subunidad catal!tica. *uando se acti9a el receptor, el enzima pasa del citoplasma a la membrana plasm(tica, que es donde est( el receptor, y donde se encuentra el inositol , F bi$os$ato sobre el que acta el enzima para obtener 1:1/. &?.: el 1:1/ es un segundo mensa5ero que se usa para acti9ar la prote!n quinasa ' (A4#). A4# tiene un dominio ser!n&treon!n quinasa y un dominio de interaccin prote!na l!pidos (dominio 1)) que es importante para la seValizacin porque reacciona con zonas ricas en 1:1/. Al generarse 1:1/, A4# reacciona con "l por el dominio 1) y se ubica en la membrana plasm(tica. Aqu! debes er $os$orilada para ser acti9a, y esto lo hacen 1041 y 104>, en dos posiciones distintas. & A4# $a9orece la glucogenog"nesis porque no permite la inacti9acin de glucgeno sintetasa por la glucgeno sintetasa quinasa.

& &

A4# acti9a la $os$odiesterasa que degrada el A21c. A4# acti9a $os$atasas como la S;4.

ObJetivos de insulina 4 glucagn: el ob5eti9o principal es mantener la homeostasis de glucosa en sangre. & .a insulina trata de que se utilice glucosa de todas las $ormas posibles, acti9ando su captacin por te5idos e3trahep(ticos (msculo, te5ido adiposo), promo9iendo el almacenamiento de glucgeno y de #AS y $acilitando la gluclisis. & -l glucagn se produce por respuesta opuesta a la insulina. #ras el ayuno, en el p(ncreas se libera glucagn que promue9e que haya glucosa utilizable en los te5idos. #e5ido *erebro )!gado Almac"n Slucosa, #AS *ombustible Slucosa Slucosa, AS, aa AS Ucidos grasos Slucosa -3porta AS, glucosa, cuerpos cetnicos AS, glicerol .actato

#e5ido adiposo #AS 2sculo esquel"tico en Slucgeno reposo 2sculo esquel"tico en e5ercicio

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Efectos del glucagn: los te5idos diana son el h!gado y el te5ido adiposo. & Acti9a la glucogenolisis%

&

:nhibe la glucogenog"nesis%

&

&

Acti9a la gluconeog"nesis para obtener glucosa% para acti9arla la hormona acta sobre enzimas cla9es a los que acti9a y que controlan el proceso a ni9el de s!ntesis de glucosa% la Slucosa M&$os$atasa y la 1-1*4. .a 14A 9ia5a al ncleo para $os$orilar a *=-', de unin a *=-. Acti9a la liplisis%

&

:nhibe la gluclisis% su ob5eti9o es obtener glucosa. Se bloquea a dos ni9eles o A ni9el de la piru9ato quinasa (14)

A ni9el de $os$o$ructo >&quinasa (1;4>)% es un enzima bi$uncional que lle9a a cabo la reaccin en los dos sentidos. #iene acti9idad quinasa (cuando no est( $os$orilada) y $os$atasa (cuando s! lo est().

-l Acetil*oA se puede usar para obtener glucosa slo si hay una pequeVa cantidad de o3aloacetato. -n este caso se obtiene energ!a haciendo el ciclo de 4rebs. -l glucgeno hep(tico dura unas doce horas tras la ingesta. -n ayuno le9e, si hay restos de o3aloacetato, se utiliza para poner en marcha el ciclo de 4rebs. Si no hay o3aloacetato el Acetil*oA se des9!a hacia la $ormacin de otros compuestos usados como $uente alternati9a. -l glucagn permite un $lu5o neto hacia la $ormacin de glucosa, que se e3porta a otros te5idos. #iene receptores en el h!gado y el te5ido adiposo. Efectos de la insulina: & :nhibe la glucogenolisis por dos 9!as% o 0esciende la JA21cK por lo que no permite que acte 14A. o Acti9a $os$atasas que catalizan el paso de S;4 a su $orma de$os$orilada inacti9a.

&

Acti9a la glucogenog"nesis%

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& &

:nhibe la gluconeog"nesis%% reprime la e3presin de enzimas cla9es como 1-1*4. :nhibe la liplisis% $a9orece la inacti9acin de la lipasa sensible a hormonas acti9ando la $ormacin de (cidos grasos. -l enzima limitante es la Acetil*oA carbo3ilasa, que es acti9ado por insulina e inhibido por glucagn.

&

Acti9a la gluclisis% por acti9acin de $os$atasas y ba5ada en los ni9eles de A21c. o 1or acti9acin de la piru9ato quinasa

1or potenciacin de la acti9idad quinasa de la 1;4>.

.a insulina $a9orece el uso de la glucosa de todas las maneras posibles, a ni9el del te5ido adiposo, donde se potencia la $ormacin de (cidos grasos y #AS, y tambi"n a ni9el del msculo, donde se inhibe la glucogenolisis y se acti9a la gluclisis. ;a9orece procesos anablicos como la s!ntesis de prote!nas por captacin de amino(cidos. .a captacin de glucosa se lle9a a cabo por la presencia de un receptor espec!$ico, S.B#& . -n ausencia de insulina, estos transportadores no se encuentran en la membrana plasm(tica, sino en 9es!culas. Si aumentan los ni9eles de glucosa en sangre aumenta la JA4#K que tiene como diana SS4/. #ambi"n permite que los transportadores de glucosa S.B#& se $undan con la membrana. T!a metablica Slucogenolisis Slucogenog"nesis Sluconeog"nesis .iplisis Sluclisis T!a metablica Slucogenog"nesis Slucogenolisis Sluclisis Sluconeog"nesis .iplisis .ipog"nesis Slucagn Acti9a :nhibe Acti9a Acti9a :nhibe -nzima Slucgeno sintetasa Slucgeno $os$orilasa quinasa Slucoquinasa, piru9ato quinasa, 1;4> Slucosa M&$os$atasa, 1-1*4, ;ructosa >, M bi$os$atasa .ipasa sensible a hormonas Acetil*oA carbo3ilasa, (cido graso sintetasas :nsulina :nhibe Acti9a :nhibe :nhibe Acti9a 2odo de regulacin *ambio de acti9idad *ambio de acti9idad :nduccinDcambio de acti9idad :nduccinDcambio de acti9idad *ambio de acti9idad *ambio de acti9idad Slucagn :nhibe Acti9a :nhibe Acti9a Acti9a :nsulina Acti9a :nhibe Acti9a :nhibe :nhibe Acti9a

-n un indi9iduo de A6 Ig hay unas 1/F666 cal almacenadas en #AS, > 666 cal en prote!nas y 1M66 cal en glucgeno. Se suele buscar la preser9acin de las prote!nas, que en ayuno se degradan, principalmente a ni9el muscular, pudiendo llegar a poner en peligro la 9ida de las personas porque la contraccin puede llegar a cesar en msculos 9itales como el corazn y el dia$ragma. -l ayuno puede prolongarse hasta >&/ meses, en los que la $alta de o3aloacetato lle9a a que el Acetil*oA $abrique

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cuerpos cetnicos, que no se presentan en personas bien alimentadas, ya que se usan por el msculo y el cerebro. Su presencia en demas!a ocasiona acidosis de la sangre. %iabetes: e3isten dos tipos% & 0iabetes : o dependiente de insulina% se produce en la in$ancia por destruccin de c"lulas del p(ncreas. -s una en$ermedad autoinmune. 0e este modo no se produce insulina y hay que administrarla de por 9ida para controlar los ni9eles de glucosa. Al no producirse insulina, el glucagn, que $unciona normalmente, ignora que hay glucosa y produce m(s, agra9ando la glucemia y la $ormacin de cuerpos cetnicos que pro9ocan acidosis. .os ni9eles altos de glucosa originan retinopat!as, problemas cardio9asculares y en$ermedades ne$rolgicas. & 0iabetes ::% propia de personas mayores u obesos. -n obesos, los ni9eles de insulina son normales, pero se desarrolla una resistencia a la insulina en las c"lulas receptoras. 1or esta razn no se produce transporte de glucosa en el h!gado y el msculo. #ambi"n puede $allar el mecanismo receptor. -ste tipo de diabetes supone el E6&N68 de los casos y se puede tratar con dieta y e5ercicio. .a diabetes se puede medir por ni9eles de albmina glucosilada en sangre. Se produce tambi"n una alteracin en el metabolismo de carbohidratos y grasa que lle9a a un e3ceso de T.0..

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