INTRODUCCIN

La tincin propuesta por el mdico dans Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa. Una tincin diferencial tpicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teir a todas las clulas en la tincin; enseguida un paso de decoloracin, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de clulas y finalmente un colorante de contraste, el cual tie las clulas recin decoloradas pero no tiene efecto sobre las clulas que an retienen el colorante primario. Clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reaccin de la tincin de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodocido teicoico es muy difcil de remover. Como la pared celular de las clulas Gram positivas retiene estos compuestos, es ms difcil decolorar una clula Gram positiva que una Gram negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remocin del colorante primario cristal violeta de estas clulas. Cuando otro colorante, usualmente safranina, se aade, las clulas Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tincin, las clulas Gram positivas sern del color del cristal violeta, o colorante primario, y las clulas Gram negativas sern del color de la safranina que es el colorante de contraste.

TINCIN DIFERENCIAL GRAM

OBJETIVO:
Identificar de bacterias gran.

MATERIAL:

Microscopio ptico. Aceite de inmersin. Colorantes para tincin Gram: lugol, alcohol-acetona, cristal violeta y safranina. Mechero. Recipiente de plstico para las tinciones. Cultivos bacterianos. Asa de siembra.

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TINCIN DIFERENCIAL GRAM

PROCEDIMIENTO
SE AGREGARAN GOTAS DE COLORANTE QUE CUBRAN EL FROTIS.
Ingresar el asa de siembra, en el cultivo y luego realizar un frotis de forma estriada. Fijar en el calor la muestra y luego secar. Para la coloracin : Agregar de cristal violeta (por 1 minuto). Lavar Agregar lugol (por 1 minuto). Luego alcohol-acetona. Agregar safranina (por 30s.) Lavarlo Secar en llama Observar en el microscopio.

RESULTADOS

GRAM POSITIVO

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TINCIN DIFERENCIAL GRAM

RESULTADOS

En la muestra se identific que era una gran positiva debido a que, dio un color azul.

BIBLIOGRAFIA

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/documentos/Cla seProcariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%2 0Gram.pdf

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003749.htm

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