FLAVO Y TANINOS RESUMEN

El presente informe describir el procedimiento que se llevo a cabo dentro del laboratorio de productos naturales que consiste en la extraccin de metabolitos secundarios como los flavonoides y taninos en vegetales, los vegetales usados fuernn: la tara, el t, otros y el proceso de extraccin se realiz bajo el mtodo solido-lquido en etanol al 95% a temperatura ambiente. Una vez extrada los flavonoides y taninos se sometieron al proceso de identificacin por reacciones cualitativas de coloracin, para los flavonoides se les realizo su CCD visto con lmpara UV y utilizando como revelador vapores de amoniaco. Se observo presencia en todos los vegetales analizados, pero en algunos se observo mayor presencia de estos por la intensidad de la coloracin.

PRINCIPIOS TEORICOS
FLAVONOIDES Los flavonoides son pigmentos naturales que poseen un esqueleto C6C3-C6.Los flavonoides presentan todos los matices de solubilidad desde totalmente solubles en agua hasta insoluble en ella pero soluble en ter etlico, pasando por los solubles en etanol. Por regla general los flavonoides son insolubles en ter de petrleo, lo que permite desengrasar un material antes de extraerlos. Los diferentes tipos de flavonoides se pueden identificar mediante reacciones coloridas y propiedades de solubilidad. Los resultados sealan que los flavonoides actualmente se usan en la conservacin de grasas o jugos debido a las propiedades antioxidantes, la accin farmacolgica es tambin extensa y variada.

En funcin de sus caractersticas estructurales se pueden clasificar en: 1. Flavanos, como la catequina, con un grupo -OH en posicin 3 del anillo C. 2. Flavonoles, representados por la quercitina, que posee un grupo carbonilo en posicin 4 y un grupo -OH en posicin 3 del anillo C. 3. Flavonas, como la diosmetina, que poseen un grupo carbonilo en posicin 4 del anillo C y carecen del grupo hidroxilo en posicin C3. 4. Antocianidinas, que tienen unido el grupo -OH en posicin 3 pero adems poseen un doble enlace entre los carbonos 3 y 4 del anillo C.

TANINOS Qumicamente son metabolitos secundarios de las plantas, fenlicos no nitrogenados, ms o menos complejos, sabor astringente. Los taninos son resultado de la combinacin de un fenol y un azcar. Estos poliglicosidos son muy solubles en agua y no en alcohol y escasamente solubles en la mayora de los disolventes orgnicos. La posicin ocupada por la porcin de azcar influye en la solubilidad de la molcula y su capacidad de formar lacas insolubles con los metales. Los taninos suelen tener varios usos: Capacidad de precipitar protenas, algunas veces como formadores de sustancias (aceites esenciales, resinas, lignina, etc.), protectores

(Propiedades fungicidas y bacteriostticas, moderador de las oxidaciones, antifermentos) y sustancias de reserva. Los taninos hidrolizables son esteres de glcidos y cidos fenlicos y como su propio nombre indica, son fcilmente hidrolizables en condiciones cidas o bsicas o por la accin de enzimas, (esterasas), mientras que los taninos condensados son oligmeros y polmeros de flavanoides unidos por enlaces C-C, y no son susceptibles de hidrlisis.

-Taninos hidrolizables: Llamados tambin glicos o piroglicos. Estos taninos, como su denominacin indica, se hidrolizan con facilidad tanto por cidos y lcalis como por va enzimtica y son generalmente de formacin patolgica.

Galotanino con uniones depsidicas, donde G = galoido -Taninos condensados: Llamados tambin proantocianidinos o catecalico. Se conocen tambin como no hidrolizables, ya que se hidrolizan con dificultad y, por el contrario, el tratamiento con calor y cidos minerales origina polmeros de alto peso molecular (Flobfenos). Este tipo de taninos se producen en el metabolismo normal de los vegetales por lo que se consideran fisiolgicos y se encuentran ampliamente repartidos en el reino vegetal.

Epigalocatequina-(4p8)- galocatequina, donde R = OH

CUESTIONARIO 1. Escriba un mtodo de obtencin de los flavonoides a escala de laboratorio diferente al usado Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra se desengrasa inicialmente con ter de petrleo n-hexano, luego los flavonoides se extraen con etanol puro o del 80%. Este ltimo es recomendado para garantizar la extraccin de los ms polares. El extracto obtenido se evapora con calentamiento no superior a los 50C y se le hacen particiones sucesivas con ter etlico, acetato de etilo y n-butanol. Los flavonoides apolares quedan en la fase etrea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los ms polares en n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar por cromatografa en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa. 2. Qu ltimos estudios han realizados sobre los flavonoides relacionados con el cncer? Fraccin de compuestos fenlicos y flavonoides de Bidens pilosa sobre el cncer de mama, inducido en ratas hembras: Los flavonoides, compuestos fenlicos y taninos estuvieron en mayor cantidad en la fraccin metanolica. Se observo neoplasia maligna metastasica y adenocarcinoma mamario en el grupo con toxico. La fraccin metanlica impidi una mayor diferenciacin celular, disminuyendo en 61.5% los radicales libres y 67.7 los microncleos. Fraccin de compuestos fenlicos y flavonoides de Bidens pilosa sobre el cncer gstrico inducido en ratas machos: Los flavonoides, compuestos fenlicos, y taninos estuvieron en mayor cantidad en la fraccin metanlica; los controles de TI evidenciaron desorganizacin celular e inicio de lesin precancerosa, la parte metanlica mostro mayor empastamiento en la superficie libre de las clulas epiteliales gstricas de los pex glandulares; disminuyendo en 31.5% los radicales libres y 51.6% los microncleos. Efecto de compuestos fenlicos y flavonoides de Bidens pilosa L, sobre el cncer de colon inducido en ratas: Hubo incremento de los niveles de oxido ntrico y lipoperoxidacin en los animales con 1,2-dimetilhidracina (DMH) y disminucin en los que recibieron el toxico mas la fraccin de compuestos fenlicos y flavonoides de la planta. Al estudio histopatologico con la DMH, se evidencio desorganizacin celular, adenocarcinoma e invasivo. En tanto que, con los tratamientos, se observo citoproteccin no dependiente de la dosis, siendo mayor a 50 mg/ Kg. Los hallazgos probablemente se expliquen porque los flavonoides y los compuestos fenlicos cumplen un rol importante en la inhibicin del estrs oxidativo y por lo tanto la lipoperoxidacin, resultando ser

potentes antioxidantes y tambin anticancergenos, inhibiendo el crecimiento de tumores. 3. Cul sera la utilidad que los flavonoides sean insolubles en ter de petrleo? Los flavonoides presentan todos los matices de solubilidad, desde totalmente solubles en agua hasta insolubles en ella, pero solubles en ter etlico (aglicona muy esterificada), pasando por las solubles en etanol (aglicona). Sin embargo por regla general los flavonoides son insolubles en ter de petrleo, lo cual es de mucha ayuda, ya que permite desengrasar el material vegetal, eliminando de esta manera los interferentes como las ceras y las grasas vegetales, antes de proceder a la extraccin. 4. Usando reacciones qumicas indique la capacidad antioxidante de los flavonoides
El concepto bsico de la actividad antioxidante de varios compuestos naturales y sintticos comprende una transicin redox mediante la cual la molcula antioxidante dona un electrn (o tomo de hidrgeno, equivalente a la donacin de un electrn y un H+ al radical libre (R). Durante el transcurso de esta transferencia de electrones, el carcter radical (inestabilidad), es transferido al antioxidante, formndose un antioxidante radicalderivado.
Flavonoide (OH) + Radical Radical flavonoide (O) + RH

Cualquiera sea el mecanismo inherente a los efectos antioxidantes de los flavonoides, estos compuestos al igual que todos los antioxidantes deben reunir dos requisitos bsicos para ser considerados tales: en primer lugar, aun a bajas concentraciones deben proteger los compuestos contra la oxidacin o el dao por RL y, en segundo lugar, el radical flavonoide aroxil radical as formado debe ser lo suficientemente estable para que la funcin antioxidante sea efectiva. La falta de estabilidad que pueda tener el radical aroxilo est en la base del efecto prooxidante de algunos flavonoides. A su vez, el radical aroxilo puede ser recuperado por otros antioxidantes, como el ascorbato.
Radical + cido flavonoide (O.) ascrbico Flavonoide + radical (OH) ascorbato

BIBLIOGRAFIA

Olga Lock de Ugaz, INVESTIGACIN FITOQUMICA Mtodos en el estudio de productos naturales, segunda edicin, Fondo editorial PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DEL PERU, Lima-Per, 1994.

Xorge Alejandro Domnguez, Mtodos de investigacin Fitoqumica, Editorial LIMUSA, Mxico, 1973.

http://www.antioxidantes.com.ar/frart020.htm http://www.biblioteca/14_biodisponibilidad_flavonoides_cerveza_73.pdf

ANTOCIANINAS BETALAINAS PARTE EXPERIMENTAL Materiales o o o o o o o Mortero con piln Tubos de ensayo Gradilla Papel Whatman Equipo de CCD Lpiz Regla Reactivos cido Clorhdrico (HCl) Metanol Reactivo de Fehling FeCl3 c. actico c. frmico N-butanol NaOH

PROCEDIMIENTO A. ANTOCIANINAS Muestras: Cscara de uva Cscara de molle Maz morado Los pasos para la preparacin de los extractos de las muestras a analizar se encuentran descritos en la gua de prcticas de productos naturales, salvo cualquier modificacin por parte del docente encargado. B. BETALANAS Muestra: Betarraga Los pasos para la preparacin del extracto de la muestra a analizar se encuentra descrito en la gua de prcticas de productos naturales, salvo cualquier modificacin por parte del docente encargado.

REACCIONES
Hidrlisis de la antocianina:

Reaccin con el reactivo de Fehling (A y B):

H HO HO H OH

H
O H H H OH OH

OH H H H OH
Cu++

OH OH H H H O OH

HO HO

OH O cupro-tartrico Rojo
soluble

H complejo

Cu2O

HO HO

Na+ OH

D-glucosa

Aldonato de sodio

Reaccin con el NaOH 20%:

OH OH O
+

O Na O Na Na O O
+

HO

+
OH OH

5 NaOH - 5 H2O O Na O Na

complejo de color verde

Reaccin con el HCl 1N:

OH OH HO O
+

OH OH HO
+ O Cl

HCl

OH OH sal de oxonio OH Sol. rojo violceo

OH

RESULTADOS Ensayo Adicin de NaOH al 20% Reacidificacin: (HCl 1N,luego de unos min Sol. Alcalina) Adicin de NH3 Adicin c. minerales (HCl 1N) Adicin de acetato de plomo Distribucin entre alcohol isoamilico y agua Extraccin con : a)Alcohol absoluto b)Con agua destilada Antocianinas (maz morado) Decoloracin lenta de violeta a verde El color puede ser regenerado con la acidificacin Oscurecimiento de la solucin Decoloracin Pptado azul grisceo Fase alcohlica adquiere coloracin roja pH cido Buena extraccin con ambos Betalanas (betarraga) Decoloracin de violeta a amarillo Oscurecimiento del color y con lcali color amarillo Coloracin amarillo pardo Intensificacin del color Ppdo rojo-marrn Fase alcohlica no adquiere coloracin a)Menor extraccin b)Mayor extraccin

IMGENES Antocianinas Betalanas

NOTA: Los tubos se encuentran numerados de izquierda a derecha y de esta manera se han realizado las pruebas descritas en resultados. Las imgenes de la segunda fila y la tercera muestran la reacidificacin.

ANTOCIANINAS Cscara de molle Cscara de uva

NOTA: Las reacciones que se realizaron fueron de HCl (1N), NaOH al 20% y FeCl3 en ese orden de izquierda a derecha. Llenar quien tenga las placas. MUESTRA Rf

DISCUSION DE RESULTADOS Cuando se realizo la hidrlisis cida se puedo demostrar mediante la prueba de Fehling que al inicio las antocianinas se encontraban unidas a glcidos (azucares), por dar negativo a Fehling, despus de la hidrlisis se realizo nuevamente la prueba de Fehling y dio positivo lo que indicaba presencia de azucares reductores y que la antocianina se haba separado del azcar. Se observ para las reacciones de identificacin de antocianinas en el maz morado como para las betalanas en betarraga que los resultados concuerdan con los datos tericos que tenamos. Para la cascara de molle y de uva se realizaron las reacciones con HCl (1N), NaOH y FeCl3 solamente; debido a que haba poca muestra de ambos extractos. Los resultados para la reaccin con el extracto de uva no se pudo observar claramente, ya que desde el inicio presentaba una coloracin muy oscura. Tambin se pudo determinar que para las betalanas el solvente que mejor las extrae es el agua as como otros solventes de gran polaridad como el alcohol absoluto, pero lo extraen en menor medida. En la cromatografa de capa fina se pudo determinar la presencia de las antocianinas del maz morado al correr el extracto de este con el patrn de antocianina, pues ambos dieron un valor similar de Rf.

CUESTIONARIO

5.- Qu papel juegan en la industria del vino?

Las antocianinas son las responsables principales del color rojo en el vino. Las antocianinas se encuentran en diversas frutas cumpliendo una misin similar. Este compuesto qumico se encuentra en la capa exterior de la piel de la uva y durante el proceso de maceracin se extrae antes que los taninos. El color rojo o rosado depende, por completo, de la forma en que se extrae los antocianinas de la piel de la uva durante el proceso de fermentacin. La manera en la que se aplasta la uva puede afectar las propiedades organolpticas del mosto, por ejemplo, si se prensa poco se extraen los azcares del centro de la uva, obtenindose pocos polifenoles (vinos blancos afrutados), pero si se aprieta ms, empiezan a extraerse los antocianinas y aparece la coloracin tinta. El oxgeno juega un papel importante en la estabilizacin de los colores del vino tinto, permite que los taninos y las antocianinas tengan un proceso conocido como acoplamiento oxidativo. La maduracin en barricas es una especie de lenta oxidacin del vino. Dos de las reacciones ms habituales en la maduracin son la oxidacin fenlica y la polimerizacin de las antocianinas con otros flavonoides para formar pigmentos y sabores. Las antocianinas son un grupo de glicsidos de la cianidina (azul), la delfinidina (azul, puede verse en berenjenas, granadas, fruta de la pasin), la malvidina (prpura), la pelargonidina (rojo), la peonidina (rosado) y la petunidina. Durante la maceracin la proporcin de antocianinas azules cambia hasta virar desde colores prpura-rojizos a anaranjados. En los vinos jvenes el color es debido principalmente a las antocianinas, pero como son compuestos qumicos no estables se van enlazando con los taninos formando polmeros ms estables y con capacidad de pigmentacin.

6.- Mencione 5 aplicaciones industriales de las antocianinas. Las antocianinas son de inters particular para la industria de colorantes alimenticios en la industria de alimentos y bebidas, ya sea como colorantes naturales, alimentos funcionales y suplementos alimenticios debido a su capacidad para impartir colores atractivos. En la industria farmacutica, cosmetolgica y textil, se ha encontrado que el uso de antocianinas tiene un alto potencial, ya que pueden emplearse como fuente de colorantes naturales, como alimentos funcionales y como productos nutracuticos. 7.- Qu tipo de antocianinas se encuentra en el maz morado?

El maz morado se caracteriza por presentar antocianinas del tipo cianidina 3- glucsido; en mayor proporcin, pelargonidina 3 glucsido y peonidina 3- glucsido a nivel de la coronta con bajos contenidos de slidos solubles, lo que facilita su uso a nivel industrial.

BIBLIOGRAFIA http://www.biblio.colpos.mx:8080/jspui/bitstream/handle/10521/1709/Mendoza_Mendoza_ CG_MC_Genetica_2012.pdf?sequence=1 www biotecnia uson mx revistas articulos - IO- -DPA- pdf http://144.206.159.178/ft/553/590005/12105003.pdf http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.food.080708.100754 http://advances.nutrition.org/content/2/1/1.full http://144.206.159.178/ft/553/590005/12105003.pdf http://www.biotecnia.uson.mx/revistas/articulos/16-BIO-11-DPA-06.pdf http://minadesalud.com/images/pdf/proton_ficha.pdf http://www.scielo.org.pe/pdf/rsqp/v75n1/a10v75n1.pdf