Tesis Percy, Extractos

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN - TARAPOTO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

DEPARTAMENTO ACADMICO AGROSILVO PASTORIL

TESIS
EFECTO DE DIEZ EXTRACTOS VEGETALES SOBRE Fusarium
oxysporum AISLADO DE CEBOLLA CHINA (Allium fistolosum L.) BAJO
CONDICIONES DE LABORATORIO E INVERNADERO EN SAN MARTN.

PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE:
INGENIERO AGRNOMO
PRESENTADO POR:
Bach. PERCY DIAZ CHUQUIZUTA

TARAPOTO PER
2006

2
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN - TARAPOTO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
DEPARTAMENTO ACADMICO AGROSILVO PASTORIL

REA DE MEJORAMIENTO Y PROTECCIN DE CULTIVOS

TESIS
EFECTO DE DIEZ EXTRACTOS VEGETALES SOBRE Fusarium
oxysporum AISLADO DE CEBOLLA CHINA (Allium fistolosum L.) BAJO
CONDICIONES DE LABORATORIO E INVERNADERO EN SAN MARTN.

PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE:
INGENIERO AGRNOMO
MIEMBROS DEL JURADO

___________________________________ __________________________
Ing. M.Sc. ARMANDO CUEVA BENAVIDES Ing. MANUEL DORIA BOLAOS
Presidente Secretario

______________________________ ________________________________
Ing. ELAS TORRES FLORES Ing. EYBIS JOS FLORES GARCA
Miembro Asesor

3

DEDICATORIA
En memoria de:
Gladys Chuquizuta Picn
y
Maria del Rosario Ruiz Crdenas
Que gozan de la compaa de Dios Padre.

Para las personas que ms amo en mi vida, que son mis guas
e hicieron de m el profesional de hoy.

Con mucho cario a mis queridos padres Porfirio Daz y
Marina B. Chuquizuta,, amigos incondicionales a los cuales
debo este logro, gracias a su esfuerzo, apoyo espiritual,
econmico, por inculcarme valores y sentimientos hacia mis
semejantes.

A mis hermanos Henry y Csar de los cuales aprendo a travs
de sus consejos que me sirven para ser un buen profesional
cada da

Con todo mi corazn para Nadia A. Campos Varela, por su
apoyo y estar siempre a mi lado en todo momento,
compartiendo buenas experiencias durante nuestra vida
acadmica y profesional.
Bach. Agr. Percy Daz Chuquizuta
Tesista

4
AGRADECIMIENTO

Un agradecimiento muy especial al Ing. Eybis J os Flores Garca decente
de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de San
Martn por ser el asesor del presente trabajo de investigacin.

Un agradecimiento muy especial al Ing. Csar Chappa Santa Maria decente
de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de San
Martn por brindarme la oportunidad de participar dentro del proyecto:
AGROECOLOGA A PARTIR DEL USO RACIONAL DE LOS
RECURSOS EN EL FUNDO MIRAFLORES DE LA FCA/UNSM-T
BANDA DE SHILCAYO- SAN MARTN - PER

Agradezco a los profesionales y amigos que apoyaron para el desarrollo y
culminacin de la presente tesis:

Al Blgo. M.Sc Winston Ros Ruiz por compartir conocimientos y facilitar
los materiales necesarios para la elaboracin del presente trabajo.

Al Ing J orge Lus Pelez Rivera, dueo del Fundo EL PACIFICO.

Al tcnico Delman encargado del laboratorio de Fitopatologa

5
INDICE
Pg.
I. INTRODUCCIN 6

II. OBJETIVOS 8

III. REVISIN BIBLIOGRFICA 9

3.1. CULTIVO DE CEBOLLA CHINA (Allium fistolosum L.) 9
3.2. DEL PATGENO Fusarium oxysporum 11
3.3. PASOS BSICOS PARA EL DESARROLLO DE UN
PLAGUICIDA BOTNICO. 14
3.4. PREPARACIN DEL EXTRACTO VEGETAL. 14
3.5. COMPUESTOS DE LAS PLANTAS, USADAS COMO
MEDIOS DE DEFENSA CONTRA MICROORGANISMOS 15
3.6. COMPUESTOS DE LAS PLANTAS EN ESTUDIO. 16
3.7. TRABAJ OS REALIZADOS CON EXTRACTOS VEGETALES
EN EL CONTROL DE MICROORGANISMOS 21

IV. MATERIALES Y MTODOS 24

V. RESULTADOS 42

5.1. EN LABORATORIO. 42
5.2. EN INVERNADERO. 48

VI. DISCUSIONES 54

VII. CONCLUSIONES 62

VIII. RECOMENDACIONES 64

IX. BIBLIOGRAFA 65

RESUMEN 73

SUMARY 74

ANEXO 75

6
I. INTRODUCCIN
El uso excesivo de plaguicidas sintticos, especialmente de fungicidas en la
agricultura, mas que dar aparentes beneficios en el control de plagas, provoca
problemas ms graves, como la resistencia de los microorganismos patgenos,
obligando al agricultor a buscar productos con mayores concentraciones y/o
realizar mezclas indebidas sin tener en cuenta los daos que esto ocasiona al
ambiente, eliminando a los enemigos naturales y mas an que atenta contra su
salud y de su familia.
Uno de estos patgenos por el cual se realizan aplicaciones de fungicidas
sintticos es el hongo del gnero Fusarium que causa la muerte de plntulas en
la mayora de los cultivos, ocasionando en muchos casos la prdida de gran
parte de las plantaciones.
El uso de extractos vegetales para el control de plagas fue una prctica
utilizada por el hombre desde tiempos inmemoriales, que casi desapareci con la
aparicin de los plaguicidas. ltimamente estos extractos de plantas con
propiedades biocidas se estn convirtiendo nuevamente en un instrumento
tecnolgico con la finalidad de disminuir el uso de agroqumicos y obtener
productos ms saludables. GOMERO (2002), reporta que en el Per existen 300
especies de plantas inventariadas entre nativas e introducidas, de las cuales 38
tiene propiedades fungicidas.
En nuestra regin existe una gran diversidad de especies vegetales, en la
cual podemos encontrar plantas que pueden ser nuevas opciones para el manejo
de enfermedades, incidiendo en aquellas consideradas como malezas en los

7
cultivos y de esta manera darles un uso adecuado para no incurrir en la perdida
de las especies de plantas de uso actual como barbasco (Lonchocarpus spp),
Huamansamana (Jacaranda macrocarpum), Ajo sacha (Mansoa alliacea),
Huaca (Clibadium sp), Neem (Azadirachta indica) entre otras.
El presente trabajo de investigacin se bas en el estudio de diez plantas con
posibles propiedades fungicidas como: Higuerilla (Ricinus communis), Pin
(Jatropha gossypifolia), Sabila (Aloe vera), Vergonzosa (Mimosa pudica),
Bejuco (Ipomoea purpurea), Paico (Chenopodium ambrosioides), Rosa
castilla (Rosa sp), Tomatillo (Solanum torvum), Diente de len (Emilia
forbergii) y Neem (Azadirachta indica), para el control de Fusarium oxysporum,
hongo causante de la pudricin basal en Cebolla China (Allium fistolosum L)
para presentarlas como nuevas alternativas, buscando la dosis con el mejor
efecto utilizando extractos vegetales, probndolas bajo condiciones de
laboratorio e invernadero.

8

II. OBJETIVOS

2.1. Estudiar el efecto de diez extractos vegetales sobre Fusarium
oxysporum en el cultivo de Cebolla china (Allium fistolosum L.).

2.2. Determinar las dosis de extracto vegetal ms eficiente sobre Fusarium
oxysporum en el cultivo de Cebolla china (Allium fistolosum L.).

9
III. REVISIN BIBLIOGRFICA

3.1. CULTIVO DE LA CEBOLLA CHINA (Allium fistolosum L.)

3.1.1. Origen:

PREZ (1979), es una especie oriunda de Asia cultivada en China
desde tiempos muy remotos.

3.1.2. Taxonoma.

MOSTACERO (1993), lo clasifica:
Reino : Plantae
Divisin : Angiospermae.
Clase : Liliales.
Orden : Liliaceae.
Gnero : Allium
Especie : fistolosum

3.1.3. Caractersticas morfolgicas.

VALDEZ (1999), menciona que es una planta, de un bulbo ovoide
achatado de color blanquecino o rosado, tiene olor caracterstico
debido a la presencia de sulfuro de alilo, el tallo pequeo en forma de
disco y su periodo vegetativo esta entre 45 a 60 das.

10
THOMSON (1999), menciona que sus hojas son numerosas,
fistulosas de 25 a 30 cm de longitud. El color de la hoja al trasplante
es verde claro y a la cosecha verde oscuro.

MOROTO (1986), menciona que va semilla botnica, se cultiva en 3
meses. Es una planta con hojas cnicas casi perfectamente circular e
inflada, la parte interna es vaco, su base alcanza su dimetro
promedio 1 cm que disminuye hacia el pice.

La inflorescencia es fcilmente distinguida, de color amarillo plido
con un nervio medio contrastante. El orden de la apertura de las
flores en la umbelfera es regular inicindose en la parte superior o
central y progresa uniforme hacia la base umbelfera, nunca se abre
totalmente.

3.2.4. Principales enfermedades de la cebolla china.
VARGAS (1996), las enfermedades causadas por hongos son:
Enfermedad Patgeno
Pudricin rosada de raz : Poma terrestris.
Tizn de la hoja : Stemphylium vesicarium
Roya : Puccinia all y P.porri
Moho gris del bulbo : Botrytis cinerea.
Oidium : Oidiopsis sicula.
Mildiu : Peronospora destructor
Marchitez y pudricin de raz: Fusarium oxysporum
Alternariosis : Alternaria porri y A. solani.

11
3.2. DEL PATGENO Fusarium oxysporum.

3.2.1. Descripcin.

SEGAL et al (1998), mencionan que es un hongo distribuido
universalmente. Se asla como saprofito del suelo. Causa grandes
prdidas econmicas.

ROMANO (1998), menciona que se encuentra en la microflora. La
mayora de especies son ms comunes en la rea tropicales y sub
tropicales. Puede causar infecciones en los humanos. Este gnero
contiene encima de 20 especies, los ms comunes son Fusarium
solani, F. oxysporum, F. chlamydosporum.

3.2.2. Taxonoma.

AGRIOS (1996), lo clasifica:

Reino : Fungi.
Divisin : Eumycota.
Clase : Deuteromicetes
Orden : Hyphales (Moniliales).
Familia : Hyphaleaceae.
Genero : Fusarium
Especie : oxysporum

12
3.2.3. Caractersticas generales del hongo.

AGRIOS (1996), menciona que presenta un micelio incoloro al
principio y conforme madura adquiere un color crema o amarillo
plido y bajo ciertas condiciones adquiere un color rosa plido o
algo prpura. Hace mencin que este hongo produce 3 tipos de
esporas asexuales que son:

Microconidias: tienen de 1 a 2 clulas y son los que se
forman con mayor frecuencia en el interior de los vasos de las
plantas hospedantes que han infectado.

Macroconidias: son las esporas tpicas de Fusarium estn
constituidas de 3 a 5 clulas, se adelgazan gradualmente y se
encorvan hacia ambos extremos. Aparecen frecuentemente
sobre la superficie de la planta.

Clamidosporas: Constituidas por una o ms clulas, son de
pared gruesa y son esporas redondas que se forma
terminando intercalarmente en el micelio ms viejo o en las
macroconidias del hongo.

ROMANO (1998), menciona que las macroconidias miden de 3 8
x 11 70 y las microconidas de 2 4 x 4 8 .

13
3.2.4. Sntomas de la enfermedad.

AGRIOS (1996), menciona que varias especies del gnero
Fusarium producen pudricin de bulbo, cormo y tubrculos. Es una
enfermedad comn en cebolla que empieza en la superficie sana de
los bulbos pero con frecuencia se inicia en las heridas de la base.
Las races adquieren una tonalidad que va de caf o negro que se
hunden y pudren, a menudo contiene el micelio blanco del hongo.
El follaje se torna amarillo.

BEJO (2004), nos dice que los primeros sntomas son la aparicin
de hojas retorcidas que empiezan a amarillear. Ms adelante, las
hojas mueren empezando por la punta. Las races infectadas
adquieren un color marrn oscuro y se pudren. A medida que se
desarrolla la infeccin, se hace visible un crecimiento fngico blanco
debajo del bulbo.

3.2.5. Control.

AGRIOS (1996), describe que el uso de variedades resistentes al
hongo es el nico medio prctico para controlar la enfermedad en
campo. El uso de semillas sanas y de trasplante es de hecho
obligatorio y el tratamiento con agua caliente de las semillas debe
efectuarse antes de que se siembre. El plstico solar (solarizacin)
del terreno cubrindolo con una pelcula de plstico transparente,

14
durante el verano, disminuye tambin la incidencia de la
enfermedad. Pero aun as, seala el autor, que no existe un control
eficiente para este patgeno.

3.3. PASOS BSICOS PARA EL DESARROLLO DE UN PLAGUICIDA
BOTNICO.

ARNING y VELSQUEZ (2000), presentan los pasos bsicos para el
desarrollo de plaguicidas botnicos, mencionados por Hellpap (Dr.;
GTZ/GATE, Alemania) a nivel de finca resumidos en el cuadro 1

Cuadro 1: Pasos bsicos para desarrollar plaguicidas botnicos.
Actividad Mtodo
Seleccin de especies de plantas.

Seleccin de partes de la planta.
Eficiencia de distintos extractos.
Primeros datos toxicolgicos.

Modo de accin.
Plagas controladas.
Mtodos de extraccin, formulacin,
dosis, toxicidad aguda.
Extensin, propagacin de plantas.
Revisin de literatura y conocimientos
sobre control de plagas, botnica
etnolgica y medicina tradicional,
seleccin de ciertas familias.
Bioensayo (Laboratorio).
Revisin de literatura y
conocimientos.
Bioensayo (Lab. y campo).
Bioensayo (Lab. y campo), pruebas
orales, dermales e inhalacin.
Extensionistas, seminarios, medios de
masificacin, folletos.

3.4. PREPARACIN DEL EXTRACTO VEGETAL.

ZAPATA et al (2003), emplearon el siguiente procedimiento: utiliz 20g de
material vegetal seco y molido al cual se le prctica un prelavado con

15
solucin de hipoclorito de sodio al 0,26 % por 2 min y luego 4 lavados con
agua destilada estril; se agrega 400 ml de agua doblemente destilada y
esterilizada y se licua la preparacin por 5 min. Posteriormente se filtra
utilizando cuatro capas de gasa esterilizada y la suspensin acuosa se
almacena en el refrigerador.

3.5. COMPUESTOS DE LAS PLANTAS, USADAS COMO MEDIOS DE
DEFENSA CONTRA MICROORGANISMOS.

AGRIOS (1996), menciona que las plantas presentan compuestos tales
como Fenoles y Taninos y otros como saponinas en altas concentraciones
en tejidos vegetales jvenes que inhiben la infeccin de los patgenos.
Este autor tambin hace mencin que el efecto toxico combinado de todos
los fenoles fungitoxicos presentes (ms que el de cada uno de ellos por
separado), es posiblemente el responsable de la inhibicin de las
infecciones.

MLLER et al (1995), mencionan que la actividad antimicrobiana de los
extractos de plantas est asociada a la presencia de metabolitos
secundarios. La fraccin fenlica de aceites esenciales de varias plantas
aromticas ha mostrado ser txica contra Fusarium moniliforme,
Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum y Phytophthora capsici.).

LAMPKIN (1990), menciona que se cree que gran parte del efecto de los
extractos de plantas sobre las enfermedades, ms que deberse a algn

16
tipo de toxicidad directa, se produce por el fortalecimiento estructural de la
planta, incrementando su resistencia a la penetracin de los micelios de
los hongos y a las picaduras de insectos chupadores como los pulgones, o
bien estimulando un desarrollo vigoroso para superar un ataque. Por lo
general no hay una nica sustancia responsable, sino que es una
interaccin compleja entre una gama de agentes.

Las plantas utilizan metabolitos secundarios como respuesta filolgica
ante el ataque de agentes biticos, tales como fenoles, terpenoides
(monoterpenos, sesquiterpenos, triterpenos), los cuales tiene efecto
alelopatico, insecticida y fungicida, tambin menciona que los alcaloides
tiene efecto controlando la germinacin de otras especies de plantas a su
alrededor; a dems brindan proteccin contra agentes biticos.
http://fai.unne.edu.ar/biologa/fisiologiavegetal.htm.

3.6. COMPUESTOS DE LAS PLANTAS EN ESTUDIO.

3.6.1. Paico (Chenopodium ambrosioides L), y Pin rojo
(Jatropha gossypifolia L.)

SIAMAZONIA (2002), menciona que el Paico (Chenopodium
ambrosioides L), y Pin rojo (Jatropha gossypifolia L.), pertenecen
a las familias Chenopodiaceae y Euphorbiaceae respectivamente y
que presentan los siguientes componentes qumicos:

17
Paico (Chenopodium ambrosioides L): contiene ascaridol y
otros monoterpenos; alcaloides, cido butrico, salicilato de metilo,
saponinas, sesquiterpenos, triterpenos, lpidos, flavonoides
(campferol-7-ramno-sidio, ambosidio, quercetina), aminocidos,
cidos orgnicos (ctrico, mlico, vanlico, tartrico, oxlico y
succnico), alcanfor, pectina, taninos, terpenos, carveno, anethole
(ester fenlico) y santonina (SIAMAZONIA, 2002).

GARCA (1992), menciona que contiene 1,5% de aceite de
quenopodio y 64,5% de ascaridol. Esta planta contiene adems
taninos, terpenos, carveno (46%), p-cimol, linomeno, alcanfor,
salicilato de metilo, cido butrico, pectina y sales minerales
(PALACIOS, 1993). Otro principio activo importante es el anethole
(ster fenlico) con efectos antiinflamatorios (SOUSA y SOUZA,
1993).

El ascaridol es el principal responsable del aroma del paico, as
como tambin de sus propiedades parasiticidas y de sus efectos
txicos. La variada presencia de sacridos (pectina), de
gluccidos (saponinas, flavonoides), taninos, cidos orgnicos,
aceites esenciales, lpidos y vitaminas confieren a la planta total
un carcter qumico diferente al que tiene exclusivamente el
ascaridol (SOUSA y SOUZA, 1993).

Pin (Jatropha gossypifolia L.): contiene el alcaloide
jatropina (altamente toxico). La almendra contiene curcina. Las

18
semillas presentan cido palmtico, linoleico y oleico. Las hojas
presentan apigenina, isovitexina, vitexina, jatrofolona A y B,
lignano (SIAMAZONIA, 2002).

3.6.2. Higuerilla (Ricinus comunnis)

MORALES (2003), reporta que la higuerilla (Ricinus comunnis)
pertenece ala Familia Euphorbiaceae y esta compuesta por aceite de
ricino, cidos oleico, linoleico. Sustancias nitrogenadas: ricinina
(alcaloide), ricina (glucoproteina); Enzimas: lipasa; vitamina E; Sales
minerales; protenas (20%). La ricina y ricinina, la primera es una
fitotoxina sumamente venenosa por va endovenosa y menor por va
oral, aunque tambin esta ltima va puede ocasionar la muerte; su
actividad desaparece por accin del calor moderado; el segundo es
un alcaloide de frmula C
8
H
8
N
2
O
2
. La ricina es un veneno que puede
elaborarse a partir de los sobrantes del procesamiento de las semillas
de la planta de ricino. Es una sustancia estable. Por ejemplo, no la
afectan mucho las condiciones extremas como temperaturas muy
calientes o muy fras. La ricina es parte de la masa sobrante que se
origina cuando se produce el aceite de ricino (C.C.P.E, 2004).

3.6.3. Sbila (Aloe vera L.) y Vergonzosa (Mimosa spp.)
GISAZA (2003), menciona que la sbila (Aloe vera L.) y
Vergonzosa (Mimosa spp.) pertenecen a las Familias Liliaceae y
Mimosaceae respectivamente. La composicin qumica de estas
plantas es:

19
Sbila (Aloe vera L.): El gel obtenido del Aloe produce seis
agentes antispticos de elevada actividad antimicrobiana: el cido
cinamnico, un tipo de urea nitrogenada, lupeol, fenol, azufre,
cido flico y un cido salcico natural que combinado con el
lupeol tiene importantes efectos analgsicos
(http://latiendadelaloe.comserpro.com.). Es utilizado para
combatir infecciones por hongos como la tia (GISAZA, 2003),

Vergonzosa (Mimosa spp.): Detiene la produccin de
microbios en el organismo, el espasmo muscular, alivia dolores y
provoca vmito.
CAMARGO (2000), nos dice que la corteza de Mimosa spp
presenta una gran abundancia de taninos, saponinas, alcaloides,
glucosa, xilosa, rhamnosa, arabinosa, lupeol, fitoesteroles, lpidos,
cristales de oxalato de calcio y de almidn.
3.6.4. Neem (Azaderahcta indica)
UNIVERSIDAD DE MINNESOTA (2002), menciona que el Neem
(Azaderahcta indica) pertenece a la familia Meliaceae y contiene
compuesto Etetraterpenoide llamado azadiractina que es el que se
encuentra en mayor en toda la planta y con mayor concentracin en
las semillas. En el extracto se han identificado alrededor de 18
compuestos entre los que destacan salanina, meliantrol y
azadiractina. Muestra accin antialimentaria, reguladora del
crecimiento, inhibidora de la oviposicin y esterilizante.

20
3.6.5. Tomatillo (Solanum torvum).
MARCANO (1992), menciona en su conferencia que la planta
Solanum torvum (Tomatillo), presenta en su composicin
compuestos nitrogenados complejos llamado alcaloides de nombre
Solanina, que es un glucsido alcaloide toxico que tienen la
propiedad de formar sales con los cidos y que actan sobre el
sistema nervioso, primero excitndolo y luego paralizndolo.
3.6.6. Rosas (Rosa sp).

En la rosa (Rosa sp) destacan dos ingredientes, el tanino, de accin
astringente, y la esencia, a los que debe sus virtudes. Los ptalos de
las rosas rojas son ms apreciados en farmacia que los de las rosas
blancas, por tener mayor cantidad de tanino.
http://.www.webislam.com.

3.6.7. Bejuco (Ipomoea spp).

MOLYNEUX et al (1995), mencionan que los componentes txicos
del gnero Ipomoea fueron identificados en el ao 1995 a partir de
una especie australiana. Dichos compuestos son alcaloides que
poseen una potente actividad inhibitoria sobre glucosidasas. Causa
desequilibrios en el metabolismo de oligosacridos, lo que conduce al
almacenamiento excesivo de glcidos en el citoplasma de diferentes
clulas, especialmente nerviosas y hepticas (DALO y
MOUSSATCH, 1878; DAMIR et al., 1987).

21
3.6.8. Familia Asteraceae.

Las plantas de la familia Asteraceae presentan en sus hojas
flavonoides, cumarinas, vitaminas B y C. Las races tienen inulina,
resma, triterpenos pentacclicos, cidos fenlicos, sesquiterpenos
lactona (lactupicnina) y otras sustancias.
www.webcolombia/plantascurativas.com.

3.7. TRABAJOS REALIZADOS CON EXTRACTOS VEGETALES EN EL
CONTROL DE MICROORGANISMOS.

VENEGAS et al (2005), reportan que extractos metanlicos de Mimosa
tenuiflora mostr un rango de inhibicin del crecimiento de 12 20 mm,
para el caso de Escherichia coli. En las cepas de Vibrio cholerae el rango
inhibitorio fue de 12 - 20 mm con Jatropha dioica y de 21 25 mm para M.
tenuiflora. Cuando determinamos las CMB (Concentracin Mnima
Bactericida) para E. coli encontramos que con M. tenuiflora superan los
40mg/ml. En V. cholerae las CMB fueron de 2 20 mg / ml de acuerdo a la
planta.

TEQUIDA (2001) menciona que se evalo la actividad fungicida de plantas
silvestres Larrea tridentata Proboscidea parviflora, Baccharis glutinosa
Datura discolor, controlaron al menos el crecimiento de dos especies de
hongos. Por ejemplo, L. tridentata, inhibi el crecimiento de las seis
especies de hongos en un rango de 41,5% hasta el 100% tomando en
cuenta tanto a los extractos metanlicos como a los extractos etanlicos.
Entre ellos Fusarium poae y Fusarium moniliforme.

22
BRAVO et al (2000), mencionan plantas con accin contra el desarrollo
del micelio y la esporulacin de Fusarium moniliforme (Amphipterygium
adstringens, Rosmarinus officinalis, Mimosa tenuiflora, Piper nigrum,
Cestrum nocturnum y Haematoxylom brasiletto); con accin sobre el
desarrollo del micelio (Larrea tridentata y Origanum vulgare) y con
marcado efecto antiesporulante y con escaso efecto sobre el micelio
(Psidium guajava, Ligustrum lucidum, Byrsonima crassifolia, Pinus sp.,
Pithecellobium dulce, Juglans regia, Manguifera indica, Artemisa
ludoviciana, Rhynchosia sp. y Spathodea campanulata).

OROZCO (2000), menciona que el extracto hidroalcoholicos de Ipomoea
nil controla a la bacteria Ralstonia solanacearum en ensayos bajo
condiciones de laboratorio en el cultivo de pltano (Musa paradisiaca L.)
pero en invernadero no ha dando resultado.

BUENAS ONDAS (2001), menciona que el extracto acuoso de semillas
del rbol "neem" (Azadirachta indica), se pulverizan sobre las plantas a
dosis de 50 g de semillas/ litro de agua. Este preparado tambin tuvo
mucho xito como fungicida actuando contra hongos de los siguientes
gneros: Fusarium spp., Rhizoctonia spp., Sclerotium spp. y Sclerotinia
spp.

GISAZA (2003), menciona que la higuerilla (Ricinus communis) es
repelente de moscas y zancudos. En el mbito de la proteccin de plantas
y productos almacenados la higuerilla tiene una gran eficacia contra

23
hongos, nemtodos, insectos y caros. Adems es una planta husped
para insectos benficos.

LOAIZA et al (1996), mencionan que se obtuvieron extractos hidro-
alcohlicos de diferentes partes de cada planta. Los extractos de Quassia
amara (hombre grande) y Aloe variegata (sbila), fueron los que
evidenciaron efectos positivos contra insectos y hongos respectivamente.

TUESTA (2005), menciona que la mayor cantidad de botones florales y
flores por planta de tomate (Lycopersicum esculentum), se obtuvo con el
extracto de Chenopodium ambrosioides (Paico) a 40 ml/l de agua
registrando 24,11 y 18,92 respectivamente, pero no muestra buena
eficacia como fungicida para el control de Stemphylium solani causante de
la mancha gris del Tomate.

TAPIA et al (1996), realizaron ensayos para curar diferentes
enfermedades de la sangre. Seleccionaron la hierba sosa (Solanum
torvum) y el llantn (Plantago major), para evaluar los efectos de sus
extractos acuosos sobre la proliferacin de clulas sanguneas, en los
ensayos obtuvieron que las concentraciones de 0,4 y 0,2 g/ml, estimul la
produccin de leucocitos in vivo, la concertacin de 0,05 de S. turvum o de
P. major producen el mismo efecto que las concentraciones de 0,4 y 0,2
g/ml. En los ensayos in Vitro, no se obtuvo actividad antibacteriana o
antimictica de los extractos ensallados.

24
IV. MATERIALES Y MTODOS.

4.1. UBICACIN DEL EXPERIMENTO.

El presente trabajo de investigacin se realiz en el Laboratorio de
Fitopatologa y en el invernadero ubicado en la segunda planta de los
laboratorios de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad
Nacional de San Martn; situado en la Ciudad Universitaria, del distrito de
Morales, provincia y regin San Martn, cuya ubicacin geogrfica es:

4.1.1. Ubicacin Geogrfica.

Latitud sur : 06 29 40
Longitud oeste : 76 27 55
Altitud : 295 m. s. n. m. m.

4.2. METODOLOGA.

Este trabajo se realiz de Marzo a J unio del 2006, siguiendo los pasos
bsicos citados por ARNING y VELSQUEZ (2000), para desarrollar los
plaguicidas botnicos, el cual tuvo dos fases: La primera en laboratorio y la
segunda en invernadero las cuales se describen a continuacin:

25
4.2.1. Fase Laboratorio.

a. Recoleccin de Muestras.

Se recolectaron plantas de
Cebolla china de la variedad
roja trujillana del Fundo El
Pacifico (de Propiedad del
Ing. J orge Lus Pelez
Rivera), que presentaron
sntomas de marchitamiento
y clorosis (Foto 01), siendo
trasladadas en sobres de
papel al laboratorio para el aislamiento e identificacin. El fundo en
mencin se ubica en el sector Killoallpa, en el distrito de Lamas, la
cual se encuentra dentro de la zona de vida de Bosque seco
tropical, teniendo precipitacin promedio anual de 1200 mm. y una
temperatura promedio de 24C (HOLDRIDG, 1987). Estas muestras
fueron seleccionadas, embaladas en bolsas de papel, etiquetadas y
trasladadas al Laboratorio de Fitopatologa.

Fundo El Pacifico - Lamas
Foto 01: Planta de cebolla china
con sntomas de marchitamiento y
clorosis

26
b. Cmara hmeda.

De las plantas recolectadas
se sacaron muestras de
bulbos enfermos (tozos de
0,9 cm por 1 cm aprox.)
colocndolas en cmaras
hmedas diseadas
utilizando 5 placas petri,
conteniendo papel toalla
humedecido con agua
destilada, luego se coloc una lamina porta objetos sobre el cual se
distribuyeron las muestras en nmero de 4 por cmara hmeda,
procediendo a taparlo e incubarlo a 27C 2 por 5 das, tiempo en
que apareci el micelio del hongo (Foto 02). Esto se realiz con la
finalidad de reforzar el anlisis fitopatolgico.

Foto 02: Trozos de cebolla con
micelio despus del periodo de
incubacin en Cmara Humedad.
c. Anlisis fitopatolgico.

Consisti en la descripcin
de los sntomas y la
identificacin mediante el
mtodo de grahan
utilizando un estilete para
sacar una fraccin del
Lab. Fitopatologa UNSM - T
Foto 03: Observacin del
patgeno obtenido en la cmara
hmeda.

27
micelio crecido y desarrollado del hongo en las cmaras hmedas,
ponindola en una lamina porta objeto. Se aadi una gota de Azul
de algodn y se cubri con una lmina cubre objeto para su
observacin en un microscopio compuesto (Foto 03).

d. Preparacin del medio de cultivo PDA (Papa Dextrosa
Agrar).

Se prepar poniendo en un
recipiente 200 g de papa
picada (sin pelar) ms 500
ml de agua, cocinndolo en
el horno microondas por 20
min. En otro recipiente se
coloc 20 g de agar, con
otros 500 ml de agua,
colocndolo en el mismo horno por 10 min tiempo en que el agar
quedo completamente fundido (Foto 04).

Una vez cocinado los 200 g
de papa, se filtr el caldo
utilizando un tamiz sobre el
agar fundido en el otro
recipiente. Luego se
mezcl, aadiendo 20 g de
Foto 04: Preparacin del medio de
cultivo PDA.
Foto 05: Distribucin y tapado de
las botellas de vidrio con medio
PDA.

28
glucosa. Finalmente se complet con agua hasta 1000 ml, para ser
distribuido en botellas a razn de 100 ml, siendo tapados con
algodn (limpio y estril) y llevados para su esterilizacin a 121C
(15 lb de presin) por 20 min (Foto 05).

e. Aislamiento.

Se procedi a lavar los
bulbos y races de las
plantas recolectadas con
abundante agua, para luego
cortarlos en trozos finos
(muestras), siendo
desinfectados con
hipoclorito de sodio al 1
o
/o durante 2 minutos, pasado este tiempo
se coloc sobre papel toalla quedando listo para el aislamiento
(Foto 06). Seguidamente se
procedi al plaqueado del
medio PDA en placas Petri
y a la siembra de doce (12)
muestras (en la cmara de
flujo laminar), utilizando una
pinza esterilizada,
colocando una muestra en
el centro de cada placa (Foto 07), finalmente se sellaron con cinta
plstica, se etiquetaron e incubaron a 27 C 2. Una vez
Foto 06: Desinfeccin de las
muestras.
Foto 07: Siembra de las muestras
en placas petri.

29
desarrollado el hongo, se procedi al reaislamiento y multiplicacin
(repique).

f. Repique.

Se utiliz una esptula
esterilizada para el traslado
de la rodaja de 0,8 mm del
hongo aislado al centro de
otras placas petri
conteniendo el mismo medio
de cultivo (PDA), con la
finalidad de obtener
aislamientos puros del hongo para facilitar su identificacin (Foto
08).

Foto 08: Siembra de las muestras
en placas petri.
g. Identificacin.

Se realiz con un microscopio compuesto y la clave taxonmica de
BARNETH & HUNTER (1973) y TOUSSON & NELSON (1968).

h. Prueba de patogenicidad

Para esta prueba se utiliz
semillas de cebolla china de
la variedad trujillana, siendo
sometidas a tratamiento
Foto 09: Suelo desinfestado en
estufa.

30
trmico a 46C por 20 minutos, dejando reposar por 24 horas sobre
papel. Posteriormente se desinfest 5 kilos de suelo en la estufa a
121C por 3 horas (Foto 09). Una vez desinfestado el suelo se
distribuy en macetas, de 1 kilo de capacidad.

Luego se tomo una placa
petri con el micelio del
patgeno, siendo extrado
utilizando agua destilada en
una pizeta (Foto 10),
obteniendo una solucin de
130 ml de conidias e hifas
infectivas (inculo) cuya
concentracin fue de 1,26 x
10
5
conidias / ml, el cual fue asperjado directamente al suelo antes
de la siembra de las semillas vegetativas (5 bulbillos / maceta).

Foto 10: Inoculacin del hongo
al suelo.
i. Reaislamiento.

Al manifestarse los sntomas de la enfermedad despus de la
inoculacin se procedi a reaislar el hongo, tomando nuevamente
muestras de la zona radicular, procediendo a su multiplicacin para
la prueba de alimento envenenado.

31
j. Prueba de alimento envenenado.

Obtenidas las colonias puras del hongo, se procedi a la
preparacin del medio PDA mezclado con extractos vegetales el
cual tuvo como primer paso la recoleccin de las partes a utilizar de
las plantas a investigar (Cuadro 2).

Cuadro 2: Plantas en estudio.
Nombre comn Nombre cientfico Parte utilizada
Neem
Azadirachta indica
(Familia: Meliaceae)
Hoja
Tomatillo
Solanum torvum
(Familia: Solanaceae)
Planta
Higuerilla
Ricinus communis
(Familia: Euphorbiaceae)
Semilla
Vergonsoza
Mimosa pudica
(Familia: Mimosoideae)
Hoja
Diente de len
Emilia fosbergii
(Familia: Asteraceae)
Planta
Pin
Jatropha gossypifolia
(Familia: Euphorbiaceae)
Fruto inmaduro
Rosa castilla
Rosa sp
(Familia: Rosaceae)
Flor y hoja
Bejuco
Ipomoea purpurea
(Familia: Convolvulaceae)
Hoja
Paico
Chenopodium ambrosioides
(Familia: Chenopodiaceae)
Hoja
Sbila
Aloe vera
(Familia: Liliaceae)
Hoja

32
Mtodo de extraccin:

Las partes utilizadas de las plantas en estudio, estuvieron
sanas y libres de dao por plagas. Se pes 100 g de cada
planta. Las hojas, flores y ramas fueron lavadas con agua
destilada y machacadas usando mortero y piln, ambos
limpios. En el caso de las semillas de Higuerilla y frutos
inmaduros de Pin se molieron, obteniendo una torta que
se dej reposar por 6 horas en agua destilada en proporcin
1:1 (100 g de torta en 100 ml de agua), para extrae el
contenido.

Las hojas, flores, frutos y semillas trituradas fueron
tamizados obteniendo as los extractos puros, aadindose
en las botellas de vidrio que contenan 100 ml de medio
PDA. Las dosis que se experimentaron por cada extracto
fueron: 0 ml, 1 ml, 2 ml y 4 ml por 100 ml de medio PDA.
Luego fueron esterilizadas a 121C por 20 min,
posteriormente se realiz el plaqueado de los medios
envenenados.

Cuando se solidifico el medio se sembr una rodaja de 0,8
mm del hongo crecido y desarrollado en PDA en el centro de
cada placa petri. Para esta prueba se utiliz el Diseo
Completamente al Azar (DCA) con arreglo factorial 10

33
(Extractos) x 4 (dosis), teniendo un total de 40 tratamientos
(Cuadro 3), con 5 pruebas por cada uno de ellos.

Cuadro 3: Tratamientos en estudio.

Factor A (Plantas)
Trat.
Nombre comn Nombre cientfico
Factor B (dosis)
1 Diente de Len E. fosbergii 0 ml
5 Pin J. gossypifolia 0 ml
9 Higuerilla R. communis 0 ml
13 Neem A. indica 0 ml
17 Sbila A. vera 0 ml
21 Bejuco I. purpurea 0 ml
25 Vergonzosa M. pudica 0 ml
29 Paico Ch. ambrosioides 0 ml
33 Rosa castilla Rosa sp 0 ml
37 Tomatillo S. torvum 0 ml

34
4.2.1. Fase Invernadero.

Se realiz, utilizando una estructura de modificacin ambiental mnima
denominada caseta, con la finalidad de disminuir los efectos de las
condiciones ambientales externas.

a. Preparacin y aplicacin del inculo.

Se procedi a llenar los
maceteros con suelo
esterilizado en estufa a
121C por 3 horas (Foto 11).
Para la inoculacin, se liber
de una placa petri el micelio
del hongo Fusarium
oxysporum, con agua
destilada, obteniendo una
solucin de 130 ml (hifas y
conidias), con una
concentracin de 1,28 x 10
5

conidias / ml, siendo
inoculado al suelo de las
macetas y por aspersin
(Foto 12) y luego se sembr
de los bulbillos de cebolla china.
Foto 11: Llenado de los maceteros
con tierra.
Foto 12: Inoculacin del hongo en
el suelo.

35
b. Siembra de bulbos del hospedante

Se sembr cinco bulbillos de
Cebolla china variedad
trujillana por macetero
siguiendo el procedimiento
que se realiza en el Fundo
Hortcola El Pacifico (Foto
13).

Foto 13: Inoculacin del hongo en
el suelo.
c. Preparacin de extractos vegetales.

Se seleccionaron las plantas que tuvieron mejor control en la fase
de laboratorio con sus respectivas dosis de aplicacin. Se pes
nuevamente 100 g de cada planta, procediendo a lavarlas con
agua destilada y machacarlas con mortero y piln. (Cuadro 4)

Cuadro 4: Plantas y dosis aplicadas en invernadero
Nombre comn Nombre cientfico Dosis: ml/l
H20
Neem Azadirachta indica 10
Tomatillo Solanum torvum 10
Higuerilla Ricinus communis 40
Vergonzosa Mimosa pudica 10
Diente de len Emilia fosbergii 10
Rosa castilla Rosa sp 40
Bejuco Ipomoea purpurea 10

36
d. Aplicacin de los extractos.

Se realiz despus de la
siembra, y despus de la
aparicin de los sntomas
de la enfermedad, siendo
cada semana hasta la
cosecha en horas de la
tarde. Para este
experimento se utiliz el
Diseo Completamente al Azar (DCA) con 8 tratamientos (Cuadro
5) y 5 observaciones por cada tratamiento (Foto 14).

Cuadro 5: Descripcin de los tratamientos.
Foto 14: Vista de los
Tratamientos en Invernadero.
Trat. Extractos vegetales Dosis: ml/l
H2O
T1 Testigo (Hospedero) Sin aplicacin
T2
Extracto de Rosa castilla
(Rosa sp)
40
T3
Extracto de Higuerilla
(Ricinus communis)
40
T4
Extracto de Tomatillo
(Solanum torvum)
10
T5
Extracto de Diente de len
(Emilia fosbergii)
10
T6
Extracto de Neem
(Azadirachta indica)
10
T7
Extracto de Bejuco
(Ipomoea purpurea)
10
T8
Extracto de Vergonzosa
(Mimosa pudica)
10

37
4.3. PARMETROS EVALUADOS.

4.3.1. En Laboratorio.

a. Caractersticas del patgeno.

Se realiz dos tipos de observacin siendo la primera a travs
de un microscopio compuesto (objetivo 40x / ocular 10x) para
determinar la forma y color del hongo y la segunda con la
visualizacin directa de la colonia en la placa para determinar el
color que presenta, entre otras como:

Medicin de la estructura del patgeno.

Para medir las estructuras del patgeno se utiliz una
solucin de 5 ml del hongo en agua destilada, aadindole
tincin con azul de algodn y utilizando la escala
micrometrica para ser observado en un microscopio
compuesto con un objetivo de 40x / ocular de 16x.

Tiempo de colonizacin.

Se contaron los das desde el aislamiento, hasta que el
hongo cubri por completo la placa petri testigo, siendo este

38
periodo de 8 das, momento en que se detuvieron las
evaluaciones.

b. Sntomas (Prueba de patogenicidad).

Se evalu en la prueba de patogenicidad, desde la aparicin de
los sntomas (10 das despus de la siembra) hasta la muerte de
la planta, siendo contrastadas con los sntomas encontrados en
campo durante la recoleccin de las muestras.

c. Efecto de extractos vegetales (Alimento envenenado).

Se deline desde un punto central de la placa en forma de cruz,
luego con una regla de procedi a medir los dimetros de la
colonia del patgeno, con el fin de visualizar el efecto de los
extractos (alimento envenenado).

39
4.3.2. En Invernadero

a. Porcentaje de emergencia de la cebolla china: Se evalu el
porcentaje de plntulas de cebolla china emergidas despus de
la aplicacin de los extractos al momento de la siembra.

b. Porcentaje de incidencia de la enfermedad. Se cont el
nmero de plantas con sntomas de la enfermedad por
tratamiento, haciendo la recoleccin de los datos semanalmente,
realizando una antes de la primera aplicacin de extractos y
luego despus de cada aplicacin, expresndolos en porcentaje
bajo la siguiente frmula:

Porcentaje de Incidencia = # de plantas afectadas x 100
# de plantas evaluadas.

c. Porcentaje de Severidad de la enfermedad. Se determino por
la escala de Horsfall y Barrat (1945), citado por REDMAN et al
(1969), siendo modificado en base a la evolucin de los
sntomas de la enfermedad, llevados a porcentaje bajo la
siguiente frmula:

% Severidad = (# de plantas x grado de severidad) x 100
Total plantas x grado mayor

40
Cuadro 6: Escala para determinar el % severidad (basado en
Horsfall y Barrat, 1945).
Grado Denominacin. % de severidad.
0 Tejido sano 0%
1 Leve 1 25%
2 Moderado 26% - 50%
3 Severo 51% - 75%
4 Muerto +76%

Fuente: Propia
Foto 15: Escala para determinar el % severidad (Laboratorio de
fitopatologa UNSM T)
3
2 1 0
4

41
d. Eficiencia de control de Extractos. La eficiencia de control
se calcul en base a la incidencia, usando la frmula
propuesta por ABBOT (1925)

Donde:

100 (%) x
yte
ytrat yte
Eficiencia

=
yte : Incidencia en el testigo.
ytrat : Incidencia bajo tratamiento.

42
V. RESULTADOS.

5.1. En Laboratorio.

5.1.1. Caractersticas del patgeno.

Cuadro 7: Caractersticas biomtricas y morfolgicas del hongo
Fusarium oxysoprum
Caractersticas Resultados
Tiempo 8 das
Medicin lineal 9,2 cm
Colonia
Color Blanco salmn
Largo 25 40
Ancho 3 4,5
Color Hialino
Septas 4 5
Conidia
Forma
Curvado en los
extremos
Color
Hialino
Hifa
Septado Si

A
a
b
B
Foto 16: A) Colonia en medio PDA. B) Estructuras del hongo
Fusarium oxysporum (a. Hifa, b. Conidia).
Lab. Fitopatologa UNSM - T Lab. Fitopatologa UNSM - T
Aumento total: 400 x

43
5.1.2. Sntomas (Prueba de patogenicidad).

Los sntomas observados en la prueba de patogenicidad
(invernadero) fueron marchitez, amarillamiento desde la punta de
las hojas hacia la base de la planta, bulbos de fcil desunin,
blandos al tacto y con presencia de micelio blanquecino en la base,
siendo los mismos que se presentan en campo.

A
B
Lab. Fitopatologa UNSM - T Fundo El Pacifico - Lamas
Foto 18: Bulbos con presencia de
micelio.
Foto 17: A. Sntomas en campo, B. Sntomas en invernadero.

44
5.1.3. Efecto de extractos vegetales (Alimento envenenado).

alimento

ficativo A signif ativo ns: No significativo

Grfico 1 nc l efec e s br c

F de V. G.L. S.C C.M. F.C
Significacin
Cuadro 8: Anlisis de Varianza para la prueba de
envenenado.

*
:
Signi **: ltamente ic
0,05 y 0,01
Rept. 4 0 0,0031 ,0123 0,98 Ns
A
(Extr
858,63
actos)
9 24,441 2,7158 **
B
(Dosis)
3 58,266 19,4219 6140,71 **
A*B
Dosis (Extractos x )
27 63,686 2,3587 745,77 **
Error 156 0,493 0,0032
Total 199 1 46,898
R
2
: 99,67% CV: 0,679% X: 8,284 cm

: Du an para e to de xtractos o e la olonia de
Fusarium oxysporum.

8
,
8
7

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Extractos utilizados

45
Grfico 2: Duncan de las dosis de aplicacin de extractos sobre la

colonia de Fusarium oxysporum.

9
,
2

a
8
,
1
5

b
7
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,5
0 ml 4 ml 1 ml 2 ml
Dosis de extractos vegetales

46
Duncan para la interaccin de extractos y dosis de

Trat.
Factor B (dosis)
A*B
(Dimetro (cm))
DUNCAN
Cuadro 9:
aplicacin sobre el Dimetro de colonia (cm) de F.
oxysporum.

Factor A (Plantas)

8 a J. gossypifolia 4 ml 9,22
1 E. fosbergii 0 ml 9,2 ab
5 J. gossypifolia 0 ml 9,2 ab
9 R. communis 0 ml 9,2 ab
13 A. indica 0 ml 9,2 ab
17 A. vera 0 ml 9,2 ab
21 I . purpurea 0 ml 9,2 ab
25 M . pudica 0 ml 9,2 ab
29 Ch. a s mbrosioide 0 ml 9,2 ab
33 Rosa sp 0 ml 9,2 ab
37 S. torvum 0 ml 9,2 ab
28 M. pudica 4 ml 9,17 ab
18 A. vera 1 ml 9,15 ab
30 Ch. ambrosioides 1 ml 9,12 b
34 Rosa sp 1 ml 8,865 c
6 J. gossypifolia 1 ml 8,72 d
15 A. indica 2 ml 8,71 d
24 I. purpurea 4 ml 8,65 d
19 A. vera 2 ml 8,56 e
20 A. vera 4 ml 8,56 e
32 Ch. ambrosioides 4 ml 8,525 e
10 R. is commun 1 ml 8,41 f
11 R. communis 2 ml 8,37 f
4 E. fosbergii 4 ml 7,99 g
16 A. indica 4 ml 7,96 g
7 J . gossypifolia 2 ml 7,88 h
3 E . fosbergii 2 ml 7,83 h
27 M. pudica 2 ml 7,615 i
30 Ch s . ambrosioide 2 ml 7,57 i
40 S. torvum 4 ml 7,41 j
39 S. torvum 2 ml 7,38 j
23 I. purpurea 2 ml 7,38 j
35 Rosa sp 2 ml 7,35 j
22 I. purpurea 1 ml 7,225 k
26 M . pudica 1 ml 7,225 k
36 Rosa sp 4 ml 7,07 l
14 A. indica 1 ml 7,05 l
12 R. s communi 4 ml 6,96 m
2 E n . fosbergii 1 ml 6,752
38 S. torvum 1 ml 6,68 o
Grfico 3: Duncan de la interaccin de plantas vs dosis para la prueba de alimento envenenado.

47

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Extractos y dosis aplicadas
D
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d
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c
o
l
o
n
i
a

(
c
m
)

48
5.2. En Invernadero.

Porcentaje de emergencia de la cebolla china.
Cuadro 10: Anlisis de Varianza para el % de emergencia de plntulas
de cebolla china despus de la aplicacin de los extractos.

Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 55,92 7,99 153,51 **
Error 32 1,67 0,052
Total 39 57,59

*: Significativo **: Altamente significativo ns: No significativo

R
2
97,11% C.V 0,31% X 73,41%

Grfico 4: Duncan para el % de emergencia de plntulas despus de
la aplicacin de extractos vegetales.
7
4
,
0
6

a

7
4
,
0
5
8

a

7
4
,
0
5
8

a

7
1
,
2
1

c

7
4
,
0
5
8

a

7
4
,
2
3
8

a
7
4
,
0
5
8

a
7
1
,
5
2
4

b
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5
66,5
68,5
5
5
5
%

d
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r
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n
c
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a

64,
70,
72,
74,
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0

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/
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0

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l
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l
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(
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0

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l
)
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c
a

(
1
0

m
l
/
l
)
Tratamientos

49
Porcentaje de incidencia de la enfermedad.

Cuadro 11: Anlisis de Varianza para el % de incidencia antes de la
aplicacin de extractos.

Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 748,64 106,95 242,48 **
Error 32 14,11 0,44
Total 39 762,75

Cuadro 12: Anlisis de Varianza para el % de incidencia despus de la
primera aplicacin de extractos.

R
2
: 98,15% C.V: 1,38% X: 47,999 %
Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 7067,69 1009,67 1961,41 **
Error 32 16,47 0,52
Total 39 7084,17
R
2
: 99,77% C.V: 1,197% X: 59,95%

50
segunda aplicacin de extractos.
Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 7551,23 1078,75 2055,88 **
Error 32 16,79 0,53
Total 39 7568,02

tercera aplicacin de extractos.
Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 7554,7 1079,24 7009,89 **
Error 32 4,93 0,15
Total 39 7559,63

cuarta aplicacin de extractos.
Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 4668,5 666,93 487,28 **
Error 32 43,8 1,37
Total 39 4712,3
R
2
: 99,79% C.V: 1,05% X: 69,2%
R
2
: 99,94% C.V: 0,53% X: 73,44%
R
2
: 99,07% C.V: 1,51% X: 77,68%

51

quinta aplicacin de extractos.

Significancia
al 0,05 y 0,01
Tratamientos 7 4391,07 627,3 664,59 **
Error 32 30,2 0,94
Total 39 4421,27
R
2
: 99,32% C.V: 1,24% X: 78,29%

8
4
,
6
9

b
8
2
,
1
5

b
8
2
,
1
5

b
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6
,
6
9

c
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1
,
4
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1
,
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2

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2
,
1
5

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2
,
1
5

b
7
2

c
6
1
,
3
8

d
5
6
,
0
6

c
5
0
,
9
52
9
6

b
7
2

d
7
2

c
5
6
,
0
6

e
5
3
,
5
3

g
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1
,
2
2

d
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8
,
6
9

c
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2
,
1
5

c
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2
,
1
5

b
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2
,
1
5

b
7
6
,
8
4

b
7
1
,
5
3

b
5
5
,
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4

a
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0

a
9
0

a
9
0

a
9
0

a
9
0

a
5
0
,
9
9
6

b
6
4
,
1
5

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6
4
,
1
5

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5
6
,
3
1

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5
6
,
3
1

f
5
6
,
3
1

c
4
6
,
3
8

d
6
1
,
1
5

f
5
8
,
8
4

e
5
8
,
8
4

d
5
8
,
8
4

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4
6
,
1
5

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4
3
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6
2

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0

a
9
0

a
9
0

a
9
0

a
5
6
,
8
5

c
4
6
,
1
6

d
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
4 5 6
Evaluaciones
%

d
e

i
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c
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d
e
n
c
i
a
1 2 3
Testigo Rosa sp R. communis S. torvum E. fosbergii A. indica I. purpurea M. pudica
Grfico 5: Duncan para el porcentaje de incidencia de Fusarium oxysporum en invernadero.

40 ml/l
H2O
40 ml/l
H2O
10 ml/l
H2O
10 ml/l
H2O
10 ml/l
H2O
10 ml/l
H2O
10 ml/l
H2O

I.A.A I.D.A.1
era
I.D.A. 2
da
I.D.A. 3
era
I.D.A. 4
ta.
I.D.A. 5
ta

I.A.A.: Incidencia Antes de la Aplicacin I.D.A.: Incidencia despus de la aplicacin

53
Porcentaje de severidad de la enfermedad.

Cuadro 17: Grado (G) de severidad (%S) de la enfermedad
evaluada, antes de la primera aplicacin (inicial) y
despus de cada aplicacin de los extractos.

Inicial 1 Eval. 2 Eval. 3 Eval. 4 Eval. 5 Eval.
Trat
% S G % S G % S G % S G % S. G % S G
T
1
13 1 30 2 62 3 82 4 90 4 95 4
T
2
20 1 38 2 45 2 64 3 87 4 90 4
T
3
15 1 21 1 27 2 43 2 75 3 77 4
T
4
18 1 29 2 36 2 60 3 77 4 85 4
T
5
17 1 35 2 90 4 100 4 100 4 100 4
T
6
14 1 20 1 29 2 41 2 56 3 69 3
T
7
12 1 18 1 28 2 43 2 57 3 69 3
T
8
16 1 24 1 57 3 100 4 100 4 100 4

Eficiencia de control de extractos.
Cuadro 18: Porcentaje de eficiencia de extractos vegetales en el
control de Fusarium oxysporum segn la formula de
ABOOT (1925).

TRAT. Extracto/dosis. % incidencia % de eficiencia
T1 Testigo 84,69 --------
T2 Rosa sp (40 ml/l) 82,15 2,9
T3 R. communis (40 ml/l) 72 14,98
T4 S. torvum (10 ml/l) 82,15 2,9
T5 E. fosbergii (10 ml/l) 90 -6,27
T6 A. indica (10 ml/l) 64,15 24,25
T7 I. purpurea (10 ml/l) 61,15 27,8
T8 M. pudica (10 ml/l) 90 -6,27

54
VI. DISCUSIN.

6.1. En laboratorio.

a. Caractersticas del patgeno.

Las caractersticas del patgeno observado en los aislamientos (foto
16) y descritos en el cuadro 7 pertenecen al hongo Fusarium
oxysporum tal como lo indican AGRIOS (1996) y ROMANO (1998),
siendo este el causante de la marchites y pudricin de bulbos de
Cebolla china (Allium fistolosum L.), que esta afectado en el distrito
de Lamas.

b. Sntomas (Prueba de patogenicidad).

En cuanto a los sntomas observados tanto en campo como en la
prueba de patogenicidad descritos en los resultados (fotos 17 y 18),
afirma las descripciones hechas por AGRIOS (1996) y BEJO (2004)
siendo de la misma enfermedad.

c. Efecto de extractos vegetales (alimento envenenado).

El anlisis de varianza para esta prueba (cuadro 8), nos dice que
existe una alta significancia para:

55
Para los extractos usados (factor A), la prueba de duncan (al 0,05)
en el grfico 1, nos indica que todos los extractos tuvieron efecto
inhibiendo el crecimiento de la colonia de F. oxysporum,
obteniendo los menores promedios con: Diente de len (Emilia
fosbergii) y tomatillo (Solanum torvum) con 7,94 y 7,67 cm de
dimetro respectivamente, a diferencia de los dems extractos,
cuyos promedios fueron mayores a 8 cm.

En cuanto a las dosis aplicadas (Factor B), tambin existi
diferencia estadstica, el cual se muestra en la prueba de duncan en
el grfico 2, indicando que las tres dosis probadas tuvieron efecto
inhibiendo el crecimiento de la colonia de F. oxysporum, es decir,
que dentro de los diez extractos evaluados, la mayora de estos
inhibieron el crecimiento con la dosis de 2 ml/100 ml PDA,
alcanzando un promedio de 7,84 cm de dimetro. Para la dosis de 1
ml/100 ml PDA, pocos extractos tuvieron este efecto sobre el
dimetro de la colonia de F. oxysporum, alcanzando un dimetro de
7,92 cm. Por ultimo la mayora de extractos a dosis 4 ml/ 100 ml
PDA, alcanzaron un promedio de 8,15 cm de dimetro, teniendo
menor efecto de inhibicin sobre el crecimiento de la colonia.

Para la interaccin de los extractos con las dosis aplicadas
(Interaccin A x B), existi diferencia estadstica entre los 40
tratamientos segn la prueba de duncan, en el cuadro 9 y grfico
3, donde se observ que los extractos con mayor inhibicin sobre el

56
dimetro de colonia de F. oxysporum fueron: Bejuco (I. purpurea)
con 1 ml, Vergonzosa (M. pudica) con 1 ml, Rosa castilla (Rosa
sp) con 4 ml, Neem (A. indica) con 1 ml, Higuerilla (R.
communis) con 4 ml, Diente de Len (E. fosbergii) con 1 ml y
Tomatillo (S. torvum) con 1 ml; obteniendo los siguientes
promedios de: 7,225; 7,225: 7,07; 7,05; 6,96; 6,75 y 6,68 cm de
dimetro respectivamente, siendo seleccionados para probarlos en
la fase de invernadero.

Los extractos de Pin (Jatropha gossypofolia) y Paico
(Chenopodium ambrosioides), alcanzaron 7,88 y 7,57 cm. de
dimetro de colonia, solamente con la dosis de 2 ml/100 ml PDA,
posiblemente se deba a que los compuestos fungitoxicos, se
encuentran en la cantidad necesaria para ejercer la accin
inhibitoria.

El medio envenenado con Sbila (Aloe vera), a dosis de 2 y 4
ml/100 ml de PDA inhibieron el crecimiento de la colonia de F.
oxysporum alcanzando un dimetro de 8,56 cm. para ambas dosis,
por lo tanto, tiene efecto contra hongos como lo menciona LOAIZA
et al (1996), que utiliz la especie variegata del mismo gnero
(Aloe), la cual ha tenido un buen efecto contra hongos.

El extracto de Neem (A. indica) a dosis de 1 ml/100 ml PDA,
inhibi el crecimiento de F. oxysporum, alcanzando un dimetro de

57
7,05 cm. teniendo efecto fngico como lo menciona BUENAS
ONDAS (2001).

Para el caso del extracto de Higuerilla (R. communis) usando la
dosis de 4 ml, se demostr lo mencionado por GISAZA (2003),
siendo esta planta eficiente en el control de F. oxusporum, ya que el
dimetro que alcanzo la colonia fue de 6,96 cm.

Estos resultados se deben a que las plantas usadas presentan
dentro de su composicin, compuestos como Fenoles, Taninos,
alcaloides, terpenoides y saponinas, que fueron estudiados por:
SIAMAZONIA (2002) para Pin (J. gossypofolia) y Paico (Ch.
ambrosioides); GARCIA (1992), PALACIOS (1993), SOUSA Y
SOUZA (1993) solo en Paico (Ch. ambrosioides); MORALES
(2003) en Higuerilla (R. communis); GISAZA (2003) en
Vergonzosa (Mimosa sp); UNIVERSIDAD DE MINESOTA (2002)
para Neem (A. indica); MARCANO (1992), en Tomatillo (S.
torvum); MOLYNEUX et al (1995), DALO & MOUSSATCHE (1878)
y DAMIR et al (1987), para las especies del genero Ipomoea
(Bejucos), y las descripciones que mencionan las paginas:
http://latiendadelaloe.comserpro.com., webcolombia.com y
wedislam.com., para Aloe vera (Sbila), la Familia Asteraceae y
Rosa sp, respectivamente. Estos compuestos que mencionan los
autores, tienen efecto inhibitorio en las infecciones producidas por

58
los patgenos tal como lo mencionan AGRIOS (1996) y
http://fai.unne.edu.ar/biologa/fisiologiavegetal.htm.

6.2. Invernadero.

a. Porcentaje de emergencia de la cebolla china.

El anlisis de varianza para el porcentaje de emergencia (cuadro 10),
nos indica que existe una diferencia altamente significativa entre los
tratamientos observados en el grfico 4, siendo los extractos a base
de S. torvum (Tomatillo) con 10ml/l y de Mimosa pudica
(vergonzosa) con 10ml/l los que obtuvieron menores porcentajes de
emergencia de 71,21% y 71,52% respectivamente, despus de la
aplicacin de los extractos al momento de la siembra, este efecto se
debe a que estas plantas contiene Alcaloides que segn
http://fai.unne.edu.ar/biologa/fisiologiavegetal.htm, estos compuestos
ejerce efecto regulador del crecimiento inhibiendo la germinacin, que
en este caso tiene efecto inhibitorio de la emergencia de los plntulas
de cebolla china

b. Porcentaje de incidencia de la enfermedad.

Para este parmetro se obtuvo segn el anlisis de varianza una alta
significancia entre los tratamientos en todas las evaluaciones desde la
Incidencia inicial (antes de la primera aplicacin de extractos) hasta la

59
quinta evaluacin (cuadros 11, 12, 13, 14, 15 y 16) despus de la
aplicacin de los extractos, mostrndose en el grfico 5 que los
extractos de I. purpurea llamado Bejuco (10 ml/l), Azadirachta indica
conocido como Neem (10 ml/l) y Ricinus communis llamado
comnmente Higuerilla (40 ml/l) fueron los que mostraron mayor
efecto fngico, logrando porcentajes de 61,15%; 64,15%; 72%,
respectivamente debido a la presencia de alcaloides (Higuerilla y
Bejuco) y terpenoides (Neem) en su composicin.

De estos extractos mencionado el que tuvo mayor estabilidad en su
efecto fngico fue Bejuco (I. purpurea) ya que despus de la segunda
aplicacin, mantuvo un promedio de 58,84% de incidencia hasta
despus de la cuarta aplicacin, bajando su efecto despus de la
quinta aplicacin, alcanzando 61,15% de incidencia de F. oxysporum.

En el caso de los extractos de Higuerilla (R. communis) y Neem (A.
indica) los efecto fngicos se mantuvieron hasta despus de la tercera
evaluacin con promedios de 56,06 y 56,31% de incidencia,
elevndose despus de la cuarta evaluacin a 72% y 64,15%
respectivamente, mantenindose as hasta la ultima evaluacin.

Con los extractos de Rosa castilla (Rosa sp) y Tomatillo (S. torvum)
con dosis de 40 ml/l y 10 ml/l respectivamente, se pudo observar que
muestran estabilidad despus de la tercera aplicacin para el extracto
de S. torvum y despus de la cuarta aplicacin en el caso del extracto

60
de Rosa sp con promedios de incidencia de 82,15% para ambos. Esto
nos quiere decir que los compuestos fungitxicos de estas plantas
tienen que pasar por un periodo de maceracin para ser liberados.

En los extractos de Diente de len (E. fosbergii) con 10 ml/ l y
Vergonzosa (M. pudica) con 10 ml/l, se observo que aceleraron la
muerte de las plantas de cebolla china despus de la primera
aplicacin de estos extractos, esto nos quiere decir, que estas plantas
ejercen un efecto aleloptico que debilita a la planta hacindola ms
susceptible al ataque de F. oxysporum. Por lo tanto, no ayuda al
fortalecimiento estructural de la planta.

c. Porcentaje de severidad de la enfermedad.

En cuanto al porcentaje de severidad mostrado en el cuadro 17, nos
indica que los extractos de Bejuco (I. purpurea), a 10 ml/l
H2O
y Neem
(A. indica), a 10 ml/l
H2O
, retardan la severidad causada por F.
oxysporum, mantenindolo segn la escala en un 51 a75% de tejido
muerto (grado 3) a diferencia de los tratamientos y el testigo que
alcanzaron ms del 76% de tejido muerto (grado 4), afirmando lo
mencionado por AGRIOS (1996), que hasta el momento no hay un
mtodo que control eficiente para este patgeno.

61
d. Eficiencia de control de extractos.

En el cuadro 18 para el porcentaje de eficiencia de extractos, nos
muestra que los extractos vegetales de Higuerilla (R. communis) a 40
ml/l
H2O
, Neem (A. indica) a 10 ml/l
H2O
y Bejuco (I. purpurea) a 10
ml/l
H2O
, tuvieron mejor control en la incidencia de la enfermedad con
14,98%; 24,25% y 27,8% respectivamente superando a los dems
tratamientos.

Al trmino del experimento, nos encontramos con grandes diferencias en
cuanto al efecto de las plantas en la fase de laboratorio, con los efectos en
la fase invernadero, debindose a que la esterilizacin de los extractos en
laboratorio produjo una alteracin en los efecto contra F. oxysporum,
tambin se puede decir que los extractos vegetales de Diente de len (E.
fosbergii), Vergonzosa (M. pudica) y Tomatillo (S. torvum), necesitaran
de otro mtodo de preparacin ya sea por decoccin o por infusin que les
permita liberar los compuestos fngicos que en su estado fresco no han
podido demostrar, como ha sido en la fase invernadero.

62
VII. CONCLUSIONES.

7.1. Todos los extractos vegetales tuvieron efecto inhibiendo el crecimiento
(dimetro) de colonia de Fusarium oxysporum en la fase de laboratorio.

7.2. Los extractos que tuvieron mayor efecto inhibitorio sobre el dimetro de
colonia de F. oxysporum fueron: Ricinus communis (Higuerilla) con 4
ml/100ml PDA, Emilia fosbergii (Diente de len) con 1 ml/ 100 ml/PDA y
Solanum torvum (Tomatillo) con 1 ml/ 100 ml/PDA con 6,96; 6,752 y 6,68
cm de dimetro respectivamente.

7.3. Los extractos de Solanum torvum (Tomatillo) a 10 ml/ l
H2O
y Mimosa
pudica (Vergonzosa) a 10 ml/ l
H2O
, inhibieron la emergencia de semillas
de cebolla china (Allium fistolosum) variedad trujillana ya que alcanzaron
porcentaje de 71,21% y 71,52% respectivamente a diferencia de los
dems tratamientos.

7.4. Los extractos que mostraron menor incidencia del ataque de F. oxysporum
al final de la evaluacin en invernadero fueron: R. communis (Higuerilla)
a 40ml/l
H20
, con 72%, Azadirachta indica (Neem) a 10 ml/l
H2O
, con
64,15% e Ipomoea purpurea (Bejuco) a 10 ml/l
H2O
, con 61,15%.

7.5. Para el porcentaje de severidad, los extractos de A. indica (Neem) a 10
ml/l
H2O
e I. purpurea (Bejuco) a 10 ml/l
H2O
, inhibieron el ataque de F.
oxysporum. Las plantas afectadas alcanzaron entre 51% a 75% de tejido

63
muerto (grado 3, en la escala) a diferencia de los dems tratamientos que
tuvieron ms del 76% (grado 4).

7.6. En cuanto a la eficiencia de los extractos, contra el ataque de F.
oxysporum, los mayores porcentajes se lograron con R. communis
(Higuerilla) a 40ml/l
H20
, Azadirachta indica (Neem) a 10 ml/l
H2O
, e
Ipomoea purpurea (Bejuco) a 10 ml/l
H2O
, con 14,98%; 24,25% y 27,8%
respectivamente.

7.7. Se logr encontrar plantas existentes en nuestras regin con potencial
fungicida como: Tomatillo (S. torvum), Bejuco (I. purpurea), Diente de
len (E. forbergii), Higuerilla (R. communis), Rosa castilla (Rosa sp),
para el control de Fusarium oxysporum en Cebolla China.

64
VIII. RECOMENDACIONES.

8.1. Realizar otros ensayos en laboratorio e invernadero utilizando los 10
extractos y las mismas dosis, para el control de otras especies del gnero
Fusarium.

8.2. Realizar trabajos utilizando con diferentes dosis aplicacin en campo de
Bejuco (I. purpurea) y Higuerilla (R. communis), para el control de
Fusarium oxysporum y ensayos con diferentes mtodos de extraccin para
el caso de Diente de len (E. fosbergii) y Tomatillo (S. torvum).

8.3. Investigar otras plantas que tengan altos contenidos de compuestos
fenlicos y alcaloides que sean abundantes en nuestra regin.

8.4. Realizar investigaciones utilizando de plantas con efectos plaguicidas para
reducir el excesivo uso de agroqumicos que afectan al medio ambiente y
la salud del productor y consumidor.

65
IX. BIBLIOGRAFA.

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73
RESUMEN.
El objetivo fue evaluar el efecto de las dosis de extractos vegetales en el control de
F. oxysporum en Laboratorio e invernadero. Para la prueba en Laboratorio se
recolectarn muestras de cebolla china (Allium fistolosum) enfermas. Los extractos
se prepararon pesando 100 g de cada planta. Las hojas se trituraron y las semillas
se molieron agrando agua destilada, reposando por 24 h, aadiendo las dosis
respectivas al medio de cultivo PDA. Para esta prueba se us el Diseo
Completamente al Azar (DCA) con arreglo factorial 10 (plantas) x 4 (dosis: 0 ml, 1
ml, 2 ml y 4 ml) y la prueba de duncan (al 0,05). En esta prueba los extractos de I.
purpurea de 1ml, de M. pudica de 1ml, de Rosa sp de 4ml, A. indica de 1ml, R.
communis de 4ml, E. fosbergii de 1ml y S. torvum de 1ml obtuvieron efecto sobre el
dimetro de colonia con promedios de 7,225; 7,225; 7,07; 7,05; 6,96; 6,752 y 6,68
cm respectivamente con respecto al testigo (9,2 cm), siendo utilizados para la fase
de invernadero donde la preparacin de extractos fue la misma que en laboratorio.
Para esta prueba se us un diseo completamente al azar (DCA) con 8
tratamientos y 5 observaciones, realizando la prueba de Duncan al 0,05,
obteniendo resultados la emergencia con los extractos de S. torvum (10ml) con
71,21% y M. pudica (10ml) con 71,524%, siendo menores con respecto a los
dems tratamientos; para la incidencia los mejores extractos fueron R. communis
(40ml/l) con 72%, A. indica (10ml/l) con 64,15% e I. purpurea (10ml/l) con 61,15%,
obteniendo porcentajes de eficiencia en el control de 14,98; 24,25 y 27,8
respectivamente; en el % de severidad los extractos de A. indica (10ml/l) e I.
purpurea (10ml/l), retardaron el avance de la enfermedad hasta el grado 3 al final
de la evaluacin.

74
SUMARY.

The objective was to evaluate the effect of the doses of vegetable extracts in the
control of F. oxysporum in Laboratory and hothouse. For the test in Laboratory was
gathered samples of Chinese onion (Allium fistolosum) sick persons. The extracts
got ready weighing 100 g of each plant. The leaves were crushed and the seeds
were milled I enlarge distilled water, resting for 24 h, adding the respective doses to
the means of cultivation PDA. For this test the Design was used Totally at random
(DCA) with factorial arrangement 10 (you plant) x 4 (dose: 0 ml, 1 ml, 2 ml and 4
ml) and the duncan test (at the 0,05). In this test the extracts of I. purpurea 1ml, of
M. pudica 1ml, of Rosa sp 4ml, A. indica of 1ml, R. communis 4ml, E. fosbergii 1ml
and S. torvum 1ml obtained effect on the colony size with averages of 7,225; 7,225;
7,07; 7,05; 6,96; 6,752 and 6,68 cm respectively with regard to the witness (9,2
cm), being used for the hothouse phase where the preparation of extracts was the
same one that in laboratory. For this test a design was used totally at random
(DCA) with 8 treatments and 5 observations, carrying out the test from Duncan to
the 0,05, obtaining results the emergency with the extracts of S. torvum (10ml) with
71,21% and M. pudica (10ml) with 71,524%, being smaller with regard to the other
treatments; for the incidence the best extracts were R. communis (40ml/l) with 72%,
A. indica (10ml/l) with 64,15% and I. purpurea (10ml/l) with 61,15%, obtaining
percentages of efficiency in the control of 14,98; 24,25 and 27,8 respectively; in
the% of severity the extracts of A. indica (10ml/l) and I. purpurea (10ml/l), they
slowed the advance of the illness until the grade 3 at the end of the evaluation.

75

76
ANEXO 1

PLANTAS UTILIZADAS EN EL EXPERIMENTO.

Higuerilla
(Ricinus communis)

Neem Tomatillo Vergonzosa
(Azadirachta indica) (Solanum torvum) (Mimosa pudica)

Bejuco Pin Diente de len
(Ipomoea purpurea) (Jatropha gossypifolia) (Emilia fosbergii)

Paico Sabila Rosa castilla
(Chenopodium ambrosioides) (Aloe vera) (Rosa sp)

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