MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL MSc.

Miluska Vega

LABORATORIO N 5 MICOLOGA 1. Objetivos Tomar conocimiento de los hongos microscpicos. Observar en el microscopio las diferentes formas, estructuras y contribuyentes de los diferentes hongos microscpicos.

2. Introduccin La Micologa es la ciencia que se ocupa del estudio de los hongos, definindolos como organismos macroscpicos y microscpicos de distribucin universal, dispersos en el aire, superficies terrestres, agua marinas, lacustres y fluviales, desde helados casquetes polares hasta los ms ridos desiertos. Los hongos contribuyen a la descomposicin de la materia orgnica y participan en los ciclos biolgicos, como as tambin son patgenos de animales y plantas. A los hongos que se nutren de materia muerta se les conoce como saprofitos y los que requieren de materia viva se los denomina parsitos. En el sistema de clasificacin de los seres vivos en cinco reinos, se encuentran clasificados en el Reino Fungi. Los hongos se dividen en cuatro clases (Phila):

Ascomycota: Pleospora herbarum

Basidiomycota: Coprinus cinereus

Zygomycotes: a-Rhizopus, b-Mucor

Chytridiomycota: Allomyces sp.

La clase Ascomycota es la ms extensa, comprende el 50% de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos patgenos. A los hongos deuteromicetos no se les conoce su reproduccin sexual, se los denomina tambien hongos imperfectos o mitospricos (no tiene categora sistemtica), que representa el segundo grupo ms numeroso y que tambin incluye patgenos humanos. Los hongos son seres vivos eucariota, carentes de clorofila y puede ser unicelulares o filamentosos, sin formar tejidos especializados. Debido a la ausencia de clorofila los hongos son quimiohetertrofos aerobios o microaerfilos, obtienen los nutrientes por absorcin. Los hongos unicelulares o levaduras se reproducen por escisin o brotes, algunos bajo ciertas condiciones de crecimiento emiten prolongaciones semejantes a un filamento, se les denomina pseudomicelio. En su aspecto macroscpico, las colonias de levaduras suelen ser de color blanco crema, ms o menos lisas, o de aspecto seco y plegado y de tamao variable. Los hongos filamentosos o mohos son tubos cilindricos ramificados (continuos o tabicados) con crecimiento apical, esto es, crecimiento originado por las puntas de las hifas. El thallo (cuerpo) filamentoso se denomina micelio y las ramificaciones originadas de l se llaman hifas. El micelio de fructificacin se especializa en producir esporas, para la reproduccin. El micelio vegetativo penetra en el sustrato para obtener los nutrientes. Los hongos filamentosos representan el crecimiento ms tpico de los hongos microscpicos; en medios de cultivo slidos y tambin sobre cualquier superficie en la que se desarrollen (por ej frutas u otros alimentos) producen colonias algodonosas o pulverulentas que son muy caractersticas. Su identificacin se basa en criterios fisiolgicos, sobre la base de pruebas bioqumicas.

Levaduras en escisin

Hifas septadas

3.

Tcnicas de identificacin de levaduras

Las pruebas para identificacin de levaduras pueden agruparse en dos categoras: Pruebas morfolgicas: aspecto de las colonias, observacin macroscpica de los cultivos, presencia de ascosporas. Pruebas fisiolgicas: temperatura mxima de crecimiento, capacidad de utilizacin de diversos compuestos como fuente nica de carbono en condiciones de aerobiosis, capacidad de fermentacin de diversos azcares, capacidad de utilizacin de diversos compuestos como fuente nica de nitrgeno, actividad ureasa, capacidad de crecimiento con altas concentraciones de glucosa.

4.

Estudio Morfolgico de Levaduras a) Materiales necesarios Solucin de azul de metileno o lactofenosl Porta y cubre objetos Vasos de precipitado de 10 ml. Agua azucarada Bistur Pinzas Microscopio compuesto Cinta adhesiva Material que deben traer los alumnos ( levadura de pan granulada o en pasta)

b) Tcnica Colocar 5 ml de agua azucarada y a 30 C. en la vaso de precipitado. Adiciona 1 gr. De levadura. Dejar reposar por 20 minutos. En un portaobjetos coloca una gota de lugol y adiciona una gota de la muestra preparada. Observa al microscopio la preparacin. Dibuja y describe las observaciones hechas.

Levadura

de

pan:

Saccharomyces

5.

Estudio morfolgico de los Hongos Filamentosos

Entre los criterios ms empleados para la identificacin de los hongos filamentosos est el estudio de las caractersticas macro y microscpicas de las colonias. La morfologa microscpica de los cultivos es la que proporciona por ejemplo: el grosor de los filamentos, el tipo y la distribucin de los septos, la forma, el tamao y la disposicin de las esporas y de las estructuras formadoras de stas. Uno de los mtodos aplicados para la observacin microscpica de los cultivos es la observacin en fresco, con una solucin adecuada. 5.1. Procedimiento a) Materiales necesarios: Solucin lugol (tincin de Gram) Solucion de lactofenol Portaobjetos y cubreobjetos Bistur Pinzas 1 Microscopio ptico Cinta adhesiva Material que deben traer los alumnos: muestras (por ejemplo pan enmohecido, frutas u hortalizas)

b) Tcnica: Preparacin en fresco: Raspa con el bistur una pequea parte del micelio del hongo En un portaobjetos coloca una gota de lugol y extiende la muestra de micelio. Observa al microscopio la preparacin Dibuja y describe las observaciones hechas. Preparacin en cinta adhesiva Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.

Moho del tomate: Penicillium

Moho de ctricos: Aspergillus

Rhizophus: esporangios:
Aspergillus

Zigomiceto: Allomyces:
esporangios: Aspergillus