Que necesitan los organismos para vivir?

- Requerimientos nutricionales (alimento)

-Condiciones fsicas (Temperatura, pH, actividad del agua)

Requerimientos nutricionales
Los organismos necesitan obtener energa y materias primas para poder realizar sus actividades metablicas y desarrollar todo su ciclo vital. En trminos nutricionales y de acuerdo a la cantidad se puede decir que requieren de:
MACRONUTRIENTES MICRONUTRIENTES FACTORES DE CRECIMIENTO

MACRONUTRIENTES
Agregados en cantidades de gramos por litro que estn representados por las fuentes de C, N, S, P, K y Mg.

MICRONUTRIENTES
o elementos trazas representados por las sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co que se agregan a los medios en cantidades de miligramos o microgramos por litro.

FACTORES DE CRECIMIENTO
Componentes orgnicos que no son sintetizados ni metabolizados por las clulas, sino incorporados a estructuras celulares (vitaminas, pseudovitaminas).

Composicin qumica de un microorganismo

Componentes de las clulas (% peso seco)
Carbono 50% Oxgeno 32% Nitrgeno 14% (NH4 ) Fsforo 3% (PO 43-) Azufre 1% (SO42-) Elementos traza Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.

Composicin elemental de clulas microbianas (% peso en base seca)

Elemento
Carbono Hidrgeno Oxgeno Nitrgeno Magnesio Fsforo

Bacterias Levaduras
46-52 Entre 8 y12 18 - 24 Entre 10 y 14 0,1 - 0,5 2,0 - 3,0 46 - 52 Entre 8 y12 18 - 24 Entre 5 y 9 0,1 - 0,5 0,8 - 0,25

Mohos
45-55 Entre 8 y12 18 - 24 Entre 3 y 7 0,1 - 0,3 0,4 - 4,5

Azufre
Calcio Potasio Hierro Otros

0,1 - 1,0
0,01 - 1,0 1,0 - 4,5 0,02 - 0,2 <0,01

0,01 - 0,025
0,1 - 0,3 1,0 - 4,0 0,01 - 0,5 <0,01

0,1 - 0,5
0,1 - 1,4 0,2 -2,5 0,1 - 0,2 <0,01

RELACION DE COMPOSICIONES EN LA FORMULACIN

DE UN MEDIO

C:N:P
Compuesto Protenas Carbohidratos

100:10:(1-5)
Levaduras
35 - 60 30 - 45

Composicin de Biomolculas en clulas microbianas (% peso en base seca)

Bacterias
50 - 60 Entre 6 - 15

Mohos
25 - 40 40 - 55

Lpidos
Ac. Nuclicos Cenizas

Entre 5 y 10
15 - 25 Entre 4 y 10

Entre 5 y 10
Entre 5 y 15 Entre 4 y 10

Entre 5 y 10
Entre 2 y 10 Entre 4 y 10

Temperatura

pH
Actividad del agua (aw)

Potencial Redox

TEMPERATURA
Relacin temperatura-velocidad de crecimiento (ecuacin de Arrhenius)

k(T)= A*exp(-Ea/RT)
k(T): constante cintica (dependiente de la temperatura) A: factor preexponencial o factor de frecuencia. Refleja la frecuencia de las colisiones. Ea: energa de activacin, expresada en kJ/mol. R: constante universal de los gases. Su valor es 8,3143 JK-1mol-1 T: temperatura absoluta [K]

Efectos biolgicos de la temperatura en la clula

Temperaturas cardinales: mnima, mxima y ptima

Clases de microorganismos segn la temperatura de crecimiento

pH
Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio de pH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a la membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas).

Acidfilos
Neutrfilos Alcalfilos

Efectos del pH sobre la velocidad de crecimiento: a. Hongos. b. Bacterias

Actividad de agua (aw)

El valor de la actividad de agua nos da una idea de la cantidad de agua disponible metablicamente. Conforme aumenta la cantidad de solutos en el medio, disminuye su actividad de agua.

a
0 < aW < 1

= P/Po

P = presin de vapor del agua en una solucin Po = presin de vapor del agua pura

ACTIVIDAD DE AGUA DE DIVERSAS SUSTANCIAS

Actividad de agua

Material

Organismo que crece

aw
1.000 0.995 0.980 0.950 0.900 0.850 0.800 0.750 0.700 Agua pura Sangre Humana Agua Marina Pan Jarabe de arce, jamn Chorizo Pasteles de frutas, mermeladas Pescado salado Cereales, caramelos Frutos secos Caulobacter Spirillum Streptococcus, E. coli Pseudomonas, Vibrio Bacilos Gram positivos Cocos Gram positivos Levaduras Hongos filamentosos Halobacterium, Halococcus Hongos xeroflicos

Actividad del agua para diversos microorganismos

CLASIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO A SU TOLERANCIA A LAS SALES DISUELTAS EN EL AGUA

Potencial Redox
ACEPTAR ELECTRONES CAPACIDAD DEL SUSTRATO DE: DONAR ELECTRONES CARACTARSTICA REDUCTORA CARACTARSTICA OXIDANTE

Cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice que desarrolla un metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras que los microorganismos que requieren ambientes reductores (o menos oxidantes) realizan un metabolismo fermentativo.

Clasificacin de los organismos con respecto al consumo de oxgeno

Aerobios

Microaerfilos
Anaerobios facultativos Anaerobios estrictos u obligados

 Hay microorganismos que viven en ambientes

anaerobios que llevan a cabo un metabolismo oxidativo porque usan otro aceptor final de electrones que acta como oxidante ambiental. (nitratos (NO3-), sulfatos (SO42-) u otros compuestos orgnicos oxidados).

Crecimiento
En Organismos multicelulares
Implica un aumento ordenado de todos los componentes de un organismo y no solamente de alguno de ellos.

En Unicelulares
El crecimiento conduce a un aumento en el nmero de clulas ms que en el tamao celular.

DIVISIN CELULAR EN ORGANISMOS UNICELULARES

VIABILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS?

 Con los nutrientes necesarios y las condiciones fsico-

qumicas adecuadas se puede realizar el cultivo de microorganismos de las siguientes formas:

- Batch (lotes) - Fed-Batch (lotes alimentados) - Continuo

Ciclo de crecimiento de las poblaciones microbianas

FASE LAG
Etapa lenta o de retardo lag: - Adaptacin enzimtica al tipo de sustrato. - Adaptacin a la concentracin y condiciones de operacin. Las clulas estn vivas pero no se reproducen (hacen un censo del medio y las condiciones fsicas)

CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Es el tipo de crecimiento donde el nmero de clulas se

duplica cada cierto tiempo

VARIACION DE LA BIOMASA
La velocidad en la variacin de la concentracin de

celular conocida tambin como la VELOCIDAD DE CRECIMIENTO en el nmero de clulas o en la masa celular) se puede expresar as: dN/dt = (biomasa que nace)-(biomasa que muere)

dN/dt = N - KdN

dN/dt=N

dN/dt=0

dN/dt=-Kd N

Donde: dN/dt= rata de crecimiento N= Nmero de clulas o biomasa en el tiempo t, = velocidad especfica de crecimiento (t-1 ), Kd = constante de velocidad de muerte ceular

Tiempo de generacin tg

El tiempo requerido para duplicar el nmero de clulas de una poblacin

Velocidad especfica de

crecimiento

Cambio instantneo en el # relativo de clulas en un intervalo de tiempo

Constante de
velocidad K

El recproco del tiempo de generacin (generaciones/unidad de tiempo)

CALCULO DE LA CONCENTRACIN CELULAR EN EL TIEMPO

Nf =No 2n

n=t/tg

Nf =No 2t/tg

Donde: N= Nmero de clulas o biomasa en el tiempo (t), No = Concentracin inicial de clulas o biomasa, n= nmero de generaciones, tg = tiempo de generacin, t= tiempo, K= constante de crecimiento

ln(Nf )=ln(No ) + [ln(2)/tg ]*t

tg=t*ln(2)/[ln(Nf )-ln(No )]

K=1/tg
K=3,32*[log(Nf )-log(No )]/(tf to )

Bajo condiciones dadas de crecimiento (medio, temperatura, pH, etc) cada especie bacteriana tiene un tiempo de generacin determinado genticamente

Los tiempos de generacin varan ampliamente

El ms corto conocido es de alrededor de 6 min/generacin. Algunas bacterias tienen tiempos de generacin de horas, das, semanas, meses.

VARIACIN DE LA CONCENTRACIN CELULAR

Donde:

Variacin de la concentracin celular en el tiempo, N: Concentracin celular en tiempo (t), : Velocidad especfica de crecimiento (t-1 )

Integrando

N=No expt

N=No expt
Linealizando

ln(N)=ln(No ) + *t

ln(N)=ln(No ) + [ln(2)/tg ]*t

= [ln(2)/tg ]

CONSUMO DE SUSTRATO

Prolongar la fase log

Medio fresco

A medida que aumenta la concentracin celular, la concentracin de sustrato disminuye.

(dN/dt)=YS (-dS/dt)
Donde: dN/dt: Variacin de la concentracin celular en el tiempo, dS/dt: Variacin en la concentracin de sustrato en el tiempo, -YS : es el rendimiento de utilizacin de sustrato.

YS =(dN/-dS)

YS =(Nf No )/(Sf So )

(dN/dt)=YS (-dS/dt)
Dividiendo por 1/N

(1/N)*(dN/dt)=YS *(-dS/dt)*(1/N)

qs =(-dS/dt)(1/N)

=(1/N)*(dN/dt)

=YS qs

Donde qs es la velocidad especfica instantnea de consumo de sustrato por el microorganismo en un intervalo de tiempo

=YS qs
Hay una compensacin entre la tasa de consumo

de sustrato y el rendimiento de forma que los microorganismos que tienen altas tasas de consumo de sustrato tienen rendimientos mas bajos y viceversa.

Crecimiento celular con sustratos mltiples

-Opcion A: consumo simultneo -Opcion B: crecimiento diaxico

ETAPA ESTACIONARIA
Elevada concentracin de biomasa - Escasez de sustrato - Crecimiento lento - Sustrato usado bsicamente para mantenimiento Velocidad de crecimiento = velocidad de muerte
CRECIMIENTO CRPTICO

(dN/dt)=0

Expresin cintica del proceso de mantenimiento

(dS/dt)=-ms N
Donde: mS: coeficiente cintico de mantenimiento celular, kgS/(kgN*h)

ETAPA DE MUERTE O LISIS CELULAR

Expresin cintica del proceso de muerte celular

(dN/dt)=-Kd N Muerte significa la prdida irreversible de la capacidad para reproducirse (crecer y dividirse). Designar a una clula microbiana como muerta no implica su inactividad metablica.

PROBLEMA
Un fermentador de 10 litros de medio es inoculado con 500 ml de inculo de 4,1 g/l. Se sabe que si se deja crecer la cepa, al cabo de 6 horas la biomasa en el fermentador ser de 6 g/l. Determinar el tiempo de duplicacin y el tiempo que deber permanecer la cepa en el fermentador para alcanzar la misma concentracin del inculo.

RELACIN ENTRE LA VELOCIDAD ESPECFICA DE CRECIMIENTO Y LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO

En condiciones de sustrato abundante y ausencia de

inhibicin, la concentracin de sustrato no afecta el valor de . Pero cuando el sustrato se hace limitante, si hay un efecto.

ECUACIN DE MONOD

max: velocidad especfica de crecimiento mxima, (t-1 ) KS: constante de semisaturacin, (g de S/l)

OTRAS ECUACIONES

Donde n es una constante emprica que se obtiene por ajuste de datos experimentales

INHIBICIN DE CRECIMIENTO
Es la disminucin de la actividad de los microorganismos, retardo e impedimento de su desarrollo, y por lo tanto, de la fermentacin. La fermentacin pone lenta e incluso se para, principalmente por:
- Agotamiento de algn elemento necesario (oxigeno,

sustancias nitrogenadas,.....) - Formacin o presencia de sustancias inhibidoras (alcohol, CO2, ciertos sustratos)

INHIBICIN
Por sustrato:

Donde KIS es la constante de inhibicin por sustrato

INHIBICIN
Por producto:

Donde KIP es la constante de inhibicin por producto y P es la concentracin de producto

DATOS DE UNA FERMENTACIN

ANLISIS DE CURVAS DE CRECIMIENTO: APLICACIONES

Objetivo: obligar a un microorganismo a crecer usando arsnico en lugar de fosfato para sus biomolculas.

Fuente del microorganismo: Fango del lago Mono en California, un lago hipersalino con altas concentraciones de arsnico

El fsforo es un bioelemento esencial. Los seres vivos lo usan para hacer ATP que usan como moneda energtica en el metabolismo. Pero tambin se usa para hacer unas cuantas biomolculas, principalmente los cidos nucleicos y los fosfolpidos. Parece que el arsnico puede sustituir al fsforo en los cidos nucleicos. El parecido en la reactividad qumica es lo que explica la toxicidad del arsnico. Se incorpora en las rutas metablicas del fsforo sustituyndolo en la formacin de enlaces steres. Pero a diferencia del fsforo, las biomolculas que llevan arsnico en su composicin son mucho menos estables.

Anlisis Nano-SIMS de clulas de GFAJ-1 creciendo con arseniato (imgenes B, D y F) o con fosfato (imgenes C, E y G). SIMS son las siglas en ingles de Secondary ion mass spectrometry y lo que nos dice esta tcnica es la composicin elemental de las clulas. A mayor color, ms cantidad del elemento (As o P) que se est midiendo.

Curvas de crecimiento de GFAJ-1 en diferentes condiciones de cultivo. En A se representa la densidad ptica y en B el nmero de clulas de los cultivos en presencia de fosfato (lnea contnua y crculos negros), arsenato (lnea discontinua y cuadrados negros) y sin fosfato ni arsenato (lnea continua y tringulos blancos).

CONCLUSIONES
Halomonadaceae crece con un tiempo de generacin de 31 horas en presencia de arsnico y sin fosfato. Si se crece en un medio con fosfato (1,5 mM) y sin arsnico, el microorganismo crece entonces con un tiempo de generacin de 19 horas y se obtienen 10 veces ms clulas en fase estacionaria. Si no hay ni fosfato ni arsenato en el medio, el microorganismo no crece.

CONSUMO DE SUSTRATOS

Caso A

Caso B

Caso C

 Qu nombre recibe este tipo de crecimiento con dos sustratos?

Calcule los tiempos de generacin para dada uno de los sustratos en

cada uno de los casos. Cmo afecta la concentracin inicial de sustrato a: rendimiento sustrato-biomasa, tiempo de generacin global, tiempo total de fermentacin y concentracin final de biomasa. Si se desea hacer una fermentacin con un solo sustrato, Cul elige?

FERMENTACIONES FED-BATCH

Glicerol puro

Glicerol crudo

Comparacin productividades PHB

Influencia del oxgeno en la produccin de biomasa

FERMENTACIN ALCOHLICA
120
Xpred Spred S Ppred P X

120
Xpred
X

Spred
S

Ppred
P

Biomasa -Azcar total - Bioetanol (g/L)

Bio masa -Azcar total - Bioetanol (g/L)

100

100

80

80

60

60

40

40

20

20

0 0 5 10 15 20 25 30

0 0 5 10 15 20 25 30

Tiempo (h)

Tiempo (h)

CONDICIN 1
T= 28C [ ] = 16brix Tiempo = 24 h

CONDICIN 2
T= 38C [ ] = 20brix Tiempo = 24 h