Para Clasificar Hongos

INSTITUTO NACIONAL DE CIENCIAS AGRCOLAS Departamento de Biofertilizantes y Nutricin de las Plantas Grupo de Micorrizas Arbusculares
CARACTERIZACION DE LAS PRINCIPALES CEPAS DE HONGOS MICORRZICOS ARBUSCULARES PERTENECIENTES AL CEPARIO DEL INCA. CLASIFICACIN.
Bannie Vzquez Del Llano, Laura Medina Garca, Kalyanne Fernndez Surez, Yakeln Rodriguez Yon, Yonaisy Mujica Prez, Aracelis Mena Echevarra, Loreli Mirabal Alonso, Liannes Arias Hernndez.
La Habana, 2007
Nota aclaratoria: Este Manual es una traduccin al espaol del INVAM, 2003 (International Culture Collection of (Vesicular) Arbuscular Mycorrhizal Fungi) en colaboracin con los Investigadores y Especialistas del grupo de Micorrizas perteneciente al departamento de Biofertilizantes y Nutricin de las plantas.
El grupo de investigacin que dirige la coleccin ms prestigiosa de especies de Glomales,INVAM, ha recuperado, durante la produccin continua de micorrizas arbusculares con fines taxonmicos, suficiente informacin acerca de las principales caractersticas reproductivas de las especies que forman la asociacin micorrzica arbuscular (INVAM, 1993). De esta forma, determinaron diferencias esenciales relacionadas con el potencial infectivo y la genealoga de los organismos fngicos.
Generalidades del Gnero: Glomus Todos los propgulos son altamente infectivos, por lo tanto el cultivo de ellos se puede comenzar a partir de cualquiera de las partes deseadas; los inculos, an sin esporas mantienen un elevado potencial infectivo. Generalmente las especies de este gnero han sido reportadas como eficientes en los diferentes tipos de suelos estudiados (Ver Captulo3).
Clasificacin Taxonmica
Glomeromycota Glomeromycetes Glomerales Diversisporales Glomeraceae Gigasporaceae Acaulosporaceae Entrophosporaceae Pacisporaceae Diversisporaceae Paraglomerales Archaeosporales Paraglomeraceae Geosiphonaceae Archaeosporaceae Glomus Gigaspora & Scutellospora Acaulospora & Kuklospora & Appendicispora Entrophospora Pacispora Diversispora Paraglomus Geosiphon Archaeospora & Intraspora
Nota: Entrophosporaceae, Kuklospora, Intraspora (Sieverding & Oehl 2006, Journal of Applied Botany and Food Quality 80: 69-81).
Glomus intrarradices ESPORAS COLOR: Desde blanco, crema plido (0-0-100) a amarillo pardo (0-10-40-0), algunas veces con un tinte verde. El color es altamente variable. FORMA: Globosa, subglobosa, irregular, con muchas espora elpticas (especialmente las que se extraen de las races micorrizadas). DISTRIBUCIN DE TAMAO: de 40-140 m, promedio = 93.3 m (n = 170). ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Est constituida por tres paredes (L1, L2 y L3), la primera pared est presente solo en esporas juveniles y en la pared de la hifa de sustentacin (que est menos coloreada). L2 y L3 se forman secuencialmente en la pared de la espora y de la hifa de sustentacin (ver secuencia de fotografas).
L1: es la capa externa, hialina, mucilaginosa, tiene de 0.6-3.2 m de espesor, con manchas que van del rosado y rojo (0-60-30-10) al prpura plido (20-6020-10) en presencia de Melzer, cuando estn intactas las esporas juveniles. Por lo general, esta capa se degrada con la edad y se descompone naturalmente.
Puede aparecer granular por la accin de microorganismos y acumular algunos detritos. L2: Las esperas jvenes intactas presentan una capa exterior mucilaginosa adhesiva, hialina, de 1.5-4.9 m de espesor. Con la edad, esta capa se degrada conjuntamente con L1 y tambin adquiere una apariencia granular. A las esporas maduras les falta a menudo las capas L1 y L2, o se encuentran juntas como parches speros. L3: Esta capa va del amarillo al castao plido (0-0-80-0 a 5-0-80-0), la subpared (o lmina) permanece adherida o se separa al aplicar presin. El grado de separacin entre las subparedes vara considerablemente entre las esporas y a menudo se ve afectado por la edad, el parasitismo, o la cantidad de presin aplicada despus del montaje. En las esporas juveniles las subparedes tienen un grosor de 0.5-1 m y la capa se espesa con la formacin de subparedes adicionales. El espesor vara de 3.2-12 m en las esporas maduras. Esta capa se forma simultneamente en la pared de la hifa de sustentacin.
En PVLG
En PVLG y reactivo de Melzer (1:1 v/v)
HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: De cilndrica a ligeramente iluminada, en ocasiones ligeramente estrecho (vea las fotografas). TAMAO: 11-18 m (promedio = 15 m). ESPESOR DE LA PARED COMPUESTA: 3.2-6.4 m. ESTRUCTURA DE LA PARED: Est compuesta por tres capas (L1, L2 y L3) continuas de las tres capas correspondientes a la pared de la espora. Las dos capas exteriores son las nicas presentes en las fases tempranas de formacin de la espora, y las dos se adelgazan o degradan con la maduracin de sta. La hifa reacciona ligeramente en el reactivo de Melzer, indicando algn material residual de L1. Las subcapas de L3 pueden tambin separarse a lo largo de la longitud de la hifa, aunque en menor nmero. OCLUSIN: La subcapa ms profunda de L3 en la pared de la espora no se extiende hacia la hifa de sustentacin. De vez en cuando uns especie de tapn o embudo divide la espora del contenido hifal. GERMINACION El tubo germinal surge del lumen de la hifa de sustentacin y parece proceder de la subcapa ms profunda de L3. En algunas especies el tubo germinal surge de los extremos rotos de la hifa a corta distancia de la espora, por el mismo mecanismo. Esta conducta podra considerarse cuando se analice la alta infectividad que poseen los fragmentos de hifas en hongos de esta especie. MYCORRIZA Los arbsculos y las hifas en las clulas corticales de sorgo, maz y trbol rojo se tien de oscuro con el Azul de tripano. Numerosas vesculas (o esporas) se forman a menudo cerca del punto de entrada de la hifa, a lo largo de la red arbsculo-hifal. An no se ha dilucidado como las vesculas intraradicales son
capaces de diferenciarse posteriormente en esporas, debido a que se forman dentro de las races.
Arbsculos en clulas corticales de maz
Estructura de la micorriza en maz
La colonizacin arbuscular parece alcanzar el mximo en Glomus antes que en muchos otros hongos, con races ms viejas que contienen a menudo una red hifal ms extensa (menos el arbsculo) y numerosas esporas intrarradicales. Estas esporas tienden distribuirse irregularmente en algunas especies hospederas y formar racimos densos en otros huspedes (vea las fotografas debajo). Es esta propiedad de agregacin abundante de esporas dentro y alrededor de las races la que ha ocasionado que numerosos micorrizlogos confundan esta especie con Glomus fasciculatum.
Esporas en maiz crecido en maceta
Esporas en manzana crecida en campo
Glomus clarum ESPORAS COLOR: Desde el blanco hasta el

Extrado fresco Conservadas en seco 2 aos De races teidas
amarillo pardo (0-1060-0), pasando por el amarillo plido (0-020-0) y el pardo plido (0-10-20-0).
FORMA: Globosa, subglobosa, algunas veces elptica, oblonga o irregular (posiblemente en esporas formadas dentro de las races). DISTRIBUCION DEL TAMAO: 100-260 m, promedio = 182 m (n=120). ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED ESPORA: Est formada por tres capas (L1, L2 y L3), todas pueden estar adheridas pero L3 a menudo se separa en las esporas maduras al aplicar presin. Estas capas forman consecutivamente la pared de la espora diferenciada (de izquierda a derecha en la secuencia de fotos abajo), con slo L1 presente en la espora y en la pared de la hifa.
L1: Es una capa hialina, mucilaginosa, normalmente se degrada y se desprende, por lo que a menudo est ausente en las esporas maduras. Tiene de 1.0-4.7 m de espesor cuando est distribuida en la espora, pero se extiende a menudo formando parches de 8.5 m de espesor en las esporas ms jvenes. Se tie de
rosado-rojo (20-80-20-0) a prpura brillante (20-80-40-0) en el reactivo de Melzer. Esta capa aparece casi laminada en las esporas juveniles. L2: Es hialina permanentemente, mide de 9-14.5 m de espesor (promedio de 11.3 m). Consiste en subcapas que no son quebradizas, sino de una consistencia granular que causa agrietamiento y fragmentacin de la pared de la espora, las esporas aparecen a menudo "aplastadas" (vea la fotografa de la derecha). Esta capa es ms espesa (tanto como un 25%) en algunas regiones para que la superficie interna aparezca "ondulada" y a veces parece tener protuberancias poco profundos. La superficie de esta capa parece a menudo escamosa en PVLG y llena de parches en el reactivo de Melzer debido a la degradacin desigual de la capa exterior (L1). L3: Otra capa permanente, normalmente consiste de 2-4 subcapas (o lminas); que van del color amarillo (0-0-40-0) al amarillo oscuro (0-10-60-0). Tiene de 1.2-3.5 m de espesor (la mayora cerca de 2.5 m). Las subcapas normalmente estn adheridas, pero a veces se separan y espesan (a 12 m de espesor) a la juntura de la hifa de sustentacin.
En PVLG
En PVLG y reactivo de Melzer (1:1 v/v)
HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: Cilndrica, en ocasiones ligeramente estrecha o irregular. TAMAO: 18-24 m (promedio = 22.1 m).
ESTRUCTURA DE LA PARED: Formada por tres capas (L1, L2 y L3), con L1 que adelgaza hasta hacerse apenas visible hasta 5 m de la superficie de la espora. Tiene un espesor de 6.4-10.6 m cerca de la espora (media=8.7 m), adelgazando a menos de 3 m con slo L3 visible. L1 es mucilaginosa y es la nica capa presente en la hifa de sustentacin juvenil, momento en el que la pared de la hifa es menor de 1.0 m de espesor. L2 es laminada y se contina con la L2 de la pared de la espora. Parece sintetizarse al mismo tiempo en que se sintetiza la pared de la espora temprana, alcanza entre 4.8-11.2 m de espesor en su madurez. L3 es visible como una capa muy delgada (normalmente <0.8 m de espesor, de vez en cuando hasta 1.6 m) y de color plido amarillo (0-010-0). En algunas esporas blancas, esta capa no puede verse. OCLUSIN: La subcapa mas profunda de L3 forma una especie de puente en el poro, aunque a menudo est tan delgada que el poro parece estar abierto (vea la fotografa). En ocasiones, la pared de algunas esporas se suaviza en esa zona y casi ocluye el poro, formndose un tapn. GERMINACIN El tubo germinativo surge del lumen de la hifa de sustentacin, se origina, ya sea en el septum o producto de una rotura en la ramificacin. Parece producirse en la subcapa ms interna de L3 en ambos casos. MICORRIZA Las vesculas son oblongas, elpticas y a menudo se producen cerca del punto de entrada de la raz. La produccin de arbsculos comienza temprano en la colonizacin micorrzica (vea las fotografas debajo) con arbsculos que se forman en clulas aisladas por lo que la distribucin es dispersa. Las hifas intrarradicales tienen de 2-5 m de dimetro, el grosor puede aumentar si una vescula terminal se forma. Todas las estructuras reaccionan ante Melzer salvo los arbsculos senescentes (vea debajo). Las esporas intraradicales se agrupan a
menudo en racimos y penetran por la epidermis de la raz debido a su gran tamao.
Arbsculos en clulas cortinales de maz
Glomus spurcum ESPORAS COLOR: Subhialino (0-0-5-0) que va del amarillo plido al castao (0-5-20-0), generalmente con una superficie algo seca debido a los detritos adheridos. FORMA: Globosa y subglobosa. DISTRIBUCIN DE TAMAO: 60-120 m, promedio= 85 m (n = 120). ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Est formada por dos capas (L1 y L2). L1 puede separarse a menudo de L2 cuando las esporas son presionadas vigorosamente.
En PVLG
En PVLG y reactivo de Melzer's (1:1 v/v)
L1: Es hialina, va del amarillo plido al castao (0-50-20-0) con 0.4-1.2 m de espesor (normalmente entre 0.6-0.7 m). A menudo se adelgaza bastante para arrugarse y producir muchos pliegues en la espora, puede separarse parcial o
totalmente de la capa laminada interna (L2). Por lo general se encuentra recubierta con detritos orgnicos. L2: Es una capa hialina consistente y delgada que posee subcapas hialinas (o lminas), con 1.4-4.2 m de espesor (aproximadamente 2.8 m). Esta capa presenta una plasticidad considerable, puede medir hasta 12 m de espesor en algunas esporas donde la pared ha sido aplastada por una presin determinada. La subcapa ms profunda a menudo produce numerosas arrugas que pueden interpretarse como una capa interna flexible asociada con la pared de la espora (o una "pared membranosa" por la terminologa convencional). HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: Ligeramente cilndrica TAMAO: De 4.8-7.9 m (aproximadamente= 6.2 m). ESTRUCTURA DE LA PARED: Ms all de la regin del esporforo solo una capa, L1, contina hasta formar parte de la pared de la hifa, la capa L2 se detiene en la regin del esporforo y no forma parte de la estructura de la hifa. La pared de la hifa es delgada (<1 m) por lo que en ocasiones es difcil de apreciar. OCLUSIN: Es difcil de apreciar en muchas esporas porque la hifa de sustentacin es muy frgil y consiste en un engrosamiento de la pared L2 de la espora. Esta capa no se extiende hacia la hifa de sustentacin. MICORRIZA La micorriza en las races de maz generalmente se tien dbilmente en presencia de Tripano blue, aunque la intensidad de la reaccin vara de una regin de la raz a otra (o entre las races de una misma muestra). Las ramificaciones de los arbsculos y las hifas son ms oscuros y notables cerca de
los puntos de entrada de la raz. Las vesculas generalmente se tien ms oscuro que los arbsculos o las hifas intraradicales.
Arbsculos en maz
Glomus fasciculatum ESPORAS COLOR: Desde amarillo plido hasta amarillo plidocastao FORMA: Globosa y subglobosa DISTRIBUCIN DE TAMAO: 60-110 m ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Consiste en tres capas (L1, L2, y L3) que se forman secuencialmente, basadas en el modelo de diferenciacin de las paredes de las esporas observado en todas las otras especies de Glomus. L1: Es una capa hialina exterior que puede desprenderse en ocasiones, tiene de 0.6-1.8 m de espesor y produce una reaccin rosado-roja frente al reactivo de Melzer, se encuentra aderida a L2. L2: Es una capa compuesta por subcapas delgadas adheridas (o en lminas), de color amarillo - castao (0-0-40-0) y posee de 4-9 m de espesor. Todas las subcapas tienen una coloracin que va del rojo oscuro al color rojo ligeramente prpura ante el reactivo de Melzer. L3: Capa delgada, flexible, con menos de 1.0 m de espesor que se contina con la capa ms profunda de la hifa de sustentacin. Se ha descrito como una "pared membranosa", pero claramente es una parte del componente de la pared de la espora. No podra determinarse si esta capa reacciona de igual forma que L2 ante el reactivo de Melzer.
En PVLG
En PVLG y Reactivo de Melzer
HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: Ligeramente cilndrica TAMAO: 8-10.2 m ESPESOR DE LA PARED COMPUESTA DE LA ESPORA: < 1-2 m ESTRUCTURA DE LA PARED: Presenta dos capas que se pueden distinguir claramente, es decir que L1 y L2 continan hasta la hifa de sustentacin desde la pared de la espora. La capa L3 proveniente de la pared de la espora tambin puede continuar en la hifa, pero frecuentemente aparece encorvada formando un septum. OCLUSIN: La capa ms profunda de la pared de la espora (L3) parece formar un septum frgil. La capa laminada de la pared de la espora (L2) tambin puede engrosarse, pero raramente ocluye completamente el poro hifal.
Glomus hoi ESPORAS Se encuentran individualmente en el suelo, tienen forma globosa, subglobosa, elipsoidal o irregular, pueden tener (5080) - (120-155) x (4575) (120-140) m de dimetro y un color ligeramente castao. PARED DE LA ESPORA: Est compuesta por dos capas distintas, separables (L1 y L2). La capa exterior (L1) va de amarillo claro a amarillo naranja, tiene de (24) (6-8) m de espesor, con una superficie exterior que se fractura y segrega. La capa interna (L2) es hialina con 1 um de espesor, muy delgada y de color amarillo. HIFA DE SUSTENTACIN Es ligeramente cilndrica hacia el punto de unin, tiene (58) (11-13) m de ancho en la base de la espora. La pared de la hifa consiste en una sola capa, con 2.5-5 m de espesor, a veces llegando a fina, delgada, septada con las ramas laterales. OCLUSIN: Parece ser un septum delgado, encorvado en el lumen de la hifa o un poco debajo de su punto de unin con la espora.
Ejemplos
Tipos de hifa
Glomus mosseae ESPOROCARPO En algunos casos se producen en potes de cultivos agregados de 2-8 esporas, rodeados por un peridium fuerte (vea la fotografa de la derecha). Esta conducta no slo vara entre las sucesiones, sino entre las producidas en el mismo pote. Esporocarpos: Van del amarillo-castao (0-40-100-10) hasta el bronceado (20-40-100/-0). El peridium que rodea estas esporas es de 10-38 m de espesor, con una hifa robusta que tiene de (8-18 m de ancho, con paredes de 1.6-3.5 m de espesor) mezcladas con numerosas hifas ramificadas y finas (2-5 m de ancho, paredes <1 m de espesor). El peridium no altera la estructura de la pared de la espora y usualmente puede desaparecer despus de varios cultivos sucesivos. ESPORAS COLOR: Va de amarillo claro (0-5-20-0) al naranja-castao oscuro (0-30-10010), pero una mayora es amarillo-castao (0-10-60-0). FORMA: Globosa y subglobosa, algunas son irregulares. DISTRIBUCIN DE TAMAO:100-260 m, tamao promedio = 195 m (n = 166) ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS
Esporas jvenes Esporas peridium maduras con
generaciones de los cultivos de un solo aislamiento e incluso entre esporas
PARED ESPORA: Presenta tres capas (L1, L2 y L3) que se forman consecutivamente con la pared de la espora. El exterior a menudo est gelatinoso y su grado puede variar las esporas maduras o ms viejas. Las esporas en algunos aislamientos se ramifican dentro del peridium compacto. Este carcter, es taxonmico porque se valora un poco inestable. En suelos pobres en materia orgnica el agrupamiento de los peridium acta principalmente en la formacin de los agregados y las esporas solas sin el peridium actan despus de 1-2 ciclos de propagaciones sucesivas.
L1: Hyalina, mucilagenosa, de 1.4-2.5 m de espesor (promedio = 2.1 m), se tien de rosado-rojo con el reactivo de Melzer (0-20-20-0 a 0-60-20-0), degradndose a menudo y formando una capa granular que entonces se desprende en las esporas maduras, pareciendo granular en las fases avanzadas de degradacin, tiene 2.5-3.5 m de espesor cuando est intacto en las esporas juveniles. L2: Hialina, con 0.8-1.6 m de espesor (promedio= 1.2 m), muy refractiva a la vista con contrastes pticos diferenciales, generalmente rgida y fracturada en lajas parecidas a los fragmentos observados cuando esta capa se separa de L3. No reacciona ante el reactivo de Melzer. Esta capa parece ser bastante inconstante en su apariencia entre las esporas del mismo aislamiento y tambin entre los aislamientos. Es incierto si la capa no est sintetizndose o simplemente no es perceptible.
L3: Una capa consistente, que va del amarillo castao (0-10-80-0) al naranjacastao (0-20-80-0), la subcapa (o lmina) tiene 3.2-6.4 m de espesor (promedio 4.7 m). Posee depresiones diminutas que cubren la superficie.
En PVLG
En PVLG y en Reactivo de Melzer(1:1 v/v)
HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: Iluminada, en forma de embudo. TAMAO: 16-32 m (aproximado= 24 m). PARED HIFAL: Se observan slo dos capas, la externa es continua con L1 y la interna contina con L3 de la pared de la espora, juntos tienen 2.4-4.8 m de espesor cerca de la espora. La capa exterior adelgaza de 1.2-1.6 m. Raramente se presenta en la hifa de esporas maduras. La capa interna tiene un color semejante al de L3 de la pared de la espora. OCLUSIN: Presenta un septum recurvado que se forma de 0-30 m del punto de atadura a la espora. GERMINACIN El tubo de germinacin surge del lumen de la hifa de sustentacin, originando un septum recurvado. Produce ramificaciones hifales extensivas despus de la emergencia de la hifa. Los esporocarpos producen numerosas hifas infectivas.
MICORRIZA La hifa intraradical, los arbsculos y las vesculas se tien de azul intenso frente al Azul de tripano. En el desarrollo de la micorriza las hifas externas se ramifican y forman numerosas vesculas extramatricales, hialinas, con paredes delgadas y una estructura muy simple en las paredes. Las hifas intraradicales pueden enrollarse cerca del punto de entrada, con una hifa de 3-6 m de ancho, pero entonces generalmente crecen paralelas al eje de la raz. Las ltimas hifas son muy extensas y tienen de 1.5-3 m. La produccin de la vescula es muy espordica. Los arbsculos forman consecutivamente hifas ms delgadas ramificadas (vea las fotografas de abajo) a partir de una hifa principal o tronco que generalmente es extensa y tiene de 3-4 m de espesor. En estados micorrizicos avanzados las races presentan hifas intraradicales, arbsculos espordicos y vesculas principalmente.
Arbsculos en maz
Glomus claroideum ESPORAS COLOR: Del crema (0-0-10-0) al amarillo (0-0-40-0) FORMA: De globosa a subglobosa DISTRIBUCIN DE TAMAO: 80-160 m, aproximadamente = 115 m (n = 120) ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Est formada por cuatro capas (L1, L2, L3 y L4), slo las primeras dos estn presentes en las esporas ms juveniles (debajo fotografa izquierda) y se contina con la pared juvenil de la hifa de sustentacin. La capa L3 desarrolla luego la hifa de sustentacin mientras se va espesando gradualmente (debajo fotografa correcta) para constituir en el futuro la mayor parte de la pared de la espora. L4 se forma al final, mientras va originando una parte de la pared de la hifa, pero slo en la regin de la base de la espora.
L1: Es una capa hialina, mucilaginosa, de 0.6-1.8 m de espesor en las esporas jvenes, produce una reaccin que va del rosa (0-30-20-0) al rosa ms oscuro (0-40-20-0) ante el reactivo de Melzer. Es a menudo difcil de distinguir de L2 porque ambas capas estn adheridas firmemente. Esta capa parece granular
cuando se descompone, normalmente se desprende completamente en las esporas maduras (junto con L2). L2: Es hialina, formada en las esporas juveniles con L1, tiene de 0.6-2.0 m de espesor, se degrada y se desprende conjuntamente con L1. Cuando esta capa se degrada, parece atraer detritos orgnicos que pueden aumentar en la superficie de la espora, no reacciona ante el reactivo de Melzer. L3: Es una capa delgada y firmemente adherida, de color amarillo plido (0-020-0) las subcapas (o lminas) tienen de 2.8-6.2 m de espesor (aproximadamente de 3.8 m) en las esporas maduras.
L4: El color de esta capa est muy relacionado con el color de la capa laminada que puede aparecer a menudo moderadamente delgada (<0.5 m) o gruesa con subcapas de casi 3 m, produciendo pliegues cuando est muy delgada (vea la sucesin de delgado a grueso en las fotografas a la derecha). Su apariencia se parece a una flexible pared germinal interna (= una pared membranosa), pero se extiende en la hifa de sustentacin como una parte de la pared de la hifa. No es igual a una pared germinal aunque similar en apariencia, porque no tiene ningn papel en los procesos de germinacin. Es la que origina la hifa de sustentacin por lo que es considerada como la capa ms profunda de la pared de la espora. No es considerada como una subcapa de L3 porque puede separarse de forma consistente de la pared de la espora. En algunas esporas se separa completamente de la pared y tiene una protrusin pequea dnde se at a la pared de la hifa de sustentacin.
En PVLG
En PVLG y en Reactivo de Melzer (1:1 v/v)
HIFA DE SUSTENTACIN FORMA: Ligeramente cilndrica (vea las fotografas) TAMAO: 6-8 m (aproximadamente= 6.9 m). ESTRUCTURA DE LA PARED: Tres capas (L1, L2 y L3) continuas con las tres capas exteriores de la pared de la espora, tiene de 1.2-3.2 m de espesor en la regin de la unin hifal, adelgazando 1.5 m hacia el interior de la espora a menos de 1.0 m de espesor. L1 y L2 normalmente estn ausentes de la superficie en esporas maduras. En muchas esporas la pared de la hifa es tan frgil que se desprende de la espora y no puede apreciarse. L4 no se extiende en la hifa ms all del "septum" que divide la espora del citoplasma de la hifa. GERMINACIN El tubo germinativo surge del lumen de la hifa de sustentacin. Walker y Vestberg (1998) informan que la germinacin tambin ocurre a travs de la pared de la espora, pero esto no ha sido observado en cualquiera de los aislamientos de la coleccin INVAM. MICORRIZA La ramificacin arbuscular de la hifa intraradical tiene de 2.5-4 m de dimetro, se tie de oscuro con el Azul de tripano cuando estn totalmente formadas y son funcionales (la fotografa izquierda), tornndose ms difuso y ligeramente coloreadas cuando ellos empiezan a sufrir senescencia. Las hifas ramificadas se incrementan hacia los extremos del tronco principal del arbsculo.
La hifa intraradical de la micorriza tambin se tie de oscuro en el Azul de tripano. Tiende a crecer intercelularmente entre las clulas corticales formndose la red hifal que consiste en numerosas ramificaciones y anillos ocasionales. Algunas hifas tendrn la apariencia de proyecciones, pero ellas son a menudo remanentes del tronco hifal de los arbsculos intracelulares. Raramente se desarrollan vesculas. La ocurrencia y abundancia de vesculas pueden ser tanto debido a una respuesta medio ambiental como al determinante gentico.
Arbsculos en maz
Micorriza en maz
Gigaspora margarita ESPORAS COLOR: De blanco a cremoso (0-5-30-0) en muchas esporas, amarillo oscuro (0-10-40-0) en algunas generaciones o algunos aislamientos. FORMA: De globosa a subglobosa. DISTRIBUCIN DE TAMAO:260-400 m, aproximadamente= 321 m (n = 98). ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Tres capas (L1, L2, y L3), las dos primeras estn adheridas y tienen un espesor igual en las esporas juveniles, en las esporas adultas L2 se engrosa y se diferencia y L3 se define hacia la formacin del tubo germinativo.
En PVLG
En
PVLG
Reactivo
de
Melzer's
L1: Una capa exterior rgida, permanente, adherida a la lmina interna con un color que va del pardusco al amarillo (0-10-30-0), tiene 1.6-2.4 m espesor. L2: Consiste en una capa hialina con subcapas (o lminas) que aumenta cuando engrosa, y presenta un poco de plasticidad cuando se le aplica presin, tiene una
coloracion que va del amarillo (0-10-80-0) al amarillo-pardusco (0-10-100-0) en PVLG, su espesor es de 13-31 m (promedio de 22 m). El espesor vara considerablemente dentro de la espora (14-23 m), coloreando del rojo-castao oscuro (20-80-100-0) al rojo-prpura muy oscuro (60-80-70-10) frente al reactivo de Melzer. En las esporas ms jvenes, las subcapas se unen semejando olas. L3: Es una capa germinal que est adherida con la capa laminada. Numerosas estructuras parecidas a verrugas se forman en la superficie interna de esta capa, y se concentran sobre todo en regiones donde se forma el tubo germinal (normalmente en la proximidad ntima a la clula de suspensin), las verrugas tienen de 1.2-5 m de alto en esporas germinadas y 2.5-3 m de ancho. HIFA DE SUSTENTACIN TAMAO DE LA CLULA ESPORGENA: 34-47 m (aproximadamente= 42 m) PAREDED CELULAR DEL ESPORGENO: Dos capas hialinas (L1 y L2) probablemente estn presentes (se continan con las primeras dos capas de la pared de la espora), pero slo L2 se distingue en el microscopio. L2: Es una capa de coloracin pardusca amarilla (0-10-60-0), tiene de 3.2-6.4 m de espesor cerca de la espora y adelgaza a 1.2-1.6 m ms all de la clula del esporgeno. OCLUSIN: El cierre ocurre por el tapn que tiene una coloracin semejante a la capa laminada de la pared de la espora. GERMINACIN El tubo germinal forma protuberancias verrugosas en la superficie interna de L3 de la pared de la espora, emerge a travs de la pared de la espora y tiene de 6-8
m de ancho, el tubo germinal se extiende inmediatamente despus de la emergencia de la pared de la espora (12-15 m ancho).
Germ tube emerging from Eight the from spore wall.
holes
where
germination had occurred
CLULAS AUXILIARES Las clulas auxiliares en los agregados son de 4-20, tienen una forma que va de subglobosa a ovoide, la hifa hialina est enrollada, la pared es delgada (<1 m de espesor), tiene un color que va del blanco al crema (0-010-0); cada clula tiene de 1.5-2.0 m de ancho y de 2.010.0 m alto. MICORRIZA Los arbsculos intraradicales y las hifas se tien de oscuro con el Azul de tripano. Los arbsculos producen ramificaciones a partir de las hifas basales hinchadas, los extremos de stas son ms fciles de observar una vez que se empiezan a degradar. Las hifas intraradicales tienen de 3-9 m de dimetro, con las reas abultadas a 16 m y los bultos son como proyecciones distribuidas a todo lo largo; normalmente estn enrollados cerca de los puntos de entrada en muchas clulas corticales.
Arbsculos en clulas de maz
Acaulospora scrobiculata ESPORAS COLOR: De subhialino a amarillo (0-0-10-0), pero algunas esporas son ms oscuras y estn coloreadas de color crema (0-10-20-0). FORMA: Globosa, subglobosa y ocasionalmente irregular. DISTRIBUCIN DE TAMAO: 80-160 m, aproximadamente = 120.3 m (n = 116). ESTRUCTURA SUBCELULAR DE LAS ESPORAS PARED DE LA ESPORA: Tres capas (L1, L2, y L3), la exterior se contina con la pared del cuello del saclo del esporforo y las dos ltimas se sintetizan al originarze la espora. L1: Hialina; tiene de 0.8-1.2 m de espesor, se degrada y se desprende temprano en la diferenciacin de la pared de espora, a menudo est ausente en las esporas maduras. L2: Es una capa que inicialmente se engrosa en su formacin, su coloracin va del amarillo (0-0-20-0) al amarillo plido (5-0-20-0), las subcapas (o lminas) tienen depresiones cncavas y ovoides en la superficie. Estas depresiones tienen de 0.6-2.0 m y de 0.5-1.4 m de profundidad. Algunas emergen para formar canales de 5-12 m de largo. Las subcapas a veces parecen hendirse y forman dos grupos de igual espesor, uno est incluido en las depresiones y el otro puede estar debajo de las depresiones, el espesor de las dos subcapas compuestas es 4.5-7 m (aproximadamente=6.1 m).
L3: Esta capa se designa como un componente discreto de la pared de la espora porque a veces se separa ligeramente de la pared de la espora y define los lmites. Cuando est separada puede interpretarse como una pared interna flexible separada. Sin embargo, se considera que es parte de la pared de la espora porque normalmente es ntegra y a veces muestra evidencias de ser simplemente otra subcapa (o lmina) de la pared de la espora. Es el anlogo a L3, se encuentra en otras especies con las paredes de la esporas ornamentadas.
Esporas montadas en PVLG.
Esporas montadas en PVLG y en Reactivo de Melzer (1:1 v/v)
PARED GERMINAL (gw germination wall pared germinal): Dos paredes internas hialinas, flexibles (la gw1 y gw2) pueden verse en todas las esporas si se separan cuando las esporas estn rotas. GW1: Se forman dos capas hialinas firmemente adheridas (L1 y L2), las dos tienen un espesor igual, midiendo 1.0-1.3 m juntos. No reacciona ante Melzer. Esta pared se observa facilmente cerca de la pared de la espora excepto en las esporas rotas en las que no son fciles de apreciar. En otras esporas, los Gw1 pueden producir uno a muchos pliegues, dando la apariencia de una serie desconcertante de paredes internas flexibles, haciendo difcil el diagnstico. GW2: Dos capas hialinas firmemente adheridas (L1 y L2). L1 tiene de 0.6-1.2 m de espesor, con protuberancias granulares que tienden a removerse y
desprenderse cuando se le aplica una presin. Estas protuberancias se estabilizan despus de la preservacin, pero por otra parte pueden estar ausente en esporas montadas dentro de unos meses de almacenamiento. L2 tiene de 1.24.1 m de espesor y muestra coloraciones que van del rosa purpra (0-60-30-0) al rojizo-bronceado (20-80-60-0) ante el reactivo de Melzer. CICATRIZ: Presenta una cicatriz redonda, ovoide que indica la regin de contacto entre la espora y el cuello del sculo durante la sntesis de la espora; la depresin dentro de la cicatriz es de 7.5-13.4 m de dimetro (aproximadamente = 10.7 m). La conexin entre el cuello del sculo y la espora es inicialmente algo compleja, consiste en slo la capa L1 de la espora, seguido por la sntesis de las subcapas del L2 (laminado) la capa que se forma entre el cuello del sculo y la espora. Despus de la degradacin se desprende de L1, estas subcapas forman un espinazo de 2.8-4 m de alto alrededor del poro ocludo. El modo de formacin de esta regin es anlogo a lo que ocurre durante la sntesis de capas de pared de esporas en las especies de Glomus. SCULO DEL ESPORFORO COLOR: Hialino. FORMA: Globosa, subglobosa. DISTRIBUCIN DE TAMAO: 100-230 m, aproximadamente= 114.3 m. PARED DEL SCULO: Una capa hialina, con la superficie lisa y tiene de 1.42.0 m de espesor. DISTANCIA DEL SCULO A LA ESPORA: 40-80 m.
GERMINACION El escudo de germinacin es ovoide y se forma en la pared germinal ms profunda (gw2). sta es difcil de ver excepto en las esporas ms viejas dnde los volmenes han aclarado con la fusin de glbulos del lpidos en el lumen de la espora. Spain (1992) informa que los escudos de A. scrobiculata son ligeramente ovoides con una configuracin espiral interior. MICORRIZA Los arbsculos a menudo se colorean ligeramente con el Azul de tripano, aunque a veces se notan mas oscuros. Las hifas intraradicales tienden a ser ms gruesas (4-6 m) y forman enrrollamientos cerca del punto de entrada de la raz. Las hifas crecen a lo largo del eje de la raz y generalmente tienen alrededor de 2-4 m de dimetro. Las vesculas se forman a menudo cerca de los puntos de entrada y van de esfricas a irregularmente oblongas. Note la ltima fotografa en la sucesin debajo donde el extremo de una raz de maz est llena con muchas hifas enrolladas. El hongo responde dinmicamente a los cambios estructurales y fisiolgicos en las diferentes regiones de la raz, lo cual justifica las variaciones estructurales y morfolgicas dentro de un mismo sistema radical.
Arbsculos en clulas de maz
Citas Bibliogrficas: INVAM, 2003, International Culture Collection of (Vesicular) Arbuscular Mycorrhizal Fungi.

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INSTITUTO NACIONAL DE CIENCIAS AGRCOLAS Departamento de Biofertilizantes y Nutricin de las Plantas Grupo de Micorrizas Arbusculares

En PVLG y reactivo de Melzer (1:1 v/v)

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Germ tube emerging from Eight the from spore wall.

germination had occurred

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