Instituto Superior de Cincias da Sade Norte Ensino Universitrio

Bioqumica Geral

Caderno de Apontamentos

Mestrado Integrado em Medicina Dentria

Ano lectivo 2009/2010

Caderno de Apontamentos

Bioqumica Geral
Contactos das Docentes: Prof. Doutora Roxana Falco Moreira roxana.moreira@iscsn.cespu.pt

Mestre Juliana Faria juliana.faria@iscsn.cespu.pt

Dr. Tiago Silva ogait_tiago@hotmail.com

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I - PROTENAS
Objectivos do captulo: Saber reconhecer um aminocido, uma estrutura polipeptdica e uma estrutura proteica; Compreender a relao entre a ionizao de aminocidos e protenas e as caractersticas cido-base do meio em que se encontra; Conhecer aminocidos comuns e derivados; Compreender os nveis de organizao das estruturas proteicas; Compreender a relao entre estrutura e funo das protenas; Compreender a desnaturao e renaturao de protenas; Entender a funcionalidade de protenas como a hemoglobina, mioglobina e o colagnio; Entender a funo de grupos prostticos. Entender a funcionalidade de protenas conjugadas; Saber o que o heme; Entender a importncia da poro peptdica da hemoglobina; Entender as consequncias da maior ou menor afinidade pelo oxignio da hemoglobina; Entender a que se referem as estruturas T e R da hemoglobina; Entender porque a hemoglobina uma protena alostrica e conhecer os 3 tipos de interaces alostricas apresentados;

Conhecer e entender a hemoglobinopatia a que se refere a anemia falciforme; Conhecer a estrutura do colagnio e a sua funcionalidade consequente; Conhecer os pormenores a nvel de organizao estrutural do colagnio; Conhecer patologias relacionadas com alteraes do colagnio.

Caderno de Apontamentos Funes desempenhadas pelas protenas em humanos 1-Dinmicas Exemplos:

- Enzimas

- Protenas transportadoras (de oxignio, ferro, hormonas, de drogas e compostos txicos...) - imunoglobulinas e interfero - fibrina - Hormonas - Protenas envolvidas em mecanismos contrcteis - Protenas envolvidas em mecanismos de transcrio e traduo gentica 2-Estticas Exemplos: - Protenas estruturais (presentes nos: osso, ligamentos, orgos, sistema vascular, epiderme) Aminocidos: caractersticas e propriedades Todos os diferentes tipos de protenas so sintetizados inicialmente como polmeros de apenas 20 aminocidos (aminocidos comuns: aminocidos para os quais existe um codo especfico no cdigo gentico.) No entanto, para alm dos aminocidos comuns, encontram-se nas protenas aminocidos derivados que so formados a partir dos aminocidos comuns, aps estes terem sido incorporados numa estrutura proteica. Estrutura geral de um aminocido

Um carbono central (C ) ao qual esto ligados 4 substituintes, um grupo carboxlico, um grupo amino e uma radical(R).

Caderno de Apontamentos Exemplos de aminocidos

Estrutura dos radicais (cadeias laterais) dos aminocidos comuns:

1) CADEIAS LATERAIS APOLARES 2) CADEIAS LATERIAS POLARES 3) CADEIAS LATERAIS AROMTICAS 4) CADEIAS LATERAIS CARREGADAS NEGATIVAMENTE (ACDICAS) 5) CADEIAS LATERAIS CARREGADAS POSITIVAMENTE (BSICAS)

Nota: Os aminocidos polares so mais solveis em gua ou hidroflicos porque contm grupos funcionais que estabelecem ligaes de hidrognio com a gua.

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Caderno de Apontamentos Exemplos de Estruturas de aminocidos derivados:

Derivam dos comuns por modificaes qumicas ps traducionais (hidroxilaes, carboxilaes, ligao a aucares, fosforilaes).

Aminocidos tm um centro assimtrico

Os aminocidos comuns tm uma estrutura geral com 4 substituintes ligados a um tomo de carbono (-carbono) num arranjo tetradrico. Portanto, o tomo de carbono assimtrico: o aminocido exibe isomerismo ptico (com excepo da glicina, em que dois dos substituintes (R=H) so iguais. Ismeros pticos so imagem um do outro num espelho plano.

Caderno de Apontamentos Propriedades cido-base dos aminocidos e protenas: 1. Dependem essencialmente da ionizao dos grupos alfa-carboxlicos e amino assim como da ionizao dos grupos presentes nas cadeias laterais. o Formas cidas: De grupos contendo azoto so positivas. De grupos contendo oxignio ou enxofre so neutras.

Formas bsicas: De grupos contendo azoto so neutros. De grupos contendo oxignio ou enxofre so negativos.

2. Os aminocidos com cadeias laterais contendo tomos de azoto (Lis, Arg) so designados de bsicos. A pH fisiolgico esto predominantemente carregados positivamente (forma cida).

3. Os aminocidos com cadeias laterais contendo grupos carboxlicos (Asp, Glu) so designados de acdicos. A pH fisiolgico esto predominantemente carregados negativamente (forma bsica).

4. Protenas em que a razo ( Lis+ Arg / Glu+ Asp) maior que um so referidas como protenas bsicas; protenas em que essa razo inferior a um, so referidas como protenas cidas. 5. Um aminocido dissolvido em gua, a pH neutro, existe predominantemente na forma de um io dipolar (zwitterio). Assim, pode funcionar como um cido (dador de protes) mas tambm pode funcionar como uma base (aceitador de protes).

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Por exemplo, a glicina, um aminocido monoaminomonocarboxlico:

pK (carboxilo) = 2,4 pK (amino) = 9,8

Portanto, 1 ionizao pH 2,4. 2 ionizao pH 9,8.

Ponto isoelctrico (pI) pH ao qual o aminocido (ou ptido ou protena) electricamente neutro. O seu valor depende dos pK dos grupos ionizveis que contenha. Notas:
1) A pH inferior ao seu pI, o aminocido (pptido, protena) fica carregado positivamente. 2) A pH superior ao seu pI, o aminocido (pptido, protena) fica carregado negativamente.

Determinao experimental do ponto isoelctrico

Valor do pH ao qual a molcula no se move num campo elctrico. Quanto mais afastado do pI o pH a que se encontra uma protena, maior a carga global da protena. Influncia do pH na funcionalidade proteica Exemplo: enzimas cuja funcionalidade depende essencialmente de aminocidos presentes no centro activo a forma bsica desse aminocido pode corresponder forma activa; a forma cida forma inactiva...

Caderno de Apontamentos Pptidos e ligao peptdica

Nas protenas, o grupo -carboxlico de um aminocido unido ao radical -amino de outro aminocido por uma ligao peptdica (ligao amida).

Muitos aminocidos unidos por ligaes peptdicas originam cadeias peptdicas. Os aminocidos dessas cadeias designam-se radicais ou resduos.

Uma cadeia polipeptdica tem direco: Por conveno, a extremidade amnica considerada o incio da cadeia.

A maioria das cadeias polipeptdicas naturais contm entre 50 a 2000 aa. As cadeias com mais de 50 aa j se designam por protenas. Existem protenas com uma nica cadeia polipeptdica e existem protenas multimricas, formadas por vrias cadeias. O peso molecular mdio de um aa cerca de 110 Da.

Nota: Alguns pequenos pptidos tm actividade biolgica. Por exemplo, a hormona insulina
formada por dois pptidos de 30 e 21 aa.
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Caderno de Apontamentos As protenas podem conter outros grupos qumicos para alm dos aa

o Protenas simples contm unicamente aa o Protenas conjugadas contm tambm grupos prostticos

As protenas homlogas de espcies diferentes possuem sequncias homlogas

Encontram-se na sua sequncia de aa: o o o Resduos invariantes Resduos variveis Substituies conservativas (substituies por aminocidos de polaridade similar)

Utilizao de protenas homlogas no tratamento da diabetes mellitus

Possvel utilizao de insulina de porco ou vaca no tratamento de diabetes mellitus humano. possvel devido ao pequeno n de substituies no conservativas de resduos.

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Caderno de Apontamentos Protenas: estrutura primria, secundria, terciria e quaternria o Estrutura primria A sequncia de aminocidos das cadeias polipeptdicas de uma protena corresponde ao que designado por Estrutura primria de uma protena. a estrutura primria que confere a uma protena as suas propriedades fsicas e faz a protena enrolar-se numa estrutura nica, que responsvel pela sua funcionalidade caracterstica. Diz respeito estrutura covalente da protena, ou seja: sequncia de aminocidos e tambm localizao de pontes dissulfureto (cistinas). A estrutura primria nica numa protena, uma vez que, a sua composio, proporo e sequncia em aminocidos caracterstica.

PONTES DISSULFURETO:

o Resultam da ligao qumica de cistenas; o Podem ser estabelecidas numa s cadeia polipeptdica ou entre diferentes cadeias polipeptdicas.

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Caderno de Apontamentos o Estrutura Secundria Refere-se ao arranjo espacial dos radicais de aminocidos presentes na sequncia linear. Quando essas relaes so do tipo linear, do origem a estruturas peridicas. Exemplo: a) -hlice b) Folha pregueada

ESTRUTURA SUPERSECUNDRIA

So estruturas intermedirias entre estruturas secundrias e tercirias. Referem-se a

aglomerados de estruturas secundrias. Exemplo: Algumas cadeias enovelam-se em regies compactas (DOMNIOS). Os domnios podem ser unidos por um segmento flexvel da cadeia, como prolas num cordo, podendo exibir um deslocamento especfico relativamente uns aos outros, tendo tal deslocamento um objectivo funcional.

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Caderno de Apontamentos o Estrutura Terciria Refere-se estrutura tridimensional da protena, incluindo a relao geomtrica entre segmentos distantes da estrutura primria. Envolve aminocidos distantes na sequncia peptdica e pertencentes a diferentes estruturas secundrias. a estrutura terciria que aproxima resduos de aminocidos bem distantes na estrutura primria permitindo a formao de estruturas vitais para a funcionalidade de certas protenas.

A estrutura terciria tambm responsvel pela localizao das cadeias hidrofbicas no interior das cadeias hidrofbicas no interior da estrutura proteica, ao contrrio das cadeias ionizveis, localizadas exteriormente, na interface aquosa.

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o

Estrutura Quaternria ao arranjo proteicas de protenas ou

Refere-se

subunidades

em

complexos

tridimensionais. As subunidades de uma estrutura quaternria esto associadas no covalentemente. Vrias subunidades ligadas covalentemente constituem uma nica

estrutura terciria, no quaternria.

A FORMA DE UMA MOLCULA PROTEICA DETERMINADA PELA SUA SEQUNCIA DE AMINOCIDOS

A maioria das protenas assume o seu enrolamento caracterstico espontaneamente. Atravs do tratamento com certos solventes as protenas podem ser a desnaturadas conformao

(desenroladas),

perdendo

caracterstica. Para alm de certos solventes, o calor, pH extremos, certos solutos, so igualmente capazes de criar condies

desnaturantes. A desnaturao implica a perda de estrutura e consequentemente da funcionalidade.

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Caderno de Apontamentos Quando o desnaturante removido, as protenas geralmente readquirem a sua conformao original, o que indicativo de que a sua sequncia em aminocidos contm toda a informao necessria para o enrolamento.

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Caderno de Apontamentos Hemoglobina e Mioglobina A hemoglobina e a mioglobina so importantes protenas para estudo porque ilustram muitos princpios importantes de conformao, dinmica e funo de protenas: -exemplo de enovelamento -exemplo de ligao a outras molculas (ligandos e reguladores) -exemplo de integrao de conformaes (interaces alostricas) -exemplo de como uma simples mutao pode causar doena -...

Os vertebrados desenvolveram dois mecanismos principais para assegurar que a todas as suas clulas chega um fluxo contnuo e adequado de oxignio: -um sistema circulatrio que distribui oxignio s clulas -uso de molculas transportadoras de oxignio para vencer as limitaes impostas pela baixa solubilidade do oxignio na gua:

HEMOGLOBINA (nas hemcias, transporta o oxignio no sangue) MIOGLOBINA (no msculo)

Analisando a hemoglobina e a mioglobina:

A. ESTRUTURAS

o Protenas globulares.

o Contm um grupo grupo heme, (que uma porfirina com radicais substituintes e um tomo de ferro central) com o local de ligao ao oxignio. O estado ferroso (+2: ferro-hemoglobina ou ferro-mioglobina) liga-se ao oxignio, mas no o frrico (+3:ferri-hemoglobina ou ferri-mioglobina).

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Heme - o grupo prosttico: unidade no peptdica ligada firmemente a estas protenas e essencial para a sua funo. (As protenas sem o grupo prosttico caracterstico designamse de apoprotenas).

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Caderno de Apontamentos MIOGLOBINA Formada por uma cadeia polipeptdica nica que adquire uma forma compacta; O interior da mioglobina constitudo quase exclusivamente por aminocidos apolares; Cerca de 75% da cadeia enrola-se em -hlice; O heme, localiza-se num nicho apolar que o protege da oxidao forma frrica.

O tomo de ferro do heme liga-se (num mesmo plano) a quatro N dos aneis pirrol. Liga-se igualmente ao tomo de N de uma histidina (histidina proximal) e a sua 6 posio de coordenao (do outro lado do plano em relao 5 posio de coordenao) corresponde ao local de ligao ao oxignio.

A proximidade ao heme de uma outra histidina (histidina distal), diminui a afinidade de ligao do CO ao local de ligao ao oxignio e inibe a oxidao para o estado frrico. A histidina distal impede a aproximao de

cadeias de mioglobina o que tornaria mais favorvel a oxidao do heme ferroso para frrico. tambm a histidina distal que, por interferir na ligao (s permite a ligao numa geometria no favorvel) de uma molcula de CO, reprime assim a preferncia inata do heme por monxido de carbono.
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Modo linear de ligao do monxido de carbono a ferro-porfirinas isoladas. Neste modo de logao a afinidade da ferro-porfirina para o CO bastante superior relativamente ao O2. No entanto, o modo de ligao do CO ao heme nas cadeias de mio ou hemoglobina, angular e no linear pela influncia da presena da poro peptdica da molcula. A afinidade para o CO ento pronunciadamente reduzida.

assim compreensvel a necessidade da poro peptdica destas molculas, para o transporte e armazenamento de oxignio.

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Caderno de Apontamentos HEMOGLOBINA

constituda por 4 cadeias polipeptdicas, cada uma com um heme; A hemoglobina A, predominante em adultos, constituda por duas cadeias e duas . Os adultos tambm possuem outra hemoglobina em menor quantidade e os fetos produzem hemoglobinas com subunidades um pouco diferentes;

A estrutura tridimensional das cadeias e da hemoglobina marcadamente semelhante da mioglobina;

O facto de a hemoglobina possuir quatro cadeias polipeptdicas provoca o aparecimento de certas caractersticas ausentes na mioglobina, monomrica;

A hemoglobina transporta caties hidrognio e dixido de carbono, para alm de oxignio;

A ligao da hemoglobina s molculas por ela transportada regulada por interaces alostricas, que so interaces entre centros distantes na mesma protena. A hemoglobina uma protena alostrica, a mioglobina no.

A hemoglobina apresenta trs tipos de efeitos alostricos:

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a) A ligao ao oxignio cooperativa, ou seja, a ligao do oxignio ao heme

facilita a ligao de oxignio a outros hemes da mesma molcula. Compare-se as curvas de ligao ao oxignio da hemoglobina e da mioglobina:

Notar: a maior afinidade da mioglobina para o oxignio: as formas das curvas, hiperblica para a mioglobina, sigmide para a hemoglobina.

b) Efeito de Bohr: H+ e CO2 promovem a libertao do oxignio da hemoglobina (estimula a libertao de oxignio em tecidos em metabolismo activo). O oxignio promove a libertao do H+ e CO2 nos capilares dos alvolos pulmonares.
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c) A afinidade da hemoglobina para o oxignio tambm regulada pelo 2,3bifosfoglicerato (BPG), que se liga desoxi-hemoglobina mas no oxihemoglobina, diminuindo a afinidade da molcula para o oxignio. A hemoglobina fetal tem maior afinidade para o oxignio do que a hemoglobina do adulto, por ligar-se menos fortemente ao BPG.

A hemoglobina fetal tem maior afinidade para o oxignio do que a hemoglobina do adulto, por ligar-se menos fortemente ao BPG.

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Caderno de Apontamentos Pode-se afirmar que da evoluo da mioglobina para a hemoglobina, surgiu uma molcula capaz de perceber informaes do ambiente em que se encontra. As ligaes do oxignio, H+, CO2 e BPG ocorrem em locais distintos originando mudanas de conformao da protena, da sua estrutura quaternria. Assim se explica que a ligao de uma molcula afecte a ligao das outras. As caractersticas funcionais da protena so reguladas por molculas especficas do seu ambiente. Estrutura quaternria tensa (T) e relaxada (R) da hemoglobina

Estrutura quaternria tensa (T): ligaes salinas entre as subunidades, o que origina baixa afinidade para o oxignio.

Estrutura relaxada (R): ausncia de ligaes salinas, aumenta a afinidade para o oxignio.

A oxigenao da cadeia provoca a alterao da conformao T para R.

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Caderno de Apontamentos Anemia Falciforme

a)

A hemoglobina existe nas hemcias.

b) Forma de foice das hemcias, caracterstica da anemia falciforme.

Na anemia falciforme, existe uma anormalidade a nvel da hemoglobina: a hemoglobina S (com duas cadeias normais e duas mutadas). Ocorre substituio de um glutamato (aa polar) na posio 6 da cadeia por uma valina (aa polar). A substituio ocorrida na hemoglobina S altera a solubilidade da hemoglobina, provoca o aparecimento de precipitados fibrosos resultantes da polimerizao de

DESOXIHEMOGLOBINAS S que deformam a hemcia (forma de foice) e levam sua destruio e consequente origem da anemia.

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Caderno de Apontamentos Colagnio O colagnio encontrado em quantidades significativas em todos os tecidos e orgos onde fornece suporte e fora estrutural. O colagnio torna-se assim a protena mais abundante no organismo humano e a sua presena em percentagem varia de 4% a 70% conforme o tecido ou orgo considerado.

Composio em aminocidos muito alta em glicina (33%), prolina (10%), hidroxiprolina 810%) e hidroxilisina (1%). Uma pequena quantidade de carbohidratos encontrada no colagnio ligado a hidroxilisina.

Sequncia em aminocidos A unidade molecular do colagnio contm trs cadeias polipeptdicas. No colagnio presente em alguns tecidos, as trs cadeias tm uma sequncia em aminocidos idntica, noutros tecidos apenas duas das cadeias so idnticas em sequncia, noutros ainda as trs cadeias so todas diferentes. Os diferentes tipos de colagnio so caracterizados pelas suas

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Caderno de Apontamentos diferenas nas propriedades fsicas devido s diferenas nas sequncias presentes de aminocidos e percentagem em hidratos de carbono. notvel a regularidade da sequncia do colagnio: quase todo o terceiro aminocido glicina. Para alm disso, a sequncia glicina-prolina-hidroxiprolina repetida com muita frequncia. A presena da glicina no colagnio crtica, porque estabiliza a estrutura do colagnio (hlice tripla do colagnio, j estudada). O interior do cabo trifilamentar muito apertado. De facto o nico aminocido que pode caber numa posio interior a glicina. Como h trs aminocidos por volta na hlice, o terceiro aminocido em cada filamento conveniente que seja glicina. O aminocido de cada lado da glicina est localizado fora do cabo, onde h espao para os anis volumosos de prolina e hidroxiprolina. Assim, verifica-se que a simplicidade da glicina s vezes vantajosa, porque como ocupa muito pouco espao, permite que filamentos polipeptdicos se aproximem.

A mutao de uma s glicina no colagnio pode ser letal. Por exemplo, uma mutao que origine a substituio do resduo 988 de glicina para um de cistena, leva a uma quebra da hlice tripla expondo-a a excessiva hidroxilao e glicosilao. Por consequncia, forma-se um colagnio anormal, que se desdobra temperatura corporal e no consegue formar os normais arranjos fibrilares altamente ordenados.

A hidroxilao defeituosa uma das leses bioqumicas no escorbuto: a deficincia diettica do cido ascrbico (vitamina C), causadora do escorbuto, leva a que a aco da enzima que promove as hidroxilaes do colagnio esteja inibida. O colagnio que se forma ento insuficientemente hidroxilado, sendo incapaz de formar fibras adequadamente e por isso surgem as leses cutneas e fragilidade dos vasos sanguneos, to destacados no escorbuto.

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Caderno de Apontamentos As fibras do colagnio so fortalecidas por interligaes.

As fibras do colagnio so estabilizadas pela formao de interligaes covalentes. Tais interligaes estabelecem-se intermolecularmente e intramolecularmente.

Intermolecularmente, os derivados aldedicos de duas lisinas prximas do terminal amnico sofrem uma condensao alcolica. Intramolecularmente, as ligaes estabelecem-se entre dois radicais, um de hidroxilisina e outro de lisina: estas ligaes estabelecem-se entre aminocidos prximos do terminal amnico de uma molcula e aminocidos prximos do terminal carboxlico de outra. O tipo e o grau das interligaes variam com a funo fisiolgica e com a idade do tecido.

Pessoas com o sndrome de Ehlers-Danlos tipo V: tm articulaes hipermveis e pele muito distensvel, por causa de uma deficincia na enzima que catalisa essas interligaes.

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II - ENZIMAS
Objectivos do captulo: Entender o que uma enzima; Entender a importncia da aco enzimtica no organismo; Conhecer as propriedades da funcionalidade enzimtica; Familiarizar-se com os vrios tipos de enzimas; Entender o que so cofactores e coenzimas; Perceber o modelo de Michaelis- Menten; Entender os conceitos de velocidade de reaco, velocidade mxima, constante de Michaelis- Menten, afinidade enzimtica; Perceber a importncia da regulao da actividade enzimtica; Compreender a catlise enzimtica; Entender os conceitos de energia de activao, estado de transio; Entender a inibio da actividade enzimtica, irreversvel e reversvel, competitiva e no competitiva; Entender as consequncias da inibio na cintica enzimtica.

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Caderno de Apontamentos Enzimas Polmeros biolgicos que catalisam mltiplos processos dinmicos que tornam a vida possvel tal como a conhecemos. O seu poder catalisador assim como a sua elevada especificidade para o substrato so duas caractersticas globais. Terminologia: Actividade enzimtica: Usualmente expressa em micromoles (mol) de substrato convertido em produto por minuto, em determinadas condies de reaco. Unidade de actividade enzimtica (U): Quantidade de enzima que cataliza a converso de 1 mol de substrato por minuto

Actividade especfica de uma preparao enzimtica: N de unidades de enzima por mg de protena (U/mg), nada indicando a pureza da preparao. N de renovao outurnover: N de molculas de substrato convertidas em produto por unidade de tempo quando a enzima est saturada. Isoenzimas: Formas fisicamente distintas de uma dada enzima, presentes em diferentes tipos celulares ou compartimentos subcelulares Velocidade mxima: Velocidade em condies de saturao da enzima pelo substrato em determinadas condies de pH, temperatura e fora inica.

(Nota: Katal (kat): nova unidade que designa a converso de uma mol de substrato por segundo)

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Caderno de Apontamentos Existem seis classes principais de enzimas:

Muitas enzimas requerem, para alm do substrato, uma segunda molcula orgnica, metaloorgnica ou simplesmente metal, sem a qual so inactivas para o desempenho da catlise enzimtica. Essa molcula designa-se de COFACTOR. Caso seja orgnica ou metaloorgnica, pode-se designar de COENZIMA.

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Caderno de Apontamentos Importncia da aco Enzimtica Nas condies suaves de T e pH a que as clulas se encontram, a maioria das molculas biolgicas so bastante estveis. Sem catlise, a maioria das reaces no ocorreriam ou ocorreriam a baixas velocidades. As enzimas afectam a velocidade da reaco, no o seu equilbrio. Para que uma reaco ocorra necessrio que se alinhem grupos reactivos, implicando uma barreira energtica (E de activao). As enzimas diminuem

selectivamente as E de activao das reaces que so vitais para as clulas.

As reaces enzimticas ocorrem no centro activo da enzima. O seu poder cataltico e a sua especificidade so consequncia das interaces fracas no covalentes que se estabelecem entre a enzima e o substrato.

No entanto, ao contrrio do que era anteriormente aceite, as enzimas no so complementares ao substrato. Na realidade, as enzimas so complementares ao substrato apenas no estado de transio.

Estado de transio: refere-se ao momento molecular instantneo aps o ultrapassar da E de activao, em que j ocorreram acontecimentos como quebra e formao de ligaes, aparecimento de cargas (...) at que se atingiu um ponto em que igualmente provvel a reaco colapsar para o lado dos substratos ou para o lado dos produtos.

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Caderno de Apontamentos

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

Explica as propriedades cinticas de muitas enzimas. A velocidade de catlise da maioria das enzimas varia com a concentrao do substrato, sendo quase linearmente proporcional para concentraes baixas e quase independente para concentraes muito elevadas.

Equao de Michaelis- Menten: V = Vmax ( |S| / ( |S| + Km) )

Velocidade mxima:

Velocidade quando a enzima est saturada Km: constante de Michaelis-Menten

Constante numericamente igual concentrao do substrato para a qual V = Vmax / 2 - inversamente proporcional afinidade da enzima pelo substrato.

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Caderno de Apontamentos

Vmax e Km podem ser determinados pela variao da concentrao do substrato

Para transformar a equao de Michaelis-Menten numa equao que origine um grfico em linha recta pode-se considerar o inverso da equao. 1/V = 1/Vmax + (Km/Vmax)(1/|S|) O traado desta equao designa-se de TRAADO DE LINEWEAVER-BURK que permite a determinao de Vmax e Km: a intercepo com o eixo das ordenadas d o valor de 1/Vmax e o declive d Km/Vmax.

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Caderno de Apontamentos As Enzimas Alostricas no obedecem cintica de Michaelis-Menten

Existem enzimas cujas propriedades cinticas no so explicadas pelo modelo de MichaelisMenten. Um exemplo disso so as enzimas alostricas. Tais enzimas apresentam frequentemente grficos sigmides (e no hiperblicos) de velocidade de reaco em funo de concentrao do substrato por a ligao do substrato a um centro activo afectar as propriedades de outros centros activos na mesma molcula de enzima. Para alm disso, a regulao frequente dessas enzimas por protenas reguladoras que se ligam a locais diferentes dos catalticos tambm afecta as suas propriedades cinticas. As actividades catalticas de vrias Enzimas so reguladas

Existem diversos mecanismos de regulao: fosforilao, glicosilao, quebra de ligaes peptdicas especficas, retroinibio, interaces alostricas, etc. A actividade regulada das enzimas permite que as reaces sejam aceleradas, controladas e organizadas, de modo a que a clula tenha o maior rendimento energtico e portanto a maior sobrevivncia.

As Enzimas podem ser inibidas por molculas especficas

A inibio da actividade enzimtica por determinados compostos, um dos mais importantes mecanismos de controlo dos sistemas biolgicos. O estudo de tais inibies esclarece esses mecanismos, identifica locais crticos de catlise enzimtica e permite o fabrico de agentes teraputicos com efeitos sobre aco enzimtica. Inibio irreversvel: um inibidor reversvel fica fortemente ligado enzima, de forma covalente ou no. A sua dissociao muito lenta ento.

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Caderno de Apontamentos Inibio reversvel: o inibidor liga-se fracamente enzima. O complexo enzima inibidor dissocia-se rapidamente. Pode ser COMPETITIVA ou no COMPETITIVA.

Inibio competitiva: a enzima pode ligar-se ao substrato ou ao inibidor, mas no ambos.

Muitos inibidores competitivos assemelham-se ao substrato e ligam-se ao centro activo da enzima. O substrato ento impedido de ligar-se ao mesmo centro activo. Um inibidor competitivo diminui a velocidade de catlise pela reduo da proporo de molculas de enzima ligadas ao substrato. Acontece por vezes que uma enzima seja inibida competitivamente pelo produto da reaco que cataliza, j que esse apresenta semelhana estrutural com o substrato. A inibio competitiva pode ser anulada pelo aumento da concentrao do substrato. Inibio no competitiva: o inibidor e o substrato podem ligar-se simultaneamente mesma molcula de enzima, porque os seus locais de ligao no se sobrepem. Neste tipo de inibio no diminudo o n de molculas de enzima ligadas ao substrato, mas sim diminudo o n de turnover da enzima. Este tipo de inibio no pode ser ultrapassada por aumento da concentrao do substrato.

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Caderno de Apontamentos Diferenciao de Inibio Competitiva e No Competitiva por anlise da cintica Inibio competitiva:

o Diminui a afinidade de ligao ao substrato;

o Km aumenta ( necessria uma concentrao de S superior para que se atinja metade da saturao da enzima);

o A inibio competitiva pode ser ento anulada por altas concentraes do substrato. o Vmax mantm-se.

Inibio no-competitiva:

o A afinidade de ligao mantmse: Km mantm-se. o A inibio no competitiva no pode ser anulada pelo aumento da concentrao do substrato. A velocidade da reaco catalisada diminui: Vmax diminui.

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Caderno de Apontamentos Aplicaes

a) Uso do etanol como inibidor competitivo para tratar envenenamento por etilenoglicol; b) Uso de penicilina como inibidor irreversvel de uma enzima chave na sntese da parede celular bacteriana. A penicilina assemelha-se a um dos substratos da enzima transpeptidase ligando-se irreversivelmente a ela e inactivando-a.

As molculas de RNA tambm podem ser catalisadores muito eficazes

Foi descoberta uma molcula de RNA que actua quer como uma ribonuclease quer como uma RNA polimerase. Apresenta um alto grau de especificidade, cintica de Michelis Menten e susceptibilidade a inibio competitiva. As molculas de RNA podem ser catalisadores muito eficazes, formando estruturas tridimensionasis precisas que se ligam a substratos especficos. Em relao s protenas, tm a desvantagem de no formarem nichos apolares e serem muito menos versteis, por s conterem 4 elementos de construo em vez de 20.

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Caderno de Apontamentos

Vias Metablicas
Metabolismo

Em todas as clulas do organismo encontram-se centenas de reaces qumicas a ocorrer, que em conjunto so designadas por metabolismo. Dentro das clulas, a existncia de enzimas especficas leva a que estas estabeleam sries de reaces com elevadas taxas de fluxo numa determinada direco as vias metablicas. Tais vias metablicas podem ser utilizadas para extraco de energia a partir de diferentes nutrientes vias catablicas ou para sntese de molculas mais complexas vias anablicas. H ainda vias (como o ciclo de Krebs, por exemplo) que podem ter simultaneamente funes anablicas ou catablicas e que so designadas por vias anfiblicas. Mecanismos de Regulao Metablica

As actividades das vias metablicas so constantemente ajustadas de forma a que a produo de energia ou a sntese de diferentes metabolitos satisfaam as necessidades fisiolgicas do organismo. Desta forma, as vias de sntese e degradao de uma determinada molcula nunca esto simultaneamente activas, uma vez que isso se iria traduzir num gasto ftil de energia. Alguns dos mecanismos envolvidos na regulao das vias metablicas so: a) Disponibilidade de substrato; b) Regulao alostrica (alterao da actividade enzimtica pela ligao de activadores ou inibidores alostricos); c) Controlo transcricional (alterao da expresso de uma determinada enzima envolvida na via metablica, provocada por alteraes na sntese de RNA mensageiro); d) Controlo hormonal (a activao ou inibio de enzimas chave em vrias vias metablicas mediada por hormonas).

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Caderno de Apontamentos ATP

O funcionamento de uma clula depende da sua capacidade de extraco e de utilizao de energia qumica de molculas orgnicas. O ATP a unidade biolgica universal de energia. O ATP formado na oxidao de diferentes nutrientes (por exemplo glicose, cidos gordos ou aminocidos) e utilizado para: a) Realizar trabalho mecnico no processo de contraco muscular e outros movimentos celulares; b) O transporte activo de metabolitos; c) Sntese de macromolculas e outras biomolculas.

O ATP utilizado como o dador imediato de energia livre num sistema biolgico e no como uma forma de armazenamento a longo prazo. Numa clula, uma molcula de ATP utilizada menos de um minuto aps a sua formao. Torna-se vital, deste modo para a clula possuir mecanismos de regenerao do ATP. A formao de ATP o objectivo primrio dos processos catablicos. O carbono das molculas combustveis oxidado e a energia libertada usada para regenerar ATP a partir de ADP e Pi.

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Caderno de Apontamentos Metabolismo de Hidratos de Carbono e Bioenergtica Gliclise

Reaces e regulao da gliclise. Rendimento energtico da gliclise. Destinos metablicos do piruvato. Entrada de outras hexoses na via glicoltica. Bioenergtica

Formao de acetil-CoA. Ciclo de Krebs. O ciclo de Krebs como ciclo anfiblico. Reaces anapleurticas. Regulao do ciclo de Krebs. Fosforilao oxidativa. Criao da fora proto-motriz. Teoria quimiosmtica. Rendimento energtico da oxidao completa de uma molcula de glicose. Inibidores da fosforilao oxidativa. Desacopladores da fosforilao oxidativa.

Via das Pentose Fosfato

Formao de NADPH e ribose-5-fosfato. Fase oxidativa e fase no oxidativa. Consequncias da deficincia da enzima glucose-6-fosfato desidrogenase. Gluconeognese

Reaces e regulao da gluconeognese. Diferenas entre gliclise e gluconeognese. Localizao da gluconeognese. Precursores utilizados na sntese de glicose e sua entrada na via gluconeognica. Metabolismo do Glicognio

Sntese e degradao do glicognio. Regulao da sntese e degradao do glicognio. Diferenas no metabolismo do glicognio heptico e muscular. Doenas genticas de armazenamento do glicognio.

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Caderno de Apontamentos Entrada de Glicose nas Clulas

Os combustveis energticos mais importantes so a glicose e os cidos gordos. No entanto, embora a oxidao de cidos seja mais rentvel do ponto de vista energtico do que o oxidao da glicose, a glicose um combustvel praticamente universal. o nico combustvel que pode ser utilizado pelos eritrcitos e por clulas da medula renal bem como pelo crebro, em circunstncias fisiolgicas normais. A glicose tambm o combustvel utilizado pelas clulas musculares em condies de exerccio fsico intenso. O primeiro passo no metabolismo de qualquer nutriente consiste na sua entrada para o interior da clula. A glicose entra nas clulas atravs de transportadores especficos e uma vez nas clulas imediatamente fosforilada a glicose-6-fosfato pela enzima hexocinase (ou glucocinase em alguns casos). Esta fosforilao importante uma vez que a adio de uma carga negativa molcula impede a sua difuso atravs da membrana. Conforme as condies fisiolgicas em que a clula se encontra, a glicose-6-fosfato pode ter diferentes destinos: a) Converso em piruvato atravs da gliclise; b) Converso em ribose-5-fosfato e NADPH atravs da via das pentose fosfato; c) Armazenamento sob a forma de glicognio.

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Caderno de Apontamentos Gliclise

A gliclise uma via metablica que ocorre no citoplasma de praticamente todas as clulas, quer estas estejam em condies aerbicas ou anaerbicas. Por cada molcula de glicose degradada pela via glicoltica so formadas duas molculas de piruvato, de ATP e de NADH. Em condies anaerbicas, a gliclise torna-se essencial, pois a nica via que permite a sntese de ATP. Nestas condies, o piruvato formado convertido em lactato, de forma a regenerar o NAD+ e poder prosseguir a gliclise. Na ausncia de oxignio, a gliclise a nica via que a clula pode utilizar para a sntese de ATP a partir de ADP e Pi. Em condies aerbicas o piruvato transformado em acetil-CoA que entra no ciclo de Krebs, o que vem permitir um maior rendimento energtico. Para a utilizao de glicose em condies aerbicas, necessrio no s a funcionalidade das enzimas glicolticas e a presena de oxignio, mas tambm sistemas enzimticos mitocondriais como a piruvato desidrogenase, o ciclo de Krebs e a cadeia respiratria.

Reaces da Gliclise

Todas as enzimas da gliclise so encontradas no citoplasma celular e catalisam as reaces envolvidas na converso de glicose a piruvato. Na primeira fase da gliclise ocorre consumo de glicose e clivagem da glicose em dois compostos em C3.

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Caderno de Apontamentos A glicose entra na via glicoltica pela fosforilao a glicose-6-fosfato, reaco catalisada pela hexocinase. Esta reaco irreversvel e envolve o consumo de ATP. A hexocinase inibida de forma alostrica pelo produto final glicose-6-fosfato. No fgado, esta reaco tambm catalisada pela glucocinase, uma isoenzima da hexocinase, que actua s para elevadas concentraes de glicose uma vez que tem uma afinidade bastante mais baixa para o substrato. A funo da glucocinase remover a glicose do sangue quando esta se encontra em nveis elevados (por exemplo, a seguir a uma refeio). A glucocinase, ao contrrio da hexocinase, especfica para a glicose. A glicose-6-fosfato um metabolito importante, pois um intermedirio comum a diferentes vias metablicas (gliclise, gluconeognese, glicognese, gluconeognese e via das pentose fosfato). Na gliclise aps a sua converso em frutose-6-fosfato, ocorre um novo passo de fosforilao que leva formao de frutose-1,6-bifosfato, numa reaco irreversvel. A enzima que catalisa esta reaco a fosfofrutocinase, uma enzima chave na regulao da gliclise. A fosfofrutocinase uma enzima alostrica e indutvel. Nveis elevados de ATP inibem alostericamente a enzima, diminuindo a afinidade para o substrato. O AMP e ADP invertem a aco inibitria do ATP, pelo que a actividade da enzima aumenta quando a razo ATP/AD(M)P baixa, ou seja, quando h uma baixa carga energtica na clula. A fosfofrutocinase tambm inibida na presena de elevada concentrao de H+, de forma a evitar a produo excessiva de cido lctico e consequente acidose metablica. A fosfofrutocinase ainda inibida pelo citrato (que assinala a abundncia de precursores biossintticos formados a partir de glicose) e activada pelo metabolito frutose-2,6-bifosfato.

A frutose-1,6-bifosfato formada clivada em dois compostos em C3 (gliceraldedo-3fosfato e dihidroxicetona-fosfato) interconvertveis. A enzima triose fosfato isomerase converte rapidamente dihidroxicetona-fosfato em gliceraldedo-3-fosfato, o qual pode prosseguir para as seguintes reaces glicolticas.

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Caderno de Apontamentos Na segunda fase da gliclise as duas molculas de gliceraldedo-3-fosfato provenientes de cada molcula de glicose vo ser convertidas em piruvato, ocorrendo nesta fase sntese de ATP. O gliceraldedo-3-fosfato oxidado pela enzima gliceraldedo-3-fosfato

desidrogenase, originando 1,3-bifosfoglicerato e NADH. Para esta reaco ocorrer necessrio a presena de NAD+ na clula, o qual reduzido nesta reaco a NADH. Na reaco seguinte, catalisada pela enzima fosfoglicerato cinase, o 1,3-bifosfoglicerato convertido em 3-fosfoglicerato, ocorrendo a hidrlise de uma ligao fosfato altamente energtica e que est associada sntese de ATP (fosforilao ao nvel do substrato). O 3fosfoglicerato isomerizado a 2-fosfoglicerato ocorrendo de seguida a converso deste composto a fosfoenolpiruvato pela enzima enolase. Na ltima reaco da gliclise, a enzima piruvato cinase catalisa a sntese de piruvato, ocorrendo novamento neste passo a formao de ATP. Esta reaco irreversvel e a enzima piruvato cinase sujeita a regulao, sofrendo inibio na presena de ATP.

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Caderno de Apontamentos Rendimento energtico da gliclise

Na primeira fase da gliclise ocorre gasto de duas molculas de ATP, mas na segunda so formados 2 molculas de ATP por cada molcula em C3, o que corresponde a um ganho lquido de 2 molculas de ATP. Por cada molcula de glicose oxidada por esta via so tambm reduzidas 2 molculas de NAD+ a NADH. Destinos metablicos do piruvato

A oxidao completa da glicose requer no s oxignio molecular, mas tambm sistemas enzimticos mitocondriais como o complexo piruvato desidrogenase (que converte piruvavato em acetil-CoA), ciclo de Krebs e cadeia respiratria. Em condies aerbicas e na presena destes sistemas enzimticos, o piruvato formado na gliclise transportado para a mitocndria por um transportador especfico. Dentro da mitocndria, o piruvato descarboxilado oxidativamente a acetil-CoA pelo complexo piruvato desdrogenase e na presena de tiamina (TPP-vitamina B1). O complexo piruvato desidrogenase constitudo por trs enzimas diferentes que actuam sequencialmente (piruvato desidrogenase, dihidrolipoil transacetilase e dihidrolipoil desidrogenase). O facto destas enzimas actuarem num complexo enzimtico de espao confinado, leva a que os intermedirios metablicos no se dissociem e permaneam ligados s enzimas, o que se traduz num aumento da taxa da reaco e elimine reaces colaterais. A piruvato desidrogenase catalisa uma reaco irreversvel e portanto a acetil-CoA no pode ser utilizada na sntese de piruvato. A regulao desta enzima d-se por inibio feed-back, em que os produtos finais (acetil-CoA e NADH) inibem a actividade da enzima. tambm regulada por modificao covalente a fosforilao inibe a actividade enzimtica, a desfosforilao activa-a.

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Caderno de Apontamentos Quando o fornecimento de oxignio escasso (o que acontece, por exemplo no exerccio fsico anaerbico) ou quando a clula no possui sistemas enzimticos mitocondriais (caso dos eritrcitos), a reoxidao do NADH atravs da cadeia respiratria encontra-se impedida, o que poderia levar inibio da gliclise (o NAD+ um cofactor essencial da gliclise). Nestas circunstncias, o piruvato convertido em lactato pela enzima lactato desidrogenase, havendo simultaneamente reoxidao do NADH a NAD+, o que permite o prosseguir da via glicoltica. Assim, a gliclise pode ocorrer em condies anaerbicas, embora o rendimento energtico seja desta forma muito mais baixo (2 molculas de ATP por cada molcula de glicose consumida). Consequentemente, para obter uma determinada quantidade de energia, haver consumo de muito mais glicose e aumentar a produo de lactato, que poder provocar acidose lctica.

Nos mamferos, todas as clulas possuem a enzima lactato desidrogenase (LDH), sendo o lactato o produto final da gliclise em condies anaerbicas. Em condies aerbicas e na presena dos sistemas enzimticos mitocondriais funcionais, as clulas podem utilizar o oxignio molecular e as reaces mitocondriais para oxidar NADH a NAD+. Nestas condies, o piruvato transportado para a mitocndria onde convertido em acetil-CoA que prossegue para o ciclo de Krebs e cadeia respiratria. Alguns microrganismos possuem um mecanismo alternativo para oxidar o NADH formado na gliclise. Utilizam a enzima lcool desidrogenase, regenerando o NAD+ e produzindo etanol (fermentao alcolica).

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Caderno de Apontamentos Entrada de outras hexoses na via glicoltica

Alguns alimentos vulgarmente utilizados na dieta humana possuem na sua composio dissacardeos como sacarose ou lactose. A hidrlise destes dissacardeos pelas enzimas invertase (ou sacarase) e lactase levam formao respectivamente de frutose e galactose, para alm da glicose. Estes monossacardeos podem, tal como a glicose, ser convertidos em intermedirios glicolticos.

A frutose metabolizada mais rapidamente que a glicose no fgado. A enzima frutocinase, presente no fgado, converte frutose em frutose-1-fosfato. A frutose-1-fosfato formada clivada por uma aldolase em gliceraldedo e no intermedirio glicoltico dihidroxicetona fosfato (a ausncia desta enzima provoca intolerncia frutose hereditria). O gliceraldedo tambm convertido no intermedirio glicoltico gliceraldedo-3-fosfato pela enzima triocinase. Estes dois compostos podem ento prosseguir a via glicoltica. A entrada de frutose na gliclise por esta via, leva a que seja ultrapassada a reaco catalisada pela principal enzima envolvida na regulao da gliclise a formao de frutose-1,6-bifosfato pela enzima fosfofrutocinase. Isto leva a que o metabolismo da frutose se d muito mais rapidamente e possa ocorrer uma sntese descontrolada de cido lctico. Para alm disso, parte do piruvato formado pode tambm originar acetil-CoA que pode ser utilizada na sntese de cidos gordos e triglicridos. Ocorre ento um aumento na secreo de VLDL podendo provocar hipertrigliceridemia. O aumento de VLDL provoca por sua vez um aumento nas LDL que transportam colesterol.

A galactose rapidamente convertida em glicose no fgado. A galactose fosforilada pela galactocinase e o produto resultante galactose-1-fosfato reage com UDP-glicose para formar UDP-galactose e glicose-1-fosfato. A glicose-1-fosfato ento convertida em glicose-6-fosfato e prossegue a via glicoltica. A incapacidadade em metabolizar galactose, por deficincias nas enzimas envolvidas nesse metabolismo provocam a doena galactosemia. Nesta doena ocorre um aumento dos nveis de galactose que pode ser reduzida a galactitol que pode acumular e provocar cataratas.

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Caderno de Apontamentos

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Caderno de Apontamentos Bioenergtica

A oxidao completa da glicose pressupe, como referido, a presena de oxignio molecular, bem como os sistemas enzimticos mitocondriais complexo piruvato desidrogenase, ciclo de Krebs e cadeia respiratria.

Formao de acetil-CoA

O piruvato formado na gliclise transportado para a mitocndria por um transportador especfico, sendo a convertida em acetil-CoA pelo complexo piruvato desidrogenase. A acetil-CoA uma molcula central no metabolismo, dado que um ponto de convergncia de vrias vias metablicas.

glucose

c. gordos

amino cidos (cetognicos)

piruvato

Acetil CoA
sntese de corpos cetnicos sntese de cidos gordos sntese de colesterol oxidao via ciclo de Krebs

Ciclo de Krebs

O ciclo de Krebs, tambm designado por ciclo do cido ctrico ou ciclo dos cidos tricarboxlicos, uma via metablica que ocorre na matriz mitocondrial e que permite a oxidao de resduos de acetil a CO2. A maior parte da acetil-CoA que entra no ciclo de Krebs proveniente da oxidao de cidos gordos ou da oxidao do piruvato catalisada pelo complexo piruvato desidrogenase. Tal como o prprio ciclo, estes processos ocorrem na mitocndria. A acetil-CoA entra no ciclo atravs de uma reaco de condensao com oxaloacetato (catalisada pela enzima citrato sintetase), originando citrato. O citrato isomerizado a isocitrato. Nos dois passos seguintes, ocorrem duas descarboxilaes oxidativas, com

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Caderno de Apontamentos formao de CO2 e NADH. Na primeira reaco a enzima isocitrato desidrogenase converte isocitrato em -cetoglutarato, o qual transformado na reaco seguinte em succinilCoA, pela enzima -cetoglutarato desidrogenase. O succinil-CoA clivado em succinato e CoA, numa reaco suficientemente exergnica para originar a sntese de GTP. As trs ltimas reaces do ciclo permitem a regenerao de oxaloacetato. A enzima succinato desidrogenase (protena integral da membrana mitocondrial interna) converte succinato em fumarato, havendo nesta reaco formao de FADH2. A enzima fumarase catalisa uma reaco de hidratao que leva formao de malato, o qual oxidado a oxaloacetato, levando mais uma vez produo de NADH. Esta reaco completa o ciclo, havendo a formao de 2 molculas de CO2, 3 molculas de NADH, uma molculas de FADH2 e uma molcula de GTP (que pode ser convertido em ATP), por cada molcula de acetil-CoA que entra no ciclo.

O ciclo de Krebs como via anfiblica

O ciclo de Krebs, alm das funes catablicas j descritas, apresenta tambm funes anablicas designado por via anfiblica. O ciclo de Krebs fornece precursores
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Caderno de Apontamentos importantes para vias anablicas. o caso, por exemplo, da utilizao de oxaloacetato na gluconeognese para a sntese de glicose, da utilizao de -cetoglutarato e oxaloacetato para a sntese de aminocidos, ou da utilizao do succinil-CoA para a sntese do grupo heme. Reaces anapleurticas

Os intermedirios do ciclo de Krebs encontram-se na mitocndria em quantidades muito reduzidas. Torna-se assim necessrio a reposio destes compostos quando so utilizados em reaces anablicas, de modo a permitir a continuidade do ciclo. Esta reposio conseguida atravs das chamadas reaces anapleurticas, que conduzem formao de intermedirios do ciclo de Krebs. A reaco anapleurtica mais importante a catalisada pela enzima piruvato carboxilase que converte piruvato em oxaloacetato. O oxaloacetato formado pode rapidamente ser transformado noutros intermedirios do ciclo at permitir a reposio do composto em falta.

Em contraste com o piruvato, a acetil-CoA no um metabolito anapleurtico. A acetilCoA que entra no ciclo completamente oxidada a CO2, no havendo por isso tomos de carbono disponveis para reaces biossintticas.
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Caderno de Apontamentos Regulao do ciclo de Krebs

Os principais locais de regulao do ciclo de Krebs correspondem a reaces que no de equilbrio, como o caso das reaces catalisadas pelas enzimas citrato sintetase, isocitrato desidrogenase e -cetoglutarato desidrogenase. As enzimas citrato sintetase e cetoglutarato desidrogenase so inibidas pelo produto final, citrato e succinil-CoA respectivamente. As enzimas isocitrato desidrogenase e -cetoglutarato desidrogenase so activadas pelo clcio. O clcio encontra-se aumentado durante o processo de contraco muscular, situao em que h uma maior demanda energtica. As enzimas envolvidas na regulao so tambm afectadas pelo estado energtico da clula dado pelas razes ATP/ADP e NADH/NAD+. Uma diminuio destas razes traduz um dfice energtico na clula e conduz activao do ciclo.

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Caderno de Apontamentos Fosforilao Oxidativa

Os equivalentes redutores (NADH e FADH2) que se formam na gliclise, sntese de acetilCoA e ciclo de Krebs, transferem os electres atravs de uma srie de complexos proteicos at ao aceitador final que o oxignio molecular. Esta transferncia de electres conduz formao de uma grande quantidade de energia sob a forma de ATP, num processo designado por fosforilao oxidativa. Este processo aerbico, dado que requer o oxignio como ltimo aceitador de electres.

A cadeia respiratria parte do processo de fosforilao oxidativa e catalisa a transferncia de electres desde o NADH e FADH2 at ao oxignio molecular. A cadeia respiratria consiste em quatro complexos proteicos (I, II, III e IV), sendo que o complexo II a enzima succinato desidrogenase, participante no ciclo de Krebs. A cadeia respiratria consiste ainda em duas molculas transportadoras mveis, ubiquinona e citocromo c, que permitem o transporte de electres entre os diferentes complexos proteicos. A enzima ATP sintetase por vezes includa na cadeia respiratria e designada por complexo V. Todos os complexos da cadeia respiratria so constitudos por vrias cadeias peptdicas e contm uma srie de centros redox. Esses centros redox so flavinas (FMN e FAD nos complexos I e II), centros de Fe/S (complexos I, III e IV) e grupos heme (complexos II, III e IV). A oxidao do NADH por esta forma permite a regenerao do NAD+ em condies aerbicas. Esta regenerao em condies anaerbicas conseguida pela converso de piruvato em lactato.

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Caderno de Apontamentos O complexo I transfere electres do NADH para a ubiquinona, via FMN e vrios centros de Fe/S. O complexo II transfere electres do FADH2 tambm para a ubiquinona ou coenzima Q. A ubiquinona ento reduzida e transfere os electres para o complexo III (a ubiquinona um componente mvel na membrana, podendo por isso fazer essa transferncia). O complexo III, por sua vez transfere os electres para o citocromo c (outra molcula mvel) que os transfere para o complexo IV ou citocromo oxidase. O complexo IV catalisa a transferncia final dos electres para o oxignio molecular que convertido em gua. O transporte de electres pelos complexos da cadeia respiratria ocorre vectorialmente. No entanto, embora estes complexos estejam todos localizados na membrana mitocondrial interna, eles no se encontram em contacto. As molculas ubiquinona e citocromo c so molculas mveis que permitem fazer a transferncia de electres entre os diferentes complexos.

Criao de uma fora proto-motriz

O transporte de electres atravs da cadeia respiratria est associado ao bombeamento de protes ao nvel dos complexos I, III e IV. Assim, durante a transferncia de electres, a concentrao de H+ aumenta, levando a uma diminuio do valor de pH no espao intermembranar. Isso leva formao de um potencial qumico (pH alcalino no interior da matriz mitocondrial) e de um potencial elctrico devido diferena de cargas ( negativo no interior da matriz mitocondrial). O conjunto dessas duas foras designado por fora protomotriz. Por cada molcula de NADH oxidada so bombeados 10 protes, ao passo que a oxidao do FADH2 leva apenas ao bombeamento de 6 protes, uma vez que no h bombeamento de protes ao nvel do complexo II. Isso leva a diferentes rendimentos energticos na oxidao das duas molculas: a oxidao de uma molcula de NADH leva produo de 2,5 molculas de ATP ao passo que a oxidao de uma molcula de FADH2 conduz apenas sntese de 1,5 molculas de ATP.
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Caderno de Apontamentos Teoria quimiosmtica

O transporte de electres atravs da cadeia respiratria at ao oxignio molecular, conduz, como referido, ao bombeamento de protes para o espao intermembranar. A fora proto-motriz originada desta forma utilizada para conduzir a sntese de ATP pela enzima ATP sintetase. Este acoplamento

existente entre a formao de um gradiente de protes pela cadeia

respiratria e a sntese de ATP designada por teoria quimiosmtica.

Os protes bombeados durante o transporte de electres pela cadeia respiratria podem retornar matriz mitocondrial pela enzima ATP sintetase. Esta enzima consiste em duas unidades funcionais: um canal que permite a passagem de protes (subunidade F0) e a unidade cataltica onde ocorre a sntese de ATP (subunidade F1). A unidade cataltica possui 3 locais activos. O processo cataltico pode ser dividido em trs fases: na primeira
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Caderno de Apontamentos fase ocorre ligao do ADP e do Pi, na segunda d-se a sntese de ATP e finalmente, na terceira, o ATP formado libertado. Cada vez que ocorre passagem de protes atravs da unidade F0, ocorre uma modificao conformacional e cada um dos trs locais activos passa de uma fase para a fase seguinte.

Rendimento energtico da oxidao completa de uma molcula de glicose

As molculas de NADH formadas na gliclise, no citoplasma das clulas, podem ser transportadas para a mitocndria por dois transportadores diferentes (glicerol-fosfato ou malato-aspartato). Conforme o tipo de transportador, originam NADH ou FADH2 mitocondrial, o que se ir traduzir numa eficincia energtica diferente.

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Caderno de Apontamentos Inibidores da fosforilao oxidativa

Existem vrios venenos, como o cianeto, que conduzem inibio do processo de fosforilao oxidativa. A inibio deste processo leva a que a clula tenha que recorrer gliclise para obteno de energia. A gliclise um processo muito menos rentvel energeticamente, pelo que a inibio da fosforilao oxidativa conduz a um aumento do consumo de glicose por parte das clulas, a uma activao da gliclise e

consequentemente a um aumento dos nveis de lactato, o que poder levar a uma situao de acidose lctica, que aliada ao dfice energtico pode a conduzir a uma situao extremamente grave, podendo mesmo originar a morte. Desacopladores da fosforilao oxidativa

Os desacopladores so substncias que provocam a separao funcional entre a oxidao do NADH ou FADH2 e a fosforilao do ADP a ATP. Os desacopladores permitem a dissipao do gradiente de protes no espao intermembranar sem que haja o envolvimento da ATP sintetase neste processo. O desacoplamento pode resultar de danos qumicos ocorridos na membrana interna ou da aco de substncias como o 2,4-nitrofenol que transportam os protes atravs da membrana. A energia contida no gradiente de protes ento dissipada sob a forma de calor. A utilizao destes compostos leva a um descontrolo da respirao, a um aumento da taxa metablica e uma diminuio do peso corporal. A termogenina um desacoplador natural existente no tecido adiposo castanho. Este tecido encontrado, por exemplo, em recmnascidos ou em animais que hibernam e tem como objectivo a produo de calor. Ao contrrio do que acontece com outros

desacopladores, este um processo regulado e localizado.

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Caderno de Apontamentos Via das Pentose Fosfato

A via das pentose fosfato, tambm designada por via das hexose monofosfato, uma via oxidativa, localizada no citoplasma e que, tal como a gliclise, iniciada a partir de glicose-6-fosfato. O objectivo desta via a formao de NADPH, necessrio em muitas vias biossintticas (ex. sntese de cidos gordos), e de ribose-5-fosfato, necessrio para a sntese de nucletidos constituintes dos cidos nucleicos.

Fase oxidativa

fase

oxidativa

da

via

transforma glicose-6-fosfato em ribulose-5-fosfato, a qual pode ser convertido Neste em ribose-5so

fosfato.

processo

formadas uma molcula de CO2 e duas de NADPH. A primeira reaco da via catalisada pela enzima glicose-6-fosfato

desidrogenase e a principal enzima regulao. envolvida na sua

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Caderno de Apontamentos Fase no oxidativa

Esta fase ocorre quando h uma maior necessidade em NADPH do que em ribose-5-fosfato. Desta forma ribulose-5-fosfato pode ser convertida em frutose-6-fosfato (por enzimas designadas transaldolases e transcetolases), que por sua vez podem originar glicose-6fosfato. A glicose-6-fosfato formada pode ser de novo utilizada na via das pentose fosfato para formar mais NADPH. Caso a clula se encontre com carncia de energia adicionalmente carncia em NADPH, parte da glicose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato formados na fase no oxidativa, pode ser canalizada para a gliclise para a produo de ATP.

Deficincia na glucose-6-fosfato desidrogenase

A enzima glucose-6-fosfato desidrogenase a principal enzima envolvida na regulao da via das pentose-fosfato, pelo que a deficincia gentica nesta enzima conduz a uma diminuio na produo de NADPH. A baixa dos nveis de NADPH leva inibio da regenerao da glutationa reduzida nos eritrcitos. A glutationa reduzida utilizada como defesa antioxidante e por isso, nesta situao, os eritrcitos encontram-se mais sujeitos exposio de agentes oxidantes. A exposio a agentes oxidantes leva peroxidao lipdica das membranas dos eritrcitos e sua destruio, podendo provocar uma situao de anemia.
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Caderno de Apontamentos Gluconeognese

Alguns tecidos, como o crebro e eritrcitos, so dependentes da utilizao de glicose como combustvel energtico. Numa situao em que no haja fornecimento de glicose atravs da alimentao, o organismo pode recorrer, num perodo de tempo limitado, s reservas de glicognio hepticas. No entanto, essas reservas esgotam-se em

aproximadamente 24 horas. Assim, o organismo tem que recorrer a outras vias para manter os nveis de glicose sanguneas para perodos de tempo superiores a um dia. Isso possvel atravs da sntese de glicose a partir de precursores no glicdicos, como o lactato, aminocidos ou glicerol, numa via metablica designada por sntese de novo de glicose ou gluconeognese.

A gluconeognese ocorre predominantemente no fgado, embora possa tambm ocorrer em menor escala no rim. Os principais precursores gluconeognicos so os aminocidos derivados de protena muscular. Numa situao de jejum, ocorre uma degradao de protena muscular em elevada extenso, de forma aos aminocidos poderem ser utilizados para a sntese de glicose. Outro precursor importante o lactato, formado nos eritrcitos ou nos msculos em exerccio anaerbico. Numa situao de jejum, ocorre tambm degradao de triglicridos do tecido adiposo, e o glicerol resultante dessa hidrlise utilizado para a sntese de glicose. Pelo contrrio, os cidos gordos provenientes dessa hidrlise no contribuem para a gluconeognese.

A maior parte das enzimas envolvidas na gluconeognese so comuns gliclise. Existem, no entanto, enzimas especficas desta via, e que so responsveis pela regulao da gluconeognese. A existncia de reaces irreversveis na gliclise e na gluconeognese leva a uma regulao diferenciada das duas vias, evitando a sua ocorrncia simultnea e o consumo intil de energia.

Os primeiros passos da gluconeognese ocorrem na mitocndria. O piruvato carboxilado a oxaloacetato pela enzima piruvato carboxilase (enzima activada por acetil-CoA). Como o oxaloacetato um intermedirio do ciclo de Krebs, todos os aminocidos que possam ser desaminados a um intermedirio do ciclo ou a piruvato, podem ser utilizados na gluconeognese. O oxaloacetato transportado para o citoplasma e a convertido em fosfoenolpiruvato pela enzima fosfoenolpiruvato carboxicinase. Na gliclise a

transformao de fosfoenolpiruvato em piruvato ocorre num s passo catalisado pela enzima piruvato cinase. Os passos seguintes da gluconeognese so catalisados pelas

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Caderno de Apontamentos mesmas enzimas da gliclise at formao de frutose-1,6-bifosfato. Ocorre ento remoo de um grupo fosfato da frutose-1,6-bifosfato por aco da frutose-1,6- bifosfatase (enzima inibida pro frutose 2,6 bifosfato). A fosforilao de frutose6-fosfato a frutose-1,6-bifosfato,

que ocorre na gliclise, catalisada pela fosfofrutocinase. A frutose-6fosfato isomerizada a glucose-6fosfato e esta desfosforilada pela glucose-6-fosfatase na ltima

reaco da via. Na gliclise a fosforilao da glicose para formar glicose-6-fosfato catalisada pela hexocinase. A glucose-6-fosfatase

apenas existe no fgado e no rim, pelo que estes so os nicos locais do organismo onde ocorre

gluconeognese. A glicose formada aps a aco da glucose-6-fosfatase ento libertada para o sangue.

O glicerol , como referido, um substrato gluconeognico. Para se dar essa converso, o glicerol fosforilado a glicerol-3-fosfato

entrando depois na gluconeognese via dihidroxicetona-fosfato.

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Caderno de Apontamentos Ciclo de Cori

O ciclo de Cori estabelece-se entre tecidos produtores de lactato (p.e. msculo em condies anaerbicas) e o fgado. O lactato produzido pelo

msculo (durante o catabolismo da glicose em condies anaerbicas) transportado pela corrente sangunea at ao fgado. No fgado convertido em glicose pela gluconeognese e essa glicose formada transportada para o msculo onde pode novamente ser convertida em lactato aps o processo de gliclise.

Metabolismo do Glicognio

O glicognio a forma prontamente mobilizvel da glicose, sendo um polmero altamente ramificado, com a maioria dos resduos unidos por ligaes 1,4 e em que as ramificaes surgem de ligaes 1,6 (1 em cada 10 resduos). A presena de glicognio aumenta muito a quantidade de glucose disponvel de imediato quer no intervalo entre as refeies quer durante a actividade muscular. Para ter uma ideia do que isto significa, a energia que corresponde quantidade de glicognio total num organismo saudvel cerca de 15 vezes superior quantidade de energia correspondente glicose existente nos fluidos corporais. Os dois locais principais de armazenamento de glicognio so o fgado e o msculoesqueltico. A concentrao de glicognio maior no fgado mas a quantidade de glicognio armazenada superior no msculo porque tem maior massa. No entanto, quase todos os tecidos animais sintetizam glicognio. No citosol, observam-se grnulos de glicognio.

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Caderno de Apontamentos A sntese e degradao de glicognio so vias importantes porque: o Regulam os nveis sanguneos de glucose e fornecem uma reserva de glucose para situaes de exerccio intenso; o A regulao hormonal do metabolismo mediada por mecanismos de importncia geral, como o controlo coordenado destas vias pelo cAMP e regulao das enzimas por fosforilao reversvel; o Existem uma srie de deficincias enzimticas hereditrias que resultam em desequilbrios deste metabolismo que s vezes atingem gravidades letais.

Degradao do glicognio

O glicognio quebrado pelo ortofosfato para originar glucose fosforilado, numa reaco catalisada pela glicognio fosforilase: Nesta reaco d-se a remoo sequencial de resduos glicosil das extremidades no redutoras de uma molcula de glicognio. A clivagem fosforoltica do glicognio energeticamente vantajosa porque o acar que se liberta est fosforilado podendo entrar na via glicoltica sem gasto de ATP (j que seria necessrio fosforil-la) e a presena do fosfato d uma carga negativa que impede a glucose de se difundir para o exterior da clula.

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Caderno de Apontamentos A fosforilase s degrada ligaes -1,4 pelo que apenas possibilita uma

degradao limitada do glicognio. A fosforilase pra a sua actuao

quando atinge o resduo terminal que dista 4 resduos do ponto de

ramificao.

A fosforilase cliva 5 ligaes -1,4 numa das ramificaes e 3 na outra. Nesse ponto pra a sua actividade pois os resduos esto a 4 resduos do ponto de ramificao. Agora entra em aco uma enzima diferente. Uma enzima transferase transfere um

bloco de 3 resduos glicosil de uma ramificao para a outra. Quebra-se assim uma ligao glicosdica 1,4 entre e estabelece-se uma nova. Esta transferncia expe um resduo aco de uma terceira enzima 1,6 glicosidase, tambm conhecida como enzima desramificadora. Esta enzima hidrolisa a ligao glicosdica 1,6. Ento as enzimas transferase e desramificadora convertem a estrutura ramificada numa estrutura linear, o que torna possvel a clivagem adicional pela fosforilase. interessante notar que a transferase e a enzima desramificadora so partes da mesma enzima e que, de facto, se trata de uma s cadeia polipeptdica que contm ambos os centros catalticos.

A glucose-1-fosfato, libertada pela aco da glicognio fosforilase, convertida em glucose-6-fosfato pela fosfoglucomutase.

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Caderno de Apontamentos O fgado possui a glucose-6-fosfatase, uma enzima hidroltica ausente no msculo

Uma das principais funes do fgado a de manter relativamente constante os nveis de glicose no sangue. A glicose libertada captada principalmente pelo crebro e pelo msculo-esqueltico. Ora a glicose fosforilada no pode sair facilmente das clulas, contrariamente ao que acontece glucose. Como foi referido, o fgado possui uma enzima hidroltica, glucose-6-fosfatase, que permite a sada de glucose. Como esta enzima est ausente no msculo e crebro, a glicose fica retida o que importante porque estes rgos necessitam de grandes quantidades deste combustvel para a regenerao de ATP. Verifica-se que o fgado armazena glucose de uma forma no egosta fazendo-o tambm para o benefcio de outros tecidos. Na ausncia de glucose-6-fosfatase, a glicose formada pode ser utilizada na gliclise para a sntese de ATP (msculo) ou na via das pentosefosfato.

Sntese do glicognio

A sntese de glicognio ocorre por uma via distinta da via inversa do processo de degradao. Este no um caso isolado no metabolismo geral: vias separadas de sntese e degradao permitam uma maior flexibilidade tanto em termos energticos como de regulao.

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Caderno de Apontamentos O ponto de partida para a sntese de glicognio a glucose 6-fosfato que pode derivar de glucose livre por aco da enzima hexocinase ou pela enzima glucocinase. Para que se inicie a sntese de glicognio, a glucose 6-fosfato reversvelmente convertida a glucose1-fosfato pela fosfoglucomutase. A UDP-glucose sintetizada a partir de glucose-1-fosfato e uridina trifosfato (UTP), numa reaco catalisada pela enzima UDP-glucose pirofosforilase.

Na sntese do glicognio, torna-se necessria a adio de unidades glicosil aos resduos terminais no redutores da molcula. As unidades glicosil activadas da UDP-glucose so transferidas para o grupo hidroxilo do C-4 terminal do glicognio para formar uma ligao 1,4 glicosdica. Esta reaco catalisada pela glicognio sintetase, que consegue apenas adicionar resduos glicosil se a cadeia polissacardea contiver j mais de 4 resduos.

67

Caderno de Apontamentos A sntese de glicognio necessita de um primer (iniciador). A protena glicogenina (37 kDa) serve de protena iniciadora qual adicionada o primeiro resduo de glucose e que serve igualmente de catalisadora da sntese da molcula nascente de glicognio at estarem ligados cerca de 8 resduos de glucose.

A glicognio sintetase s capaz de catalisar a sntese de ligaes a 1,4. ento necessrio outra enzima para catalisar a formao de ramificaes, importantes para a solubilidade do glicognio. A ramificao ocorre aps a introduo de uma srie de resduos glicosil unidos por ligao 1,4. Uma ramificao criada por quebra de uma ligao a 1,5 e criao de uma ligao 1,6, pela enzima glicosil-(4-6)-transferase: um bloco de resduos, geralmente de 7, transferido para um local mais interior da molcula, criando uma nova ramificao.

Para a sntese de glicognio h gasto de uma molcula de ATP por cada glucose, gasta na formao de UTP. No entanto a oxidao completa de uma glucose libertada pela degradao do glicognio permite a obteno de 37 ATP. Estes 37 ATP versus 1 ATP gasto no armazenamento significa que a eficincia do armazenamento energtico em glicognio de cerca de 97%. Regulao da Sntese e Degradao do Glicognio

A sntese e degradao do glicognio esto coordenadas de modo que a glicognio sintetase est praticamente inactiva quando a fosforilase est totalmente activa e viceversa. O metabolismo do glicognio profundamente afectado por hormonas especficas. A insulina indica um estado alimentado e induz a sntese de glicognio no fgado. A epinefrina e o glucagon so hormonas com o efeito oposto ao da insulina, e so libertadas como consequncia de um estado de jejum ou exerccio muscular, por exemplo. Estimulam a degradao do glicognio no fgado, fazendo com que aumentem os nveis sanguneos de
68

Caderno de Apontamentos glucose. A epinefrina e o glucagon no entram nas clulas alvo. Em vez disso ligam-se a receptores proteicos especficos na membrana plasmtica. Estes complexos hormonareceptor activam a sntese de cAMP que leva activao de uma cascata de reaces que por sua vez conduzem activao da fosforilase e inibio da glicognio sintetase. A fosforilase activada pela fosforilao de um resduo especfico de serina. A forma inactiva da enzima designada de fosforilase b e a forma activa designada de fosforilase a. A fosforilao da enzima catalisada pela fosforilase cinase e a desfosforilao mediada por uma fosfatase especfica que hidrolisa o fosforil ligado serina. A glicognio sintetase inactivada pela fosforilao de um resduo especfico de serina. A fosforilao converte a glicognio sintetase a na forma inactiva b. Assim, a fosforilao tem efeitos opostos nas actividades enzimticas da glicognio sintetase e da fosforilase.

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Caderno de Apontamentos Temos assim uma cascata de reaces no controlo da fosforilao da glicognio sintetase e da fosforilase:

As enzimas fosfatases revertem os efeitos das cinases. A epinefrina leva inibio da fosfatase enquanto a insulina leva sua activao. Doenas genticas de armazenamento de glicognio

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Caderno de Apontamentos Metabolismo Lipdico

Os lpidos so a fonte energtica mais rentvel na maioria dos tecidos humanos, com excepo de eritrcitos e clulas cerebrais. Os triglicridos constituem a forma de armazenamento dessa energia. Os cidos gordos, provenientes da hidrlise dos triglicridos, constituem a forma imediata de energia. Os cidos gordos so libertados do tecido adiposo aps liplise mediada pelo glucagon e transportados no sangue em associao com a albumina para os diversos tecidos onde so metabolizados. O seu metabolismo inteiramente oxidativo, sendo o bom funcionamento da maquinaria enzimtica mitocondrial imprescindvel. Em condies de descanso, cerca de metade da energia utilizada por tecidos como msculo ou fgado derivado do catabolismo dos cidos gordos. Digesto e Absoro dos Lpidos da Dieta

Os lpidos so constituintes importantes da dieta, no s devido ao seu elevado contedo energtico, mas tambm porque esta classe de nutrientes inclui vitaminas lipossolveis e cidos gordos essenciais. Tal como acontece com outros nutrientes, os lpidos da dieta tm que ser hidrolisados a molculas mais simples, de modo a se poder dar a sua absoro a nvel intestinal. Aproximadamente 90% dos lpidos ingeridos correspondem a triglicridos, sendo os restantes respeitantes a fosfolpidos, colesterol, steres de colesterol e cidos gordos livres. O estmago secreta uma lipase gstrica que hidrolisa os triglicridos a cidos gordos livres e 1,2-diacilglicerol. No entanto, o baixo pH a que se encontra o estmago leva destruio das protenas e apenas cerca de 30% dos triglicridos so hidrolisados por esta enzima. O processo de digesto prossegue ento no intestino, onde secrees biliares e pancreticas neutralizam essa acidez, de modo a permitir a actividade de enzimas contidas no suco pancretico e intestinal. Uma dessas enzimas a lipase pancretica que hidrolisa os triglicridos a cidos gordos livres e a monoacilgliceris. No entanto, para ser possvel a actividade desta enzima, os triglicridos tm que ser emulsificados de modo a formar uma superfcie hidroflica que permita a actuao da enzima. A solubilizao iniciada no estmago, com componentes da dieta (fosfolpidos, cidos gordos livres e

monoacilgliceris) e cidos gordos livres resultante de alguma hidrlise dos triglicridos a actuarem como surfatantes, sendo completada no intestino pelos cidos biliares. A lipase pancretica , no entanto, inibida na presena de cidos biliares. Esta inibio pode ser ultrapassada pela actuao de uma colipase presente no suco pancretico, que por um

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Caderno de Apontamentos lado impede a inibio da lipase por parte dos cidos biliares e por outro permite a ancoragem entre a lipase e o seu substrato. A aco da lipase pancretica produz na sua maioria cidos gordos livres e 2-monoacilgliceris. Os produtos da digesto so absorvidos e d-se a ressntese de triglicridos nas clulas da mucosa intestinal. O glicerol livre que se pode formar pela hidrlise completa dos triglicridos passa directamente para a veia porta. Os triglicridos ressintetizados nas clulas da mucosa intestinal juntam-se a outros lpidos da dieta fosfolpidos, colesterol e steres de colesterol e a apoprotenas para formarem os quilomicrons. Os quilomicrons so, portanto, lipoprotenas que permitem o transporte de lpidos provenientes da dieta. Os triglicridos constituem o principal componente destas lipoprotenas, que fazem o seu transporte do intestino principalmente para o tecido adiposo, onde se d o seu armazenamento. As figuras seguintes esquematizam todo esse processo de digesto e absoro dos triglicridos.

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Caderno de Apontamentos

Lipognese

A lipognese e a acumulao de triglicridos no tecido adiposo encontram-se reguladas pelo estado nutricional e de actividade do organismo. A insulina (hormona que assinala o estado alimentado) e glicose activam este processo, ao passo que o glucagon (hormona produzida em situao de jejum) e a adrenalina (produzida por exemplo em situao de exerccio fsico) o inibem. Assim, a taxa de lipognese maior em organismos bem alimentados, com uma dieta rica em acares e sedentrios. Todas estas situaes esto associadas com uma maior quantidade de cidos gordos incorporadas pelo tecido adiposo e com uma maior taxa de sntese de cidos gordos e triglicridos no fgado e tecido adiposo. Os triglicridos so transportados para o tecido adiposo pelas lipoprotenas quilomicrons e VLDL. O fgado possui uma grande actividade lipognica em situao de ps alimentao, mas os triglicridos a sintetizados so transportados pelas VLDL para o tecido adiposo onde so armazenados. Os quilomicrons, como j foi referido, transportam os triglicridos provenientes da dieta. Os quilomicrons e as VLDL so rapidamente catabolizados por aco da lipoprotena lipase, enzima localizada nas paredes dos vasos sanguneos e activada por aco da insulina. A aco da lipoprotena lipase permite a hidrlise dos triglicridos constituintes destas lipoprotenas e a incorporao dos cidos gordos resultantes desta hidrlise por parte dos adipcitos. Uma deficincia na lipoprotena lipase impede a hidrlise dos triglicridos constituintes dos quilomicrons e VLDL, e a consequente incorporao dos cidos gordos nos adipcitos. Isto leva a um aumento nos nveis de triglicridos no sangue (e uma diminuio no tecido adiposo), provocando

hipertrigliceridmia. Este aumento dos nveis de triglicridos no plasma pode ser tambm visvel comparando o plasma de um indivduo em jejum com o plasma retirado aps uma refeio, antes do tempo de actuao da lipoprotena lipase.

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Caderno de Apontamentos A insulina alm de promover a activao da enzima lipoprotena lipase, promove tambm a activao da entrada de glicose nos adipcitos e a sntese de cidos gordos. Os triglicridos sintetizados no tecido adiposo so formados por esterificao dos cidos gordos captados pelos adipcitos (provenientes dos triglicridos dos quilomicrons e VLDL aps aco da lipoprotena lipase) ou l sintetizados, com o glicerol-3-fosfato. Nos adipcitos, o glicerol3-fosfato sintetizado a partir do intermedirio glicoltico dihidroxicetona-fosfato, tornando-se, portanto, a glicose essencial para a sntese e armazenamento de triglicridos. A insulina estimula a gliclise, o que permite a maior produo de glicerol-fosfato necessrio para a sntese de triglicridos, bem como de piruvato, o qual pode ser convertido em acetil-CoA. A acetil-CoA formada pode ser direccionada para a sntese de cidos gordos que esterificados com o glicerol-fosfato aumentam os nveis de triglicridos sintetizados e armazenados.

Adipcito Glicose INSULINA

VLDL TG

Glicose

DHAP

Glicerol-3-P

+ +
Piruvato Acetil-CoA c. gordos c. Gordos-CoA

TG

Lipoprotena lipase c. gordos

quilomicrons TG

Liplise

Tal como acontece com a lipognese, tambm a liplise, ou hidrlise de triglicridos no tecido adiposo, se encontra regulado pelo estado nutricional e de actividade do organismo. Neste caso, ao contrrio do que acontece na lipognese, a insulina e glicose inibem este processo, ao passo que o glucagon e a adrenalina o activam. A taxa de liplise activada em situaes de jejum ou durante o exerccio fsico, por exemplo. O processo de catabolismo dos triglicridos origina como produtos finais cidos gordos livres e glicerol, que passam para a corrente sangunea. O glicerol transportado para o fgado, onde convertido em glicose pelo processo de gluconeognese. O glicerol proveniente da hidrlise de triglicridos do tecido adiposo, constitui uma importante fonte de glicose durante o perodo de jejum. No que respeita aos cidos gordos libertados, estes so transportados em associao com a albumina, podendo ser metabolizados pela maioria dos tecidos do

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Caderno de Apontamentos organismo (exceptuando eritrcitos, neurnios), o que permite um poupar de glicose nesta situao. A enzima responsvel a lipase pela hidrlise dos aco

triglicridos

sensvel

hormonal, enzima activada pelo glucagon e inibida pela insulina. O glucagon promove a fosforilao desta enzima tornando-a activa, ao passo que a insulina conduz sua

desfosforilao.

-OXIDAO DOS CIDOS GORDOS

Os cidos gordos so uma importante fonte energtica, armazenados na sua maioria em triglicridos do tecido adiposo. A oxidao de cidos gordos origina acetil CoA, substrato para o ciclo de Krebs, e NADH e FADH2 que podem ser utilizados no processo de fosforilao oxidativa para a sntese de ATP. O catabolismo dos cidos gordos efectuado por enzimas presentes na matriz mitocondrial das clulas, num processo designado por -oxidao. A -oxidao iniciada pela ligao da coenzima-A ao terminal carboxlico dos cidos gordos. Este passo inicial acompanhado pela hidrlise do de duas ligaes fosfato de elevada energia do ATP, originando AMP e dois Pi.

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Caderno de Apontamentos A activao dos cidos gordos (de cadeia longa) com a coenzima A ocorre no citoplasma das clulas. O passo seguinte do catabolismo dos cidos gordos consiste assim, na passagem destes derivados dos cidos gordos para a matriz mitocondrial das clulas, de forma a que os cidos gordos activados possam ser oxidados. Os cidos gordos de cadeia curta ou cadeia mdia podem atravessar a membrana mitocondrial por difuso passiva, sendo activados por ligao CoA no interior da mitocndria. No entanto, os cidos gordos de cadeia longa, principais constituintes dos triglicridos da dieta e armazenados, so activados com a CoA no citoplasma e transportados para a mitocndria atravs do shuttle da carnitina.

A CoA uma molcula grande e polar que no consegues atravessar a membrana mitocondrial. Assim, os cidos gordos so transferidos para uma pequena molcula, a carnitina, pela enzima carnitina aciltransferase I. Na membrana mitocondrial existe um transportador que permite a passagem da molcula acil-carnitina para a matriz mitocondrial. Na matriz mitocondrial, a enzima carnitina aciltransferase II permite regenerar a molcula acil-CoA e libertar a carnitina. O shuttle da carnitina inibido pelo malonil-CoA e pelo acetato. Deficincias no metabolismo da carnitina impedem a oxidao de cidos gordos, levando a graves consequncias para o organismo, especialmente em situao de jejum.

Oxidao dos cidos gordos

A -oxidao dos cidos gordos consiste numa srie de ciclos de reaces que consistem em oxidao, hidratao, oxidao e clivagem de uma molcula de acetil CoA a partir da extremidade do cido gordo. Nas duas reaces de oxidao, h transferncia de electres para o FAD e NAD+, formando-se respectivamente FADH2 e NADH. Assim, por cada ciclo
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Caderno de Apontamentos ocorrido, forma-se uma molcula de NADH, uma de FADH2 e uma de acetil-CoA. O NADH e o FADH2 podem entrar na cadeia respiratria ao passo que a acetil CoA entra no ciclo de Krebs. Desta forma, tal como j foi referido, o catabolismo dos cidos gordos pressupe a existncia do metabolismo oxidativo e dos sistemas enzimticos mitocondriais. As clulas cerebrais, embora obedeam a esse requisito, no podem utilizar cidos gordos para a produo de energia, pois estes no conseguem ultrapassar a barreira hemato-enceflica.

FADH2 NADH FADH2 NADH FADH2 NADH FADH2 NADH FADH2 NADH FADH2 NADH

+ 6 FADH2 + 6 NADH

A clivagem da molcula de acetil-CoA a partir da extremidade do acil-CoA (cido gordo activado com a coenzima A), ocorre na presena da CoA. Assim, no fim de cada ciclo de reaces liberta-se acetil-CoA e forma-se novo acil-CoA que possui menos dois tomos de carbono e que pode prosseguir para novo ciclo. Em cada ciclo forma-se ento uma molcula de NADH, uma de FADH2, uma de acetil-CoA e a molcula de acil-CoA encurtada em dois carbonos. No ltimo ciclo, esta molcula de acil-CoA encurtada em dois carbonos a prpria acetil-CoA.

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Caderno de Apontamentos Balano energtico da -oxidao de cidos gordos

Para uma molcula de cido gordo com 16 tomos de carbono, como o cido palmtico, so necessrios sete ciclos para a sua oxidao completa. Por cada ciclo efectuado forma-se, como referido, uma molcula de NADH, uma de FADH2 e uma de acetil-CoA. No fim dos sete ciclos so formadas sete de cada uma destas molculas, mais a molcula de acetil-CoA final, o que origina no total 7 molculas de NADH, 7 de FADH2 e 8 de acetil-CoA O NADH e o FADH2 entram na cadeia respiratria, ao passo que a acetil-CoA entra no ciclo de Krebs.

Cada molcula de NADH origina 2,5 molculas de ATP, ao passo que o FADH2 origina 1,5 molculas de ATP. Por sua vez, a oxidao completa de uma molcula de acetil-CoA origina 10 molculas de ATP (ciclo de Krebs + cadeia respiratria). Assim, no total obtmse 7x2,5 ATPs provenientes do NADH, 7x1,5 ATPs provenientes do FADH2 e 8x10 ATPs provenientes da acetil-CoA produzidos na -oxidao do cido palmtico (16C). No total isso origina 108 ATPs aos quais tm que ser subtrados 2 ATPs gastos na activao do cido gordo, sendo o resultado final de 106 ATPs. Este rendimento energtico bastante superior ao da oxidao de uma molcula de glicose, mesmo quando se d sua oxidao completa. importante referir, neste processo de oxidao de cidos gordos, que a acetilCoA formada no pode ser utilizada para a produo de glicose, pois no pode ser convertida em piruvato (a reaco que converte piruvato em acetil-CoA irreversvel). A acetil-CoA pode ser usada para a produo de energia por incorporao no ciclo de Krebs ou pode ser utilizada na sntese de corpos cetnicos.
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Caderno de Apontamentos Oxidao de cidos gordos insaturados

No organismo humano, cerca de 50% dos cidos gordos so insaturados, ou seja, possuem ligaes duplas entre os carbonos da sua cadeia. A maior parte dos cidos gordos insaturados so degradados pela via da oxidao com uma enzima adicional, que converte a ligao dupla cis numa ligao trans - a via da -oxidao apenas pode processar ligaes duplas trans. A

existncia dessa ligao dupla leva a que na oxidao de cidos gordos insaturados ocorra menos uma reaco de oxidao concomitantemente com a reduo de FAD a FADH2. H desta forma um menor rendimento energtico por comparao com a oxidao de um cido gordo saturado com o mesmo nmero de tomos de carbono.

Oxidao de cidos gordos com nmero mpar de tomos de carbono

Os cidos gordos com nmero mpar de tomos de carbono prosseguem a via normal da oxidao, mas no ciclo final o acil CoA resultante o propionil CoA (3 tomos de carbono) e no a acetil CoA (2 tomos de carbono). O propionil CoA convertido a metil malonil CoA, numa reaco catalisada pela enzima propionil CoA carboxilase e dependente de biotina. O metilmalonil CoA convertido no intermedirio do ciclo de Krebs succinil CoA. O succinil CoA pode ser metabolizado pelo ciclo de Krebs, podendo tambm ser convertido em glicose atravs da gluconeognese, tal como acontece com todos os intermedirios do ciclo de Krebs. Trata-se da nica situao em que pode haver sntese de novo de glicose (embora em quantidade reduzida) atravs da oxidao de cidos gordos.

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Caderno de Apontamentos Sntese de corpos cetnicos cetognese

Os corpos cetnicos (acetona, acetoacetato e -hidroxibutirato) so sintetizados no fgado a partir de acetil-CoA (a qual produzida principalmente atravs da oxidao de cidos gordos) e so substratos energticos para o corao, msculo-esqueltico e rins em situao de jejum. Em caso de jejum prolongado so tambm uma fonte de energia importante para o crebro. No entanto, quando em excesso no organismo, os corpos cetnicos podem conduzir a uma situao de acidose metablica, prejudicial ao organismo. Os corpos cetnicos podem ser oxidados a acetil-CoA, substrato para o ciclo de Krebs, sendo produzidos 10 ATPs por cada molcula de acetil CoA. Os corpos cetnicos so essencialmente produzidos em condies em que ocorre um aumento da oxidao de cidos gordos no fgado e uma activao da gluconeognese (por exemplo, numa situao de jejum ou num indivduo com diabetes tipo I). O aumento da oxidao de cidos gordos conduz a um aumento dos nveis de acetil-CoA, substrato do ciclo de Krebs. No entanto, em situaes fisiolgicas que conduzem activao da gluconeognese, os nveis de oxaloacetato encontram-se diminudos, pois o oxaloacetato encontra-se desviado para a gluconeognese. O oxaloacetato pode combinar-se com a acetil-CoA para a sntese de citrato, que entra assim no ciclo de Kreb, mas nestas condies a acetil CoA est em excesso em relao ao oxaloacetato disponvel. A acetil CoA em excesso ento desviada para a sntese de corpos cetnicos.

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Caderno de Apontamentos Biossntese de cidos Gordos

Os cidos gordos so sintetizados a partir de acetil CoA (proveniente principalmente do piruvato, originado pela gliclise, atravs da enzima piruvato desidrogenase) e so o principal substrato energtico do tecido cardaco. As enzimas responsveis pela biossntese de cidos gordos encontram-se localizadas no citoplasma e so completamente diferentes das enzimas envolvidas na -oxidao, que ocorre na mitocndria. Para a sntese de cidos gordos necessrio NADPH (proveniente da via das pentose fosfato) e ATP.

Transferncia de acetil-CoA para o citoplasma

A acetil CoA no pode atravessar a membrana mitocondrial interna e transportada para o citoplasma atravs do shuttle do citrato. A acetil CoA sofre uma reaco de condensao com o oxaloacetato, originando citrato que transportado para o citoplasma. O citrato reage com a CoA no citoplasma, formando oxaloacetato e acetil CoA.

Sntese de malonil CoA

A enzima acetil CoA carboxilase catalisa a carboxilao da acetil CoA a malonil CoA, numa reaco dependente de biotina e que consome ATP. Este passo o passo chave na regulao da sntese de cidos gordos. A acetil CoA carboxilase activada pelo citrato e insulina e inibida pelo palmitoil CoA e glucagon. O malonil CoA um dador activado de unidades de acetil CoA.
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Caderno de Apontamentos Sntese da cadeia de cido gordo

O complexo enzimtico cido gordo sintetase catalisa vrias reaces que permitem o alongamento da cadeia do cido gordo. Ocorre a

transferncia da acetil CoA (2C) e malonil CoA (3C) para um domnio deste complexo designado por protena

transportadora de acilo (ACP). H ento uma reaco de descarboxilao e condensao formando-se acetoacetil CoA (4C).

O acetoacetil CoA sofre uma reaco de reduo (em que necessrio NADPH), uma de desidratao e novamente uma reaco de reduo (em que intervm de novo o NADPH), originando butiril CoA, o qual se combina com o malonil CoA, entrando num novo ciclo de alongamento.

cidos gordos com mais de 16 tomos de carbono so sintetizados no retculo endoplasmtico. Tambm no retculo endoplasmtico pode ocorrer a insaturao dos cidos gordos por aco da enzima cido gordo oxigenase.

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Caderno de Apontamentos Resumo: o A sntese de cidos gordos de cadeia longa catalisada por 2 sistemas enzimticos presentes no citoplasma das clulas: acetil-CoA carboxilase e sintetase dos cidos gordos.

o Esta via converte acetil-CoA em palmitato e requer NADPH, ATP, Mn2+, biotina, cido pantotnico e HCO3- como cofactores.

o A acetil-CoA carboxilase converte acetil-CoA em malonil-CoA. A sintetase dos cidos gordos catalisa a formao de palmitato a partir de uma molcula de acetil-CoA e 7 de malonil-CoA.

o A acetil-CoA carboxilase regulada positivamente pelo citrato e negativamente por acil-CoA (cido gordo activado com CoA). A insulina activa esta enzima a curto prazo por desfosforilao e a longo prazo por induo da sntese. O glucagon e adrenalina tm efeito contrrio. o O alongamento dos cidos gordos com mais de 16C ocorre no retculo endoplasmtico. microssomal. Regulao Geral do Metabolismo dos cidos Gordos A insaturao catalisada por um sistema enzimtico

Adipcito INSULINA
quilomicrons TG

Triglicridos

INSULINA

Lipoprotena lipase c. Gordos c. gordos

Lipase sensvel aco hormonal

+ GLUCAGON

VLDL TG

c. gordos + albumina

Triglicridos Acil-CoA Malonil-CoA

Hepatcito

c. gordos livre

Acil-CoA B-oxidao Acetil-CoA Corpos cetnicos Degradao de cidos gordos Ciclo Krebs (ATP)

+ -

INSULINA GLUCAGON

Acetil-CoA Sntese de cidos gordos

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Caderno de Apontamentos Metabolismo do cido araquidnico

O cido araquidnico, cido gordo com 20 tomos de carbono, um intermedirio chave no processo de inflamao, bem como em processos de sinalizao. precursor de eucosanides como prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos. obtido por duas vias distintas: atravs da hidrlise de fosfolpidos pela fosfolipase A2 (agentes inflamatrios esterides como a hidrocortisona inibem a fosfolipase A2) ou pela hidrlise de diglicridos pela aco da diacilglicerol lipase. Os leucotrienos so mediadores inflamatrios e vasoactivos e que so sintetizados a partir do cido araquidnico por aco da lipoxigenase. Uma outra enzima, a cicloxigenase, converte o cido araquidnico em prostaglandinas e tromboxanos. A cicloxigenase converte o cido araquidnico na prostaglandina PGH2, que depois pode ser convertida noutras prostaglandinas,

prostaciclina e tromboxanos. A aspirina tem efeito anti-inflamatrios e anti-trombticos porque inibe a aco da enzima cicloxigenase.

Metabolismo dos fosfolpidos Sntese de glicerofosfolpidos

O precursor metablico de fosfoglicridos o CDP-diacilglicerol ou o diacilglicerol. O CDPdiacilglicerol formado por reaco do cido fosfatdico (diacilglicerol-3-fosfato) com citosina trifosfato (CTP). O CDP diacilglicerol reage com o glicerol-fosfato, originando fosfotidilglicerol, com o inositol originando fosfotidilinositol, com a serina originando fosfotidilserina, ou com outra molcula de CDP diacilglicerol, originando cardiolipina. A fosfotidilserina por carboxilao origina fosfotidiletenolamina, e esta por metilao

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Caderno de Apontamentos origina fosfotidilcolina. Outra via para a sntese de fosfoglicridos envolve a utilizao de diacilglicerol como precursor. O diacilglicerol reage com CDP-colina ou com CDPetenolamina, formando respectivamente fosfotidilcolina ou fosfotidiletanolamina. Sntese de esfingofosfolpidos

A esfingosina, lcool constituinte dos esfingolpidos, formada por condensao entre serina e palmitoil-CoA, numa reaco que requer NADPH. A ceramida sintetizada a partir da esterificao entre esfingosina e um cido gordo. A esfingomielina formada por reaco entre a ceramida e CDP-colina. A adio de uma ose ceramida origina cerebrsidos. A adio de mais oses origina os ganglisidos.

Metabolismo do Colesterol

O colesterol um dos principais constituintes das membranas celulares, regulando a fluidez da membrana. tambm importante para a sntese de esteris importantes no organismo, como os cidos biliares, vitamina D e hormonas esterides. No entanto, o colesterol em excesso no organismo pode originar placas artereosclerticas e provocar doenas cardiovasculares, a principal causa de morte nos pases ocidentalizados. Grande parte do colesterol no organismo obtido atravs da dieta, mas o colesterol pode tambm ser sintetizado no organismo (no intestino, na pele, em glndulas produtoras de hormonas esterides e principalmente no fgado) a partir de acetil-CoA. A via biossinttica pode ser dividida em 4 fases: 1. Na primeira fase, ou fase de condensao, forma-se mevalonato, um composto com 6 tomo de carbono a partir de 3 molculas de acetil-CoA. nesta fase que ocorre a reaco mais importante para a regulao da sntese de colesterol. A converso de hidroximetilglutaril-CoA (HMG-CoA) a mevalonato pela enzima HMG-CoA redutase, numa reaco que utiliza NADPH. O HMG-CoA tambm precursor da sntese de corpos cetnicos por aco da enzima HMG-CoA liase, mas esta reaco ocorre na mitocndria, ao passo que a sntese de mevalonato ocorre no retculo endoplasmtico. 2. Na segunda fase, o mevalonato (C6) descarboxilado a um isopreno isopentenildifosfato (C5). Nesta reaco so consumidos 3 ATPs.

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Caderno de Apontamentos 3. Na terceira fase, ocorre condensao entre as molculas de isopreno, originando o esqualeno (C30). 4. Por ltimo, o colesterol sintetizado a partir do esqualeno por uma srie de reaces, em que ocorre ciclizao, oxidao, remoo e migrao de grupos metilo. A converso do esqualeno em colesterol dependente do citocromo P450.

A enzima HMG-CoA redutase uma enzima chave na regulao da sntese de colesterol. sujeita a vrias formas de regulao:

I.

reprimida pelo colesterol, o produto final da via. tambm reprimida pelo colesterol da dieta. O colesterol altera a fluidez da membrana, inibindo a actividade da enzima. O colesterol alm de inibir a actividade da HMG-CoA redutase inibe tambm a prpria sntese da enzima.

II.

A enzima sujeita a fosforilao por resposta aco de diferentes hormonas. A forma fosforilada a forma inactiva. A insulina promove a desfosforilao da enzima activando-a, ao passo que o glucagon a inibe ao promover a sua fosforilao

III.

A insulina activa a expresso do gene da HMG-CoA redutase. O glucagon inibe essa expresso.

IV.

A HMG-CoA redutase responde a um ritmo circadiano.

A droga levostatina utilizada no tratamento da hipercolesterolmia, por inibir a actividade da HMG-CoA redutase, e portanto, bloquear a sntese endgena de colesterol. A maior parte do colesterol esterificado com cidos gordos de cadeia longa.

Sntese de derivados do colesterol cidos biliares, vitamina D e hormonas esterides cidos biliares

Os cidos biliares primrios (cido clico e quenodesoxiclico) so sintetizados no fgado a partir do colesterol. Para a sntese dos cidos biliares necessria a aco do citocromo P450. Circulao enteroheptica

Os cidos biliares primrios so transportados para o intestino, onde so convertidos em cidos biliares secundrios (cido desoxiclico e litoclico) por bactrias intestinais. No

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Caderno de Apontamentos intestino, os cidos biliares so desconjugados, reabsorvidos e retornam pela veia porta para o fgado ligados albumina. O fgado capta os cidos biliares, reconjuga-os com taurina ou glicina e secreta-os para a blis. A secreo da blis para o intestino constitui a principal forma para a excreo de colesterol, dado que o ncleo esteride no pode ser oxidado a CO2 e H2O. O excesso de colesterol na blis pode levar ao aparecimento de pedras na vescula biliar. Vitamina D

O 7-dehidrocolesterol, intermedirio da sntese de colesterol, acumula-se na pele, onde convertido a colecalciferol (vitamina D3) pela luz ultravioleta. O colecalciferol transformado na forma activa da vitamina D por duas hidroxilaes dependentes do citocromo P450 que ocorrem no fgado e no rim. A vitamina D regula o metabolismo do clcio e do fosfato no organismo e a sua deficincia origina raquitismo nas crianas e osteomalcia nos adultos. Hormonas esterides

O colesterol, nas clulas adrenocorticais, convertido em progesterona, um intermedirio na sntese das hormonas adrenais (cortisol, corticosterona, aldosterona) e sexuais (testosterona, progesterona, estradiol). A sntese de progesterona a partir de colesterol dependente do citocromo P450.

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Caderno de Apontamentos Metabolismo de Lipoprotenas

As lipoprotenas so compostas de um ncleo hidrofbico lipdico revestido pela parte proteica (apoprotenas) e por lpidos polares (fosfolpidos, colesterol). So classificadas de acordo com a sua densidade e incluem por ordem crescente de densidades: quilomicrons, VLDL, IDL, LDL, HDL.

Os quilomicrons transportam os lpidos provenientes da alimentao e so sintetizados no organismo. So constitudos na sua maioria por triglicridos. Os quilomicrons transportam os triglicridos do intestino principalmente para o tecido adiposo (mas tambm para outros locais como por exemplo para as glndulas mamrias). Os triglicridos dos quilomicrons so hidrolisados pela lipoprotena lipase, de forma aos cidos gordos poderem ser captados pelo tecido adiposo. Quando os quilomicrons perdem os triglicridos, por aco da lipoprotena lipase, convertem-se em quilomicrons remanescentes, enriquecidos em colesterol e steres de colesterol exgenos, e so captados pelo fgado.

As VLDL so sintetizadas no fgado e os principais lpidos constituintes destas lipoprotenas so os triglicridos sintetizados no fgado. As VLDL transportam os triglicridos do fgado principalmente para o tecido adiposo. Tal como acontece com os quilomicrons, os triglicridos das VLDL so hidrolisados em cidos gordos (captados pelo tecido adiposo, glndulas mamrias, msculo...) e glicerol pela enzima lipoprotena lipase. H medida que vo perdendo os triglicridos, as lipoprotenas remanescentes aumentam de densidade convertendo-se sucessivamente em IDL e LDL (estas ltimas especialmente ricas em colesterol sintetizado no fgado). A deficincia na lipoprotna lipase conduz a um aumento dos quilomicrons e VLDL no sangue, conduzindo a uma hipertrigliceridmia. As LDL so o principal transportador de colesterol no organismo e transportam colesterol do fgado para os tecidos perifricos. O aumento dos nveis de LDL est associado ao aparecimento de placas artereosclerticas nas artrias.

As HDL so ricas em steres de colesterol endgenos e transportam o colesterol proveniente de outras lipoprotenas e das membranas para o fgado. tambm designado por colesterol bom. O colesterol proveniente da morte celular e remodelao das membranas incorporado nas HDL. O colesterol esterificado e as HDL trocam apoprotenas e steres de colesterol com outras lipoprotenas. No fgado libertam o colesterol.

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Caderno de Apontamentos Os cidos gordos so transportados associados albumina. Os corpos cetnicos so hidrossolveis e so transportados na forma livre.

Receptores das LDL papel chave no metabolismo das LDL

As LDL transportam colesterol do fgado para os tecidos perifricos. As clulas possuem receptores

especficos para as LDL (ligam-se apoprotena B100). O complexo LDLreceptor endocitose. endocitose internalizado As vesculas por de com

associam-se

lisossomas, ocorrendo a degradao dos componentes das LDL pelas

enzimas lisossomais. O colesterol livre pode ser re-esterificado ou pode ser incorporado nas membranas celulares. Os receptores das LDL so sujeitos a uma regulao retroactiva. Quando ocorre um aumento dos nveis de colesterol dentro da clula, a expresso dos receptores das LDL encontra-se inibida, inibindo dessa forma a captao de LDL e consequentemente a incorporao de mais colesterol nas clulas.

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Caderno de Apontamentos Na hipercolesterolmia familiar, h uma deficincia gentica nos receptores das LDL. Como consequncia h uma inibio na captao das LDL plasmticas por parte das clulas, o que se vai traduzir num aumento dos nveis de LDL, e consequentemente do colesterol no sangue. A hipercolesterolmia pode tambm ser provocada por erros alimentares. O aumento da captao de colesterol por parte das clulas devido ao aumento dos nveis de LDL, provocado pelos erros alimentares, leva inibio da sntese de receptores das LDL (que so sujeitos a retroinibio). Assim, a captao das LDL encontra-se inibida e ocorre um aumento do colesterol no sangue. O aumento de colesterol no sangue provoca o aparecimento de xantomas e est associado ao aparecimento de doenas cardiovasculares. A mevinolina utilizada no tratamento da hipercolesterolmia familiar. A mevinolina inibe a enzima HMG-CoA redutase, enzima chave na sntese de colesterol. Desta forma, ocorre uma diminuio dos nveis de colesterol na clula. A diminuio dos nveis de colesterol celulares vai estimular o gene normal (em doentes heterozigticos) a produzir mais receptores das LDL, de modo a contrariar essa descida de colesterol. H por conseguinte uma diminuio das LDL e do colesterol no sangue. O evento chave no aparecimento de placas artereosclerticas o aparecimento de danos no endotlio provocado pelas LDL oxidadas. O endotlio fica mais permevel a

lipoprotenas. As LDL atravessam a parede vascular e depositam-se no interior onde podem ser oxidadas. As LDL oxidadas estimulam a expresso de molculas de adeso, a atraco de moncitos, ocorrendo formao de macrfagos. As LDL so ingeridas pelos macrfagos e as clulas ficam com lpidos acumulados. H um enfraquecimento de uma capa fibrosa com macrfagos, expondo colagnio e lpidos corrente sangunea. Ocorre adeso e agregao de plaquetas e a formao da placa arterosclertica.A formao de

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Caderno de Apontamentos placas artereosclerticas pode levar ao bloqueamento de artrias, podendo provocar ataques cardacos ou derrames cerebrais.

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Caderno de Apontamentos Metabolismo Proteico

Em termos quantitativos, as protenas so o grupo mais importante de biomolculas. Num indivduo pesando cerca de 70 kg, as protenas compreendem cerca de 10 kg, a sua maioria compreendendo as protenas musculares. Algumas hormonas, nomeadamente o cortisol e a testosterona regulam a sntese e degradao proteica. O metabolismo do nitrognio de um adulto saudvel geralmente equilibrado, ou seja, a quantidade de nitrognio incorporado e excretado sensivelmente igual. A anlise de alteraes desse equilbrio designa-se por balano de azoto. Assim, numa situao de balano de azoto positivo, a quantidade de azoto ingerida superior quantidade excretada. Alguns exemplos em que ocorre balano positivo de azoto incluem crescimento, gravidez, lactao, convalescncia (ocorre reparao de tecidos), administrao de esterides anabolizantes. Pelo contrrio, numa situao de balano de azoto negativo, a quantidade de azoto ingerida inferior quantidade excretada. Alguns exemplos em que ocorre balano negativo de azoto incluem jejum, dieta pobre em protenas, falta de aminocidos essenciais, aumento do catabolismo proteico aps trauma ou infeces.

As protenas ingeridas na dieta tm que ser hidrolisadas no percurso digestivo, de forma aos aminocidos constituintes poderem ser absorvidos a nvel intestinal. As protenas so degradadas em aminocidos por uma srie de proteases e peptidases. Os aminocidos livres passam para a corrente sangunea por transportadores especficos. Alguns pptidos de tamanho pequeno podem tambm ser transportados para a corrente sangunea.
Tripsina Quimiotripsina Carboxipeptidase Aminopeptidase

O metabolismo de aminocidos compreende uma vasta gama de reaces de sntese e degradao pelas quais os aminocidos so condensado em polipptidos ou outros compostos, e degradados para obter energia metablica ou para sintetizar glicose. A transformao qumica dos aminocidos distinta dos hidratos de carbono ou dos lpidos por envolver o elemento nitrognio. No existe nenhuma reserva de aminocidos anlogos ao glicognio (hidratos de carbono) ou triglicridos (lpidos). Os mamferos sintetizam
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Caderno de Apontamentos alguns aminocidos e obtm os restantes da dieta. Os aminocidos em excesso no so armazenados nem excretados mas sim desaminados e convertidos a metabolitos comuns que so precursores de glicose, cidos gordos e corpos cetnicos, ou seja, os aminocidos so combustveis metablicos.

Os componentes celulares esto em constante renovao. A semi-vida das protenas varia desde poucos minutos a vrias semanas. As clulas esto constantemente a sintetizar e a degradar protenas. Desta forma, armazenam nutrientes sob a forma de protenas que podem ser degradas em caso de necessidades metablicas, eliminam protenas anormais e controlam enzimas e protenas reguladoras. As principais enzimas reguladoras tm tempo de semi-vida curtos, ao passo que as protenas com actividades constantes tm tempo de semi-vida longos. A taxa de degradao de protenas varia com a alterao das condies e necessidades metablicas, assim como com o estado hormonal e nutricional. Degradao lisossomal

Os lisossomas possuem cerca de 50 enzimas hidrolticas, incluindo proteasaes. As protenas degradadas pela via lisossomal so internalizadas por endocitose. Em clulas mal alimentadas, existe seleco das protenas degradadas para evitar uma depleo de enzimas essenciais e de protenas reguladoras. Deste modo, os lisossomas, em situao de privao metablica, degradam apenas protenas especficas (marcadas com um pptido especfico KFERQ ou muito relacionado). Tais protenas so selectivamente provenientes de rgos que atrofiam em resposta prolongado ao (ex. jejum msculo),

mas no de rgos que no o fazem (ex. crebro). Muitos processos patolgicos ou

fisiolgicos esto associados a uma actividade lisossomal intensa (exs. i - degradao muscular provocada por

danificao de tecidos ou trauma; ii regresso do tero aps o nascimento de uma criana h reduo da

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Caderno de Apontamentos sua massa de 2 Kg para 50 g em 9 dias; iii a artrite reumatide, uma doena inflamatria crnica, resulta da libertao de enzimas lisossomais para o meio extracelular, o que origina a danificao de tecidos circundantes). A via de degradao lisossomal de protenas independente da presena de ATP. Degradao via ubiquitina

A degradao proteica em clulas eucariticas, tambm ocorre num processo dependente de ATP e independente dos lisossomas. Tal processo envolve a ubiquitina, uma protena monomrica de 76 resduos, caracterizada pela sua ubiquidade e abundncia. uma das protenas mais conservadas, sugerindo que nica para desempenhar a sua funo. As protenas so marcadas para degradao por ligao covalente com a ubiquitina. Usualmente, vrias ubiquitinas encontram-se ligadas a essas protena. As protena membranares so degradadas no vacolo, ao passo que as protenas citoslicas so degradadas num complexo multiproteico designado proteossoma 26S. A maioria das protenas degradadas pela via da ubiquitina so protenas anormais e com tempo de semivida curto.

Classificao de aminocidos

Os aminocidos podem ser classificados em essenciais ou no essenciais. Os aminocidos essenciais no podem ser sintetizados pelo organismo humano e tm que ser fornecidos pela dieta. Os aminocidos no essenciais podem ser sintetizados pelo nosso organismo atravs de reaces simples. Existem alguns aminocidos que se tornam essenciais em determinadas condies de crescimento ou na presena de determinadas deficincias metablicas.
Aminocidos
Essenciais arginina1 fenilalanina histidina isoleucina leucina lisina metionina treonina triptofano valina
1

No essenciais alanina aspartato asparagina cistena glutamato glutamina glicina prolina serina tirosina

apenas durante perodos de crescimento rpido ou doena

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Caderno de Apontamentos Biossntese de aminocidos no essenciais

Na biossntese de aminocidos no essenciais existem precursores que so comuns na biossntese de vrios aminocidos. Os precursores vm de intermedirios da gliclise, vias da pentose fosfato, ciclo de Krebs.

Alguns aminocidos so sintetizados por aminao (incorporao do grupo amina). Nestas reaces intervem o NH4+. Os aminocidos glutamato, glutamina, asparagina so sintetizados desta forma.

Outros aminocidos so sintetizados por transaminao. Nesta reaco ocorre

transferncia de um grupo amina de um aminocido para um cetocido. O

aminocido assim transformado em cetocido e o cetocido em aminocido. Normalmente o cetocido receptor o cetoglutarato, mas tambm pode ser por exemplo o piruvato no msculo.

Outro aminocido no essencial a tirosina. Pode ser formado a partir de fenilalanina por hidroxilao. A tirosina pode-se tornar essencial na doena

metablica fenilcetonria.

Em algumas reaces de sntese de aminocidos necessrio NADPH, tal como acontece com outras reaces de biossntese, nomeadamente biossntese de lpidos.

Na sntese de alguns aminocidos, nomeadamente serina e metionina, importante a presena de cido flico. O tetrahidrofolato uma coenzima sintetizada a partir de cido flico que transfere resduos de unidades de um carbono (C1) em diferentes estados de oxidao.

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Caderno de Apontamentos Existe um equilbrio dinmico entre o pool de aminocidos existente no organismo e as protenas dos tecidos. As protenas da dieta so uma fonte de aminocidos essenciais e no essenciais, embora estes ltimos tambm possam ser sintetizados no organismo. Parte desses aminocidos utilizado na sntese proteica, mas uma parte significativa tambm utilizada para o metabolismo energtico. O esqueleto carbnico derivado do catabolismo de aminocidos pode ser convertido em lpidos ou hidratos de carbono. O excesso resultante de nitrognio deve ser metabolizado e excretado sob a forma de ureia. Para alm do papel no metabolismo oxidativo, a protena da dieta fornece aminocidos que so utilizados na sntese de compostos aminados como purinas, pirimidinas, hormonas, etc, bem como na sntese proteica.
Protenas da dieta Sntese de: ~ 30 g / dia purinas pirimidinas neurotransmissores glucose

Pool de amino cidos

~ 300 g / dia

Protenas de tecidos

Ureia (urina)

O metabolismo do azoto num adulto saudvel normalmente equilibrado, ou seja, a quantidade de azoto ingerida semelhante quantidade de azoto excretada. Quando a quantidade de azoto ingerida superior quantidade de azoto excretada, o balano positivo (ex. crescimento, lactao, gravidez, convalescncia), enquanto que no caso contrrio (quantidade de azoto excretado superior quantidade de azoto ingerida), o balano negativo (ex. dfice de protena na dieta, falta de aminocidos essenciais, situaes ps-trauma aumenta o catabolismo proteico).

Antes de se dar o metabolismo do esqueleto carbnico dos aminocidos, o grupo amina deve ser removido. O nitrognio do grupo amina, ao contrrio do carbono, no pode ser utilizado na produo de energia. Assim, o grupo amina em excesso, que no utilizado em reaces de biossntese (de aminocidos ou outras aminas biolgicas), excretado sob a forma de ureia. O principal mecanismo de remoo do grupo amina a partir de aminocidos a reaco de transaminao. As reaces de transaminao so catalisadas por um grupo especfico de enzimas designadas por transaminases ou aminotransferases, e consistem na transferncia de um grupo amina de um aminocido1 para um cetocido2, formando os correspondentes cetocido1 e aminocido2. As transaminases esto envolvidas

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Caderno de Apontamentos quer no metabolismo catablico, quer no metabolismo anablico dos aminocidos. As transaminases necessitam da coenzima piridoxal-fosfato, um derivado da vitamina B6 (piridoxina). A passagem do grupo amino de um aminocido para um cetcido complexa. D-se em primeiro lugar a transferncia do gupo amina do aminocido para a coenzima piridoxal fosfato ligado enzima. Forma-se o correspondente cetocido e a coenzima ligada ao grupo amina transfere ento esse grupo para o cetocido aceitador (normalmente -cetoglutarato) formando-se o correspondente aminocido (glutamato).

As principais transaminases a nvel quantitativo so a alanina transaminase e a aspartato transaminase. As reaces catalisadas por estas enzimas so reversveis e so as seguintes:
alanina transaminase alanina + -cetoglutarato aspartato transaminase aspartato + -cetoglutarato oxaloacetato + glutamato piruvato + glutamato

As enzimas alanina transaminase (ou alanina amino transferase) e aspartato transaminase (ou aspartato aminotransferase) existem em elevada quantidade no fgado e no msculo sendo a determinao da sua actividade muitas vezes utilizada para diagnsticos clnicos.

O grupo amina captado pelo -cetoglutarato, para formar glutamato, pode ser removido por uma reaco de desaminao oxidativa. Quando o grupo amina de um aminocido libertado sob a forma de amnia, esse processo designado por desaminao. Isso pode acontecer, por exemplo na remoo do grupo amina da glutamina por aco da glutaminase. De particular importncia, o mecanismo de desaminao oxidativa, que permite a remoo do grupo amina do glutamato. Esta reaco catalisada pela enzima glutamato desidrogenase formando-se NADPH no processo, para alm de amnia e do cetoglutarato.
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Caderno de Apontamentos

A desaminao oxidativa do glutamato ocorre na matriz mitocondrial. A enzima glutamato desidrogenase inibida pelo NADH, GTP e ATP e activada pelo ADP e GDP (ou seja, activada por baixos nveis energticos na clula a reaco leva formao de cetoglutarato, intermedirio do ciclo de Krebs).

A amnia produzida na reaco convertida em ureia atravs do ciclo da ureia. Assim, o modo principal como se d o metabolismo do grupo amina dos aminocidos pela aco sequencial das transaminases, glutamato

desidrogenase e ciclo da ureia.

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Caderno de Apontamentos Ciclo da ureia

No processo de degradao de aminocidos, formam-se grandes quantidades de amnia. Este io pode ser proveniente da remoo do grupo amina pela glutaminase, da aco de enzimas como aminocido oxidases ou serina e treonina hidratases, que levam remoo do grupo amina e, principalmente, pela aco das transaminases acoplada aco da glutamato desidrogenase. O principal local onde ocorre degradao de aminocidos o fgado. Neste processo forma-se ento o io amnia. A amnia extremamente txica para as clulas. Uma das razes para essa toxicidade o facto deste io levar alterao do pH sanguneo, interferindo deste modo com o equilbrio cido-base. Alm disso, a amnia atravessa a barreira hemato-enceflica, havendo desta forma um aumento deste io no crebro. O aumento de amnia pode levar a uma diminuio de -cetoglutarato (reage com o io amnia originando glutamato) e glutamato (reage com o io amnia originando glutamina). Assim, as reservas de -cetoglutarato escasseiam, comprometendo o funcionamento do ciclo de Krebs e a produo de ATP. Por outro lado, o glutamato ele prprio neurotransmissor e precursor de neurotransmissores (GABA), pelo que a sua diminuio pode tambm contribuir para os problemas neurolgicos que surgem em situao de hiperamonmia. A amnia extremamente txica podendo provocar tremores, alteraes na fala e na viso e danos neurolgicos irreversveis. Assim, a amnia deve ser rapidamente inactivada e excretada. Em mamferos isso acontece pela sua converso em ureia. A ureia um composto diaminado no txico, pequeno e hidrossolvel, podendo ser facilmente transportado no sangue e excretado na urina. A ureia sintetizada exclusivamente no fgado, atravs de uma srie de reaces que compreendem o ciclo da ureia. A ureia formada tem dois tomos de azoto um derivado do io amnia e outro derivado do aspartato.

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Caderno de Apontamentos A estequeometria global do ciclo da ureia :

CO2 + NH4+ + 3 ATP + aspartato + 2 H2O

ureia + 2 ADP + 2 Pi + AMP + PPi + fumarato

Reaces do ciclo da ureia

a) Formao de carbamoil-fosfato a partir de amnia e dixido de carbono, pela enzima carbamoil-fosfato sintetase.

b) Formao de citrulina pela enzima ornitina transcarbamoilase.

c) Formao de argininosuccinato pela enzima arginina succinato sintetase. Requer uma molcula de ATP. O aspartato fornece o segundo grupo amina encontrado na molcula de ureia. O aspartato pode ser formado por uma reaco de transaminao a partir do oxaloacetato - intermedirio do ciclo de Krebs. d) Formao de arginina e fumarato pela argininosuccinato liase. O fumarato um intermedirio do ciclo de Krebs, fazendo assim a ligao entre os dois ciclos. e) Formao de ureia e regenerao da ornitina pela enzima arginase. A ureia uma molcula no txica e hidrossolvel que passa para o sangue e excretada na urina.

As primeiras duas reaces do ciclo da ureia ocorrem na mitocndria das clulas hepticas. As restantes ocorrem no citoplasma. A sntese de carbamoil fosfato a etapa reguladora do ciclo. O consumo de 2 molculas de ATP torna-a irreversvel. activada pela arginina e pelo N-acetilglutamato. Quando h um aumento da degradao de aminocidos (ex: situao de excesso de protenas ingeridas em que o excesso de nitrognio tem que ser removido e excretado; situao de jejum em que
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Caderno de Apontamentos aumenta a degradao de protenas musculares) aumenta a quantidade de amnia, o que conduz a um aumento de glutamato e N-acetilglutamato, activando desta forma o ciclo da ureia. As restantes enzimas so controladas pela concentrao de substrato. Ciclo da ureia:

A ureia excretada pelos rins. Os rins desempenham um papel importante no metabolismo de aminocidos e na gluconeognese. S os rins e o fgado so capazes de sintetizar de novo glicose (gluconeognese). Nos rins, o principal substrato gluconeognico a glutamina. A glutamina transportada para o rim e a por aco da glutaminase origina glutamato e amnia. O glutamato pode ser utilizado para gluconeognese. A glutamina sintetase, em conjugao com a glutaminase responsvel pelo transporte de amnia dos tecidos para o fgado e para o rim. No rim excretada sob a forma de amnia. No fgado convertida em ureia que depois transportada para o rim e a excretada. Deficincias enzimticas do ciclo da ureia conduzem a uma situao de hiperamonmia que, como foi referido, pode levar a encefolapatias e a outros problemas cerebrais muito graves. Crianas que apresentem uma deficincia completa de enzimas do ciclo da ureia, normalmente no sobrevivem ao perodo neonatal. Quando essa deficincia parcial, o tratamento pode atenuar alguns dos sintomas observados. O tratamento feito base de dietas pobres em protenas (mas a dieta deve incluir os aminocidos essenciais), administrao de benzoato de sdio e fenilacetato de sdio para reduzir os nveis de amnia e pode tambm ser necessrio proceder a hemodilise para evitar os danos cerebrais provocados por hiperamonmia.

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Caderno de Apontamentos O ciclo da ureia est relacionado com o ciclo de Krebs: o aspartato que entra no ciclo da ureia pode ser formado a partir de oxaloacetato do ciclo de Krebs, por transminao; o fumarato formado no ciclo da ureia intermedirio do ciclo de Krebs Degradao dos esqueletos carbonados dos aminocidos

A degradao de alguns aminocidos (glucognicos) converte-os a intermedirios do ciclo de Krebs ou a seus precursores, de modo a poderem ser oxidados ou usados na gluconeognese. A degradao de outros aminocidos pode convert-los a acetil-CoA ou acetoacetato (aminocidos cetognicos). Os aminocidos so degradados a um dos seguintes intermedirios metablicos: piruvato, -cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato, oxaloacetato, acetil-CoA, acetoacetato. Os aminocidos podem ento ser divididos em dois grupos nas suas vias catablicas:

I.

Glucognicos: o esqueleto carbnico dos aminocidos so degradados a piruvato, cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato ou oxaloacetato, logo so precursores da glicose.

II.

Cetognicos: o esqueleto carbnico dos aminocidos so degradados a acetil-CoA ou acetoacetato, logo podem ser convertidos a cidos gordos ou corpos cetnicos.

H ainda aminocidos que so simultaneamente glucognicos e cetognicos.

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Caderno de Apontamentos Ciclo da glicose-alanina

Existe um grupo de aminotransferases musculares que utilizam o piruvato como o seu cetocido aceitador. O aminocido que se forma nesse processo a alanina que libertada para o fgado. A alanina pode tambm ser proveniente da degradao de protena muscular. No fgado a alanina cede o seu grupo amina ao -cetoglutarato por uma reaco de transaminao originando de novo piruvato, que utilizado na gluconeognese. A este ciclo d-se o nome de ciclo glicose-alanina. O grupo amina que libertado no fgado aps desaminao oxidativa do glutamato utilizado na sntese de ureia. Numa situao de jejum prolongado, a glicose formada no fgado por esta via usada por tecidos perifricos, quebrando o ciclo. O NH3 e o piruvato formados nestas condies provm da degradao de protena muscular.

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Caderno de Apontamentos Os aminocidos como precursores biossintticos Alguns aminocidos para alm de constituirem as unidades de construo das protenas, so igualmente precursores de vrias biomolculas importantes, incluindo nucletidos, coenzimas, o grupo heme, hormonas, neurotransmissores e glutationa.
glutamato
CO2

-aminobutirato (GABA) serotonina

CO2 LSD compete com serotonina

triptofano tirosina histidina glutamato + cistena + glicina glicina + arginina serina

hormonas da tiride (T3/T4) histamina

CO2 Vasodilatador libertado na resposta alrgica

glutationa
Protege os eritrcitos de danos oxidativos

creatina

fosfocreatina

acetilcolina

A glutationa (GSH) um tripptido composto por glutamato, cistena e glicina, que tem numerosas funes importantes nas clulas. um agente redutor, conjuga-se com drogas tornando-as solveis, est envolvida no transporte de aminocidos atravs das membranas celulares, serve de co-factor em algumas reaces enzimticas e participa no rearranjo de ligaes dissulfureto em protenas.A tirosina precursora de vrias aminas biognicas como a melanina, os neurotransmissores DOPA e dopamina e as catecolaminas epinefrina (adrenalina) e norepinefrina (noradrenalina).
tirosina tirosina hidroxilase (BH4) DOPA dopamina dopamina hidroxilase (ascorbato) O2 H2O melanina

tirosinase O2 H2O

norepinefrina

epinefrina
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Caderno de Apontamentos Doenas genticas associadas ao metabolismo de aminocidos Fenilcetonria provocada por uma deficincia na enzima fenilalanina hidroxilase (ou no seu cofactor), que converte fenilalanina em tirosina. Essa deficincia provoca uma acumulao de fenilalanina e seus derivados fenilcetocidos (fenilpiruvato, fenilactato) que em parte so excretados na urina da o nome da doena. O aumento de fenilalanina pode provocar atrasos mentais, mas aps os 10 anos esse aumento no parece ser to grave. Alm da acumulao de fenilcetocidos, a fenilcetonria caracteriza-se tambm pela deficincia em tirosina, que passa a ser neste caso um aminocido essencial. A tirosina precursora de neurotransmissores e de catecolaminas (DOPA, dopamina, adrenalina, noradrenalina), pelo que a sua deficincia est tambm associada aos defeitos neurolgicos observados. A tirosina tambm precursora de melanina, pigmento de colorao da pele, pelo que a sua deficincia leva a que os doentes apresentem cor de pele e cabelo clara. A fenilcetonria uma das doenas genticas que pode ser diagnosticada no teste do pezinho. O seu diagnstico precoce permite que seja administrado um tratamento que leva ao retardar dos sintomas caractersticos desta doena. Esse tratamento passa pela dieta que deve ser pobre em fenilalanina e suplementada com tirosina, que passa a tornar-se no caso desta doena num aminocido essencial. Alcaptonria A alcaptonria resulta na excreo de grandes quantidades de homogentisato, devido falta de homogentisato oxidase, enzima envolvida na degradao de tirosina. Esta doena no apresenta grande gravidade, podendo apenas levar a uma situao de artrite em idade mais avanada. A urina destes doentes negra devido oxidao do homogentisato. Albinismo O albinismo provocado por uma deficincia em tirosinase, enzima que converte tirosina em melanina. A sua deficincia provoca falta de pigmentao da pele, o que provoca susceptibilidade a queimaduras solares e cancros de pele.

Doena de Parkinson A doena de Parkinson provocada por deficincia na enzima tirosina hidroxilase que converte tirosina em DOPA. A DOPA depois convertida a dopamina, pelo que a falta desta enzima provoca uma deficincia em dopamina, provocando os sintomas caractersticos da doena de Parkinson. O tratamento feito com L-DOPA, pois a dopamina no atravessa a barreira hematoenceflica.

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Caderno de Apontamentos Metabolismo dos cidos Nucleicos

Os nucletidos participam em vrias funes essenciais no organismo: so constituintes do DNA e RNA, so portadores de energia sob a forma de nucletidos trifosfatos (ex. ATP), so intermedirios metablicos, so constituintes de coenzimas (FAD, NAD, NADP, CoA), participam na regulao do metabolismo, etc. Um nucletido composto por trs componentes: uma base azotada, uma pentose e fosfato. Quando a base azotada se liga pentose, forma-se um nuclesido. Um nucletido um ster fosfato de um nuclesido. As bases azotadas contidas nos nucletidos so bases pricas ou pirimdicas. As principais purinas no DNA e RNA so a guanina e adenina. Em relao s pirimidinas, no DNA encontramos a timina e a citosina, enquanto no RNA, a timina substituda por uracilo. Os nucletidos podem ser sintetizados de novo ou podem ser sintetizados aps reciclagem das bases azotadas. A via de recuperao importante, j que a sntese de novo de nucletidos uma via energeticamente dispendiosa. A biossntese das bases azotadas um processo complexo, mas a maioria das clulas possui as enzimas necessrias neste processo. No entanto, como h uma via alternativa de recuperao, a existncia de defeitos genticos nesta via enzimtica no pe normalmente em risco a vida humana.

Biossntese de nucletidos de purinas

biossntese

de

nucletidos

de

purinas

inicia-se

pela

sntese

de

PRPP

(5-

fosforibosilpirofosfato), que fornece a poro ribose-fosfato. A sntese de PRPP envolve a transferncia de um grupo pirofosfato (PPi) para o carbono 1 da ribose-5-fosfato (proveniente da via das pentose fosfato), numa reaco catalisada pela enzima PRPP sintetase. A sntese do anel de purina inicia-se ligao pela formao em de uma a

N-glicosdica,

que

glutamina o aminocido dador do nitrognio, formando-se desta forma o composto 5-fosforibosilamina. Esta

reaco catalisada pela enzima PRPP amidotransferase e constitui o principal passo na sntese de

nucletidos de purina.

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Caderno de Apontamentos Os restantes elementos do anel heterocclico do IMP (nucletido precursor do AMP e do GMP), so provenientes da glutamina, do formil-tetrahidrofolato, do aspartato, da glicona e do CO2.

* *

No passo final, a enzima IMP sintetase catalisa o fecho do segundo anel de purina, de modo a formar o IMP.

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Caderno de Apontamentos O IMP um nucletido que tem como base azotada a hipoxantina e precursor dos nucletidos de purina AMP e o GMP. O IMP convertido nestes dois nucletidos em duas reaces enzimticas:

O ATP e o GTP so depois sintetizados por reaces de fosforilao do AMP e do GMP, respectivamente.

Para alm da via de sntese de novo, as clulas podem tambm sintetizar nucletidos atravs da recuperao de bases azotadas provenientes de nucletidos obtidos a partir da dieta ou a partir da degradao de cidos nucleicos endgenos - via de recuperao de nucletidos. Nos seres humanos, linfcitos T inactivos ou outras clulas do sistema imune produzidas no timo, sintetizam nucletidos por esta via, embora a sntese de novo seja necessria para a activao dos linfcitos T. O crebro humano apresenta tambm um nvel baixo de actividade da enzima PRPP amidotransferase, pelo que a via de recuperao particularmente importante neste rgo. A via de recuperao uma via muito mais simples e menos dispendiosa energeticamente comparativamente sntese de novo. Na via de recuperao tambm sintetizado PRPP que se combina com as bases pricas de modo a sintetizar os nucletidos de purina. A enzima adenina fosforibosiltransferase catalisa a sntese de AMP a partir de adenina e PRPP, ao passo que a enzima hipoxantinaguaninafosforibosiltransferase (HGPRT) catalisa a sntese de IMP e GMP a partir de hipoxantina/guanina e PRPP. A deficincia gentica desta ltima enzima origina uma doena designada por sndroma de Lesch-Nyhan. A deficincia gentica na HGPRT conduz a um aumento dos nveis de PRPP, resultando numa activao da sntese de novo de
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Caderno de Apontamentos nucletidos de purina (O PRPP substrato da enzima PRPP amidotransferase). A superproduo de nucletidos de purina origina tambm um aumento da sua degradao e, consequentemente, de cido rico (produto de degradao de nucletidos de purina). Esta doena caracterizada por anormalidades neurolgicas (atrasos mentais, comportamentos agressivos, auto-mutilao) e pela acumulao de cido rico (gota, artrite, clculos renais). Biossntese de nucletidos de pirimidinas

Ao contrrio do que acontece com os nucletidos de purina, o anel de pirimidina sintetizado primeiro e s depois ligado a ribose-fosfato para formar os nucletidos pirimdicos. Os precursores do anel de pirimidina so o carbamoil fosfato (que entra tambm no ciclo da ureia) e o aspartato. O carbamoil fosfato utilizado para a sntese de pirimidinas formado no citosol, ao passo que o carbamoil fosfato do ciclo da ureia sintetizado na mitocndria. O anel heterocclico formado por duas reaces origina orotato, o qual se combina ento com o PRPP para formar orotato-monofosfato (OMP). O OMP ento descarboxilado para sintetizar UMP. O UMP serve de precursor para a sntese de outros nucletidos pirimdicos. Primeiro, o UMP fosforilado duas vezes originando o UTP. Depois, a CTP sintetase catalisa a converso de UTP em CTP numa reaco de aminao em que o dador do grupo amina a glutamina.

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Caderno de Apontamentos Sntese de desoxiribonucletidos

O DNA utiliza na sua constituio desoxiribonucletidos em vez dos ribonucletidos encontrados no RNA, pelo que as clulas necessitam de vias de reduo que convertam os ribonucletidos na sua forma desoxi. Nesta reaco, o 2-OH da ribose substitudo por 2H na desoxirribose. Os desoxiribonucletidos de adenina, guanina e citosina so sintetizados directamente a partir do correspondente ribonucletido, por aco da enzima ribonucletido redutase. A reduo de ribonucletidos ocorre apenas na forma difosfato, pelo que os mononucletidos tm que ser primeiro convertidos a dinucletidos, para que se possa ento processar a reduo da ribose. O nucletido dTMP, que existe unicamente no DNA, sintetizado por uma via especfica que envolve a metilao da forma desoxi do uridilato (dUMP), numa reaco catalisada pela enzima timidilato sintetase.

O dUMP serve de substrato enzima timidilato sintetase, que transfere um grupo metil do metilenotetrahidrofolato para o dUMP, originando dTMP. O folato libertado sob a forma de dihidrofolato. A regenerao do dador metil metilenotetrahidrofolato, pode ser efectuada em dois passos: a enzima dihidrofolato redutase regenera o tetrahidrofolato, que pode novamente ser convertido em metilenotetrahidrofolato pela enzima serina hidroximetiltransferase.

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Caderno de Apontamentos

Utilizao de drogas inibidoras da sntese de DNA

As drogas que inibem a proliferao celular so utilizadas em quimioterapia, no tratamento do cancro. Muitas dessas substncias interferem com a sntese de desoxirribonucletidos, inibindo desta forma a replicao de DNA e a diviso celular. Alguns agentes quimioteraputicos, como o fluoruracilo, aminopterina e o metotrexato, actuam por inibio da actuao da enzima timidilato sintetase e, consequentemente, da sntese de dTMP. O fluoruracilo origina o composto fluordesoxiuridilato (fluor-dUMP). Este composto um inibidor competitivo do substrato desoxiuridilato (dUMP) e designado por substrato suicida uma vez que se liga irreversivelmente enzima. Por sua vez, o metotrexato (um

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Caderno de Apontamentos antifolato) actua ao nvel da enzima dihidrofolato redutase, impedindo a regenerao do metilenotetrahidrofolato, substrato da enzima timidilato sintetase. As clulas cancerosas so particularmente sensveis a este tratamento, uma vez que requerem mais dTMP para a diviso celular. H no entanto, algumas clulas saudveis que tambm se encontram em diviso e que por isso so sensveis aco destas drogas. Algumas dessas clulas so as clulas da medula ssea, as clulas da mucosa intestinal ou os folculos capilares, da os efeitos secundrios observados no tratamento por quimioterapia.

Degradao de nucletidos: catabolismo de purinas e formao de cido rico

Nos seres humanos, as purinas so degradadas a cido rico e excretadas desta forma. No primeiro passo efectuada a remoo do grupo fosfato aos nucletidos adenina monofosfato (AMP) e guanosina monofosfato (GMP), originando os nuclesidos adenosina e guanosina, respectivamente. A adenosina desaminada originando a inosina. A aco de nucleosidases permite a remoo da ribose, originando hipoxantina no caso da inosina e guanina no caso da guanosina. Ambas as bases azotadas (hipoxantina e guanina) so convertidas a xantina, a qual convertida em cido rico por aco da enzima xantina oxidase.

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Caderno de Apontamentos

O aumento da degradao de nucletidos de purina pode levar ao aumento da produo de cido rico e gota. O cido rico pouco solvel em gua e, portanto, quando formado em elevada quantidade ou a sua eliminao est comprometida (situao que leva hiperuricmia excesso de cido rico no sangue), pode ocorrer acumulao de cristais de cido rico no organismo. Esses cristais depositam-se essencialmente nas articulaes, levando a ataques dolorosos de gota. A acumulao de cristais de cido rico pode tambm levar formao de pedras renais e obstruco do tracto urinrio. Algumas das causas da hiperuricmia so: sndroma de Lesch-Nyhan (referido anteriormente), deficincia em glucose-6-fosfatase (leva acumulao de glucose-6-fosfato e activao da via das pentose fosfato aumento da produo de ribose fosfato aumento do turnover de purinas), diminuio da excreo de cido rico, uso de uma dieta rica em purinas (ex. carne). A hiperuricmia pode ser tratada com alopurinol, um inibidor da enzima xantina oxidase.
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