1 Metabolismo de plantas - o metabolismo energtico: Prof.

Jeferson Dombroski A necessidade de energia para a vida: Muitos processos executados pelos seres vivos necessitam de energia externa para acontecerem (reaes endergnicas). Em condies normais, sem a adio de energia externa, esses processos no ocorreriam. Um bom exemplo a reao simplificada da fotossntese: 6CO2 + 6H2O + energia = C6H12O6 + 6O2. Essa reao no ocorre sem a participao de uma fonte externa de energia. Assim, para que um organismo sobreviva, ele precisa gastar energia. Ns sabemos que a energia no pode ser criada (e nem destruda), ela pode apenas ser transformada. Isso implica que, para que um ser vivo possa executar suas funes viatis, precisa obter energia. O processo mais comum de obteno de energia pelos seres vivos pela oxidao 1 de substncias orgnicas. Quando as substncias so oxidadas, elas liberam energia (reao exergnica), normalmente na forma de calor, mas, quando as condies so adequadas (presena de uma enzima especfica, substratos, cofatores, temperatura, pH, etc.) essa energia liberada pode ser transferida para uma outra substncia (ATP, NADP+, NAD+, ferredoxina, FAD+, etc.) essa "outra substncia", ento vai poder ser usada como "fonte externa de energia" para permitir que as vrias reaes endergnicas de que a vida depende ocorram. Esse processo de obteno de energia denominado de respirao (definio do dicionrio Aurlio - Respirao celular - Processo que permite s clulas retirar energia acumulada em compostos orgnicos). Apesar de qualquer substncia orgnica poder ser usada como substrato para a respirao, as principais substncias oxidadas so os carboidratos (acares), e para que conheamos o processo respiratrio, necessrio o conhecimento de algumas caractersticas dos acares

Os acares de plantas: Os acares de plantas tm muitas funes, assim como so muitos os tipos de acares, que tm uma nomenclatura bastante complexa. Para entendlos, a primeira distino que devemos fazer entre os monossacardeos, os dissacardeos e os polissacardeos. Os monossacardeos de plantas so substncias solveis em gua e contm apenas uma unidade de acar em sua molcula. Esses acares aparecem em plantas sozinhos (p. ex.: glicose, a frutose, a galactose, a ribose, a desoxirribose) ou ligados a protenas (glicoprotenas), lipdeos (p. ex.: galactolipdeos), bases nitrogenadas (RNA - o "R" do acar ribose, e DNA, o "D" do acar desoxirribose), e a molculas de fosfato. Esses ltimos so denominados de acares-fosfato, e como exemplos importantes temos a glicose fosfato, o gliceraldedo-3-fosfato, a dihidroxicetona-fosfato, a frutose 1,6 bis1

Oxidao, na qumica moderna significa perder eltrons. Na respirao, os eltrons

perdidos (pelos acares) so transferidos para aceptores de eltrons (NAD e FAD), que se tornam o NADH + H+ e o FDH2.

2 fosfato e a ribulose 1,5 bis-fosfato. Todas essas substncias so bastante reativas, principalmente os acares-fosfato e, em funo disso, so produzidas e utilizadas rapidamente, e no podem ser transportadas por longas distncias dentro da planta. Para esse fim (transporte), a planta usa os dissacarideos. Os dissacardeos so tambm representados por vrias substncias, mas principalmente por uma, a sacarose. Sacarose um dmero (formado pela unio de uma molcula de frutose com uma molcula de glicose), bastante solvel e pouco reativo. Essas duas caractersticas tornaram essa molcula a principal substncia transportada pelo floema para fins de transferncia de energia. Os polissacardeos so molculas grandes que contm vrias unidades de monssacardeos. Dependendo da forma como essas ligaes so feitas, surgem polissacardeos solveis ou insolveis. Por exemplo, a polimerizao da molcula de glicose pode originar amilose, amilopectina (ambos componentes do amido), ou celulose. As molculas de amilose e amilopectina so facilmente metabolizadas pelos vegetais. Como o amido pouco solvel, o acmulo dessa substncia no afeta grandemente o potencial hdrico, ou seja, a clula pode armazenar amido sem que isso afete a sua disponibilidade de gua. Se a clula armazenasse sacarose, por exemplo, quanto maior a quantidade de sacarose armazenada, menor seria o potencial hdrico, e o funcionamento da clula ficaria prejudicado por falta de gua disponvel. J a celulose um polmero muito estvel e resistente, e usado para a construo da parede celular, juntamente com outros polmeros de carboidratos. Em resumo, as plantas, em geral, usam os seguintes carboidratos para o seu metabolismo energtico: o amido armazenado, dentro de plastdeos, e a sacarose transportada pelo floema. Assim, se uma clula precisa de energia, ou ela "queima" o amido armazenado ou ela importa sacarose para "queimar". Mecanismos e rotas respiratrias O primeiro passo da obteno de energia a "quebra" das molculas de sacarose ou de amido para liberao dos monmeros de glicose. No caso da quebra do amido, que ocorre dentro de plastdeos, o amido convertido em glicose-fosfato e, a seguir, em glicose-1,6-bis-fosfato, que, por sua vez, "quebrada" em duas molculas, uma de dihidroxicetona fosfato (DHAP) e outra de gliceraldedo-3-fosfato (GAP). Essas molculas so transportadas para fora dos plastdeos, e os processos seguintes da respirao acontecem no citosol e nas mitocndrias. No caso da sacarose, esta importada pela clula atravs de bombas movidas por prtons (H+). No citosol, a sacarose quebrada pela enzima invertase, produzindo uma molcula de glicose e uma de frutose. Essas molculas so fosforiladas (ganham um grupo fosfato), o que ocorre com gasto de ATP (ver figura 1). A seguir, a glicose-6-fosfato convertida em frutose-6-fosfato, e esta em frutose-1,6-bisfosfato. Esta, por sua vez "quebrada" em gliceraldedo3-fosfato (G3P) e dihidroxicetona-fosfato. Essas duas ltimas molculas so facilmente interconversveis. O passo seguinte a desidrogenao do G3P, e esse processo libera energia tambm, na forma de NADH+H+, ou seja, entra um NAD+ e produzido um NADH+H+, sendo produzido o 1,3-bisfosfoglicerato, o qual perde um fosfato, sendo convertido em 3-fosfoglicerato, e essa ltima reao produz um ATP. O fosfoglicerato posteriormente convertido em fosfoenolpiruvato (PEP) e este, por ltimo, em piruvato. A converso do PEP em piruvato produz mais um ATP.

3 Esse processo que ocorre totalmente no citosol denominado de gliclise (via de Embden-Meyerhoff-Parnas - figura 1) e compreende desde a quebra da sacarose at a formao de piruvato. Na gliclise a produo energtica pequena. So gastos dois ATPs para cada molcula de glicose, e, como so produzidos 2 G3P, ento, para cada molcula de glicose so produzidos 2 NADH+H+ e 4 ATPs. Como so gastos dois ATPs, a produo lquida de apenas dois ATPs e 2 NADH+H+ por molcula de glicose respirada.

Figura 1 As reaes da gliclise Fonte: Kerbauy, 2004 (modificado e redesenhado) A prxima etapa o transporte do piruvato para a mitocndria, o que ocorre atravs de uma protena transportadora de piruvato existente na membrana interna das mitocndrias. L ocorre o ciclo de Krebs (ou ciclo dos cidos tricarboxlicos, ou ciclo do cido ctrico). Nessa fase o piruvato se liga com

4 a Coenzima A e NAD+, em um complexo protico, que produz acetil-CoA, NADH+H+, e a primeira molcula de CO2 liberada (figura 2).

Figura 2 Ciclo de Krebs. Fonte: Kerbauy, 2004 (modificado e redesenhado) A acetil-CoA se liga ao oxalacetato, produzindo citrato e, posteriormente, isocitrato. Este desidrogenado, produzindo NADH+H+ e liberando a segunda molcula de CO2. A molcula formada o alfa-ceto-glutarato, que tambm desidrogenado, com a produo de mais um NADH+H+ e da terceira molcula de CO2, formando o succinil-CoA. A oxidao dessa molcula produz um ATP e uma molcula de succinato, Este convertido (desidrogenado) em fumarato, com a produo de FADH2, e o fumarato convertido posteriormente em malato e este em oxalacetato. Esta ltima reao produz ainda mais um NADH+H+. O oxalacetato produzido, ento, pode ser usado para se ligar a mais um acetil-CoA e reiniciar o ciclo de Krebs. Como pode ser observado, esse ciclo produz, para

5 cada molcula de piruvato, que tem trs carbonos, 1 ATP, 4 NADH+H+ e 1 FADH2. Como na gliclise so produzidos 2 piruvatos para cada molcula de glicose, o ciclo de Krebs produz 2 ATP, 8 NADH+H+ e 2 FADH2. Cadeia transportadora de eltrons O NADH+H+ pode ser usado para vrias reaes, mas muito menos usado do que o ATP. Essa ltima molcula que a verdadeira "moeda corrente" dentro da clula. Por isso, necessrio converter os NADH+H+ e os FADH2 produzidos em ATPs. Isso feito por uma srie de protenas situadas na membrana interna das mitocndrias (figuras 3 e 4). Basicamente, o que essas protenas fazem oxidar o NADH+H+. Os eltrons produzidos nessa oxidao so transportados entre as protenas (ponto amarelo na figura 4) at o acceptor final de eltrons, que o Oxignio (O2). Por sua vez, o H+ produzido na oxidao do NADH+H+ liberado apenas do outro lado da membrana (no espao intermembranas), gerando um acmulo de ons H+ (prtons) no espao intermembrana (figura 4). Essa diferena de concentrao de prtons gera uma diferena de potencial eletroqumico trans-membrana (relacionada diferena de pH. Quando a mitocndria est ativa, o pH da matriz sobe para at 8,5 e o pH do espao intermembranas cai para at 5,5), e a energia dessa diferena de potencial usada pela enzima ATP-sintase para a produo de ATPs (figura 4). Em mdia, cada NADH+H+ permite a produo de quase 3 ATPs, e cada FADH2, quase 2 ATPs.

Figura 3 - Cadeia transportadora de eltrons. Complexo I a NADH desidrogenase; Q a ubiquinona; Complexo II a sccinato desidrogenase (enzima do ciclo de Krebs); Complexo III o citocromo bc1; cit c o citocromo c; Complexo IV a citocromo c oxidase. (http://www2.ufp.pt/~pedros/bq/respira.htm)

Figura 4. Transporte de eltrons (pontos amarelos) e de H+ na CTE da mitocndria. Os H+ transportados so usados para produzir ATP atravs da enzima ATP sintase (ATPsoma) (http://www.dbio.uevora.pt/biologia1/respiracao.htm) H uma questo aqui que gera alguma dificuldade de entendimento. Quando o NADH+H+ oxidado, ele gera NAD+, 2H+, e ainda sobram dois eltrons. Esses eltrons que "sobram" so um problema que resolvido com o uso de um aceptor de eltrons (aceitador de eltrons). Em plantas a substncia que faz esse papel o oxignio. Quando a molcula de oxignio (O2) recebe eltrons, ela "quebrada", e imediatamente quatro H+ so ligados, formando duas molculas de gua. Como isso acontece na matriz mitocondrial (lquido no interior das mitocndrias), provocando diminuio dos H+ disponveis, e aumento do pH na matriz mitocondrial. Esse processo tambm contribui para aumentar a diferena de potencial eletroqumico trans-membrana (gradiente de H+) atravs da membrana interna da mitocndria. Como j foi dito antes, essa diferena de potencial eletroqumico usada para gerar energia e produzir ATPs. No total, somando a gliclise, o ciclo de Krebs e a cadeia transportadora de eltrons, para cada molcula de glicose h uma produo lquida de 32 ATPs. Via alternativa de transporte de eltrons A CTE mitocondrial em animais pode ser inibida por rotenona, monxido de carbono (CO) e cianeto (CN-), e a presena desses agentes pode levar animais morte. Essa inibio no to evidente em plantas, porque o transporte de eltrons pode continuar a ocorrer em uma via alternativa, com auxlio de uma oxidase alternativa da ubiquinona, que transfere os eltrons diretamente para o

7 oxignio. Nesse processo no h produo de ATPs, mas gera calor. Algumas flores usam esse processo para se aquecer, e assim aumentar a liberao de compostos volteis com o fim de atrair polinizadores. Fermentao ou respirao anaerbia Quando no h oxignio gasoso (O2) disponvel, a cadeia transportadora de eltrons no acontece. Assim, o NADH+H+.no pode ser convertido em NAD. Isso gera um problema enorme, pois a quantidade de NAD limitada, e o NAD necessrio desde a gliclise, na converso de G-3-P em 1,3bisfosfoglicerato (figura 1). Sem a presena de NAD essa reao no ocorre. Assim, haveria a paralisao de toda a produo de energia pela clula e a sua morte. H uma alternativa, no entanto, que chamada de fermentao. Nesse processo, o piruvato formado no final da gliclise convertido em lactato (cido ltico), pela enzima lactato desidrogenase, ou em etanol (lcool etlico), pela enzima lcool desidrogenase. Isso ocorre com o gasto de uma molcula de NADH+H+. (que convertido em NAD) para cada molcula de piruvato. Inicialmente ocorre a produo de lactato, mas como ele um cido, e txico, apenas uma pequena quantidade pode ser produzida. O etanol um pouco menos txico, mas em altas concentraes pode ser letal. segundo esse mecanismo possvel regenerar uma molcula de NAD, o suficiente para continuar funcionando a gliclise, mas o ciclo de Krebs para totalmente. Na fermentao, cada molcula de glicose respirada gera apenas 2 ATPs e duas molculas de etanol (ou de lactato).

Figura 5. Reaes da fermentao. As duas vias acontecem em plantas. Regulao da respirao A gliclise regulada principalmente em dois pontos, na converso da frutose-6-fosfato em frutose-1,6-bisfosfato (pela enzima fosfofrutoquinase), e na converso de fosfoenolpiruvato em piruvato (pela enzima piruvato quinase). Essas enzimas so reguladas por uma srie de fatores, dentre eles o ADP e o fosfato livre. A presena de grande quantidade de ADP e de fosfato livre estimula essas enzimas, e a gliclise aumenta visando produzir ATP. A produo de ATP

8 automaticamente provoca a diminuio de ADP e de fosfato livre. Essas enzimas tambm so inibidas pelo ATP. Assim, se houver uma boa disponibilidade de ATPs, a gliclise vai ocorrer mais devagar ou at parar. Em caso da presena de muito ATP, a gliclise para e comea a ocorrer a gliconeognese, que um processo inverso da gliclise, ou seja, as molculas de G-3-P so convertidas novamente em glicose, e da em sacarose ou amido. H ainda um terceiro ponto de regulao da gliclise, na converso de glicose em glicose-6-P (pela enzima hexoquinase). A presena de glicose-6-P inibe essa enzima. O ciclo de Krebs, por sua vez, controlado fundamentalmente pela disponibilidade de substratos, inibio pelos produtos e por outros intermedirios do ciclo. A enzima piruvato desidrogenase (piruvato acetil-Co-A) inibida por acetil-Co-A. A enzima Citrato sintase (acetil-Co-A + oxalacetato citrato) e isocitrato desidrogenase (isocitrato a-cetoglutarato) e cetoglutarato desidrogenase (a-cetoglutarato succinil-CoA) so inibidas pelo succinil-CoA. Todas as enzimas do ciclo de Krebs citadas acima so inibidas pelo NADH+H+. A isocitrato desidrogenase inibida por ATP e estimulada por ADP. As desidrogenases mencionadas so estimuladas pelo on Ca+2. Via das pentoses A via das pentoses tambm ocorre no citosol, se inicia com a glicose-6fosfato, produzindo fosfogluconato e NADPH+H+. Este, por sua vez, convertido em ribulose-5-fosfato, com a produo de mais uma NADPH+H+ e a liberao de uma molcula de CO2. A seguir ocorrem reaes que iro produzir, ao final a glicose-6-fosfato que permitir o reincio do ciclo. A cada 6 molculas de ribulose5-fosfato (cinco carbonos) sero produzida 5 molculas de glicose-6-fosfato (seis carbonos). Assim, essa via produz 2 NADPH+H+ e tambm libera CO2. Alm do NADPH+H+ (que pode ser usado para produzir ATPs), h a produo de uma srie de acares que podem ser usados em diferentes processos metabicos. O G3P produzido pode ser transformado em piruvato na gliclise, ou, pela gliconeognese, ser usado para produo de sacarose ou amido. As principais funes da via das pentoses so a produo de NADPH+H+ no citossol e a produo de alguns acares para serem usados em outras rotas metablicas, como a ribose-5-fosfato e a eritrose-4-fosfato. O fluxo metablico na via das pentoses-fosfato regulado pela velocidade da reao da glucose-6-fosfato-desidrogenase, que controlada pela disponibilidade de NADP+.

Figura 6. Via das pentoses. As etapas da regenerao da glicose-6-fosfato a partir da ribose-5-fosfato no so mostradas. Fonte: Taiz e Zeiger, 1991 (redesenhado)

Alguns sites interessantes Gliclise e Resirao:

www2.ufp.pt/~pedros/bq/respira.htm

http://fai.unne.edu.ar/biologia/metabolismo/met6.htm (em espanhol) http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/grupof/int.html http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/grupof/via.html http://www.dbio.uevora.pt/biologia1/glicolise.htm

10 http://ftp.unb.br/pub/UNB/cbsp/Download/Transparencias/Metabolismo/Glicolise/ http://class.fst.ohio-state.edu/FST605/lectures/Lect.html http://www.gwu.edu/~mpb/glycolysis.htm http://www.jonmaber.demon.co.uk/glysteps/ e http://www.jonmaber.demon.co.uk/glyintro http://www.homepages.hetnet.nl/~b1beukema/pathways.html Questes para estudo 1. O que respirao? 2. O que ATP? 3. O que gliclise? 4. Onde, na clula, ocorre a gliclise? 5. Qual saldo energtico (em ATPs) da gliclise, para cada molcula de glicose? 6. Quantos NADH so produzidos na gliclise por molcula de glicose? 7. O que acontece com os NADHs formados na gliclise? 8. Qual o produto final da gliclise (qual substncia)? 9. Sob condies normais de oxignio, o que acontece com o piruvato formado no citosol durante a gliclise? 10. O que o ciclo de Krebs? 11. O que o ciclo dos cidos tricarboxlicos? 12. O que acontece com o piruvato aps a entrada na mitocndria? 13. Quantos NADHs, FADHs e ATPs so produzidos DIRETAMENTE no ciclo de Krebs por cada molcula de piruvato? 14. Quantos NADHs, FADHs e ATPs so produzidos DIRETAMENTE no ciclo de Krebs por cada molcula de glicose? 15. O que faz a cadeia transportadora de eltrons da mitocndria? 16. Qual a funo do oxignio na cadeia transportadora de eltrons da mitocndria? 17. Quantos ATPs so produzidos na respirao aerbia por cada molcula de glicose? 18. O que acontece com o ciclo de Krebs e a cadeia transportadora de eltrons da mitocndria em caso de ausncia de oxignio? 19. Como se processa a respirao no caso de ausncia de oxignio? 20. Quantos ATPs e NADHs so produzidos pela respirao anaerbia?