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Lpez-Durn M, Campo-Trapero J, Cano-Snchez J, Dez-Prez R, Bascones-Martnez A Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral

Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral


Application of molecular biology techniques in oral cancer
Lpez-Durn M*, Campo-Trapero J**, Cano-Snchez J***, Dez-Prez R*, Bascones-Martnez A****
RESUMEN Este artculo de revisin se propone exponer las principales tcnicas de biologa molecular disponibles actualmente para los investigadores, en el campo del cncer y precncer oral, clasificadas segn el tipo de material biolgico del que se disponga para iniciar la investigacin. ste puede ser ADN, ARN o protenas. La explicacin de cada tcnica comprender una breve sistemtica del proceso, as como sus ventajas, inconvenientes y estado de actividad actual. Todo ello con la finalidad de esclarecer las aplicaciones, pronto indispensables, de las tcnicas ms destacadas, en el diagnstico precoz, pronstico y tratamiento individualizado del carcinoma oral. Entre las tcnicas ms tiles en este proceso se encuentran: la electroforesis en gel, las tcnicas de hibridacin, la tecnologa microarray, los biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la transcriptasa inversa, las tcnicas de Southern, Northern y Western blot, la secuenciacin de ADN, la clonacin de genes, la inmunohistoqumica, el ensayo ELISA y la citometra de flujo. Destacan en particular por su gran utilidad, la tecnologa microarray, los biochips y la PCR. Palabras clave: Tcnicas biologa molecular, cncer oral, carcinoma oral de clulas escamosas, PCR, microchips, microarrays. SUMMARY This article summarizes the main techniques in the area of molecular biology that are available for the investigation of oral cancer and precancer. They have been classified depending on the biological material we expect to analyze, which can be DNA, RNA or proteins. The explanation for each technique includes a brief description of its basics, as well as some advantages, drawbacks and current use of the technique. Our aim is to throw light on the applications of these techniques, soon indispensable for most studies, in the early diagnosis, prognosis and individualized treatment of oral carcinoma. The most useful techniques for this objective are nowadays: gel electrophoresis, hybridation, microarray technology, biochips, PCR (conventional, quantitative or reverse transcriptase), Southern, Northern and Western blot studies, DNA sequenciation, cloning, immunohistochemistry, ELISA and flow citrometry. Some techniques that deserve a special mention due to their greater usefulness in the area of oral cancer are microarray technology, biochips and PCR. Key words: Molecular biology techniques, oral cancer, oral squamous cell carcinoma, PCR, microchips, microarrays. Fecha de recepcin: 17 de abril de 2009. Aceptado para publicacin: 22 de abril de 2009. * ** Licenciado en Odontologa. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM. Doctor en Odontologa. Profesor contratado doctor. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM. *** Doctor en Odontologa. Profesor asociado. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. Facultad de Odontologa. UCM. **** Doctor en Medicina y en Estomatologa. Catedrtico de Medicina y Ciruga Bucofacial. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM. Lpez-Durn M, Campo-Trapero J, Cano-Snchez J, Dez-Prez R, Bascones-Martnez A. Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral. Av. Odontoestomatol 2010; 26 (4): 189-196.

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INTRODUCCIN Una vez secuenciado el genoma humano, hay que acotar y otorgar su funcin a cada fragmento de ADN correspondiente a un gen. El Proyecto Genoma Humano ha revelado que los diez billones de pares de bases que forman el ADN codifican entre 30.000 y 40.000 genes (1). El ADN de las clulas de un organismo contiene la informacin gentica necesaria para la construccin de sus protenas, que determinarn la funcin biolgica del gen o la patologa de la enfermedad. La molcula de ARNm (ARN mensajero) es una copia de esta informacin mediante un proceso conocido como transcripcin. La informacin codificada en la molcula de ARNm es interpretada en un proceso denominado traduccin que tiene como fin la construccin de la protena. Sin embargo, el mero conocimiento de la secuencia de bases del ADN no es suficiente para definir la funcin biolgica o la patologa de la enfermedad. Para alcanzar este conocimiento se han desarrollado tcnicas basadas en los perfiles de expresin, que a su vez han favorecido la deteccin de nuevos protooncogenes, genes supresores tumorales y modificaciones genticas involucradas en la carcinognesis oral. A toda esta tecnologa se le une la bioinformtica, capaz de descifrar la ingente cantidad de los datos generados por las tcnicas de biologa molecular (2). La caracterizacin de los patrones moleculares alterados que conducen a la transformacin maligna puede emplearse tanto para el diagnstico temprano del cncer como para un tratamiento eficaz de esta patologa (1). Todo esto tambin est suponiendo una revolucin en la investigacin de la carcinognesis oral al permitirnos llevar a cabo un anlisis en una escala genmica o protemica, complementaria a los mtodos convencionales de diagnstico clnico o histopatolgico, con el objetivo de determinar biomarcadores que puedan ser aplicados a nivel diagnstico y/o teraputico en las lesiones de precncer y cncer oral. APLICACIONES DE LA BIOLOGA MOLECULAR EN ONCOLOGA ORAL Subclasificacin de los tumores orales identificados histolgicamente El cncer de cabeza y cuello (CCC) es el sexto ms comn en el mundo, y est asociado a una baja
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supervivencia y una alta morbilidad, constituyendo el cncer oral el 40% de los CCC (3). En la actualidad, la tecnologa microarray ha descubierto cuatro subtipos de carcinoma oral de clulas escamosas (COCE) segn sus distintos comportamientos clnicos, identificados por los perfiles de expresin gnica. Chung et al, describieron un subtipo de COCE asociado al EGFR (receptor del factor de crecimiento endotelial), otro con un mesnquima enriquecido, un tercer tipo similar al epitelio normal y un ltimo subclasificado en base a sus altos niveles de enzimas antioxidantes (4, 5). Estos grupos mostraron diferencias estadsticamente significativas en la tasa de supervivencia sin recurrencia del tumor, y una exactitud del 80% en la prediccin de metstasis linfticas (5). Diagnstico y pronstico molecular del cncer El COCE, como sucede con el resto de los cnceres, es una enfermedad causada por la acumulacin de anomalas en la secuencia y expresin de un nmero de genes crticos. La tecnologa microarray ha conseguido identificar muchos genes con alteraciones en su expresin, siendo la mayora reguladores del ciclo celular, marcadores de diferenciacin, genes con funcin antioxidante o reparadora del ADN, y genes involucrados en la adhesin celular, en las seales de transduccin o en la respuesta inflamatoria (1, 6, 7) Entre ellos, cabe mencionar por su importancia o relevancia los siguientes: Proliferacin y ciclo celular: el EGFR, C-myc, las ciclinas A y D1, Ki67, Bcl-2, H-RAS; supresin tumoral: p53, Bax, Rb, p16, p21, p27, maspina; angiognesis: EGFR, VEGF; invasin y metstasis: caderinas, cateninas, MMPs, integrinas, protena S100. Hasta el momento actual no se ha encontrado un gen o grupo de genes implicados en el desarrollo de la enfermedad en la mayora de los casos y que pudiera ser, por lo tanto, utilizado como biomarcador en el diagnstico precoz y/o manejo de los pacientes con COCE. Todas las formas de cncer desarrollan alteraciones comunes, como son: la habilidad para la autosuficiencia en las seales de crecimiento e insensibilidad a las seales que se oponen a l, evasin de la apoptosis, angiognesis, potencial replicativo ilimitado, invasin tisular y capacidad de metstasis (8). Las alteraciones que promueven este crecimiento celular anormal, detectables mediante las tcnicas

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de biologa molecular, son: la mutacin, delecin, amplificacin, translocacin y las modificaciones en la expresin gnica o en el nivel de metilacin. Se ha observado que los cambios en los patrones de metilacin pueden aparecer incluso dos aos antes del desarrollo de un COCE, por lo que se ha propuesto utilizar estas modificaciones como biomarcadores para la deteccin y pronstico de esta patologa (9) Ninguna de las mltiples tcnicas que existen actualmente para la deteccin de los patrones de metilacin es universal. Para la seleccin de la ms adecuada se debe considerar el tipo, cantidad y calidad del material biolgico. Las tcnicas ms avanzadas para la deteccin de metilaciones en los genes son el MALDITOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry), la HPLC (High-performance liquid chromatography) (9) y la MSP-PCR (Methylation - Specific PCR) (9-11). En lesiones potencialmente malignas, como la leucoplasia oral, se ha empleado la tecnologa microarray para identificar genes que sirvieran de biomarcadores para las lesiones displsicas con potencial para progresar a COCE, establecindose la tecnologa microarray como el mtodo de eleccin para analizar los marcadores potenciales de progresin de la displasia epitelial. (1, 7). Mejora en el desarrollo de frmacos El empleo de la biologa molecular para el tratamiento oncolgico pretende, por una parte, identificar los subgrupos sensibles a beneficiarse del tratamiento, y por otra, establecer nuevas dianas teraputicas determinando los genes asociados con un mal pronstico o ausencia de respuesta al tratamiento (12). Adems, facilita la prediccin de efectos adversos durante los estudios de toxicidad (12). El desarrollo farmacolgico actual se centra en agentes diseados contra genes especficos involucrados en el cncer, alejndose cada vez ms de los frmacos con toxicidad general (12). Cabe destacar tambin la importancia de la tecnologa microarray en este campo (1, 12). Estudio de la estabilidad cromosmica La longitud de los telmeros es un importante indicador en el estudio tanto de la estabilidad cromos-

mica como de la actividad de la telomerasa y la capacidad proliferativa de las clulas, pudiendo utilizarse para el pronstico de malignidad en las clulas tumorales (13). Entre los mtodos empleados para medir la longitud de los telmeros se encuentran los siguientes: southern blot, hybridization protection assay, fluorescence in situ hybridization (FISH) , citrometra de flujo, reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y la microscopa electrnica. TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR DISPONIBLES PARA SU APLICACIN EN ONCOLOGA ORAL Existen en la actualidad numerosas tcnicas para el estudio de las alteraciones producidas en el cncer o precncer oral. En las tablas 1 y 2 aparecen explicadas las tcnicas principales, clasificadas en grupos segn el tipo de material gentico que pretendamos analizar: ADN, ARN o protenas. Algunas de ellas son aplicables a todo tipo de muestra biolgica, mientras que otras son especficamente utilizadas para cada uno de los tipos de material de partida. De todas las tcnicas que se resumen en las Tablas 1 y 2, merecen especial atencin y un desarrollo mayor la tecnologa microarray, los biochips y la PCR. La tecnologa microarray permite la miniaturizacin del proceso de hibridacin de las secuencias de nucletidos en superficies microscpicas, que normalmente son ledas por un lser capaz de interpretar los fluorforos. Pueden usarse para detectar ADN, ARN o protenas y permiten analizar incluso todo el genoma humano conocido en un nico experimento (14, 15). El microarray permite analizar los niveles de expresin de un gen, determinando la cantidad de material gentico presente (4). Son ensayos sencillos que requieren un material muy accesible, de alta validez y reproducibilidad (6, 15). En general, el procedimiento del microarray puede dividirse en las siguientes fases: 1. Fabricacin del array. 2. Aislamiento y marcaje del material gentico. 3. Aplicacin de la muestra marcada al array y medicin de la hibridacin.
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TABLA 1.- TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR APLICABLES TANTO A MUESTRAS DE ADN, ARN O PROTENAS
Base metodolgica Aplicacin Ventajas Inconvenientes Necesita comparar datos con otros conocidos. Se tiende a la miniaturizacin y a los chips.

Electroforesis Separacin de cidos Comparacin de mues- Tcnica sencilla en gel nucleicos o protenas tras biolgicas distintas segn su tamao y (sano/enfermo). carga elctrica mediante campo elctrico, en medio poroso. Hibridacin

Unin de sondas es- Se usa en PCR, chips Alta especifici- Requiere un mtopecficas marcadas a de ADN, Southern y dad. do de visualizacin los cidos nucleicos o Northern Blot. (radiactividad o quiprotenas a identificar. mioluminiscencia). Miniaturizacin del proceso de hibridacin para analizar un nmero elevado de muestras en un nico experimento. Monitorizacin de niveles de biomarcadores, deteccin de cambios en material gentico, determinacin de dianas farmacolgicas, evaluacin de interacciones entre protenas. Tcnica cuantitativa, sencilla, accesible, de alta validez, reproducibilidad y sensibilidad. Los de ADNc no permiten detectar modificaciones posttranscripcionales.

Microarray TCNICAS
COMUNES

Biochips

Ensayo bioqumico Farmacogenmica y farmacogentica (Idenminiaturizado. tificacin de dianas teraputicas; desarrollo de frmacos), diagnstico de enfermedades, deteccin de mutaciones y polimorfismos, anlisis de perfiles de expresin.

Estudio de varios elementos simultneamente en la misma muestra; requiere cantidades mnimas de muestra y reactivos; rendimiento alto de la muestra.

Problemas para analizar protenas (la estructura 3D favorece uniones mltiples; fcil desnaturalizacin o inactivacin por la manipulacin), precio.

4. Anlisis e interpretacin de los datos (12). Una tcnica frecuentemente empleada para el estudio del cncer oral es la aplicacin de la inmunohistoqumica a muestras recogidas en tissue microarrays (TMA) (Fig. 1). El concepto de los microarrays basados en anticuerpos fue propuesto por Ekins y Chu en la segunda mitad de la dcada de 1980. Probaron matemticamente que estos arrays permitan determinar mltiples niveles proteicos de forma simultnea y con una alta sensibilidad. Posibilitan, por tanto, identificar y
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cuantificar protenas, as como estudiar su funcin. La limitacin de los microarrays de ADNc es que no son capaces de detectar modificaciones que ocurran despus de la transcripcin (metilacin, fosforilacin, etc), permitiendo en este caso slo una visin parcial del proceso (7). Las aplicaciones de los microarrays incluyen: La monitorizacin de los niveles de biomarcadores en los pacientes con lesiones de cncer o precncer oral.

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TABLA 2.- TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR APLICABLES ESPECFICAMENTE A MUESTRAS DE ADN, ARN O PROTENAS
Base metodolgica
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa) Mtodo enzimtico de amplificacin de secuencias especficas de ADN (ej: gen) para obtener millones de copias, mediante la ADN polimerasa Variante de la PCR en la que se cuantifica de forma absoluta o relativa (comparando con un gen normalizador) el producto de la amplificacin de ADN Duplicar un gen o una porcin de ste Electroforesis e hibridacin para secuencias especficas de ADN Conocimiento de la secuencia de bases nitrogenadas de un fragmento de ADN mediante un mtodo qumico o enzimtico Electroforesis e hibridacin para secuencias especficas de ARNm Amplificacin de fragmentos de ARN de inters para obtener millones de copias, con un paso previo de conversin de ARNm en ADNc bicatenario Visualizacin de una secuencia de ADN o ARN en el sitio fsico donde se encuentra, mediante hibridacin por complementariedad de bases. Variaciones de la tcnica: FISH, Q-FISH, TELI-FISH (parafina), Flow-FISH Electroforesis en gel para separar protenas segn su peso molecular y deteccin mediante anticuerpos especficos Deteccin de molculas mediante uniones especficas antgeno-anticuerpo Ensayo inmunoenzimtico que puede ser directo/ indirecto, cualitativo/ cuantitativo/ semicuantitativo Paso de clulas por un fluido colocado bajo una fuente de luz que permite su visualizacin

Aplicacin
Amplificacin de genes; modificacin de fragmentos de ADN; genotipificacin; deteccin de mutaciones, marcadores genticos, expresin de genes. Cuantificacin de expresin gnica, valoracin de la eficacia de frmacos, deteccin de agentes infecciosos y polimorfismos, diagnstico tumoral, medicin de telmeros Obtener un fragmento de ADN buscado Deteccin del tamao y cantidad de un fragmento de ADN de inters (ej: telmero) Entender la estructura; detectar mutaciones y mecanismos fisiopatolgicos generados por inferencia en la secuencia y homologa de genes Deteccin del tamao y nmero de transcripciones

Ventajas
Lmite de deteccin muy alto

Inconvenientes
Requiere material gentico bicatenario y tcnicas de visualizacin; es semicuantitativa; frecuentes falsos positivos por contaminacin leve Requiere una curva de calibrado para la cuantificacin absoluta y una alta calidad del material de partida; aconsejable la estandarizacin Se obtiene slo una copia Tcnica lenta que requiere grandes cantidades de ADN Slo permite el conocimiento de la secuencia de bases, pero no su funcin Tcnica lenta que requiere grandes cantidades de ARN Tcnica semicuantitativa

PCR cuantitativa o en tiempo real

TCNICAS PARA ADN Cloning Southern blot

Tcnica cuantitativa; mayor sensibilidad y rapidez; menor probabilidad de contaminacin; no requiere electroforesis para su visualizacin Posibilidad de ampliar la muestra exacta Permite cuantificar tamao y abundancia Permite el conocimiento de la estructura ms bsica de un nucletido o gen Es la tcnica ms sensible para detectar niveles de expresin de ARNm Requiere cantidades mnimas de ARN

Secuenciacin

Northern blot

RT-PCR (PCR transcriptasa inversa) TCNICAS PARA ARN

Cuantificacin de expresin gnica, valoracin de la eficacia de frmacos, deteccin de agentes infecciosos, diagnstico tumoral Analizar la presencia y/o distribucin de una secuencia de ADN o ARN transcrito de inters en tejidos o clulas. Muy utilizada en los TMA, donde puede hacerse de forma automatizada Examinar cambios en niveles proteicos

Hibridacin in situ

Sondas ms sensibles y especficas que las de ADN; la visualizacin en el tejido permite correlacionar resultados con muestras histolgicas e inmunolgicas Tcnica con gran sensibilidad; permite detectar tambin el peso molecular de las protenas Posible a partir de muestras congeladas o en formol Sencilla, rpida, econmica, automatizable, anlisis simultneo de varias muestras Tcnica rpida; permite valorar el contenido total de ADN de una poblacin celular

Las sondas de ARN son ms lbiles que las de ADN

Western blot

Tcnica semicuantitativa, poco especfica; laboriosa; requiere tcnicas de visualizacin Tcnica semicuantitativa Requiere tcnicas de visualizacin de la reaccin enzimtica

Inmuno -histo qumica TCNICAS PARA PROTENAS ELISA (Enzyme linked immuno sorbent assay)

Localizacin de protenas especficas en tejidos o clulas Cuantificacin de molculas

Citometra de flujo

Recuento celular, evaluacin de marcadores fenotpicos, ciclos celulares, apoptosis

Requiere clulas en suspensin

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Fig. 1. Construccin y anlisis de un TMA a partir de muestras fijadas en formaldehdo y embebidas en parafina. A) Marcaje de la zona de inters en portaobjetos y parafinas. B) Fijacin del bloque recibidor en el microtomo. C) Confeccin del cilindro recibidor. D) Toma de la regin marcada. E) Colocacin en el cilindro preconfeccionado. F) Recoger el resto de las muestras en el bloque recibidor de la misma manera. G) Corte del TMA. H) Tincin con hematoxilina/eosina y/o inmunotincin. I) Visualizacin mediante microscopio.

La determinacin de cambios en los niveles celulares de expresin gnica o proteica; el anlisis de distintos candidatos farmacolgicos. El descubrimiento y validacin de nuevas dianas teraputicas para el tratamiento del COCE. La evaluacin de las interacciones entre protenas. La monitorizacin de las modificaciones proteicas. (1, 4, 6, 12, 15). La Genmica y la Protemica utilizan para su estudio en el campo de los biochips, los ADN-chips y los microarrays proteicos, respectivamente. Con las protenas, el escenario se vuelve ms complicado por varias razones, entre las que se encuentran las siguientes:
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La amplia variedad proteica permite muchas formas de funcionalizacin e hibridacin. La tcnica no consigue una amplificacin de protenas igualable a la PCR. Requiere una herramienta de anlisis estadstico para cuantificar las uniones de la estructura tridimensional proteica. Los mtodos de transporte e inmovilizacin pueden producir la desnaturalizacin o inactivacin de las protenas (16). Otra tcnica muy utilizada por su enorme potencial replicativo es la PCR (por Polymerase Chain Reaction), bien la convencional, la semicuantitativa pero con un lmite de deteccin mucho mayor que el resto de las tcnicas, o cualquiera de sus varieda-

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des. Esta tcnica fue descrita inicialmente por Khorana y colaboradores en 1974, y perfeccionada por Mullis en 1986, siendo de las ms empleadas actualmente. Permite la amplificacin de un fragmento de ADN de inters (por ejemplo un gen), obteniendo millones de copias, en slo 30 50 ciclos de reaccin. La PCR requiere material gentico bicatenario (ADN molde o template), que se separa en las dos hebras mediante incrementos de temperatura, y donde cada uno de los filamentos aislados sirve de molde para la sntesis y amplificacin de nuevas hebras de ADN (17). La PCR es una tcnica vlida para diferentes aplicaciones mdicas que requieran una concentracin alta de un fragmento concreto de ADN (17). Entre las variaciones de esta tcnica se encuentran la PCR en tiempo real (PCR cuantitativa), capaz de determinar el nmero de copias de ADN presentes en una muestra, o la PCR transcriptasa inversa, adaptada para analizar ARN mensajero monocatenario mediante un paso previo de conversin a ADN complementario bicatenario. Esta tcnica puede usarse en los casos en que se dispone de niveles de ARN insuficientes para la tcnica de Northern blot. Adems de proporcionar informacin cuantitativa, la PCR en tiempo real presenta otra serie de ventajas frente a la PCR tradicional, entre las que se encuentra su mayor sensibilidad (menos falsos negativos), rapidez y menor probabilidad de contaminacin (menos falsos positivos) (17). Existe una PCR especialmente diseada para la deteccin de las metilaciones en los genes implicados en la carcinognesis oral. Es la Methylation-Specific PCR o MSP , que precisa de un tratamiento especial de la muestra con bisulfito sdico para diferenciar las bases metiladas de las no metiladas (10, 11). La Nested-MSP (MN-MSP) aparece como mtodo alternativo a la MSP en aquellos casos en que se analicen muestras con baja cantidad o calidad de ADN inicial, como puede ocurrir con las conservadas en parafina (11). CONCLUSIN Debido a que el cncer oral es una enfermedad asociada a cambios moleculares, genticos y tisulares, el descubrimiento de biomarcadores que puedan detectar estas alteraciones proporciona una potente herramienta para el diagnstico, seguimiento y prediccin del pronstico y de la respuesta al tratamiento.

Se podra afirmar que, a da de hoy, la tecnologa precede al conocimiento, ya que es el rpido desarrollo de estas tcnicas lo que permite avanzar en el conocimiento de las enfermedades a nivel molecular, as como la creacin de dianas teraputicas cada vez ms especficas y fiables. En la actualidad existen numerosas herramientas disponibles para dilucidar las funciones biolgicas de un gen en sus diferentes niveles de expresin (DNA, mRNA o protenas), entre las que se encuentran: la electroforesis en gel, las tcnicas de hibridacin, la tecnologa microarray, los biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la transcriptasa inversa, las tcnicas de Southern, Northern y Western blot, la secuenciacin de ADN, la clonacin de genes, la inmunohistoqumica, el ensayo ELISA y la citometra de flujo. No todas las tcnicas son aplicables a cualquier muestra biolgica, sino que deberemos tener en cuenta el tipo, cantidad y mtodo de conservacin del material de partida, as como los objetivos, tiempo y economa de la investigacin. Actualmente, las tcnicas con mayor utilidad en el estudio del cncer oral son la PCR cuantitativa, los biochips y la tecnologa microarray. La PCR en tiempo real o cuantitativa comprende, adems de las ventajas inherentes a la PCR convencional, el poder de cuantificacin del producto inicial, un aumento en la sensibilidad, una mayor rapidez y menor probabilidad de contaminacin. La hibridacin con microarrays ha esclarecido la relacin existente entre el perfil de expresin gnica y la presencia de diversas patologas. Esta tcnica es adems de gran inters en el ensayo de frmacos anticancergenos. Los biochips consiguen un alto rendimiento de la muestra y de los reactivos y, al igual que los microarrays permiten medir la expresin de decenas de miles de genes simultneamente, pudindose recoger dicha informacin en bases de datos con perfiles de expresin gnica que permitan comprender las funciones e interacciones de estos genes. Una vez se empiezan a crear estas bases de datos, es importante aadir a toda investigacin molecular la denominada bsqueda in silico, a travs de las numerosas herramientas bioinformticas actualmente disponibles, que permiten el acceso a estas bases de datos, muchas de ellas de acceso pblico.
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