Columna de biolixiviacin de minerales de cobre de bajo grado por ferrooxidans Acidithiobacillus en cultivos puros y mixtos con acidfilo hetertrofos

Acidiphilium sp.
Yu Yang un , b , Mengxue Diao c , Kai Liu una , Lin Qian d , Anh Nguyen V. c , Qiu Guanzhou un , b ,
una

Escuela de Procesamiento de Minerales y Bioingeniera de la Universidad Central del Sur, Changsha 410083,

China
b

clave Laboratorio de biometalurgia, Ministerio de Educacin de China, Changsha 410083, China Facultad de Ingeniera Qumica de la Universidad de Queensland, Brisbane, Queensland 4072, Australia Facultad de Ciencias Ambientales e Ingeniera de la Universidad de Donghua, Shanghai 201620, China

http://dx.doi.org/10.1016/j.hydromet.2012.09.003 , Cmo citar o enlazar Usando DOI Permisos y reimpresiones

Abstracto
El objetivo de esta investigacin fue comparar un cultivo puro de Acidithiobacillus ferrooxidans GF con un cultivo mixto con Acidiphilium sp. DX1-1 en la biolixiviacin de minerales de cobre de baja ley. Los experimentos de lixiviacin se llevaron a cabo a temperatura ambiente. La influencia de la temperatura, el pH, potencial redox y la concentracin de hierro total y el ion frrico en solucin en el rendimiento de la biolixiviacin columna tambin se investig. El ADN total fue extrado de las muestras de minerales tomadas a diferentes profundidades de la superficie superior de la columna, y las correspondientes estructuras de la comunidad microbiana se examinaron media nte anlisis de restriccin de ADN ribosmico amplificado (ARDRA). Cobre extracciones por los cultivos puros y mixtos logra 14,87% y 20,11%, respectivamente, durante un perodo de 117 das, incluyendo 15 das de cido pre-lixiviacin y 102 das de biolixiviacin. Las relaciones entre auttrofa y bacterias heterotrficas en las porciones superior e inferior de las columnas eran 1.20:1 y 2.14:1, respectivamente.

Reflejos

 Este trabajo destaca la biolixiviacin de cobre de bajo grado mediante el cultivo bacteriano puro y mixto. El ADN total fue extrado de las muestras de mineral a diferentes profundidades. Las relaciones entre auttrofa y bacterias heterotrficas en las porciones superior e inferior de la columna eran diferentes.

Palabras clave
Biolixiviacin Columna ; Mineral de cobre de bajo grado ;

Ferrooxidans Acidithiobacillus ; Acidiphilium sp.

1. Introduccin
Debido a la continua disminucin en el grado de minerales valiosos en depsitos de mineral y el requisito estricto de la proteccin del medio ambiente, los procesos de recuperacin de metal tradicionales basados en la tostacin se han convertido en menos deseable ( Rawlings et al., 2003 ). La biolixiviacin como una tecnologa emergente ha atrado una amplia atencin por parte de la industria minera, ofreciendo una serie de ventajas econmicas y ambientales (a veces) ms de los enfoques convencionales ( Muoz et al., 2007 ).La oxidacin microbiana de los sulfuros de cobre es fundamental para la extraccin de cobre a partir de minerales de bajo grado de Cu y se concentra ( Rodrguez et al., 2003 ). La calcopirita (CuFeS 2 ) ha merecido una atencin especial ya que es el mineral de cobre -cojinete ms importante en el mundo y a diferencia de muchos otros minerales que es refra ctaria al tratamiento hidrometalrgico. Estudios recientes han sugerido que las reacciones implicadas en la oxidacin de minerales de sulfuro tales como calcopirita se pueden agrupar en la generacin de cido (ecuaciones (3) y (4) , donde M + representa iones tales como K + , Na + , NH 4 + ), el consumo de cido (Ec. (2) ), la generacin de ion frrico (Ec. (2) ) y el consumo de ion frrico (Ec. (1) ) como se ha representado por las reacciones (1) - (4) a continuacin ( Vilcez et al. , 2009 ). ecuacin( 1 ) CuFeS 2 4Fe + 3 + Cu 2 + 5Fe + 2 + + 2S 0 ecuacin( 2 ) 4Fe + 2 + O 2 + 4 H + 4Fe 3 + + 2 H 2 O ecuacin( 3 ) S 0 + 3/2O 2 + H 2 O 2 H + + SO4 2 -

ecuacin( 4 ) 3Fe 3 + + 2SO 4 2 - + 6H 2 O + M + MFe 3 (SO 4 ) 2 (OH) 6 + 6 H + Las principales tcnicas de biolixiviacin para el procesamiento de minerales de sulfuro incluyen la lixiviacin de tanque agitado, y la lixiviacin de montn de volcado ( Mousavi et al., 2006 ). Reactores Montn son ms baratos de construir y operar, por lo que son ms adecuados para el tratamiento de minerales de menor calidad que las que se reactores de tanque agitado ( Rawlings et al., 2003 ). En las ltimas dcadas, con la asistencia bacterias lixiviacin de sulfuros de cobre de baja ley se ha aplicado con xito a la extraccin de cobre a partir de minerales de sulfuro de secundaria en todo el mundo ( Watling, 2006). Laboratorio de simulacin de lixiviacin en pilas normalmente implica el uso de biorreactores de columna, que puede operar como sistemas inundados y aireado, sistemas de percolados utilizando lixiviado reciclado, o el sistema de bomba de aire comprimido ( Puhakka et al., 2007 ). Simulaciones a escala de laboratorio de biorreactores montn permiten examen detallado y la experimentacin que se llevarn a cabo en los parmetros de lixiviacin y minerales oxidantes consorcios microbianos ( Johnson, 2008 ). Los resultados obtenidos en el laboratorio ayudarn a indicar si la lixiviacin bacteriana es posible en condiciones aceptables ( Mousavi et al., 2006 ).

Acidithiobacillus ferrooxidans , una bacteria chemolithoautotrophic obligado, fue reconocido como

un medio para mantener el hierro en forma frrica oxidado para servir como el oxidante de minerales de sulfuro de cobre con el fin de solubilizar cobre ( Olson et al., 2003 ). Hasta la fecha, A. ferrooxidans se ha utilizado como un organismo modelo para el estudio del mecanismo de la produccin de cido en entornos de metal-lixiviacin ( Rawlings, 2005 y Walton y Johnson, 1992 ) y han sido considerados como un microorganismo biomining modelo ( Arena et al., 1995 ) . Aunque acidophiles quimiolitotrficas tienen el papel principal en la aceleracin de la disolucin de minerales de sulfuro, acidophiles hetertrofos contribuir al proceso de red, ya sea directamente (algunas son de hierro-oxidantes) o indirectamente (a travs de sus interacciones positivas con los de hierro y azufre-oxidantes) ( Johnson y Roberto, 1997 ). Se metabolizan materiales orgnicos (lisados, exudados, etc) que de otro modo podran inhibir algunos de sus homlogos auttrofos ms sensibles, de los que se derivan estos materiales ( Johnson y Roberto, 1997 ). Esta es una de las razones por las poblaciones mixtas de acidfilos tienden a ser tanto ms robusto y ms eficiente para la oxidacin de minerales de cultivos puros correspondientes ( Johnson, 2001 ). Acidiphilium spp. son los ms frecuentemente notificadas hetertrofos acidfilas en aguas de las minas cidas y se consideran capaces de adaptarse a temperaturas entre 17 y 45 C, y a valores de pH comprendidos entre 1,5 y 6,0 ( Baker y Banfield, 2003 ). A pesar de que no estn directamente involucrados en la descomposicin de minerales (es decir, que no se oxidan hierro), la mayora de las cepas pueden reducir Fe
3 +

a Fe 2 + , se oxidan a azufre elemental sulfato

( Hallberg y Johnson, 2001 , Hallberg et al., 2001 y Johnson and Bridge, 2002 ) y crecen en una estrecha relacin de comensalismo con la bacteria quimiolitotrficas ( Coram-Uliana et al., 2006 ). La comprensin del papel de las cepas bacterianas y las interacciones potenciales dentro de la poblacin bacteriana en las condiciones definidas biolixiviacin es esencial para la mejora de la eficiencia de los procesos de biolixiviacin ( Akcil et al., 2007 ). Varios intentos se han hecho para dilucidar las interacciones microbianas resultantes ( Barros et al., 1984 , Lobos et al., 1986 y Marchand y Silverstein, 2003 ). Pero ha habido relativamente pocos estudios sobre la microbiologa de biorreactores montn, y la mayora de ellos han analizado las fases lquidas (soluciones de lixiviacin cargada (PLS), refinados, etc) en lugar del propio mineral ( Johnson, 2008 ). En este trabajo se describe la columna de biolixiviacin de m inerales de cobre de baja ley (Meizhou, China) por cultivos puros y mixtos de auttrofos y hetertrofos mesfilos a temperatura ambiente. Los cambios en la estructura de la comunidad microbiana en diferentes profundidades de la columna durante la biolixiviacin tambin se describen y analizan.

2. Materiales y mtodos
2.1. Mineral de cobre de bajo grado
Las pruebas se realizaron en un mineral de cobre de bajo grado obtenido de la mina de cobre de Meizhou (Guangdong, China). La composicin qumica de la muestra de mineral de Cu era 1,587%, 3,892% Fe, Zn 0,133%, 0,244% de Mg, K 2,389%, 0,283% de Ca, Pb 0,574%, 6,135% de Al, Si y S 37,194% 1,759%. El anlisis por difraccin de rayos X (DRX) mostr que la muestra contena aproximadamente el 85% de cuarzo (SiO 2 ), 7,4% lepidocrocita (FeO (OH)) y 7,6% muscovita (KAL 2 (AlSi 3 O 10 ) (OH) 2 ). Calcopirita estaba presente en una pequea concentracin.

2.2. Microorganismos y medios de comunicacin

Anteriormente bacterias aisladas Acidithiobacillus ferrooxidans GF y Acidiphilium sp. DX1-1 de la AMD (drenaje cido de minas) de agua de Gaofeng mina de cobre (Guangxi, China) y la mina de cobre Dexing (Jiangxi, China), respectivamente, fueron utilizados en este trabajo ( Yang et al., 2007b y Yang et al. , 2008). Estas cepas se cultivaron por separado en medio 9K (pH 2,5) ( Silverman y Lundgren, 1959 ) con 44,7 g / l FeSO 4 para A. ferrooxidans GF y en medio 9K libre de hierro con 10 g / L de glucosa para Acidiphilium sp.DX1-1. Las culturas de A. ferrooxidans GF y Acidiphilium sp. DX1-1 se incubaron en matraces Erlenmeyer de 500 ml que contienen 200 ml de medio correspondiente en un agitador rotatorio a 170 rpm y 30 C, respectivamente. Antes de inoculado en las columnas, las bacterias haban sido subcultivadas a travs de varias transferencias en un medio con un pH inicial de 2,5 con el fin de adaptar las bacterias a las

condiciones del experimento. Despus de ser cosechadas, las bacterias se lavaron varias veces con medio 9K libre de hierro y se diluyeron hasta obtener la concentracin de clulas de aproximadamente 1 10 8clulas / ml. A continuacin, un cultivo mixto se prepar mediante la adicin de volumen equivalente de estas dos cepas y la concentracin de clulas de cada cepa fue aproximadamente igual (aproximadamente 1 10 8 clulas / ml).

2.3. Pruebas de biolixiviacin

Un diagrama esquemtico del aparato de lixiviacin se muestra en la figura. 1 . El mineral se moli y se tamiz para obtener un tamao de partcula en el rango de 10 -15 mm. Las columnas se fabrican a partir de 5 mm de espesor de plexigls, que era de 50 cm de altura con un dimetro interno de 6,5 cm. Debido a la pequea racin de dimetro de la columna de dimetro de partcula y el cribado de las multas que elimina la fuerza capilar, se utiliza una alta tasa de riego para asegurar la humectacin uniforme de las partculas minerales. Una placa de soporte de plexigls con mltiples agujeros ( 3 mm) se fij en la parte inferior de la columna permitiendo que el aire a inyectar (35 L / (m 2 min)) y se dispersa uniformemente sobre el lecho de partculas en la columna. La solucin de lixiviacin se recicl a la parte superior de la columna y se instila en un trozo de esponja estril colocado en la superficie superior del mineral de asistir en la distribucin uniforme de la solucin. La solucin de lixiviacin se pas a travs de la muestra de mineral por gravedad y se recoge por un recipiente de vidrio con una capacidad de 3 L. La solucin de irrigacin se recircula a travs de un bucle de lado con una bomba peristltica a la tasa de 0,66 l / h que no lo hicieron causar la saturacin del mineral, que se han observado como las inun daciones o encharcamiento de la solucin de alimentacin en la parte superior del lecho de mineral.

. Figura . 1 Esquema del biorreactor de columna: 1, compresor de aire; 2, filtro de aire; 3, rociador de aire; 4, la placa de soporte; 5, esponja; 6, la bomba peristltica; 7, recipiente de vidrio; 8, mezclador. Opciones Figura

Los experimentos de lixiviacin se llevaron a cabo a temperatura ambiente y la temperatura de la solucin de lixiviado se registr durante todo el proceso de lixiviacin. El experimento de lixiviacin se dividi en dos etapas, incluyendo el cido antes de la lixiviacin y la etapa de lixiviacin microbiana. El mineral se esteriliz en recipientes cerrados por calor seco a 160 C durante 80 h para evitar el crecimiento de microorganismos indgenas. Los minerales (aproximadamente 2,0 kg) se cargaron en las columnas y pre-lixiviadas con 2,5 L de medio 9K libre de hierro (pH 2,5) durante 15 das con el fin de neutralizar los componentes cidos de consumo de los minerales. El pH se ajust usando 10 MH 2 SO 4 en la etapa de pre-lixiviacin, pero no durante la etapa de biolixiviacin. Los experimentos se llevaron a cabo en tres biorreactores de columna designados como A, B y C. La columna A se inocularon con 10% (v / v) A.ferrooxidans GF. La columna B se inocul con 10% (v / v) cultivos mixtos de A. ferrooxidans GF yAcidiphilium sp. DX1-1. La columna

C fue un control abitico. La cantidad de clulas suspendidas en el fuera de la solucin se cont cada 15 min despus de la inoculacin durante aproximadamente 4 h. La prueba de control se llev a cabo mediante la adicin de la misma cantidad de glutaraldehdo (1% (v / v)) a la solucin de lixiviacin y adiciones peridicas de glutaraldehdo, segn sea necesario.

2.4. Mtodos de anlisis

Los componentes de la muestra mineral y residuos de lixiviados se analizaron por XRD. Las muestras de solucin de lixiviacin (1 ml) se retiraron peridicamente para la medicin de pH, potencial y las concentraciones de cobre y hierro redox. El cobre y las concentraciones totales de hierro se determinaron por espectrometra de absorcin atmica (AAS), mientras que la concentracin de Fe 2 + se determin por titulacin con K 2 Cr 2 O 7 ( Tercera et al., 2000 ). El valor de pH se midi con un medidor de pH (PHS-3C, Leici, China), y el potencial redox se midi con un electrodo de platino con un Hg / Hg 2 Cl 2 (SCE) electrodo de referencia. Diferentes electrodos se utilizan para evitar la contaminacin cruzada entre las diferentes columnas. La concentracin de clulas se determin por recuento directo usando un hemocitmetro bajo un microscopio ptico.

2.5. Anlisis de estructura de la comunidad microbiana

2.5.1. Extraccin de ADN y la amplificacin por PCR
Las columnas fueron cerrados tras 102 das de biolixiviacin. El ADN total se extrajo a partir de 10 g de minerales lixiviados de la muestra desde la parte superior y la parte inferior de la columna, respectivamente, por lisis directa de las clulas unidas como se ha descrito previamente ( Zhou et al., 1996 ). Dos cebadores, 63F y 1387R ( Marchesi et al., 1998 ), se utilizaron para amplificar aproximadamente 1300 pb de un fragmento del gen de ARNr 16S consenso. Las condiciones de PCR fueron las mismas como se ha descrito previamente ( Yang et al., 2007a ).

2.5.2. Anlisis de restriccin ADNr Clonacin y amplificada (ARDRA)

Despus del ciclo trmico, los productos de PCR se separaron por electroforesis en gel de agarosa al 1,0% y se visualizaron por tincin con bromuro de etidio bajo luz UV. Las bandas del tamao esperado (aproximadamente 1300 pb) se extrajeron y purificaron con EZNA Gel Extraction Kit (OMEGA, China). El producto de PCR se lig en el vector pGEM-T (Promega, China) y se transform en E. Coli clulas competentes DH5a (Tiangen, Beijing, China). Se construyeron bibliotecas de clones de genes de ARNr 16S, y las colonias suficientes fueron escogidos al azar de cada muestra para el anlisis de restriccin. A partir de entonces, los patrones de bandas ARDRA se analizaron para determinar el porcentaje de cada patrn en las bibliotecas y los clones representativos de cada patrn diferente fueron secuenciados por Sangon (Shanghai,

China). Identificacin de la secuencia se realiz en las instalaciones de BLASTN del Centro Nacional de Informacin sobre Biotecnologa ( www.ncbi.nlm.nih.gov / BLAST ) para identificar la afiliacin filogentica de los microorganismos de biolixiviacin en la comunidad.

3. Resultados y discusin
3.1. Pruebas de biolixiviacin
En los 15 das de pre-cido de lixiviacin, extraccin de cobre de las columnas A, B y C fue de 3,1%, 3,02% y 1,95%, respectivamente ( . Fig. 2 ). El consumo de cido es debido principalmente a minerales de ganga que consumen cido neutralizantes.

. Figura 2. Extraccin de cobre en las columnas A, B y C, y la variacin de la temperatura de la solucin de lixiviado a travs del tiempo. Opciones Figura

Temperatura pareca influir en la tasa de lixiviacin ya sea por causas fsico-qumicas o microbiolgicas. Por lo tanto, la evaluacin de los efectos de la temperatura sobre la lixiviacin bacteriana se considera que es particularmente importante ( Ahonen y Tuovinen, 1992 ). Desde el comienzo de la fase de biolixiviacin, la temperatura de la solucin de lixiviado aument de 23 a 26 C en el da 13 y se prolong durante aproximadamente 4 das ( . Fig. 2 ). Durante este perodo, la extraccin de cobre por el cultivo mixto en la columna B aument notablemente y alcanz 11,07% en el da 17o. Desde el da 17 al da 55, la temperatura de la solucin de lixiviacin se redujo desde 26 hasta 18 C, mientras que las tasas de extraccin de cobre en las columnas A y B se ralentiz. La temperatura ptima de crecimiento de A. ferrooxidans y Acidiphilium sp. DX1-1 fue de 30 C. Por lo tanto, estos microorganismos mesfilos muestran un mejor crecimiento y la actividad de oxidacin cuando la temperatura de la solucin de lixiviado se aproxima a la ptima. Por otra parte,

bajo una condicin de temperatura ms alta, la lixiviacin de cobre puede ocurrir mucho ms rpido, debido a la dependencia de Arrhenius de la velocidad de reaccin de la temperatura ( Leahy et al., 2007 ). Adems, un aumento de la temperatura tambin puede mejorar el rendimiento de cobre debido a que la cantidad de productos de oxidacin del azufre y otros que la capa (y pasivado) la superficie del mineral se reduce ( Rawlings et al., 2003 ). Vale la pena sealar que el cultivo mixto lleva a cabo una tasa de extraccin de cobre relativamente mayor que cultivo puro de A. ferrooxidans hicieron. Esto podra ser debido al pH ms bajo ( figura. 3 ) y superior Fe 3
+

concentracin ( . Fig. 4 ) de la solucin de lixiviado de la columna B. Como los ensayos de

lixiviacin procesado, la temperatura de la solucin de lixiviado continu disminuyendo a alrededor de 11 C . La tasa de extraccin de cobre se desaceler y alcanz 14,87% y 20,11% en el da 102 en las columnas A y B, respectivamente. La extraccin de cobre en el control abitico (Columna C) fue de aproximadamente 2,6% al final de la prueba de lixiviacin.

. Figura 3. Variacin de pH durante la columna de biolixiviacin. Opciones Figura

. Figura 4. hierro total y las concentraciones de iones frricos en soluciones durante columna de biolixiviacin. Opciones Figura

. Figura 3 muestra la variacin del pH fuera de la solucin despus de la inoculacin. En los primeros 2 das despus de la inoculacin, los valores de pH en las columnas A y B disminuyeron a 2,38 y 2,28, respectivamente. Mientras tanto, la solucin de lixiviado de las columnas A y B se convirti en naranja claro.Esto est de acuerdo con la generacin de ion frrico ( . Fig. 4 ). Como era de esperar, el aumento de Fe 3 +concentracin coincidi con un fuerte incremento en el potencial redox (de 300 mV a 540 mV) en ambos fuera de soluciones de las columnas A y B ( . Fig. 5 ). En el da 3 y el da 4, los de las soluciones de las columnas A y B se convirti en verde claro, que coincide con el aumento de la concentracin de cobre ( . Fig. 2 ), e indica que este mineral de cobre de bajo grado puede ser utilizado por los inculos como fuente de energa.

. Figura 5. Variacin del potencial redox durante la columna de biolixiviacin.

Opciones Figura

Sin embargo, el pH de las soluciones lixiviadas de las dos columnas A y B comenz a subir y alcanz 2,9 y 2,83 en el sexto da, respectivamente. Mientras tanto, se observ una pequea cantidad de precipitado de color amarillo, que ms tarde se confirm que era jarosita por XRD (datos no mostrados), en la superficie mineral en la columna A. Precipitaciones en la columna B formado ms tarde y en particular de menos que en la columna A. La fuerte aumento de pH ( . Fig. 3 ) y la disminucin de hierro total y Fe da 6. La tasa de extraccin de cobre muestra una etapa de recesin a partir del da 15 de biolixiviacin. Hay varias razones para este fenmeno. El pH del licor de lixiviacin aument a alrededor de 3,8 ( . Fig. 3 ), lo que indica que el cido se consume continuamente (incluso si en la etapa de recesin). Alto nivel de in frrico se hidroliza fcilmente y contribuye a la formacin de la capa de pasivacin en forma de jarosita cubierto en las partculas de mineral a un pH de aproximadamente 2,75 ( Meruane y Vargas, 2003 ). La capa de jarosita formada alrededor de los minerales impidi el acceso bacteriana a la superficie del mineral y limita la transferencia de masa de oxidante a la superficie y los lixiviados de la superficie ( Stott et al., 2000 ). Los valores de pH variaron por muchas razones, pero el material de cido que consume fue el factor primordial en biolixiviacin experimentos. El pH se increment debido a que el cido se consume continuamente e indica ms cido que consume componentes se e xpone como un resultado del contacto o efectos de biolixiviacin de no contacto. Basado en el anlisis de la composicin qumica de muestras de mineral, se puede inferir que el cido que consumen minerales, tales como Na, K, Ca y Mg, contribuyeron a la elevacin del pH e inhiben el proceso global. Adems, la lepidocrocita representa una cantidad significativa de mineralizacin de hierro que tambin es altamente cido que consume. La variacin del pH indica que, en su conjunto, la cantidad de generacin de cido fue menor que la del consumo de cido, por lo tanto, el pH aument lentamente con el tiempo. La adicin de la cantidad apropiada de cido era necesario para la biolixiviacin eficiente, especialmente para los minerales que contienen bajo contenido de sulfuros (S 2 - 1,759% en nuestro caso). Controlar el valor del pH a un nivel adecuado es importante para la biolixiviacin por varias razones. En primer lugar, los microorganismos son acidfilas activa en medio cido (pH inferior a 3,5). En segundo lugar, el bajo pH ayuda a mantener la suficiente Fe
2 + 3 +

concentraciones ( . Fig. 4 tambin se observaron) en el

en la solucin como una fuente de energa

para los microorganismos hierro-oxidantes. Por otra parte, el bajo pH puede inhibir la formacin de una capa de pasivacin en la superficie de las partculas de mine ral ( Fu et al., 2008 ). Sin embargo, la adicin de cido tambin se traducir en un mayor costo, especialmente en bioheaps que operan comercialmente.

Como se muestra en la figura. 6 , despus de la inoculacin de la densidad de las clulas libres de pura A.ferrooxidans GF en la solucin mantuvo decreciente y alcanza el punto ms bajo de 1,15 10 7 clulas / ml en el minuto 195a. A partir de entonces, su densidad celular libre comenz a aumentar y, finalmente, lleg a 5,25 10 7 clulas / ml en el minuto 270. Este repunte fue permitido por la finalizacin de un ciclo (alrededor de 227 min) del lixiviado que fluye e indica que alrededor del 52,5% de las clulas inoculadas en total se presentaron como las bacterias que nadan libremente. En contraste, los inculos mixta muestra una fijacin ms pronunciada: aproximadamente el 78,5% de los inculos mixta se mantuvo en la columna, ya sea montado en la superficie del mineral o se mantuvo en solucin estancada que fue atrapado en los poros y grietas entre las partculas de mineral ( Petersen y Dixon, 2007 ). En general, los microorganismos crecen montn como biopelculas que no estn sujetas al lavado ( Rawlings y Johnson, 2007 ). Ghauri et al. (2007)inform que auttrofos y hetertrofos acidophiles tienden a vivir en estrecha relacin (a menudo en relaciones mutualistas) y por lo tanto el desarrollo de las comunidades del biofilm mixtos sobre la superficie mineral.

. Figura 6. Variacin de la densidad de clulas libres en las plantas fuera de las soluciones de las columnas A y B despus de la inoculacin. Opciones Figura

3.2. Anlisis de estructura de la comunidad microbiana

Se utiliz el anlisis de restriccin de ADN ribosmico amplificado (ARDRA) para revelar la variacin de la relacin de estas dos bacterias a diferentes profundidades de la columna. El ADN total se extrajo a partir de dos muestras de mineral tomadas de la parte superior y la parte inferior de la columna B, respectivamente.Se identificaron los patrones de bandas ARDRA y los porcentajes de los clones identificados en ADNr 16S biblioteca de cada muestra se muestran en la figura. 7 . Los clones de A. ferrooxidans GF y Acidiphilium sp.DX1-1 en la muestra inferior representaron el 68,1% y el 31,9% de la biblioteca de clones, respectivamente.Pero en la parte

superior de la muestra, el porcentaje de clones de A. ferrooxidans GF se redujo a 54,5% y los clones de Acidiphilium sp. DX1-1 representaba 45,5%.

. Figura 7. Los porcentajes de cada clon identificado en los 16s rDNA bibliotecas de dos muestras. Opciones Figura

Acidez, el suministro de oxgeno, los potenciales redox, la temperatura y las condiciones de solucin qumica varan ampliamente durante el perodo de biolixiviacin. Tales variaciones son propensos a favorecer ciertos microorganismos selectivamente o pueden afectar a una sucesin de organismos en diferente profundidad de la bioheap ( Pradhan et al., 2008 ). Como la mayora de las bacterias de metal-lixiviacin son aerbico y quimiolitotrfica en la naturaleza, entre los factores mencionados anteriormente, suministro de oxgeno desempea un papel importante. Actos oxgeno molecular como aceptor final de electrones en la energa produciendo reacciones implicadas en la lixiviacin bacteriana, es decir, la oxidacin del ion ferroso, azufre reducido de azufre elemental o ( Acevedo y Argentina, 1989 ). Como puede verse en la figura. 1 , el aire se ve obligado en el mineral de embalado de la base del biorreactor de columna, donde el oxgeno estaba casi saturada. A medida que el aire fluye hacia arriba a travs de los espacios vacos, el oxgeno debe ser consumido por la oxidacin microb iana de minerales de sulfuro y hasta cierto punto como resultado la disminucin de la concentracin de oxgeno cerca de la parte superior de la columna. La aireacin de abajo proporciona el oxgeno para promover el hierro y el azufre oxidacin por A.ferrooxidans GF (ecuaciones (2) y (3) ), as como dixido de carbono requeridos por este auttrofa mineral-oxidante microorganismo. Como resultado, A. ferrooxidans GF tendi a ser ms robusto en la parte inferior que en la superior. Las diversas relaciones de estas dos cepas en diferentes partes de la columna eran probablem ente debido al agotamiento del oxgeno desde la parte inferior a la parte superior.

4. Conclusiones

En el sistema de la columna-biolixiviacin mesfila, una extraccin de cobre de 20,11% y 14,87% se logr mediante un cultivo bacteriano mixto y pura A. ferrooxidans cultura, respectivamente, en 117 das, incluyendo 15 das antes de la etapa de lixiviacin cida y 102 das biolixiviacin etapa. El valor de pH de la solucin de lixiviacin jug un papel crtico en la aceleracin de bajo grado mineral de disolucin de cobre en todo el proceso. En la parte inferior y la parte superior de la columna B, A. ferrooxidans representaron el 68,1% y el 54,5%, mientras que Adiciphilium sp. DX1-1, 31,9% y 45,5%, respectivamente. El desarrollo de mtodos para cuantificar con precisin el crecimiento microbiano, la actividad metablica y la interaccin de las columnas sobre el mineral de cobre de bajo grado probablemente mejorar la comprensin del papel de los microorganismos en la biolixiviacin biolixiviacin montn.

Reconocimiento
Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional de Investigacin Bsica de China (no. 2010CB630901 ).

Referencia
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