REGULAO DA EXPRESSO GENICA GENOMA HUMANO EXPRESSO GENICA Cada clula possui uma expresso gnica diferente.

e. H interesse da indstria farmacutica de produzir substancias sintticas atravs da Biologia Molecular. A insulina foi a primeira protena sintetizada pela tcnica de DNA-combinante. DNA e RNA tambm so antgenos ao corpo e por isso ao serem introduzidos geram resposta. Doenas autoimunes so tratadas com molculas desenhadas (criadas pela biologia molecular). O genoma interfere no tratamento (determina se uma pessoa mais sensvel a uma substancia, se houver falha na produo de um protena pode no reconhecer uma substancia e etc). O conhecimento do gentipo do paciente auxilia no tratamento. Gene: qualquer seqncia de bases capaz de codificar um transcrito e depois traduzir em uma protena com funo celular. H muitas seqncias de bases que no conseguem transcrever nada. De 3200 pares de bases, somente 1200 pares formam genes. Desses 1200 pares, alguns nem vo ser traduzidos (ntrons). Clulas do mesmo individuo possuem o mesmo genoma, mas que se diferenciam e realizam funes distintas devido a regulao gnica (gera expresses diferentes). Aproximadamente 5000 genes so expressos em cada clula. Um problema que pode ser encontrado em clulas neoplasicas que elas podem expressar genes que o tecido no expressava antes e que constituem funes de outras clulas. A clula que perde a capacidade de restringir a expresso de genes que no auxiliam em suas funes acaba involuindo, e quanto mais indiferenciado o tecido, maior o risco de neoplasia. REGULAO DA EXPRESSO GNICA A regulao gnica responsvel pela diferenciao das clulas tronco nas demais clulas do corpo. Os sistemas enzimticos da transcrio consegue fazer a fita na direo 5-3. As 2 fitas de DNA transcrevem RNAm, pois a fita anti-sense muda de acordo com o referencial. O RNAm semelhante a fita sense, mas

pareada com a anti-sense.

Fisicamente o gen tem um padro (estrutura). Muitos gens foram descobertos pela sua estrutura, porem sua funo foi descoberta depois (ainda esto sendo conhecidas, porque no se conhece a funo de muitos gens). A descrio de um gen deve seguir a orientao 5-3. A velocidade de transcrio varia de clula em celula (devido aos diferentes elementos reguladores). Todas as clulas tem o mesmo gen, o que muda a regio reguladora que controla a expresso gnica e determina se o gen ser expresso ou no.

 Elemento responsivo: da especificidade ao gene e sendo o regulador principal da expresso, recebe e reconhece sinais de estimulo e de inibio do gene. Os elementos responsivos so diferentes para cada gen. REGULAO CIS: a regulao prxima a regio promotora (elemento responsivo e elementos proximais) contida no prprio DNA e que determinam se o gen ativado ou no. REGULAO TRANS: feita atravs de fatores de transcrio (sua interao, ligao ou no com os locais do DNA) que se ligam nos elementos distais q influenciam na velocidade e intensidade da transcrio. Fator de transcrio: protena nuclear que pode se ligar ao DNA de forma estvel. Seu conjunto modula a expresso gnica (reprime ou libera). Os fatores de transcrio podem se ligar ao DNA pois possuem formato especifico. Ao conhecer a estrutura desses fatores pode se descobrir sua funo. Os elementos de transcrio so os fatores de transcrio. Quando o elemento responsivo ativado, abremse stios de ligao no TATA box para protenas (TBP) e elas estabilizam a RNA polimerase para ocorrer a transcrio. Os elementos distais e proximais regulam o tempo de transcrio. Quando essas protenas se aglutinam e se ligam ao TATA box, provem condies para a RNA poliemerase ativar o cdon de iniciao e comear a transcrever. MAQUINARIA DE TRANSCRIO Fatores de transcrio no especficos (protenas que se ligam a regio promotora criando uma ala) so componentes dessa maquinaria. Elas so comuns a varias clulas pois s possibilitam a transcrio, mas no a determinam (funo dos elementos responsivos). A ligao das protenas ao TATA box serve s para fixar a RNA polimerase. A ala formada pela maquinaria (fixada na regio promotora) serve para estabilizar a reao. REGULAO DA TRANSCRIO Elementos responsivos: respondem a um estimulo especifico externo ao ncleo.

Ex: cortisol entra na clula, se liga a um receptor prprio e muda a sua conformao. Depois esse complexo se liga a outro complexo que sofreu o mesmo processo e se dimeriza. Abrem-se stios de ligao que possibilitam esse dmero entrar no ncleo e se ligar ao elemento responsivo desse receptor dimerizado. De 40.000 gens, somente 3.000 possuem elemento responsivo para tal complexo (dmero), por exemplo. 1 substancia acaba regulando vrios genes ao mesmo tempo, podendo ter efeito desejado ou no. O elemento de resposta tem uma estrutura padro (2 sequencias de bases intercaladas por 3 bases qualquer). As seqncias de lados inversos de fitas diferentes so imagens especulares uma da outra. Alguns genes possuem mltiplos elementos responsivos, intensificando a expresso. Nesse caso a transcrio dose dependente, quanto mais elementos ativados, maior a expresso. REPRESSO DA TRANSCRIO Represso em Cis: ocorre alterao na regio prxima a promotora ou deficincia no estimulador da expresso ou ate mesmo a ligao de substancias inibidoras nessa regio. Represso em Trans: competidora (uma protena se liga a outra que estimula a transcrio e ela no consegue se ligar ao elemento responsivo). Outro exemplo da represso em trans quando o fator de transcrio se liga ao complexo ativador e faz suas protenas se separarem, inibindo a transcrio. A regulao em cis ocorre de forma direta no elemento responsivo pela presena de ligantes e isso estimula ou inibe a maquinaria de transcrio. A regulao em trans controlada pelas protenas nucleares de forma indireta, causando efeito nas protenas (efeito de transcrio). Regula a velocidade da transcrio. O aumenta do AMPc celular, possibilita as protenas do citoplasma serem fosforiladas e adquirirem funo. Cada grupo delas cumprir uma funo especifica (determinada pelo DNA) e somente 3 % se tornar elementos de resposta (as que conseguem se ligar de forma estavel ao elemento responsivo). Genes house-keeping: genes que so transcritos todo o tempo de forma comum em todas as

clulas. Geralmente produzem protenas que tem funo de manuteno (ex: protenas que tem ao na mitocndria). Fatores de crescimento e isoleucinas dimerizam um receptor de membrana que ativa a fosfolipase C. A fosfolipase C forma IP3 que ativa a PKC, que age no NFkB. Este entra no ncleo e pode se ligar ao elemento responsivo ou no cortisol (ai se inativa, pois no consegue se ligar ao seu elemento responsivo). Ao se ligar ao elemento responsivo, o NFkB produz interleucinas que ativam o sistema imune. MODULAO INIBITORIA EM TRANS: o dmero glicocortizide (GTM) tetrameriza o dmero AP-1 (se liga no ncleo aumentando a proliferao celular neoplasias) no deixando se ligar ao receptor. ESTIMULADORES x SILENCIADORES Elementos estimuladores (enhancers): se ligam a maquinaria, criando a ala e possibilitando a transcrio. Elementos silenciadores (silencers): no deixam formar a ala, se ligam no mesmo lugar das protenas que se ligam a fita e a maquinaria (que fariam a ala) impossibilitando a expresso de determinado gen. Esses elementos so responsveis pela diferenciao, pois protenas produzidas pelo prprio genoma de cada clula age como estimulador ou silenciador. Quanto mais estvel a ala, maior a durao da transcrio. Por isso fatores de transcrio regulam tambm a velocidade do processo, pois a estabilizao depende da ligao destes com a maquinaria para produzir a ala. Localizao varivel podendo ser muito distante. Mecanismos clssicos de ativao e represso. Mecanismo de represso passivo (local competitivo). NIVEIS DE REGULAO DA TRANSCRIO TRANSCRIO CLSSICA: um gen possui somente uma unidade de transcrio formando uma protena com funo celular. TRANSCRIO ALTERNATIVA: ocorrem diferentes transcries de um mesmo gen, formando isoformas de uma protena, ou seja, a mesma estrutura gnica pode produzir mais de um RNA diferente. H dois caminhos para ocorrer a transcrio alternativa: o Presena de regies promotoras diferentes num mesmo gen. o Ocorrncia do Splicing alternativo (juntar os xons, separados por espaos criados pela retirada dos ntrons). o Ambos os caminhos ocorrem em tecidos especficos, em estagios de desenvolvimento especifico, se expressando diferentemente em diferentes sexos.

Esses caminhos possibilitam a variedade protica (isoformas). Ex: Hormnio do crescimento (isoformas possuem mesma funo nesse caso, mas com intensidades diferentes). o Cada tecido tem predomnio de uma isoforma diferente. Ex: adrenalina predomina no corao e adrenalina predomina no siste4ma respiratrio. o As isoformas podem ter funes antagnicas. O controle da transcrio especifico para cada clula, tecido e rgo, sendo indutivel por outras clulas e meio externo (produzem substancias que estimulam ou inibem). O meio extra celular modula e controla a velocidade e durao da transcrio. o MECANISMOS EPIGENTICOS

a demonstrao de como fatores extracelulares conseguem modular permanentemente a expresso gentica. METILAO: adio de grupos metil nas citosinas do DNA e das protenas nucleares. o O DNA ou a Histona metilada enrola o DNA (condensa) e impede a abertura dele para o encaixe da maquinaria de transcrio. o a forma mais eficaz de silenciar o gene. o As citosinas da regio de regulao so mais protegidas contra esse processo e portanto no sofrem metilao (ilhas de CpG, citosinas do gene de manuteno e da regio reguladora). o Ao longo da vida, naturalmente perdemos citosinas (viram timina ou uracila). o Quando os cromossomos esto acetilados e no metilados, eles esto abertos e prontos a receber a maquinaria de transcrio, porem quando so desacetilados e metilados, se fecham (tornam-se condensados). o A metilao dar origem especificidade nas clulas (genes metilados no sero expressos). o Quando se forma o zigoto, se mantm sinais de que clulas sero remetiladas e onde (em que gen) ocorrer esse processo. o Os gens do ocito sero mais expressos do que os do espermatozide, pois so menos metilados. EXEMPLOS DE CONTROLE EPIGENTICO DA METILAO INATIVAO DO CROMOSSOMO X o H necessidade de inativao de um gen de 1 cromossomo quando a interao cause alguma doena por exemplo (do cromossomo da me ou do pai). o Nas mulheres um alelo est ativo e outro no. o Ocorre metilao de um alelo e do outro no nas mulheres (controle da dosagem gnica). HIPERMETILAO DOS GENES DA SUPRESSO TUMORAL o Se os genes da supresso tumoral estiverem hipermetilados ocorre neoplasia.

IMPRINTING a excluso allica dependente da origem parental. Utiliza a metilao para silenciao gnica. Alguns genes autossmicos so sempre do pai ou sempre da me (determinados por sinais durante a formao do gameta ou fecundao). Aproximadamente 80 pares de genes sofrem esse tipo de fenmeno. O que ocorre que o fentipo esperado ser alterado devido a supresso de um gen (por metilao) de origem materna ou paterna. Ex: um pai negro e uma me branca deveriam gerar um filho mulato, mas devido a supresso dos genes responsveis por essa caracterstica no pai a criana nasce branca. Geralmente o alelo paterno mais reprimido (pois o espermatozide possui maior grau de metilao). Se houver hiperexpressao de um gen ou hiperrepressao no mesmo lcus, ocorre doenas. Ex: Sndrome de Beckwith-Wiedemann (perda do imprinting do alelo materno), Sndrome de Angelman (dissomia uniparental paterna-deleo do alelo materno), etc. FALHAS DA EXPRESSO PROBLEMAS NO SITIO DE SPLICING: Quando ocorre splicing anormal, o RNA m no tem a mesma meia-vida e o RNA anormal transcrito fica com menor estabilidade, produzindo menos protenas ou muito mais do que deveria. o Aumento ou diminuio do RNA (h fatores que regulam a estabilidade do RNA ou sua efetividade para traduzir). o Esse aumento ou diminuio de RNA causado pela metilao DNA, acetilao das histonas ou imprinting que alteram a expresso gnica. o Erros no processamento de RNA gerando molculas instveis. PROBLEMAS COM REGIO PROMOTORA E/OU REGULADORA: pode ocorre rearranjo ou inverso gnica na regio reguladora, causando hiperatividade ou hipoatividade. Ex: hiperatividade na protena RET (causa cncer, pois estimula a diviso celular). o O rearranjo ou inverso at um determinado tamanho da regio reguladora h funcionamento anormal, se for maior no h transcrio. o Doena do X-Fragil: causa mais freqente de retardo mental masculino. Na regio telomrica do X tem um gene com repeties CGG. Quando essas repeties ultrapassam 200 em numero, o gene codificador de uma determinada protena para ou produz menos dela ou produz protenas sem funo. o Doena de Huntington: aumento da repetio de CAG causando morte neuronal (essa alterao devida ao baixo metabolismo energtico, alterao das mitocndrias, stress oxidativo, e etc). PROCESSAMENTO DO RNA RNA INTERFERENCIA: alem de outras alteraes na transcrio, o RNA transcrito pode ser silenciado ou degradado, no conseguindo produzir protenas. Toda a vez que o corpo entra em contato com RNAm defeituoso ou com RNA Sn ou DNASn (pequenos fragmentos deles), produz RNA interferncia (possuem trechos dupla fita) para combater se for prejudicial.

 Esses RNAs interferncia se ligam a esses RNAs ou DNAs estranhos impedindo sua traduo ou incorporao no material gentico. Possumos no corpo complexos proticos chamados RISC (Complexo protico de silenciamento produzido pelo RNA) que reconhecem micro RNAs ou micro DNAs invasores se ligando a eles, estimulando a produo de mais RISC e neutralizando esses fragmentos invasores.