Determinacin de ADN

1. Objetivos:
El objetivo principal de este experimento es el poder observar sin ayuda de ningn instrumento ptico (microscpico) el ADN, en diferentes muestras.

2. Fundamento Terico:
El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, son estructuras costituidas por dos pequeos filamentos o brazos, que pueden ser iguales o desiguales, esta unidos por un punto comn llamado Centrmero; varan en forma y tamao, pueden verse fcilmente al momento de la divisin celular por medio de un microscopio. Estructura del ADN: El ADN est formado por unidades llamadas nucletidos, cada una de las cuales tienes tres sustancias: el cido fosfrico, un azcar de cinco carbonos llamado pentosa y una base nitrogenada. El cido fosfrico forma el grupo fosfato; la base nitrogenada es de cuatro clases: Adenina(A), Guanina (G), Citocina(C) y Timina (T). Segn los descubrimientos del ADN, James Watson y Francis Crick, el ADN est formado por una doble cadena de nucletidos que forman una especie de doble hlice semejante a una escalera en espiral; a los lados se disponen en forma alternada un fosfato y un azcar y en los peldaos dos bases nitrogenadas. Funciones y Propiedades del ADN a) El ADN controla la actividad de la clula. b) Es el que lleva la informacin gentica de la clula, ya que las unidades de ADN, llamadas genes, son las responsables de las caractersticas estructurales y de la transmisin de estas caractersticas de una clula a otra en la divisin celular. Los genes se localizan a lo largo del cromosoma. c) El ADN tiene propiedad de duplicarse durante la divisin celular para formar dos molculas idnticas, para lo cual necesitan que el ncleo existan nucletidos, energa y enzimas.

3. Materiales e Instrumentos:
Materiales:

Vegetales (Hojas de espinaca) Semillas(garbanzos, porotos o lentejas) Hgado de pollo Sal sin Yodo Detergente liquido Enzimas: que pueden ser: Ablandador de carne, jugo de anan(pia) papana o solucin de lentes de

contacto.(Cualquiera de los mencionados) Alcohol etlico 95% (funciona tambin con sapropel) Instrumentos: Licuadora Deposito graduado de un litro Colador Probeta de 10 ml Tubos de ensayo

4. Tcnica:
1) Lo primero es tomar taza de espinacas, porotos o lentejas e hgado de pollo (cada elemento es para una determinacin) una pizca de las y una taza de agua. Todo eso se coloca en una licuadora y se procesa durante 15 segundos. Finalmente, la mezcla resultante se filtra para eliminar cualquier partcula de gran tamao. 2) A la mezcla que obtuviste agrgale 2 cucharitas de detergente lquido y revolver lentamente sin formar espuma. Luego deje reposar por 5-10 minutos. Finalmente coloca la mezcla en 3 tubos de ensayo de prueba. 3) Agregar a cada envase una pizca de ablandador de carne y revolver muy despacio. Si lo haces rpidamente tal vez no logres ver nada al final del experimento. Si no tienes ablandador de carne puedes utilizar jugo de anan (pia) o solucin de lentes de contacto. 4) Inclina el envase de la mezcla y verter muy lentamente alcohol etlico 95% de modo que se forme una capa sobre la mezcla anterior. Agregar tanto alcohol como mezcla hay en los tubos de ensayo. El ADN comenzara a coagular como una maza blancuzca y subir hasta la parte donde est el alcohol. Puedes retirarlo con la ayuda de un palillo. En este caso las protenas y la grasa se quedan en la parte acuosa de la mezcla y el ADN asciende hasta llegar al alcohol. El ADN es una molcula muy larga y tiende a agruparse. De ah la facilidad para retirarla. Por qu funciona as? El agua con una pizca de sal es una mezcla isotnica. Es para que lo que se va a sacar de la semilla sufra lo menos posible. En la licuadora se rompe la

cubierta de la semilla. Pero las clulas vegetales enteras (son demasiado pequeas). Para eso se usa el detergente. Zumo de pia, de papaya, abanador de carne todo esto son enzimas que cortan las protenas. Se trata de romper lo que hay dentro de la clula dejando intacto el ADN. Al aadir el alcohol se consigue separar el ADN, que tiene ms facilidad con el alcohol que con el agua.

5. Cuestionario:
1) Esquematice que tipos de azcar se encuentran en el ADN y ARN: Son pentosas de tipo ribosa para el ARN y desoxiribosa para el ADN, a continuacin algunas caractersticas de estos azucares. La Ribosa La ribosa es una pentosa de cinco tomos de carbono que es muy importante en los seres vivos porque es el componente del cido ribonucleico y otras sustancias como nucletidos y ATP. A partir de la ribosa se sintetiza la desoxirribosa en el ciclo de las pentosas. Adems se considera una de las protenas oligosacaridas ms solubles en agua que existen en la tierra, por tanto la ribosa reacciona con pentosa y forma ribosipentosa que es conocida como la vitamina c de loa ctricos. La desoxiribosa Es un monosacridos de 5 tomos de carbono (una pentosa) derivado de la ribosa, que forma parte de la estructura de nucletidos del ADN. Su frmula es C5H10O4. 2) Esquematice las estructuras de la Adenina, Citocina, Tiamina, Guanina. ADENINA TIAMINA

CITOSINA

GUANINA

3) Diferencia entre las bases nitrogenadas puricas y piridimicas. Las base pricas estn formadas por un anillo doble (Un doble heterociclo), siendo las ms abundantes en la clula, la adenina y la guanina. Mientras que las pirimidicas, estn compuestas por un anillo simple y son, la citosina, el uracilo y timina. Entonces: Las bases nitrogenadas que forman parte de los cidos nucleicos son de dos tipos, pricas y pirimidnicas. Las bases pricas derivadas de la purina (fusin de un anillo pirimidnico y uno de imidazol) son la Adenina (6-aminopurina) y la Guanina (2-amino-6-hidroxipurina). Las bases pirimidnicas (derivadas de la pirimidina) son la Timina (2,6-dihidroxi-5metilpirimidina o tambin llamada 5-metiluracilo), Citosina (2-hidroxi-6aminopirimidina) y Uracilo (2,6-dihidroxipirimidina). Las bases nitrogenadas que forman normalmente parte del ADN son: Adenina (A), Guanina (G), Citosina y Timina (T). Las bases nitrogenadas que forman parte de el ARN son: Adenina (A), Guanina (G), Citosina (C) y Uracilo (U). Por tanto, la Timina es especfica del ADN y el Uracilo es especfico del ARN.

Bases Pricas

Bases Pirimidnicas

4) Cmo se forman los nuclecilos y nucletidos? Un nuclesido es una molcula monomrica orgnica que integra las macromolculas de cidos nucleicos que resultan de la unin covalente entre una base heterocclica con una pentosa que puede ser ribosa o desoxirribosa. Ejemplos de nuclesidos son la citidina, uridina, adenosina, guanosina, timidina y la inosina. Los nuclesidos pueden combinarse con un grupo fosfrico (cido fosfrico: H3PO4) mediante determinadas quinasas de la clula, produciendo nucletidos, que son los componentes moleculares bsicos del ADN y el ARN. Los nuclesidos pueden ser de dos tipos, dependiendo de la pentosa que contengan:

Ribonuclesidos: la pentosa es la ribosa Desoxirribonuclesidos: la pentosa es la 2-desoxirribosa

La citidina es un nuclesido que se forma cuando la citosina se aparea con un anillo de ribosa (tambin denominado ribofuranosa) a travs de un enlace glucosdico -N1. Si la citosina se aparea con un anillo de desoxirribosa se la denomina desoxicitidina.

La Uridina es una molcula (conocida como nuclesido) formada cuando la base nitrogenada uracilo es enlazada a un anillo de ribosa (tambin conocida como ribofuranosa) mediante un enlace glucosdico -N1.Si el uracilo es enlazado a un anillo de desoxirribosa, el compuesto resultante se denomina desoxiuridina.La proteina que repara uracilos en el DNA es la uracil-glicosilasa

La Guanosina es un nuclesido que se obtiene al enlazar la base nitrogenada guanina a un anillo de ribosa mediante un enlace glucosdico -N9.

La la de

timidina es un base nitrogenada desoxirribosa

nuclesido formado cuando timina se enlaza a un anillo mediante un enlace

glucosdico -N1. La inosina es un nuclesido intermediario de las rutas de sntesis de cidos nuclicos que se forma cuando la hipoxantina se une a un anillo de ribosa (tambin conocido como ribofuranosa) a travs de un enlace glucosdico -N9. A nivel industrial se produce principalmente para su adiccin a alimentos preparados, sopas de sobre etc., ya que tiene un efecto potenciado del sabor.

Formacin de nucletidos Cada nucletido es un ensamblado de tres componentes:

Bases nitrogenadas: derivan de los compuestos heterocclicos aromticos purina y pirimidina. o Bases nitrogenadas purnicas: son la adenina (A) y la guanina (G). Ambas forman parte del ADN y del ARN. o Bases nitrogenadas pirimidnicas: son la timina (T), la citosina (C) y el uracilo (U). La timina y la citosina intervienen en la formacin del ADN. En el ARN aparecen la citosina y el uracilo. o Bases nitrogenadas isoaloxacnicas: la flavina (F). No forma parte del ADN o del ARN, pero s de algunos compuestos importantes como el FAD Pentosa: el azcar de cinco tomos de carbono; puede ser ribosa (ARN) o desoxirribosa (ADN). La diferencia entre ambos es que el ARN si posee un grupo OH en el segundo carbono. cido fosfrico: de frmula H3PO4. Cada nucletido puede contener uno (nucletidos-monofosfato, como el AMP), dos (nucletidos-difosfato, como el ADP) o tres (nucletidos-trifosfato, como el ATP) grupos fosfato

Nomenclatura

Nombre

Imagen

dAMP Desoxiadenilato (desoxiadenosina 5'monofosfato)

dTMP Desoxitimidilato (desoxitimidina monofosfato) 5'-

dCMP Desoxicitidilato (desoxicitidina monofosfato) 5'-

dGMP

Desoxiguanilato (desoxiguanosina 5'monofosfato)