INTRODUCCION A LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION MOLECULAR UV/VIS Y DE INFRARROJO CERCANO

Cap. 13

Medicin de la absorbancia y la transmitancia

Recipiente produce prdidas por:
reflexin (aire/pared, pared/solucin) dispersin (molculas grandes) absorcin (paredes recipiente)

Comparar potencias de recipiente de muestra con recipiente conteniendo disolvente (blanco).

Ley de Beer

Potencia radiante
Es la energia (joules) de la radiacion incidente en el detector, por m2 y por segundo.

La potencia del haz se atenua de Po hasta P por la interaccin entre los fotones y las

partculas absorbentes.

Transmitancia
Es la fraccion de radiacion incidente transmitida por la solucion.

P T Po
P %T x 100 PO

Absorbancia

PO A log 10T log P

A abc

Absortividad y absortividad molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a traves de la solucin, y a la concentracin c de la especie absorbente.

A abc
Donde a es la absortividad (constante de proporcionalidad).

 La magnitud de a depende de las unidades para b y c. Si b esta en cm y c en g/L, a esta en L g-1 cm-1.

Si b esta en cm y c en mol/l, la absortividad se denomina absortividad molar, e (L mol-1 cm-1 )

A ebc

Aplicacin de la ley de Beer a mezclas

Suponiendo que no haya interaccin entre las distintas especies:

Atotal A1 A2 ... An Atotal e 1bc1 e 2bc 2 ...enbcn

Donde 1, 2, , y n son los componentes absorbentes.

Limitaciones de la ley de Beer

La ley de Beer solo describe absorcion en soluciones diluidas
A concentraciones > 0.01M la distancia promedio entre las moleculas absorbentes hace que cada molecula interactue con las moleculas vecinas, alterando capacidad de absorber radiacion de determinada l Interaccion ocurre tambien a bajas concentraciones de moleculas absorbentes pero a alta concentracion de otras especies (electrolitos)

Algunos iones o molculas orgnicas de gran tamano no cumplen estrictamente la Ley de Beer aun en soluciones diluidas.

Los cambios de concentracin no deben causar alteraciones significativas en el h de la solucin.

Desviaciones de la ley de Beer

Desviaciones qumicas
Ocurren cuando un analito se disocia, asocia o reacciona con el disolvente, resultando en un producto con espectro de absorcin diferente. Indicadores cido-base

H In HIn color2
color1

 Desviaciones instrumentales con

radiaciones policromticas

El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo se da con radiaciones monocromticas

Los dispositivos seleccionadores originan una banda simtrica de longitudes de onda en torno al valor deseado. A medida que aumente la diferencia entre las absortividades molares para las distintas longitudes de onda, las desviaciones son mayores.

 Desviaciones instrumentales en
presencia de luz parsita
Radiacin proveniente del dispositivo seleccionador esta contaminada con radiacin dispersada o parasita (por dispersin y reflexin en superficies interiores del aparato). Se obtienen absorbancias menores a las tericas.

Efecto de la anchura de la rendija en las mediciones de absorbancia

Anchura de la rendija: 1.0, 0.5 y 0.1 mm (milmetro) se refiere a la anchura del dispositivo mecnico (rendija) que limita la cantidad de luz o radiacin que llega a la muestra. Rendija: dos piezas de metal con bordes afilados, paralelos y en el mismo plano.

 Para conseguir espectros complejos bien resueltos se requieren anchuras de rendija estrechas.

Anchura de rendija = 0.1 mm

Anchura de rendija = 0.5 mm

Anchura de rendija = 1.0 mm

 Ancho de banda: se define como el espacio de ajuste del monocromador necesario para mover la imagen de la rendija de entrada a travs de la rendija de salida. Se expresa en unidades de . Ejemplo: 0.5 nm, 9.0 nm, 20 nm.

 Anchura de banda efectiva: es la mitad de la anchura de banda cuando las dos anchuras de las rendijas son iguales; se aprecia que es el intervalo de longitudes de onda que salen del monocromador para un ajuste dado de longitud de onda. Tambin se expresa en unidades de . Ejemplo: 0.5 nm, 9.0 nm, 20 nm.

 A menor anchura de banda efectiva mayor resolucin espectral.

A menor ancho de rendija menor anchura de banda efectiva.

Instrumentacin

 Fotmetros: utlizan filtros como selectores de , son sencillos y econmicos, hay de haz simple y de doble haz.

Fotmetros
Sencillos Econmicos Filtros (cada uno para distinta regin del espectro: sol roja, filtro verde) Buena relacion senal/ruido Cuando la pureza espectral no es importante Uno y doble haces

Espectrofotmetros
Regin visible (380-800 nm)
Sencillos Un haz Monocromador de red Anlisis cuantitativo Spectronic 20 $1000 - 3000

UV/VIS (190 o 210 800 o 1000)

Lamparas intercambiables W / H2 Tubos fotomultiplicadores Redes de dispersin $2000 8000 un haz, $4000 15000 doble haz

Haz sencillo

Doble haz en el espacio

Dole haz en el tiempo

RECIPIENTES PARA MUESTRAS

Todos los instrumentos espectroscopicos a exepcin de los de emision, requieren de recipientes para las muestras: celdas o cubetas. Cuarzo o slice fundida

UV (<350 nm), y vis e IR

Vidrios de silicato o plstico

350-2000nm

NaCl, KBr, TlBr o Tll cristalinos

IR

 Calibrar cubetas para detedctar diferencias por rayaduras y desgaste 0.1-10 cm (1 cm + comn)

Planas (perpendiculares al haz) mejores que cilndricas (minimizan prdidas por reflexin) Limpieza

Eliminar huellas dactilares, grasa y otras manchas Limpiar antes y despues superficie externa con papel para lentes empapado con MeOH grado espectromtrico No tocar ventanas

FUENTES DE RADIACION
Continua Potencia no debe variar en el intervalo de l

Lmpara de D2 o H2

Espectro continuo de radiacin de 160-375 nm

D2 Ee D2* D' D' 'hv

E 2 ED 2* ED' ED' 'hv

La suma de las energas cinticas (ED y ED) pueden variar desde 0 hasta ED2* (energa cuantizada fija del D2*). La frecuencia del fotn puede variar de forma continua.

Deben tener ventanas de cuarzo (el vidrio absorbe fuertemente las l menores a 350 nm). La lmpara de deuterio produce una esfera de radiacin algo ms grande e intensa (> 1 a 1.5 mm de dimetro) que el hidrgeno.

 LAMPARAS DE FILAMENTO DE W

350-2500nm Lmite inferior impuesto por cubierta de

vidrio que aloja filamento. Control estricto del voltaje. Tungsteno/halgeno mas eficientes, mayor vida, tambin en regin UV.

PROBLEMA: La furosemida, peso molecular 330.7 g/mol, es un diurtico, derivado del cido antranlico, que se administra en casos de hipertensin, enfermedades renales, cirrosis heptica, etc. En disolucin alcalina presenta en espectro de absorcin UV/VIS con mximo de absorcin centrado en 271 nm. Se analiz la cantidad de furosemida en una tableta disolviendo su contenido en disolucin de NaOH 0.1 molar aforando en un baln de 100 ml. Un volumen de 1.0 ml de esta disolucin se transfiri a un baln de 50 y se midi en un espectrofotmetro UV/VIS a 271 nm, dando una absorbancia de 0.475 en una cubeta de 1.0 cm.

Para hacer la curva de calibracin se prepararon una serie de disoluciones patrn de este frmaco, y se midieron a la misma longitud de onda en una cubeta de 1.0 cm. Obtener la ecuacin de la curva de calibracin concentracin versus absorbancia. Determinar la absortividad molar de la furosemida en las condiciones dadas. Determinar la cantidad de frmaco presente en la tableta expresada en miligramos. La sensibilidad del mtodo. El lmite de deteccin del mtodo. El porcentaje de transmitancia para una tableta de dicho frmaco con un contenido de furosemida igual al doble de la cantidad calculada en el inciso c).

Concentracin mol/L 0.00 1x10-5 2x10-5 3x10-5 4x10-5 5x10-5

Seal (A, absorbancia a =271 nm) 0.035 0.197 0.395 0.59 0.79 0.985

Desviacin estndar de la seal A 0.0089 0.0039 0.0099 0.0109 0.0118 0.0098