RNA aspectos funcionais e estruturais

objetivo

Ao nal desta aula, voc ter a oportunidade de: Descrever os aspectos funcionais e estruturais do RNA.

AULA

Pr-requisito
Para acompanhar mais facilmente esta aula, importante que voc reveja alguns conceitos de Qumica e Bioqumica e, principalmente, a Aula 3 de nossa disciplina.

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APRESENTAO
Na Aula 4, voc teve a oportunidade de estudar os aspectos funcionais e estruturais do DNA. Alm disso, voc viu que, com base na estrutura de DNA dupla hlice, em particular de uma das peculiaridades dessa estrutura complementaridade de bases , foram propostos diversos mecanismos associados a processos biolgicos envolvendo a participao do DNA. Ns, os biologistas moleculares, acreditamos que a Biologia Molecular de fato se iniciou com a proposio do modelo de estrutura do DNA. Nesta aula, para concluir o tema cidos nuclicos, voc ver que o RNA bastante distinto do DNA no que diz respeito aos aspectos funcionais e estruturais. Entretanto, assim como para o DNA, a estrutura do RNA est intrinsecamente associada funo exercida por esta molcula.

ASPECTOS FUNCIONAIS DO RNA

O experimento de Fraenkel-Conrat e Singer, em 1957, citado na Aula 2, foi importante no sentido de identicar o RNA como material gentico de um vrus que infecta plantas, o TMV. Voc se lembra? O papel do RNA como material gentico se restringe a grupos especcos de vrus. Alm da funo de armazenamento de informao gentica, funes variadas podem ser exercidas por diferentes molculas de RNA, sendo que a principal delas est associada a sua participao no uxo da informao gentica. O que ser isso? Toda a informao armazenada na molcula de DNA, que sabemos no ser pouca, em algum momento tem de ser utilizada, seja para determinar o crescimento de uma clula, seja para determinar fentipos mais evidentes, como aqueles que diferenciam uma clula da outra ou mesmo um organismo complexo do outro. Os fentipos distintos s se manifestam por causa da produo de protenas especcas. Essas protenas, por sua vez, so produzidas de acordo com a informao armazenada nos genes. Portanto, existe uma relao direta entre o que est contido em um gene e o tipo de protena sintetizada. Ao processo global, desde a utilizao da informao contida no gene (DNA) at a sntese de uma molcula funcional, chamamos uxo da informao gentica. Podemos dizer, ainda, que os genes so perpetuados como seqncias de cidos nuclicos, DNA ou RNA, mas funcionam aps serem expressos sob a forma de protenas.

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no citoplasma, bastante provvel que exista uma molcula, diferente do DNA, capaz de carrear a mensagem gentica do ncleo para o citoplasma, voc no acha? Ainda no incio da dcada de 1950, o RNA se mostrou um forte candidato para desempenhar esta funo, uma vez que j se sabia que as molculas de RNA podem ser encontradas tanto no ncleo como no citoplasma, e que o aumento da sntese protica acompanhado pelo aumento da quantidade de RNA citoplasmtico e do aumento de sua taxa de renovao tambm. Hoje em dia, sabe-se que o RNA desempenha no s essa funo como tantas outras envolvidas na expresso da informao gentica da clula. O conhecimento acumulado ao longo dos ltimos 50 a 60 anos de pesquisa nos permite dizer que a expresso de um gene sob a forma de protenas envolve duas etapas distintas: a transcrio, que se refere ao conjunto de reaes envolvidas na sntese de RNA de acordo com a seqncia de bases do DNA, e a traduo, que consiste em um conjunto de reaes envolvidas na sntese de protena, sendo que a ordem dos aminocidos na protena formada determinada pela ordem de bases nitrogenadas presentes no RNA sintetizado. Na Figura 5.1, esto representados os trs principais processos envolvidos na perpetuao do material gentico e no fluxo da informao gentica. A replicao, assunto do Mdulo 2, responsvel pela herana do material gentico, DNA ou RNA. A transcrio (tema do Mdulo 3) e a traduo (tema do Mdulo 4) so responsveis pela converso da informao contida no DNA em protenas. Tambm est representada na Figura 5.1 a transcrio reversa, processo caracterstico de alguns vrus de RNA, como, por exemplo, o HIV (do ingls Human Immunodeciency Virus), agente causador da AIDS (do ingls Acquired Immunodeciency Syndrome). Aps a infeco da clula hospedeira, o material gentico desse vrus, o RNA, convertido a DNA, que, ento, se integra ao genoma do hospedeiro para ter seus genes expressos e garantir a produo das molculas necessrias formao de novas partculas virais.
Figura 5.1: Perpetuao do material gentico, DNA ou RNA, por replicao, e uxo da informao gentica, que engloba transcrio e traduo. * Etapas que ocorrem apenas em certos vrus de RNA, conforme explicado no texto. Replicao Transcrio Traduo Replicao*

DNA
Transio reversa*

RNA

Protena

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e sabendo que a sntese de protenas ocorre nos ribossomos presentes

Considerando o DNA de eucarioto, que est localizado no ncleo,

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Quando a informao contida em um gene (DNA) utilizada para a sntese de uma molcula funcional, dizemos que o gene foi expresso, ou estamos tratando da expresso gnica. Podemos dizer que o RNA atua como um intermedirio nesse processo, por usar a informao codicada no DNA para especicar a seqncia de aminocidos na protena funcional, ou ainda que o RNA serve de molde para a sntese de protenas. O RNA que desempenha esta funo o RNA mensageiro (mRNA, do ingls messenger RNA). Outros dois tipos principais de RNA participam desse processo: o RNA de transferncia (tRNA, do ingls transfer RNA) e o RNA ribossomal (rRNA, do ingls ribosomal RNA).Vamos ver qual a importncia de cada um deles! A sntese de uma cadeia polipeptdica ocorre nos ribossomos, que consiste em uma associao de rRNA e protenas. Os aminocidos que fazem parte da cadeia polipeptdica nascente so trazidos para o ribossomo, ligados covalentemente ao tRNA. A ordem dos aminocidos no polipeptdeo determinada pela seqncia especca de bases do mRNA. A sntese de protena requer, de fato, uma relao interdependente entre o mRNA, o molde da informao, o tRNA, a molcula transportadora de aminocido, e o rRNA, que faz parte da maquinaria sinttica. Assim, para que a sntese protica ocorra no momento certo durante o ciclo de vida de uma clula, as snteses de mRNA, tRNA e rRNA devem estar em perfeita coordenao com a resposta celular aos ambientes intra e extracelulares. Na mitocndria, onde tambm ocorre sntese de protena, encontram-se os correspondentes aos trs tipos principais de RNA j mencionados. Para diferenci-los, os RNAs mitocondriais so chamados mt mRNA (RNA mensageiro mitocondrial), mt tRNA (RNA de transferncia mitocondrial) e mt rRNA (RNA ribossomal mitocondrial). At o momento, foi enfatizada a utilizao da informao gentica para a sntese de protenas, que, alis, ser o tema das aulas dos Mdulos 3 e 4. Contudo, voc deve saber que o produto nal de alguns poucos genes o prprio RNA. A anlise da seqncia de bases do genoma da levedura Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, revelou a existncia de aproximadamente 750 genes (cerca de 10% do nmero total de genes da levedura) que produzem RNA como produto nal. Esses RNAs, como as protenas, servem como componentes enzimticos e estruturais para uma variedade de processos na clula.

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nuclear (hnRNA, do ingls heterogeneous nuclear RNA), o RNA nuclear pequeno (snRNA, do ingls small nuclear RNA), o RNA nucleolar pequeno (snoRNA, do ingls small nucleolar RNA) e o RNA citoplasmtico pequeno (scRNA, do ingls small cytoplasmic RNA). Para facilitar o aprendizado, no Quadro 5.1, voc encontra os principais tipos de RNAs produzidos nas clulas e as funes atribudas a cada um deles. Ao observar o quadro, reita sobre a innidade de funes que os RNAs podem desempenhar.
Quadro 5.1: Principais tipos de RNAs e suas funes na clula

Tipo de RNA

Funo Transferncia de informao gentica

mRNAs (RNAs mensageiros)

do ncleo ao citoplasma ou do gene para o ribossomo. Transferncia dos aminocidos para

tRNAs (RNAs de transferncia)

o complexo mRNA-ribossomo de acordo com a seqncia de bases do mRNA.

rRNAs (RNAs ribossomais) hnRNAs (RNAs heterogneos nucleares)

Parte integrante da estrutura bsica dos ribossomos. Precursores de mRNA e outros RNAs. Participao em uma variedade de processos

snRNAs (RNAs nucleares pequenos)

nucleares, incluindo splicing de pr-mRNAs (Tema do Mdulo 3).

snoRNAs (RNAs nucleolares pequenos) scRNAs (RNAs citoplasmticos pequenos)

Processamento e modificaes qumicas do rRNAS. Seleo de protenas para excreo. Participao em diversos processos celulares, incluindo sntese de telmero, inativao do cromossomo X, transporte de protenas para o interior do retculo endoplasmtico e sinalizao de molculas de RNA para que sejam degradadas.

Outros RNAs

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tipos de RNA encontrados na clula, destacam-se: o RNA heterogneo

J foram apresentados a voc o rRNA e o tRNA. Dentre outros

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importante que voc saiba tambm que o RNA a nica macromolcula conhecida capaz de atuar no armazenamento e na transmisso de informao gentica, alm de exercer atividade cataltica. Voc j estudou enzimas na Bioqumica, no ? Por muito tempo pensouse que apenas as protenas eram capazes de exercer atividade cataltica. A descoberta dos RNAs catalticos, ou ribozimas, causou uma revoluo na cincia, e diversos estudos relacionando as funes desempenhadas pelos RNAs e a origem da vida tm sido realizados desde ento. As ribozimas apresentam variaes considerveis de tamanho, podem ser constitudas por um ou mais lamentos e, de maneira anloga s enzimas, sua estrutura tridimensional importante para sua funo. Falaremos um pouco mais sobre as ribozimas nas aulas do Mdulo 3.

!
RNAs que atuam como enzimas Thomas Cech e colaboradores, em 1982, revelaram que alguns RNAs exibem atividade cataltica, comportando-se como as tradicionais enzimas de origem protica. Esses RNAs receberam o nome de "ribozimas" e esse trabalho rendeu um prmio Nobel. As ribozimas atuam no processamento de mRNAs e so capazes de cortar e remover seqncias especcas de sua prpria molcula ou de outros RNAs.

CARACTERSTICAS QUMICAS DO RNA

Voc viu na Aula 3 que RNA e DNA so quimicamente similares. RNA tambm um polmero linear no ramicado de nucleotdeos, os ribonucleotdeos, lembra? Para recordar as principais diferenas entre RNA e DNA, observe o Quadro 5.2.
Quadro 5.2: Principais diferenas entre DNA e RNA

DNA Nucleotdeo Acar Bases purnicas Bases pirimidnicas Principal funo Desoxirribonucleotdeo Desoxirribose Adenina e guanina Citosina e timina Armazenamento de informao gentica

RNA Ribonucleotdeo Ribose Adenina e guanina Citosina e uracila Transferncia de informao gentica

Embora o RNA seja um dos componentes mais estveis da clula, no to estvel quanto o DNA. A presena do grupo 2-hidroxila adjacente faz com que a ligao fosfodister do RNA seja mais susceptvel s hidrlises qumica e enzimtica do que a ligao fosfodister do DNA.

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outros, como os rRNAs, sejam muito mais estveis metabolicamente. Voc tambm viu, na Aula 4, que o estudo de composio de bases no DNA feito por Chargaff, no nal da dcada de 1940, em muito contribuiu para o modelo de DNA dupla hlice. A complementaridade de bases neste modelo justica a correspondncia de purinas e pirimidinas encontrada por Chargaff. J os RNAs de eucariotos, cujo tamanho varia de aproximadamente 65 a mais de 200.000 nucleotdeos, apresentam seqncias de bases complementares s seqncias de pores especcas de somente uma ta de DNA. O resultado disso que todos os RNAs celulares analisados at o momento so lineares e apresentam uma nica cadeia polinucleotdica, ou seja, uma nica ta. Assim, diferentemente da composio de bases do DNA, as razes entre A + U e C + G nos RNAs no so iguais, e a regra de Chargaff no se aplica. O mesmo ocorre com molculas de DNA formadas por um nico lamento, como o caso do material gentico de alguns bacterifagos. Em contrapartida, se estivermos tratando de duas tas de RNA, como o genoma de certos vrus de RNA, a complementaridade pode existir e a regra de Chargaff pode ser aplicada.

ASPECTOS ESTRUTURAIS DOS PRINCIPAIS TIPOS DE RNA

Voc agora deve estar imaginando quais os tipos de estruturas que uma molcula de RNA pode assumir. Como essa molcula constituda por um nico lamento, parece bvio que ela no forme uma dupla hlice extensa. De fato, a estrutura do RNA o resultado do pareamento
INTRAMOLECULAR

INTRAMOLECULAR (OU INTRACADEIA)

O termo intramolecular (ou intracadeia) se aplica a processos que ocorrem entre diferentes regies de uma mesma molcula ou de uma mesma cadeia, quando se trata de um polmero.

(OU

INTRACADEIA )

de bases em regies relativamente

pequenas da molcula. Diferentemente do DNA dupla hlice, o RNA no apresenta estrutura secundria regular e simples que sirva como referncia. As estruturas tridimensionais de muitos RNAs, assim como das protenas, so complexas e nicas. Para a estrutura do RNA, o empilhamento de bases, que atua restringindo as possveis conformaes da molcula, mais importante para a determinao de interaes
INTER E INTRAMOLECULARES

INTERMOLECULAR (OU INTERCADEIA)

O termo intermolecular (ou intercadeia) se aplica a processos que ocorrem entre regies de duas ou mais molculas diferentes ou de duas ou mais cadeias, quando se trata de um polmero.

do que a ponte de hidrognio. As interaes de

empilhamento de bases desempenham, portanto, um importante papel na estabilizao da conformao da molcula.

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bactrias, sejam sintetizados, usados e degradados em minutos, embora

Essa caracterstica faz com que alguns RNAs, como os mRNAs de

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A estrutura helicoidal tambm existe no RNA (observe a Figura 5.2) mesmo na ausncia de pareamento extensivo de bases do tipo Watson-Crick, ou seja, A=T e CG. A estrutura helicoidal ocorre, principalmente, por causa das foras de empillhamento de bases, que so mais fortes entre duas purinas do que entre uma purina e uma pirimidina ou
Figura 5.2: Padro de empilhamento tpico de um RNA ta simples. As bases esto representadas em branco e o suporte acarfosfato em cinza.

entre duas pirimidinas. As seqncias complementares na molcula de RNA podem produzir estruturas ainda mais complexas. Uma regio do RNA pode formar pares de bases com regies complementares tanto de RNA como de DNA. Repare, na Figura 5.3, um hbrido RNADNA formado entre regies complementares de cada uma das molculas. O pareamento de bases segue o padro descrito para o DNA: G pareia com C e A pareia com U (ou com um eventual T presente em alguns RNAs). O pareamento entre G e U, que raro em DNA, tambm muito comum em RNA. Vale ressaltar, aqui, que o
PAR DE BASES

PAR DE BASES G U
Ao longo do curso, a representao de pares de bases que no sejam os pares Watson-Crick (formados entre as bases A e T e entre as bases C e G) ser feita com o smbolo ( ) entre os smbolos das bases envolvidas no pareamento. Esta notao visa diferenciao entre um par de bases, como o par G U, e uma seqncia de bases adjacentes em uma cadeia polinucleotdica, como a seqncia GU.

G U s ocorre em tas de RNA j

sintetizadas, uma vez que as RNA polimerases (enzimas responsveis pela sntese de RNA) no inserem U em local oposto ao molde G ou vice-versa. Isto ser detalhadamente discutido no Mdulo 3. Aguarde!!! Uma outra caracterstica importante que as duplas hlices formadas entre RNAs ou entre RNA e DNA so sempre antiparalelas, assim como no DNA. Note a orientao das tas na Figura 5.3.

Um hbrido ou um duplex parcial a estrutura formada quando dois DNAs ou dois RNAs diferentes, ou, at mesmo, um RNA e um DNA apresentam homologia, ou seja, regies complementares.

Figura 5.3: Um hbrido RNA-DNA. A formao do hbrido s possvel quando as molculas apresentam regies complementares (ou homlogas). As setas indicam os pares de bases A=U. Repare que as tas so antiparalelas.

Fita de RNA

Fita de DNA

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como a da forma A do DNA. Lembra das outras estruturas do DNA? As quebras na hlice regular da forma A do RNA so causadas por bases mal emparelhadas ou desemparelhadas, e geram alas internas (internal loops, em ingls) e salincias (bulges, em ingls). As regies helicoidais duplas no RNA so chamadas hastes e alas, ou pelo nome em ingls hairpin. Essa ltima estrutura apresenta variaes em relao ao comprimento da regio com pareamento de bases e o tamanho e o nmero de alas no pareadas. Voc visualizar melhor essas estruturas na Figura 5.4.
Fita dupla (haste e ala) Fitas simples Salincia Ala interna

(a)

(b)

Figura 5.4: Estruturas secundrias do RNA. (a) Salincia, alas internas , hastes e alas. (b) Hlice enrolada para a direita, forma A, associada a regies de pareamento.

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complementaridade de bases uma dupla hlice voltada para a direita,

A estrutura de dupla fita nas regies que apresentam

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Muitos RNAs tm capacidade de formar estruturas helicoidais geradas por pareamentos de bases em uma grande extenso de sua cadeia. Observe, por exemplo, a Figura 5.5, na qual est representada a possvel estrutura secundria de um RNA, com destaque para o par G U. Repare as estruturas secundrias, haste e ala, salincias e alas internas, distribudas ao longo do lamento de RNA. Outros pareamentos tambm podem ocorrer entre diferentes regies da molcula, resultando em uma estrutura tridimensional caracterstica e, certamente, fundamental para
RIBONUCLEASE
Enzima que catalisa a hidrlise do RNA.

a funo desempenhada. Vamos olhar, agora, as estruturas dos principais tipos de RNA tentando associ-las s suas funes!
Figura 5.5: Possvel estrutura secundria do componente de RNA da enzima RIBONUCLEASE P (RNase P) de Escherichia coli. A RNase P uma ribonuclease que contm, alm da parte protica, uma parte integrante de RNA e participa do processamento dos tRNAs. As caixas em cinza indicam o par no tradicional G U, representado em destaque separadamente.

Par de bases G U Guanina Uracila

C1' da C1 da ribose
'

ribose

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Aproximadamente 15% do total de RNA celular correspondem aos tRNAs. Para desempenhar seu papel na sntese de protenas, os tRNAs precisam desempenhar duas funes. Primeiramente, as molculas de tRNA ativam os aminocidos, o que favorece energeticamente a formao das ligaes peptdicas. Os aminocidos ativados so, ento, transportados para os ribossomos, onde so transferidos para a cadeia polipeptdica nascente. A segunda funo dos tRNAs reconhecer a informao contida no mRNA, mais especicamente nos
CDONS

do

mRNA, assegurando que o aminocido correto seja incorporado na cadeia peptdica crescente. Maiores detalhes sobre a participao dessas molculas na sntese protica voc s ver no Mdulo 4. Nesta aula, apenas algumas peculiaridades sero abordadas para que voc entenda que duas caractersticas estruturais dos tRNAs esto diretamente associadas a estas funes. Sabe-se que cada tRNA pode transferir apenas um aminocido. Entretanto, embora apenas 20 aminocidos sejam utilizados na sntese de protenas, a variedade de tRNAs na clula grande, existindo pelo menos um tRNA especco para cada um dos aminocidos incorporados numa cadeia polipeptdica. Os tRNAs so polirribonucleotdeos relativamente pequenos, apresentando entre 73 e 93 ribonucleotdeos, o que corresponde a uma faixa de peso molecular de 24.000 a 31.000. As seqncias de todas as molculas de tRNA de inmeros organismos, mais de 1.000 conhecidas at o momento, apresentam uma estrutura secundria comum que se assemelha a uma folha de trevo. Veja na Figura 5.6 a estrutura secundria geral comum a todos os tRNAs. Note as partes da molcula que esto ligadas por pontes de hidrognio, chamadas hastes ou braos, e as partes em que essas interaes no ocorrem, chamadas alas. No esquema, esto representados os nucleotdeos que no variam com o tipo de tRNA. A presena de vrios nucleotdeos modicados tambm comum nos tRNAs, como, por exemplo, os resduos letra grega psi (pseudouridina), D (5,6-diidrouridina), m1G (1-metilguanosina) e I (inosina), dentre outros. CDON
Uma seqncia de trs nucleotdeos adjacentes em um cido nuclico que codica um aminocido especco.

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RNAs de transferncia (tRNAs)

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Uma peculiaridade interessante que essas modicaes so introduzidas aps a sntese da molcula de tRNA. Observe a frmula estrutural desses nucleotdeos na Figura 5.7.

Figura 5.6: Estrutura secundria geral de todos os tRNAs. Estrutura de folha de trevo. Note os quatro braos sempre presentes e um brao extra que no est presente em todos os tRNAs. Os crculos fechados representam os nucleotdeos comuns (derivados das bases A, C, G e T) e as linhas entre eles representam pontes de hidrognio, que caracterizam os pares de bases. As caractersticas e/ou resduos invariantes esto representados em cinza. Os smbolos utilizados na gura so: Pu qualquer purina; Pi qualquer pirimidina; G* guanosina ou 2-O-metilguanosina; pseudo-uridina.

Inosina (I)

1 - Metilguanosina (m1G)

Figura 5.7: Bases modicadas que podem estar presentes nos tRNAs. Note que, na pseudo-uridina, a ligao ribose ocorre atravs do carbono C5 em lugar do carbono C1 mais usual.

Pseudo-uridina ()

Dihidrouridina (D)

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um aminocido especco, e o brao do anticdon, que contm uma seqncia complementar (lembra da complementaridade de bases?) ao cdon no mRNA, o que assegura a ordem dos aminocidos na protena de acordo com a seqncia de bases no mRNA. Os detalhes desse reconhecimento sero vistos no Mdulo 4. Os outros dois ou trs braos so importantes apenas para a conformao tridimensional das molculas de tRNAs. Agora que voc j aprendeu sobre as peculiaridades das molculas de tRNA, incluindo a estrutura de folha de trevo (estrutura secundria), importante que voc conhea sua estrutura tridimensional. Usaremos, como exemplo, o tRNA de levedura especco para o aminocido fenilalanina, representado por tRNAPhe (l-se fenilalanil tRNA). Este tRNA, o primeiro cido nuclico a ter sua seqncia de bases completamente determinada, contm 76 nucleotdeos, sendo que 10 so formados por bases modicadas. Na Figura 5.8, voc pode ver uma representao da estrutura tridimensional do tRNAPhe proposta com base na anlise de difrao de raios X. Note que, nessa estrutura que se assemelha a um L torcido, os dois braos importantes para que o tRNA desempenhe suas funes, os braos do aminocido e do anticdon, esto arranjados de forma especca no espao. Essa estrutura, que tem sido observada em todos os tRNAs estudados at o momento, fundamental para as etapas de ativao de aminocidos e de transferncia de aminocido para a cadeia peptdica nascente no ribossomo.

Figura 5.8: Estrutura tridimensional do tRNAPhe de levedura proposta a partir da anlise de difrao de raios X. A forma se assemelha a um L torcido. (a) Diagrama esquemtico. (b) Modelo de preenchimento espacial. As trs bases correspondentes ao anticdon, a extremidade 3 no brao do aminocido e os braos D e TC esto em destaque.

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possa desempenhar sua funo: o brao do aminocido, que se liga a

Dois braos de um tRNA so importantes para que a molcula

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RNAs ribossomais (rRNAs)

A sntese de protenas, como ser visto no Mdulo 4, ocorre nos ribossomos, uma maquinaria supramolecular complexa. Em uma clula da bactria E. coli, encontram-se mais de 15.000 ribossomos, que correspondem a aproximadamente do peso seco da clula. Assim, voc tem uma idia do tamanho dessas partculas e da quantidade de ribossomos presentes em uma clula. A poro de RNA nos ribossomos corresponde a 60-65% do peso total do ribossomo, enquanto os 35 a 40% restantes correspondem poro protica. Os ribossomos de procariotos e eucariotos so sempre constitudos de duas subunidades, uma maior e outra menor. Cada subunidade formada por uma, at trs molculas de rRNA e inmeras protenas diferentes, como ser visto mais adiante. Diferentemente dos tRNAS, as molculas de rRNAs geralmente so grandes e alguns poucos tipos esto presentes em uma clula. Os rRNAs representam cerca de 80% do RNA celular total e so metabolicamente estveis. Esta estabilidade resultado de sua associao com protenas ribossomais. Os estudos de dissociao dos ribossomos foram de extrema importncia para se entender sua estrutura, suas propriedades e seu papel na sntese de protenas. A tcnica de ULTRACENTRIFUGAO ANALTICA, cujo princpio bsico consiste na observao do movimento de molculas em uma centrfuga, foi, e ainda , muito empregada no monitoramento da dissociao e da reassociao dos ribossomos. O movimento de uma partcula, que nesse caso especco pode ser ribossomo, RNA ou protena, na centrifugao caracterizado pelo COEFICIENTE DE SEDIMENTAO expresso em UNIDADES SVEDBERG (S).

ULTRACENTRIFUGAO ANALTICA, COEFICIENTE DE SEDIMENTAO E UNIDADES SVEDBERG (S)

Na tcnica de ultracentrifugao analtica, o movimento de uma partcula caracterizado pelo coeciente de sedimentao expresso em unidades Svedberg (S). Esse nome foi dado em homenagem a Thedor Svedberg, um cientista sueco que inventou a ultracentrfuga. A rapidez com que uma partcula se move em direo ao fundo do tubo depende de sua forma e de seu tamanho. Assim, o valor de S aumenta com o peso molecular da partcula que est sedimentando, mas esta relao no diretamente proporcional, uma vez que sua forma tambm inuencia a velocidade de sedimentao.

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suas subunidades maior e menor e seus rRNAs constituintes. Observe a Figura 5.9 e acompanhe a descrio a seguir.

Figura 5.9: Comparao dos ribossomos procariticos e eucariticos. Esto representadas as subunidades maior e menor com os dados relativos a cada uma delas. Mr a massa molecular relativa.

Na bactria E. coli, a subunidade menor do ribossomo, tambm chamada de subunidade 30S, formada por uma molcula de rRNA 16S e 21 protenas diferentes. J a subunidade maior, conhecida por subunidade 50S, constituda de duas molculas de rRNA, os rRNAs 5S e 23S, e 36 protenas, sendo 33 protenas diferentes.

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empregada para designar os ribossomos de procariotos ou eucariotos,

A partir de agora, esta unidade, Svedberg S, ser comumente

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A partcula inteira apresenta coeciente de sedimentao de 70S. Repare que no basta simplesmente somar os valores de coeciente de sedimentao das duas subunidades para se determinar o coeciente do ribossomo, o que comprova que o valor de S depende da forma da partcula. Como sero os ribossomos de eucariotos? Provavelmente mais complexos. Vamos ver como eles so? Os ribossomos de uma clula eucaritica, no considerando aqueles presentes na mitocndria e em cloroplasto, so maiores e mais complexos que os ribossomos bacterianos, apresentando coeciente de sedimentao de 80S. Eles tambm tm duas subunidades que, apesar de poderem variar de tamanho entre as espcies, apresentam valores mdios de coeciente de sedimentao de 40S e 60S, para as subunidades menor e maior, respectivamente. A subunidade 40S contm um rRNA 18S e a subunidade 60S formada pelos rRNAs 5S, 5,8S e 28S. Em associao a esses rRNAS encontram-se mais de 80 protenas diferentes. Os ribossomos de todos os organismos e organelas so similares em relao aos aspectos estruturais e funcionais. Os rRNAs que integram essas partculas contm inmeros nucleotdeos modicados e podem apresentar estruturas secundrias bastante complexas, como as apresentadas na Figura 5.10.
(a) (b) 5' (1) 3' (120)

5' (1)

Figura 5.10: Modelos de estruturas secundrias de rRNAs bacterianos. (a) rRNA 16S de E. coli. (b) rRNA 5S de E. coli. O primeiro (extremidade 5) e o ltimo (extremidade 3) resduos de nucleotdeos dos rRNAs esto numerados. 3' (1.542)

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Dos trs principais tipos de RNA, os mRNAs so os menos abundantes, representando, na maioria das clulas, entre 5 e 10% do RNA celular total. Os mRNAs so sintetizados utilizando a mensagem contida na seqncia de bases de pores especcas do genoma de um organismo. As seqncias de bases do mRNA, por sua vez, determinaro a ordem dos aminocidos nas protenas sintetizadas nos ribossomos. Os mRNAs eucariticos so monocistrnicos, isto , contm informao para apenas uma cadeia polipeptdica. Em contrapartida, os mRNAs procariticos so geralmente policistrnicos, ou seja, contm informaes para a sntese de mais de uma protena. importante ressaltar que o fentipo e o estado funcional de uma clula est diretamente relacionado ao seu contedo de mRNA. Assim, clulas que se multiplicam muito rapidamente necessitam de diferentes protenas em um curto intervalo de tempo. Para atender a esta exigncia, de se esperar que os mRNAs tenham um tempo de vida pequeno, sendo rapidamente degradados aps participarem da sntese de protenas, para que os ribonucleotdeos sejam reciclados e utilizados na sntese de molculas de outros mRNAs. Os mRNAs apresentam muita variao no tamanho. Isso fcil de ser entendido! J que os mRNAs codicam protenas (determinam a seqncia de aminocidos nas cadeias polipeptdicas) dos mais diversos tamanhos, de se esperar que eles devam apresentar tambm tamanhos heterogneos. Provavelmente, existem poucos dobramentos intracadeia (ou intramolecular) nos mRNAs e pouco temos a discutir sobre os aspectos estruturais desse tipo de RNA. Os detalhes sobre sua sntese e processamento sero discutidos no Mdulo 3. Para finalizar, sob o aspecto estrutural, o DNA apresenta dois lamentos arranjados espacialmente na forma de dupla hlice. Sua funo celular armazenar e perpetuar a informao gentica, o que de alguma forma assegurado por suas caractersticas estruturais. Contudo, o RNA contm um nico lamento, no apresenta uma estrutura padro e participa de inmeros processos celulares.

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AULA

RNAs mensageiros (mRNAs)

MDULO 1

Biologia Molecular | RNA aspectos funcionais e estruturais

Na Figura 5.11, voc pode observar as diferenas estruturais bsicas entre os dois cidos nuclicos. Mas importante ressaltar que dependendo da molcula de RNA, sua estrutura pode ser bastante complexa e certamente est relacionada funo celular que lhe atribuda.

DNA Suporte desoxirribose-fosfato

Bases Pontes de hidrognio entre bases pareadas

RNA Suporte ribose-fosfato

Bases

Figura 5.11: DNA versus RNA. Uma diferena bsica entre esses cidos nuclicos a presena de duas tas no DNA e de um nico lamento no RNA. Como conseqncia, as molculas de DNA, independentemente de sua seqncia de bases, assumem a estrutura de dupla hlice, enquanto as molculas de RNA podem assumir diferentes estruturas tridimensionais, que so dependentes das seqncias de bases.

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Nesta aula, voc aprendeu que, alm de ser o material gentico de alguns vrus, o RNA pode desempenhar inmeras funes na clula, sendo que a maioria dessas funes est associada a sua participao no fluxo da informao gentica, que o processo global em que a informao contida no DNA utilizada para a sntese de protena. O intermedirio nesse processo, que conta com a participao de vrios tipos de RNA, uma molcula de mRNA. O RNA menos estvel que o DNA devido presena do grupo 2-hidroxila, mas existe variao de estabilidade entre os diferentes tipos de RNA. Diferentemente do DNA, o RNA formado por um nico lamento, de forma que equivalncia de bases, conforme a regra de Chargaff, no se aplica a essa molcula. A ta nica de RNA pode apresentar uma estrutura helicoidal, que facilitada pelas foras de empilhamento de bases. Entretanto, as seqncias complementares de diferentes pores do RNA podem formar pares de bases de acordo com o padro descrito para o DNA, gerando uma estrutura de dupla ta. A regularidade da hlice pode ser quebrada por estruturas conhecidas como alas internas, salincias e hastes e alas. Do total dos RNAs celulares, aproximadamente 15% correspondem aos tRNAs, 85% aos rRNAs e o restante, aos mRNAs. O tamanho de cada um desses tipos de RNA bastante distinto, assim como a estrutura, que determinante para as funes que cada um desempenha. O tamanho dos mRNAs proporcional ao tamanho das protenas que codicam, sendo, portanto, bastante heterogneo. Os tRNAs e rRNAs apresentam em suas seqncias um nmero razovel de nucleotdeos modicados. Os rRNAs so metabolicamente mais estveis que os outros dois tipos de RNA devido a sua associao com protenas ribossomais.

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AULA

RESUMO

MDULO 1

Biologia Molecular | RNA aspectos funcionais e estruturais

EXERCCIOS
1. Discuta as funes do RNA. 2. Quais so os trs principais tipos de RNA e de que processo celular eles participam. 3. A estabilidade do DNA biologicamente vantajosa? E a instabilidade do RNA biologicamente vantajosa? Discuta a diferena de estabilidade dessas molculas. 4. Um vrus identicado recentemente teve seu material gentico isolado e a composio de bases determinada. Sabendo que o material gentico RNA e que o percentual de adenina 18% e o de citosina 32%, possvel calcular o percentual das duas outras bases? Explique. 5. Marque a alternativa correta a respeito do RNA: a) Incorpora bases purnicas e pirimidnicas, modicadas e no modicadas, durante sua sntese. b) No exibe qualquer estrutura helicoidal dupla. c) As estruturas das molculas apresentam interaes de empilhamento de bases e pareamento de bases ligadas por pontes de hidrognio. d) Geralmente contm cerca de 65 a 100 nucleotdeos. e) No exibe pareamento de bases do tipo Watson-Crick. 6. Represente as estruturas secundrias comumente encontradas nos RNAs. 7. Relacione a estrutura tridimensional dos tRNAs com a funo desempenhada. 8. O que voc acha que seria degradado mais rapidamente na clula, o mRNA ou o rRNA. Por qu?

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As questes desta aula tm por objetivo a xao do contedo estudado. Caso voc se sinta inseguro aps resolv-las e conferir suas respostas, no hesite em rever a aula ou pedir ajuda aos tutores no plo.

INFORMAES SOBRE A PRXIMA AULA

Nas prximas aulas, voc estudar a organizao dos cidos nuclicos como material gentico de procariotos, vrus e eucariotos.

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AULA

AUTO-AVALIAO

MDULO 1