ARTICULO CIENTIFICO

COLORANTES NATURALES OBTENIDOS A PARTIR DE Coussapoa villosa (UVILLA), Syzygium malaccence (POMARROSA) Y Simira rubenscens (PUCAQUIRO)

Por: Alenguer Alva, Karina Arzubialdes-Gonzles, Ana Mara Daz Retegui

IQUITOS PERU

2009

COLORANTES NATURALES OBTENIDOS A PARTIR DE Coussapoa villosa (UVILLA), Syzygium malaccence (POMARROSA) Y Simira rubenscens (PUCAQUIRO)

Por:

Alenguer Alva, Karina Arzubialdes-Gonzles, Ana Mara Daz Retegui*

RESUMEN De la cscara de los frutos de las especies Syzygium malaccence (pomarrosa), Coussapoa villosa (uvilla) y de la madera de la especie Simira rubenscens

(pucaquiro), fueron extrados con disolventes n-hexano, cloroformo, etanol y agua. Despus del aislamiento y purificacin hasta obtener los colorantes naturales que fueron identificadas por reacciones qumicas y mediante espectrometra de UV-Vis. As, de la especie Syzygium malaccence se identificaron flavonoides del tipo flavonas; Coussapoa villosa flavonoides del tipo chalconas, auronas y flavonoles; y de la madera de la especie Simira rubenscens (pucaquiro), flavonoides del tipo chalconas, auronas y flavonasy quinonas tipo naftoquinonas y antroquinonas.

Palabras

Claves:

Colorantes

naturales,

flavonoides,

quinonas,

Syzygium

malaccence, Coussapoa villosa, Simira rubenscens

ABSTRACT From the skin of the fruits of the species Syzygium malaccence (rose apple), Coussapoa villosa (uvilla) and wood species Simira rubenscens (pucaquiro) were extracted with solvents n-hexane, chloroform, ethanol and water. After isolation and purification to obtain natural dyes that were identified by chemical reactions and by UVVis spectrometry. Thus, the species Syzygium malaccence identified flavonoids type flavones; of Coussapoa villosa flavonoids type chalcones, and flavonols and aurones and woodworking Simira rubenscens (pucaquiro), species flavonoids type chalcones, aurones and flavones and quinones type naphthoquinones anthroquinones. Key words: naturals colorants, flavonoids, quinones, Syzygium malaccence, Myrciaria dubia, Coussapoa villosa, Simira rubenscens

* Trabajo Final de Carrera para la obtencin del Ttulo de Ingeniera en Industrias Alimentarias

INTRODUCCION

En la amazona se encuentran alrededor de 7000 especies diferentes de plantas, de las cuales segn Arce1 (2,000) se han reconocido ms de 100 plantas con propiedades coloridas. Las especies ms promisorias fueron de la familia mirtaceae: Eugenia cf egensis, Syzygium cumini, Myrciaria dubia, que poseen pigmentos antocinicos; especies de la familia Bixaceae, Rubiaceae, Leguminoseae, Vitaceae, Melastomataceae que proporcionan colorantes de alto valor comercial. Las especies Coussapoa villosa (uvilla), Syzygium malaccence (pomarrosa) y Simira rubenscens (pucaquiro), se encuentran ubicados en la Amazona baja, el fruto de la uvilla se usa como alimento, la resina como emplasto y las flores en infusin para combatir la ictericia; el fruto de la pomarrosa se usa como alimento, en jugos, dulces y en almbar, tambin contiene un alto contenido de hierro; y la madera de color rosa claro pucaquiro es usado en la medicina tradicional como antirreumtico y estimulante, la extraccin con hidroalcohol que da una solucin de color rojo es utilizado como afrodisaco, de ninguno de ellos se han reportado otros estudios cientficos. (Brack, 1999). En los aos recientes se ha renovado el inters en colorantes naturales por recientes limitaciones en el uso de algunos sintticos en alimentos, medicamentos y en productos cosmticos debido a su toxicidad. Son frecuentes las denuncias por el uso de colorantes no adecuados en estos productos de uso humano, como por ejemplo la presencia de colorantes sintticos nocivos como Rhodamina y Naranja Permanente en lpices de labios, o de otros colorantes no permitidos en caramelos, refrescos y gelatinas (Lock, 1997). Por otro lado, mientras que unos colorantes no se permiten en unos pases, otros si lo permiten; por ejemplo, el Rojo Allura (Rojo N 40) y el Azul brillante (Azul N 1) no son permitidos en la Unin Europea pero s en Estados Unidos (por la Administracin de Alimentos, Medicamentos y Cosmtica,

AMC), mientras que en los colorantes carmoisina (E 122) y el ponceau 4R (E 124), sucede lo contrario. (Toyofa y Garca, 1996).
1

Arce Hidalgo, Julio. Informacin Personal. 2000

Los colorantes naturales vienen siendo utilizados en la preparacin de alimentos y bebidas por siglos, posteriormente, cuando se empez a usar en grandes cantidades fueron reemplazados por colorantes artificiales en la preparacin y procesamiento de alimentos en forma industrial, ya que estos son fciles de obtenerse a bajo costo. Las especies vegetales citadas crecen en chacras, purmas, laderas de ros y tienen poco valor comercial y en muchos casos tienen usos desconocidos. Por todo eso, se hace necesario continuar la investigacin de los colorantes naturales en busca de mejorar y adecuar una forma de extraccin de bajo costo, contribuir a obtener un valor agregado para estas especies, encontrar una tecnologa de extraccin que pueda ser transferida y aprovechada por la industria de alimentos, textilera, cosmticos y otros.

MATERIAL Y METODOS

Procedimientos Generales Los espectros de UV-Vis fueron obtenidos en MeOH y EtOH/OH, en un espectrofotmetro THERMOSPECTRONIC, modelo Gnesis 6 y procesados por un software Vision Nlite de Thermoelectron Corporation y los reactivos de Shinoda y Borntrger. Para la cromografa en columna (CC) se us gel de slice 60 F254 (Merck S.A.) y cromatografa en camada delgada (CCD se us cromatoplacas de gel de slice F 1500/LS254 (Schleicher & Schuell). En general, como eluyente se emple n-hexano, cloroformo y metanol (Merck S.A.). Recoleccin del material vegetal Los frutos de las especies Syzygium malaccence (pomarrosa) y Coussapoa villosa (uvilla); y la madera de Simira rubenscens (pucaquiro), fueron obtenidos en la inmediaciones de la ciudad de Iquitos y reposa un espcimen de cada uno de ellos en el Herbarium Amazonense de la UNAP. Extraccin y fraccionamiento Las cscaras del fruto de la pomarrosa y uvilla, la madera en viruta del pucaquiro y luego llevadas al proceso de extraccin con n-hexano, cloroformo y etanol (96%) sucesivamente (7 das por cada solvente por 3 veces consecutivas) que despus de evaporar los solventes en un evaporador rotativo se obtuvo los extractos etanlicos que tenan el color caracterstico. El fraccionamiento se realiz con solventes nhexano, cloroformo y metanol sobre una mezcla del extracto con gel de slice para columna y que posteriormente se someti a cromatografa en columna usando gradiente de n-hexano:cloroformo, cloroformo:metnol para dar varias fracciones que a su vez fueron unidas por cromatografa de camada delgada, en el caso del extracto del

pucaquiro se realiz CC repetitiva hasta lograr su purificacin y CCD preparativa eludas en mezcla de cloroformo:metanol (95:5).

RESULTADOS Y DISCUSIN

De la especie Syzygium malaccence (pomarrosa) los colorantes aislados presentaron con el reactivo de Shinoda una coloracin rosada indicando presencia de flavonas. (Lock, 1997).

Figura1. Espectro UV-Vis en MeOH del colorante de la pomarrosa.

En la Figura 1 el espectro de UV-Vis en metanol (MeOH) para la determinacin de flavonoides, muestran absorbancias a 220 nm de alta intensidad, 270 nm de mediana intensidad y 330 nm y 530 nm de baja intensidad, tambin se puede apreciar las absorbancia obtenidas en la tabla 01. Segn Lock (1997) afirma que las absorbancias a 250 280 nm (banda II) y 310-350 nm (banda I) pertenecen a las flavonas.

Tabla 01: Longitudes de onda y sus Absorbancia del Colorante en MeOH

Longitud de onda (nm) 200 220 270 330 495 530 560

Absorbancia (A) 0.220 0.900 0.345 0.158 0.102 0.146 0.126

De la especie Coussapoa villosa (uvilla) los colorantes purificados con el reactivo de Shinoda da una coloracin hasta de rosado, indicando la posible presencia de flavonoides, (Lock, 1997)

En la Figura 1 el espectro de UV-Vis en metanol (MeOH) para la determinacin de flavonoides, muestran absorbancias a 224 nm de alta intensidad, 270 nm de mediana intensidad y 346 nm de baja intensidad.

Figura 2. Espectro UV-Vis del colorante en MeOH

Tambin se puede apreciar las absorbancia obtenidas en la tabla 02 y segn Lock (1997) afirma que las absorbancias a 230 270 nm (banda II) y 340 - 390 nm (banda

I) pertenecen a las chalconas; las absorbancia a 230 270 nm (banda II) y 380 y 430 nm pertenecen a las auronas y las absorbancias a 250 - 280 nm (banda II) y 330 360 nm (banda I) pertenecen a los flavonoles.

Tabla 02: Longitudes de onda y sus Absorbancia del Colorante en MeOH Longitud de onda (nm) 204 210 224 270 346 Absorbancia (A) 0.518 0.681 2.116 0.972 0.678

De la especie Simiria rubensces (pucaquiro) el colorante aislado en la solucin de Borntrger da un color rojo en la fase acuosa indicativo de la presencia de quinonas, y que con el reactivo de Shinoda da una coloracin hasta de rosado claro, indicando la presencia de flavonoides (Lock, 1994; Gibaja, 1998). Al disolverlo con Carbonato de sodio y Bicarbonato de sodio se disuelven parcialmente, demostrando la presencia de quinonas - y - Hidroxilados. (Gibaja, 1998)

Figura 3. Espectro UV.-Vis del Colorante en EtOH/OH

El espectro de UV-Vis de la figura 3, muestran bandas a 240 de alta intensidad (banda II), 290 de media intensidad (banda I), 340 de intensidad baja, tambin se pueden apreciar las absorbancia obtenidas en la tabla 03.

Tabla 03. Longitudes de onda y sus Absorbancia del Colorante en EtOH/OH Longitud de onda (nm) 195 205 240 290 340 Absorbancia (A) 0.665 0.614 1.734 0.925 0.578

Segn Lock (1997), las naftoquinonas presentan las bandas a 245, 257h y 335 nm; una seal a 257h corresponde a transiciones electrnicas en el sistema quinoideo y en cambio las antraquinonas muestran intensa absorcin bencenoide a 250 nm y de

intensidad media a 322 nm, la absorcin quinoidea fuerte se observa a 263 y 272 nm y una dbil a 405 nm. Por otro lado Gibaja (1998), afirma que las naftoquinonas involucran los mximos de absorcin del grupo quinonico y bencenoico, dan seales entre 240-290 nm fuerte, cerca de 335nm mediana en regin 400-510nm y en cambio las antraquinonas

presentan mximos de absorcin entre 240-260 nm (bencenoide), a 260-300 nm (quinonico) y otra regin 360-520 nm.

Figura 4. Espectro UV-Vis del colorante en MeOH

En la Figura 4 el espectro de UV-Vis en metanol (MeOH) para la determinacin de flavonoides, muestran absorbancias a 224 y 228 nm de alta intensidad, 284 nm de mediana intensidad y 328 nm de baja intensidad, tambin se puede apreciar las absorbancia obtenidas en la tabla 04. Segn Lock (1997) afirma que las absorbancias a 230 270 nm (banda II) y 340 - 390 nm (banda I) pertenecen a las chalconas; las absorbancia a 230 270 nm (banda II) y 380 y 430 nm pertenecen a las auronas y las absorbancias a 250 - 280 nm (banda II) y 310 350 nm (banda I) pertenecen a los flavonas.

Tabla 04: Longitudes de onda y sus Absorbancia del Colorante en MeOH Longitud de onda (nm) 204 208 224 228 284 328 Absorbancia (A) 0.555 0.689 1.616 1.636 0.702 0.452

CONCLUSIONES Con los resultados anteriores se confirma la presencia de flavonoides del tipo de flavonas en la especie Syzygium malaccence (pomarrosa), flavonoides del tipo de chalconas, auronas y flavonoles en la especie Coussapoa villosa (uvilla) y naftoquinonas, antroquinoas y adems los flavonoides como chalconas, auronas y flavonas de la especie Simira rubenscens (pucaquiro).

AGRADECIMIENTOS A la Oficina General de Investigaciones de la UNAP por el financiamiento brindado para el proyecto de investigacin presentado.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. BRACK, A. 1999. Diccionario enciclopdico de plantas tiles del Per. PNUD. 556 p. 2. GIBAJA S. 1998. Pigmentos Naturales Qunonicos. Primera Edicin. Editorial Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Per. 3. LOCK O. 1997. Colorantes Naturales. Primera Edicin. Pontificia Universidad Catlica del Per. Lima, Per. pp. 137-163. 4. TOYOFA A., GARCIA E. 1996. Colorantes. En Biotecnologa Alimentaria. (Garca M., Quintero R., Lpez A. Eds.) Ed. Limusa. Mxico. Pp. 34-52.

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Grosor de capa de 200 m, tamao de partcula de 10 - 12 m

Placas de aluminio flexible que se pueden cortar con facilidad para adaptarse a las necesidades de separacin particulares Dos indicadores fluorescentes inorgnicos para deteccin por UV de sustancias incoloras Las muestras que absorben a longitud de onda de 254 nm se detectan mediante fluorescencia

Cromatofolios de TLC con zona de concentracin Estas placas se basan en las distintas propiedades en cuanto a la adsorcin de dos adsorbentes de slice: un adsorbente concentrador inerte de gran porosidad en el que se aplican las muestras y una capa de separacin selectiva para la separacin. Independientemente de la forma, tamao o posicin de las manchas, la muestra siempre se concentra en pocos segundos en forma de banda estrecha en la interfaz de los dos adsorbentes, donde se inicia la separacin.

Aplicacin rpida y sencilla de las muestras Incluye una etapa de purificacin y concentracin Mejor resolucin gracias a la generacin bandas estrechas

Cromatofolios de TLC de silicagel 60 modificada qumicamente Las capas de slice modificado (grosor de la capa de 200 m) son muy aptas para las separaciones ms problemticas que no se pueden resolver adecuadamente mediante slice sin modificar.

Los resultados son menos dependientes de la humedad atmosfrica Permiten el uso de sistemas disolventes acuosos El slice con RP modificado proporciona una ptima correlacin con HPLC Sin actividad cataltica para las sustancias inestables (degradacin oxidativa)

Espectroscopia ultravioleta-visible
De Wikipedia, la enciclopedia libre Saltar a: navegacin, bsqueda La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra ultravioleta-visible (UV/VIS) es una espectroscopia de emisin de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico, es decir, una longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas. La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados. Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.
Utiliza la radiacin del espectro electromagntico cuya longitud de onda est comprendida entre los 100 y los 800 nm (energa comprendida entre las 286 y 36 Kcal/mol) y su efecto sobre la materia orgnica, como se indic con anterioridad, es producir transiciones electrnicas entre los orbitales atmicos y/o moleculares de la sustancia.

El aspecto tpico de un espectro UV es el que se muestra en la figura:

Los mximos de absorcin se deben a la presencia de cromforos en la molcula, en este caso existen dos absorciones a 190 y 270 nm, pero para caracterizar dichas absorciones adems de la longitud de onda maxima para cada absorcin debemos recordar la ley de Lambert-Beer, segn la cual: Dependiendo del tipo de enlace que consideremos como cromforo la excitacin electrnica que puede observarse es: Absorbancia = lc Donde: = Coeficiente de extincin molar, es una constante relacionada con el rea de incidencia del cromforo y la probabilidad de de que produzca la absorcin. l = recorrido en cm de la radiacin a travs de la muestra c = concentracin de la muestra en moles/litro Consideraremos que cuando es inferior a 10000 esa absorcin se debe a una transicin electrnica prohibida por las reglas de seleccin. MODOS DE EXCITACIN ELECTRNICA. Dependiendo del tipo de enlace que consideremos como cromforo la excitacin electrnica que puede observarse es: Enlace sencillo:

Enlace sencillo con pares de electrones no compartidos:

Enlace doble:

Grupo carbonilo:

-dienos:

Es necesario aclarar que aunque en dichas figuras se subraya solo la transicin con

mayor longitud de onda, ello no implica que las dems transiciones no se produzcan e incluso que dichas transiciones aunque de menor longitud de onda sean de mayor absorcin que la indicada. Cuando la radiacin incide sobre una sustancia no toda ella se ve afectada por la misma; al tomo o conjunto de tomos que absorben radiacin se le denominaba cromforo. En las molculas existen tambin tomos o grupos de tomos que no absorben radiacin, pero hacen que se modifique alguna de las caractersticas de la absorcin del cromforo, se denominaban a tales grupos auxocromos. De acuerdo con los anteriores modos de excitacin tendremos los siguientes cromforos simples en la espectroscopa UV: Electrones implicados Enlace transicin max (nm) C-C, C-H ->* 150 Electrones -O-NElectrones n -SC=O C=O Electrones C=C n->* n->* n->* n->* n->* ->* 185 195 195 290 190 190

Ejemplos: Cromforo C=C Sustancia Etileno t-2-Hexeno Ciclohexeno 1,3-Butadieno 1-Octino max (nm) 170 nm 184 182 214 185 222 277 290 279 204 190 271 210 15800 10000 7600 20000 2000 126 8 (H2O) 16 (Hexano) 15 60 5000 19 1500

C=C Acetaldehdo C=O Acetona cido actico Acetoxima Nitrometano Ciclohexil metil sulfxido

C=NOH NO2 S=O

Debemos tener en cuenta que la obtencin de un espectro UV supone en primer lugar disolver la sustancia en un disolvente adecuado, que tambin absorbera en el UV, por lo que en la prctica la espectroscopia UV se ve limitada a longitudes de onda

superiores a 200-220 nm. Debido a ello, como podemos imaginar, no son muchos los grupos funcionales que podremos determinar con la espectroscopia UV, siendo de destacar que todos ellos deben poseer al menos un enlace doble. La existencia de un segundo doble enlace conjugado con el anterior o la presencia de un grupo auxocromo hace que aumente la max de la absorcin (efecto batocrmico) (tambin la absorbancia y , (efecto hipercrmico). En caso de producirse por cualquier circunstancia una disminucin de la max sera un efecto ipsocrmico, o una disminucin de la absorbancia (efecto hipocrmico). En la siguiente Tabla se indican las caractersticas de algunos cromforos en la espectroscopia UV:

GRUPO FUNCIONAL Acetilenos Diacetilenos Eninos Alenos Cumulenos (Butatrieno) Nitrilos Nitroderivados

max (nm) 170-175 225-235 220-225 175-185 241 340 210 270-280 260-270 350 350 400 210-215 208 210

4500 200 10000 10000 20300 120 16000 200 150 150 bajo 3 1600 300

Nitratos Nitritos Azo derivados Diazo derivados Sulfxidos Sulfonas Vinilsulfonas

Un caso aparte son los hidrocarburos aromticos que poseen dos absorciones caractersticas conocidas como banda E (etilnica) y banda B (bencenoide) que se ven modificadas por la presencia de dobles enlaces conjugados (E -> K (conjugacin)) y la presencia de elementos con pares de electrones sin compartir: banda R (radicalaria)

BANDA E K B R

TRANSICIN
->* ->* ->* n->*

max (nm) 180-220 220-250 250-290 275-330

2000-6000 10000-30000 100-1000 10-100

As por ejemplo: COMPUESTO BANDA E 184 (47000) Benceno 204 (7400)* 208 (7800) BANDA K BANDA B 254 (204) BANDA R -

t-Butilbenceno Estireno Acetofenona

244 (12000) 240 (13000)

257 (170) 282 (450) 278 (1100)

319 (50)

Una sola a 198nm (8000)

Aunque parezca de utilizacin limitada para la determinacin estructural, la espectroscopia UV se muestra muy til para el estudio de sistemas dinicos conjugados, en productos naturales, en compuestos carbonlicos ,-insaturados, en el estudio de productos quinnicos y en el de productos aromticos y heterocclicos, habindose establecido frmulas empricas que permiten determinar la max en funcin de la estructura. Algunos ejemplos de aplicacin se muestran en los siguientes ejemplos: