Cultivo Continuo

Es un sistema de flujo de volumen constante al que se le agrega continuamente medio y del cual sale un dispositivo que permite la eliminacin constante del medio excedente. El dispositivo ms frecuente para cultivo continuo es el llamado quimiostato.

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Quimiostato
Sistema abierto de flujo que se compone de: una cmara de cultivo de volumen constante a la que llega un suministro de nutrientes, (C N) y de la que se eliminan o separan los productos txicos de desecho (por un dispositivo de rebosadero).
Sistema en el Equilibrio el nmero de clulas y la concentracin de nutrientes en la cmara permanecen constantes sistema en estado estacionario, con las clulas creciendo exponencialmente

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Quimiostato

Caractersticas Inicia modo Batch Etapa de transicin (dx/dt 0, ds/dt 0) Opera en rgimen estable o estacionario Es posible controlar a y la densidad celular Seleccin de m.os (se mantienen los que crecen ms rpido) Ideal para tratamiento de aguas residuales Limitaciones Dificulta la recuperacin del producto Susceptible a contaminacin ( E y S) Poca estabilidad de cepas recombinantes
Batch S X

X
Quimiostato

S
t

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Aplicaciones del Quimiostato

Aportan una fuente continua de clulas en fase exponencial, lo que se aplica a procesos industriales de fermentacin Produccin de bebidas alcohlicas Antibiticos Aminocidos

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Parmetros del Quimiostato

Los parmetros a tener en cuenta son:
flujo (f), medido en L/h volumen de la cmara de cultivo (v, en L) densidad celular en la cmara (x) factor de dilucin D = f/v (en h-1)

la velocidad especifica de crecimiento () se controla por la tasa de flujo o la tasa de dilucin (velocidad a la que se bombea el medio en el tiempo) la densidad de la poblacin est controlada por la concentracin del nutriente limitante.

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Ecuaciones que rigen al Quimiostato

Balances para obtener las ecuaciones: 1. Modelo de crecimiento celular en la etapa de transicin y etapa de quimiostato dx/dt =(-D)x estado estacionario =D 2. Balance para sustrato ds/dt = D (Sr-S)- x / Yx/s estado estacionario S = Dks/ (max-D) biomasa en el estado estacionario X = Yx/s (Sr-S) 3. Balance para producto dP/dt = x(+)-DP estado estacionario P = Yx/s/D [Sr-(Dks/ (max-D)] (+)
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Balances en el quimiostato
F Sr Xo

V S X

FSX

Entrada Salida + Produccin Consumo = Acumulacin

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Dilucin crtica
Equilibrio se ve afectado: Si la tasa de dilucin se eleva muy alto, los microorganismos pueden ser removidos en su totalidad fuera del recipiente antes de que se reproduzcan dado que la velocidad de flujo superara a la velocidad de crecimiento (D>>). Si la dilucin es inferior a una gran porcin de clulas puede morir ya que no se agrega lo suficientemente rpido el sustrato para permitir el mantenimiento del cultivo (D<< ). Dilucin crtica (Dc) = dilucin a la cual la biomasa desaparece
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Productividad y Dilucin ptima

PR dPR/dD=0 X S Dc
D ptima

Productividad, la cantidad producida por unidad de tiempo PR = DX

D ptima , dilucin a la que se obtiene la mayor productividad Cmo se encuentra la dilucin ptima, que desventaja tiene y como solucionar el problema?
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D ptima
dilucin a la que se obtiene la mayor productividad

D op.= max {1 [ Ks/(So+Ks)]1/2 }

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Resumen Quimiostato
1. Etapa de transicin = max S/ (Ks+S) dx/dt =(-D) x ds/dt = D (Sr-S)- x / Yx/s dP/dt = x(+)-DP 3. D ptima D op.= max {1 [ Ks/(Sr+Ks)]1/2}

4. Productividad PR = DX
5. D crtica Cuando X = 0

2. Estado Estacionario =D X = Yx/s (Sr-S) S = Dks/ (max-D) P = Yx/s/D [Sr-(Dks/ (max-D)] (+)

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Ejercicio 1
Calcule cual sera la concentracin de biomasa y de sustrato al estado estacionario en un quimiostato que trabaja a una dilucin de 0.01 h-1 a una concentracin de sustrato de 100g/L, las constantes cinticas del microorganismo son: max= 0.8 h-1 Ks = 1 g/L Yx/s = 0.5 gbiomasa/g sustrato Generar el perfil de operacin del reactor hasta que la D = 0.9 h-1 (incrementos de 0.1 a partir de 0.1) determinando concentracin de biomasa, sustrato, dilucin crtica, productividad, y dilucin ptima.

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Ejercicio 2
En un laboratorio de bioprocesos se dispone de un sistema de cultivo continuo en una sola etapa y se requiere realizar un ensayo con una bacteria de max= 0.57 h-1, con un medio definido limitado por carbono, con Ks = 0.09 g/L y un Yx/s = 0.43g/g. El volumen de trabajo es de 50 L y se alimenta con un flujo de 32L/h con una concentracin de sustrato de 35 g/L. El producto generado en este cultivo es un metabolito secundario cuya constante es 0.356 g/g.h Determine la concentracin de biomasa, sustrato, producto, dilucin ptima, dilucin crtica y productividad del proceso.

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Quimiostatos en serie
F01 S01 F12 S1 X1 F02 S02

V1 S1 X1

F01 = F12 F2 = F12 + F02 D1 = F01 / V1 D2 = (F12 + F02) / V2 = F2 / V2 Balance de clulas (R1 y R2) estado transitorio y estado estacionario dX2/dt =0 Balance de consumo de sustrato estado transitorio (R1 y R2) y estacionario dS2/dt =0 Balance de formacin de producto estado transitorio (R1 y R2) y estacionario dP2/dt =0 (Tarea 10 puntos, escala 0-100)

V2 S2 X2

2
F2 S2 X2

Reactores de diferente tamao, Reactor 2 > Reactor 1 No hay deslave en reactor 2 si no lo hay en reactor 1

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Ecuaciones Quimiostatos en serie

1. Etapa de transicin dX1/dt =(1-D1) x1 dX2/dt =(2-D2) x2 + D12x1 dS1/dt = D1 (S01-S1)- (1x1/Yx/s) dS2/dt = D12 S1 + D02 S02- D2S2- (2x2/Yx/s) dP1/dt = X1 (1+)-D1P1 dP2/dt = D12P1 D2P2 + X2 (2+) 2. Estado Estacionario X2 = [-Yx/s (S01-S1) D12] / 2- D2 S2 = [D12 S1 + D02 S02- (2x2/Yx/s)] / D2 P2 = [D12P1 + X2 (2+)]/ D2

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Quimiostato 3 etapas
F01 S01 F02 S02

V1

V2 S2 X2

S1
X1

F1 S1 X1

F2 S2 X2 F03= F01+ F02 F13 S13

V3 S3 X3

F3 S3 X3

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Quimiostatos de una etapa con recirculacin

a) Interna o perfusin
Recirculacin
Sistemas que se bloquean o forman acumulaciones celulares (Clulas Inmovilizadas = Clulas fsicamente confinadas en un espacio fsico) Se elimina una etapa de separacin (Biomasa de Producto) Consta de un filtro interno para retener las clulas que se producen, los productos txicos son removidos y el producto de inters secretado recuperado Alta productividad, si se utiliza un soporte poroso, la densidad celular ser tal que permitir un buen rendimiento Tipos de inmovilizacin: Adsorcin superficial (clulas animales), Autoagregacin (Lodos Activados), Confinamiento en barrera, Atrapamiento en matriz porosa

Aplicacin: Cultivo de clulas animales, cultivo de clulas vegetales, produccin de vacunas y hormonas (perfusin). Procesos con costo elevado debido a su operacin compleja
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Quimiostatos de una etapa con recirculacin externa

b) Externa
Prurga

tratamiento de aguas
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Efluente clarificado

Resumen de aplicaciones del quimiostato

Estudio de la fisiologa de microorganismos y clulas animales y vegetales en condiciones constantes. Produccin de vino. Produccin de biomasa. Produccin de enzimas Fermentaciones de la leche. Cultivos de quimostato pueden ser usados para la produccin de "iniciadores" para la fabricacin de quesos y leches fermentadas, tal como el yogurt. Aguas residuales

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C. continuo vs C. Discontinuo
Cultivo dicontinuo (lote o intermitente) Sistema cerrado La poblacin microbiana crece en un volumen fijo de medio que no se renueva y que se modifica Fase temprana de crecimiento constante Fase exponencial, concentracin de sustrato y resto de nutrientes disminuye, inhibicin por exceso de producto, acumulacin de productos excretados, pH extremoso, fisiologa del microorganismo cambia a lo largo del tiempo de incubacin Fase estacionaria medio de cultivo inhabitable Fcil de controlar, permite realizar muchas rplicas a pequea escala Ideal para producir metabolitos secundarios( los que se generar despus de que crece el m.o.) Cultivo continuo Sistema abierto El medio se agrega continuamente y opera en estado estacionario (equilibrio entre la velocidad de duplicacin de un m.o., velocidad de salida de clulas y medio de cultivo con desechos) Los residuos mas el exceso de poblacin se eliminan a travs de una lnea de salida a una definida velocidad de Dilucin Flujo constante a volumen fijo Ideal para producir metabolitos primarios (metabolitos asociados al crecimiento) Permite obtener altos rendimientos de producto Ambiente constante Permite estudiar el efecto de los nutrientes sobre un m.o. especfico

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Transferencia de oxgeno en los biorreactores

La transferencia de masa es el proceso en el cual ocurre un cambio de concentracin de un compuesto al transferirse de una fase a otra.

Difusin o conveccin 3 1 2 Transporte de O2 en el seno del lquido

oxgeno

E. coli

1- TRANSFERENCIA DE MASA EN GASES O LIQUIDOS QUIETOS: POR DIFUSION MOLECULAR.

La velocidad de transferencia de masa debida a un gradiente de concentracin se define por la ley de Difusion ( LEY DE FICK), donde la transferencia se efectua por un mecanismo lento. J = - DAB dCA dZ - DAB: coeficiente de difusin del soluto A en la mezcla AB (cm2 seg-1 ) - La fuerza impulsora (dCA) gradiente de concentracin - El flujo de masa (J) que se transfiere es directamente proporcional al gradiente de concentracion o fuerza impulsora. El coeficiente DAB puede OBTENERSE : * gases : teora cintica de los gases * lquidos: no hay teora de estructura. En caso de soluciones diluidas de no electrolitos hay expresiones similares a las de gases, relacionando con el PM de los solventes, viscosidad, etc, pero no son exactas.

2- TRANSFERENCIA DE MASA EN LIQUIDOS AGITADOS : Por Conveccin

No se pueden describir en forma exacta las condiciones de flujo (turbulencia) y se recurre a parmetros globales como son los coeficientes de transferencia de masa que dependen de los compuestos a transferir y de las condiciones del sistema. Lquido Gas C*g Fuerza motriz = F =(C*g-CL) O2 C*g: se estima mediante la ley de Henry o Ec. de Pirt CL CL: se mide con un electrodo As la velocidad de trasnferencia de masa por unidad de volumen y por conveccin (Na) es: Na= AF/VR Na= KLa (C*g-CL)
a: Area diponible/Volumen del reactor 1/Resistencia a fluir: conductancia= KL KLa: coeficiente volumtrico de tranfserencia de O2. C*g= Ci CH2O

Ci = (P/H) YO2

donde P-presin; H-cte de Henry; YO2 mol O2 /moles totales

Mtodos para calcular el KLa a) Indirectos: mtodo del sulfito, esttico y del tiempo de respuesta. b) Directos: mtodo dinmico y balance de oxgeno

Investigar y describir al menos dos mtodos para calcular el KLa Lectura y discusin de articulo: 1. Cuntos gases participan en la fase acuosa? 2. Cul fue el desafo de los autores en el diseo del biorreactor? 3. Cul fue el reactor que utilizaron? 4. Qu ecuacin proponen para la transferencia de masa? 5. Cmo se agit el reactor y como se suministraron los gases? 6. Cmo se midi el oxgeno disuelto? 7. Qu mtodo utilizan para medir el KLa? 8. Cul fue el sustrato utilizado? 9. Cul fue la limitante del diseo? 10. Cmo aumentaron la tasa de transferencia?

Escalamiento de Biorreactores
Objetivos del escalamiento: 1.Predecir como se realizar el proceso de fermentacin 2.Controlar las condiciones de operacin independientemente de la escala utilizada Parmetros a considerar durante el escalamiento: Transferencia de oxgeno (gas) Transferencia de calor Tipo de fluidos (Newtoniano o No-Newtoniano) Agitacin (homogenizacin del medio)

Criterios para el escalamiento Dependiendo del tipo de fermentacin deber escogerse uno de los siguientes criterios para el escalamiento:

Nmero de Reynolds modificado nD2i/ Potencia consumida durante el mezclado por unidad de volumen de lquido P/V Energa disipada por unidad de masa del lquido velocidad de transferencia de oxgeno en un punto determinado del reactor (coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, KLa) Velocidad de circulacin del lquido

P/V y KLa son los dos criterios ms utilizados para el escalamiento. El nmero de litros, el nmero de Reynolds y el tiempo de mezclado no son buenos criterios de escalamiento.