Universidad de Colima

DOCTORADO EN CIENCIAS. REA: BIOTECNOLOGA

Presencia, identificacin y patogenicidad de
nematodos entomopatgenos (Rhabditidae:
Heterorhabditidae, Steinernematidae) aislados de
suelos del Pacfico Centro Mexicano

Tesis

Que para obtener el grado de Doctor en Ciencias
rea: Biotecnologa

PRESENTA

Martn Gonzlez Ramrez

ASESORES:

DR. Roberto Lezama Gutirrez
DR. Jaime Molina Ochoa

Tecomn, Col Marzo 2006
i
Agradecimientos

A la Universidad de Colima; por su gran inters, por llevar sus carreras
profesionales a los lugares indicados que hacen posible la realizacin del deseo
de superacin del estudiantado

A la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias; por permitirme y
bridar el apoyo suficiente para la realizacin de mis estudios.

Al Dr. Carlos Salazar Silva, rector de la Universidad de Colima y
autoridades universitarias, quienes permitieron mi formacin acadmica.

Al Dr. Javier Farias Larios por sus consejos y sugerencias durante mis
estudios.

Al Dr. Roberto Lezama Gutirrez por su asesoria durante mis estudios, sus
atinadas sugerencias en el proceso acadmico y de redaccin del escrito de tesis
doctoral.

Al Dr. Jaime Molina Ochoa por sus consejos durante mi formacin y
redaccin de tesis doctoral.

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa por la beca econmica para
realizar mis estudios en la universidad de Colima, durante el perodo de 1997-
2000.

ii
Dedicatorias

A ti Seor, por dejarme alcanzar una vez ms otra meta deseada.

A mi esposa Juana de la Cruz Olivares Arias, Claudia Isabel Gonzlez
Olivares y Edith Jaqueline Gonzlez Olivares quienes sin saberlo, con su sonrisa,
cario y amor alimentan mi vida y hacen que el sol brille ms fuerte en los das
nublados.

A mis compaeros de la Generacin 1997-2000 del Doctorado en Ciencias
en Biotecnologa

A mi Alma Mater























iii
Indce Pag.
Agradecimientos.................................................................................................... i
Dedicatorias...........................................................................................................ii
Indice.....................................................................................................................ii
Lista de cuadros .................................................................................................. vii
Lista de figuras .................................................................................................... iix
Abstract ................................................................................................................xi
Resumen ............................................................................................................. xii
I. Introduccin....................................................................................................... 1
II. Antecedentes.................................................................................................... 8
2.1 Los nematodos entomopatgenos................................................................. 8
2.2. Biologa del complejo nematodo/bacteria ..................................................... 9
2.3. Las bacterias mutualistas ........................................................................... 12
2.4. Las interacciones nematodo/bacteria con hospederos............................... 15
2.5. Biogeografa ............................................................................................... 17
2.5.1. Incidencia y la distribucin ................................................................... 18
2.6. Presencia natural de nematodos entomopatgenos................................... 20
2.7. Los factores limitantes ................................................................................ 42
2.7.1. Factores de abiticos ........................................................................... 44
2.7.1.1. La textura y la estructura del suelo................................................ 44
2.7.1.2. Humedad y la aireacin del suelo.................................................. 46
2.7.1.3. La temperatura del suelo............................................................... 49
2.7.1.4. El pH del suelo............................................................................... 51
2.7.1.5. Plaguicidas .................................................................................... 51
2.7.2. Factores de biticos ............................................................................. 52
2.7.2.1 Los patgenos microbianos............................................................ 53
2.7.2.2. Depredadores de nematodos ........................................................ 55
2.7.2.3. Hospederos no plaga..................................................................... 56
2.7.2.4. Races de plantas y microflora de la rizosfera............................... 57
2.8. Rango de hospederos................................................................................. 58
2.9. La conducta ecolgica ................................................................................ 59
iv
2.10. Ecologa.................................................................................................... 60
2.11. Sobrevivencia ........................................................................................... 61
2.12. El reciclaje de nematodos......................................................................... 63
2.13. Gentica ................................................................................................... 64
2.14. Produccin masiva, formulacin y comercializacin................................. 65
2.15. La formulacin y almacenamiento ............................................................ 67
2.16. El control de calidad.................................................................................. 68
2.16. La comercializacin .................................................................................. 68
2.17. Las estrategias de aplicacin.................................................................... 69
2.18. Los mtodos de la aplicacin.................................................................... 70
2.19. Los efectos de agroqumicos y agentes de control biolgico.................... 71
III. Materiales y Mtodos..................................................................................... 73
3.1. Lugar del experimento................................................................................ 73
3.2. Cra de Galleria mellonella L....................................................................... 73
3.3. Lugares de muestreo.................................................................................. 74
3.4. Colecta de suelo......................................................................................... 80
3.5. Aislamiento de nematodos entomopatgenos............................................ 80
3.6. Postulados de Kochs................................................................................. 81
3.7. Identificacin de nematodos entomopatgenos.......................................... 82
3.8. Preparacin de JIs para estudios morfomtricos....................................... 82
3.9. Origen de las moscas de la fruta ................................................................ 82
3.10. Reproduccin de nematodos.................................................................... 83
3.11. Prueba de patogenicdad de nematodos a A. ludens ................................ 83
3.11.1 Experimento de larvas de A. ludens en cajas de petri......................... 83
3.11.2. Experimento de larvas y pupas de A. ludens en botes de plstico con
suelo areno-limoso......................................................................................... 84
3.12. Diseo experimental ................................................................................. 84
3.13. Anlisis de datos....................................................................................... 84
IV. Resultados .................................................................................................... 86
4.1. Presencia de nematodos entomopatgenos por localidad y estado........... 86
v
4.3. Presencia de nematodos entomopatgenos del nmero de muestras
analizadas.......................................................................................................... 86
4.5. Tipo de hbitat ............................................................................................ 90
4.6. Caractersticas fsico-qumicas del suelo.................................................... 92
4.6.1. pH del suelo ......................................................................................... 92
4.6.2. Conductividad elctrica del suelo (dS/m) ............................................. 95
4.6.3. Materia orgnica del suelo (%)............................................................. 97
4.6.4. Nitrgeno del suelo (%)........................................................................ 97
4.6.5. Fsforo del suelo (mg/kg suelo) ........................................................... 97
4.6.6. Potasio del suelo (cmol/kg suelo)......................................................... 98
4.6.7. Calcio del suelo (cmol/kg suelo)......................................................... 100
4.6.8. Anlisis de correlacin de las caractersticas fsico-qumicas............ 101
4.7. Textura del suelo para nematodos entomopatgenos.............................. 101
4.8. Altitud sobre el nivel del mar (msnm)........................................................ 105
4.9. Virulencia de cepas y aislados de nematodos entomopatgenos ............ 107
4.9.1. Tiempo letal 50 de nematodos evaluados sobre larvas de A. ludens. 113
4.10. Virulencia de nematodos a larvas de A. ludens en botes con suelo estril.
.......................................................................................................................... 114
4.11. Virulencia de nematodos a pupas de A. ludens en un suelo estril......... 118
V. Discusiones.................................................................................................. 120
5.1 Presencia de nematodos entomopatgenos......................................... 121
5.2. Tipo de hbitat .......................................................................................... 122
5.3. Caractersticas fsico-qumicas del suelo.................................................. 123
5.3.1. pH del suelo ....................................................................................... 123
5.3.2. Conductividad elctrica ...................................................................... 125
5.3.3. Materia orgnica................................................................................. 125
5.3.4. Nitrgeno............................................................................................ 126
5.3.5. Fsforo............................................................................................... 126
5.3.6. Potasio ............................................................................................... 127
5.3.7. Calcio ................................................................................................. 127
5.4. Textura del suelo ...................................................................................... 128
vi
5.5. Altitud........................................................................................................ 130
5.6. Virulencia de nematodos sobre larvas de A. ludens. ................................ 131
5.7. Virulencia de nematodos sobre larvas y pupas de A. ludens en un suelo
areno-limoso. ................................................................................................... 133
5.8. Tiempo letal 50% (TL
50
) de nematodos sobre larvas de A. ludens. .......... 134
VI. Conclusiones............................................................................................... 135
V. Literatura consultada.................................................................................... 137
























vii
Lista de cuadros
Cuadro 1. Especies descritas de nematodos entomopatgenos y sus
respectivas especies de bacterias simbiticas .......

12
Cuadro 2. Algunos factores que afectan la sobrevivencia y la infectivididad
de nematodos de entomopatgenos ....

43
Cuadro 3. Distribucin vertical de Steinernema glaseri de cuatro tipos de
suelo diferentes, 5 das despus de la colocacin de 30,000
nematodos a una profundidad de 16 cm (Georgis y Poinar, 1983c)

45
Cuadro 4: Efectos del tipo suelo y races de maz sobre la infectividad de
Heterorhabditis bacteriophora a larvas de la polilla de la cera
(Galleria mellonella) (Choo y Kaya, 1991) ...

58
Cuadro 5. Nmero de localidad, cdigo, nmero de muestras por localidad,
fecha de colecta, localidad, localizacin geogrfica, altitud y
cultivo de seis estados del Pacfico Centro Mexicano ...

75
Cuadro 6. Porcentaje de localidades positivas con nematodos
entomopatgenos en seis estados de la Republica Mexicana .

86
Cuadro 7. Porcentaje de muestras positivas con nematodos
entomopatgenos en seis estados de la Republica Mexicana ....

87
Cuadro 8. Caractersticas fsico-qumicas del suelo: pH, Conductividad
elctrica, materia orgnica, Nitrgeno, Fsforo, Potasio, Calcio de
las localidades que resultaron positivas con la presencia de
nematodos entomopatgenos ...


88
Cuadro 9. Valores de correlacin de las caractersticas fsico-qumicas del
suelo con relacin a la presencia de nematodos entomopatgenos
102
Cuadro 10. Presencia de nematodos entomopatgenos en funcin de la
altitud (msnm) y textura del suelo (arena: limo: arcilla) .....

108
Cuadro 11. Porcentaje de mortalidad de larvas A. ludens a diferentes
especies y cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y
prueba de separacin de medias por Tukey al 0.05 ..

111
Cuadro 12. Evolucin del porcentaje de mortalidad de larvas de A. ludens
inoculadas con 23 cepas o aislados de nematodos
entomopatgenos nativos a la concentracin de 1000 JIs por
mililitro en cajas de petri .


112
viii
Cuadro 13. Estimacin de los tiempos letales, limite de confianza de 23
aislados y cepas de nematodos entomopatgenos
(Steinernematidae: Heterorhabditidae) evaluados sobre larvas de
mosca de la fruta A. ludens


115
Cuadro 14. Porcentaje de mortalidad de larvas A. ludens a diferentes
especies y cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y
prueba de separacin de medias por Tukey al 5%

116
Cuadro 15. Evolucin del porcentaje de mortalidad de larvas de Anastrepha
ludens inoculadas con aislados de nematodos entomopatgenos
en suelo estril a la concentracin de 1000 JIs por mililitro ..

117
Cuadro 16. Porcentaje de mortalidad de pupas A. ludens a diferentes
especies y cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y
prueba de separacin de medias por Tukey al 5%

118
Cuadro 17. Evolucin del porcentaje de mortalidad de pupas de A. ludens
inoculadas con aislados de nematodos entomopatgenos en
suelo estril a la concentracin de 1000 JIs por mililitro ...

119























ix
Lista de figuras
Figura 1. Ciclo de vida generalizado de steinernematidos y heterorhabditidos
IJ = Juvenil infectivo

10
Figura 2. Juvenil infectivo del tercer estadio de (A) Steinernema carpocapsae
muestra la prdida de la cutcula del segundo estadio (arriba) y (B)
Heterorhabditis bacteriophora muestra la cutcula bien pegada del
segundo estadio (arriba)


10
Figura 3. Mapa de muestreo de los estados de colecta de muestras de suelo
del Pacfico Centro Mexicano

73
Figura 4. Porcentaje de muestras con presencia de nematodos
entomopatgenos de los estados de Colima (C), Jalisco (J),
Michoacn (M), Nayarit (N), Sinaloa (S) y Veracruz (V) en la Zona
Centro Occidente de Mxico .


90
Figura 5. Porcentaje de muestras positivas con nematodos entomopatgenos
en funcin del tipo de hbitat de muestreo como maz (M), maz-
sorgo (M/S), sorgo para grano (SG), sorgo forrajero (SF), pasto
Sudn (PS), limn (L), palma gigante (PG), palma hbrida (PH),
mango (m) y naranja valencia (N) .......



91
Figura 6. Porcentaje de recuperacin de especies de nematodos
entomopatgenos en funcin del tipo de hbitat: maz (M), maz-
sorgo (M/S), sorgo para grano (SG), sorgo forrajero (SF), pasto
Sudn (PS), limn (L), palma gigante (PG), palma hbrida (PH),
mango (m) y naranja valencia (N)



92
Figura 7. Frecuencia relativa de la presencia de nematodos entomopatgenos
en funcin del pH del suelo de las muestras positivas como: muy
ext. cido (4.0-4.5), fuerte. cido (4.6-5.5), cido (5.6-6.5), mod.
cido (6.6-6.8), neutro (6.9-7.2), mod. alcalino (7.3-7.5) y no
analizados



93
Figura 8. Frecuencia relativa a la presencia de nematodos Steinernema y
Heterorhabditis con relacin al pH del suelo de las localidades
positivas como muy ext. cido (4.0-4.5), ext. cido (4.6-5.5), cido
(5.6-6.5), mod. cido (6.6-6.8), neutro (6.9-7.2), mod. alcalino (7.3-
7.5) y no analizados



94
Figura 9. Presencia de nematodos entomopatgenos en funcin de la
conductividad elctrica o salinidad del suelo EN= (< 0.25), DPSS=

x
(0.26-0.75), OMP= (0.76-1.25), RC= (1.26-1.75), ST= (1.76-2.25),
TMP= (> 2.26) y ND= no determinado

96
Figura 10. Presencia de nematodos entomopatgenos, tipo de especie
Heterorhabditis y Steinernema en funcin de la conductividad
elctrica o salinidad del suelo EN= (< 0.25), DPSS= (0.26-0.75),
OMP= (0.76-1.25), RC= (1.26-1.75), ST= (1.76-2.25), TMP= (>
2.26) y ND= no determinado .



96
Figura 11. Porcentaje de la presencia de nematodos en funcin del fsforo
presente en las muestras positivas ..

98
Figura 12. Presencia de nematodos en funcin del potasio presente en las
muestras positivas con estos agentes .

99
Figura 13. Porcentaje de la presencia de nematodos entomopatgenos dentro
de las muestras positivas en funcin de calcio del suelo .

100
Figura 14. Correlacin de las caractersticas fsico-qumicas con respecto a la
presencia de nematodos entomopatgenos ..

102
Figura 15. Presencia de nematodos entomopatgenos tipo de textura del
suelo (areno-limoso A-L, franco arenoso F-A, franco F, franco-
limoso F-L, franco-arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-arcilloso F-Ar,
arcilloso Ar y muestras no analizadas NA) .
103
Figura 16. Presencia de especies de entomopatgenos en funcin de la
textura del suelo (areno-limoso A-L, franco arenoso F-A, franco F,
franco-limoso F-L, limoso L, franco-arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-
arcilloso F-Ar, arcilloso Ar y muestras no analizadas ...
104
Figura 17. Presencia de nematodos entomopatgenos por estado de
muestreo en funcin de la textura del suelo (areno-limoso A-L,
franco arenoso F-A, franco F, franco-limoso F-L, limoso L, franco-
arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-arcilloso F-Ar, arcilloso Ar y muestras
no analizadas NA) ...
105
Figura 18. Porcentaje de la presencia de nematodos entomopatgenos de
suelo en funcin de la altitud sobre el nivel del mar de las
localidades de Colima (C), Jalisco (J), Michoacn (M) y Nayarit (N)

106
Figura 19. Porcentaje de presencia de Steinernema y Heterorhabditis en
funcin de la altitud sobre el nivel del mar de las localidades de
Colima (C), Jalisco (J), Michoacn (M) y Nayarit (N)

107
xi
PRESENCE, IDENTIFICATION AND PATHOGENICITY OF
ENTOMOPATHOGENIC NEMATODES (RHABDITIDAE;
HETERORHABDITIDAE, STEINERNEMATIDAE) ISOLATED FROM SOILS OF
THE MEXICAN CENTRAL PACIFIC REGION

Abstract

The objective of this research was to detect the presence of entomopathogenic
nematodes (EPN) in six Mexican states of the Central Pacific region. About 147
soil samples were obtained from 89 localities. The EPN were isolated by baiting
soil samples with larvae of the greater wax moth, Galleria mellonella L., and were
incubated at 25C. The recovery rate of EPNs from soil samples was about 23.8%.
The genus of EPN mostly recovered was Steinernema with 25 isolates (17%), and
Heterorhabditis with 10 isolates (6.8%), belonging to the families
Steinerenematidae, and Heterorhabditidae. Steinernema had higher recovery rates
than Heterorhabditis, and it was frequently recovered from cornfields. A simple
logistic regression analysis revealed a positive association with chemical, and
physical soil characteristics such as pH, phosphorus, and potassium, but also
revealed negative associations with electrical conductivity, organic matter content,
nitrogen, and calcium. The pathogenicity of the EPN isolated was evaluated
against third instars of the Mexican fruit fly, Anastrepha ludens Loew. The Petri
dish technique was used to evaluate the pathogenicity of 23 isolates. Petri dishes
were lined with two pieces of filter paper Whatman No. 1, 1 ml of a diluted
concentration of EPN were made in sterile distilled water containing 1000 infective
juveniles of each isolated was added to the Petri dishes and kept at 15% humidity,
and then 20 larvae were placed in each dish. The experiment was replicated 4
times, and kept under laboratory conditions. The larval mortality was recorded
every 24 h postinoculation, and the cadavers were dissected to verify the presence
of EPN. The insect pest exhibited differential grades of susceptibility to EPN. The
larval mortality percentages ranged from 51.1 to 90.6%. Seven isolates showed
higher levels of pathogenicity, four belonged to Steinernema, and three to
Heterorhabditis. An association between the larval mortality rate, and exposure
time to EPNs was observed. The lethal mean time (LT
50
) was estimated by Probit
analysis. The LT50 was 13 at 62 h, the isolates SM45, SC3b, S. carpocapsae
LDV, SC1b, HC10bm, HC21c were four-fold more pathogenic than S. riobrave.
The results suggested that these isolates have potential as biological control
agents of A. ludens.

Key words: Biological control, Steinernematidae, Heterorhabditidae, Mexican fruit
fly, Anastrepha, Tephritidae.




xii
PRESENCIA, IDENTIFICACIN Y PATOGENICIDAD DE NEMATODOS
ENTOMOPATGENOS (RHABDITIDAE; HETERORHABDITIDAE,
STEINERNEMATIDAE) AISLADOS DE SUELOS DEL PACFICO CENTRO
MEXICANO

Resumen

El objetivo de esta investigacin fue detectar la presencia de nematodos
entomopatgenos (NEP) en seis estados del Pacfico Centro Mexicano. Alrededor
de 147 muestras de suelo fueron obtenidas de 89 localidades. Los NEP fueron
aislados al cebar muestras de suelo con larvas de palomilla mayor de la cera,
Galleria mellonella L., y fueron incubadas a 25C. La tasa de recuperacin de NEP
de las muestras de suelo fue alrededor de 23.8%. El gnero de NEP mayormente
recuperado fue Steinernema con 25 aislados (17%), y Heterorhabditis con 10
aislados (6.8%), pertenecientes a las familias Steinerenematidae y
Heterorhabditidae. Steinernema tuvo tasas de recuperacin ms grandes que
Heterorhabditis, y fue ms frecuentemente recuperado de suelos de maizales. Un
anlisis simple de regression logstica revel una asociacin positiva con
caractersticas fsicas y qumicas de suelo tales como: pH, fsforo, y potasio; pero
tambin revel asociaciones negativas con la conductividad elctrica, contenido de
materia orgnica, nitrgeno y calcio. La patogenicidad de los NEP aislados fue
evaluada en contra de terceros estadios de la mosca mexicana de la fruta,
Anastrepha ludens Loew. La tcnica de platos de Petri se us para evaluar la
patogenicidad. A los platos de Petri se les colocaron dos piezas de papel filtro
Whatman No. 1 y luego 1 ml de una concentracin diluida de NEP hecha con agua
destilada estril conteniendo 1000 juveniles infectivos de cada aislado fue
adicionada a los platos de Petri; mantenidas a 15% de humedad, luego 20 larvas
fueron colocadas en cada plato. El experimento fue repetido cuatro veces y
mantenido bajo condiciones de laboratorio. La mortalidad larvaria fue registrada
cada 24 h postinoculacin, y los cadveres fueron diseccionados para verificar la
presencia de NEP. El insecto plaga mostr grados variables de susceptibilidad a
NEP. Los porcientos de mortalidad variaron de 51.1 a 90.6%. Siete aislados
mostraron los niveles ms altos de patogenicidad, cuatro pertenecieron a
Steinernema y tres a Heterorhabditis. Se observ una asociacin entre la tasa de
mortalidad larvaria y el tiempo de exposicin larvaria a NEP. Los tiempos letales
promedios (TL
50
) fue estimado mediante anlisis Probit. El TL
50
fu 13 a 62 h; los
aislados de NEP: SM45, SC3b, S. carpocapsae LDV, SC1b, HC10bm y HC21c
fueron cuatro veces ms patgenos que S. riobrave. Los resultados sugieren que
estos aislados tiene potencial como agentes de control biolgico de A. ludens.

Key words: Control biolgico, Steinernematidae, Heterorhabditidae, mosca
mexicana de la fruta, Anastrepha, Tephritidae.


1
I. Introduccin
El uso excesivo de los insecticidas qumicos ha provocado el desarrollo de
la resistencia de los insectos a los insecticidas, los cuales adems tienen efectos
adversos sobre los insectos benficos, vida silvestre y sobre la salud humana en
todo el mundo. En respuesta a sto se han incrementado las demandas para
buscar nuevas alternativas de control, as como la seleccin de los agentes de
control de plagas, en particular el uso de control biolgico. En general, existen tres
tipos de control biolgico los cuales estn organizados como: natural, clsico y
aumentativo (Gaugler, 1988).
Durante la ltima dcada, han tenido un elevado inters tanto por las
universidades, los gobiernos y los cientficos industriales sobre el control biolgico
aumentativo de insectos por medio del uso de nematodos entomopatgenos ya
que estos renen muchos criterios de seleccin, los cuales pertenecen a las
familias de Steinernematidae y Heterorhabditidae (Georgis, 1992; Kaya y Gaugler,
1993; Midituri et al., 1996).
Los nematodos steinernemtidos y heterorhabdtidos estn asociados
simbiticamente con las bacterias patgenas de insectos de los gneros
Xenorhabdus y Photorhabdus, respectivamente (Akhurst y Dunphy, 1993;
Boemare et al., 1993). La forma infectiva de estos nematodos es en la fase juvenil
(dauer) que se encuentra en el suelo donde puede sobrevivir varios meses sin
alimentarse y llevar una sola especie de bacteria, como simbionte, dentro del
intestino (Akhurst, 1990).
Los nematodos al encontrar un insecto hospedero entran por las aberturas
naturales (boca, ano, espirculos), pero tambin en el caso de la especie de
Heterorhabditis, penetran a travs de la cutcula y para invadir al hospedero, hasta
el hemocelo donde libera la bacteria simbitica en la hemolinfa del insecto, en
donde sta produce protenas antibacterianas que previenen la infeccin de otros
agentes biolgicos (Dunphy, 1994). La bacteria proliferante, mata al insecto
hospedero en un perodo de 24 a 48 horas y establece condiciones satisfactorias
2
para la reproduccin de los nematodos ya que le proporciona los medios
necesarios como nutrientes e inhibir el crecimiento de otros microorganismos
(Kaya et al., 1993).
Los nematodos se han aplicado exitosamente en el control de insectos
plaga en cultivos agrcolas, hortcolas, forestales y zonas urbanas, en muchos
pases (Georgis, 1992). En Europa, los productos a base de nematodos estn
disponibles primeramente para el control de Otiorhynchus sulcatus (F), y moscas
esciaridas en hongos comestibles y cultivos hortcolas. En los Estados Unidos de
Norte Amrica y Canad, se dispone de los productos comerciales para el control
de un amplio espectro de insectos que viven en el suelo y en lugares crpticos.
Sin embargo, en Mxico y el resto de Latinoamrica, no se han explotado
completamente, ms aun existe poca difusin de estos agentes de control
biolgico. Tal vez una de las razones es la carencia de informacin acerca de su
potencial, identificacin y distribucin de nematodos nativos, lo cual podra permitir
la seleccin de aislados o especies eficaces (Stock, 1995).
La investigacin sobre agentes de control biolgico, que tienen gran
potencial para el control de insectos plaga, como los nematodos
entomopatgenos, por su habilidad para actuar como agentes efectivos contra
insectos con la finalidad de conocer cuales son los nuevos y mejores aislados de
nematodos, ya que estos se han clasificado por sus caractersticas de accin
como acechadores, emboscadores y/o navegadores quienes son atrados al
insecto hospedero (Lewis et al., 1993).
Durante los ltimos aos, el nmero de aislados reportados se ha
incrementado enormemente, siendo estos obtenidos de diferentes tipos de suelos
donde habitan los insectos en diferentes pases los cuales pertenecen a las
familias Heterorhabditidae y Steinernematidae (Poinar, 1990). Muchos de los
nematodos que se han aislado a partir de suelo mediante la tcnica de trampa de
Galleria mellonela L. (Bedding y Akhurst, 1975) se han demostrado que estos
nematodos se distribuyen en muchas partes del mundo como Asia (Zhang et al.,
3
1992; Amarasinghe et al., 1994), frica del norte (Shamseldean y Abd-Elgawad,
1994), Australia y Nueva Zelanda (Akhurst y Bedding, 1986; Wouts, 1979),
Canad (Mracek y Webster, 1994), Europa (Mracek, 1980; Deseo et al., 1984;
Burman et al., 1986; Blackshaw, 1988; Vanninen et al., 1989; Hominick y Briscoe,
1990a, 1990b; Ehlers et al., 1992; Griffin et al., 1991, 1994; Boag et al., 1992;
Haukeland, 1993; Tallosi et al., 1995; Delpino y Palomo 1996); Regin
Mediterrnea (Glazer et al., 1991c; Ozer et al., 1995, Amrica del sur (deDoucet,
1986b; Nguyen y Smart, 1988; deDoucet y deDoucet, 1990; Stock, 1995), Amrica
del Norte, EEUU (Akhurst y Brooks, 1984; Hara et al., 1991; Rueda et al., 1993;
Liu y Berry, 1995a), Corea (Choo et al.,1995) y Malasia (Mason et al., 1996).
En tanto que, el gnero Heterorhabditis se ha aislado de Santa F
Argentina (Stock, 1993); Bracon Australia (Poinar, 1975); Vietnam (Phan et al.,
2003); China (Liu, 1994); (Stock et al., 2002); islas de Hawai (Garned et al., 1994);
Tamil Nadu India (Poinar et al., 1992); Oregon EEUU (Liu y Berry, 1996a); Ohio,
EEUU (Poinar et al., 1987); (Nguyen et al., 2004); (Kakulia y Mikaia, 1997); y
Nueva Zelanda (Poinar, 1990b).
Hasta la fecha la familia Steinernematidae contiene dos gneros
Neosteinernema (Nguyen y Smart, 1994) con una especie y Steinernema (Steiner,
1923) de estas se conocen 45 especies, aisladas de distintas reas geogrficas
(Poinar, 1990); como S. abbasi (Elawad et al., 1997); S. aciari (Qiu et al., 2005); S.
affinis (Bovien, 1937); S. anomali (Kozodoi, 1984); S. anatoliense (Hazir et al.,
2003); S. apuliae (Triggiani et al., 2004); S. asiaticum (Shahina et al., 2002); S.
bicornutum (Tallosi y Ehlers, 1995); S. carpocapsae (Weiser, 1955); S. caudatum
(Xu et al., 1991); S. ceratophorum (Jian et al., 1997); S. cubana (Mracek et al.,
1994); S. diaprepesi (Nguyen y Duncan, 2002); S. feltiae (Filipjep, 1934); S. glaseri
(Steiner, 1929); S. guangdogense (Qiu et al., 2004); S. hermaphroditum (Stock et
al., 2004); S. intermedia (Poinar, 1985); S. jollieti (Spiridonov et al., 2004); S. karii
(Waturu et al., 1997); S. kraussei (Steiner, 1923, Mracek, 1994); S. kushidai
(Mamiya, 1988); S. litorale (Yoshida, 2004), S. loci (Phan et al., 2001); S.
longicaudum (Shen y Wang, 1991); S. monticolum (Stock et al., 1997); S.
4
neocurtillis (Nguyen y Smart, 1992); S. oregonensis (Liu y Berry, 1996b); S.
pakistanense (Shahina et al., 2001); S. puertoricensis (Roman y Figueroa, 1994);
S. rara (deDoucet, 1986b); S. riobravis (Cabanillas et al., 1994); S. ritteri
(deDoucet, 1990); S. robustispiculum (Phan et al., 2005); S. sangi (Phan et al.,
2001); S. scapterisci (Nguyen y Smart, 1990); S. scarabaei (Stock y Koppenhofer,
2003); S. siamkayai (Stock et al., 1998); S. silvaticum (Sturhan et al., 2005); S.
tami (Van Luc et al., 2000); S. thanhi (Phan et al., 2001); S. thermophylum
(Gangula y Singh, 2000); S. weiseri (Mracek et al., 2004); S. websteri (Cutler y
Stock, 2003); S. yirgalemense (Nguyen et al., 2005) y una especie de
Neosteinernema longicurvicauda (Nguyen y Smart, 1994).
En tanto que, la familia Heterorhabditidae compuesta del gnero
Heterorhabditis, la cual contiene doce especies H. argentinensis (Stock, 1993); H.
bacteriophora (Poinar, 1975); H. baujardi (Phan et al., 2003); H. brevicaudis (Liu,
1994); H. downesi (Stock et al., 2002); H. hawaiiensis (Garned et al., 1994); H.
indicus (Poinar et al., 1992); H. marelatus (Liu y Berry, 1996a); H. megidis (Poinar
et al., 1987) sinnimo H. californicus (Stock et al., 1996); H. mexicana (Nguyen et
al., 2004); H. poinarii (Kakulia y Mikaia, 1997); y H. zealandica (Poinar, 1990).
Muchos de los nematodos aislados en la actualidad permanecen sin
clasificar al nivel especfico de especie, no obstante muchos autores han creado
claves taxonmicas utilizando machos y juveniles infectivos por lo difcil de
encontrar un buen diagnstico de los caracteres morfolgicos para su
identificacin de estos nematodos (Nguyen y Smart, 1992b, 1996; Poinar, 1990;
Wright, 1990; Joyce et al., 1994a). Por otro lado, la identificacin de aislados es un
aspecto importante de la investigacin y desarrollo de cada familia de nematodos
entomopatgenos. Curran (1990) concluye que el anlisis de secuenciacin del
DNA constituye el mtodo molecular preferido para la discriminacin entre
categoras de nematodos entomopatgenos bajo el nivel de especie.
Lo anterior nos obliga a utilizar las diferentes tcnicas que se han
desarrollado para la identificacin de nematodos, as como el apareamiento
cruzado (Dix et al., 1992), electrofresis en gel de almidn y acetato de celulosa
5
(Akhurst, 1987; Jagdale et al., 1996), anlisis de enzimas de restriccin RFLPs
(Smits et al., 1991; Joyce et al., 1994a; Fallas et al., 1996,) enfoque isoelctrico
(IEF) (Joyce et al., 1994b), y marcadores de polimorfismo RAPD (Garned et al.,
1994; Liu y Berry, 1996c) y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) (Liu y
Berry, 1995b) son algunas de las tcnicas usadas para la identificacin de
aislados y entre especies de estos nematodos entomopatgenos.
Se ha demostrado que diferentes aislados y especies de nematodos
entomopatgenos varan en su eficacia como agentes de control biolgico de
insectos (Bedding et al., 1983), para lo cual se requiere un mtodo rpido y
confiable para identificar su variabilidad gentica. Sin embargo, para este
propsito se usa polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin (RFLPs) en
la unidad repetida del DNA ribosomal. Lo cual permite identificar si los nematodos
pertenecen a diferentes especies o son miembros de la misma especie (Akhurst y
Bedding, 1978).
Stock y Kaya (1996) mencionan que existen algunas carencias en el
diagnstico de caracteres morfolgicos para todas las especies reconocidas hasta
la fecha que se han descrito por morfologa y asociaciones morfomtricas. Sin
embargo, es necesario analizar estadsticamente las caractersticas morfolgicas
de las especies de nematodos y revisar los mtodos de caracterizacin
morfomtrica tradicional para la diferenciacin de las especies de estos
nematodos (Stock y Kaya, 1996).
Los nematodos se han aislado en diferentes estudios realizados sobre la
distribucin estacional de nematodos steinernemtidos y heterorhabdtidos en
diferente tipo de suelo, los cuales se asocian con suelos calcreos en Inglaterra
(Hominick y Briscoe, 1990a), de barro arenoso y suelos de barro en Irlanda
(Blackshauw, 1988), en humus y suelos arenosos en Suecia (Burman et al., 1986),
y de humus con capas de suelo rgano-mineral en Checoslovaquia (Mracek,
1982).
6
En contraste, la presencia de steinernemtidos y heterorhabdtidos no es
influenciada por el tipo de suelo o la vegetacin en Italia (Deseo et al., 1988).
Akhurst y Brooks (1984) especulan sobre las diferencias en la distribucin de
nematodos en varios pases que refleja la disponibilidad de insectos hospederos
satisfactorios, aunque las influencias ambientes tales como tipo del suelo pueden
tambin determinar su distribucin. Estos estudios indican que los
steinernemtidos se encuentran en muchas partes del mundo a diferente altitud,
mientras que los heterorhabdtidos se localizan ms cerca a las zonas costeras
(Griffin et al., 1991, 1994a).
En algunos pases como Australia, Estados Unidos, Gran Bretaa y Nueva
Zelanda tienen leyes de cuarentena tocante a la importacin de organismos
exticos con el fin de proteger la fauna y flora nativa, as como la agricultura
(Bedding et al., 1996; Richarson, 1996; Rizvi et al., 1996).
Algunos nematodos entomopatgenos tienen un amplio rango de
hospederos en el laboratorio (Poinar, 1990); lo cual puede ser una amenaza a
insectos nativos, ya que muchas de las especies de insectos estaran en peligro.
Las especies de nematodos entomopatgenos tienen diferencias en la
sobrevivencia e infectividad de insectos hospederos, son ms favorables de
usarse en programas de control biolgico (Bedding et al., 1983). Las condiciones
biticas y abiticas del sitio aislado juegan un papel importante en su adaptacin.
El uso de nematodos que ocurren naturalmente como agentes de control biolgico
pueden tambin reducir el riesgo a organismos no plaga cundo son comparados
con aislamientos exticos (Blackshaw, 1988).
Por esta razn es importante conocer la distribucin natural de los
nematodos entomopatgenos nativos del Pacifico Centro Mexicano, los cuales
pueden tener diferente ocurrencia. Ya que es un requisito importante para crear un
criterio sobre futuras introducciones de nematodos entomopatgenos exticos. Lo
anterior hace necesario, que para impulsar el control microbiano en Mxico, se
deba hacer un inventario de los microorganismos nativos en diferentes reas
7
ecolgicas del pas, con el fin de documentarlos, evaluar su potencialidad de uso
en las diferentes plagas que afectan la produccin agropecuaria y forestal, para
as ofrecer una alternativa ecolgica y sustentable de control de plagas. Por tal
motivo es importante realizar este trabajo para la obtencin de germoplasma como
un recurso para su uso en los trpicos, ya que ellos tienen una mejor adaptacin al
medio ambiente, los cuales pueden ser ms efectivos contra especies de plagas
en zonas tropicales.
Por lo antes expuesto se plantean la siguiente:
Hiptesis:
Las poblaciones de nematodos entomopatgenos nativos difieren en su
presencia en suelos del Pacfico Centro Mexicano y en su patogenicidad sobre
larvas y pupas de mosca de la fruta A. ludens.
Objetivo principal
- Determinar la presencia e identificacin de nematodos entomopatgenos
aislados de suelos del Pacifico Centro Mexicano y su patogenicidad sobre larvas y
pupas de A. ludens.
Objetivos particulares
- Determinar la presencia de nematodos entomopatgenos de diferentes
localidades en los estados de Colima, Jalisco, Michoacn, Nayarit, Sinaloa y
Veracruz.
- Aislar e identificar los nematodos entomopatgenos nativos hasta el nivel
de gnero.
- Evaluar la patogenicidad de los aislados de nematodos en mosca de la
fruta A. ludens.
- Determinar el tiempo letal 50 de los nematodos evaluados sobre larvas y
pupas de A. ludens.
8
II. Antecedentes
2.1 Los nematodos entomopatgenos
Existen ms de 3000 asociaciones simbiticas entre insectos y nematodos,
8 rdenes de las cuales comprenden la mayora de los nematodos capaces de
parasitar insectos sanos (Poinar, 1979). Esto ha dado origen a los nematodos
entomopatgenos de los gneros Steinernema Neoaplectana y
Neoesteinernema (Steinernematidae) y Heterorhabditis (Heterorhabditidae), a
partir de Rhabditoides microbiotrficos y bacterifagos (Poinar, 1990).
Estos tres gneros de nematodos son interesantes porque dependen de
bacterias como fuente alimenticia y han desarrollado mecanismos para transportar
e introducir bacterias del gnero Xenorhabdus y Photorhabdus en insectos. Estas
bacterias son capaces de matar a los insectos en 48 horas convirtiendo los
cadveres en un hbitat conveniente para su crecimiento y reproduccin (Akhurst,
1982). Los nematodos de insectos son principalmente parsitos obligados y
facultativos, pueden atacar a los estados biolgicos de larva, prepupa, pupa y
adulto de insectos (Kaya y Hara, 1981).
Los nematodos de las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae,
poseen los atributos de un agente de control biolgico "ideal" (Timper et al., 1988;
Kaya y Gaugler, 1993; Kaya, 1993), considerando su seguridad a invertebrados,
plantas, y otros organismos no plaga (Akhurst, 1990; Poinar, 1989). Por sus
caractersticas, tienen una distribucin geogrfica amplia y un rango de
hospederos (Poinar, 1990; Zimmerman, 1978); solamente en Amrica Latina
alrededor de 100 especies de 11 rdenes de insectos son susceptibles a estos
nematodos (Poinar, 1979; Wassink y Poinar, 1984). Su presencia en los suelos
esta bien documentada (Poinar y Hom, 1986; Timper et al, 1988; Kung et al.,
1990a, b, c). Las larvas del tercer estado juvenil constituyen una forma
especializada para sobrevivir, dispersarse e invadir al hospedero (Kaya y Gaugler,
1993).
9
Los cuales son fcilmente aplicados usando equipos estndares de
aspersin (Georgis, 1990; Georgis y Poinar, 1994), son compatibles con
insecticidas qumicos (Forschler et al., 1990, Hara y Kaya; 1983, Rovesti et al.,
1988; Rovesti y Deseo, 1990), produccin masiva (Friedman, 1990), variacin
gentica (Gaugler et al, 1989; Poinar, 1991; Gaugler, 1993), su virulencia (Glazer
et al., 1991) y un amplio rango de hospederos (Gaugler, 1988; Figueroa y Roman,
1990).
As como a su disponibilidad para probar su habilidad de bsqueda y
exterminio rpido del hospedero (Lewis et al., 1992; 1993). Adems las ventajas
que presentan para realizar en ellos mejoramiento gentico que les permita
aumentar su persistencia hacia la desecacin, a la radiacin ultravioleta y su
virulencia, por el corto perodo de sus generaciones, su facilidad de manejo y
cultivo (Gaugler, 1987; Gaugler et al, 1989; Gaugler et al., 1992a; Gaugler, 1993;
Gaugler et al., 1994).
Estos nematodos entomopatgenos, sirven como vectores de la bacteria
del gnero Xenorhabdus y Photorhabdus, lo cual ha reforzando la vinculacin
entre nematologa de insectos y patologa de insectos (Gaugler y Kaya, 1990;
Tanada y Kaya, 1993).
2.2. Biologa del complejo nematodo/bacteria
Los steinernematidos y heterorhabditidos, patgenos obligados en la
naturaleza, tienen la no-alimentacin, vida libre, tercer estado juvenil infectivo o
juveniles dauer que infectan al insecto hospedero en el ambiente del suelo (Figura
1). El juvenil infectivo, es la nica etapa que ocurre fuera de un insecto, est
protegido por la cutcula del segundo estadio que se pierde fcilmente en los
steinernematidos (Figura 2a) pero es retenido en los heterorhabditidos (Figura 2b)
hasta apenas antes de o a poco de la infeccin del hospedero. Adems, la
asociacin del nematodo/bacteria es sumamente especfica. En el juvenil infectivo,
las clulas bacterianas se albergan en una vescula en la parte anterior del
intestino para steinernematidos y en el tracto intestinal para el heterorhabditidos.
10

Figura 1. Ciclo de vida generalizado de steinernematidos y heterorhabditidos. IJ =
Juvenil infectivo.

Figura 2. Juvenil infectivo del tercer estadio de (A) Steinernema carpocapsae
muestra la prdida de la cutcula del segundo estadio (arriba) y (B)
11
Heterorhabditis bacteriophora muestra la cutcula bien pegada del segundo
estadio (arriba).
El juvenil infectivo infecta al hospedero por aberturas natural (boca,
espirculos, ano) o adelgazada reas de la cutcula del hospedero (comn slo en
heterorhabditidos) (Kaya y Gaugler, 1993) y penetra en el hemocelo del
hospedero. El juvenil infectivo entonces libera la bacteria por el ano para los
steinernematidos o por la boca para los heterorhabditidos (Ciche y Ensingh, 2003).
La bacteria mutualistica se propaga y produce substancias que matan
rpidamente al hospedero y protegen el cadver de la colonizacin por otros
microorganismos.
El nematodo inicia su desarrollo, alimentndose de las clulas bacterianas y
tejidos del hospedero que ha sido metabolizado por la bacteria y tiene de 1-3
generaciones, dependiendo del tamao del hospedero. Cuando los recursos de
alimento en el cadver del hospedero se agotan, una nueva generacin de
juveniles infectivos se produce y emergen del cadver del hospedero dentro del
suelo para buscar nuevos hospederos (Figura 1).
Una diferencia mayor entre steinernematidos y heterorhabditidos es que
todos pero una especie en el grupo anterior son amfimcticos, mientras que la
especie en el ltimo grupo son hermafroditas en la primera generacin pero
amfimcticos en la siguiente generacin. As, los steinernematidos requieren un
juvenil infectivo masculino y un femenino para invadir a un insecto hospedero para
producir progenie, mientras que los heterorhabditidos necesita slo un juvenil
infectivo penetrar en un hospedero como resulta el adulto hermafrodito es auto-
frtil. Sin embargo, Griffin et al. (2001) encontr una especie de Steinernema sin
describir de Indonesia que consiste en gran parte de hermafroditas auto-frtiles
con una frecuencia baja de machos (1-6% de la poblacin).
Una especie dada del nematodo se asocia especficamente con una
especie simbitica bacteriana, pero la especie bacteriana se puede asociar con
ms de una especie de nematodo (Cuadro 1). Akhurst y Boemare (1990)
12
mencionan que la mejor reproduccin del nematodo ocurre con su simbionte
natural, pero algunas veces, el nematodo se puede desarrollar en otra especie
bacteriana. La relacin entre el nematodo y la bacteria es mutualista por las
razones siguientes: el nematodo es dependiente de la bacteria para (a) matar
rpidamente a su insecto hospedero, (b) crear un ambiente favorable para su
desarrollo produciendo antibiticos que eliminan microorganismos que compiten,
(c) transfor los tejidos de hospedero en una fuente de alimento, y (d) sirvir como
un recurso de alimento. La bacteria necesita al nematodo para (a) proteccin del
ambiente externo, (b) la penetracin dentro del hemocelo del hospedero, y (c) en
la inhibicin de las protenas antibacterianas del hospedero.
2.3. Las bacterias mutualistas
Las bacterias Xenorhabdus y Photorhabdus son mviles, Gram negativa,
facultativo, no-forman esporas, las barras anaerobias en la familia
Enterobacteriaceae. En el gnero Xenorhabdus, existen 5 especies que se
asocian con Steinernema, mientras que el gnero Photorhabdus, existen 3
especie que se asocian con Heterorhabditis (Cuadro 1) (Fisher-Le Saux et al.,
1999, Burnell y Stock, 2000, Boemare, 2002, Hazir, 2003) con una especie, P.
luminescens, dividido en cinco subespecies (Hazir, 2003). La subespecie de P.
luminescens es subsp. luminescens, laumondii, akhurstii, kayaii, y thraciaensis
(Boemare, 2002).
Cuadro 1. Especies descritas de nematodos entomopatgenos y sus respectivas
especies de bacterias simbiticas.

Genero de nematodo Especie de nematodo Especie simbitica

Steinernema abbasi Sin describir
affine Xenorhabdus bovienii
anatoliense Sin describir
arenarium(= anomali)1 Xenorhabdus sp
asiaticum Sin describir
bicornutum Sin describir
carpocapsae 2 X. nematophila
caudatum Sin describir
ceratophorum Sin describir
13
cubanum X. poinarii
diaprepesi Sin describir
feltiae (= bibionis) 3 X. bovienii
glaseri X. poinarii
intermedium X. bovienii
karii Sin describir
kraussei X. bovienii
kushidai X. japonica
loci Sin describir
longicaudum Sin describir
monticolum Sin describir
neocurtillae Sin describir
oregonense Sin describir
puertoricense Sin describir
rarum Xenorhabdus sp
riobrave. Xenorhabdus sp
ritteri Xenorhabdus sp
sangi Sin describir
scapterisci Xenorhabdus sp
scarabaei Sin describir
siamkayai Sin describir
tami Xenorhabdus sp
thanhi Sin describir
thermophilum Sin describir
websteri Sin describir
wesieri Sin describir
Sin describer X. beddingii
serratum Sin describir
Neosteinernema longicurvicauda Sin describir
Heterorhabditis bacteriophora Sin describir
(= heliothidis) P. luminescens 4
(= argentinensis) P. temperata 5
baujardi Sin describir
brevicaudis 3 P. luminescens 4
downesi Photorhabdus sp.
indica Sin describir
(= hawaiiensis) P. luminescens
marelata Sin describir
(= hepialius) P. luminescens 4
megidis P. temperata
poinari 3 Photorhabdus sp
taysearae Sin describir
zealandica P. temperata

Cuadro 1. En parntesis utilizaron previamente los nombres y/o los
14
sinnimos. 2 las especies "carpocapsae" se ha referido a como "feltiae" en la
literatura principalmente entre 1983 y 1989. El nombre "feltiae" es vlido y tiene
prioridad sobre la especie inquerida "bibionis. 3 especie inquerida. 4 Fischer Saux
et al. (1999) mostr que Photorhabdus es un grupo heterogneo. P. luminescens
se asocia con H. indica con alguno pero no todos aislados de H. bacteriophora. La
posicin del simbionte bacteriano con H. argentinensis, H. brevicaudis y H.
marelatus no esta clara y hemos mantenido la especie bacteriana como P.
luminescens. Esto puede cambiar en una fecha futura, algunos subgrupos de H.
bacteriophora se asocian con P. temperata (Fischer-Le Saux et al., 1999).
Las diferencias mayores ocurren entre los dos gneros bacterianos
(Boemare, 2002). Por ejemplo, La mayora de las Photorhabdus spp., son
luminiscente y catalasa positiva, mientras que Xenorhabdus spp., no tiene
luminescencia y es catalasa negativo. Ambos gneros bacterianos producen
variantes fenotpicas de los tipos de clulas llamadas forma primaria (fase I) y
forma secundaria (fase II) (Forst y Clarke, 2002). La forma primaria es el de tipo
clula naturalmente asociado con los nematodos, mientras que la forma
secundaria puede surgir espontneamente cuando se cultiva la bacteria, estas en
la etapa inmvil de no-crecimiento. La forma secundaria de Xenorhabdus puede
volver a la forma primaria, pero este fenmeno no se ha documentado para
Photorhabdus spp.
Las diferencias entre las formas primarias y secundarias se presentan. Por
ejemplo la forma primaria produce antibiticos, absorbe ciertos tintes, y desarrolla
inclusiones intracelulares grandes compuestas de protenas de cristal, mientras
que la forma secundaria no produce o slo produce dbilmente antibiticos, no
produce tintes de absorcin, y produce inclusiones intracelulares ineficazmente. La
forma primaria es superior a la forma secundaria en su habilidad de sostener la
propagacin del nematodo in vitro, aunque alguna evidencia sugiere que esto no
es siempre el caso (Lysenko y Weiser, 1974, Ehlers et al., 1990, Volgyi et al.,
1998). La razn para la presencia de las dos formas no se conoce (Boemare,
2002).
15
La asociacin entre la bacteria y el nematodo es esencialmente
monoxnica, pero otras especies de bacterias se han aislado de juveniles
infectivos de varias especies de steinernematidos (Lysenko y Weiser, 1974,
Aguillera et al., 1993, Aguillera y Smart, 1993) y heterorhabditidos (Jackson et al.,
1995, Babic et al., 2000). Los estudios recientes por Vivas y Goodrich-Blair (2001)
con X. nematophila y S. carpocapsae encontraron que un gen bacteriano sirve
para retener la especificidad entre la bacteria y el nematodo. Adems, Martens et
al., (2003) han mostrado que pocas clulas de X. nematophila inician la
colonizacin de un juvenil infectivo y que stos crecen dentro del lumen del
intestino en un patrn reproductivo polifsico durante la colonizacin.
Un adelanto mayor ha sido secuenciando el genoma entero de P.
luminescens, cepa TT01 (Duchaud et al., 2003). La sucesin completa del genoma
tiene 5,688,987 pares de bases y contiene 4,839 genes codificados de protena
predeterminados. Los autores indican que esta bacteria ser un modelo
prometedor para el estudio de interacciones de simbiosis y la interaccin
hospedero-patgeno.
2.4. Las interacciones nematodo/bacteria con hospederos
An con el amplio rango de hospedero de la mayora de los especies de
nematodos entomopatgenos, su eficacia vara con muchos factores biolgicos,
inclusive la especie de nematodo y cepa y la especie de insecto y su estado de
desarrollo (Gaugler et al., 1994, Eidt y Thurston, 1995, Simoes y Rosa, 1996). Uno
de los factores que afectan la eficacia es que muchos insectos que viven en el
suelo han evolucionado las conductas que tienen como resultado en reducir la
bsqueda del hospedero, la fijacin, o la penetracin por los juveniles infectivos.
Algunos de los documentos sobre la conducta del insecto incluyen (1) una mayor
proporcin de defecacin que reduce la infeccin va el ano (larvas de
escarabajos), (2) la baja produccin CO
2
o liberacin de CO
2
en chorros que
aminoran las seales qumicas (pupas de lepidpteros y larvas de escarabajos),
(3) la formacin de capullos impenetrables o clulas del suelo antes de la
pupacin que sirven como barreras fsicas (muchos lepidpteros y escarabajos),
16
(4) individuos que matan al nematodo que evitan reducir la contaminacin de
otros insectos en un nido (comejenes), y (5) un arreglo agresivo o conducta de
evasin que reduce el contacto de los juveniles infectivos (larvas de escarabajos)
(Gaugler et al., 1994, Koppenhofer et al., 2000b).
Los juveniles infectivos pueden penetrar dentro de insectos utilizando varias
rutas, dependiendo de que sean accesibles (Eidt y Thurston, 1995). En algunos
insectos, las rutas usuales de la entrada pueden ser inaccesibles porque la boca
puede ser obstruida por filtros orales (gusano de alambre) o es demasiado
estrecha (insectos con partes de la boca chupadores/penetradores o insectos
pequeos con partes de la boca masticadores). El ano puede estar apretado por
msculos u otras estructuras (gusanos de alambre), o los espirculos pueden
estar cubiertos con septa (gusanos de alambre) o platos de cedazo (larvas de
escarabajos) o son simplemente demasiado estrechos para la entrada del
nematodo (algunos dpteros y lepidpteros).
Los juveniles infectivos pueden penetrar por la cutcula (inclusive la
traquea) o el intestino para entrar al hemocelo. Para entrar por la cutcula, los
nematodos emplean la fuerza fsica tal como el cuerpo que empuja para reventar
por la traquea delgada o, al igual que los Heterorhabditis, utiliza un diente anterior
para penetrar directamente en el hemocelo. Para entrar por el intestino, ellos
utilizan la fuerza fsica y/o secreciones proteolticas para digerir los tejidos del
intestino para entrar en el hemocelo (Abu-Hatab et al., 1993, Peters y Ehlers,
1994).
Dentro del hemocelo de los insectos, los nematodos y las bacterias vencen
la respuesta inmunolgica de los hospederos (Dunphy y Thurston, 1990, Kaya y
Gaugler, 1993) que involucran recprocamente, los factores humorales y celulares.
Para contrarrestar las clulas bacterianas, el insecto puede utilizar las
protenas antibacterianas y/o fagocitosis seguidas por la formacin de ndulos,
para desactivar los nematodos, los hemocitos de los insectos pueden encapsular
estos seguido por la melanizacin. En algunos casos, los nematodos pueden
17
vencer las defensas de insecto. As, S. glaseri es encapsulado inicialmente por
larvas del escarabajo japons, Popillia japonica (Newman), pero escapa de la
cpsula e infecta exitosamente a su hospedero (Wang et al., 1995) porque el
nematodo tiene las protenas que cubren la superficie que eliminan la respuesta
inmunolgica de los hospederos y destruyen los hemocitos (Wang y Gaugler,
1998). Una especie de Heterorhabditis evita la encapsulacin en larvas de
tipulidos por la cubierta de la cutcula del segundo estadio durante la penetracin
del hospedero (Peters et al., 1997).
Adems, los nematodos que invaden pueden producir inhibidores
inmunolgicos como los factores que destruyen los factores antibacterianos
producidos por los insectos y permiten que la bacteria mutualstica produzca
toxinas insecticidas que matan rpidamente al hospedero (Bowen et al., 1998).
Los nematodos pueden paralizarlo al producir tambin exotxinas y citotxicas y
las enzimas extracelulares proteolticas. Las reacciones de arriba son
dependientes del insecto hospedero y el complejo nematodo/bacteria (Dowds y
Peters, 2002) y contribuyen a la eficacia variable de los nematodos
entomopatgenos contra diferentes especies de insectos.
2.5. Biogeografa
Los nematodos entomopatgenos se han recuperado de suelos de muchas
partes del mundo (Hominick, 2002). Algunas especies de nematodos parecen
tener una distribucin global y son esencialmente ubicuo (Hominick, 2002). S.
carpocapsae y S. feltiae se distribuyen ampliamente en regiones templadas, H.
bacteriophora es comn en regiones con climas continentales y mediterrneos, y
H. indica se encuentra mucho a travs de los trpicos y el subtrpico. Otras
especies tales como S. rarum, S. kushidai, S. ritteri y H. argentinensis parecen
tener una distribucin mucho ms restringida, pero como muchos estudios se han
conducido estas especies se puede encontrar ms ampliamente
En Turqua, se han conducido varios estudios con aislamiento de varias
especies conocidas y por lo menos una nueva especie (Ozer et al., 1995, Susurluk
18
et al., 2001, Hazir et al., 2003a). Ozer et al. (1995) recuperaron S. feltiae de la
costa del Mar Negro, y Susurluk et al., (2001) aislaron H. bacteriophora, un
Heterorhabditis sp., y S. feltiae de Ankara Turquia. Hazir et al. (2003a) hicieron
una inspeccin extensa a travs de Turqua y aislaron H. bacteriophora, S. feltiae,
S. affine, y una especie sin describir de Steinernema. (Hazir et al. (2003a)
describieron subsiguientemente la especie nueva como S. anatoliense. En este
estudio, la especie ms comn era S. feltiae, que se aisl de 10 sitios en seis
regiones, H. bacteriophora de siete sitios en cinco regiones, S. affine de cuatro
sitios en dos regiones, y la nueva especie descrita S. anatoliense de un sitio
2.5.1. Incidencia y la distribucin
Las especies de Steinernema y Heterorhabditis se ha aislado de muestras
de suelo tomadas a travs del mundo (Kaya, 1990) pero muy pocos estudios se
han hecho a largo plazo de su dinmica de poblacin. Hominick y Briscoe (1990a)
en un estudio de suelos de Reino Unido no encontraron ninguna evidencia de la
temporada en la incidencia de nematodos, cuando ellos examinaron varios
hbitats por dos aos. Ellos sospecharon que la vegetacin, quizs sea la causa
de la persistencia de S. bibionis (= S. feltiae); suelos de orillas de csped o pastos
que producen ms muestras positivas, que los suelos de otros hbitats. Los
estudios conducidos proporcionan en otra parte algo de evidencia contradictoria
para la presencia estacional y la preferencia del hbitat para steinernematidos.
Griffin et al., (1991) analizaron los resultados de un rango de inspecciones
de suelo y concluy que haba la evidencia de la temporada. Ellos sugirieron
tambin que, cuando nematodos se recuperaron de todos los tipos hbitats
probados en Irlanda, no haba la asociacin significativa entre el hbitat y la
frecuencia de la recuperacin.
En Checoslovaquia, los steinernermatidos eran ms comn en bosques que
en cultivos y estaban ausentes en praderas (Mracek, 1980). Ellos fueron
descubiertos frecuentemente en suelos calientes, localidades secas pero nunca en
suelos de pantano. Mracek (1979) sugiri que las larvas de la mosca de la sierra
19
son susceptibles a nematodos, las cuales estn presentes en suelos de bosque
donde la altitud del bosque, y tipo de localidad afect la distribucin del nematodo.
En Carolina del Norte, Akhurst y Books (1984) encontraron al nematodo Rhabditis
parsito de insectos era menos comn en bosques que aquellos que estaban en
cultivos o pasto. Akhurst y Bedding (1986) atribuyen los diferentes resultados a las
variaciones en la distribucin del insecto hospedero y a la especie de nematodos
implicados.
En el Reino Unido., los steinernematidos se asocian particularmente con
suelos que tienen un horizonte de subsuelo calcreo (Hominick y Briscoe, 1990b);
suelos con mucha agua los hacen suelos con altos contnidos en materia orgnica.
Vanninen et al., (1989) estudiaron suelos cultivados en Finlandia y encontraron
una alta incidencia de steinernematidos en suelos de humus que en suelos de
cualquier otro tipo; ellos no encontraron nematodos en suelos arcillosos. Lu baja
incidencia de nematodos entomopatgenos en suelos arcillosos haba sido notada
por Burman et al., (1986) en Suecia y Blackshaw (1988) en Irlanda.
La evidencia comienza a sostener el panorama de que la familia
Heterorhabditidae es endmica a climas calientes mientras que Steinernematidae
prevalece en regiones templadas. En Israel, los heterorhabditidos han sido
encontrados, en suelos arenosos, bajo la sombra de rboles de albaricoque
regados en el desierto de Negev (Glazer et al., 1991c). Los resultados negativos
se obtuvieron cuando las muestras se tomaron de suelos menos aireados, an
cundo estaba hmedo, o de suelos arenosos pero secos. En las islas de Hawaii,
veintidos sitios fueron positivos para Heterorhabditis spp.; su incidencia fue mas
correlacionada con los sitios de muestreo dentro de los 100 metros de la orilla del
mar. Las suelos eran moderadamente alcalinos (pH 8.0) y contenido de materia
orgnica (12%). El nico aislado de Steinernema encontrado vino de reas
interiores donde los suelos eran franco arcilloso y franco limoso donde contenido
orgnico era mayor (15-35 %) (Hara et al., 1991).
20
2.6. Presencia natural de nematodos entomopatgenos
El conocimiento de la presencia de los nematodos entomopatgenos, es un
paso esencial en la valoracin del papel que desempean en el suelo. Estudios
sobre los factores geogrficos y ecolgicos proporcionan un entendimiento acerca
de la presencia, distribucin y abundancia de las especies, que es influenciada
fuertemente por los insectos hospederos susceptibles, vegetacin nativa, y sus
asociaciones con las diferentes regiones climticas y tipos de suelo. Considerando
adems, muchas reas que han sido afectadas por la agricultura y aquellas que
forman parte de los ecosistemas naturales.
Poinar y Brooks (1977) recuperan poblaciones del nematodo entomgeno
Neoaplectana Steinernema glaseri de larvas del escarabajo Stringoderma
arboricola, en un campo del condado de Wilson, en Carolina del Norte. Tambin,
observan una bacteria simbitica que es contenida en el intestino de los estadios
juveniles infectivos. El hecho de que N. glaseri fue recuperado de insectos vivos
en el suelo, sugiere que los estadios infectivos de esta especie permanecen en el
suelo, y puede ser un efectivo agente de control biolgico de insectos plaga que
viven en el suelo.
Mrek (1980) analiza un total de 57 muestras de suelo 35 fueron de
bosques, 12 de campos y 10 de praderas. Los nematodos steinernematidos solo
estuvieron presentes en 21 muestras, de estas 19 fueron de muestras de suelo, y
dos de un campo de maz. Steinernema kraussei fue aislado de Cephalia abietis
(L.) de cuatro localidades, y tambin de un campo de maz adyacente a un bosque
infestado. La mayora de los aislados fueron obtenidos de bosques, ninguno de
biotipos hmedos. La incidencia de estos nematodos no avanza gradualmente con
relacin a la altitud (de 150-1000 msnm). Por lo tanto, no tiene influencia sobre su
existencia, ya que las larvas infectivas fueron encontradas en muestras de tierras
bajas, laderas de campos y bosques, as como favorablemente en los suelos de
bosques montaosos a 1000 msnm.
Romn y Beavers (1983) determinan la presencia de nematodos
entomgenos en suelos de Puerto Rico, mediante dos tcnicas. En la primera
21
usan 10 larvas de Diaprepes abbreviatus (L.) colocadas en cajas individuales
ocultas en campos de caa de azcar en ocho localidades, y en la segunda
colectan muestras de suelo de campos de caa de azcar y pastizales en cinco
zonas geogrficas. En la primera recuperan 46 larvas (35 vivas y 11 muertas), una
larva (2.3%) fue recuperada de un campo de caa de azcar e infectada con
Heterorhabditis sp. No fueron recuperados Neoaplectana sp. en esta prueba. El
pH de las muestras de suelo tuvo un rango de 3.5 a 7.9 y parece no tener efecto
sobre la capacidad de N. carpocapsae para parasitar las larvas de D. abbreviatus
en el estudio de laboratorio. Los hallazgos de este estudio indican que la poblacin
natural de nematodos entomgenos es muy baja, aunque parece ser el primer
reporte de la presencia de Heterorhabditis sp., en Puerto Rico.
Akhurst y Brooks (1984) recolectan un total de 510 muestras de suelo en 14
localidades de Carolina del Norte. Determinan la incidencia de nematodos en
bosques, pastos, huertas de durazno, viedos y en hbitat de tierras con cultivos
anuales. Los nemtodos fueron aislados en 13 de las 14 localidades y en cada
hbitat. Destacan que la mayora de los nematodos aislados comnmente fueron
de Heterorhabditis (13/14 localidades) y todos parecen ser de una especie H.
heliothis. Tres especies de Steinernema (= Neoplectana) fueron aisladas: S.
feltiae, S. glaseri y una especie sin describir, fueron aisladas. Steinernema glaseri
solo fue aislado de dos localidades que estaban separadas por lo menos 25 Km.
La incidencia de los nematodos cundo los resultados de cada muestra se usaron
como la unidad, se encontr que la incidencia en tierras cubiertas de bosque fue
menos significativa (P < 0.001) que en pastos, huertas/viedos o en tierras
cultivadas.
Akhurst y Bedding (1986) detectan la existencia natural de nematodos
patognos de insectos en suelos de Australia. Los nematodos steinernematidos
y/o heterorhabditidos fueron encontrados en cada estado y territorio. Cuatro
nuevas especies de Steinernema, un nuevo gnero de Steinernematidae y al
menos tres nuevas especies de Heterorhabditis se aislaron, as como
Heterorhabditis bacteriophora Poinar, Steinernema bibionis (Bovien) y S. feltiae
22
(Filipjev). Cuando los nematodos fueron detectados en cada sitio de Tasmania y
Queensland, y 10 o ms muestras se tomaron, los nematodos se presentaron en
un promedio de 24% (rango de 10-60%) de las muestras. Ocasionalmente en
Tasmania y el Norte de Queensland, dos o ms especies se aislaron de sitios
individuales. La inspeccin de Tasmania no muestra diferencias significativas en la
incidencia de nematodos en los sitios de bosques (19/119) y en pastizales
(39/165). Sin embargo, el tiempo de muestreo afect significativamente los
resultados con existencia de nematodos detectados ms comnmente en sitios
muestreados en invierno y primavera (16/54 y 12/55 respectivamente), que en
aquellos muestreados en verano y otoo (7/54 y 18/121 respectivamente).
Hokkanen y Zimmermann (1986) inspeccionan muestras de suelo de varias
partes de Finlandia, desde la costa Sur al Norte del crculo rtico. En 11 muestras
de un total de 30 cebadas con Tribolium destructor (Uyttenboogart, 1934) y
Acanthocinus aedelis (L.), fue aislado un nematodo patgeno de insecto,
Neoaplectana sp.
Dese et al., (1988) examinan la presencia natural de nematodos
entomopatgenos en suelos agrcolas de Italia. La incidencia de los nematodos en
diferentes sitios, no puede ser considerada caracterstica de su distribucin en
Italia; el nmero de muestras y el tipo de suelo de las tierras cultivadas fueron
diferentes.
Mrek y Jensen (1988) reportan por primera vez la incidencia de
nematodos entomgenos en plantaciones experimentales de rboles frutales y de
bosques en Budapest, Hungra. Nematodos de la familia Steinernematidae se
encontraron en todas las huertas de la estacin experimental, excepto en la huerta
de rboles de nogal. En el sitio experimental de bosques, solamente fue
encontrada una larva muerta, en la cual la reproduccin de nematodos no fue
exitosa. La especie de nematodos representando esta familia, fue determinada
como Steinernema feltiae. El nmero de nematodos de esta especie, recuperados
de las muestras de la huerta experimental fueron encontrados estrechamente
correlacionados con aquellos hospederos favorables de este nematodo. La mayor
23
tasa de mortalidad de larvas de Galleria mellonella (L.) en las muestras de suelo
de una huerta de pera y cerezo (90%), respectivamente y en manzano fue del
100%. En la huerta privada de Szigethalom, fueron descubiertos miembros de la
familia Heterorhabditidae, representada por la especie Heterorhabditis heliothidis,
en la cual Polyphylla fullo (L.), el hospedero de este nematodo fue abundante.
Vnninen et al., (1989) estudian la distribucin y abundancia de hongos y
nematodos entomoparsitos en suelos cultivados en Finlandia. Alrededor de 243
muestras de suelo de diferentes partes del pas fueron procesadas mediante
larvas de T. molitor (L.) como insecto cebo. En cuanto a los nematodos 14 fueron
aislados, aunque fueron considerablemente menos frecuentes que los hongos,
existiendo en las muestras solamente 27.8% de las localidades, y solamente
pudieron ser aislados de 5.8% de las muestras. Todos los aislados pertenecen a la
familia Steinernematidae. De estos, cinco han sido identificados como
Neoaplectana bibionis Bovien., el resto de los aislados en identificaciones
provisionales incluye a Steinernema feltiae entre otros. Los nematodos fueron
obtenidos solamente de suelos bajo frambueso (21% de los casos), campos de
heno o pastos (17%), colza o nabo silvestre (11%), rboles de fresno (5%) y
cereales (4%). El pH de las muestras promedi 5.97, fluctuando de 4.30 a 7.45, el
promedio de la conductividad 191.3% (54-689) y el contenido de materia orgnica
8.9% (2.2-59.9). El anlisis de correlacin no sugiri que estos factores tengan
algn efecto significativo sobre la existencia de los patgenos. Aunque fueron
encontrados significativamente ms en suelos de humus, que en otro tipo de
suelo.
Mamiya y Ogura (1990) obtienen nematodos entomgenos en hbitats de
bosque en 24 localidades de varias regiones en Japn. Donde los nematodos
steinernematidos fueron aislados de 6 localidades. Steinernema feltiae fue
encontrada por primera vez en Japn en suelos de bosque de pino. Nematodos
heterorhabditidos no se aislaron. Los resultados de estas inspecciones indican que
los steinernematidos pueden estar ampliamente distribuidos y de una existencia
comn en Japn.
24
de Doucet (1990) comunica la existencia de especies autctonas de
nematodos entomfagos, obtenidos de muestras de suelos de diferentes
localidades de la provincia de Crdoba, Argentina. Fueron halladas 20 poblaciones
pertenecientes a las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae. Los gneros y
especies identificadas son: Neoaplectana carpocapsae, N. glaseri, N. rara,
Neoaplectana. sp. 1 y Neoaplectana. sp. 2; y Heterorhabditis bacteriophora y
Heterorhabditis. sp. Por otro lado, Neoaplectana carpocapsae, N. rara y H.
bacteriophora fueron encontrados naturalmente parasitando larvas y pupas de
lepidpteros (Noctuidae). Hasta el momento los resultados obtenidos evidencian
una diversidad considerable y una amplia distribucin de este grupo de nematodos
en la zona Centro-Sur de la provincia de Crdoba.
Sturhan (1990) estudia la existencia natural de Steinernema y
Heterorhabditis en suelos de la Repblica Federal de Alemania. Los juveniles
infectivos de estos nematodos entomopatgenos, se presentaron en un 25% de
las muestras colectadas en diferentes biotopos. Estos fueron comnmente
encontrados en bosques y prados, pero raramente en suelos agrcolas. Con base
a los caracteres morfolgicos de los juveniles, Heterorhabditis sp., Steinernema
affinis, S. intermedia y 5 formas de Steinernema adicionales pudieron ser
identificados o diferenciados. Steinernema forma A y S. intermedia fueron los
ms comunes y ampliamente distribuidos, seguidos por S. affinis y Steinernema
forma B. Slo se encontr en pocas localidades a Heterorhabditis sp. Mientras
que S. affinis es reportado de campos y prados, la existencia de ciertas especies
de Steinernema fue casi restringida a suelos de bosques.
Hominick y Briscoe (1990a) documentan la existencia de entomopatgenos
rhabditoideos en suelos britnicos. En una inspeccin conducida en arbustos,
orillas de camino, bosques y sitios de tierras o campos sanos, 403 muestras de
suelo fueron cebadas con larvas de Galleria. Steinernematidos (61) fueron
recuperados de 48.6% de los sitios (80), pero solamente un sitio (0.25%) produjo
Heterorhabditis sp. Frecuentemente la especie ms recuperada fue Steinernema
bibionis (Bovien). El hbitat tiene poca asociacin con la presencia de los
25
steinernematidos. A menudo, la mayora de los nematodos prevalecen en varios
hbitats, desde un continuo como en las orillas de camino o herbceos, mientras
que en tierras sanas a menudo producen menos. Las tierras sanas es el tipo de
hbitat, el cual proveen un solo sitio con Heterorhabditis sp. La presencia de los
steinernematidos vari geogrficamente en diferentes partes de Inglaterra, y fue
influenciada con el tipo de suelo especialmente de subsuelo calcreo. Un alto
porcentaje de las muestras de suelos litomrficos es la forma usual de los
nematodos. Para los suelos que estn peridica o estacionalmente con grandes
mantos de agua, fueron favorables. Los suelos enriquecidos con humus y de alto
contenido de materia orgnica, frecuentemente alojaron nematodos. Para suelos
cafs, los nematodos fueron ms comunes en aquellos con subsuelos calcreos
ricos de arcilla. Relativamente los dos steinernematidos son especies no
especializadas, existiendo en diversos hbitats y tipos de suelo, y estn adaptados
a temperaturas fras.
Hominick y Briscoe (1990b) determinan la persistencia de nematodos
entomopatgenos en 15 sitios en tierras sanas, arbustos, orillas de camino,
viedos, pastos y bosques. La mayora de los nematodos obtenidos se
identificaron como Steinernema (= Neoaplectana) bibionis (Bovien) La vegetacin
puede estar enlazada para la persistencia de S. bibionis. Los dos sitios de tierras
sanas nunca produjeron nematodos, pero dos sitios de bosques con el mismo tipo
de suelo al de las tierras sanas, regularmente produjeron un gran nmero de
larvas infectadas en el bioensayo. Usualmente los suelos de pastizales resultaron
con ms larvas infectadas, ms que los suelos de otros tipos de hbitats.
Griffin et al., (1991) reportan la existencia de nematodos parsitos de
insectos en la Repblica de Irlanda. Los nematodos parsitos de insectos se
recuperaron de 58 (10.5%) de las 551 muestras de suelo probadas.
Heterorhabditis se recuper de un solo sitio, el resto de los aislados fueron de
Steinernema. Dos tipos de Steinernema se encontraron morfolgicamente
distintos. Estos se identificaron como S. feltiae Filipjev, 1934 (= S. bibionis Bovien,
1937) y S. affinis Bovien, 1937 (18 muestras). Las muestras no produjeron ms
26
que una especie de nematodo parsito de insectos. La asociacin entre la
frecuencia de recuperacin de nematodos, fue altamente significativa (P < 0.001).
Estos se presentan dos veces en muchas muestras de suelos arenosos o
turbosos, as como arcillosos o franco arcilloso. Sin embargo, la diferencia entre
los grupos de textura del suelo no fue significativa. Los nematodos se presentaron
en un amplio rango de hbitats, incluyendo tierras de cultivos, csped (pastos,
orillas de camino) y bosques. Las dos especies de Steinernema difieren un poco
en su representacin en diferentes hbitats. S. affinis se encontr en pastizales y
tierras cultivadas, pero no en suelos de bosques. S. feltiae se recuper de todos
los hbitats, y la frecuencia de recuperacin en bosques y tierras cultivadas, fue
dos veces ms que en pastizales. Sin embargo, no se muestra asociacin a P <
0.05 entre el hbitat y la existencia de nematodos, cuando cada especie fue
probada separadamente o juntas. Tambin fueron menos probables para ser
recuperados en mayo-junio que en otro tiempo del ao.
Downes y Griffin (1991) recuperan heterorhabditidos para entender su
existencia dentro de las islas de Irlanda y Escocia. Dentro de las islas
Heterorhabditis no fue detectado en ninguno de los 31 sitios muestreados, pero
fue recuperado de 18 (a 13.7%) de los 131 sitios costeros. El gnero fue presente
en 2 (3.9%) de los 51 sitios muestreados en Escocia. La existencia de
Steinernema el cual fue frecuentemente presente, no se recuper en esta
inspeccin. Todos los sitios de los cuales Heterorhabditis fue recuperado a pocos
metros bajo el nivel del mar, fueron predominantemente en cualquier sistema de
dunas o en prados cercanos usados para pastos o recreacin. Los nicos suelos
muestreados en la presente inspeccin, fueron suelos de arena de las costas. El
contenido de materia orgnica fluctu de 3 a 7%, y el pH de 4.6 a 8.1.
Figueroa et al., (1991) determinan la presencia de nematodos
entomopatgenos en muestras de suelo en pastos, bosques y tierras cultivadas en
10 reas geogrficas de 84 localidades de Puerto Rico. Los nematodos se
encontraron muy frecuentemente en muestras del rea hmeda del este de Puerto
Rico. El pH del suelo promedi de 4.8 a 9.2; la materia orgnica de 0.15 a 15.20%;
27
la elevacin sobre el nivel del mar a 705 m; y la precipitacin de 24 a 180 cm/ao.
Los nematodos no fueron recuperados de muestras de suelo en la regin seca de
la isla. Aparentemente, esta no es comn o abundante desde el sureste al noreste
de Puerto Rico. En esta regin la mayora de los suelos fueron de limoneros
cultivados, moderada o fuertemente permeables o porosos. Los nematodos se
encontraron en cultivos de hortalizas, caa de azcar, frutales y rboles forestales.
Glazer et al., (1991c) realizan una inspeccin en el desierto de Negev,
Israel. Nematodos entomopatgenos se aislaron bajo la sombra de albaricoque.
Este hbitat es caracterizado por suelo de humedad continua (18/22 w/w), debido
al sistema de riego. Subsecuentemente, las muestras de suelo se tomaron de 3
sitios adicionales en el noreste del desierto Negev. En estos 3 sitios las muestras
se tomaron bajo la sombra de huertos de rboles regados artificialmente (ctricos
en Gevulot y Zeelim, y pera en Retamin), as como de 3 o 4 hbitats naturales
(por ejmplo: orillas de camino, vegetacin natural) a una distancia de 50-100 m de
los huertos. Poblaciones nuevas de nematodos entomopatgenos se recuperaron
de las muestras tomadas de cada huerto, y ninguna de los hbitats naturales.
Todas las nuevas poblaciones aisladas se identificaron como heterorhabditidos.
Los sitios se caracterizan por suelos de arena y hmedos (18-24 w/w).
Hara et al., (1991) reportan la existencia de poblaciones naturales de
nematodos entomopatgenos en las Islas Hawaii. Un total de 351 muestras se
colectaron de las 6 mayores islas; 24 sitios 6.8% fueron positivos para los
nematodos entomopatgenos; de estos 22 sitios 6.3% fueron positivos para 22
Heterorhabditis sp. y solo dos aislados de Steinernema sp. Los heterorhabditidos
fueron altamente correlacionados con las playas del ocano, donde 15.8% (21 de
133 muestras de suelo) fueron positivas para nematodos heterorhabditidos.
Adems, 95.5% de las muestras positivas a Heterorhabditis sp., contenan granos
de arena, coral y concha, con pH moderadamente alcalino (8.0) y contenido
orgnico (12%). Los 22 sitios positivos tienen una precipitacin media anual de
90.0 9.4 cm y flucta de 32.3 a 216.1 cm. Los steinernematidos aislados
provienen de reas dentro de la isla, en suelos limosos arcillosos y franco limoso,
28
con alto contenido orgnico (15-35%). Tiene una temperatura del suelo, contenido
de materia orgnica y salinidad, dentro del rango de aquel Heterorhabditis sp.,
encontrado en la muestra positiva, pero el pH fue neutro a cido y una
precipitacin media anual de 45.2 y 68.1 cm.
Zang et al., (1992) examinan la existencia de nematodos entomopatgenos
en diferentes tipos de suelo y hbitats en el rea de Beijing China. Cinco especies
de Steinernema y seis de Heterorhabditis fueron obtenidas, sumados para un
13.1% de incidencia de nematodos en las muestras. La tasa de incidencia en los
suelos se encontr influenciada por el tipo de suelo y hbitat. En suelos de
huertas, jardines de hortalizas, campos de cereales y tierras no cultivadas, fue de
28.2, 10.5, 7.7 y 12.2%, respectivamente; mientras que en aquellos suelos de
poca arena, franco arenoso, medio franco y franco alto, fueron 20.8, 15.1, 12.2 y
5.4%, respectivamente.
Boag et al., (1992) reportan la distribucin y persistencia de nematodos
entomopatgenos en Escocia. De un total de 1014 muestras examinadas, solo se
encontraron en 22 (2.2%) y todos los nematodos recuperados e identificados
pertenecen a una sola especie, Steinernema feltiae. La presencia de las muestras
positivas dentro de los 5 mayores tipos de vegetacin, indica que S. feltiae a
menudo fue encontrado ms en prados permanentes que en tierras arables,
bosques de conferas o bosques deciduos, en cambio no fue recuperado ninguno
de arbustos o tierras cultivadas. Tambin se encontr en 25 de las 256 muestras,
una presencia de 9.77%. Estas tienen una correlacin significativa entre el nmero
de G. mellonella cebadas muertas y los nmeros de juveniles recuperados
(Coeficiente de correlacin r= 0.92; GL= 3; P < 0.05), indicando que tiene una
distribucin muy agregada.
Mrcek y Webster (1993) examinan muestras de suelo de 125 sitios de 87
localidades al Oeste de Canad. Los nematodos entomopatgenos se
recuperaron de 25 sitios (20% del total) en 21 localidades; 18 sitios (14.4%) fueron
positivos para la existencia de steinernematidos y 7 sitios (5.6%) para
heterorhabditidos. Los steinernematidos se identificaron como Steinernema feltiae,
29
y otros pertenecen al menos a 2 especies. Todos los aislados de heterorhabditidos
se identificaron como Heterorhabditis megidis, presente solo en la regin seca y
caliente, en una huerta frutcola. Los steinernematidos se recuperaron de bosques
de conferas, bosques de hoja ancha y matorral espinoso, huertos y campos de
granos. La mayora de los nematodos existen en los sitios donde el impacto
humano sobre la naturaleza ha sido substancial (tierras cultivadas, orillas de
camino) grandes reas de bosques o regiones adyacentes a estas con diverso
impacto. Tambin en aquellos sitios con daos visibles en el follaje de insectos
plaga, y en donde ocurre una parte de su ciclo de vida en el suelo (larvas de
escarabajos, gusano de alambre, larvas de palomillas, etc.). Los nematodos se
recuperaron de Abril a Septiembre, y esta fue una tendencia para ms sitios que
fueron positivos a nematodos, en el inicio del verano (Abril-Julio) que al final del
verano (Agosto-Septiembre).
Rueda et al., (1993) investigan la existencia natural de nematodos
entomopatgenos en viveros en Tennessee EEUU. De un total de 113 muestras
de suelo, Heterorhabditis bacteriophora fue el nico heterorhabditido recuperado,
presente en un 15% (17 de 113) de muestras de suelo de semilleros. Steinernema
carpocapsae el nico steinernematido recuperado, tambin existi en el 15% de
las muestras. H. bacteriophora y S. carpocapsae se encontraron en muestras de
suelo de la mayora de los sitios inspeccionados de los viveros. La relacin entre
las especies de plantas de los semilleros y la frecuencia de recuperacin de
nematodos, fue significativa (P < 0.05). En las muestras de suelo positivas para H.
bacteriophora, la materia orgnica promedio 2.1-2.6%; el pH, 5.6-6.2; el contenido
de humedad, 10.8-15.7% y la temperatura del suelo al momento del muestreo,
21.5-26.9
o
C. Mientras que en las muestras de suelo positivas para S.
carpocapsae, la materia orgnica promedio 1.8-2.5%; pH, 5.6-6.1; contenido de
humedad, 8.4-15.9% y la temperatura del suelo al momento del muestreo, 23.3-
26.4
o
C. Heterorhabditis bacteriophora se recuper ms frecuentemente de suelos
limo-arenosos (59%), seguido por franco limoso (18%). Mientras que S.
carpocapsae existe ms frecuentemente en franco limoso (35%), seguido por
30
franco arcilloso (29%) y franco arenoso (29%). La relacin entre la textura del
suelo y la incidencia de recuperacin de H. bacteriophora y S. carpocapsae no fue
significativa para cada especie individual o juntas.
Yoshida (1993) reporta la distribucin de nematodos entomoflicos en 17
regiones de Japn. Aproximadamente 500 muestras de suelo de 135 sitios fueron
procesadas; nueve sitios en seis regiones fueron aislados steinernematidos,
mientras que los heterorhabditidos en ocho sitios de cinco regiones. Los
steinernematidos estn ampliamente distribuidos por todo Japn. Los
heterorhabditidos se localizan en reas subtropicales y de clima templado a travs
de la costa del Pacfico. Los nematodos se encontraron en bosques (14 sitios) y
pastizales (2 sitios), pero no campos labrados. Estos son detectados ms
frecuentemente de suelos arenosos y francos (15 sitios) que en los arcillosos (un
sitio).
Amarasinghe y Hominick (1993) inspeccionan la existencia de nematodos
entomopatgenos endmicos adaptados climticamente en Sri Lanka. Especies
de Steinernema y Heterorhabditis se recuperaron de suelos arenosos del rea
costera del Sureste, dentro de 5-100 m del ocano. En la zona seca no dieron
positivo a nematodos. Este es el primer reporte de heterorhabditidos y
steinernematidos de la costa tropical. Entre los 33 sitios positivos a lo largo de la
costa, se encontraron dos tipos genticos de Heterorhabditis y dos de
Steinernema. De todos los sitios positivos, cuatro produjeron simultneamente
heterorhabditidos y steinernematidos, pero nunca en el mismo hospedero. De los
38 aislados, 17 fueron steinernematidos y 21 de heterorhabditidos. La vegetacin
asociada en todos los sitios positivos a lo largo de la costa, fue coco Cocos
nucifera (L.), camote Ipomoea sp., y pasto comn. El pH tiene un rango de 7.8-8.9.
El anlisis de la textura del suelo muestra que la prevalencia de los nematodos en
suelos arenosos, franco arena, arena franco y franco, fue de 70.4, 18.5, 11.1 y
0.0%, respectivamente. La temperatura tomada al momento de los muestreos fue
de 30
o
C o ms alta.
31
Pollit et al., (1993) descubren en un campo de fresa en Scheleswing-
Holstein, Alemania un alto nivel de infeccin natural con una poblacin nativa del
nematodo entomopatgeno Steinernema feltiae sobre larvas del picudo Phyllobius
urticae (De Geer, 1775) (Curculionidae). Este nematodo fue encontrado en
Septiembre de 1992, en un 16.2% de los insectos (n= 179) colectados. Tambin
fue el principal factor de mortalidad en Octubre, aunque las temperaturas del suelo
tenan humedad debajo de los 12
o
C despus de Octubre.
deAgera y Gabarra (1994) reportan la existencia de nematodos
entomopatgenos en Cabrils, Catalogne, Espaa. Dos poblaciones de larvas
infectivas fueron encontradas, Steinernema glaseri y Heterorhabditis
bacteriophora. La presencia de S. glaseri es reportada por primera vez en la
regin Palertica, fuera de las regiones Nearticas y Neotropicales. Ambos
nematodos se probaron contra Frankliniella occidentalis (Hook) y Trialeuroides
vaporarium (Westwood) y H. bacteriophora es ms agresiva que S. glaseri.
Stuart y Gaugler (1994) investigan la distribucin y abundancia de
nematodos entomopatgenos a lo largo de transectos en diversas localidades de
Nueva Jersey, EEUU. Estos se recuperaron de 12 de los 13 sitios (92.3%) y en 72
de 600 muestras de suelo (12.0%). Los heterorhabditidos (probablemente H.
bacteriophora) fue el ms comn y abundante. Mientras que los steinernematidos
fueron los menos frecuentes, con S. glaseri, S. feltiae y S. carpocapsae.
Totalmente, los heterorhabditido fueron igualmente abundantes en hbitats de
pastos, malezas y rboles dispersos, de estos las malezas producen
significativamente ms muestras positivas que las reas de pastos, pero menores
en bosques cerrados de sombra. En un solo sitio (13) de dos transectos paralelos
recorridos a travs de csped en orillas de caminos y en un barbecho de malezas
en un campo de maz, produjeron aproximadamente una tercio de todas las
muestras positivas de heterorhabditidos, con 19 de 40 muestras que dieron
positivas.
Amarashinge et al., (1994) documentan la presencia y distribucin de
nematodos entomopatgenos en suelos de Sri Lanka. Las muestras colectadas de
32
diferentes regiones agroecolgicas (plantaciones de t, pastizales) y diversos tipos
de hbitat (bosques naturales) cercanos a las plantaciones de t; revelan que la
presencia de nematodos fue restringida a suelos arenosos costeros (franco arcillo
arenosos, franco arenosos, franco arcillosos y franco). El pH de estos suelos fue
de un rango de 3.5-5.1. Dos Heterorhabditis y tres Steinernema se descubrieron
dentro de 5-100 m del mar. Los miembros de ambas familias fueron igualmente
prevalecientes, siendo el primer reporte de ambos nematodos en un rea costera
en los trpicos. Estos nematodo estn presentes a altas temperaturas (algunos
arriba de los 30
o
C), y ninguna lluvia monznica o la sequa tiene efecto sobre su
presencia.
Liu y Berry (1995a) determinan la distribucin natural de nematodos
entomopatgenos adaptados en suelos de Oregon. Los nematodos se
recuperaron de 11.8% de las muestras probadas (30/255), representando el
27.1% de los 14 sitios muestreados, y de regiones geogrficas del estado.
Heterorhabditis spp. fue recuperado de 24 muestras de suelo de 10 sitios, y
Steinernema spp. se recuper en siete muestras de suelo de cinco sitios. La
asociacin entre las regiones geogrficas y la frecuencia de recuperacin de estos
nematodos, fue altamente significativa, siendo ms alta en la regin costera. Los
nematodos se presentaron en un amplio rango de hbitat, incluyendo las playas,
bosques, csped, maz y trigo. La asociacin entre el hbitat y la frecuencia de
recuperacin de nematodos, fue altamente significativa. Los nematodos se
recuperaron frecuentemente ms de las playas. La diferencia entre la textura del
suelo y la frecuencia de recuperacin de los nematodos, tambin fue altamente
significativa. Los nematodos se recuperaron en un 21% (29/138) de las muestras
de suelo arenoso, y en un 0.1% (1/100) de las muestras de suelo franco arenoso.
La mitad de las muestras de suelo en las cuales los nematodos se recuperaron de
humedad media. Tambin dos muestras de nematodos se recuperaron de suelo
seco. Aproximadamente el 75% de las muestras de suelo colectadas de la regin
costera, fueron positivas para especies de Heterorhabditis y Steinernema, se
recuper solamente de una muestra tomada en la regin costera, pero se
33
recuper de seis muestras de suelo obtenidas en otras regiones geogrficas. La
asociacin entre los gneros de nematodos y las regiones geogrficas fue
significativa.
Choo et al., (1995) determinan la existencia de nematodos
entomopatgenos en la Repblica de Corea. De un total de 499 muestras, 23
(4.6%) fueron positivas con 19 (3.8%) contenan Steinernema y cuatro (0.8%)
Heterorhabditis. Con base a morfometra, los aislados de Heterorhabditis se
identificaron como H. bacteriophora. Los steinernematidos fueron identificados
como S. carpocapsae, S. intermedia, S. glaseri y S. feltiae. Las muestras positivas
de los sitios de cada hbitat incluyeron 15 de 415 (3.6%) de bosques; una de 27
(3.7%) de pastizales incluyendo parques y campos de golf; tres de 24 (12.5%) de
campos agrcolas, dos de 16 (12.5%) a lo largo de reas ribereas, y dos de 17
(11.8%) cerca de las playas del mar. Los dos aislados de Heterorhabditis se
colectaron de reas ribereas, uno se colect en un campo de cacahuate
adyacente a un rea riberea, y otro de un bosque. Catorce de los sitios positivos
a Steinernema se aislaron de hbitat de bosques de conferas, deciduos o en
recrecimiento; dos se aislaron cerca de las playas del mar, con un aislado de una
rea de pastizales y una entre rboles de pino negro; dos se aislaron de campos
agrcolas, con uno seguido del otro en malezas; y uno fue de pastos en un campo
de golf. Solo se encontr una infeccin natural de insectos en cadveres de larvas
un gusano de escarabajo desconocido, probablemente Adoretus sp., infectado
como un steinernematido.
Hominick et al., (1995) comparan la biodiversidad, variabilidad geogrfica y
el hbitat especfico de nematodos entomopatgenos en dos inspecciones en el
Reino Unido (UK) y una en los Pases Bajos (Holanda). La presencia promedio de
los nematodos steinernematidos en las tres inspecciones. Fue marcadamente
similar. Sin embargo, en el caso de la presencia de los heterorhabditidos, vari
grandemente. En la primera inspeccin de UK que excluy sitios costeros,
produjeron solamente un heterorhabditido (0.25%). Mientras que en la segunda
fueron restringidos en dos sitios de reas arenosas costeras (1.27%). En la
34
inspeccin de Holanda, la cual involucr tierra adentro, ms que sitios costeros,
produjeron heterorhabditidos en 13 sitios (13%). La distribucin de los nematodos
en Pases Bajos as como en Reino Unido, no fue restringida a un rea geogrfica
particular tierra adentro. Un total de ocho especies de steinernematidos y dos
heterorhabditidos fueron aislados. Steinernema feltiae fue el ms comn de las
tres inspecciones, con su prevalencia promediando de 31.9% a 5.73% del total de
nematodos aislados. Steinernema affinis fue el ms comn en la segunda
inspeccin de UK. El nematodo heterorhabditido aislado produjo patrones
idnticos al aislado original de Heterorhabditis megidis. S. feltiae fue encontrado
predominante en campos y mrgenes, con un 80% de todos los aislados de esta
especie. Similarmente S. affinis fue encontrado principalmente en estos dos
hbitats (86% de todos los aislados), pero 73% de todos los miembros de esta
especie, fueron encontrados en margenes.
Stock (1995) asla e identifica poblaciones autctonas de nematodos
entomopatgenos en la regin Pampera de Argentina. Un total de 310 muestras
de suelo fueron extradas de 14 localidades. Nematodos pertenecientes a la
familia Steinernematidae (Steinernema feltiae, S. carpocapsae y S. scapterisci)
fueron hallados en 65.9% de las muestras positivas, mientras que el 34.1%
restante estuvo representado por nematodos de la familia Heterorhabdtidae
(Heterorhabditis bacteriophora y H. argentinensis). Suelos francos produjeron
poblaciones de nematodos en 19 ocasiones, y en franco arenoso en 22 ocasiones.
No se encontraron nematodos en suelos arcillosos. Sobre un total de 264 insectos
colectados, 27 de estos fueron recuperados parasitados naturalmente por
steinernematidos y heterorhabditidos, estos fueron el picudo de la alfalfa (Orden:
Curculionidae), gusanos blancos (Coleoptera: Scarabaeidae) y ninfas del grillo
topo (Orthoptera: Gryllotalpidae).
Garca y Palomo (1996) determinan la existencia natural de nematodos
entomopatgenos en el rea Mediterrnea de Espaa. Estos se recuperaron de 35
sitios (23.3%); 33 sitios (94%) fueron positivos para steinernematidos y los otros
dos sitios (5.7%) para heterorhabditidos. Cinco tipos de Steinernema
35
morfolgicamente distintos fueron identificados como S. feltiae (69.5% de los
steinernematidos encontrados), S. carpocapsae (11.1%), S. affinis (2.8%).
Tambin otros dos tipos pertenecen al menos a 2 especies diferentes. Solamente
en dos muestras fueron ms de una especie de nematodos recuperados, y en
ambos casos las dos especies fueron S. feltiae y S. carpocapsae. Todos los
heterorhabditidos aislados se identificaron como Heterorhaditis bacteriophora.
Esta inspeccin no muestra diferencias significativas sobre la existencia de
nematodos en la primavera (22.2% del total de los sitios) y en el otoo (25%). Los
nematodos se presentaron en 3 hbitats muestreados; campos cultivados (28.2%),
bosques (16.3%) y pastos (23.3%). Tambin se presentaron en muestras de suelo
localizadas entre 0 a 2,000 m de elevacin, aunque no fueron observadas
diferencias significativas. Analizando las relaciones entre la existencia de
nematodos con la temperatura del aire y la precipitacin pluvial, no se encontraron
que tengan algn efecto significativo estadsticamente. Sin embargo, los
nematodos se encontraron ms comunes en sitios con temperatura media anual
bajas (6-8
o
C) y en precipitacin media anual alta (1000-1100 mm).
Miduturi et al., (1996) reportan la existencia natural de nematodos
entomopatgenos en Blgica. Sesenta aislados de diferentes hbitats fueron
recuperados. Estos muestran caracteres consistentes con las descripciones de
Steinernema sp y Heterorhabditis sp. Dentro de las poblaciones pertenecientes al
gnero Steinernema, 10 se encontraron comparables con S. feltiae; S. affinis y
Steinernema spp. B3. El aislado de Heterorhabditis tiene las medidas descritas de
H. megidis; aunque, son ms pequeos que la descripcin original. Los
nematodos entomopatgenos se recuperaron de 16 (12.3%) de las muestras de
suelo. Heterorhabditis fue recuperado solo de un sitio, el resto de los aislados
fueron Steinernema spp. Los nematodos entomopatgenos se aislaron de 50%,
18.8% a 12.3% de las muestras tomadas en dunas de arena, pastizales y bosques
respectivamente. S. feltiae y S. affinis fueron aislados de estos tres hbitats. El
Heterorhabditis sp. fue aislado de un sitio de pastizales. S. feltiae A1 fue ms
comn en suelos arenoso franco, con un amplio rango de contenido de materia
36
orgnica (1.2-8.4%). S. affinis fue aislado en arenoso franco a franco arenoso con
un contenido de materia orgnica (4.2-5.3%). Heterorhabditis sp. (tipo NWE) y
Steinernema especie B3 fueron aislados de suelos franco arenoso, con un
contenido de materia orgnica de 5.6% y 7.5%, respectivamente. Los suelos de
los sitios positivos muestreados fueron en el rango de pH de 4.0-8.1. S. feltiae y la
especie B3 fueron aisladas de suelos cidos y neutros (pH 4.2-7.1), S. affinis se
encontr en suelos neutros y alcalinos (pH 6.5-8.1). El Heterorhabditis se present
en suelo casi neutro (pH 6.8).
Steiner (1996) investiga la distribucin de nematodos entomopatgenos en
las regiones alpinas de Suiza. Las siguientes especies de nematodos
entomopatgenos fueron identificadas: Steinernema affinis, S. feltiae, S.
intermedia, S. kraussei, Steinernema sp. (una especie cercana a S. intermedia) y
Heterorhabditis sp. Las ltimas dos especies solamente fueron encontradas una
vez. En general, estos son muy comunes en el rango montaoso. Steinernema
kraussei fue claramente la especie ms frecuente (representando el 52% de 67
aislados identificados), y restringido a las regiones alpinas, mientras que S. affinis,
S. feltiae y S. intermedia estn ampliamente distribuidas. El porcentaje total de las
muestras de suelo que produjeron nematodos entomopatgenos, fue de 27% (128
aislados en 473 muestras), encontrados en altitudes entre los 490 y 2,530 msnm
(S. affinis y S. kraussei respectivamente), y la mayora de los aislados se
recuperaron en altitudes entre los 1,500 y 2,100 m. Adems, S. kraussei parece
tener una especificidad para algunos tipos de vegetacin. Esta fue excesivamente
frecuente en las hierbas alerces alpinas y en bosques. Solamente un aislado de S.
intermedia y S. feltiae fue recuperado en suelos de bosques, aunque parecen
preferir hbitats de pastizales. Similarmente, S. affinis, Heterorhabditis sp. y
Steinernema sp., fueron confinados a hbitats de pastizales. Los valores de pH y
las desvacions de este parmetro fueron para S. feltiae (6.4 1.2), S. intermedia
(6.2 0.7), S. affinis (6.9 0.4), Heterorhabditis sp. (6.5) y Steinernema sp. (7.8).
Chlander et al., (1997) describen la abundancia y diversidad de especies de
hongos y nematodos entomopatgenos en suelos del UK. En el estudio principal
37
70 aislados de nematodos (4.3%) fueron obtenidos de tres especies. Seis aislados
de Steinernema feltiae A1 fueron aislados de 400 muestras de suelo (1.5% de
existencia), 7 aislados de Steinernema sp. tipo RFLP C1 (1.8% de existencia) y 4
de S. feltiae tipo RFLP A2 (1.0%). Estas diferentes no fueron significativas en la
existencia de nematodos en las muestras colectadas de arbustos (8.0%) y
bosques (5.5%). Los nematodos no fueron aislados de los campos de cebada,
fueron aislados significativamente ms de muestras de suelo de arbustos y
bosques, que de campos de cebada.
Miduturi et al., (1997a) sealan la distribucin natural de poblaciones
nativas de nematodos entomopatgenos en suelos de Blgica. Con base a la
identificacin morfomtrica, permitieron identificar al nivel de especie a 20 de los
21 aislados como Steinernema spp. y una poblacin de Heterorhabditis sp. Los
nematodos entomopatgenos fueron aislados de 21 (8.5%) de las 248 muestras
de suelo colectadas. Los nematodos se recuperaron de 38.1%, 28.5%, 23.8% y
9.6% de las muestras tomadas en bosques, orillas de camino, campos cultivados y
pastizales respectivamente. Steinernema feltiae tipo A1, fue recuperado de todos
los hbitats, excepto de orillas de camino, mientras que S. affinis no se encontr
en campos cultivados. Steinernema sp. B3 fue recuperado de campos cultivados y
orillas de camino, mientras que H. megidis se detect en un pastizal.
Los suelos arenosos a franco arenoso con un amplio rango de contenido de
materia orgnica (3.1-35.0%) fueron asociados con S. feltiae, mientras que S.
affinis fue asociado con arena y franco arcilloso arenoso, con un contenido de
materia orgnica (6.0-27.8%). H. megidis (tipo NWE) fue aislado en suelo franco
arenoso con un contenido de materia orgnica de 5.6%, mientras que la especie
B3 fue asociada con suelos francos con un contenido de materia orgnica de
7.5%. Todos los aislados se encontraron en suelos con un rango de pH de 3.6-7.8.
Sin embargo, la mayora de las poblaciones de S. feltiae fueron aisladas de suelos
cidos.
Miduturi et al., (1997b) estudian la distribucin de Steinernema feltiae y
Heterorhabditis megidis en un hbitat de pastizales en Blgica. Los resultados
38
indican una distribucin agregada para ambas especies. Ninguna de las muestras
(106) contena poblaciones mezcladas de nematodos entomopatgenos. La
fraccin de arena y el contenido de materia orgnica no siempre influyeron en su
distribucin. El mayor nmero de S. feltiae fue detectada en muestras con una
fraccin de arena ms del 90%. El rea en la cual H. megidis algunas veces fue
detectada, limitada y tena una fraccin de arena ms del 94%. La cantidad de S.
feltiae fue influenciada negativamente por un alto contenido de materia orgnica.
Yoshida et al., (1998) colectan nematodos entomopatgenos nativos de
Japn. Un total de 1416 muestras de 266 sitios, fueron obtendidas en cinco
regiones climticas, las muestras positivas representan el 10.0% del nmero total
de las muestras de suelo (142). En 62 y 24 sitios fueron detectados 120
steinernematidos y 29 heterorhabditidos. Por medio de morfologa y/o anlisis
RFLP, fueron reconocidas ocho especies de steinernematidos: siete especies sin
describir y Steinerema kushidai. La distribucin de los steinernematidos fue muy
amplia, extendindose de sitios de playas a sitios tierra adentro y de regiones
subtropicales a templadas fras, mientras que la mayora de los heterorhabditidos
existen en el rea costera de la regin caliente; donde cada especie tiene una
incidencia y diversidad caracterstica: tres con una distribucin amplia y comn,
una costera, una subtropical y tres con una mayor presencia en las montaas. En
contraste, los heterorhabditis fueron identificados como Heterorhabditis indica y H.
megidis. La primera fue ampliamente encontrada de la regin costera del
subtropico a la zona caliente templada, mientras que la ltima fue encontrada
principalmente en la parte oriental de la regin costera caliente templada. La
distribucin vertical de los steinernematidos se extendi desde las playas a
montaas cerca de los 1,400 msnm. S. kushidai y H. megidis fueron aislados de
bosques. Aunque en la mayora de los sitios positivos muestreados, solamente
una especie de nematodo fue recuperada una vez, algunas especies existieron
simptricamente en 14 sitios muestreados, y los steinernematidos y
heterorhabditidos fueron aislados de la misma muestra de suelo en seis de estos
14 sitios.
39
Constant et al., (1998) identifican nematodos entomopatgenos nativos del
rea Caribea, particularmente de las Islas Guadalupe. De 538 sitos muestreados,
35 fueron positivos. De estos sitios, 34 produjeron el gnero Heterorhabditis (97%)
mientras que solamente un sitio produjo Steinernema (3%). Dos especies distintas
de Heterorhabditis fueron encontradas: H. indica (88%) y H. bacteriophora (12%).
Un Steinernema probablemente fue una nueva especie, la cual es estudiada. Los
nematodos existen en la costa (91.4%), tierras bajas del trpico (5.7%) y en las
reas tropicales de altitud media (2.9%). Los nematodos fueron ms frecuentes en
pH 8.0-9.3, los cuales corresponden a hbitats de playa de arena calcrea. En
baja elevacin (vertisol; pH 6.5-7.2), fueron encontrados dos aislados de H. indica
en pastos. Mientras que en elevacin media (bosque; pH 5.5) la especie fue
identificada como H. bacteriophora, as como en dos muestras de tierras
cultivadas.
Stock et al., (1999) inspeccionan la diversidad de nematodos
entomopatgenos en 30 hbitat no disturbados de 10 regiones geogrficas de
California, EEUU. Los steinernematidos comprenden el 80% y los heterorhabitidos
el 20% de los nematodos recuperados. Los aislados fueron identificados como
Steinernema carpocapsae, S. feltiae, S. kraussei, S. longicaudatus, S.
oregonensis, Heterorhabditis marelatus y H. bacteriophora. Entre los
steinernematidos, S. kraussei fue el ms abundante (32.8% del total de las
muestras positivas) y ampliamente distribuida, y junto con S. feltiae fueron los ms
comunes, generalmente existiendo en suelos cidos con alto contenido de materia
orgnica. S. oregonense y S. longicaudum fueron aislados de valles y montaas.
Entre los heterorhabditidos, H. bacteriophora fue recuperado a lo largo de la costa
del Sureste, mientras que H. marelatus fue recuperado a lo largo de la costa
Noreste de California. Los steinernematidos fueron recuperados de bosques de
conferas, de roble y pastizales, mientras que los heterorhabditidos de las costas
pantanosas. No se recuperaron nematodos de las muestras de suelo colectadas
en las regiones desrticas. En trminos de diversidad de especies, los bosques de
conferas y roble, 33.8% y 33.8%, respectivamente; fueron los hbitats ms ricos,
40
produjeron cuatro de cinco especies de los Steinernema recuperados. Los
siguientes fueron las costas pantanosas (23.9%) donde dos especies de
Heterorhabditis (H. marelatus y H. bacteriophora) y un steinernematido (S. feltiae)
fue recuperado. Los bosques de roble fueron caracterizados por la presencia de S.
kraussei y S. carpocapsae y en pastizales por S. kraussei y S. feltiae. En trminos
de recuperacin el ms notable fue el bosque de roble, en el cual el 100% de los
sitios muestreados fueron positivos en todas las regiones. En general, los
steinernematidos fueron encontrados en suelos franco-arenosos, que se
presentaron en un suelo de pH cido (5.0) a neutro. El contenido de materia
orgnica de las muestras de suelo positivos-nematodos, vari de 2.4% a 7.1%.
Mientras para las especies de Heterorhabditis, H. bacteriophora fue recuperado de
suelos franco-arenoso, con un pH que fueron un rango de ligeramente cido a
ligeramente alcalino (6.3-7.1). El contenido de materia orgnica de estos suelos,
fue el menos recuperado de todas las muestras de suelo positivas. Los tipos de
suelo donde H. marelatus fue encontrado, fluctuaron de franco a franco-arenoso.
El pH de los suelos fue similar para aquellos de H. bacteriophora (6.3-7.2). El
contenido de materia orgnica de estos suelos, fue tan ligera como en aquellos de
H. bacteriophora (2.1-3.9% contra 1.1-1.2%).
Mrcek et al., (1999) evalan la presencia de nematodos entomopatgenos
en el territorio de la Repblica Checa. De las 342 muestras estudiadas, 184
(53.8%) fueron positivas, solamente un sitio muestreado fue habitado por un
nematodo heterorhabditido, el cual fue identificado como H. megidis. Todos los
otros nematodos aislados pertenecen a 6 especies de Steinernema. De estas las
ms frecuentes fueron S. kraussei (19.8% prevalece en hbitat de rboles) y S.
feltiae (35.9% en campos y hbitat de rboles), mientras que S. intermedia, S.
affine (4.3%), S. bicornutum (2.2%) y Steinernema sp. perteneciente al grupo
glaseri (0.5%) fueron raros. Las ltimas cuatro especies son nuevos reportes de
la fauna de la Repblica Checa. El 34.3% pertenece a especies no determinadas.
Los nematodos presentan una distribucin omnipresente en los ecosistemas
naturales, subecosistemas y hbitats. Estos se encontraron ms frecuentes en
41
rboles frutales (orillas de camino y huertas), en hbitat probable-virgen, bosques
y hbitat de bosques deciduos, fueron ms del 50% de los sitios muestreados,
contenan nematodos entomopatgenos. En los hbitats deciduos fueron ms
prevalecientes en bosques de lamo y lima y de aliso, abedul y bosques de roble
viejo. Los nematodos fueron escasos en los hbitats agrcolas, donde la existencia
excede el 50% solamente en los campos de maz y bosques florecidos. La
prevalencia de los nematodos fue ms significativamente en los suelos ligeros. De
205 sitios muestreados con insectos de abundancia severa o moderada, el 66.5%
fueron positivos para nematodos, mientras en aquellos con ligera incidencia o no
visible (40 sitios muestreados), solamente el 15% contiene nematodos.
Griffin et al., (1999) reportan el aislamiento y caracterizacin de
Heterorhabditis spp. de Hungra, Estonia y Dinamarca. El gnero fue recuperado
en promedio de 33% de los sitios y en 16% de las muestras. Tres especies fueron
detectadas H. megidis tipo NWE en Dinamarca y Estonia; Heterorhabditis tipo Iris
en Dinamarca y Hungra, y H. bacteriophora (tipo HP88 perfil restringido) en
Hungra. En Estonia, Heterorhabditis tipo NWE fue detectado en praderas, reas
de tierra de pastos recreativos, bosques de coniferas abiertos con extensos pastos
que protegen los mrgenes de un campo de cereal. En Sjaelland (Dinamarca) los
tipos Iris y NWE de Heterorhabditis fueron aislados. La mayora de los sitios de
recuperacin fue en dunas o reas de csped recreativas, a menudo con arbustos
(Rosa rugosa (Thumb.), Empetrum nigrum (L.) y brezo) y/o conferas. Mientras
que el tipo NWE procede de trebol/hierbas en los mrgenes de orillas de camino.
En Hungra, H. bacteriophora fue la especie tipo dominante, pero el tipo Iris fue
identificada en dos sitios en la regin de Kecskemt (46%), que incluyen praderas,
pastos, un ladera herbcea con enebro, un campo de centeno asociado con
viedos, un bosque a orilla de camino, y el banco de un lago seco alcalino. En el
rea de Debrecen, solamente H. bacteriophora (21%) fue detectada. Los sitios en
esta regin existen suelos pesados, franco arenoso o franco arcilloso arenoso ms
bien que arenoso, a igual que todos sitios muestreados de los tres pases. Los
42
hbitats positivos aqu fueron pastos, terreno desrtico y en los mrgenes de un
campo de maz.
2.7. Los factores limitantes
Para el propsito de esta revisin slo la zona radicular del suelo se
considera. Adems de variado vertical y lateralmente, pueden las propiedades de
suelo que resultan de, o afectar, el crecimiento de la planta y el cambio de la
actividad biolgica con las estaciones as como tambin sobre perodos ms
cortos o ms largos. Estas propiedades inestables incluyen los nmeros y la
distribucin de organismos de varias clases, la cantidad de descomposicin de la
materia orgnica, la geometra del espacio del poro, la distribucin del lquido y
fases gaseosas, el pH y la temperatura (Richardson y Grewal, 1994).
Si o no las fases infectivas de los ciclos de vida del nematodo sern
exitosas al encontrar a un hospedero favorable a parasitar depende casi
totalmente en cmo ellos son afectados por un rango de factores que limitan
potencialmente, muchos de estos son del ambiente y ligados al suelo. Los
nematodos son, por ejemplo, casi totalmente dependientes del agua para sus
actividades. Ellos no se pueden mover, alimentar, ni ponen huevos a menos que
halla la humedad suficiente en su ambiente. Muchas especies puede sobrevivir en
condiciones secas hasta cierto punto pero ellos estn entonces quietos, un estado
de anhidrobitico e incapaz de actividad (Richardson y Grewal, 1994).
Akhurst (1986) resumi un rango de factores que podran afectar la
habilidad de los infectivos, siguiendo activamente los gradientes del bixido de
carbono, para localizar a los hospederos. La humedad excesiva del suelo,
alcalinidad, desprendimiento de bixido de carbono de la raz y actividad
microbiana, el tamao de poro del suelo, la compactacin de suelo, la temperatura
y la disponibilidad de agua suelta estaban entre las consideraciones que se deben
reconocer que influyen potencialmente en la actividad del nematodo. Las
diferencias en el comportamiento del nematodo (Gaugler, 1988), no atraccin de
los insectos a nematodos, resistencia del hospedero a la infeccin puede tambin
43
contribuir a la falta de xito de algunos ensayos de campo (Choo et al., 1989).
Wallace (1965) advirti del peligro inherente a atribuir la distribucin de nematodo,
a la densidad, o a patogenicidad, a cualquiera de los factores. Se aclara que
muchos componentes del ambiente de suelo pueden combinar y actuar
recprocamente para afectar las poblaciones de nematodos de entomopatgenos
(Cuadro 2).
Cuadro 2: Algunos factores que afectan la sobrevivencia y la infectivididad de
nematodos de entomopatgenos
Factores abiticos Factores biticos
1. Suelo 1. Hospederos
Textura Insectos
Estructura Otros invertebrados
Humedad
Temperatura 2. Enemigos naturales y enfermedades
Airecin Patgenos microbianos
pH Depredadores
2. Plaguicidas 3. Races y la rizosfera
3. Topografa 4. Prcticas culturales
44
2.7.1. Factores de abiticos
2.7.1.1. La textura y la estructura del suelo
Ambos factores afectan el movimiento y la persistencia de nematodos como
la textura del suelo y tamao de poro. Los nematodos son incapaces de moverse
entre partculas de suelo cuando los dimetros de poro son menos que el ancho
del cuerpo, as que su habilidad de la dispersin disminuye conforme los
porcentajes de limo y arcilla se incrementan en el suelo. Un suelo que contiene
ms del 20% de arcilla puede restringir la migracin de Steinernema (Ames y
Smart, 1989); en suelos arcillosos, an en la presencia de un hospedero (Cuadro
3) no puede aumentar la dispersin del juvenil infectivo (Georgis y Poinar, 1983a y
b). Los nematodos entomopatgenos pueden emigrar horizontalmente y
verticalmente (Georgis y Poinar, 1983 a, b y c; Nguyen y Smart, 1990b, Schroeder
y Beavers, 1987). Heterorhabditis spp., exhibe una mayor movilidad que
Steinernema spp. (Georgis y Poinar, 1983a).
Las larvas infectivas de la mayora de las especies de los rhabditidos
sobreviven menos en suelos de arena o arcilla que en aquellos suelos francos.
Poinar y Hom (1986) mostraron que los infectivos de S. carpocapsae permanecan
viables e infectivos por lo menos siete semanas despus de la aplicacin en el
surco de suelo franco en el campo. En pruebas de laboratorio se ha demostrado
las diferencias en la persistencia entre las especies de Steinernema en las
proporciones conocidas de arena, limo o arcilla. Kung et al., (1990a) demostraron
que S. carpocapsae sobrevivi ms que S. glaseri en un suelo franco arenoso; en
arena, al contrario ambas especies sobreviven pobremente en suelos de
arcillosos.
45
Cuadro 3. Distribucin vertical de Steinernema glaseri de cuatro tipos de suelo diferentes, 5 das despus de la
colocacin de 30,000 nematodos a una profundidad de 16 cm (Georgis y Poinar, 1983c).
% promedio de juveniles recuperados*
Profundidad (cm) Arena slica pura Franco arenoso grueso Franco arcillo limoso Arcilloso
P A P A P A P A
0-4 1.4 a 0.6 h 1.1 a 0.3 h 0 0 0 0
4-8 2.9 ae 3.1 e 3.8 e 2.8 e 0.2 h 0 0 0
8-12 13.3 b 15.6 b 9.3 g 11.6 bg 6.7 ge 5.8 0 0
12-16 20.6 c 26.3 c 22.7 cd 30.1 d 84.3 j 81.6 j 100 k 100 k
16-20 31.1 d 33.7 d 34.6 d 28.9 b 6.4 12.3 0 0
20-24 18.6 b 14.5 b 17.5 b 19.8 ge 0.3 0.3 0 0
24-28 8.6 g 4.3 e 7.2 g 5.3 f 0.1 0 0 0
28-32 4.1 e 1.9 f 3.8 e 1.2 0 0 0 0
Media total de
nematodos
recuperados

26.82

27.08

27.31

24.69

27.52

23.91

25.73

27.99
* Medias seguidas por la misma letra no hay diferencias significativas al nivel del 5%.
P = Pupas de polilla de la cera (Galleria mellonella) presentes a 0.4 cm y 28-32 cm profundidad.
A = Pupas de polilla de la cera ausentes.
46
El dimetro de poro del suelo podra tener un efecto indirecto en la
sobrevivencia de nematodos entomopatgenos en suelos infestados con hongos
nematfagos. Jaffee et al., (1990) demostraron que las diferencias en las
proporciones de transmisin de conidias del hongo (Hirsutella rhossiliensis) a
juveniles del nematodo enquistado de la remolacha azucarera (Heterodera
schachtil) era atribuible a los efectos del dimetro de poro de suelo. Los
nematodos de dimetro pequeo, en poros grandes, evitan a la conidia ms
rpidamente que los nematodos de dimetro mayor. Timper et al., (1991)
comentan sobre la aplicabilidad de estos hongos a nematodos steinernematidos
cuyas larvas infectivas de vida libre difieren substancialmente en tamao, tales
como: (S. carpocapsae = 572 m de largo X 26 m de ancho; y S. glaseri = 1060
m X 45 m).
2.7.1.2. Humedad y la aireacin del suelo
Los nematodos que habitan en el suelo necesitan un medio aerbico y
acutico para sus actividades y el contenido de humedad del suelo, que puede
fluctuar ampliamente, es por lo tanto crtico (Simons, 1973).
Los mtodos de la medicin de la disminucin de la humedad de suelo en
dos categoras generales (Kaya, 1990). El contenido de humedad se expresa
como gramos de agua por 100 gramos de suelo seco. El potencial del agua mide
las fuerzas que tiene el agua en el suelo. El contenido de humedad es ms fcil de
determinar pero el potencial del agua tiene una mejor definicin de la humedad de
suelo, que es como se describe la habilidad biolgica del agua. Aunque la
humedad del suelo se considera el factor ms importante que influye en la
sobrevivencia de los nematodos entomopatgenos, su impacto se ha examinado
raramente de otra manera que en ensayos de laboratorio
Es conocido que las larvas infectivas son capaces de sobrevivir a la
desecacin por perodos relativamente largos. Por otro lado, ms del 90% de S.
carpocapsae estaba todava vivo en un 79.5% de humedad relativa (HR) despus
de 12 das (Simons y Poinar, 1973). Esto corresponde a una medida del potencial
47
de la humedad (pF) de 5.5 y esta por debajo del punto de marchitamiento
permanente de las plantas. An despus de cuatro das de exposicin a 48.4% de
HR (pF 6.0), que corresponde a una suelo muy seco, ms del 80 % de los
nematodos sobrevivi. La sobrevivencia del nematodo depende de la proporcin
de desecacin; la proporcin ms lenta (comienza de un ambiente saturado) la
ms grande oportunidad para la sobrevivencia. Kamionek et al., (1974) informan
que ambas factores como la temperatura y la humedad del aire en la cual las
larvas de nematodos se colocan despus del secado tiene un efecto importante en
el trascurso de la mortalidad de nematodos. La restauracin de la actividad de los
nematodos a la desecacin no disminuye necesariamente su patogenicidad ha
insectos hospederos (Simons y Poinar, 1973; Kamionek et al., 1974; Kung et al.,
1991).
La continuidad de las pelculas de agua a travs de la masa del suelo es
afectada por la textura de suelo. Por ejemplo, en un nivel correspondiente al punto
que marchitamiento de las plantas, el contenido de la humedad de la arena fina
(0.3%) es bajo en comparacin al franco arenoso (5%) y franco arcilloso (20%)
(Molyneux y Bedding, 1984). Aunque el rea de la superficie de las partculas en el
franco arcilloso es 60 veces mayor que en un franco arenoso, su contenido de
humedad es slo cuatro veces ms grande. Esto indica una pelcula mucho ms
delgada de agua (la humedad / rea de superficie) franco arcilloso, una
caracterstica que tendera a inhibir al movimiento del nematodo. En la arena fina,
la partcula pequea del rea de superficie asociada con bajo contenido de
humedad produce esta pelcula de agua casi ninguna en forma contnua. El franco
arenoso retiene suficiente humedad en potenciales bajos para proporcionar las
pelculas de agua contnuas para el movimiento del nematodo.
La aeriacin del suelo es una fuente delgada situacin que es gobernada
por niveles de consumo de oxgeno y produccin de C0
2
. El oxgeno es
reemplazado por la difusin de la atmsfera dentro de los poros del suelo; difusin
del bixido de carbono de los poros del suelo a la atmsfera. Los gradientes de los
gases son establecidos por actividades biolgicas y qumicas en el suelo, y en la
48
proporcin de difusin es controlada por las propiedades fsicas (Rhichardson y
Grewal, 1994).
El movimiento del nematodo dentro de los suelos requiere poros llenos de
agua o pelculas de espesor suficiente y la continuidad para permitir la migracin
(Wallace, 1958). Como se incrementa el contenido de humedad, los poros llenos
de aire disminuye el espacio. Esto limita las oportunidades para la respiracin
aerbica y para el establecimiento de gradientes continuos de bixido de carbono
a que los nematodos pueden responder. La disponibilidad del oxgeno es un factor
limitante en suelos arcillosos, suelos llenos de agua, o suelos con alto contenido
orgnico.
Los niveles de parasitismo se incrementan cuando se presentan en suelos
arenosos, el potencial de la humedad es alto ya que refleja el nivel de aireacin en
estos suelos (Molyneux y Bedding, 1984). Por ejemplo, en un potencial de 0.01
bares equivalentes de los contenidos de humedad de 14, 23, y 52% en la arena
fina, franco arenoso y franco arcilloso corresponde a la porosidad llena de aire de
20, 12 y 1 %, respectivamente. Cuando la difusin del oxgeno de la atmsfera en
la suelo varan directamente con la cantidad de aire en el suelo (Wallace, 1965),
cuando el contenido de arcilla aumenta disminuye el movimiento del nematodo y
afecta el parasitismo de insectos.
Gaugler et al., (1980) demostraron la orientacin de los juveniles infectivos
de S. feltiae a los gradientes de C0
2
. La localizacin de las larvas del insecto sera
menos efectiva en suelos cercanos a la saturacin, o con una aireacin pobre,
desde la difusin de C0
2
es 10
4
veces ms rpida por aire que por agua.
Kung et al., (1990b) reportan que la sobrevivencia y patogenicidad de S.
carpocapsae y S. glaseri disminuy como las concentraciones probadas de
oxgeno disminuyeron de 20% a 1%. Ellos concluyeron que los nematodos
steinernematidos proporcionaran inoculaciones pobres de control biolgico en
reas sujetas a frecuente inundacin o irrigacin excesiva. Las opiniones, en este
respeto, parecen diferir ms fuerte. Georgis y Gaugler (1991) sugieren que el uso
49
efectivo de nematodos en el suelo puede ser restringido a sitios donde la irrigacin
est disponible o a reas geogrficas con lluvias frecuentes.
2.7.1.3. La temperatura del suelo
La temperatura influye en proporcin a las reservas alimenticias que son
utilizadas por los nematodos y afectan la sobrevivencia de larvas infectivas de
Steinernema y Heterorhabditis. El suelo libera su calor casi totalmente del sol y un
aumento pequeo en la temperatura que se presenta en suelo seco sujeto a la
misma entrada de calor en la superficie. El calor solar penetra ms profundo en el
suelo mojado pero el aumento resultante en la temperatura es menos que en el
suelo seco. Las capas ms profundas amortiguan ms que la superficie, que
tiende a calentarse arriba y enfriarse hacia abajo junto con la atmsfera y bajo la
influencia de luz directa del sol (Richardson y Grewal, 1994).
Los nematodos aplicados en la superficie con los rocos, si las condiciones
son favorables, intentan escapar de la radiacin solar movindose dentro del
suelo. Su sensibilidad aguda a la radiacin ultravieoleta (UV), a la luz del sol
natural (Gaugler y Boush, 1978), y a la radiacin gamma (Gaugler y Boush,
1979a) restringen severamente su uso contra plagas del follaje aunque se ha
desarrollado materiales fotoprotectores para extender la persistencia del nematodo
(Gaugler y Boush, 1979b; Shapiro et al., 1985).
El rango de temperaturas sobre los nematodos a la que pueden sobrevivir,
infectar y reproducir vara entre cepas y especies. Los perodos cortos a
temperaturas extremas bajas no parecen ser catastrficas a las poblaciones de
nematodos como las temperaturas altas. Los ensayos donde se utilizaron juveniles
de S. carpocapsae enterrados en cilndros con suelo esterilizado mostr que los
nematodos pueden sobrevivir a las temperaturas del invierno con rangos de 9
hasta 19 C sin la prdida de la infectividad (Fedorko, 1971).
La temperatura alta del suelo puede disminuir en forma rpida la
sobrevivencia del nematodo. Cuando los infectivos de S. feltiae se aplicaron en el
suelo en casas de Turqua y evaluado en muestras de suelo para la sobrevivencia
50
del nematodo, Geden y Axtell (1988) mostraron que ningn nematodo sobrevivi
ms all de dos semanas despus que el tratamiento se mantuvo a una
temperatura mayor de 24C. Los nematodos eran todava perceptibles a ms de
dos meses despus del tratamiento en el suelo estuvieron a 20 y 24C.
Gray y Johnson (1983) reportaron que la mayor proporcin de
sobrevivencia de S. carpocapsae en el suelo estaba a 30C; la sobrevivencia
disminuye significativamente cuando las temperaturas excedieron los 35C pero
algunos nematodos sobrevivieron an a 40C.
Kung et al., (1991) reportaron que la sobrevivencia y patogenicidad de S.
carpocapsae era significativamente ms grande a 5-25C que a 35C.
Opuestamente a S. glaseri la sobrevivencia y patogenicidad eran
significativamente mayores a 15-35 C que a 5 C.
Molyneux (1985) menciona que la diferencia en la sobrevivencia de la
especie de nematodo a varias temperaturas puede reflejar sus hbitats climticos
originales. Los orgenes tropicales hmedos y calientes de Heterorhabditis sp. de
la cepa D1 podra justificar su longevidad muy corta a 10C.
Las temperaturas por arriba de 35C, sobre un perodo extendido de
tiempo, son invariablemente perjudiciales a los juveniles infectivos. Generalmente,
estas condiciones no se experimentan en el campo a menos que el cadver de
hospedero se coloque cerca de la superficie de suelo. A mayor profundidad en el
suelo, los infectivos se protegen de ambientes extremos (Kaya, 1990). Milstead
(1981) inform que H. bacteriophora podra matar larvas de mariposa de cera en
temperaturas que recorren de 12-28C pero el desarrollo subsiguiente de los
parsitos se inhibieron a 12C y a 30C. En este caso, el rango de la temperatura
de la bacteria simbionte parece estar ms amplia que la de su vector. En Irlanda,
Blackshaw y Newell, (1987) mostraron que a 28C era la temperatura ptima para
la actividad de los infectivos de H. heliothis (H. bacteriophora).
Los gradientes de la temperatura facilitan la bsqueda del hospedero y
comportamiento migratorio de los nematodos. Burman y Pye (1980) reportan que
51
el crecimiento de juveniles infectivos a 10, 20 o 25C emigr en un declive hacia
sus temperaturas respectivas de crecimiento cuando se probaron inmediatamente
despus de cosechar de su medio de cultivo. Byers y Poinar (1982) reportan la
agregacin de S. carpocapsae en respuesta a la emanacin de calor de una larva
de insecto en la ausencia de sustancias qumicas y gradientes de CO
2
. Los
gradientes qumicos (Schmidt y All, 1978; Pye y Burman, 1981) y los gradientes de
CO
2
(Gaugler et al., 1980) la distribucin de los insectos en la suelo puede jugar
un papel en un rango mayor de atraccin de los nematodos. Los gradientes
trmicos podran ser significativos en rangos cortos a la atraccin as como
tambin actuando como un atrayente en el hospedero (Byers y Poinar, 1982).
2.7.1.4. El pH del suelo
Los efectos del pH en el suelo sobre la sobrevivencia e infectividad de
nematodos rhabditidos parsitos de insectos no han sido estudiados
extensamente. Sin embargo, la evidencia disponible sugiere que los infectivos
pueden tolerar una gran variedad de pH del suelo y por eso ni su eficacia ni su
persistencia son probables de ser afectados adversamente por el espectro de pH
de la mayora de los suelos agrcolas. Kung et al., (1990b) reportan que la
sobrevivencia y patogenicidad de S. carpocapsae y S. glaseri disminuy slo
levemente con el pH de suelo probado, cuando este disminuy de pH 8 a pH 4.
Sin embargo, ambos parmetros se afectaron significativamente en pH 10. Por lo
tanto, slo en suelos sumamente alcalinos deben afectar su accin nematicida
para estas especies.
2.7.1.5. Plaguicidas
Aunque la especie de Steinernema y Heterorhabditis sean compatible con
muchos plaguicidas qumicos y puedan ser aplicados junto con ellos en sistemas
de manejo integrado de plagas (Kaya, 1985), la exposicin por tiempos largos a
algunos compuestos es perjudicial. Por ejemplo, fenamiphos tena efectos
nematicidas a S. feltiae en la arena sobre un perodo de exposicin de 4-7 das y
afect adversamente la habilidad de nematodo para infectar insectos hospederos
52
(Kaya y Burlando, 1989). Zimmerman y Cranshaw (1990) mencionan que la
evidencia producida de que diferentes especies de nematodos varan en su
sensibilidad a los plaguicidas. A las concentraciones probadas, los insecticidas
carbaril, carbamato y bendiocarb, por ejemplo, eran sumamente txicos a
Heterorhabditis sp. Pero eran menos txicos a S. carpocapsae. Adems, S. feltiae
era ms sensible al chlorpirifos que Heterorhabditis sp. o S. carpocapsae.
Forschler et al., (1990) mostraron que los herbicidas alaclor y 2,4-D eran txicos a
S. feltiae y que podran reducir la eficacia de los nematodos.
En un estudio del laboratorio que evaluaron los efectos de 75 plaguicidas,
Rovesti et al., (1988) encontraron que a las proporciones de aplicacin
recomendadas, los fungicidas, herbicidas, nematicidas y un regulador de
crecimiento de caros eran txicos a H. bacteriophora. Algunos de los plaguicidas
tuvieron un efecto transitorio; los nematodos rpidamente recuperados despus se
lavaron bien o se colocaron en la arena (Rovesti y Deseo, 1990). Rovesti et al.,
(1988) mencionan la necesidad de considerar la formulacin del plaguicida,
particularmente con respecto a plaguicidas granulares del suelo. La persistencia
de la concentracin y toxicidad de los plaguicidas son gobernados por un rango de
factores e inclusive el contenido de agua de la suelo. Tales consideraciones llegan
a ser significativas en las situaciones donde los nematodos y sustancias qumicas
se combinan en estrategias de control integrado.
2.7.2. Factores de biticos
En ecosistemas naturales, los organismos que habitan en el suelo, en
varios niveles de trficos, viven en un estado de homeostasis ecolgico. Los
nematodos introducidos en tales ambientes se enfrentan a la depredacin y
parasitismo por la fauna endmica del suelo. Ishibashi y Kondo (1987) consideran
que la persistencia de los infectivos de S. feltiae podra ser ms afectados por los
factores de biticos que por factores de abiticos.
53
2.7.2.1 Los patgenos microbianos
Una gran variedad de virus, bacterias, hongos y protozoarios se presentan
naturalmente en suelos reducen las poblaciones de nematodos parsitos de
plantas y han sido notados como probables candidatos para el control biolgico de
nematodos; los heterorhabditidos y steinernematidos son susceptibles a varios de
estos antagonistas. La mayora de los antagonistas bacterianos de nematodos ha
recibido poca atencin y las enfermedades vricas de nematodos son virtualmente
un grupo desconocido (Sayre y Starr, 1988). Las epizootias de nematodos pueden
presentarse regularmente en un suelo pero es desapercibido y sin registrar.
A. Los protozoarios: Un rango de protozoarios son capaces de parasitar
nematodos pero ha sido ignorados virtualmente como prospectivos antagonistas
de Rhabditis benfico. Poinar y Hess (1988) discutieron que su incidencia puede
ser ms extensa que lo asumido comnmente y es sugerido que su papel en la
regulacin natural de poblaciones de nematodos requiri la evaluacin cuidadosa.
Los nematodos Rhabditis parsitos de insectos son susceptibles a la
infeccin por microsporidios. Poinar (1988) consider una infeccin natural de S.
glaseri como un patgeno importante de los nematodos cuando liber en el campo
pero tambin a su cultivo masivo. La infeccin tuvo como resultado
frecuentemente parcial, y a veces completa, la castracin parasitaria en ambos
sexos del nematodo. En experimentos de laboratorio, Veremtchuk e Issi (1970)
infectaron a S. carpocapsae con dos especie de microsporidios; Nosema mesnili
(Paillot) y Plistophora schubergi (Zwolfer) pasando nematodos por insectos
infectados por los protozoarios.
B. Los hongos nematfagos: Varios estudios de la presencia de hongos
nematfagos han mostrado que este grupo se encuentra en suelos a travs del
mundo y de toda clase de climas (Gray, 1988). La mayora de las especies
parecen bastante ubicuas, pocos son restringidos geogrficamente y una corriente
constante de especies nuevas contina descubriendo.
54
Los hongos nematfagos caen en dos grupos amplios; esos que son
parsitos de nematodos (los hongos de endoparsitos) con conidia o zoospora
pequea y con esos que capturan nematodos (los hongos depredadores) usar las
hifas como trampas modificadas. La habilidad del grupo para capturar y destruir
nematodos proporciona la posibilidad de utilizar los hongos como agentes de
control biolgico de especies de plagas pero podran tener repercusiones cuando
los nematodos entomopatgenos son introducidos al suelo infectado con el hongo
(Richardson y Grewal, 1994).
Es poco conocido de la especificidad a nematodos en particular
endoparsitos u hongos atrapadores (Gray, 1988). Algunos hongos se han
observado que limitan su ataque a una sola especie de nematodo; en otros casos
un rango de nematodos fue atacado. La mayora de la especies endoparsitos se
conoce que tienen un amplio rango de hospederos. Timper et al., (1991)
mencionan que un rango de existencia adhesiva en conidias de hongos y mucho
depende de la especie de nematodo y el hongo involucrado. Los nematodos se
deben mover para encontrar la conidia, las diferencias en la movilidad entre la
especie de nematodo tienen como resultado las diferencias en el nmero de
conidias encontradas. Los infectivos que slo se mueven una distancia corta antes
localizar a un hospedero, son menos probables de encontrar a antagonista fngico
que a los nematodos que se mueven distancias ms largas. Las variaciones en la
abundancia de antagonistas en el suelo pueden bien iniciar la inconsistencia en el
nivel del control logrado por nematodos entomopatgenos.
Los rhabditidos parecen poseer un elemento de la resistencia incorporada a
la infeccin por hongos endoparsitos. Poinar y Jansson (1986) reportan que las
conidias adhesivas del hongo nematfago, Drechmeria conidiospora slo
raramente ataca y nunca penetra, las etapas infectivas de S. carpocapsae, S.
glaseri, S. intermedia y H. heliothis. Timper y Kaya (1989) sugieren que la cutcula
de segundo estadio es retenida por larvas infectivas las protege de la infeccin por
el hongo endoparsitos, Hirsutilla rhossiliensis (Minter y Brady). Timper et al.,
(1991) identificaron una combinacin de los rasgos del nematodo que puede
55
reducir la mortalidad causada por hongos parasitarios. Estos incluyen el tamao
pequeo de los infectivos, habilidad limitada de dispersin, y de ambas la
tendencia hacia la retencin de la cutcula del segundo estadio y a la resistencia a
la adhesin mictica de la espora. Cuando los infectivos de Heterorhabditis spp.,
tiende a retener su cutcula exterior protectora por ms tiempo que Steinernema
spp., ellos pueden ser ms adecuados para el uso en suelos infestadas con
hongos nematfagos (Timper y Kaya, 1989).
Los hongos depredadores son parsitos facultativos. Ellos existen en la
suelo como micelio saprofito y bajo condiciones de baja disponibilidad de alimento
nutritivo producen un rango de artefactos atrapando nematodos como las perillas,
redes o hifas adhesivas, o anillos apretadores o no apretadores. Rosenzweig et al.
(1985) encontraron que siete especies de hongos depredadores eran capas de
atrapar y consumir rhabditis entomopatgeno. En experimentos de laboratorio,
Poinar y Jansson (1986) demostraron la susceptibilidad de larvas infectivas de S.
carpocapsae, S. glaseri, S. intermedia y H. heliothidis a la infeccin por los hongos
depredadores, Monacrosporium ellipsosporum (Grove) R.C. Cooke & C.H.
Dickinson y Arthrobotrys oligospora (Fresenius).
2.7.2.2. Depredadores de nematodos
A. caros (Acari): Los estudios de laboratorio (Epsky et al., 1988)
mostraron que varias especies de caros se alimentan sobre infectivos de S.
feltiae y podra afectar la sobrevivencia de nematodos entomopatgenos aplicados
en campo. Dos especies depredadoras, Gamasellodes vermivorax (Walter) y
Alycus roseus, completaron su ciclo vida y produce huevos viables con los
steinernematidos como la fuente principal de alimento. Epsky et al., (1988)
tambin demostraron diferencias significativas entre las estimaciones de dosis
letales promedio (DL
50
) de la eficacia del nematodo se obtuvo cuando los caros
estaban presentes o ausentes, los resultados les sugiriron que esa aplicacin
inundativa del suelo con Rhabditidis podra promover un incremento inicial en la
tasa de depredacin.
56
B. Collembola: La mayora de los insectos del suelo se alimentan de
collembolos sobre la materia orgnica muerta, hongos y nematodos. En
experimentos de laboratorio, Epsky et al., (1988) demostraron que el colembolo
Hypogastrura scotti (Yosii 1962) se alimenta, desarrolla sobre una dieta de
infectivos de S. feltiae. Muy poco se conoce acerca de los efectos de los
depredadores omnvoros sobre la eficacia de campo de los nematodos, su nmero
y la diversidad completa en la naturaleza sugieren que ellos justifican investigacin
adicional.
C. Tardgrados: Un grupo de depredadores polfagos frecuentan los
hbitats hmedos tales como el musgo. Ishibashi et al., (1987) reportan el
consumo de estados infectivos de S. feltiae (DD-136) un tardgrado, de
Macrobiotus sp. (Zchultze)
D. Los nematodos: Una vez aplicado al suelo, los nematodos
entomopatgenos pueden encontrar nematodos que son depredadores generales,
se alimentan sobre un rango de microorganismos, o depredadores obligados que
se alimentan especficamente sobre nematodos. Hasta la fecha, has muy poca
informacin sobre el impacto de nematodos depredadores sobre la actividad de
nematodos parsitos de insectos. Sin embargo, la depredacin de S. feltiae ambos
por un nematodo mononchido (Clarkus sp.) y por un nematodo dorilaimido
Actinolaimus sp. ha sido demostrado (Ishibashi et al., 1987).
2.7.2.3. Hospederos no plaga
Los nematodos rhabditidos poseen un amplio rango de hospederos; S.
carpocapsae se conoce que infecta cerca de 250 especies de insectos (Poinar,
1979). Por lo tanto la presencia de organismos no plaga, especialmente insectos,
quizs afecten el potencial de control biolgico de ciertas especies de nematodos
en particular para controlar plagas especficas de insectos. Si una densidad alta de
hospederos alternativos esta presente durante el perodo pico de la plaga,
entonces el efecto de control biolgico se podra reducir. Una alta incidencia de
organismos no plaga a la vez cuando a la plaga destinada es de incidencia baja
57
puede, sin embargo, ser benfico para un programa de control; el reservorio
natural de hospederos susceptibles sirven para perpetuar la poblacin de
nematodos (Richardson y Grewal, 1994).
Otros grupos de invertebrados, inclusive Gastropoda, Symphyla, Arachnida,
Crustacea y Diplopoda se conocen tambin que son susceptibles a la infeccin por
nematodos de heterorhabditidos y steinernematidos (Poinar, 1989).
2.7.2.4. Races de plantas y microflora de la rizosfera
Las races de las plantas pueden influir en la habilidad de bsqueda del
hospedero de rhabitidos infectivos. Bird y Bird (1986) demostraron que las larvas
de S. glaseri se orientan hacia el crecimiento de las puntas de la raz de semilleros
de tomate. En experimentos de laboratorio, Choo et al., (1989) encontraron que la
habilidad de bsqueda del hospedero de H. bacteriophora (H. heliothidis) fue
afectado adversamente por la densidad de races del maz, maravilla y tomate,
mientras que S. feltiae no fue afectado. La densidad del sistema radicular podra
haber cambiado las caractersticas de abiticas y biticos del suelo e influido por
la porosidad, composicin qumica o poblaciones de microorganismos. Choo et
al., (1989) mencionan que los cambios de esta naturaleza podran haber afectado
H. bacteriophora ms que S. feltiae. En un estudio comparativo de los efectos de
cuatro de tipos suelo, y de la ausencia o presencia de races, sobre la infeccin de
larvas de la polilla de la cera por H. bacteriophora. Choo y Kaya (1991) sealan
que muchos insectos fueron parasitados en sistema radicular que contena humus,
as como tambin fueron parasitados en humus sin races (Cuadro 4). En arena,
franco y arcilla, el porcentaje de infeccin era levemente, pero no
significativamente, ms alto en la presencia de races.
El ambiente normal del suelo se modifica considerablemente en la vecindad
de las races de la planta (rizosfera). Exudados y lisados del crecimiento de las
races activamente estimulan la microflora especfica inclusive bacterias de la
rizosfera (Lynch, 1990). Los efectos combinados de la actividad de la microflora y
la raz quizs afecten notablemente la habilidad de bsqueda del hospedero de
58
nematodos. En pruebas de laboratorio, Pye y Burman (1981) demostraron el
efecto atractivo de los gradientes bacterianos en el comportamiento migratorio de
S. carpocapsae. Esto confirma que en otros grupos de nematodos, la especie de
entomopatgeno puede detectar hospederos por el movimiento dirigido a un
gradiente de la concentracin hacia una fuente amplia de estmulos. Los estudios
sobre los efectos de la rizosfera y/u otra microflora del suelo sobre la actividad de
los nematodos parsitos de insectos parece merecer ms atencin.
Cuadro 4: Efectos del tipo suelo y races de maz sobre la infectividad de
Heterorhabditis bacteriophora a larvas de la polilla de la cera (Galleria
mellonella) (Choo y Kaya, 1991)
Tipo de suelo % de Galleria infectada
Presencia de races Ausencia de races
Humus 77.8 2.2 a 64.4 2.2 b
Arena 53.3 3.9 c 51.1 4.4 c
Franco 42.2 5.9 d 40.0 0 d
Arcilla 6.7 0 e 2.2 2.2 e
Medias error estandar (tres ensayos). Medias seguidas por la misma letra no son
significativamente diferentes al 5% de nivel.
2.8. Rango de hospederos
En el laboratorio, la mayora de los especies de nematodos
entomopatgenos infectan una variedad de insectos donde reciben el contacto con
el hospedero y las condiciones ambientales son ptimas, y no existe ninguna
barrera ecolgica ni de conducta a la infeccin (Kaya, y Gaugler, 1993; Gaugler et
al., 1997). En el campo, los nematodos entomopatgenos atacan un rango
apreciablemente ms estrecho de hospederos que en el laboratorio (Akhurst,
1990; Georgia et al., 1991; y Bathon, 1996), aadiendo esta cualidad a su
59
seguridad como agentes de control biolgico. Ya que estos nematodos estn
adaptados al ambiente del suelo, los hospederos principales son insectos de
suelo. El aislamiento de nuevas cepas/especies de nematodos se hace
generalmente utilizando larvas de la polilla mayor de cera, G. mellonella, y por lo
tanto, el rango de hospederos de las especies de nematodos conocidas tiende a
estar influenciado hacia generalistas o especies adaptados a insectos
lepidpteros. Sin embargo, alguna especie de nematodo que se ha aislado de
cadveres de hospederos en el campo tiene un rango restringido de hospederos
con S. kushidai (Mamiya, 1989) y S. scarabaei (Stock y Koppenhofer, 2003) esta
bien adaptado a larvas de escarabajos. S. scapterisci parece estar adaptado a
grillos del lunar o grillo topo e infecta pobremente otros insectos (Grewal et al.,
1993, Parkman y Smart, 1996), pero Bonifassi et al. (1999) demostraron que una
combinacin de de Xenorhabdus cepa UY61 y S. scapterisci infecta rpidamente
la polilla mayor, G. mellonella.
2.9. La conducta ecolgica
El mayor factor que restringe el rango de hospedero de los nematodos
entomopatgenos es la conducta diferente de los juveniles infectivos. Estos
nematodos emplean diferentes estrategias adentrndose para localizar e infectar a
hospederos, que recorren de un extremo se sienta y espera (emboscador) el otro
de estrategia que se desplaza extensamente (acechador) (Campbell y Lewis,
2002, Lewis, 2002). La mayora de las especies de nematodos se colocan como
intermediario en las estrategias de alimentacin (S. riobrave y S. feltiae) (Campbell
y Gaugler, 1997, Campbell y Kaya, 1999, 1999
b
). Estas estrategias intermedias
son adaptadas a infectar insectos que ocurren apenas debajo de la superficie de
suelo, tal como prepupas de insectos lepidpteros, de mosquitos de hongos, o de
larvas de gorgojos. Las estrategias de sentarse y espera o amboscadores (S.
carpocapsae y S. scapterisci) son caracterizados por su baja movilidad y una
tendencia para permanecer cerca de la superficie de suelo. Ellos no tienden a
responder a seales voltiles y contacto con el hospedero a menos que se
presente una sucesin apropiada para infecta eficientemente la especie del
60
hospedero mvil tal como la palomilla dorso de diamante, los grillos del lunar y
gusanos cortadores cerca de la superficie de suelo.
En el otro extremo, las extensas estrategias alimenticias o navegadores (S.
glaseri y H. bacteriophora) son caracterizados por su alta movilidad y son
distribuidos a travs del perfil de suelo. Ellos se orientan a seales voltiles del
hospedero y conectar una bsqueda localizada despus del contacto con el
hospedero y estn bien adaptados para infectar a hospederos sedentarios tales
como escarabajos, prepupas y pupas de lepidpteros (Campbell y Kaya, 1999,
1999
b
).
Otra conducta de los juveniles infectivos es su ondeando su cuerpo tpico
donde 30-95% de su cuerpo se levanta lejos del sustrato por unos pocos
segundos. La mayora de las especies de nematodos que tienen una estrategia
emboscadora o intermedia pueden ondear su cuerpo levantndolo >95% de su
cuerpo del sustrato, parndose en una curva en la cola y asumiendo una postura
recta o alternar perodos de ningn movimiento y ondeo activo (Campbell y Kaya,
1999, 1999b). Los navegadores pueden ondear su cuerpo pero no pueden
pararse en su cola. Los juveniles infectivos que pueden pararse en su cola y
ondear su cuerpo (emboscadores y algunas alimentaciones intermedias) pueden
saltar tambin. Esta conducta de saltar se puede utilizar para la fijacin al
hospedero o es indirecta donde puede jugar un papel en la dispersin (Campbell y
Kaya, 1999a).
2.10. Ecologa
La dispersin - Adems de saltar para alguna especie de nematodo, los
juveniles infectivos se pueden dispersar en el suelo hasta 90 cm en ambas
direcciones horizontales y verticales dentro de 30 das (Kaya, 1990). Esta
dispersin, especialmente para nematodos navegadores, le permite a los
nematodos entomopatgenos para buscar activamente a hospederos. Los factores
que influyen en la movilidad de los juveniles infectivos son la humedad, la
temperatura, y la textura de suelo, de las cuales la humedad es la ms crtica
61
porque los nematodos necesitan una pelcula de agua en los espacios interiores
del suelo para la propulsin efectiva. Cuando esta pelcula de agua llega a ser fina
tambin (en suelo seco) o los espacios interiores llegan a estar llenos
completamente de agua (en suelo saturado), el movimiento de nematodo es
restringido (Koppenhofer et al., 1995).
Las diferentes especies/cepas del nematodo tienen diferente temperatura
ptima y rangos (Griffin, 1993, Grewal et al., 1994) eso afecta su sobrevivencia y
movilidad. Los nematodos pierden la movilidad en temperaturas bajas (<10-15 C)
y son inactivados a temperaturas altas (>30-40 C).
La porosidad del suelo afecta la dispersin del nematodo con menos
dispersin que ocurre como en suelos porosos llega a ser ms pequeos (Kaya,
1990). Los nematodos pueden ser dispersados tambin a gran distancia
pasivamente por el agua, el viento, foresis, hospederos infectados, la actividad
humana, etc., que puede, en parte, contar para su distribucin global esparcida.
2.11. Sobrevivencia
Despus de la aplicacin de campo de los juveniles infectivos, la
persistencia es generalmente corta (Smits, 1996). Los factores no biticos as
como las temperaturas extremas, la humedad de suelo, el estrs osmtico, la
textura de suelo, humedad relativa y la radiacin ultravioleta (Glazer, 1996, Smits,
1996, Baur y Kaya, 2001) y los factores biticos tales como antibiosis, la
competencia y enemigos naturales (Kaya y Koppenhofer, 1996, Kaya, 2002) son
las causas extrnsecas primarias que afectan la sobrevivencia del juvenil infectivo.
Los juveniles infectivos pueden sobrevivir a condiciones bajas de humedad
bajando su tasa de metabolismo. La eliminacin gradual del agua de los juveniles
infectivos les da tiempo de adaptarse a las condiciones de desecacin (Patel et al.,
1997, Solomon et al., 1999). As, los suelos naturales permiten a los juveniles
infectivos persistir ms largo en suelos secos. Los juveniles infectivos pueden
sobrevivir a las condiciones de desecacin quedando dentro del cadver de
hospedero hasta que la situacin de la humedad de suelo mejore (Brown y
62
Gaugler, 1997).
La sobrevivencia del nematodo a temperaturas diferentes vara con la
especie y la cepa (Grewal et al., 1994, Hazir et al., 2001). La exposicin
prolongada a temperaturas extremas (debajo de 0 C o encima de 40 C) es
mortal para la mayora de las especies de nematodos entomopatgenos (Brown y
Gaugler, 1996). En el ambiente de suelo, los juveniles infectivos son normalmente
amortiguados de las temperaturas extremas. Para el almacenamiento, la mejor
longevidad de los juveniles infectivos est entre 5 y 15 C. A temperaturas ms
altas, los juveniles infectivos han aumentado la actividad metablica y agotan sus
reservas de energa, acortando su vida.
La luz ultravioleta (UV) puede matar los nematodos dentro de minutos
(Gaugler et al., 1992a). La radiacin UV es muy importante cuando los nematodos
se aplican como insecticidas biolgicos. La exposicin directa a la luz UV (la luz
del sol) puede ser aminorada aplicando a los juveniles infectivos temprano por la
maana o la tarde, o utilizando las cantidades suficientes de agua para lavar a los
juveniles infectivos en la suelo.
La textura del suelo afecta la sobrevivencia de los juveniles infectivos, con
la ocurrencia ms pobre en suelos arcillosos (en los mismos potenciales de agua).
La pobre tasa de sobrevivencia en suelos arcillosos es probablemente es debido a
los niveles ms bajos de oxgeno en los poros ms pequeos de suelo. El oxgeno
es tambin un factor limitante en suelos saturados de agua y suelos con alto
contenido de materia orgnica, pero el pH no tiene un efecto fuerte en la
sobrevivencia de los juveniles infectivos. La salinidad de suelo tiene tambin un
efecto insignificante en la sobrevivencia de los juveniles infectivos an en salinidad
por encima de los niveles de tolerancia de la mayora de las plantas de cultivo
(Thurston et al., 1994). El agua de mar no tiene efectos negativos en la
sobrevivencia de varias especies/cepas de Heterorhabditis (Griffin et al., 1994)
como ellos han sido aislados con frecuencia de suelos cerca de la orilla del mar.
Varios factores biticos (enemigos naturales) afectan la sobrevivencia del
63
nematodo (Kaya y Koppenhofer, 1996, Kaya, 2002). Entre los enemigos naturales
de nematodos, los hongos de nematfagos han recibido la mayora de las
atenciones. Por ejemplo, Hirsutella rhossiliensis causa una mortalidad ms alta de
los juveniles infectivos de S. glaseri que de los juveniles infectivos H.
bacteriophora. Esta mortalidad diferencial se asocia con la retencin de la cutcula
del segundo estadio por los juveniles infectivos de H. bacteriophora.
Otros enemigos naturales de los juveniles infectivos incluyen colmbolos,
caros, tardgrados y nematodos depredadores, pero su impacto bajo condiciones
de campo no es entendido bien. Los animales que se alimentan de carroa tales
como hormigas se alimentarn menos en insectos muertos por nematodos (Baur
et al., 1998). La diferencia en la actividad alimenticia por hormigas esta asociada
con factores asociados y producidos por Photorhabdus y Xenorhabdus (Zhou et
al., 2002).
2.12. El reciclaje de nematodos
El reciclaje es deseable despus de una aplicacin de nematodos
entomopatgenos porque puede proporcionar el control adicional y prolongado de
una plaga. Los factores no biticos y biticos que afectan la persistencia,
infectividad, y la motilidad de los juveniles infectivos influyen el reciclaje de los
nematodos.
Ya que ellos son patgenos obligados, la disponibilidad de hospederos
favorables es una clave para el reciclaje de los nematodos. El reciclaje es bastante
comn (Kaya, 1990, Klein, 1993) despus de la aplicacin del nematodo pero
probablemente no es suficiente para la eliminacin prolongada del hospedero, y
los nematodos se tienen que volver aplicar para mantener el control adecuado de
plagas de insectos del suelo.
En poblaciones naturales de nematodos entomopatgenos, el reciclaje
ocurre en sus insectos hospederos, pero slo unos pocos estudios han examinado
la dinmica de poblaciones de nematodos y los factores que los afectan. La
distribucin dentro del sitio de las poblaciones de nematodos es desigual (Stuart y
64
Gaugler, 1994, Campbell et al., 1997, 1998), y los factores biticos y no biticos
as como las fluctuaciones estacionales, estrategias alimenticias de los juveniles
infectivos, dinmicas de poblacin de hospedero y hospederos alternativos juegan
un papel clave en el reciclaje del nematodo.
2.13. Gentica
Los nematodos entomopatgenos son patgenos obligados en el campo,
pero en el laboratorio ellos se pueden mantener in vivo o in vitro. Durante su
conservacin en laboratorio, la diversidad gentica se puede perder, o la variacin
gentica se puede haber limitado durante la coleccin o perdido durante la
importacin y cra. Por otro lado, la conservacin de la variacin gentica para
nematodos es afectada por el efecto fundador, por la endogamia, y por la
seleccin inadvertida (Stuart y Gaugler, 1996). Un problema grave para
nematodos entomopatgenos es el efecto fundador porque slo un nmero
limitado de cadveres de insectos se colectan en solo sitios geogrficos, teniendo
como resultado variacin gentica reducida. Para mantener o aumentar la
diversidad gentica, la misma especie de nematodo se debe colectar de muchos
sitios geogrficos como sea posible y los aislados deben ser cruzados. Si la
adaptacin de laboratorio ocurre o es sospechada, los nematodos se pueden
cruzar con aislados nuevos de campo o con otras fuentes para mantener o
influenciar la diversidad gentica.
Los nematodos entomopatgenos pueden beneficiar de la mejora gentica
por cruzas selectivas o ingeniera gentica. Los ejemplos de la cruza selectiva
exitoso son la selecciones tolerantes al fri (Griffin y Downes, 1994; Grewal et al.,
1996), la mejora de la eficacia de control (Tomalak, 1994) y la resistencia a
nematicidas (Glazer et al., 1997).
Adems, la ingeniera gentica para mejorar los rasgos benficos de
nematodos entomopatgenos y sus bacterias asociadas se han hecho en una
escala limitada. Hashmi et al. (1995, 1995
b
) incorporaron un plasmido que
contiene genes de protena de choque calrico del nematodo de vida libre
65
Caenorhabditis elegans dentro de H. bacteriophora, y la cepa transgnica
resultante tiene una tolerancia ms alta a los picos ms cortos de temperatura que
tenia el tipo silvestre (Hashmi et al., 1998). Pruebas de campo no mostraron un
aumento en la persistencia de la cepa transgnica comparado con el nematodo
del tipo silvestre que indica que la forma de transgnica no tiene ventaja sobre el
tipo silvestre (Wilson et al., 1999). As, el nematodo transgnico tuvo una ventaja
sobre el tipo silvestre en almacenamiento y aplicacin porque de su mayor
tolerancia a los picos ms cortos de temperatura. Sin embargo, las leyes
reguladoras en varios pases pueden afectar la comercializacin y la liberacin
eventual de campo de nematodos transgnicos.
Para las bacterias mutualistas, algunas de los objetivos principales para el
mejoramiento gentico incluyen la patogenicidad, especificidad del hospedero,
especificidad del simbionte, la resistencia a ambientales extremos, y control de la
variacin de la fase (Burnell y Dowds, 1996). Varios genes de estas bacterias se
han clonado tales como: los genes de protena de membrana exterior, genes
inducidos por la baja temperatura, genes luz, genes de enzima extracelular y
genes (Forst y Clarke, 2002). Las protenas con actividades de insecticidas se han
aislado y los genes se identificaron, y ellos muestran potencial para ser
incorporados en plantas para el control de insectos (Bowen et al., 1998, Webster
et al., 2002).
2.14. Produccin masiva, formulacin y comercializacin
Produccin masiva. Los nematodos entomopatgenos se cultivan
fcilmente in vivo o in vitro para pruebas de laboratorio o para la produccin
comercial (Friedman, 1990). La polilla de la cera G. mellonella, es el insecto de
eleccin para la produccin in vivo porque se produce comercialmente en mayor
nmero en varios pases para cebo de pez y alimento de pjaro y lagarto. El
mtodo bsico para la produccin a pequea-escala se describe en Kaya y Stock
(1997), mientras que el mtodo a gran escala para producir nematodos son
descritos por Gaugler et al., (2002). En la produccin in vivo requiere mucha mano
de obra, la falta de economa de la escala, y es costoso, pero es tambin sencilla y
66
seguro y tiene como resultado nematodos de alta calidad (Shapiro-Ilan et al.,
2003). La produccin in vivo a escala industrial puede ser aplicable en pases
desarrollados, y en algunas industrias algodoneras en pases desarrollados
utilizan tambin esta tecnologa.
Para la produccin a gran escala, en mtodos in vitro que utilizan medios
slidos de tres dimensiones o los mtodos de fermentacin lquida se han
empleado (Ehlers, 1996, Grewal y Georgia, 1998). El mtodo de medio slido de
tres dimensiones, primero descrito por Bedding (1981), utilizan espuma de
poliuretano de polister de cmara revestido con un medio nutritivo, y inicialmente
inoculado con las bacterias simbiticas y entonces con nematodos, produciendo
65 millones de juveniles infectivos en frascos de 500 ml (Bedding, 1981) o 2 mil
millones de juveniles infectivos por bolsa de plstico estril aireada (Bedding,
1984). Las ventajas de los mtodos de medios slidos es que los costos de capital
son bajos y se requiere experiencia limitada (pero ms que en el mtodo in vivo), y
la logstica de produccin es flexible. A causa de la economa limitada de la
escala, este mtodo de produccin es ms conveniente para los pases que tienen
costos de mano de obra bajos o para servir los mercados de alto valor (Ehlers,
2001b).
Esta tecnologa tiene el costo de produccin masiva ms bajo y es el
mtodo de eleccin para compaas ms grandes con mltiples productos en
pases industrializados. Para el cultivo lquido exitoso, los factores claves son
medios favorables, monoxnica (slo las bacterias simbiticas presentes), y
oxgeno adecuado (Ehlers, 2001a, Gaugler y Han, 2002).
Los componentes tpicos de un medio son extractos de levadura como una
fuente de nitrgeno; una fuente de carbohidratos tal como harina de soya, glucosa
o glicerina, lpidos de plantas u origen animal y las sales. La transferencia del
oxgeno dentro de un bioreactor no debe ser fuerte con resultados perjudiciales a
los nematodos. El equipo convencional (propulsores de hoja plana, las columnas
de ascensor de brbuja y bioreactores internos de lazo) han tenido xito (Surrey,
1996, Ehlers et al., 1998). Varias especies de nematodos se ha producido
67
exitosamente en bioreactores de 7,500-80,000 L inclusive S. carpocapsae, S.
riobrave, S. kushidai, S. feltiae, S. glaseri, S. scapterisci, H. bacteriophora y H.
megidis, con capacidad de produccin tan alto como 250,000 juveniles
infectivos/ml que depende de la especie de nematodo.
Con Heterorhabditis, en fermentacin lquida produce nmeros
inconsistentes de juveniles infectivos. El tiempo de produccin se puede prolongar
debido a la recuperacin variable de los juveniles infectivos inoculados dentro de
los cultivos y la incapacidad de los adultos de amfimcticos para aparearse bajo
condiciones de cultivo lquido (Ehlers et al., 1998, Strauch y Ehlers, 1998).
2.15. La formulacin y almacenamiento
La siguiente produccin en gran escala, los nematodos pueden ser
almacenados en masa en tanques aireados refrigerados por perodos prolongados
o formulados inmediatamente. Los juveniles infectivos pueden ser almacenados
en una suspensin acuosa a 4-15 C (dependiendo de la especie de nematodo)
sin mucha prdida de la actividad por 6-12 meses para la especie Steinernema y
3-6 meses para la especie de Heterorhabditis.
En el tipo ms sencillo de la formulacin, los nematodos se mezclan con un
sustrato hmedo (esponja); tales formulaciones requieren la refrigeracin continua
para mantener la calidad del nematodo por perodos prolongados. Se han
desarrollado para mejorar el perodo de conservacin y la resistencia a extremos
de temperatura, las formulaciones que reducen el metabolismo de los juveniles
infectivos por la inmovilizacin o desecacin parcial. Estas formulaciones
contienen alginato, vermiculita, arcilla, carbones activados, poliacrilamida, y
grnulos dispersables de agua (Grewal y Georgia, 1998, Georgia y Kaya, 1998).
Es difcil de obtener una formulacin ptima para todas las especies de
nematodos porque ellos tienen requisitos especficos diferentes para la humedad y
el oxgeno. Una de las mejores formulaciones en grnulo de dispersin de agua
que se ha desarrollado para steinernematidos (S. carpocapsae y S. feltiae) como
cuando se combina el perodo de conservacin relativamente largo de nematodo
68
sin la refrigeracin pero con la facilidad de manejo. Los juveniles infectivos
parcialmente desecados en grnulos de dispersin humectables en agua tienen un
perodo de conservacin a 25 C de 5 a 6 meses para S. carpocapsae, 2 meses
para S. feltiae, y 1 mes para S. riobrave (Grewal, 2000). Esta formulacin se
mezcla con agua antes de rociar la aplicacin, y los juveniles infectivos
parcialmente desecados se rehidratan despus de la aplicacin a un ambiente
hmedo del suelo. Sin embargo, para lograr la infectividad ptimo los juveniles
infectivos necesitan rehidratarse hasta tres das en el suelo (Baur et al., 1997b).
2.16. El control de calidad
Antes y despus de la formulacin, la calidad de los nematodos se debe
verificar. En un mnimo, su viabilidad e infectividad se deben monitorear. Varios
protocolos de bioensayos estn disponibles, pero ensayos que utilizan muchos
nematodos se consideran inadecuados para propsitos de control de calidad
debido a las interacciones parasito/hospedero tales como reclutamiento. Grewal
(2002) recomienda el uso de uno en uno (un nematodo a una larva de Galleria) el
ensayo de pared-arena como un instrumento uniforme de control de calidad. El
ensayo uno en uno trabaja bien para steinernematidos y el ensayo cinco en uno
trabajo bien para heterorhabditidos (Gaugler et al., 2000). Los parmetros
adicionales del control de calidad incluyen: la evaluacin de reservas de energa
(peso seco o el contenido total de lpidos) como un pronosticador de la longevidad.
2.16. La comercializacin
El primer paso en el desarrollo de un producto comercial es la seleccin de
la cepa. Las propiedades claves de una cepa comercial son virulencia alta contra
las plagas (objetivos) y la facilidad de cultivo. Tambin es deseable el perodo de
conservacin y la eficacia contra mltiples plagas de insectos (Gaugler y Han,
2002). Todos rasgos se deben personificar en la misma cepa. Por ejemplo,
aunque S. glaseri sea efectivo contra larvas de colepteros, es difcil de vender a
causa de los problemas con la formulacin y el almacenamiento.
Las regulaciones en el uso de nematodos entomopatgenos para el control
69
de insectos, ya que estas regulaciones varan entre pases; los nematodos
indgenas estn exentos de registro en muchos pases europeos, en Australia, y
en los EEUU, mientras en otros pases, ellos estn sujetos a procedimientos
semejantes de registro en cuanto a un plaguicida qumico. La importacin y el uso
de especies de nematodos no-indgenas y transgnicos estn sujetos a
regulaciones estrictas en la mayora de los pases. Algunos pases consideran las
cepas extranjeras de especies endmicas pueden ser exticas, y esto puede ser
un obstculo mayor a la comercializacin de nematodos entomopatgenos
(Richardson, 1996, Bedding et al., 1996, Rizyi et al., 1996).
2.17. Las estrategias de aplicacin
Los nematodos entomopatgenos casi se han aplicado exclusivamente
utilizando el enfoque inundativo donde una gran cantidad de juveniles infectivos
son liberados en una distribucin uniforme y el control de las poblaciones de
plagas se espera que sea rpido y completo. Este enfoque es posible para
cosechas de alto valor comercial (invernaderos decorativos y verduras, ctricos,
arndanos, y csped, etc.). Sin embargo, los nematodos con un ataque pobre
para el enfoque inundativo (un paradigma de plaguicidas qumicos) en muchos
sistemas de cultivo (cosechas de bajo valor y/o cultivos con mucha superficie as
como el algodn y la soya) son limitados o retringidos a causa de su perodo de
conservacin, susceptibilidad a ambientes extremos, costo alto, etc. Las
liberaciones inoculativas, la conservacin y manejo de poblaciones endmicas de
nematodos necesitan ser explorados, ya que ellos pueden ser ms promisorios y
factibles en muchas situaciones de la plaga (Lewis et al., 1998).
La liberacin inoculativa de nematodos entomopatgenos con la esperanza
que ellos establecern poblaciones nuevas o aumentarn poblaciones bajas para
la eliminacin a largo plazo de la plaga slo se ha procurado pocas veces y es
poco conocido acerca del enfoque ptimo de esta estrategia. S. glaseri, aislado
originalmente de larvas de escarabajos en Nueva Jersey, fue liberado en un
programa de control de inoculacin masiva de 1939 a 1942 contra larvas del
escarabajo japons en los pastizales (Gaugler et al., 1992b). Gaugler et al.,
70
(1992b) notaron que la eliminacin del simbionte bacteriano por el uso de
antibacterianos el procedimiento de reproduccin masiva, y la posible pobre
adaptacin climtica de este nematodo neotropical limitaron el xito de este
programa. Ms recientemente, S. scapterisci aislado originalmente de Uruguay fue
introducido exitosamente en Florida para el control biolgico clsico de plagas del
grillo de lunar (Parkman y Smart, 1996).
Las liberaciones exitosas de inoculacin de nematodos entomopatgenos
son dependientes a largo plazo, sobrevivencia multigeneracional y reciclaje de las
poblaciones de nematodos. Para lograr esta meta, varias condiciones se deben
incluir (1) la presencia de insectos hospederos moderadamente susceptibles a
travs de la mayor parte del ao, (2) un alto nivel de umbral econmico de las
plagas de insectos objetivo, y (3) condiciones del suelo favorables para la
sobrevivencia del nematodo (Kaya, 1990).
Las liberaciones aumentativas en las poblaciones establecidas de
nematodos y/o manejo de la susceptibilidad de las poblaciones de
hospederos/plagas (utilizando un estresor tales como otros agentes de control)
hay dos enfoques adicionales que se pueden utilizar, sean estas para aumentar o
manejar las poblaciones de nematodos establecidos y que requiere ms atencin
(Koppenhofer et al., 1999, 2000a).
2.18. Los mtodos de la aplicacin
El mtodo de aplicacin ms comn para nematodos entomopatgenos
deber utilizar el mismo tipo del equipo utilizado para rociar plaguicidas qumicos.
As, los nematodos pueden ser aplicados al sitio de la plaga con la mayora de los
equipos de rocio comercialmente disponibles tales como atomizadores de mano o
suelo, atomizadores de niebla y areos en helicpteros (Georgis et al., 1995).
Los juveniles infectivos pueden resistir presiones de hasta 1068 kPa y
pasar por los atomizadores con tipos de boquilla comunes con aberturas tan
pequeas como 100 M de dimetro, pero las pantallas en las bocas se deben
quitar para aminorar el dao a los nematodos. Los nematodos se han aplicado
71
tambin va sistemas de riego inclusive de goteo, microinyectores, riego de
regadera y de surco (Georgis et al., 1995, Cabanillas y Raulston, 1996). El riego
de pre- y postaplicacin con humedad moderadamente contnua del suelo son
esenciales para el buen desempeo del nematodo. Si agua se limitada, la
aplicacin subterrnea de los nematodos puede ser un mtodo eficiente de
liberacin (Klein, 1993).
Los insectos barrenadores de plantas han sido controlados exitosamente
inyectando suspensiones de nematodos directamente en los hoyos del barrenador
o bloqueando los hoyos con esponjas empapadas con suspensiones de
nematodos (Yang et al., 1993). Para el gorgojo del pltano, una suspensin de
nematodos puede ser colocada en cortes de rizomas residuales de pltanos para
atraer los insectos (Treverrow y Bedding, 1993). Aunque no es posible
comercialmente en este momento, cebos que contengan juveniles infectivos
puede ofrecer una manera rentable de controlar insectos mviles as como adultos
de moscas domsticas (Renn, 1998).
Los efectos perjudiciales de la desecacin y radiacin UV a menudo
pueden ser reducidos al agregar adyuvantes a la formulacin o suspensin de
nematodos. Aunque el uso de nematodos para plagas de insectos foliares no han
tenido gran xito, algunos estudios ha mostrado que la agregar adyuvantes mejor
el desempeo del nematodo contra plagas que se alimentan del follaje. As, la
radiacin solar se puede filtrar con abrillantadores de estilbeno (Baur et al., 1997),
mientras que los antidesecantes as como ciertos aceites comerciales, los
productos a base de plantas, y la glicerina (Glazer et al., 1992, Broadbent y Olthof,
1995, Baur et al., 1997) han proporcionado una proteccin a corto plazo para
nematodos en hbitats expuestos.
2.19. Los efectos de agroqumicos y agentes de control biolgico
Los nematodos entomopatgenos a menudo son aplicados a
sistemas/sustratos que se tratan regularmente con muchos otros agentes,
inclusive plaguicidas de sustancias qumicas o bioracionales, abonos del suelo y
72
los fertilizantes. Dependiendo de los agentes, tiempo de aplicacin, y las
caractersticas fsico-qumicas del sistema, los nematodos pueden o no actuar
recprocamente con estos otros agentes. Si las interacciones ocurren, ellos tienen
un rango antagnico a sinrgico. Adems de estos agentes, la depredacin interna
entre parasitoides y nematodos puede ocurrir (Rosenheim et al., 1995), pero Sher
et al. (2000) y Lacey et al. (2003) han mostrado que algunos parasitoides son
compatibles con S. carpocapsae.
Los nematodos entomopatgenos parecen ser compatible con muchos
plaguicidas, pero no todos los herbicidas, fungicidas, acaricidas, insecticidas,
nematicidas (Rovesti y Deseo, 1990, Ishibashi, 1993, Georgis y Kaya, 1996),
azadirachtina (Stark, 1996), productos de Bacillus thuringiensis (Kaya y Burlando,
1989), y el jabn de plaguicidas (Kaya et al., 1995). Los efectos negativos de
varios plaguicidas en los juveniles infectivos se han documentado (Rovesti y
Deseo, 1990, Patel y Wright, 1996). Por otro lado, la interaccin sinrgica entre
nematodos entomopatgenos y otros agentes de control se ha observado con
varios insecticidas (Koppenhofer et al., 2000a, Nishimatsu y Jackson, 1998) y
patgenos (Thurston et al., 1994, Koppenhofer et al., 1999). En vista de la
diversidad de la disponibilidad de insecticidas qumicos o bioracionales, una
generalizacin sobre la compatibilidad nematodos-plaguicidas no se puede hacer.
La compatibilidad de cada plaguicida qumico y la especie de nematodo deben ser
evaluadas en base caso por caso.







73
III. Materiales y Mtodos
3.1. Lugar del experimento
La investigacin se realiz en las diferentes zonas de los estados de
Colima, Jalisco, Michoacn, Nayarit y Sinaloa que se localizan en el Pacfico
Centro Mexicano y Veracruz del golfo de Mxico. En la mayora de las zonas, se
tomaron muestras de suelo al azar de cultivos como maz, sorgo para grano,
palma de coco, pasto Sudn y sorgo forrajero (Figura 3). La otra parte se llev a
cabo en el laboratorio de control biolgico de la Facultad de Ciencias Biolgicas y
Agropcuarias, de la Universidad de Colima; ubicada en el Km 40 de la autopista
Colima-Manzanillo a una temperatura de 25 1 C.

Figura 3. Mapa de muestreo de los estados de colecta de muestras de suelo del
Pacfico Centro Mexicano
3.2. Cra de Galleria mellonella L.
Con el propsito de establecer una colonia de larvas de G. mellonella (L.) y
la multiplicacin in vitro de los nematodos segn Woodrig y Kaya (1988). Primero
74
se recuper la cera contaminada de apiarios de la localidad con la finalidad de
recuperar larvas o adultos para su multiplicacin y reproduccin.
Se colocaron las larvas dentro de frascos de vidrio, donde tienen una
cantidad aproximada de 30-50 g de la dieta para su reproduccin, posteriormente
se colocaron en una estufa de incubacin a 30 C, se revisaron constantemente
para verificar que estuviera en buenas condiciones la dieta y en caso contrario se
cambi la dieta hasta la emergencia de los adultos, los cuales se pasaron a
frascos con dieta y unos pedazos de cera para la oviposicin de los adultos con la
finalidad de mantener la cra de la polilla de la cera segn el mtodo descrito por
Woodring y Kaya (1988).
La dieta de Galleria estuvo compuesta de 100 ml de agua destilada, 100 ml
de miel precalentada, 100 ml de glicerina, 5 ml de vitaminas y 1200 gr de salvado
de trigo, despus se mezclaron todos los ingredientes lquidos y se agregaron al
recipiente que contenia el germen de trigo y posteriormente se mezclaron hasta
tener una dieta homognea (Woodring y Kaya, 1988).
3.3. Lugares de muestreo
Las muestras de suelo se colectaron en la zona centro occidente de los
estados de Colima, Jalisco, Michoacn, Nayarit y Sinaloa; mientras que del golfo
de Mxico fue el estado de Veracruz.
En el Cuadro 5, se presentan los nmeros de localidad, cdigo, nmero de
muestras por ocalidad, fcha de colecta, localidad, localizacin geogrfica
(cordenadas geogrficas), altitud y cultivo, en los seis estados muestreados.
Los datos de localizacin geogrfica y altitud fueron obtenidos mediante el
uso de un GPS marca Garmin e-trex.

75
Cuadro 5. Nmero de localidad, cdigo, nmero de muestras por localidad, fecha de colecta, localidad, localizacin geogrfica,
altitud y cultivo de seis estados del Pacfico Centro Mexicano.
No.
Loc
Cdigo No.
muestras
Fecha Localidad Norte Oeste Altitud Cultivo

C1 C1 4 17/8/98 Los mezcales, Comala 1920.811 10347.639 608 M
C2 C2 2 12/8/98 Los colomos 1925.000 10445.000 1080 M
C3 C3 3 13/8/98 Cerro colorado 1930.000 10430.000 1080 M
C4 C4 4 13/8/98 El bordo - - - - - - - - - - - - - - - M
C5 C5 2 13/8/98 Crucero de Tepames 1908.231 10337.996 519 M
C6 C6 4 13/8/98 Pea blanca - - - - - - - - - - - - - - - M y S
C7 C7 3 14/8/98 El naranjito - - - - - - - - - - - - - - - M
C8 C8 3 14/8/98 Colima, Comala,
Cuauhtmoc
1920.000 10336.000 970 M
C9 C9 1 04/8/02 El poblado, Coquimatln 1913.698 10347.722 422 M
C10 C10 1 04/8/02 Pueblo Jurez, Coquimatln 1910.752 10354.634 279 M
C11 C11 1 04/8/02 Amachico, Coquimatln 1910.667 10356.351 328 M
C12 C12 1 06/8/02 Los mezcales, Comala 1920.811 10347.639 608 M
C13 C13 1 06/8/02 El remate, Comala 1924.825 10347.639 817 M
C14 C14 1 06/8/02 Carrizalillo, Quesera 1925.389 10341.000 1550 M
C15 C15 1 06/8/02 Quesera 1923.362 10334.882 1304 M
C16 C16 1 06/8/02 Villa de lvarez 1917.201 10347.030 515 M
C17 C17 1 06/8/02 Juluapan, Villa de lvarez 1918.890 10349.611 539 M
76
C18 C18 1 07/8/02 Tepames, Colima 1908.231 10337.996 519 M
C19 C19 1 07/8/02 Estapilla, Colima 1959.549 10331.140 304 M
C20 C20 1 14/8/02 Estacin, Tecomn 1854.000 10336.000 33 L
C21 C21 1 14/8/02 Estacin, Tecomn 1854.000 10336.000 33 PG
C22 C22 1 14/8/02 Estacin, Tecomn 1854.000 10336.000 33 PH
C23 C23 1 14/8/02 Estacin, Tecomn 1854.000 10336.000 33 m
C24 C24 1 14/8/02 Estacin, Tecomn 1854.000 10336.000 33 N
24 49
J25 J1 5 19/8/98 Los pozos 1941.000 10328.000 1520 M
J26 J2 5 19/8/98 Apestepec 1941.000 10328.000 1520 M
J27 J3 5 19/8/98 Los depsitos 1941.000 10328.000 1520 M
J28 J4 5 19/8/98 Sayula 1952.000 10335.000 1304 M/S
J29 J5 5 20/8/98 Sayula 1952.000 10335.000 1304 M
J30 J6 5 20/8/98 Sayula 1952.000 10335.000 1304 M
J31 J7 1 28/8/98 Jess Maria 2041.190 10213.530 2220 M
J32 J8 1 04/8/02 Ciudad Guzmn 1940.110 10328.830 1557 M
J33 J9 1 04/8/02 Los pinitos, Tonila 1925.343 10332.447 1326 M
J34 J10 1 04/8/02 Pialla, Tuxpan 1927.293 10328.514 1079 M
J35 J11 1 04/8/02 Atenquique, Tuxpan 1931.778 10327.851 1338 M
J36 J12 1 04/8/02 Canoas, Zapotiltic 1934.073 10327.324 1391 M
J37 J13 1 04/8/02 Apastepe 1938.060 10330.950 1709 M
J38 J14 1 17/8/02 Teocuitatln 2007.035 10332.704 1369 M
J39 J15 1 17/8/02 Zacoalco de Torres 2011.988 10333.806 1425 M
77
J40 J16 1 17/8/02 Acatln de Jurez 2025.362 10333.406 1575 M
J41 J17 1 17/8/02 Tlajomulco de Ziga 2029.396 10328.298 1607 M
J42 J18 1 18/8/02 Zapopan 2043.129 10329.041 1670 M
J43 J19 1 18/8/02 Magdalena 2053.008 10302.509 1496 M
J44 J20 1 23/8/02 Crucero de Magdalena 2056.300 10402.509 1386 M
20 44
M45 M1 5 07/8/98 El jazmn - - - - - - - - - - - - - - - M
M46 M2 2 07/8/98 El batillero - - - - - - - - - - - - - - - M
M47 M3 2 08/8/98 La sidra - - - - - - - - - - - - - - - M
M48 M4 2 08/8/98 El hueso - - - - - - - - - - - - - - - M
M49 M5 3 08/8/98 Carreras - - - - - - - - - - - - - - - M
M50 M6 1 09/8/02 Totoln 1958.990 10240.183 1590 M
M51 M7 1 09/8/02 Santa Ins Tocumbo 1944.502 10234.967 1630 M
M52 M8 1 09/8/02 Peribn 1933.106 10226.586 1476 M
M53 M9 1 10/8/02 Cointzio 1941.609 10116.398 1932 M
M54 M10 1 10/8/02 Cerro La Esperanza 1941.233 10118.890 1998 M
M55 M11 1 11/8/02 Tejabn 1913.342 10153.714 587 M
M56 M12 1 11/8/02 Carretera a Nueva Italia 1903.290 10202.458 442 M
M57 M13 1 11/8/02 Presa de Zicuirn 1856.191 10154.650 292 M
M58 M14 1 11/8/02 El ceidor, Nueva Italia 1859.651 10211.577 350 M
M59 M15 1 12/8/02 La Guadalupe Parcuaro 1907.472 10212.519 540 SF
M60 M16 1 12/8/02 Las yeguas Parcuaro 1857.308 10216.733 359 SF
M61 M17 1 12/8/02 El cirin, Nueva Italia 1853.661 10207.483 255 M
78
17 26
N62 N1 1 18/8/02 Santa Mara del Oro 2120.121 10440.147 1160 M
N63 N2 1 18/8/02 El rincn, Tepic 2132.472 10456.123 849 M
N64 N3 1 18/8/02 El pichn, Tepic 2133.479 10456.937 774 M
N65 N4 1 19/8/02 Jalisco 2119.601 10455.060 1042 M
N66 N5 1 19/8/02 El refilin, Xalisco 2119.407 10455.323 964 M
N67 N6 1 19/8/02 Compostela 2117.858 10454.044 920 M
N68 N7 1 19/8/02 La presa, Compostela 2113.714 10452.162 928 M
N69 N8 1 20/8/02 Las lumbres, Acaponeta 2220.795 10518.141 48 M y SG
N70 N9 1 23/8/02 Seboruco 2120.850 10440.749 1134 M
N71 N10 1 23/8/02 Ahuacatln 2106.331 10427.427 1120 M
10 10
S72 S1 1 21/8/02 Bacurimi, Culiacn 2451.688 107 29.478 70 SG
S73 S2 1 21/8/02 La campana, Culiacn 2458.415 107 33.517 143 SG
S74 S3 1 21/8/02 Pericos, Mocorito 2503.574 107 39.547 80 SG
S75 S4 1 21/8/02 Rancho viejo Mocorito 2506.033 107 43.165 89 SG
S76 S5 1 22/8/02 Aguapepito Mocorito 2503.861 107 39.547 68 PS
S77 S6 1 22/8/02 Comanito Mocorito 2509.006 107 39.645 91 SG
S78 S7 1 22/8/02 La poma Badiraguato 2515.749 107 40.739 157 M
S79 S8 1 22/8/02 La majada Badiraguato 2514.076 107 39.781 145 M
8 8
V80 V1 1 02/9/02 Seis de Enero, Xalapa 1934.115 96 50.207 950 M
V81 V2 1 02/9/02 Altolucero, Almolonga 1935.063 96 47.384 1080 M
79
V82 V3 1 02/9/02 Actopan 1934.623 96 48.589 260 M
V83 V4 1 02/9/02 Los Gonzlez, Actopan 1931.894 96 41.294 432 M
V84 V5 1 02/9/02 Bocana, Actopan 1924.416 96 36.731 311 M
V85 V6 1 03/9/02 El volador, Coatepec 1921.594 96 51.037 709 M
V86 V7 1 03/9/02 Palmillas 1912.293 96 46.221 702 M
V87 V8 1 03/9/02 Tierra Colorada 1913.255 96 21.916 46 M
V88 V9 1 04/9/02 Cerro gordo 1925.252 96 39.566 443 M
V89 V10 1 04/9/02 La cumbre 1923.320 96 38.807 366 M
10 10
* Maz (M), maz-sorgo (M/S), sorgo forrajero (SF), sorgo de grano (SG), pasto Sudn (PS), coco gigante (PG), coco hibrido
(PH), Mango (m), Limn (L), y Naranja Valencia (N)
** Colima (C), Jalisco (J), Michoacn (M), Nayarit (N), Sinaloa (S), y Veracruz (V).
80
3.4. Colecta de suelo
Dentro de cada hbitat, se seleccion un rea de 10 m
2
, las muestras de
suelo se obtuvieron de cinco puntos al azar. De cada punto se tomaron cinco
submuestras de 10 x 10 x 15 cm de profundidad con una pala de mano pequea y
se agruparon en una bolsa de polietileno de capacidad de 4 kg (41x71 cm) y se
mezclaron las muestras de aproximadamente 1 kg de suelo; lo anterior debido a
que ms del 90% de los entomopatgenos se encuentran en los primeros 15 cm
de la superficie del suelo). Se tomaron las muestras en intervalos de 1-3 m (Hara
et al., 1991, Choo et al., 1995).
Las muestras se transportaron al laboratorio en bolsas de polietileno o
cartones de papel encerado, con la finalidad de evitar la exposicin a calor
excesivo. Posteriormente se colocaron a temperatura de laboratorio (13-15C)
(Stock, 1995). Las muestras de suelo fueron procesadas en un perodo no mayor
a 24 horas despus de la colecta usando una modificacin de la metodologa
empleada por Akhurst y Bedding (1978) y deDoucet (1986).
Los insectos que se encontraron durante la toma de muestra de suelo
fueron separados y examinados para detectar una infeccin por
entomopatgenos. Estos insectos se colocaron en frascos de plstico de 100 cc
con suelo del rea de muestreo y transportados al laboratorio. Los insectos
muertos encontrados durante el reconocimiento se lavaron varias veces con agua
destilada estril y despus se colocaron en trampas de White (Woodring y Kaya,
1988) para colectar los juveniles infectivos que emergieran.
3.5. Aislamiento de nematodos entomopatgenos
Con la finalidad de detectar nematodos entomopatgenos en las muestras
de suelo, se colocaron cinco larvas del ltimo instar de G. mellonella sobre la
superficie del suelo de cada muestra (Bedding y Akhurst, 1975). De cada una de
las muestras se tomaron 250 g de suelo de la bolsa de plstico y se colocaron en
recipientes de plstico de 1000cc con la tapa de plstico con orificios para
asegurar la aireacin; los botes que contienan las larvas y el suelo fueron
81
invertidos por 7 das y se pusieron en incubacin (deDoucet, 1986; Miduturi et al.,
1996; Midituri et al., 1997a).
Las trampas de Galleria fueron incubadas a 25 C y a 85 % de humedad
relativa y mantenidos en la oscuridad. Despus de una semana de colocadas las
larvas, se separaron las larvas muertas o moribundas, se lavaron y desinfectaron
con hipoclorito de sodio al 0.5%, para despus examnalas al microscopio y
comprobar la presencia de nematodos (Poinar, 1979; Hominick y Briscoe, 1990a;
Glazer, 1992a).
Las larvas muertas con caractersticas y sntomas de infeccin de
nematodos entomopatgenos, de cada muestra de suelo fueron enjuagadas en
agua bidestilada y se colocaron sobre un papel filtro dentro de la trampa de White
en caja de Petri (100 x 15 mm), para despus colectar los juveniles infectivos que
emergieran de los cadveres de 9-10 das despus de exposicin inicial al suelo
(Poinar, 1979; Woodring y Kaya 1988). Los insectos sobrevivientes fueron
mantenidos en cajas de Petri de 60 x 15 mm con un papel filtro hmedo para
observar los signos de infeccin (Stock, 1995).
La trampa de White consisti en una tapa de caja Petri invertida (60 mm
dimetro) puesta dentro de otra caja Petri de mayor tamao (100 x 15 mm). Los
cadveres de larvas de G. mellonella eran colocados en un papel filtro de 55 mm
en la tapa de la caja de Petri (60mm) y la caja de Petri (100 x 15 mm) y finalmente
se colocaron 5 ml de agua destilada. Los cadveres permanecieron en la trampa
por una semana para que los juveniles infectivos (JIs) emigraran al agua. Se
colectaron durante los primeros cinco das despus de iniciada la emergencia de
los juveniles infectivos de los cadveres (Nguyen y Smart, 1995).
3.6. Postulados de Kochs
Una vez recuperados los nematodos entomopatgenos se realizaron
ensayos con los juveniles infectivos, sobre cinco larvas del ltimo instar de G.
mellonella por caja de Petri (60x15mm) con la finalidad de confirmar los
postulados de Koch y su patogenicidad. Las muestras de suelos que resultaron
82
positivas con nematodos y hongos entomopatgenos, se analizaron en el
laboratorio de sulos y agua de la FCBA para determinar su pH, Conductividad
elctrica (C.E.), Materia orgnica (M.O.), Nitrgeno (N), Fsforo (P), Potasio (K),
Calcio (Ca) y textura del suelo.
3.7. Identificacin de nematodos entomopatgenos
Con la finalidad de identificar a los nematodos recuperados de las trampas
de Galleria o provenientes de insectos muertos de campo fueron identificados
mediante un examen microscpico usando un Microscopio Compuesto equipado
con ocular micromtrico, siguiendo la metodologa propuesta por Nguyen y Smart
(1996) y Stock y Kaya (1996).
Los colores de los cadveres se registraron de 4 a los 8 das despus de
muertos los insectos; los nematodos steinernematidos son de color gris, ocre o
caf son disectados de 4 a 5 das posteriores a la infeccin; y para los
heterorhabdtidos de color rojo o naranja fueron disectados de 8 a los 10 das. Los
juveniles infectivos y machos adultos fueron utilizados para identificar los gneros
de los nematodos (Akhurst y Bedding, 1978; Woodring y Kaya, 1988; Dix et al.,
1992; Griffin et al., 1994; Stock y Kaya, 1996).
3.8. Preparacin de JIs para estudios morfomtricos
Los nematodos se identificaron al nivel de gnero por reexaminacin de
montaje temporal de 10 juveniles infectivos para cada muestra aislada (Nguyen y
Smart, 1996). Los juveniles infectivos se mataron y fijaron en formaldehdo
caliente al 4% (Woodring y Kaya, 1988).
3.9. Origen de las moscas de la fruta
Las larvas de Anastrepha ludens fueron proporcionadas por el laboratorio
de produccin masiva de moscas de la fruta, MOSCAFRUT-SAGAR, Metapa de
Domnguez , Chiapas, Mxico.
83
3.10. Reproduccin de nematodos
Las larvas de G. mellonella se expusieron a los juveniles infectivos (JIs),
aplicando 2 ml de agua en una caja de Petri de 9 cm de dimetro, provistas de dos
capas de papel filtro whatman # 1. Despus de 3 a 5 das las larvas muertas se
colocaron en una capa de papel filtro hmedo en la trampa de White (Woodring y
Kaya 1988). Los nematodos se multiplicaron segn Dutky et al., (1964), Kaya y
Stimmann (1983), Matha y Mracek (1984) en condiciones de laboratorio (251C )
y almacenados a 10C hasta su utilizacin, previa titulacin y dilucin (Poinar y
Georgis, 1990; Spaull, 1991, 1992).
Despus de aproximadamente dos semanas se extrajeron los JIs que se
encontraban en la pelcula de agua y se almacenaron por una semana. Los
nematodos se almacenaron en 30 ml de agua aproximadamente a 5C, en
matraces Erlermeyer de 250 ml tapados, a densidades mayores a los 20,000
nematodos/ml (Smits et al., 1991).
3.11. Prueba de patogenicdad de nematodos a A. ludens
3.11.1 Experimento de larvas de A. ludens en cajas de petri
La unidad experimental estuvo constituida por cajas de petri de 100 x 15
mm de dimetro/altura, donde se coloc una capa doble de papel filtro humeda y
un grupo de 20 larvas del tercer instar de moscas de la fruta a una concentracin
de 1000 JIs por caja de petri (Beavers y Calkins, 1984). En total se utilizaron 80
larvas por tratamiento, ya que se hicieron cuatro repeticiones por tratamiento. El
testigo estuvo constituido por 80 larvas y un ml de agua destilada estril,
unicamente.
Una vez realizada la inoculacin, se efectuaron las observaciones a partir
de las 48 h postratamiento y despus cada 24 horas, registrndose el porcentaje
de larvas muertas por el mtodo de Finney y Bennet (1984). Las larvas muertas se
colocaron en una caja de Petri hmeda, con la finalidad de observar su
sintomatologa y constatar ms tarde la presencia de nematodos (Woodring y
Kaya, 1988).
84
3.11.2. Experimento de larvas y pupas de A. ludens en botes de
plstico con suelo areno-limoso.
El experimento de larvas y pupas estuv constituido por botes de plstico
de 5 x 5 cm de dimetro/profundidad (19.63 cm
2
) a los que les agreg 70 g de
suelo de textura areno-limoso, previamente tamizado (malla 18), esterilizado y
ajustado a una humedad de 15% (peso/volumen) (Toledo et al., 2001). Se
agregaron 20 larvas de tercer instar o pupas de A. ludens de 48 h de edad. Se
evaluaron dos concentraciones de 0 y 50 JIs/cm
2
(Yee y Lacey, 2003). La
concentracin correspondiente se aplic en un ml de suspensin que se ditribuy
uniformemnte con una pipeta sobre la superficie del suelo de cada recipiente
(Beavers y Calkins, 1984). En total se utilizaron 80 larvas por tratamiento, ya qu
se hicieron cuatro repeticiones por tratamiento (Lindegren y Vial, 1986). El testigo
estuvo constituido por la aplicacin de las larvas o pupas en un ml de agua
destilada esteril.
Una vez realizada la inoculacin, se efectuaron observaciones a partir de 48
hrs postratamiento, registrandose el porcentaje de larvas y pupas muertas (Finney
y Bennet, 1984) para ello, se tamiz el suelo de cada unidad para localizar las
larvas y pupas muertas que se colocaron en una caja de petri humeda, con la
finalidad de observar su sintomatologa y constatar ms tarde la presencia de
nematodos (Woodring y Kaya, 1988).
3.12. Diseo experimental
Todos los experimentos fueron establecidos bajo el diseo completamente
al azar, con cuatro repeticiones (Steel y Torrie, 1993).
3.13. Anlisis de datos
Se realiz primeramente una prueba de correlacin entre la presencia de
nematodos con respecto a las caractersticas fsico-qumicas del suelo para la
presencia de nematodos entomopatgenos.
El segundo termino para los bioensayos de patogenicidad, la mortalidad de
las moscas fue ajustada utilizando la frmula de Abbott (1925). El anlisis de
85
varianza fue realizado sobre el porcentaje de mortalidad de los datos
transformados a arcoseno % para normalizar los datos (Dimbi et al., (2003). Las
medias fueron separadas usando la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad
(SAS, 1998).
El tercero, aplicable para los calculos de la concentracin y tiempos letales
50% (TL
50
) fueron determinados para cada repeticin utilizando el mtodo de
anlisis Probit para correlacionar el tiempo y la mortalidad segn Finney (1971),
Throne et al., (1995) y Dimbi et al., (2003).

















86


IV. Resultados
4.1. Presencia de nematodos entomopatgenos por localidad y estado
En la mayora de las muestras analizadas de suelo se encontraron
nematodos entomopatgenos.
En general de las 89 localidades, 27 resultaron positivas (30.3%) con
nematodos entomopatgenos de los gneros Heterorhabditis y Steinernema. La
distribucin relativa de las localidades positivas fue la siguiente: en los estados de
Colima 15.7%, Jalisco 5.6%, Michoacn 7.9%, Nayarit 1.1%; no se localiz ningn
nematodo en los estados de Sinaloa y Veracruz (Cuadro 6).
Cuadro 6. Porcentaje de localidades positivas con nematodos entomopatgenos
en seis estados de la Republica Mexicana
Estado Total de localidades Localidades positivas %
Colima 24 14 15.7
Jalisco 20 5 5.6
Michoacn 17 7 7.9
Nayarit 10 1 1.1
Sinaloa 8 0 0
Veracruz 10 0 0
Totales 89 27 30.3
4.3. Presencia de nematodos entomopatgenos del nmero de muestras
analizadas
Se encontraron 35/147 muestras con nematodos entomopatgenos
(23.8%); encontrndose los gneros Steinernema y Heterorhabditis. El porcentaje
de muestras positivas localizadas para cada uno de los estados en funcin al
87
nmero de muestras recogidas se encontr 13.6% para Colima, 4.8% en Jalisco y
Michoacn y un 0.7% para Nayarit (Cuadro 7).
Cuadro 7. Porcentaje de muestras positivas con nematodos entomopatgenos en
seis estados de la Republica Mexicana
Estado Total de muestras Muestras positivas %
Colima 49 20 13.6
Jalisco 44 7 4.8
Michoacn 26 7 4.8
Nayarit 10 1 0.7
Sinaloa 8 0 0
Veracruz 10 0 0
Totales 147 35 23.8
De las muestras positivas se aislaron nematodos del gnero Steinernema,
en el estado de Colima 40.0% (14/35) los cuales fueron aislados de las
localidades: C1, C3a, C3b, C3c, C8, C13, C14, C15, C20a, C20b, C20c, C21a,
C21c y C24; adems, se detect un 17.1% (6/35) de Heterorhabditis en las
localidades: C5, C9, C10, C21b, C22 y C23. Por otro lado, en Jalisco se ubicaron
14.3% (5/35) de Steinernema sp., en las localidades de J27b, J29a, J29c, J33 y
J34, respectivamente; con un 5.7% (2/35) de los aislados de Heterorhabditis sp.,
en las localidades J31 y J38.
Mientras en Michoacn obtuvo 14.3% (5/35) de los aislados de Steinernema
sp., en las localidades de M45, M46, M52, M54 y M60, mientras un 5.7% (2/35)
de los aislados de Heterorhabditis sp., fueron ubicados en localidades M55 y M56,
respectivamente; y por ltimo en Nayarit solo se aisl el 2.8% de Steinernema sp.,
en la localidad de N62. No se encontr ningn aislado de nematodo en los
estados de Sinaloa y Veracruz (Cuadro 8, Figura 4).
88
Cuadro 8. Caractersticas fsico-qumicas del suelo: pH, Conductividad elctrica, materia orgnica, Nitrgeno, Fsforo,
Potasio, Calcio de las localidades que resultaron positivas con la presencia de nematodos entomopatgenos

Estado Lugar de colecta Cultivo pH C.E MO % N P K Ca Nematodos

C1 Los mezcales, Comala M 5.78 0.49 2.29 0.11 4 136 625 Steinernema sp.
C3a Cerro colorado M 4.72 0.65 5.25 0.26 4 90.5 3000 Steinernema sp.
C3b Cerro colorado M 4.72 0.65 5.25 0.26 4 90.5 3000 Steinernema sp.
C3c Cerro colorado M 4.72 0.65 5.25 0.26 4 90.5 3000 Steinernema sp.
C8 Colima, Comala, Cuauhtmoc M 5.54 0.25 1.36 0.06 4 45.5 375 Steinernema sp.
C13 El remate, Comala M 5.67 0.34 1.45 0.07 4.2 60.3 380 Steinernema sp
C14 Carrizalillo, Quesera M 5.19 0.46 0.43 0.02 3.3 50.1 220 Steinernema sp.
C15 Quesera M 6.46 1.55 8.53 0.4 8.1 113 340 Steinernema sp.
C20a Estacin, Tecomn L 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
C20b Estacin, Tecomn L 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
C20c Estacin, Tecomn L 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
C21a Estacin, Tecomn PG 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
C21c Estacin, Tecomn PG 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
C24 Estacin, Tecomn N 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Steinernema sp.
J27b Los depsitos M 4.99 0.6 0.9 0.05 4 90.5 1375 Steinernema sp.
J29a Sayula M 6.95 0.5 1.03 0.05 4 68 2000 Steinernema sp.
J29c Sayula M 6.95 0.5 1.03 0.05 4 68 2000 Steinernema sp.
J33 Los pinitos, Tonila M 5.09 0.57 1.65 0.08 3.2 60.3 290 Steinernema sp.
J34 Pialla, Tuxpan M 4.98 0.58 0.73 0.03 1.3 50.1 220 Steinernema sp.
M45 El jazmn M 5.66 0.34 5.19 0.26 4 68 250 Steinernema sp.
89
M46 El botillero M 6.11 1.15 5.91 0.29 4 68 375 Steinernema sp.
M52 Peribn M 5.98 0.4 2.51 0.12 4.2 80.3 280 Steinernema sp.
M54 Cerro La Esperanza M 5.73 0.47 2.71 0.14 5.1 82.5 230 Steinernema sp.
M60 Las yeguas Parcuaro SF ND ND ND ND ND ND ND Steinernema sp.
N62 Santa Mara del Oro M 5.36 0.56 0.92 0.05 1.1 62.5 280 Steinernema sp.



C5 Crucero de Tepames M 5.86 0.38 1.93 0.09 4 90.5 1500 Heterorhabditis sp.
C9 El poblado, Coquimatln M 6.7 1.02 1.58 0.08 5.1 110 320 Heterorhabditis sp.
C10 Pueblo Jurez, Coquimatln M 7.38 0.63 2.38 0.12 6.15 135 436.5 Heterorhabditis sp.
C21b Estacin, Tecomn PG 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Heterorhabditis sp.
C22 Estacin, Tecomn PH 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Heterorhabditis sp.
C23 Estacin, Tecomn M 7.37 0.24 1.16 0.05 7 47 460 Heterorhabditis sp.
J31 Jess Maria M 4.22 0 2.03 0.1 2.5 180 900 Heterorhabditis sp.
J38 Teocuitatln M ND ND ND ND ND ND ND Heterorhabditis sp.
M55 Tejabn M 6.43 0.77 2.78 0.14 4.8 82.4 490.5 Heterorhabditis sp.
M56 Carretera a Nueva Italia M 5.63 0.81 1.19 0.06 3.1 78 320 Heterorhabditis sp.



M= maz, L= limn, PG= palma gigante, PH= palma hbrida, m= mango, N= naranja, SF= sorgo forrajero

ND: No determinado.
90

0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
C J M N S V
Estados de colecta
%

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Steinernema
Heterorhabditis

Figura 4. Porcentaje de muestras con presencia de nematodos entomopatgenos
de los estados de Colima (C), Jalisco (J), Michoacn (M), Nayarit (N),
Sinaloa (S) y Veracruz (V) en la Zona Centro Occidente de Mxico.
4.5. Tipo de hbitat
Los nematodos entomopatgenos fueron aislados en un amplio rango de
sistemas agrcolas. En trminos de frecuencia de recuperacin de los nematodos
de los cultivos analizados, se infiere que hubo una frecuencia superior de
muestras positivas en maz, ya que en este cultivo se obtuvieron la mayora de las
muestras de suelo; sin embargo, en general se logr un total de recuperacin en
23.8% (35/147) de las muestras analizadas.
Con respecto al nmero de muestras positivas con nematodos sobresale el
cultivo de maz con 65.7%; siguindole el limn mexicano y palma gigante con
8.6%, maz-sorgo con 5.7%, mientras con 2.9% palma hbrida, naranja, mango y
91
sorgo forrajero. No se aislaron nematodos de los cultivos pasto Sudn, sorgo para
grano (Figura 5).
0
10
20
30
40
50
60
70
M M/S SG SF PS L PG PH m N
Tipo de hbitat
%

d
e

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Nematodos

Figura 5. Porcentaje de muestras positivas con nematodos entomopatgenos en
funcin del tipo de hbitat de muestreo como maz (M), maz-sorgo (M/S),
sorgo para grano (SG), sorgo forrajero (SF), pasto Sudn (PS), limn (L),
palma gigante (PG), palma hbrida (PH), mango (m) y naranja valencia (N).

De los 35 aislados recuperados de nematodos veinticinco son de
Steinernema con 71.4% (25/35); el cual fue recuperado de maz 45.7% (16/35),
limn 8.5% (3/35), palma gigante, maz-sorgo con 5.7% (2/35), sorgo forrajero y
naranja Valencia con 2.9% (1/35); en tanto que Heterorhabditis, se encontr con
28.6% (10/35) de las muestras, aislados de maz 20.0% (7/35), palma gigante,
palma hbrida y mango 2.9% (1/35). No se registr ningn aislado de nematodo
Heterorhabditis en los cultivos de pasto Sudn, sorgo forrajero, sorgo para grano,
asociacin maz-sorgo, limn y naranja Valencia (Figura 6).
92
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
M M/S SG SF PS L PG PH m N
Tipo de hbitat
%

d
e

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Steinernema
Heterorhabditis

Figura 6. Porcentaje de recuperacin de especies de nematodos
entomopatgenos en funcin del tipo de hbitat: maz (M), maz-sorgo
(M/S), sorgo para grano (SG), sorgo forrajero (SF), pasto Sudn (PS), limn
(L), palma gigante (PG), palma hbrida (PH), mango (m) y naranja valencia
(N).
4.6. Caractersticas fsico-qumicas del suelo
A los suelos que dieron positivo en este estudio con nematodos en
diferentes tipos de hbitat, se realiz anlisis de suelo de las caractersticas fsico-
qumicas de pH, CE, MO, N, P, K y Ca.
4.6.1. pH del suelo
Los sitios positivos con nematodos se registraron seis tipos de pH del suelo
que varan desde muy extremadamente cido hasta moderadamente alcalino con
un pH que va de 4.0 hasta 7.5, sobresaliendo en cantidad los suelos cidos (4.5-
5.5) y moderadamente alcalinos (7.3-7.5) con un 28.6%, siguindoles en
importancia extremadamente cidos (4.6-5.5) con 25.7%; neutro (6.9-7.2) y las
93
muestras no analizadas con 5.8% y por ltimo muy extremadamente cido (4.0-
4.5) y moderadamente cido (6.6-6.8) con un 2.8% (Figura 7).
0
5
10
15
20
25
30
35
Muy. Ext.
cido
Ext, cido Acido Mod.
cido
Neutro Mod.
alcalino
N/A
Nematodos entomopatgenos
%

d
e

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
pH del suelo

Figura 7. Frecuencia relativa de la presencia de nematodos entomopatgenos en
funcin del pH del suelo de las muestras positivas como: muy ext. cido
(4.0-4.5), fuerte. cido (4.6-5.5), cido (5.6-6.5), mod. cido (6.6-6.8),
neutro (6.9-7.2), mod. alcalino (7.3-7.5) y no analizados.
Los nematodos steinernematidos y heterorhabditidos se aislaron
principalmente de suelos con promedio de pH 5.83, con un rango de pH que tuvo
un rango entre 4.22 y 7.37.
Los sitios que dieron positivo para nematodos entomopatgenos en el caso
para Steinernema sp., en su mayora se distinguieron por valores de pH 5.79 con
rangos que oscilaron de 4.72-7.37; sobresaliendo los suelos extremadamente
cidos con 25.7% de las muestras en las localidades C20a, C20b, C20c, C21a,
C21c, C24 con 7.37 de pH, siguindole un pH cido con 20% de las localidades
94
J29a y J29c con 6.95; as como un 17.1% con un pH moderadamente alcalinos y
resto de las localidades con pH neutro (6.9-7.2) con 5.7% de las muestras.
En tanto que los suelos que dieron positivo para Heterorhabditis sp., se
asocian con un pH 6.48 con un rango de 4.22-7.37; sobresale el pH
moderadamente alcalino con 11.4%; siguindole los suelos con un pH cido con
8.6% y los muy extremadamente cidos y moderadamente cidos con 2.8% de las
muestras. Estos resultados muestran que el pH fue un factor importante de la
distribucin de los nematodos, as como un indicador de la composicin del suelo
(Figura 8).
0
5
10
15
20
25
30
Muy.
Ext.
cido
Ext,
cido
Acido Mod.
cido
Neutro Mod.
alcalino
N/A
pH del suelo
%

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Steinernema
Heterorhabditis

Figura 8. Frecuencia relativa a la presencia de nematodos Steinernema y
Heterorhabditis con relacin al pH del suelo de las localidades positivas
como muy ext. cido (4.0-4.5), ext. cido (4.6-5.5), cido (5.6-6.5), mod.
cido (6.6-6.8), neutro (6.9-7.2), mod. alcalino (7.3-7.5) y no analizados.

95
4.6.2. Conductividad elctrica del suelo (dS/m)
Se basa principalmente en el hecho de que las sales contenidas en una
solucin, dejan pasar la corriente elctrica con mayor facilidad lo que permite
conocer la salinidad presente en un suelo por medio de un conductmetro que
expresa su valor en dS/m (decisimens por metro) utilizando una relacin de suelo-
agua 1:2.
En general la salinidad se mide dentro de los rangos permitidos para las
plantas: EN= escasos nutrientes, DPSS= deseable para plantas sensibles a sales,
OMP= ptimo para la mayora de los cultivos, RC= reduccin del crecimiento, ST=
sntomas de toxicidad y TMP= txico para la mayora de las plantas.
El estudio permiti agrupar a los nematodos entomopatgenos dentro de
cuatro grupos; sobresaliendo el grupo DPSS con 48.6% de las muestras con un
rango de (0.26-0.75 dS/m), siguindole el grupo EN con 31.4% de las muestras
con un rango (< 0.25 dS/m), as como el grupo OMP con 14.3% de las muestras
con un rango (0.76-1.25 dS/m) y RC con 5.7% de las muestras (1.26-1.75 dS/m);
adems de 5.7% de las muestras no analizadas. No se encontr ningn nematodo
entomopatgeno del grupo ST y TPM (Figura 9).
Los sitios positivos con Steinernema sp., en su mayora se distinguieron por
valores de 0.48 dS/m de C.E. con rangos que oscilaron de 0.24-0.65 dS/m; DPSS
que sobresale con 42.8%, siguindole EN con un 20%, RC con 5.7% y por ltimo
OMP, muestra no terminada con 2.8% de las muestras. Mientras que los suelos
que dieron positivo para Heterorhabditis sp., se asociaron con 0.43 dS/m de C.E.
con un rango de 0.24-1.02 dS/m; sobresaliendo EN y OMP con 11.4% de las
muestras, siguindole DPSS con 5.7% y ub 2.8% de la muestra no determinada;
no se encontr RC, ST y TPM, respectivamente (Cuadro 8, Figura 10).

96
0
10
20
30
40
50
60
EN DPSS OMP RC ST TMP ND
Salinidad del suelo
C
.
E
.

(
d
S
/
m
)
Nematodos

Figura 9. Presencia de nematodos entomopatgenos en funcin de la
conductividad elctrica o salinidad del suelo EN= (< 0.25), DPSS= (0.26-
0.75), OMP= (0.76-1.25), RC= (1.26-1.75), ST= (1.76-2.25), TMP= (> 2.26)
y ND= no determinado.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
EN DPSS OMP RC ST TMP ND
Salinidad del suelo
C
.
E
.

(
d
S
/
m
)
Heterorhabditis
Steinernema

Figura 10. Presencia de nematodos entomopatgenos, tipo de especie
Heterorhabditis y Steinernema en funcin de la conductividad elctrica o
salinidad del suelo EN= (< 0.25), DPSS= (0.26-0.75), OMP= (0.76-1.25),
RC= (1.26-1.75), ST= (1.76-2.25), TMP= (> 2.26) y ND= no determinado.
97
4.6.3. Materia orgnica del suelo (%)
Los nematodos entomopatgenos steinernemtidos y heterorhabdtidos se
aislaron de suelos con 1.74% de M.O. con un rango que fluctu de 0.73-5.25%.
Mientras que los sitios que dieron positivo para Steinernema sp. en su mayora se
distinguieron por tener valores de 1.74% de M.O. con rangos que oscilaron de
0.73-5.25%, sobresaliendo la localidad C15 con 8.53%, siguindole M46 con
5.91%, C3a, C3b, C3c con 5.25% de M.O.; M45 con 5.19%, M54 con 2.71%, M52
con 2.51%, C1 con 2.29% y el resto de las localidades por debajo de 1.65% de
M.O. Por otro lado, los suelos que dieron positivo para Heterorhabditis sp., se
asociaron con 1.66% de M.O. con un rango que vari de 1.16-2.78%,
sobresaliendo la localidad M55 con 2.78% siguindole C10 con 2.38%, J31 con
2.03%, C5 con 1.93%, C9 con 1.58% y el resto de las localidades por abajo del
1.5% de M.O. (Cuadro 8).
4.6.4. Nitrgeno del suelo (%)
Los nematodos entomopatgenos steinernemtidos y heterorhabdtidos se
caracterizan principalmente por tener en promedio 0.08% de nitrgeno, con un
rango de 0.03-0.40%; en Steinernema sobresaliendo la localidad C15 con 0.40%,
siguindole, M46 con 0.29%, C3a, C3b, C3b con 0.26% de nitrgeno, seguido por
M54 con 0.14%, M52 con 0.12%, C1 con 0.11% de nitrgeno y el resto de las
localidades por abajo del 0.10% de nitrgeno. En tanto que, los suelos que dieron
positivo para Heterorhabditis sp., registraron 0.08% de nitrgeno con un rango de
0.05-0.14%, sobresaliendo la localidad M55 con 0.14% de nitrgeno, seguido por
C10 con 0.12%, J31 con, 0.10% de nitrgeno y el resto de las localidades por
abajo del 0.10% de nitrgeno (Cuadro 8).
4.6.5. Fsforo del suelo (mg/kg suelo)
La presencia de nematodos en suelos muy bajos en fsforo con 57.1%,
seguido por suelos bajos en fsforo con 37.1% de las muestras, respectivamente y
un 5.7% de muestras no analizadas (Figura 11). Los nematodos entomopatgenos
steinernematidos y heterorhabditidos se caracterizan principalmente por tener en
promedio 4.59 mg de fsforo con un rango que flucta de 1.1-7.0 mg.
98
Los sitios que dieron positivo para Steinernema sp., en su mayora se
distinguieron por tener valores en promedio 3.88 mg de fsforo con rangos que
oscilaron de 1.1-7.0 mg; sobresaliendo la localidad C15 con 8.1 mg, C20a, C20b,
C20c, C21a, C21c, C24 con 7 mg de fsforo, siguindole M54 con 5.1 mg, C13,
M52 con 4.2 mg y resto de las localidades por debajo de 4.1 mg.
Fsforo (mg/kg suelo)
0
10
20
30
40
50
60
Nematodos
%

d
e

m
u
e
s
t
r
a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Muy bajo
Bajo
N/A

Figura 11. Porcentaje de la presencia de nematodos en funcin del fsforo
presente en las muestras positivas.
En tanto que Heterorhabditis sp., registr en promedio 5.16 mg de fsforo
con rangos que oscilaron entre 2.0-7.0 mg; sobresaliendo las localidades C21b,
C22, C23 con 7 mg, siguindole C10 con 6.15 mg, C9 con 5.1 mg de fsforo y el
resto de las localidades por debajo de los 5 mg (Cuadro 8).
4.6.6. Potasio del suelo (cmol/kg suelo)
La presencia de nematodos entomopatgenos en funcin del potasio
presente en el suelo (cmol(+)/kg suelo) de las muestras positivas se localizan en
99
suelos muy bajos hasta moderadamente bajos; sobresaliendo los suelos muy
bajos y bajos con un 48.6% de las muestras, modernamente bajo con 8.6% y con
un 5.7% de las muestras no analizadas (Figura 12).
Potasio (cmol(+)/kg suelo)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Nematodos
%

d
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a
s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Muy bajo
Bajo
Mod. bajo
N/A

Figura 12. Presencia de nematodos en funcin del potasio presente en las
muestras positivas con estos agentes.

Los nematodos entomopatgenos steinernematidos y heterorhabditidos se
caracterizan por tener en promedio 69.07cmol de potasio, con un rango que
flucta de 45.5-180 cmol. Mientras que los sitios que dieron positivo para
Steinernema sp., en su mayora se distinguieron por valores promedios de
58.86cmol de potasio, con rangos que oscilaron de 47-135 cmol; sobresaliendo la
localidad C1 con 136 cmol, siguindole C15 con 113 cmol, C3a, C3b, C3c, J27b
con 90.5 cmol, M54 con 82.5 cmol, M52 con 80.3 cmol, J29a, J29c, M45, M46 con
100
68 cmol, N62 con 62.5 cmol, C13, J33 con 60.3 cmol y el resto de las localidades
estn por debajo de los 60 cmol de potasio.
Mientras que Heterorhabditis sp., registr en promedio 86.4 cmol de
potasio, con rangos que oscilaron de 47-180 cmol; sobresaliendo J31 con 180
cmol de potasio, siguindole C10 con 135 cmol, C9 con 110 cmol, C5 con 90.5
cmol, M55 con 82.4 cmol, M56 con 78 cmol de potasio y el resto de las localidades
estn por debajo de los 50 cmol de potasio, respectivamente (Cuadro 8).
4.6.7. Calcio del suelo (cmol/kg suelo)
Los nematodos entomopatgenos se aislaron en suelos bajos de calcio con
37.1%, siguindole muy bajo y medio con 25.7%, moderadamente bajo en calcio
con 8.6% y 5.7% de las muestras no analizadas (Figura 13).
Calcio (cmol(+)/kg suelo)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
Nematodos
%

d
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p
o
s
i
t
i
v
a
s
Muy bajo Bajo
Mod. bajo Medio
N/A

Figura 13. Porcentaje de la presencia de nematodos entomopatgenos dentro de
las muestras positivas en funcin de calcio del suelo.
Los nematodos entomopatgenos steinernematidos y heterorhabditidos se
aislaron de suelos que se caracterizan principalmente por tener 681.74 cmol de
calcio, con un rango que fluctu de 220-3000 cmol. Los sitios positivos para
101
Steinernema sp. en su mayora se distinguieron por valores de 741.2 cmol de
calcio, con rangos de 220-3000 cmol; sobresaliendo las localidades C3a, C3b, C3c
con 3000 cmol de calcio, siguindole J29a, J29c con 2000 cmol, C1 con 625 cmol,
C20a, C20b, C20c, C21a, C21c, C24 con 460 cmol y el resto de las localidades
por debajo de los 375 cmol de calcio, respectivamente.; en tanto que
Heterorhabditis sp., tiene 580.7cmol de calcio con rangos que oscilaron de 320-
1500 cmol de calcio; sobresaliendo la localidad C5 con 1500 cmol, siguindole J31
con 900 cmol, M55 con 490.5 cmol, C21b, C22 y C23 con 460 cmol y el resto de
las localidades no sobrepasan los 437 cmol de calcio, respectivamente (Cuadro 8).
4.6.8. Anlisis de correlacin de las caractersticas fsico-qumicas
El anlisis regresin registr que la probabilidad de encontrar nematodos
entomopatgenos con respecto a las caractersticas fsico-qumicas de suelo
estn correlacionadas positivamente con el pH (R= 0.197, P= 0.270), fsforo (R=
0.125, P= 0.489) y potasio (R= 0.309, P= 0.079); as como una correlacin
negativa con la conductividad elctrica (R= -0.037, P= 0.839), materia orgnica
(R= -0.182, P= 0.310), nitrgeno (R= -0.179, P= 0.318) y calcio (R= -0.150, P=
0.404) (Figura 14; Cuadro 9).
4.7. Textura del suelo para nematodos entomopatgenos
La frecuencia de recuperacin de nematodos registr siete tipos de textura
del suelo de las muestras positivas, sobresaliendo la textura areno-limoso con
34.3% (12/35), franco-arenoso, franco-limoso con 17.1% (6/35), franco y arcilloso
con 11.4% (4/35), franco-arcillo-arenoso y franco-arcilloso con 2.8% (1/35),
respectivamente y con un 5.7% las muestras no analizadas. No se encontr
ningn agente entomopatgeno en los tipos de textura arenoso, franco-arcillo-
limoso, limoso, arcillo-arenoso y arcillo-limoso (Figura 15).
102
-0.3
-0.2
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
pH C.E. M.O. N P K Ca
Caractersticas fsico-qumicas
V
a
l
o
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s

d
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c
o
r
r
e
l
a
c
i

n

Figura 14. Correlacin de las caractersticas fsico-qumicas con respecto a la
presencia de nematodos entomopatgenos

Cuadro 9. Valores de correlacin de las caractersticas fsico-qumicas del suelo
con relacin a la presencia de nematodos entomopatgenos

CA K P N MO CE pH Nem
CA 1.0000 0.2238 -0.1900 0.3464 0.3308 0.0791 -0.3501 -0.1503
0 0.2104 0.2894 0.0483 0.0600 0.6616 0.0458 0.4036
K 1.0000 -0.2447 0.3871 0.3695 0.2877 -0.4080 0.3094
0 0.1699 0.0260 0.0343 0.1044 0.0184 0.0797
P 1.0000 0.0317 0.0668 -0.0934 0.8046 0.1249
0 0.8608 0.7116 0.6051 0.0001 0.4885
N 1.0000 0.9983 0.6414 -0.3175 -0.1790
0 0.0001 0.0001 0.0718 0.3188
MO 1.0000 0.6392 -0.2892 -0.1821
0 0.0001 0.1026 0.3102
CE 1.0000 -0.1766 -0.0366
0 0.3255 0.8394
pH 1.0000 0.1977
0 0.2701
Nem 1.0000
0

103
0
5
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15
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35
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A-L F-A F F-L F-Ar-A F-Ar Ar NA
Textura de suelo
%

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s

p
o
s
i
t
i
v
a
s
Nematodos entomopatgenos

Figura 15. Presencia de nematodos entomopatgenos tipo de textura del suelo
(areno-limoso A-L, franco arenoso F-A, franco F, franco-limoso F-L, franco-
arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-arcilloso F-Ar, arcilloso Ar y muestras no
analizadas NA).
Con respecto a la especie de nematodo, se encontr que Steinernema est
presente en suelos con textura areno-limoso con 25.7%, franco-arenoso con
14.3%, franco, franco-limoso y arcilloso con 8.6%, franco-arcillo-arenoso y no
analizadas con 2.8%. Mientras que Heterorhabditis est en suelos areno-limoso y
franco-limoso con 8.6%, franco-arenoso, franco-arcilloso, arcilloso una muestra no
analizada con 2.8% de las muestras, respectivamente (Cuadro 10, Figura 16).
104
0
5
10
15
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30
A-L F-A F F-L F-Ar-A F-Ar Ar NA
Texturas del suelo
N
o
.

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s
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s
Steinernema
Heterorhabditis

Figura 16. Presencia de especies de nematodos entomopatgenos en funcin de
la textura del suelo (areno-limoso A-L, franco arenoso F-A, franco F, franco-
limoso F-L, limoso L, franco-arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-arcilloso F-Ar,
arcilloso Ar y muestras no analizadas.
Con relacin al tipo de textura en cada uno de los estados analizados
Colima registr 20 muestras de suelo con 57.1%; sobresale la textura areno-
limoso con 31.4%(11/35), siguindole franco-arenoso y arcilloso con 8.6% (3/35) y
el resto de las texturas fueron franco-limoso, franco-arcillo-arenoso y franco-
arcilloso con 2.8% (1/35), respectivamente; Jalisco se encontraron nueve
muestras de suelo con 25.7%, sobresaliendo la textura franco-limoso con 8.6%
(3/35), le sigue la textura franca con 5.7% y una muestra areno-limoso, franco-
arenoso, arcilloso y una muestra no analizada con 2.8%; Michoacn fueron cinco
muestras de suelo con 14.3%, sobresaliendo la textura franco-limoso 5.7% (3/35)
y con una muestra franco-arenoso, franco y la no analizada con 2.8%. Nayarit solo
se encontr un suelo de textura franco-arenoso con el 2.8% (Figura 17).
105
0
5
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35
Colima Jalisco Michoacn Nayarit Sinaloa Veracruz
Estados de muestreo
%

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s
A-L F-A F
F-L F-Ar-A F-Ar
Ar NA

Figura 17. Presencia de nematodos entomopatgenos por estado de muestreo en
funcin de la textura del suelo (areno-limoso A-L, franco arenoso F-A,
franco F, franco-limoso F-L, limoso L, franco-arcillo-arenoso F-Ar-A, franco-
arcilloso F-Ar, arcilloso Ar y muestras no analizadas NA).
4.8. Altitud sobre el nivel del mar (msnm)
La presencia de nematodos en funcin de la altitud se pudo observar que
existe una mayor cantidad muestras con nematodos a una menor altitud de 500
msnm con 37.1%, le sigue en importancia de 1001-1500 msnm con 28.6%,
siguindole 1501-2000 msnm con un 14.3%, entre 501-1000 msnm con 11.4% y
solamente una muestra por arriba de los 2000 msnm. As como dos muestras no
analizadas (Figura 18).
106
0
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< 500 501-1000 1001-1500 1501-2000 > 2001 ND
Altitud (msnm)
%

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Nematodos
entomopatgenos

Figura 18. Porcentaje de la presencia de nematodos entomopatgenos de suelo
en funcin de la altitud sobre el nivel del mar de las localidades de Colima
(C), Jalisco (J), Michoacn (M) y Nayarit (N).
La presencia de nematodos se localiz desde 33 hasta los 2220 msnm;
con relacin a Steinernema se registr la mayor incidencia a 1001-1500 msnm
con 22.8%, le sigue en importancia a menos de 500 msnm con 20%, 1501-2000
msnm con 14.35 y en menor proporcin a 501-1000 msnm con 8.6%; mientras
que Heterorhabditis tiene la mayor cantidad a menos de 500 msnm con 17.1%,
siguendole de 501-1000 msnm, 1001-1500 msnm y a ms de 2000 msnm con
2.8% de las muestras, respectivamente (Cuadro 10, Figura 19).

107
0
5
10
15
20
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< 500 501-1000 1001-1500 1501-2000 > 2001 ND
Altitud (msnm)
%

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s
Steinernema
Heterorhabditi
s

Figura 19. Porcentaje de presencia de Steinernema y Heterorhabditis en funcin
de la altitud sobre el nivel del mar de las localidades de Colima (C), Jalisco
(J), Michoacn (M) y Nayarit (N).
4.9. Virulencia de cepas y aislados de nematodos entomopatgenos
Con la finalidad de determinar la(s) especie(s) de nematodos mas
virulenta(s) y la susceptibilidad de larvas de tercer instar de A. ludens.
El anlisis de varianza de los datos de porcentaje de mortalidad acumulada,
mostr diferencias altamente significativas para las fuentes principales (F= 40.36;
gl= 119, 479; P<0.0001), al descomponer los factores de interaccin mostr
diferencias altamente significativas para los factores: tiempo de exposicin (F=
399.59; gl= 119, 479; P<0.0001), nematodos (F= 125.99; gl= 23, 479; P<0.0001) y
la interaccin tiempo-nematodo (F= 3.34; gl= 119, 479; P<0.0001).
108
Cuadro 10. Presencia de nematodos entomopatgenos en funcin de la altitud (msnm) y textura del suelo (arena: limo:
arcilla)
Localidad Lugar de colecta

Cultivo Altitud
%
arcilla
%
limo
%
arena Textura del suelo Nematodos

C1
Los mezcales, Comala M
625 23.24 26.16 50.6
Franco-Arcillo-
Arenoso Steinernema sp.
C3a Cerro colorado M 1080 53.24 24.16 22.6 Arcilloso Steinernema sp.
C3b Cerro colorado M 1080 53.24 24.16 22.6 Arcilloso Steinernema sp.
C3c Cerro colorado M 1080 53.24 24.16 22.6 Arcilloso Steinernema sp.
C8 Colima, Comala, Cuauhtmoc M 970 10.52 21.24 68.2 Franco-Arenoso Steinernema sp.
C13 El remate, Comala M 817 12.84 7.28 79.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C14 Carrizalillo, Quesera M 1550 6.84 5.28 87.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C15 Quesera M 1304 6.84 23.28 69.9 Franco-Arenoso Steinernema sp.
C21c Estacin, Tecomn PG 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C20b Estacin, Tecomn L 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C20c Estacin, Tecomn L 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C21a Estacin, Tecomn PG 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C21c Estacin, Tecomn PG 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
C24 Estacin, Tecomn N 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Steinernema sp.
J27b Los depsitos M 1520 5.24 20.16 74.6 Areno-Limoso Steinernema sp.
J29a Sayula M 1304 12.52 34.52 53 Franco Steinernema sp.
J29c Sayula M 1304 12.52 34.52 53 Franco Steinernema sp.
J33 Los pinitos, Tonila M 1590 16.84 29.28 53.9 Franco-Arenoso Steinernema sp.
109
J34 Pialla, Tuxpan M 1630 4.84 53.28 41.9 Franco-Limoso Steinernema sp.
M45 El jazmn M 0 5.24 59.44 35.3 Franco-Limoso Steinernema sp.
M46 El batillero M 0 3.24 34.16 62.6 Franco-Arenoso Steinernema sp.
M52 Peribn M 1338 14.84 41.28 43.9 Franco Steinernema sp.
M54 Cerro La Esperanza M 1709 12.84 53.28 33.9 Franco-Limoso Steinernema sp.
M60 Las yeguas Parcuaro SF 1496 ND ND ND ND Steinernema sp.
N62 Santa Mara del Oro M 255 18.84 23.28 57.9 Franco-Arenoso Steinernema sp.

C5 Crucero de Tepames M 400 33.24 34.16 32.6 Franco-Arcilloso Heterorhabditis sp.
C9 El poblado, Coquimatln M 422 4.84 59.28 35.9 Franco-Limoso Heterorhabditis sp.
C10 Pueblo Jurez, Coquimatln M 279 10.84 15.28 73.9 Franco-Arenoso Heterorhabditis sp.
C21b Estacin, Tecomn PG 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Heterorhabditis sp.
C22 Estacin, Tecomn PH 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Heterorhabditis sp.
C23 Estacin, Tecomn m 33 4.84 19.28 75.9 Areno-Limoso Heterorhabditis sp.
J31 Jess Maria M 2220 40.5 29.6 29.8 Arcilloso Heterorhabditis sp.
J38 Teocuitatln M 587 ND ND ND ND Heterorhabditis sp.
M55 Tejabn M 1369 6.84 79.28 13.9 Franco-Limoso Heterorhabditis sp.
M56 Carretera a Nueva Italia M 1425 2.84 71.28 25.9 Franco-Limoso Heterorhabditis sp.
110
El anlisis varianza mostr diferencias altamente significativas entre los
nematodos evaluados con respecto al tiempo; se presenta la evolucin de la tasa
de mortalidad larval con cada uno de los aislados (Cuadro 11).
Se evaluaron 23 nematodos entomopatgenos de los cuales 17 son nativos
y seis exticos; estos pertenecen al gnero Steinernema con 12 aislados y cepas
y Heterorhabditis con 11 aislados y cepas. Los resultados experimentales,
permitieron determinar 13 aislados de nematodos nativos (steinernematidos y
heterorhabditidos) evaluados presentaron una mayor actividad entomopatgena
que los nematodos exticos sobre larvas del tercer instar de A. ludens.
Los aislados de nematodos entomopatgenos que mostraron una mayor
virulencia sobre larvas de tercer instar registraron doce niveles de significativas.
Los porcentajes de mortalidad acumulada fluctuaron de 51.1 hasta 90.6% de
mortalidad, respectivamente; sobresaliendo Heterorhabditis HC10a, Steinernema
SM46, SM45, SC1b, SC3b, Heterorhabditis HC22 y HC10c con una mortalidad de
80.5 hasta 90.6%. En tanto, que las especies menos virulentas fueron H. megidis y
S. riobrave con 55.7% y 51.1% de mortalidad, respectivamente.
La evolucin del porcentaje de mortalidad registradas a las 24 horas, el
anlisis mostr diferencias altamente significativas el cual registr seis niveles de
significancia (F=23.88; gl= 23, 72; P<0.0001) con una mortalidad 22.2 hasta
68.8%; los nematodos mas virulentos fueron Steinernema SM45 con 68.8%,
siguiendo en importancia Steinernema SC3b con 66% de mortalidad el cual no
tiene diferencias con Heterorhabditis HC10a, HC10c, HC10b, HC21c, HC5, HC23,
HC21 o Steinernema SM46, SC3a, SC20a, S. carpocapsae LDV, All, S. feltiae
Fla. Con respecto a los dems nematodos, existen diferencias con los aislados de
Heterorhabditis HC21c, HJ31, H. megidis y S. riobrave (Cuadro 12).
111
Cuadro 11. Porcentaje de mortalidad de larvas A. ludens a diferentes especies y
cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y prueba de separacin
de medias por Tukey al 0.05.
Nematodo Mortalidad

Heterorhabditis HC10a 90.6 A
Steinernema SM46 89.1 A
Steinernema SM45 88.4 AB
Steinernema SC1b 88.0 AB
Steinernema SC3b 88.0 AB
Heterorhabditis HC22 86.0 AB
Heterorhabditis HC10c 80.5 ABC
Heterorhabditis HC21c 79.8 BCD
Heterorhabditis HC10b 79.3 BCDE
Heterorhabditis HC5 78.6 CDEF
Heterorhabditis HC23 78.2 CDEF
Steinernema SC20a 78.1 CDEFG
Heterorhabditis HC21a 75.9 CDEFG
S. carpocapsae All 74.3 DEFG
S. carpocapsae LDV 73.9 DEFG
Steinernema SC3a 73.9 DEFG
Heterorhabditis HC21b 71.6 EFGH
Steinernema SC1a 71.2 FGH
S. feltiae Fla 69.8 GHI
S. carpocapsae Davis 63.8 HIJ
Heteorhabditis HJ31 61.3 IJ
H. megidis 55.7 JK
S. riobrave 51.1 K
Testigo 0 L
* Valores dentro de la columna, seguida con la misma letra no son diferentes
estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad
MSD12.592
112
Cuadro 12. Evolucin del porcentaje de mortalidad de larvas de A. ludens inoculadas con veintitrs cepas o aislados
de nematodos entomopatgenos nativos a la concentracin de 1000 JIs por mililitro en cajas de petri
Especies/Cepas 24 48 72 96 120

Steinernema SC1b 64.0 ABC 88.5 ABC 91.3 ABC 96.4 AB 100 A
Steinernema SC3b 66.0 AB 84.9 ABCD 89.2 ABCD 100 A 100 A
Heterorhabditis HC10c 61.6 ABC 65.0 DEFG 82.9 ABCD 92.8 ABC 100 A
Heterorhabditis HC21a 53.2 ABC 58.1 EFGH 75.3 ABCDEF 92.8 ABC 100 A
Heterorhabditis HC23 55.6 ABC 60.6 EFGH 78.6 ABCDE 96.4 AB 100 A
Heterorhabditis HC10a 64.0 ABC 92.8 A 96.4 A 100 A 100 A
Steinernema SM46 61.4 ABC 91.3 AB 92.8 AB 100 A 100 A
Heterorhabditis HC5 57.4 ABC 73.0 ABCDE 76.5 ABCDEF 86.2 ABCDE 100 A
Heterorhabditis HC10b 61.5 ABC 71.8 BCDE 74.8 BCEDF 88.5 ABCD 100 A
Heterorhabditis HC21c 59.7 ABC 72.6 ABCDE 77.1 ABCDEF 89.7 ABCD 100 A
Heterorhabditis HC22 50.7 BCD 90.1 AB 92.8 AB 96.4 AB 100 A
Steinernema SM45 68.8 A 91.3 AB 92.8 AB 92.8 ABC 96.4 AB
S. carpocapsae LDV 60.6 ABC 66.7 EDF 68.7 DEFG 77.2 BCDEF 96.4 AB
Steinernema SC20a 57.3 ABC 60.6 EFGH 81.2 ABCD 94.9 AB 96.4 AB
S. carpocapsae All 54.1 ABC 69.9 CDEF 74.4 BCDEF 77.6 BCDF 96.4 AB
Heterorhabditis HJ31 35.0 DE 67.7 FGH 56.5 FGH 71.0 CDEF 94.9 AB
Steinernema SC3a 59.7 ABC 72.6 DEF 69.5 DEFG 77.6 BCDEF 94.9 AB
Steinernema SC1a 51.5 ABCD 57.3 EFGH 71.9 CDEFG 82.4 ABCDEF 92.8 AB
Heterorhabditis HC21b 47.5 CD 66.9 DEF 73.1 BCDEF 77.6 BCDEF 92.8 AB
S. carpocapsae Davis 49.2 BCD 54.0 EFGH 58.0 EFGH 70.6 DEF 87.3 AB
S. feltiae Fla 57.2 ABC 58.9 EFGH 70.6 DEFG 75.6 BCDEF 86.5 AB
H. megidis 29.8 E 46.0 GH 51.6 GH 64.9 EF 86.1 AB
S. riobrave 22.2 E 44.2 H 46.7 H 61.6 F 81.0 B
Testigo 0 F 0 I 0 I 0 G 0 C
* Valores dentro de la columna, seguidas con la misma letra no son diferentes estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al
0.05 de probabilidad.
113
En tanto que, a las 48 horas de la inoculacin registr diferencias altamente
significativas con nueve niveles (F=27.98; gl= 23, 72; P<0.0001), que tienen una
mortalidad de 44.2 hasta 92.8%; sobresaliendo los aislados de Heterorhabditis
HC10a, HC22, HC5, HC21c y Steinernema SM46, SM45, SC1b, SC3a, SC20a y
los menos virulentos H. megidis y S. riobrave con 45 y 44.2% de mortalidad.
Se observ a las 72 horas diferencias significativas (F=27.96; gl= 23, 72;
P<0.0001) con nueve niveles de significancia con una mortalidad de 46.7 hasta
96.4%; siendo los nematodos mas sobresalientes los nematodos de
Heterorhabditis HC10a, HC22, HC10c, HC23, HC21c, HC5 y Steinernema SM46,
SM45, SC1b, SC3a y los nematodos menos virulentos H. megidis y S. riobrave
con 51.6% y 46.7% de mortalidad, respectivamente.
A las 96 horas de la inoculacin existen diferencias significativas (F=25.39;
gl= 23, 72; P<0.0001) con siete niveles de significancia los cuales registran una
mortalidad 61.6 al 100%. Adems, 14 nematodos fueron los mas sobresalientes
de Heterorhabditis HC10a, HC23, HC22, HC21a, HC10c, HC21c, HC10b, HC5 y
Steinernema SM46, SC3a, SC1b, SC20a, SM45 y los nematodos menos
virulentos H. megidis y S. riobrave con 64.9 y 61.6% de mortalidad,
respectivamente.
La mortalidad acumulada a las 120 horas, despus de la inoculacin
existen diferencias significativas (F=34.70; gl= 23, 72; P<0.0001) con tres niveles
de significancia y una mortalidad 81 hasta 100%. Se observ que once nematodos
alcanzaron el 100% de mortalidad siendo ocho de Heterorhabditis HC10c, HC21a,
HC23, HC10a, HC5, HC10b, HC21c, HC22; as como tres de Steinernema SC1b
SC3a y SM46; adems los nematodo que presentaron la menor mortalidad fueron
H. megidis y S. riobrave con 86.1 y 81.0%.
4.9.1. Tiempo letal 50 de nematodos evaluados sobre larvas de A. ludens
Los nematodos que presentaron porcentajes de mortalidad superior al 50%
se les realiz anlisis de regresin, entre el logaritmo del tiempo de infeccin y el
114
probit de la mortalidad, para a partir de la ecuacin formada, calcular sus tiempos
letales 50%. Como se observa en el (Cuadro 13).
Los valores obtenidos para cada uno de los nematodos entomopatgenos
evaluados donde se puede observar el TL
50
de los 23 aislados, se encuentran
comprendidos entre 13.5 y 62.3 horas. Los valores con el menor TL
50

corresponden a las cepas SM45 y SC3b que presentaron los tiempos letales ms
precoces, correspondiendo estos a 13.5 y 14.8 horas, respectivamente.
Los mayores valores registrados de los nematodos evaluados fueron H.
megidis y S. riobrave con 54.4 y 62.3 horas, respectivamente. Se observa que las
cepas que presentan mayor pendiente fueron de los gneros Heterorhabditis
HC10b y Steinernema SC1b, S. carpocapsae LDV, SC3b y SM45 con valores de
16.0, 15.6, 15.5, 14.8 y 13.5 horas, respectivamente. Lo cual indica que presentan
una respuesta ms homognea, a pequeos incrementos de tiempo hay grandes
incrementos en la mortalidad de los insectos.
Adems, se observ que 16 de los 23 nematodos evaluados registraron un
TL
50
menor a las 24 horas; por otro lado, se encontr a dos de los nematodos
evaluados con un TL
50
mayor a las 48 horas siendo H. megidis y S. riobrave con
valores de 54.4 y 62.3 horas.
4.10. Virulencia de nematodos a larvas de A. ludens en botes con
suelo estril.
Los resultados experimentales, permitieron determinar que los seis
nematodos evaluados presentan actividad entomopatgena sobre larvas del tercer
estadio de A. ludens en un suelo estril.
El anlisis de varianza de los datos de porcentaje de mortalidad acumulada,
mostr diferencias altamente significativas para las fuentes principales (F= 79.96;
gl= 34, 139; P<0.0001), al descomponer los factores de interaccin mostr
diferencias altamente significativas para los factores: tiempo de exposicin (F=
429.07; gl= 24, 139; P<0.0001), nematodos (F= 115.07; gl= 6, 139; P<0.0001) y la
interaccin tiempo-nematodo (F= 12.99; gl= 24, 139; P<0.0001).
115
Cuadro 13. Estimacin de los tiempos letales, limite de confianza de veintitrs aislados y cepas de nematodos
entomopatgenos (Steinernematidae: Heterorhabditidae) evaluados sobre larvas de mosca de la fruta A.
ludens
Nematodos
(especies / Cepas)
TL
50

Horas
Intervalo
Confianza
Ecuacin de
Regresin
X
2

prob.
X
2

exp.

Steinernema SM45 13.49 A 09.01-20.19 Y = 2.68 X 3.38 7.81 0.39
Steinernema SC3b 14.77 A 10.20-21.39 Y = 2.82 X 3.92 5.99 0.83
S. carpocapsae LDV 15.55 A 06.70-23.11 Y = 2.68 X 0.22 7.81 14.79
Steinernema SC1b 15.59 A 11.23-21.65 Y = 2.91 X 4.28 7.81 1.02
Heterorhabditis HC10b 15.99 A 10.51-24.32 Y = 1.95 X 1.25 7.81 5.13
Heterorhabditis HC21c 17.55 A 12.38-24.88 Y = 2.21 X 2.16 7.81 3.34
Steinernema SM46 18.08 A 14.25-22.94 Y = 3.71 X 7.08 5.99 1.27
Heterorhabditis HC10a 18.33 A 14.91-22.54 Y = 2.68 X 10.34 3.84 0.47
Heterorhabditis HC10c 19.27 A 13.20-24.56 Y = 2.48 X 3.13 7.81 13.15
Heterorhabditis HC5 19.55 A 14.31-26.70 Y = 2.26 X 2.45 7.81 3.96
Steinernema 3 19.69 A 12.83-25.74 Y = 2.00 X 1.59 9.49 15.29
S. feltiae Fla 21.77 A 15.02-31.55 Y = 1.62 X 0.42 9.49 7.65
Heterorhabditis HC22 23.19 B 19.89-27.06 Y = 4.15 X 8.98 7.81 2.29
S. carpocapsae All 23.59 B 17.64-28.82 Y = 2.42 X 3.18 9.49 10.72
Steinernema SC20a 23.60 B 18.05-28.45 Y = 2.68 X 4.04 9.49 17.41
Heterorhabditis HC23 23.86 B 18.68-28.29 Y = 3.01 X 5.16 7.81 11.62
Heterorhabditis HC21b 26.10 B 20.28-31.22 Y = 2.57 X 3.77 9.49 9.58
Heterorhabditis HC21a 27.92 B 22.53-32.60 Y = 2.87 X 4.90 7.81 16.59
Steinernema SC1a 28.01 B 21.79-33.49 Y = 2.40 X 3.27 9.49 10.17
S. carpocapsae Davis 32.69 B 23.51-40.29 Y = 1.75 X 1.15 7.81 11.02
Heterorhabditis HJ31 46.68 C 41.04-52.04 Y = 3.12 X 6.44 9.49 24.23
H. megidis 54.42 C 48.58-60.10 Y = 3.11 X 6.60 9.49 16.51
S. riobrave 62.30 D 56.60-67.96 Y = 3.56 X 8.52 9.49 19.08

116
Los nematodos entomopatgenos mostraron una mayor virulencia para el
estado de larva sobre un suelo estril registrndose tres niveles de significancia.
Los porcentajes de mortalidad acumulada fluctuaron de 35.4 hasta 51.4%,
respectivamente; sobresaliendo Heterorhabditis HC21c, HM56, HC5 y S.
carpocapsae Mex. En tanto, las especies menos virulentas fueron S. carpocapsae
All y Steinernema SC8 con 37.0 y 35.4% de mortalidad, respectivamente (Cuadro
14).
Cuadro 14. Porcentaje de mortalidad de larvas A. ludens a diferentes especies y
cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y prueba de
separacin de medias por Tukey al 5%.
Nematodos Mortalidad
Heterorhabditis HC21c 51.4 A
Heterorhabditis HM56 49.0 A
Heterorhabditis HC5 49.0 A
S. carpocapsae Mex 44.4 A
S. carpocapsae All 37.0 B
Steinernema SC8 35.4 B
Testigo 00.0 C
* Valores dentro de la columna, seguida con la misma letra no son diferentes
estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad
MSD 11.511
Con respecto a la evolucin de la tasa de mortalidad para cada uno de los
nematodos evaluados con respecto al tiempo, se observ que los nematodos de
Heterorhabditis cepas HC21c y HC5 causaron la mayor mortalidad de larvas de
Anastrepha de 15 y 13.5% respectivamente, a partir de las 48 y 96 horas de la
inoculacin; mientras que S. carpocapsae All y la cepa SC8 alcanzaron 3.6 y 0%
de mortalidad despus de la inoculacin. Adems, se observ que de los seis
nematodos evaluados registraban menos del 50% de mortalidad de las larvas a
las 96 horas (Cuadro 15).
117
En tanto que, a las 144 horas de la inoculacin existen diferencias
significativas con tres niveles de significancia de los nematodos tenan arriba del
50% de mortalidad, sobresaliendo Heterorhabditis HM56, HC21c, HC5 y S.
carpocapsae Mex; mientras que S. carpocapsae All un 36.2%.
Adems, a las 192 horas los nematodos mostraron diferencias significativas
siendo los mas virulentos Heterorhabditis HC5 y HC21c quienes presentan 74.8 y
73.4% de mortalidad, respectivamente; mientras que el nematodo de Steinernema
cepa SC8 con 56.5% de mortalidad.
Por ultimo, la mortalidad acumulada a las 240 horas, se observ diferencias
significativas sobresaliendo Heterorhabditis HC21c con una mortalidad de 96.4%.
Tres nematodos de Heterorhabditis HC21c, HM56 y HC5 registraron una
mortalidad por arriba del 86% y el nematodo con la menor mortalidad fue
Steinernema cepa SC8 con 70.6%.
Cuadro 15 Evolucin del porcentaje de mortalidad de larvas de Anastrepha
ludens inoculadas con aislados de nematodos entomopatgenos en
suelo estril a la concentracin de 1000 JIs por mililitro.
Especies/Cepas 48 96 144 192 240

Heterorhabditis HC21c 15 A 15 A 57.4 A 73.3 A 96.4 A
Heterorhabditis HM56 12.3 A 12.3 A 60.7 A 69.8 AB 89.7 AB
Heterorhabditis HC5 13.5 A 13.5 A 56.5 A 74.8 A 86.5 ABC
S. carpocapsae Mex 8.7 A 8.7 A 58.9 A 68.6 AB 77.1 BC
S. carpocapsae All 3.6 A 3.6 A 36.2 B 67.8 AB 73.8 C
Steinernema SC8 0 A 0 A 50 AB 56.5 B 70.6 C
Testigo 0 A 0 A 0 C 0 C 0 D
* Valores dentro de la columna, seguida con la misma letra no son diferentes
estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad.
118
4.11. Virulencia de nematodos a pupas de A. ludens en un suelo estril.
El anlisis de varianza de los porcentajes de mortalidad acumulada, mostr
diferencias altamente significativas para las fuentes principales (F= 251.42; gl= 34,
139; P<0.0001), al descomponer los factores de interaccin mostr diferencias
altamente significativas para los factores: tiempo de exposicin (F= 1502.12; gl=
24, 139; P<0.0001), nematodos (F= 235.30; gl= 6, 139; P<0.0001) y la interaccin
tiempo-nematodo (F= 47.00; gl= 24, 139; P<0.0001).
La separacin de medias de la mortalidad total de pupas registr cuatro
niveles de significancia, el primero lo componen los nematodos Steinernema SC8
y Heterorhabditis HC5 con 43.8 y 43.1% de mortalidad; que estadsticamente es
igual a los del segundo bloque que lo componen Heterorhabditis HC56, HC21c y
S. carpocapsae Mex con 36.7 hasta 43.8% de mortalidad, respectivamente. El
tercer bloque lo compone el nematodo S. carpocapsae All con 30.9% de
mortalidad y por ltimo el cuarto bloque compuesto por el testigo que no presento
mortalidad natural (Cuadro 16).
Cuadro 16. Porcentaje de mortalidad de pupas A. ludens a diferentes especies y
cepas de nematodos entomopatgenos en suelo y prueba de
separacin de medias por Tukey al 5%.
Nematodos Mortalidad
Steinernema SC8 43.8 A
Heterorhabditis HC5 43.1 A
Heterorhabditis HM56 39.9 AB
Heterorhabditis HC21c 37.7 B
S. carpocapsae Mex 36.7 B
S. carpocapsae All 30.9 C
Testigo 00.00 D
* Valores dentro de la columna, seguida con la misma letra no son diferentes
estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad.
MSD 11.812
119
Se presenta la evolucin de la tasa de mortalidad de pupas con cada uno
de los nematodos evaluados, donde se observan diferencias significativas,
sobresaliendo cuatro nematodos nativos por arriba de 50% de mortalidad. El
nematodo mas sobresaliente fue Heterorhabditis cepa HM56 con 56.4% de las
pupas a las 144 horas de la inoculacin mientras que S. carpocapsae All solo
28.4% de mortalidad despus de la inoculacin (Cuadro 17).
En tanto que, a las 192 horas de la inoculacin cuatro nematodos tenan
arriba del 60% de mortalidad; mientras que S. carpocapsae All no super el
56.2%. Sin embargo, a las 240 horas los nematodos Steinernema SC8 y
Heterorhabditis HC21c alcanzaron el 91.3% de mortalidad mientras que el
nematodo S. carpocapsae All solo 69.6%.
Cuadro 17. Evolucin del porcentaje de mortalidad de pupas de A. ludens
inoculadas con aislados de nematodos entomopatgenos en suelo
estril a la concentracin de 1000 JIs por mililitro
Especies/Cepas 48 96 144 192 240
Steinernema SC8 0 0 54.8 A 72.8 A 91.3 A
Heterorhabditis HC5 0 0 51.6 AB 72.8 A 91.3 A
Heterorhabditis HC21c 0 0 50.8 AB 65.9 AB 86.5 A
Heterorhabditis HM56 0 0 56.4 A 59.0 B 84.1 AB
S. carpocapsae Mex 0 0 42.7 B 62.2 AB 78.6 AB
S. carpocapsae All 0 0 28.4 C 56.6 B 69.6 B
Testigo 0 0 0 0 0
* Valores dentro de la columna, seguida con la misma letra no son diferentes
estadsticamente, en base a la prueba de Tukey al 0.05 de probabilidad.





120
V. Discusiones
Los nematodos entomopatgenos son agentes de control biolgico que han
sido un foco de investigacin desde que Glaser demostr su potencial como
agentes de control de insectos plaga (Glaser, 1931; 1932). Posteriormente, se ha
intensificado su investigacin sobre la patogenicidad de los nematodos, funcin de
la bacteria simbionte y mecanismos de defensa de los insectos los cuales se han
desarrollado en diferentes laboratorios especialmente en Europa y Estados Unidos
de Norteamrica. Con el progreso de la produccin a gran escala en medio lquido
(Ehlers, 2001a) la investigacin se ha expandido en muchas direcciones. Los
nematodos entomopatgenos representan una parte importante del gran espectro
de los bioplaguicidas. Ellos han sido utilizados para el control de insectos plaga en
cultivos de alto valor econmico y pueden ser utilizados a gran escala en sistemas
agrcolas sostenibles.
Aunque el uso de nematodos entomopatgenos como agentes de biocontrol
ha aumentado en las ltimas dcadas, todava es restringido a cultivos con alto
valor econmico que cubren una proporcin pequea del mercado de la
agricultura en el mundo. Adems de los factores econmicos, la expansin
restringida del uso de nematodos entomopatgenos como agentes de biocontrol
es debido a varios factores intrnsecos como los biticos y no biticos. Cuando el
inters aumenta sobre el uso de nematodos indgenas o exticos, el conocimiento
de su ecologa y requisitos ambientales especficos de cada especie o cepa de
nematodo que se quiera usar como agente de biocontrol.
En este estudio se confirma la hiptesis de que en la Zona Centro
Occidente y el Golfo de Mxico se encuentran nematodos entomopatgenos;
dichos agentes se recuperaron en hbitats de suelos cultivados con maz,
asociacin maz-sorgo, sorgo forrajero, limn mexicano, coco gigante, coco
hbrido, mango y naranja. No se encontr ninguno de estos agentes en el pasto
Sudn y sorgo para grano en forma natural.
Los nematodos que se aislaron e identificaron al nivel de gnero 23.8%
121
(35/147) y corresponden a la familia Steinernematidae y Heterorhabditidae. Los
nematodos del gnero Steinernema se encontraron de manera mas frecuente que
Heterorhabditis; 71.4% de Steinernema sp. y 28.6% de Heterorhabditis sp.
5.1 Presencia de nematodos entomopatgenos
La presencia de estos nematodos en la zona Centro Occidente de Mxico
confirma su distribucin cosmopolita, pues han sido aislados en suelos de muchos
pases, como Puerto Rico (Roman y Beauvers, 1983), Islas Hawaianas (Hara et
al., 1991), Egipto (Shamseldeam y Abdelgawad, 1994), Italia (Deseo et al., 1988),
Suecia (Burman et al., 1986), Suiza (Steiner, 1994), Checoslovaquia (Mracek
1980), en Guadalupe (Deseo et al., 1988), Gran Bretaa (Hominick y Briscoe,
1990), Mxico (Lezama et al., 2001; Molina et al., 2003).
El gnero de nematodos Steinernema es reportado en Uruguay (Nguyen y
Smart, 1988), Cuba (Mracek et al., 1994), Puerto Rico (Romn y Figueroa, 1994),
Texas EUA (Cabanillas et al., 1994), Espaa (Doucet y Gabarra, 1994), Mxico
(Lezama et al., 2001, Molina et al., 2003) y Jamaica (Constant et al., 1998). El
gnero Heterorhabditis es menos abundante que Steinernema se reporta en
irlanda, Escocia e Inglaterra (Griffin et al., 1994), en Finlandia (Vanninen y El
Awady, 1994), Mxico (Lezama et al., 2001, Molina et al., 2003) y Nueva Jersey,
EUA (Stuart y Gaugler, 1994).
La presencia de nematodos entomopatgenos con 23.8% es mayor a lo
reportado Ehlers et al., (1991) en Alemania (1.2%), Boag et al., (1992) Escocia
(2.2%), Blackshaw et al., (1988) en Irlanda del norte (3.8%), Rosa et al. (2000) en
Azores (3.9%), Choo et al., (1995) en Corea (4.6%), Ehlers et al., (1991) en Italia
(5%), Deseo et al., (1988) de Italia (6%), Midituri et al., (1996) al este de Blgica
(6.1%), Hara et al., (1991) en las islas de Hawai (6.8%), Belair et al., (2001) en
Qubec (9.1%), Shamseldean y Abd-Elgawad (1994) en Egipto (9.5%), Yoshida et
al., (1998) en Japn (10%), Griffin et al., (1991) en Irlanda (10.5%), Liu y Berry
(1995) en Oregn (11.8%), Midituri et al., (1996) al Oeste de Holanda (12.3%),
Gwynn y Richardson (1996) en Gran Bretaa (12.8%), Stock (1995) en la regin
122
pampera de Argentina (13.2%), Downes y Griffin ((1991) en Israel y Escocia
(13.7%), Rueda et al., (1993) en Tennessee (15%), Mracek y Webster (1993) al
oeste de Canada (20%), Akhurst y Brooks, (1984) en Carolina del Norte (20.2%),
Garcia del Pino (1996) en la regin de Catalua de Espaa (23.3%).
Sin embargo, esta proporcin esta por debajo de lo reportado por otros
autores; Burman et al., (1986) en Suecia (25%), Stock et al., (1999) en California
(26.3%), Steiner (1996) en los Alpes Suizos (27%), Armarasinghe et al., (1994) en
el suroeste de la zona costera de Sri Lanka (30%). La mayor presencia fue
observada por Sturhan y Liscova (1999) en la Republica Eslovaca (36%), Mracek
(1980) en Checoslovaquia (36.8%), y Hominick y Briscoe (1990) en Inglaterra
(48.6%).
Rosa et al. (2000) encontraron nematodos del gnero Steinernema y
Heterorhabditis solo en el grupo del Oeste y central de Azores. Heterorhabditis
est presente en seis de las nueve islas, en tanto que Steinernema se encuentra
solo en tres. La distribucin del archipilago no muestra ser un artefacto resultante
del nmero de muestras tomadas de cada isla porque en Sao miguel, donde la
densidad de las muestras fue menor, ambos gneros se encontraron.
En contraste, los steinernematidos dominaron en pocos estudios en Europa
(Burman et al., 1986; Griffin et al., 1991; Hominick et al., 1995; Steiner, Garcia del
Pino, 1996 y Yoshida et al., 1998). Una gran proporcin de Heterorhabditis sobre
Steinernema han sido reportados de las islas de Hawaii, donde el 92% de las
muestras positivas fueron Heterorhabditis (Hara et al., 1991), Egipto
(Shamseldean y Abd-Elgawad, 1994), Sri Lanka (Amarasinghe et al., 1994) y
Puerto Rico (Romn y Figueroa, 1995) en las indias occidentales francesas.
5.2. Tipo de hbitat
La presencia de nematodos steinernematidos y heterorhabditidos con
respecto al tipo de hbitat analizado registr la mayor presencia en el cultivo de
maz, limn mexicano y palma gigante dichos resultados coinciden con lo
reportado por Mracek et al., (1999) quienes encontraron a nematodos
123
steinernematidos ms frecuente en muestras de hbitats de rboles frutales
(orillas de camino y huertas), en hbitat probable-virgen, bosques y hbitat de
bosques deciduos, fueron ms del 50% de los sitios muestreo, contenan
nematodos entomopatgenos.
Sin embargo, Stock et al., (1999) localizan nematodos en bosques de
conferas (33.8%) y de roble (33.8%). Las costas pantanosas y pastizales
produjeron el resto de muestras positivas (23.9% y 8.5%, respectivamente). Los
resultados sugieren que hay una incidencia mayor de nematodos
entomopatgenos en suelos cultivados, lo cual es respaldado por Kaukeland
(1993); Choo et al., (1995) y Garca y Palomo (1995), quienes encontraron un
mayor porcentaje de recuperacin en suelos cultivados.
Hominick y Briscoe (1990a) en un estudio de suelos de Reino Unido no
encontraron ninguna evidencia de la temporada en la incidencia de nematodos
cuando ellos examinaron varios hbitats por dos aos. Ellos sealan que la
vegetacin quizs sea la causa de la persistencia de S. bibionis (= S. feltiae);
suelos de bordos de csped o pastos quienes encontraron ms muestras positivas
que los suelos de otros hbitats.
Griffin et al., (1991) analizaron los resultados de un rango de inspecciones
de suelo y concluyen que haba la evidencia de la temporada. Ellos sugirieron que
los nematodos se recuperaron de todos los tipos hbitats probados en Irlanda, no
haba la asociacin significativa entre el hbitat y la frecuencia de la recuperacin.
5.3. Caractersticas fsico-qumicas del suelo
5.3.1. pH del suelo
La presencia de nematodos entomopatgenos en funcin del pH de suelo
registrado en este estudio se observ en cinco tipos de pH para Steinernema y
Heterorhabditis en suelos desde fuertemente cidos, moderadamente cidos,
cidos y alcalinos. Sin embargo Rosa et al., (2000) observaron que
Heterorhabditis est presente mas frecuentemente en suelos con bajo contenido
de materia orgnica y un pH ms alcalino que Steinernema. Por su parte, Steiner
124
(1996) tambin reporta una distribucin relacionada al pH del suelo entre las
especies de Steinernema.
En trminos de tolerancia del pH, los nematodos entomopatgenos fueron
encontrados en suelos con un pH (pH 5) a ligeramente alcalino (pH 7.2). Esto
coincide con otros estudios donde el pH de las muestras positivas con nematodos,
vara de 4.6 a 8 (Hara et al., 1991; Griffin et al., 1994). Para el pH, se aislaron
nematodos entomopatgenos de los suelos levemente cidos (pH 5.6) a
levemente alcalinos (pH 7.9).
Esto coincide con otros estudios donde el pH del suelo con la presencia de
nematodos vari a partir el 4.6 a 8 (Mracek y Becvar 1988; Hara et al. 1991; Griffin
et al. 1994). Downes y Griffin (1991) encontraron al nematodo Heterorhabditis en
la zona costera en un pH de 4.6 a 8.1. Figueroa et al., (1991) determinaron la
presencia de nematodos en un pH del suelo promedio de 4.8 a 9.2. Hara et al.,
(1991) encontraron a Heterorhabditis sp. y Steinernema sp., en suelos que
contenan granos de arena, coral y concha, con pH moderadamente alcalino (8.0).
Rueda et al., (1993) reportan la presencia de S. carpocapsae y H. bacteriophora
en un suelo con pH, 5.6 a 6.2. Amarasinghe y Hominick (1993) sealan la
presencia de Steinernema y Heterorhabditis sp., en la zona costera en suelos con
un pH entre 7.8 a 8.9. Amarashinge et al., (1994) reportan un pH de estos suelos
entre 3.5 a 5.1 en la zona costera de Sri Lanka.
Vnninen et al., 1989 reportan que el pH de las muestras promedi 5.97,
sealan que este factor tenga algn efecto significativo sobre la existencia de los
patgenos, aunque fueron encontrados significativamente ms en suelos de
humus, que en otro tipo de suelo.
Los suelos de los sitios positivos tienen un rango de pH de 4.0-8.1. S. feltiae
y la especie B3 fueron aisladas de suelos cidos y neutros (pH 4.2-7.1), S. affinis
se encontr en suelos neutros y alcalinos (pH 6.5-8.1). El nematodo
Heterorhabditis esta presente en suelo casi neutro (pH 6.8) (Miduturi et al. 1996).
125
Los valores de pH para S. feltiae (6.4 1.2), S. intermedia (6.2 0.7), S.
affinis (6.9 0.4), Heterorhabditis sp. (6.5) y Steinernema sp. (7.8), lo que sugiere
que estas especies evitan condiciones de pH del suelo extremas (Steiner, 1996).
Miduturi et al. (1997a) reportan que los aislados se encontraron en suelos con un
rango de pH de 3.6-7.8. Sin embargo, la mayora de las poblaciones de S. feltiae
fueron aisladas de suelos cidos
Constant et al. (1998) sealan que los nematodos estan ms frecuentes en
pH 8.0-9.3, los cuales corresponden a hbitats de playa de arena calcrea.
Stock et al. (1999) sealan que los steinernematidos fueron encontrados en
suelos franco-arenosos, que promediaron de cido (pH 5.0) a neutro. El pH de los
suelos fue similar para aquellos de H. bacteriophora (6.3-7.2).
5.3.2. Conductividad elctrica
La conductividad es la medida de la capacidad que tiene un material para
conducir la corriente elctrica. Las soluciones nutritivas contienen partculas
inicas que llevan cargas y por lo tanto poseen esta habilidad. Cuanto mayor es la
cantidad de estos iones disueltos en el agua la conductividad de la solucin
resultante es mayor. Por lo tanto, la medicin de la conductividad elctrica de una
solucin nutritiva tiene una relacin directa con la cantidad de materiales slidos
disociados que hay disueltos en ella.
Rueda et al. (1993) sealan la presencia de H. bacteriophora a una
conductividad elctrica promedi de 0.006-0.013 S/m, adems presenta a S.
carpocapsae con una conductividad elctrica promedi de 0.004-0.006 S/m
Hara et al., (1991) encontraron a Heterorhabditis sp. en suelos con salinidad
promedia de 996124 micromho
5.3.3. Materia orgnica
La materia orgnica es la fraccin orgnica del suelo excluyendo residuos
vegetales y animales sin descomponer; entre sus componentes se incluyen los
residuos vegetales y animales en descomposicin (10-20%), la biomasa
126
microbiana (1-5%) y el humus (50-85%). La importancia de la materia orgnica
radica en su relacin con numerosas propiedades del suelo: fsicas, qumicas y
biolgicas. El contenido de materia orgnica de los suelos es determinado por los
factores formadores del suelo (tiempo, clima, vegetacin, material madre,
topografa, manejo). La materia orgnica forma parte del ciclo del nitrgeno, del
azufre y del fsforo, contribuye a la asimilacin de nutrientes, mejora la estructura
y la retencin de agua del suelo y da soporte a todo un mundo de
microorganismos cuya actividad resulta beneficiosa para el cultivo.
Vnninen et al. (1989) mencionan un contenido de materia orgnica de
8.9%. Downes y Griffin (1991) sealan que la M.O flucta de 3 a 7%. Figueroa et
al., (1991) reportan de 0.15 a 15.2%. Rueda et al. (1993) promedian 2.1-2.6%.
Miduturi et al. (1996) registran un rango de 1.2-8.4%. Miduturi et al. (1997a)
muestran desde un 3.1-35.0%. Stock et al. (1999) varan de 2.4% a 7.1%.
5.3.4. Nitrgeno
Este es el caso del nitrgeno cuyas formas inorgnicas son todas solubles
independientemente del pH reinante por lo que no debera verse afectada su
asimilabilidad. Sin embargo para valores de pH inferiores a 6 o superiores a 8 se
atena la actividad bacteriana con lo que disminuye tanto la liberacin de amonio
como su oxidacin a nitrato y ello hace bajar la concentracin de nitrgeno en
forma asimilable.
Los nematodos entomopatgenos steinernematidos y heterorhabditidos se
caracterizan principalmente por tener en promedio 0.08% de nitrgeno, con un
rango de 0.03-0.26%; lo cual coincide con lo reportado por Shapiro-Ilan et al.,
(2003) quienes mencionan rangos similares de 0.04 hasta 0.15% donde aislaron a
los nematodos S. carpocapsae, S. glaseri, S. riobrave y H. bacteriophora en un
estudio realizado en Georgia de huertos con nogal.
5.3.5. Fsforo
En el caso del fsforo el pH puede inducir su fijacin o su precipitacin, solo
entre valores comprendidos entre 6.5 y 7.5 su asimilabilidad es ptima. Cuando el
127
pH se sita por debajo de 6.5, se inicia un incremento en el contenido en cargas
positivas del complejo absorbente, ello provoca una fuerte fijacin de los aniones
sobre todo el fosfato, por poseer una estructura similar a los tetraedros
estructurales de las arcillas, puede incorporarse a ellas; este hecho provoca una
inmovilizacin definitiva del mismo.
Los nematodos entomopatgenos steinernematidos y heterorhabditidos se
caracterizan principalmente por tener en promedio 4.59mg de fsforo con un rango
que flucta de 1.1-7.0mg. Estos resultados se encuentran por debajo de los
niveles reportados por Shapiro-Ilan et al., (2003) quienes mencionan a los
nematodos steinernematidos y heterorhabditidos con rangos de 95.9-195 mg de
fsforo.
5.3.6. Potasio
La presencia de nematodos en funcin del contenido de potasio sobresalen
aquellas que tienen muy bajo contenido de potasio con 26, 22, 14%,
respectivamente. As como un 4% de las muestras que no se analizaron.
Los nematodos entomopatgenos steinernematidos y heterorhabditidos se
caracterizan por tener en promedio 69.07cmol de potasio, con un rango que
flucta de 45.5-180cmol. Estos resultados se encuentra por debajo de los
reportados por Shapiro-Ilan et al., (2003) quienes mencionan para nematodos un
rango de 209.9-676.1 cmol.
5.3.7. Calcio
La presencia de nematodos steinernematidos y heterorhabditidos se
caracterizan principalmente por tener 681.74 cmol de calcio, con un rango que
fluctu de 220-3000 cmol de calcio. Es resultados se encuentran por debajo de lo
reportado por Shapiro-Ilan et al., (2003) quienes mencionan rangos de 1147-
9163cmol de calcio para nematodos S. glaseri tiene 83.14 cmol de calcio.
128
5.4. Textura del suelo
La textura del suelo determina el tamao de poro y la capacidad de
retencin de la humedad del suelo, ello afecta la movilidad de los nematodos y la
persistencia (Molineux y Bedding, 1984). En este estudio la mayor cantidad de
nematodos encontrados fueron localizados en 24 de las 35 muestras sobresalen
los suelos areno-limoso, franco-limoso y franco-arenoso.
El nematodo Steinernema se localiz en suelos con texturas areno-limoso y
franco-arenoso, en tanto que Heterorhabditis se encontr en suelos con texturas
areno-limoso y franco-limoso, aunque en menor frecuencia, lo que indica que los
nematodos del gnero Steinernema tiene ms hbitats con diferentes tipos de
suelos, tal vez esto explica porque se encontr en menor proporcin al nematodo
Heterorhabditis.
Con relacin a otros estudios (Hara et al., 1991, Griffin et al., 1994), en este
estudio demostr que los suelos areno-limoso y franco-arenosos parecen ser los
tipos de suelo preferidos para los nematodos entomopatgenos. Esto est
apoyado por el hecho de la movilidad y la supervivencia de los nematodos
entomopatgenos es favorecido en suelos con un alto contenido de arena,
mientras que los suelos con alto contenido de arcilla restringen los movimientos
del nematodo (Molyneux y Bedding 1984; Kung et al. 1990).
En el Reino Unido, los steinernematidos se asocian particularmente con
suelos que tienen un horizonte de subsuelo calcreo (Hominick y Briscoe, 1990b);
suelos con mucha agua los hacen suelos altos en materia orgnica. Vanninen et
al., (1989) en suelos cultivados en Finlandia encontraron una alta incidencia de
steinernematidos en suelos de humus que en suelos de cualquier otro tipo: ellos
no encontraron nematodos en suelos arcillosos. Su baja incidencia en suelos
arcillosos haba sido notada por Burman et al., (1986) en Suecia y Blackshaw
(1988) en Irlanda.
Generalmente, los nematodos entomopatgenos se han aislado de suelos
con alto contenido de arena y bajo contenido de arcilla. En nuestro estudio, la
129
mayora de las muestras con nematodos eran suelos arenosos a franco arenoso.
Estos resultados son similares a los reportados por otros investigadores
(Blackshaw, 1988; Hominick y Briscoe, 1990; Griffin et al., 1991; Hara et al., 1991;
Liu y Berry, 1995; Midituri et al., 1997; y Stock et al., 1999).
En Suiza, los steinernematidos tienen una alta incidencia en suelos con
humus que en arena, francos o suelos arcillosos (Burman et al., 1986). En Irlanda
del Norte. S. bibionis fue recuperado ms frecuente en suelos francos (arcilla
calcrea), menos en franco arcilloso, en suelos pantanosos y nunca de suelos
arcillosos (Blackshaw, 1988). En general, los steinernematidos y los
heterorhabditidos son ms efectivos en suelos porosos bien drenados, con bajo
contenido de materia orgnica (Akhurst, 1986). El hallazgo ms centrado fue la
asociacin de los steinernematidos con suelos calcreos, especialmente aquellos
con un subsuelo de horizonte calcreo. La presencia o ausencia de calcio,
usualmente como carbonato de calcio en la forma arcilla calcrea (franco) o limo,
es un factor importante en el medio ambiente del suelo (Dowdswell, 1987).
Aunque muchos Heterorhabditis fueron extrados de muestras de suelo
cercanos al nivel del mar, estos suelos tienen un alto porcentaje de arena. Estos
suelos son muy similares a estos en donde se encontr a Steinernema esta
bsqueda fue completamente diferente de las observadas en Hawai (Hara et al.,
1991), Irlanda (Blackshaw, 1988; Griffin et al., 1991), y Suecia (Bruman et al.,
1986). Donde Heterorhabditis se encontr en suelos arenosos y Steinernema en
suelos limosos.
La evidencia comienza a sostener el panorama que la familia
Heterorhabditidae son endmicos a climas calientes mientras que
Steinernematidae prevalece en regiones templadas. En Israel, los
heterorhabditidos han sido encontrados, en suelos arenosos, bajo la sombra de
rboles irrigados de albaricoque en el desierto de Negev (Glazer et al., 1991). Los
resultados negativos se obtuvieron cundo las muestras se tomaron de suelos
menos aireados, an cundo estaba hmedo, o de suelos arenosos pero secas.
En las islas de Hawaii, veintids sitios fueron positivos para Heterorhabditis spp.;
130
su incidencia fue mas correlacionada con los sitios de muestreo dentro de los 100
metros de la orilla del mar. Las suelos eran moderadamente alcalinos (pH 8.0) y
bajo contenido orgnico (12%). El nico aislado de Steinernema vino de reas del
interior donde los suelos eran franco arcilloso y franco limoso con mayor contenido
orgnico (15-35 %) (Hara et al., 1991).
5.5. Altitud
La altitud tiene una influencia clara sobre la distribucin de ambos gneros
en las islas. Heterorhabditis fue mas abundante de las muestras de suelo en
altitudes bajas, y su abundancia relativa disminuye con la altitud. Al rededor de los
300 msnm Steinernema es el ms abundante. Hara et al., (1991) en las islas de
Hawaii hubo una alta presencia de Heterorhabditis al nivel del mar y Steinernema
por arriba de los 300 msnm.
En el archipilago de Azores, la temperatura del suelo y la humedad
dependen de la altitud y son probablemente determinantes en la distribucin de
estos nematodos. En la parte Oeste de la isla Sao Miguel, que tiene una baja
elevacin de la parte Este es quien tiene la mayor temperatura del suelo,
Heterorhabditis es el gnero predominante en el lado Este, mientas que
Steinernema es ms comn. La temperatura y la precipitacin tambin afectan la
distribucin de insectos que potencialmente pueden ser hospederos de estos
nematodos entomopatgenos. Steiner (1996) el porcentaje total de las muestras
de suelo que produjeron nematodos entomopatgenos, fueron encontrados en
altitudes entre los 490 y 2,530 msnm (S. affinis y S. kraussei respectivamente), y
la mayora de los aislados se recuperaron en altitudes entre los 1,500 y 2,100
msnm.
Mrek (1980) menciona que la incidencia de estos nematodos no avanza
gradualmente con relacin a la altitud (150-1000 msnm), ya que las larvas
infectivas fueron encontradas en muestras de suelo bajas, laderas de campos y
bosques, as como favorablemente en suelos de bosques montaosos (a 1000
msnm).
131
Rosa et al., 2000 encontraron nematodos entomopatgenos hasta los 750
msnm, en tanto que un Heterorhabditis por debajo de los 150 msnm, mientras que
los Steinernema se encontraron por arriba de los 300 msnm.
5.6. Virulencia de nematodos sobre larvas de A. ludens.
Otro de los objetivos de la investigacin fue evaluar la virulencia de aislados
de nematodos entomopatgenos, encontrando que presentan diferente grado de
susceptibilidad de las larvas de A. ludens a la accin del nematodo.
Para poder seleccionar un nematodo entomopatgeno, como posible
agente de control biolgico es importante evaluar primero sus propiedades; as
como las caractersticas del hospedero y los factores responsables de la
efectividad que pueda influir en los nematodos, para controlar la plaga; como los
mecanismos de defensa del hospedero, los factores biticos y abiticos.
Los resultados indican que las larvas de A. ludens son susceptibles a
nematodos, siete de los veintitrs nematodos alcanzaron una mortalidad mayor al
80% de larvas; cuatro son steinernematidos y tres heterorhabditidos. Del total de
los nematodos evaluados alcanzaron un porcentaje de mortalidad de 51.1 hasta
un 90.6%; en estado de larva.
Beauver y Calkins (1984) evaluaron la virulencia de nematodos
entomopatgenos en A. suspensa y encontraron que S. glaseri parsita larvas y
adultos en un 15 y 58% respectivamente. Lo anterior significa, que las larvas de A.
ludens son ms susceptibles que A. suspensa a estos nematodos. Estos mismos
autores reportan que H. bacteriophora mata un 79 y 76% de larvas y adultos de A.
suspensa.
En este trabajo registr que exciten diferencias altamente significativas en
la virulencia entre los aislados y cepas evaluadas; las cepas que causaron la
mayor mortalidad en el caso de Heterorhabditis HC10a con 90.6%, mientras que
los steinernematidos del gnero Steinernema aislado SM46, SM45, SC1b, SC3b
con 89.1-88% de mortalidad del estado de Colima y Michoacn; en tanto que otros
heterorhabditidos fueron los aislados HC22, HC10c, HC21c, HC10b, HC5 y HC23
132
con una mortalidad de 86-78.2% del estado de Colima, resultados que son
comparables a los reportados por Beavers y Calkins (1984) con la cepa H.
bacteriophora NC evaluada en este trabajo, fue inferior a los encontrados con las
cepas locales. Tambin, ellos mismos encontraron diferencias en la virulencia
entre especies de larvas de A. suspensa; resultados que coinciden con los aqu
obtenidos. Del mismo modo; tambin observaron un 1% de infeccin en pupas de
A. suspensa con los nematodos S. feltiae y H. bacteriophora; en este trabajo se
encontr un parasitismo comprendido entre 73-100% de mortalidad, lo que indica
que las pupas de A. ludens son sensibles a todos los nematodos aqu evaluados.
Lindegren y Vail (1986) reportan que el tercer estadio de C. capitata, D.
cucurbitae y D. dorsalis son susceptibles a este nematodo S. feltiae; tambin es
capaz de parsita larvas y pupas de A. ludens, lo que aumento su rango de
insectos hospederos; por otro lado, Poinar y Hislop (1981) tambin encontraron
que los adultos de C. capitata son susceptibles a S. feltiae y H. bacteriophora en
pruebas de laboratorio.
Los resultados obtenidos corroboran lo reportado por Lezama et al (1996)
sobre la susceptibilidad de larvas de A. ludens a los nematodos entomopatgenos
S. riobravis y S. glaseri. Sin embargo, en este trabajo se encontr que la especie
de S. carpocapsae Davis caus la mas baja mortalidad con un 87% a la
concentracin de 1000 nematodos por caja de petri, mientras que Lezama et al.,
(1996) reportan 90% con la concentracin de 4000 nematodos, as como tambin
reportan un 76.25% de larvas muertas por el nematodo y un 13.75% de mortalidad
en estado biolgico de pupa.
Toledo et al., (2001) mencionan una posible explicacin de las diferencias
en la infeccin de los nematodos, en las larvas de A. ludens, pudo haber sido que
las larvas de tercer estadio, utilizadas en este estudio, hayan estado en la fase
terminal del estadio y prximas a entrar al estado de pupa, por lo que no dieron
tiempo a que los nematodos entraran en las larvas, debido a que tienden a
enterrarse en el suelo y es posible que Lezama et al. (1996) hayan utilizado larvas
133
jvenes de tercer estadio, por lo que estuvieron mayor tiempo expuestas a los
nematodos.
Duncan y McCoy (1996) reportan que S. riobravis tiene como
comportamiento el de permanecer en la superficie del suelo a menos de un
centmetro de profundidad en un 99% del total de los nematodos aplicados. Lo
anterior, puede explicar los resultados encontrados en este estudio. Mas
investigaciones se hacen necesarias para comprobar la hiptesis ya que de ser
cierta, la oportunidad de que el nematodo ataque a las larvas, se condiciona al
momento en que estas salen del fruto cado sobre la superficie del suelo, por lo
que es el nico momento en que los nematodos pueden infectarla.
Algunas investigaciones se han realizado para reducir el efecto de esta
conducta, se han hecho aplicaciones del nematodo en el agua de riego, para
incorporarlo bajo la superficie y se han logrado mejores resultados que cuando se
aplica sobre la superficie del suelo (Cabanillas y Raulston, 1996).
5.7. Virulencia de nematodos sobre larvas y pupas de A. ludens en un suelo
areno-limoso.
Los resultados de mortalidad, encontrados con la especies evaluadas en
este trabajo de Heterorhabditis cepas HC5, HC21c, HM56 y las de S. carpocapsae
cepas Mex y All, adems de Steinernema cepa SC8 este trabajo, a la
concentracin de 1000 nematodos fue mayor al 75% siendo muy superiores a los
reportados por Lezama et al., (1996) a la misma concentracin que fue de 52.5% y
con 5000 nematodos apenas alcanz la misma mortalidad 75%. Downes y Griffin
(1996) reportan que S. glaseri tiene como comportamiento la capacidad de
desplazarse hasta 90 cm de profundidad, posiblemente esta sea la razn por la
que se registraron niveles de parasitismo mas elevados que con S. riobravis.
Por su parte Lindegren y Vail (1986) reportan diferencias entre la mortalidad
de larvas de tercer estadio de C. capitata bajo el efecto de concentraciones,
resultados que concuerdan con los aqu obtenidos. Por otro lado, Lindegren et al.,
(1990) evalan al nematodo Steinernema carpocapsae a la concentracin de
134
500JIs/cm
2
aplicados al suelo para controlar A. suspensa, Bactrocera cucurbitae
S. carpocapsae con 89%, B. dorsalis con 94% y Ceratitis capitata con S. feltiae
con 87.1% y S. carpocapsae con 97% de mortalidad, respectivamente. Sin
embargo, Gazit et al., (2000) al evaluar a S. riobrave a la concentracin de 100
nematodos por cm
2
aplicados al suelo para controlar C. capitata causan una
mortalidad de 82.5%.
5.8. Tiempo letal 50% (TL
50
) de nematodos sobre larvas de A. ludens.
En lo que respecta a los tiempos letales 50% de cada cepa evaluada en
larvas del tercer estadio de A. ludens se pudo constatar que oscilan entre 13 y 62
horas; sin embargo, los aislados sobresalientes presentan un TL
50
de 13-28 horas
despus de la inoculacin.
Con relacin al TL
50
obtenido en larvas de moscas de la fruta es mayor a lo
reportado en algunos trabajos sobre lepidpteros como Gonzlez-Ramrez (1995)
evalu a H. bacteriophora sobre sietes instares larvarios de M. latipes encontrando
un TL
50
de 1.5-4.3 das. Mas tarde, Medeiros et al., (2000) evaluaron cepas de
nematodos de Steinernema y Heterorhabditis sobre los diferentes instares de
Pseudaletia unipuncta sobresaliendo un aislado de Steinernema cepa A48 que
alcanz un TL
50
de 32.3-49.2 h. En tanto que, Rosa y Simoes, (2004) evaluaron 28
cepas de nematodos nativos sobre P. unipuncta obteniendo a H. bacteriophora
cepa Az29 como el mas virulento con un TL
50
de 44 h. Mientras que Schroer et
al., (2005) quienes evaluaron a S. carpocapsae sobre larvas de Plutella xylostella
con un TL
50
mayor a las 40 h, siendo similares a lo encontrado sobre A. ludens.











135
VI. Conclusiones
En base a las condiciones en que se desarroll este experimento se puede
establecer las siguientes conclusiones.
El conocimiento de la diversidad de agentes a nivel de especie, gnero o
aislado en este estudio y su posible variacin en la virulencia, pudiera ser un
reflejo de la diversidad de hbitats encontrados en este estudio.
Es probable que los nematodos encontrados tengan una mayor adaptacin
en funcin de su frecuencia de recuperacin, fue mayor en diferentes ambientes.
Esto es un aspecto muy importante a considerar ya que podran a contribuir al uso
de aislados en programas de manejo integrado en los estados o climas similares.
Es necesario evaluar la virulencia de diferentes especies de nematodos
steinernematidos y heterorhabditidos en otras especies de moscas de la fruta, con
el fin de conocer su potencial de uso dentro de programas de manejo integrado de
plagas.
Se encontr, que todas las especies y cepas de nematodos evaluados en
este estudio tienen un potencial de control biolgico, en contra de larvas de A.
ludens; con un porcentaje de parasitismo entre 51 hasta 90.6%.
Los aislados de nematodos entomopatgenos que se evaluaron en contra
de larvas de A. ludens, presentaron actividad entomopatgena, pero diferente
grado de mortalidad a la dosis empleada, encontrndose que al nematodo H.
megidis y S. riobrave presentan los mas bajos parasitismos con un 51% de
mortalidad. Los aislados o cepas mas sobresalientes fueron Steinernema de los
aislados SM46, SM45, SC1b, SC3b; mientras que Heterorhabditis fueron los
aislados HC10a, HC22 y HC10c, por arriba del 80% de mortalidad, con tiempos
letales 50% de 13 hasta 62 horas, respectivamente.
La agresividad de las cepas evaluadas presentaron diferencias
significativas entre las nativas e introducidas. Sin embargo, hubo una tendencia de
los aislados mexicanos a ejercer su accin ms rpidamente, por lo que se
perfilan como las ms adecuadas a fin de ser utilizadas en control biolgico.
136
Los nematodos mas sobresalientes en suelo estril sobre larvas fue
Heterorhabditis cepa HC5 con el 100% de mortalidad, HC21c, HM56 y HC5 fueron
los ms virulentos, siendo estos los que se recomiendan para utilizarse en
prximos trabajos.
En el caso de las pupas de A. ludens los nematodos Steinernema SC8 y
Heterorhabditis aislado HC5 tienen la mayor mortalidad en un suelo estril con
90% de mortalidad a las 240 horas de exposicin.
Es necesario determinar s estos nematodos solos o combinados con otro
agente entomopatgeno, suprimen significativamente poblaciones de insectos
plaga.
Lo anterior, permite concluir que no obstante que un aislado sea patgeno
contra una especie de plaga, se debe de evaluar su virulencia, en todos los
estados biolgicos del insecto, para conocer el grado de impacto y posible control
que el nematodo pudiera tener al aplicarlo al campo contra esta plaga.
Los resultados ponen en evidencia que la actividad patgena de los
aislados de nematodos a larvas de A. ludens, con respecto al insecto donde fue
aislado, no es estrecha, ya que las cepas de nematodos provienen de un insecto
trampa como G. mellonella.
Es necesario continuar las investigaciones para demostrar la sensibilidad de
A. ludens a nematodos entomopatgenos nativos y que se determine sus
respectivas concentraciones letales 50% (CL
50
).
As mismo, se evalu su efectividad al nivel de invernadero antes de pasar
a campo, con el fin de seleccionar la especie de nematodo ms prometedora en el
control de A. ludens.
Seria prudente evaluar la virulencia de los nematodos nativos en otras
especies de moscas de la fruta, con el fin de conocer su potencialidad de uso
dentro de programas de manejo integrado.

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