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PRACTICA N 9

Cuantificacin del porcentaje de grasa cruda, extracto lipdico, extracto etreo o fraccin lipdica

I.

Introduccin: La cuantificacin del contenido de grasa cruda es otra de las determinaciones que integran el anlisis prximo de un sistema biolgico. Equivale al peso del residuo que se obtiene luego de exponer una muestra previamente deshidratada (materia seca), del sistema biolgico a objeto de estudio, a un reflujo con un solvente orgnico no polar por un periodo de tiempo determinado. Este procedimiento extrae, adems de las grasas o los aceites presentes en la muestra, todos los compuestos orgnicos solubles en el solvente utilizado, por ejemplo: carotenoides, vitaminas liposolubles, esteroles e hidrocarburos.

II.

METODOS DE DETERMINACION A. Muestras slidas Mtodo de extraccin continua: a. Fundamento: El mtodo se fundamenta en las caractersticas de solubilidad de la fraccin lipdica presente en el sistema biolgico a objeto de estudio. La seleccin del solvente adecuado depender de ello y de las caractersticas fsicas de la muestra. La determinacin es gravimtrica, se determina el peso de grasa en un peso de materia seca y se expresa el resultado por peso de materia fresca. b. Materiales: 1. Muestra: Galleta de soda molida, tamizada y deshidratada. 2. Solvente: ter etlico anhidro (o ter de petrleo o hexano). 3. Unidad de extraccin: Cada unidad de extraccin consta de un

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cartucho de extraccin, un portacartucho de vidrio y un vaso de

extraccin 4. Equipo de extraccin de grasa Golfish (si no se dispone del equipo, usar un extractor soxhlet)

Equipo de extraccin Goldfich 5. Planchas de calentamiento. 6. Campanas de extraccin 7. Vasos de precipitado con agua hirviendo. c. Procedimiento: 1. El vaso de extraccin debe lavarse muy bien con agua y jabn para eliminar posibles restos de extractos etreos remanente de extracciones anteriores. Se enjuaga muy bien con agua destilada y se seca en estufa a 100 C hasta obtener peso constante. 2. El portacartucho tambin debe lavarse muy bien con agua y jabn y enjuagarse con agua destilada y secado en estufa a 100 C. 3. Pesar en un cartucho de extraccin, de peso conocido y en el que se ha colocado un pedazo de lana de vidrio,

aproximadamente 2 g de la muestra previamente deshidratada o materia seca. Introducir el cartucho dentro del portacartucho

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y colocar el conjunto con cuidado en la unidad de extraccin.

4.

Colocar en el vaso de extraccin entre 40, 50 o 100 ml de solvente (segn el caso). Ajustarlo al equipo e iniciar la extraccin calentando suavemente. Continuar por un periodo de 4 a 8 horas.

5.

Evaporar el solvente en bao de agua caliente bajo la campana por 30 minutos. Enfriar en un desecador y pesar.

e. Clculos: % de grasa cruda = seca. Nota: El resultado final deber estar expresado en porcentaje de materia fresca. f. Precauciones: No manipular el material de vidrio con las manos, porque se adhiere al vidrio la grasa y el sucio de las manos, as como tampoco con instrumentos sucios. C. Muestras lquidas: Mtodo de Mojonnier. a. Introduccin: El mtodo es adecuado para determinar el % de grasa cruda en muestras lquidas como la leche; y se fundamenta en extraer la fraccin lipdica de la muestra de leche,

Peso de grasa extraida x 100 % de materia Peso de materia sec a

solubilizndola en el solvente orgnico no polar. La eficiencia del proceso depende de que durante el mismo se rompa los glbulos de grasa y se evite que el agua de la fraccin acuosa del sistema disminuya la eficiencia del solvente. Como consecuencia del proceso, se formaran dos fases claramente diferenciables, una de ellas (la superior) integrada por el solvente orgnico ms la fraccin lipdica extrada, y la otra (la inferior) en donde se localizaran los compuestos hidrosolubles.
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b.

Reactivos: Fenolftalena al 1% en alcohol de 95 % NH4OH concentrado ter de petrleo Hexano. Etanol al 95 %

1. 2. 3. 4. 5.

c. Materiales: 1. 2. 3. 4. 5. 8. Muestra: Leche pasteurizada. Equipo de Mojonnier (frasco y soporte) Planchas de calentamiento Vaso de precipitado con agua hirviendo Cpsula de metal a peso constante Campanas de extraccin

e. Procedimiento: 1. Lavar muy bien las cpsulas de metal con agua y jabn. Enjuagarlas con agua destilada, secarlas en estufa hasta obtener peso constante. 2. Determinar la densidad de la muestra de leche en un cilindro de 10 ml (previamente pesado en balanza analtica) aadir 10 ml de leche, pesar nuevamente y obtener, por diferencia, el peso de los 10 ml de leche. 3. Medir, con una pipeta volumtrica, 10 ml de la muestra y transferirla al frasco de Mojonnier. Aadir 1,25 ml de NH4OH concentrado, 3 gotas de fenolftalena y mezclar. 4. Aadir 10 ml de etanol al 95 %. Tapar el frasco y agitar con cuidado. 5. Aadir 25 ml de ter etlico y agitar cuidadosamente por 1 min.

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6.

Aadir 25 ml de ter de petrleo y agitar igual que el paso

anterior. Dejar el frasco en posicin vertical durante 15 minutos o centrifugar hasta que la capa etrea se aclare.

Frascos Mojonnier y soporte

7.

Decantar con cuidado esa capa etrea a la cpsula de aluminio previamente tarada.

8.

Repetir dos veces ms el procedimiento de extraccin de la grasa de la muestra de leche tal como se describi , aadiendo sucesivamente: 5 ml de etanol, 15 ml de hexano y 15 ml de ter de petrleo y en la tercera extraccin obviar el etanol.

9.

Decantar cada vez la capa etrea a la cpsula de aluminio que contiene el producto de la primera extraccin.

10. Evaporar en Bao de Mara y luego llevar la cpsula a peso constante.

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f.

Clculos: Con los datos obtenidos del peso de la muestra y el

peso de grasa extrada, reportar el resultado del anlisis como porcentaje de grasa cruda.

Mtodo volumtrico

Mtodo de Babcock para determinar grasa en leche: En este mtodo se adiciona cido sulfrico concentrado a una cantidad conocida de leche contenida en la botella Babcock. El cido sulfrico digiere las protenas, genera calor y libera la fraccin de grasa. Se centrifuga la mezcla por 5 minutos, se aade agua caliente, lo que permite aislar la fraccin de grasa y

Botellas Babcock para leche

la hace ascender a la columna graduada de la botella. La grasa se ha determinado volumtricamente y el resultado se expresa como porcentaje de grasa por peso de leche.

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