1.

gua- caracterizao molecular e anfotrica;ionizao,constantes de equilibrio e dissociao,definio e clculo do pH e pOH,cidos,bases e tampes

gua e Equilbrio
Caracterizao molecular
A gua uma molcula polar, devido disposio dos seus tomos, dois de hidrognio e um de oxignio, formando uma geometria angular plana a gua uma molcula com propriedades fsico-qumicas muito importantes. Em termos de importncia fisiolgica podemos destacar os pontos de ebulio e fuso e a relacionada capacidade calorfica especfica. Do ponto de vista prtico, como consequncia das fortes ligaes, resultantes em parte da sua polaridade, entre as suas molculas e do seu tamanho, a gua um excelente armazenador trmico o que faz deste um meio privilegiado para reaces qumicas e transporte de energia trmica no indivduo. Radilise e Ionizao Quando molculas de gua so sujeitas a radiao da gama do ultra-violeta (cerca de 13 eV) pode acontecer o fenmeno de ionizao ou excitao da molcula de gua, quando isto acontece um de dois caminhos podem ser tomados. Se houver apenas excitao passamos a ter uma molcula de gua a dar dois radicais livres bastante reactivos, o radical hidreto e o radical hidroxilo. Se por outro lado existir mesmo a ionizao vamos lidar com dois produtos, uma molcula de gua com carga positiva que se dissocia num proto e num radical hidroxilo e um electro hidratado ou solvatado. Este ltimo atrai os dipolos hdricos formando de certa forma dissolvido. Este ltimo pode ser anulado atravs de reaces com protes, molculas de gua ou formando mais electres aquosos. Contudo o mais perigoso destes radicais do tipo perxido, estes possuem um tempo de vida mais longa e podem ser produzidos atravs tanto da ionizao como da excitao sendo extremamente nocivos. Na realidade estamos sempre a conviver com estes radicais, porm as suas concentraes no so significativas. Alguns comportamentos, como a exposio solar continua aumentam o risco de produo destes radicais.

Equilibrio qumico As reaces incompletas, so reaces qumicas que, decorrido um determinado tempo, se atinge um equilbrio dinmico entre os reagentes e os produtos. Estas reaces so reaces reversveis. Uma vez atingido o equilbrio as reaces direta e inversa, do-se com a mesma velocidade, coexistindo todos os reagentes e produtos. Para todos os estados de equilbrio, mesma temperatura., possvel estabelecer uma constante de esuilibrio em funo das concentraes. Esta relao traduz a lei da aco das massas.

Alteraes ao estado de equilbrio: Principio de Le Chatelier se alguma causa existe em equilbrio, este vai reagir no sentido de contrariar essa perturbao, de modo a ser atingido um novo estado de equilbrio. A concentrao dos componentes, a presso e o volume (no caso dos gases), e a temperatura so factores que podem causar perturbao num sistema em equilbrio qumico.

Entropia de um sistema Entropia, S, uma grandeza que mede o grau de desordem de um sistema. Quanto maior for a desordem de um sistema, maior a sua entropia. A espontaneidade de um processo vai assim relacionar-se com o aumento da entropia do universo. Uma reaco espontnea ocorre, num sistema isolado, com aumento da entropia do sistema. As reaces podem ser caracterizadas como endotrmicas e exotrmicas, caso o calor recebido pelo sistema contribua para aumentar a energia interna, ou pelo contrrio, o calor cedido pelo sistema faa diminuir a energia interna, correspondentemente. A energia livre de Gibbs um potencial termodinmico que mede o trabalho til que se obtm num sistema isotrmico e isobrico.

Solubilidade A solubilidade de uma substancia a quantidade mxima de soluto que possvel dissolver num dado solvente, de modo a obter uma quantidade de soluo saturada, a uma dada temperatura. A constante do produto de solubilidade ou simplesmente produto de solubilidade, de um composto inico igual ao produto das concentraes de equilbrio dos ies constituintes, elevadas aos respectivos coeficientes estequiomtricos, sendo esta constante apenas afectada pela temperatura.

Factores que afectam a solubilidade A solubilidade de um sal afetada pela temperatura, bem como pela concentrao dos ies presentes na soluo. Se a dissoluo for endotrmica, num sistema no isolado, um aumento da temperatura favorece a solubilidade. Se por outro lado, a dissoluo for exotrmica, um aumento da temperatura faz diminuir a solubilidade, pois a reaco tende a progredir no sentido inverso. O efeito do io comum representa tambm uma diminuio da solubilidade, em geral, pois neste caso j se tem em equilbrio a presena de ies que se vo solubilizar. A solubilidade dos sais muitas vezes afectada pelo pH do meio, nomeadamente pela adio de um cido. Os metais de transio tm grande tendncia para formarem ies complexos. A formao destes ies provoca um aumento de solubilidade dos sais.

Equilbrio qumico da gua Como se sabe, num copo de gua no existem s molculas de gua ( H2O ), mas tambm ies, o hidrogenio ( H3O+ ) e o hidrxilo ( OH- ) que resultam ambos do seguinte equilbrio da gua, tambm designado autoprotlise da gua:

2H2O (l) H3O+ (l) + OH- (l) Ou seja, ocorre dissociao das molculas de gua no estado lquido, e esta reaco tem uma constante ( kw ) que igual a 10-14 a 25C. Este estudo do equilbrio da gua leva-nos introduo de um captulo muito importante da qumica reaces cido- base - que possui uma ntima relao com a gua, j que uma das primeiras descries deste tipo de reaces foi feita tendo em conta a molcula de gua.

cido - Base A definio de substncias cidas e bsicas sofreu modificaes ao longo da histria da qumica. Uma das primeiras foi feita por Svante August Arrhenius que definiu um cido como todo o composto que cede ies H+ em soluo aquosa e uma base como todo o composto que recebe ies OH - em soluo aquosa. No entanto, esta definio no abrange o caso do io cianato ( CN- ). Foi Brnsted que introduziu a actual definio aceite que postula que um cido toda a substncia que cede protes e uma base toda a substncia que os capta. H, no entanto substncias que se comportam como cidos e como bases consoante o tipo de reaco envolvida substncias anfotricas . Um exemplo bem conhecido a gua , seno veja se : HCl (aq.) + H20 (l) H30+ (aq.) + Cl- (aq.) (1)

NH3 (aq.) + H20 (l) NH4+ (aq.) + OH- (aq.) (2) Na reaco (1) uma molcula de gua (l) reage com uma molcula de cido clordrico ( aq. ) originado o io H3O+ ( aq. ) e o io Cl- ( aq. ), ou seja a molcula de H20 comporta-se como base pois recebe um proto. J na reaco (2) a gua comporta-se como cido pois recebe um proto.

Equilbrio cido-Base um equilbrio dinmico, pois ocorrem as duas reaces ( directa e inversa ), mas com velocidades iguais. Existe uma escala utilizada frequentemente que mede a fora de cido ou de uma base, utilizando a concentrao de H3O+ ou de OH- , que o pH ( tambm existe uma para o OH -, que o pOH ), cuja frmula : pH =-log10[H3O+] pOH =-log10[OH-] Uma substncia com baixo pH (elevado pOH ) um cido e uma substncia com elevado pH ( baixo pOH ) uma base. Solues tampo Existem certas solues que so capazes de manter o pH dentro de um intervalo estrito , neutralizando o efeito de cidos ou de bases. Estas solues so denominadas solues tampo. Exemplos: Mistura de um cido com a sua respectiva base conjugada

Um cido muito forte

Uma base muito forte

O tampo fosfato um exemplo de soluo tampo: H2PO4- HPO42- + H+ Quando se adiciona um cido, o proto desloca o equilbrio para a esquerda e consumido ( desde que no se adicione um cido em elevadas concentraes ) e quando se adiciona uma base, o io OH - reage com o H+ formando gua e sendo consumido ( mais uma vez no resulta para elevadas concentraes de base ). Assim mantm-se o nvel aceitvel do pH. Existe uma equao que d a eficincia de um tampo, que a equao de Henderson-Hasselbach: pH = pKa + log [Base] [cido] A eficincia mxima de uma soluo tampo quando [Base]=[cido], pois quando pH=pKa.

Tampo fisiolgico Um exemplo muito conhecido o tampo que existe no nosso organismo cido carbnico . Este tampao utilizado da seguinte forma: H2CO3 H2O + CO2 HCO3- + H+ (1) HCO3- CO32- + H+ (2) Quando existem concentraes de cido mais elevadas que o normal o H + desloca o equilbrio (2) para a esquerda reagindo com o io bicarbonato e sendo consumido. Quando existem altas concentraes de base o io OH- reage com o H+ originando gua e assim mantm-se o pH do organismo dentro de nveis muito estritos ( entre os 7,35 e os 7,45 ). Este controlo realizado a nvel dos pulmes e dos rins.

2. gua-estrutura,polaridade,ligaes qumicas,interaces moleculares em soluo;solues e disperses,propriedades coligativas;osmolalidade e osmolaridade, a gua como meio de reaco qumica. Para compreender as caractersticas incomuns da gua, tais como os pontos de fuso e ebulio, a sua presso vapor e ao mesmo tempo as suas propriedades como solvente, propriedades resultantes da forma como esta molcula interage com outras da mesma espcie e com outras de espcies diferentes, necessrio compreender a sua estrutura qumica, dando especial ateno ligao O-H e sua forma tridimensional. Na molcula de gua o tomo de oxignio encontra-se com uma hibridao sp3, conferindo molcula uma geometria tetradrica (se contarmos com os pares de electres no ligantes do oxignio). A maior electronegatividade do tomo de oxignio relativamente ao tomo de hidrognio, faz com que os electres partilhados nas ligaes covalentes se encontrem em mdia mais prximos do primeiro, conferindo um carcter polar molcula: os plos positivos sero ento os protes de hidrognio e os negativos os electres no ligantes do oxignio (ver figura (a)).Estas caractersticas permitem que esta molcula possa sofrer interaces intermoleculares do tipo ponte de hidrognio. Esta interaco mxima quando os dipolos elctricos se encontram alinhados, maximizando a fora atractiva entre as duas cargas. Isto justifica a estrutura cristalina do gelo em faces hexagonais (lembrar a estrutura tetradrica da molcula de gua).

Este tipo de ligao tem uma energia de 23 kJ/mol, relativamente diminuta quando comparada com a covalente de 470 kJ/mol, mas elevada quando comparada com as foras de Wander Walls que em mdia tm uma energia de 4 kJ/mol. Estas ltimas adquirem grande importncia quando consideramos grandes molculas, em que o nmero elevado destas interaces tem um efeito consideravelmente superior ao esperado pela soma algbrica destas energias, ao considerarmos o factor probablstico associado a ter que se quebrar todas as interaces ao mesmo tempo, percebemos a razo de tal facto. temperatura ambiente a fuso e a evaporao da gua so espontneas, isto verifica-se pois o ganho entrpico do sistema (TS) compensa a energia necessria para quebrar as ligaes de hidrognio (H>0). Na gua lquida as ligaes de hidrognio tendo cada molcula em mdia 3.4 ligaes activas. As pontes de hidrognio estabelecem-se entre um tomo electronegativo e um hidrognio ligado a outro tomo muito electronegativo, no sendo por isso foras exclusivas da gua. Os solutos polares so bastante solveis em gua. Ao dissolverem-se em gua a entropia do sistema aumenta. Mesmo que alguns solutos no consigam formar pontes de hidrognio com a gua, e haja quebra destas ligaes entre gua-gua na dissoluo, as foras dipolo-dipolo atenuam suficientemente esta perda de modo a que o aumento de entropia seja suficientemente compensador para que a energia de Gibbs fique negativa (reaco espontnea). Do mesmo modo, a capacidade da gua em estabelecer interaces electrostticas com partculas carregadas, faz com que tambm estas sejam solveis em gua. Por exemplo a dissoluo do NaCl em gua uma reaco espontanea devido ao grande aumento da entropia causado pela dissociao da estrutura cristalina, e pela hidratao de cada um dos ies que atenua as foras electrostticas entre eles. Estas molculas que se dissolvem em gua so hidroflicas, por oposio as que no se dissolvem em gua so hidrofbicos. Como exemplo de solutos hidrofbicos temos gases apolares, cuja dissoluo em gua praticamente nula. A dissoluo de um gs apolar em gua diminui a entropia do sistema, havendo um aumento do arranjo das molculas de gua e do gs apolar. Para alm deste factor impeditivo h ainda que considerar que a entalpia positiva, j que necessrio quebrar as pontes de hidrognio entre molculas de gua. Lquidos apolares tambm no so solveis em gua, isto porque h uma diminuio acentuada da entropia devido s molculas de gua se arranjarem ordenadamente volta dos solutos havendo interaces hidrofbicas, para alm de que tambm h um aumento da entalpia, visto que necessrio energia para quebrar pontes de hidrognio entre molculas de gua que depois no se voltam a estabelecer entre a gua e o soluto apolar- temos assim disperses. Algumas molculas possuem componentes apolares e polares, e dizem-se anfipticas. Estas, na tentativa de diminuir as interaces hidrofbicas formam micelas, ou seja a parte polar encontra-se em contacto com esto constantemente a quebrar-se e a formar-se, tendo um tempo de vida de cerca de 1 a 20 pico segundos, e

agua e a parte apolar no, como acontece com o cdos gordos. Muitas molculas, como as protenas so anfipticas, e so as interaces hidrofbicas que permitem manter a sua estrutura 3D, estas interaces so tambm importantes para a estabilizao de membranas biolgicas. H propriedades do solvente que so independentes do tipo de soluto, dependendo apenas do facto da concentrao da gua ser mais baixa em soluo do que em gua pura, estas so denominadas propriedades coligativas: presso de vapor, ponto de ebulio, ponto de fuso e presso osmtica. A presso de vapor e ponto de ebulio so alteradas a partir do mesmo principio: quando uma parcela significante das moleculas superficie de uma soluo aquosa no so gua, mas sim soluto, a tendncia para as molculas de gua passarem para a fase de vapor diminui (ou seja a presso vapor diminui e o ponto de ebulio analogamente aumenta). De modo idntico, o ponto de fuso da gua na presena de um soluto vai diminuir, pois as moleculas de soluto colidem com o cristal em formao do mesmo modo que as moleculas de gua o fazem, fazendo com que a cristalizao se d mais lentamente e a uma temperatua mais baixa. Quando duas solues aquosas de concentraes diferentes esto separadas por uma membrana semipermevel, as molculas de gua difundem-se do local onde a concentrao de gua mais elevada para o local onde a concentrao e gua mais baixa, produzindo uma presso denominada osmtica (a fora necessria para resistir ao movimento de gua). Esta presso dada aproximadamente pela expresso de vant Hoff: = icRT (em que R a constante dos gases, T a temperatura e ic osmolaridade). A osmolaridade a concentrao de partculas osmticas por litro de soluo, enquanto a osmolalidade a concentrao de partculas osmticas por quilograma de solvente. A membrana plasmtica mais permevel gua do que a outras molculas ou ies. Esta permeabilidade deve-se facilidade da gua atravessar a bicamada lipdica e os canais proteicos. Solues com igual osmolaridade denominam-se isotnicas, neste caso a quantidade de gua que entra na clula igual a que sai. Em solues hipertnicas a quantidade de gua que sai do citosol maior do que a que entra e em solues hipotnicas acontece o contrrio. A gua no apenas o solvente onde as reaces qumicas da vida celular ocorrem, esta muitas vezes participa directamente nas reaces. Uma classe delas so as reaces de hidrlise e de condensao, em que se consome ou se produz gua, respectivamente. A formao de ATP e ADP so exemplos deste tipo de reaces:

A gua ainda um dos produtos finais da respirao aerbia, pode ainda ser um dos intrevenientes em reaces cido-base e oxidao-reduo, funcionando tanto como dadora ou receptora de protes ou electres.

3.

-Aminocidos,pptidos e protenas-estrutura,ligaes,sequncias e metodologias de identificao.

1 parte - Introduo ; Aminocidos As protenas existem em todas as clulas, em todas as partes da clula. Existem centenas de diferentes tipos de protenas, com diferentes tamanhos, que vo desde pequenos pptidos at enormes polmeros. Isto deve-se grande variedade e importncia de funes (estrutura, suporte, regulao do metabolismo, actividade enzimtica em geral, etc.). Com combinaes dos 20 aminocidos, consegue-se criar um espectro enorme de diferentes compostos, entre os quais enzimas, hormonas, anticorpos, etc. Os aminocidos so -aminocidos, pois o carbono central a que esto ligados funciona como carbono . O que varia de aminocido para aminocido o seu radical, que pode diferir em estrutura, tamanho e carga elctrica, influenciando a solubilidade dos aminocidos em gua. Existem ainda aminocidos que sofrem alteraes na sua estrutura aps uma protena ser sintetizada e tambm existem aminocidos que no entram na constituio de protenas. excepo da glicina, o carbono de todos os aminocidos encontra-se ligado a 4 grupos diferentes. O carbono portanto um centro de quiralidade. Isto confere-lhes propriedades pticas: os aminocidos que deslocam o plano de polarizao da luz no sentido dos ponteiros do relgio (direita) denominam-se dextrgiros [d ou (+)] e para a esquerda levgiros [l ou (-)]. Os aminocidos podem classificar-se de acordo com a polaridade ou tendncia do grupo R para interagir com a gua a pH biolgico (+/- 7). Em primeiro lugar, existem aminocidos apolares, hidrofbicos. Nas protenas, tendem a agrupar-se atravs de interaces hidrofbicas. Exemplos mais comuns: glicina, alanina e prolina. Os aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina e triptofano) possuem grupos laterais aromticos, relativamente apolares (hidrofbicos). Estes compostos destacam-se pela grande absoro da luz ultravioleta. Os polares neutros, serina, cisteina e glutamina, apresentam maior solubilidade em gua pois o seu radical tende a estabelecer pontes de hidrognio com as molculas de gua. Por ltimo, os radicais polares com carga (negativa ou positiva) so os mais solveis em gua (hidroflicos). Por alteraes na conformao dos aminocidos, podem ainda surgir outros tipos de aminocidos com funes mais especficas. Um aminocido dissolvido em gua apresenta-se na forma de io dipolar ( zwiterio). Pode comportar-se como dador ou receptor de protes. Devido as este comportamento, d-se aos aminocidos o nome de anflitos. Num meio cido, domina a carga positiva, pois o aminocido recebe protes. A partir daqui, e medida que o pH vai aumentando, pode comportar-se como um cido diprtico: primeiramente chega-se a um ponto de inflexo, que corresponde ao pK do grupo COOH, onde h igual nmero de COOH e COO-. medida que a titulao avana, atinge-se o ponto isoelctrico, em que existem 50% de cargas positivas e 50% de cargas negativas (encontra-se na forma de io dipolar). Para pH mais bsico, vai comear a haver a remoo do segundo proto, do NH3+, at ao ponto pK2, em que h igual nmero de NH3+ e NH2. Podemos concluir que a glicina pode funcionar como soluo tampo para determinadas gamas de pH (em torno dos pK). Outros aminocidos tero comportamentos (curvas de titulao) distintos, consoante o grupo R. 2 parte - Pptidos e Protenas

O aminocido a unidade fundamental das protenas. A associao entre vrios aminocidos forma polmeros designados por pptidos: dipptidos (2 resduos de aminocidos), oligopptidos (at 10), polipptidos (a partir de 10), etc. Geralmente consideram-se polipptidos os pptidos cujo peso molecular est abaixo de 10.000. As protenas, de peso molecular superior, podem inclusive ser constitudas por vrios polipptidos associados. Por outro lado, a distino poder tambm estabelecer-se consoante o significado ou valor funcional das molculas. A associao entre aminocidos d-se por um processo caracterstico deste tipo de molculas, que resulta numa ligao peptdica. Esse processo uma reaco de condensao, envolvendo a libertao de uma molcula de gua por cada ligao formada. De um modo geral, a ligao peptdica entre dois aminocidos forma-se entre o grupo carboxilo de um deles e o grupo amina do outro. O grupo carboxilo liberta um grupo hidroxilo e o grupo amina liberta um hidrognio. O grupo hidroxilo e o hidrognio libertados formam ento a molcula de gua, enquanto o azoto do grupo amina e o carbono do grupo carboxilo, que os cederam, se ligam entre si. Obtm-se, assim, um dipptido. Este, por sua vez, possui tambm um terminal amina (terminal-N), num dos extremos, e um terminal carboxilo ( terminal-C), no oposto, que permitem que se continue o processo de polimerizao. Deve tambm referir-se o carcter rgido conferido pela ligao peptdica: a ligao dupla inicial entre o carbono e o oxignio de cada grupo carboxilo agora parcialmente transferida, por ressonncia, para a ligao entre esse mesmo carbono e o azoto, bloqueando a rotao em ambas as ligaes covalentes. Assim, geram-se planos rgidos entre cada par de carbonos-. Tal como em aminocidos individuais, os pptidos tambm podem sofrer ionizao, e portanto tambm possuem parmetros prprios em termos de curvas de titulao, ponto isoelctrico e constantes de dissociao. No entanto, este comportamento difere, naturalmente, em vrios aspectos: por um lado, apenas os terminais do pptido podem sofrer ionizao, j que os restantes se encontram covalentemente associados em ligaes peptdicas. Por outro, existem diferenas nas prprias constantes de ionizao, dado que os terminais no possuem um grupo de carga oposta ligada ao mesmo carbono-. Finalmente, existe ainda a eventual ionizao de grupos R. Muitas protenas so constitudas apenas por resduos de aminocidos, designando-se por protenas simples. No entanto, existem outras que necessitam de certas componentes, os grupos prostticos, que no so aminocidos, de forma a poder desempenhar a sua funo biolgica especfica. Estas protenas designam-se por protenas conjugadas, e podem ser classificadas de acordo com a natureza qumica do ou dos seus grupos prostticos: as lipoprotenas possuem lpidos, as glicoprotenas possuem acares, e as metaloprotenas contm um certo elemento metlico. No que diz respeito estrutura, as protenas so molculas extremamente complexas: h que considerar no s as ligaes peptdicas, formadas entre os resduos de aminocidos, como tambm as inmeras interaces fracas, estabelecidas entre eles e com as molculas do meio envolvente (gua e outras), bem como as ligaes dissulfito. De um modo geral, a conformao de uma protena orienta-se preferencialmente de forma a permitir o maior grau de estabilidade possvel molcula, mas est longe de ser rgida, oscilando de forma dinmica entre vrias formas estruturais. Isto essencial para que as protenas desempenhem a sua funo respectiva. Dada a complexidade da questo, o estudo da estrutura das protenas visto segundo 4 nveis distintos. O nvel primrio da estrutura de uma protena descreve as ligaes covalentes estabelecidas entre os vrios resduos na cadeia polipeptdica (ligaes peptdicas e ligaes dissulfito). Assim, a informao mais importante a este nvel a sequncia em que se ligam os vrios resduos de aminocidos. Essa sequncia vai ser decisiva, no s no que diz respeito conformao tridimensional da molcula, como tambm para o tipo de funo proteica e a sua eficincia. Quanto a este ltimo aspecto, deve referir-se a existncia de alguma flexibilidade: no ser humano, cerca de 20 a 30% das protenas so polimrficas. O nvel secundrio refere-se a padres estruturais repetitivos das cadeias polipeptdicas, que reflectem arranjos locais particularmente estveis entre os resduos de aminocidos. Estes arranjos tm a particularidade de poderem ser completamente descritos em termos do valor dos ngulos e das ligaes peptdicas, dado que seguem padres especficos. Entre os vrios tipos estruturais conhecidos, destacam-se dois que so particularmente estveis: a hlice e as conformaes . A hlice envolve o enrolamento do esqueleto polipeptdico em torno de um eixo longitudinal, com os grupos R orientados para o exterior, e aparece com grande frequncia ao longo da estrutura de muitas protenas, como por exemplo a -keratina (protena que compem o cabelo), observando-se em mdia em 25% da estrutura de uma determinada cadeia polipeptdica. A razo da sua grande estabilidade o facto de

permitir uma configurao ptima de ligaes de hidrognio, que se estabelecem entre o tomo de hidrognio ligado a cada tomo de azoto, nas ligaes peptdicas, e o tomo de oxignio do 4. resduo acima. Estabelecidas estas ligaes de forma sucessiva, com a participao de todos os resduos, obtm-se a referida estrutura em hlice, de grande estabilidade. Esta pode adicionalmente ser enfraquecida, ou fortificada, pela interferncia dos vrios grupos R. A conformao , por outro lado, caracteriza-se por um tipo de arranjo em que as cadeias polipeptdicas se dobram em zigzag, em vrios segmentos que se dispem lado a lado, ao longo de um mesmo plano as folhas . Os segmentos adjacentes da cadeia, assim dispostos, estabelecem tambm ligaes hidrognio entre si, que mantm a folha estvel. Este tipo de conformao no possui tanta estabilidade como a hlice , mas pode atingir maiores extenses e possui alguma versatilidade estrutural. Os segmentos adjacentes podem pertencer mesma cadeia polipeptdica ou a cadeias distintas, e podem alinhar-se de forma paralela ou antiparalela, isto , com a mesma orientao NC ou com orientaes opostas. Existe tambm a possibilidade de deposio de vrias folhas umas por cima das outras. Outro padro estrutural muito frequente so as curvas , especialmente em protenas globulares, que so muito enroladas e portanto exibem numerosas curvaturas e loops nas suas cadeias polipeptdicas. As curvas so um tipo especial de curvatura na cadeia, que interliga as extremidades de dois segmentos adjacentes de uma folha antiparalela. Trata-se normalmente de uma rotao de 180, que envolve 4 resduos de aminocidos. O 1 e o 4 resduo estabelecem uma ligao de hidrognio entre si, enquanto que os intermdios no estabelecem nenhuma (ou fazem-no apenas com a gua, caso a curva se d superfcie da molcula). A estrutura terciria descreve a moldagem global do polipptido e todas as caractersticas relacionadas com a sua forma tridimensional. Trata-se portanto de uma perspectiva muito mais abrangente, descrevendo interaces entre resduos de aminocidos distantes, no s na sequncia polipeptdica como nas estruturas de nvel secundrio. Surge aqui a distino entre dois grandes grupos de protenas: as fibrosas e as globulares. As protenas fibrosas so constitudas por cadeias polipeptdicas dispostas em longas faixas ou folhas, em que geralmente predomina um nico tipo de estrutura secundria. As protenas deste grupo tm geralmente funes de suporte e proteco, e tm como caracterstica comum o facto de serem insolveis em gua (isto deve-se a concentraes elevadas de resduos de aminocidos hidrofbicos). Na apresentao abordaram-se dois casos representativos: a -keratina e as fibras de seda. As protenas globulares, geralmente enzimas e protenas reguladoras, tm as suas cadeias polipeptdicas dobradas sob uma forma esfrica ou globular, com um vasto nmero de estruturas secundrias de tipos diferentes. Esta complexidade estrutural est obviamente relacionada com a grande variedade de funes que os vrios tipos de protenas globulares desempenham nos organismos vivos. Referiu-se na apresentao a mioglobina, protena existente nas clulas musculares (onde transporta e facilita a difuso de oxignio para as fibras em contraco rpida), que um exemplo relativamente simples, mas ilustrativo, de uma protena globular. Em termos de subestruturas (motivos ou estruturas supersecundrias), de um modo geral, existe como j referido uma imensa variedade de possibilidades. Existem, no entanto, vrias semelhanas entre estas subestruturas, de protena para protena, caracterstica que inclusive utilizada para a identificao e classificao das mesmas. Existem protenas constitudas por duas ou mais cadeias polipeptdicas, associadas de forma no covalente, designando-se por protenas multisubunitrias ou multmeros. O nvel quaternrio refere-se ento disposio relativa das vrias subunidades de uma protena conjugada. Em primeiro lugar, se possurem duas ou mais subunidades idnticas (que so designadas por protmeros) consideram-se protenas oligomricas. Com isto, surgem simetrias de vrios tipos nestas molculas. Um exemplo disto a hemoglobina, que possui 4 cadeias polipeptdicas e 4 grupos prostticos heme. Estas 4 subunidades so semelhantes 2 a 2 ( e ), dispondo-se em dois pares simtricos (cada par com uma subunidade e uma ). No que diz respeito estrutura de protenas, convm ainda referir a desnaturao, fenmeno que envolve a perda de funcionalidade de uma protena por perda da sua estrutura tridimensional. Isto envolve a neutralizao das interaces fracas por alterao de diversos parmetros no meio envolvente: temperatura, pH, solventes orgnicos, detergentes, etc. Isto pode ser revertido em certos casos (e a protena recupera a funcionalidade). 3 parte - Metodologias de identificao e sequenciao

A sequenciao por degradao de Edman das tcnicas mais importantes, envolvendo os seguintes passos: 1- Se a protena possuir mais de uma cadeia, separ-las, quebrando as ligaes dissulfito. As interaces fracas podem ser quebradas com pH extremo, ureia 8M ou elevadas concentraes salinas. As ligaes dissulfito podem ser quebradas por oxidao com cido perfrmico, ou reduo por ditiotreitol/ditioeritritol e posterior acetilao para prevenir a recombinao. 2- Determinar a composio de cada cadeia. A hidrlise envolve aquecimento da protena em cido hidroclrico 6M a 100-110 C durante 24 horas ou mais. A separao pode ser feita por cromatografia em coluna (uma coluna de plstico ou vidro possui um material poroso slido - fase estacionria - no topo da qual se situa a mistura proteica. ento adicionada a alta presso uma soluo que atravessa a coluna (fase mvel) "arrastando" a mistura proteica, cujos componentes se vo separar dependendo das suas propriedades, percorrendo o material poroso com diferentes velocidades e dando origem a vrias bandas.) Exemplos: permuta catinica, size-exclusion, afinidade qumica. 3- Determinar os resduos nos terminais N- e C-. Terminal-N: Reagente de Sanger (2,4 dinitrofluorobenzeno) e fenilisotiocianato. Terminal-C: Anlise enzimtica (carboxipeptidases - hidrolisam a ligao peptdica no terminal carboxilo, libertando o ltimo aminocido da cadeia) 4- Decompor cada cadeia em fragmentos menores e determinar a sequncia de cada fragmento. Pode utilizar-se fragmentao enzimtica (ex: tripsina, quimotripsina - "cortam" as cadeias em certos aminocidos) ou qumica (brometo de cianognio - s actua na metionina (Met)). Para sequenciar os fragmentos de dimenses inferiores utilizada a degradao de Edman: O fragmento absorvido por uma superfcie slida - geralmente fibra de vidro coberta por polibreno, um polmero catinico. O reagente de Edman (fenilisotiocianato) adicionado ao pptido numa soluo ligeiramente alcalina (12% trimetilamina), reagindo com o grupo amina do aminocido N-terminal. O derivado pode ser separado do restante pela adio de cido, e posteriormente lavado e identificado por cromatografia, podendo repetir-se o ciclo. A eficcia de cada passo de cerca de 98%. 5- Repetir 4 usando um mtodo de fragmentao diferente, de modo a gerar fragmentos diferentes. 6- Reconstruo da sequncia a partir dos fragmentos. ainda possvel efectuar a sequenciao do mRNA (ou DNA, em procariotas) do gene correspondente protena em alternativa cadeia polipeptdica. A sequenciao por espectrometria de massa tem como principal vantagem o facto de no ser necessria a decomposio das protenas. De forma a enviar os pptidos para o espectrmetro, utiliza-se o mtodo de ionizao por "electrospray": A protena digerida por uma endoprotease, a soluo resultante passa atravs de uma coluna de cromatografia e sai por fim para o espectrmetro de massa, atravs de um capilar com potencial altamente positivo. A carga nas gotas causa a sua fragmentao em ies isolados, sendo os pptidos ento fragmentados e a razo carga/massa dos fragmentos medida. O espectro de massa analisado computacionalmente e geralmente comparado a uma base de dados de protenas previamente sequenciadas, de forma a determinar a sequncia dos fragmentos. O processo repetido com enzimas de digesto diferentes, e as sobreposies nas sequncias permitem construir a sequncia final da protena. A electroforese, migrao dos fragmentos por aplicao de um campo elctrico, no muito usada para fins de sequenciao, uma vez que pode afectar a estrutura e funo das protenas. contudo til para fins analticos, permitindo a determinao de propriedades como o ponto isoelctrico e peso molecular aproximado. Utiliza-se geralmente um gel de poliacrilamida, polmero com ligaes cruzadas que forma uma rede porosa, na qual os fragmentos proteicos vo migrar aproximadamente de acordo com a razo carga/massa por aplicao de um campo elctrico. As protenas so previamente dissolvidas no detergente SDS (dando tcnica o nome de SDS-PAGE), que confere carga negativa a todos os fragmentos, dependendo a sua migrao apenas do peso/tamanho molecular (os fragmentos mais pesados vo migrar mais lentamente). A visualizao dos fragmentos aps este processo permitida por corantes como o Coomassie Blue, que se liga aos fragmentos proteicos e no ao gel.

4-INTERACES DAS PROTEINAS COM LIGANDOS Stios de ligao nas protenas; caracterizao de ligando;reversibilidade e irreversibilidade da unio; constantes de equilbrio e de dissociao. Relao entre afinidade e dissociao.Efeito cooperativo( positivo e negativo); modelos de mecanismos de cooperatividade; coeficiente, equao e vector de Hill. Representao grfica. Aplicao das caracterizaes anteriores s molculas de mioglobina, hemoglobina normal e hemoglobina fetal.
As protenas so molculas dinmicas, cujas funes dependem da interaco com outras molculas, afectadas por mudanas fisiolgicas relevantes do meio onde se encontram. A nossa apresentao foca a relao entre a estrutura dinmica das protenas e estas interaces j mencionadas. A funo de diversas protenas inclui ligao reversvel a outras molculas, molculas essas que se chamam ligandos. Estes ligandos podem ser qualquer tipo de molcula e a natureza temporria desta ligao essencial vida, permitindo uma resposta rpida do organismo a alteraes metablicas e ambientais. As protenas so flexveis, mudando a sua conformao de forma subtil como resposta a vibraes moleculares e movimentos de resduos de aminocidos. Como tal, a ligao da protena ao ligando induz uma mudana que faz com que o local de ligao se torne ainda mais complementar do ligando, fortalecendo a ligao; existe assim uma adaptao estrutural entre os dois elementos que se estende s outras subunidades numa protena multi-unitria. Como ligando da Hemoglobina e Mioglobina temos o oxignio que no poderia ser transportado livremente para longas distncias, este transporte assegurado pelo Ferro. O Ferro encontra-se incorporado no grupo Heme, uma estrutura anelar complexa, protoporfirina. Este tomo tem quatro das suas seis ligaes ocupadas com tomos de Nitrognio que impedem a sua converso para de Fe 2+ para Fe3+, forma na qual a sua ligao ao oxignio no seria possvel. A ligao do oxignio a um dos grupos livres do ferro, em molculas heme livres provoca esta converso do ferro j mencionada, no entanto, nos grupos heme ligados a protenas, esta converso impedida pela ligao de um resduo de aminocido na outra ligao livre do ferro. As interaces entre protenas e ligandos podem ser descritas quantitativamente, sendo duas das formas a constante de associao e a da dissociao. Visto que uma protena pode no s ter a funo de ligar-se ao ligando como tambm libert-lo quando necessrio (caso da mioglobina/hemoglobina com o oxignio) importante o esclarecimento destas duas constantes.

A constante de associao (Ka) mede a afinidade de um ligando (L) com a protena (P), e dado pela seguinte equao para a expresso de equilbrio:

P + L PL

Ka =

[ PL] [ P][ L]

Quanto mais alto a Ka maior a afinidade do ligando. Se considerarmos que a concentrao de [L] muito maior que a concentrao de [PL], ento, mesmo que aumentemos [PL], [L] mantm-se constante. Considerando o equilbrio como a fraco de locais de ligao ocupados em relao aos existentes temos:

[ L] [ L] +

1 Ka

medida que [L] aumenta, sendo esta uma funo hiperblica, vai atingir um ponto de saturao. A constante de dissociao (Kd), o inverso de Ka, medindo a afinidade da protena com o ligando, dada pela expresso:
Kd =

[ P][ L] , [ PL]

sendo =

[ L] + Kd

[ L]

Quando [L] igual ao Kd metade dos stios de ligao da protena esto ocupadas, sendo que quanto mais baixa for esta constante maior a afinidade do ligando com a protena. No caso do oxignio, a expresso para o ser a seguinte:
pO2 pO2 + P50

Onde P50 a presso de O2 qual metade dos stios de ligao esto ocupados. A afinidade no depende apenas dos parmetros anteriores mas tambm da prpria estrutura da protenas como tambm das alteraes conformacionais que possam ocorrer. Por exemplo, a afinidade de monxido de carbono para um heme livre cerca de 20.000 vezes maior que a do oxignio. Por outro lado, quando o heme est ligado mioglobina a afinidade do CO passa a ser apenas 200 vezes superior. Isto acontece porque quando o heme est na mioglobina existem componentes desta (a histidina distal) que vo influenciar o ngulo da ligao do CO com o ferro do heme diminuindo, portanto, a afinidade deste. Este efeito tambm observado na hemoglobina.

A hemoglobina a principal protena responsvel pelo transporte de oxignio nos animais. Enquanto que a mioglobina tem um papel de armazenamento de oxignio. Esta diferena de funes das duas protenas deve-se ao facto de a curva de ligao com o oxignio (ou curva de saturao da mioglobina pelo O2) ser hiperblica. Ou seja, ela vai saturar para presses de O 2 ainda relativamente baixas. Logo como o P O2 no sangue venoso de 40 mmg Hg e no msculo activo de 20 mmg Hg, ela no vai ter muita tendncia para libertar o oxignio. Como tanto a mioglobina e a hemoglobina tm como principais ligandos o O 2 de prever que tenham estruturas relativamente semelhanas. A hemoglobina uma protena tetramrica que contm quatro grupos prostticos. A hemoglobina adulta contm dois tipos de globina: (141 resduos) e (146 resduos). J a mioglobina idntica a uma subunidade da hemoglobina. A estrutura quartenria da hemoglobina, parcialmente oxigenada, descrita como estado T, tenso, e a da hemoglobina totalmente oxigenada (HbO2) como estado R, relaxado. Estes estados so usados para descrever estruturas quartenrias de enzimas alostricas, onde no estado T tem menor afinidade pelo substracto. No nosso caso, uma hemoglobina no estado R tem maior afinidade com o O2. Para que o oxignio se ligue hemoglobina e se liberte quando chega aos tecidos perifricos, a hemoglobina varia do estado R para o estado T consoante precise de uma maior afinidade ou menor, respectivamente - efeito cooperativo positivo - a presena de O2 na hemoglobina aumenta a afinidade desta para o O2. Pode-se ento considerar a hemoglobina uma protena alostrica, ou seja, quando um ligando se liga vai afectar os outros stios de ligao da protena.

Equao Hill Sendo n o nmero de stios de ligao na protena e usando a varivel (fraco de stios de ligao que esto ocupados na protena) chega-se equao de Hill: 1-

log ___

= n log[L] log Kd

A equao de Hill pretende assim quantificar o efeito cooperativo da ligao de molculas de ligandos numa protena. Normalmente, esta equao representada num grfico com eixo das abcissas com valores log[L] e nas ordenadas com log[/(1-)]. Experimentalmente, verificou-se que o valor do declive da recta no n nmero de stios de ligao na protena, mas sim um grau da cooperatividade entre eles, representando-se por nH, o chamado coeficiente de Hill. O valor deste coeficiente indica-nos ento o tipo de interaco que existe entre a ligao de ligandos na protena.

nH > 1 - H uma cooperao positiva na ligao dos ligandos: a ligao de uma molcula de ligando favorece a ligao de outras, o que acontece por exemplo na hemoglobina e com o oxignio como ligando. nH < 1 A ligao de um ligando prejudica ou at mesmo impede a ligao de outras molculas cooperao negativa. Este o caso mais raro. nH = 1 - O caso no-cooperativo: a ligao dos ligandos protena no afecta outras ligaes. Modelos de mecanismos de Cooperatividade Modelo MWC ou concertado Este modelo assume que as subunidades de uma protena so idnticas funcionalmente, cada uma delas com pelo menos 2 conformaes: inactiva (pouca afinidade) ou activa (muita afinidade). As subunidades mudam de forma simultaneamente e como tal a protena tem sempre as subunidades em equilbrio. um modelo de tudo-ou-nada. No caso concreto da hemoglobina, quando h uma ou mais ligaes de ligandos forma inactiva (que mais estvel quando no existem ligandos) tende a transitar o sistema para a forma activa. Modelo sequencial A ligao dos ligandos protena pode induzir uma mudana na conformao de uma subunidade especfica da mesma, que por sua vez aumenta a probabilidade de haver mudana de conformaes em subunidades adjacentes ou at a ligao de molculas de ligandos. Isto possibilita uma muito maior variedade de estados intermedirios do que no modelo anterior. As caractersticas destes mecanismos aplicadas s molculas de mioglobina e hemoglobina normal j foram descritas, no entanto falta ainda focar mais alguns pontos, nomeadamente a hemoglobina fetal. A hemoglobina normal apresenta 2 subunidades e 2 ; por seu lado a fetal, possui 2 subunidades em vez das . Isto vai ser importante porque esse tetramero tem muito menor afinidade para uma substncia chamada BCG (2,3-bifosfoglicerato), que inibidora da ligao aos ligandos de oxignio, do que o presente na hemoglobina normal. Assim, a hemoglobina fetal tem uma maior capacidade de afinidade ao O 2, o que vai ser muito til dado que o feto tem de retirar o O 2 necessrio sua sobrevivncia do sangue da me. No entanto, esta diferena expe mais o feto a intoxicaes em ambientes de elevada concentrao de CO, pois a hemoglobina fetal possui tambm uma maior afinidade ao CO.

4-ENZIMAS Natureza qumica, estrutural, tipos de actividade (classificao), especificidade, stio activo, substracto, cofactores e efectores. Caracterizao qumica e energtica de uma reaco enzimtica, energia de ligao, energia livre,, energia de activao. Constantes de equilbrio, velocidade e afinidade; equao de velocidade; estado de transio. Tipos de catlise enzimtica e factores adicionais (cido-base, covalente, ies metlicos ). Efeito de pH, temperatura e concentrao de intervenientes nas reaces.

Enzimas
As enzimas so biocatalisadores permitem catalisar reaces qumicas que viabilizam as vias metablicas em tempo til e de uma forma selectiva; a sua aco consiste em aumentar a velocidade com que se atinge o estado de equilbrio da reaco. A grande maioria das enzimas so protenas, exceptuando algumas molculas de RNA com funo cataltica, denominadas ribozimas. As enzimas proteicas podem possuir estrutura terciria ou quaternria, ou seja, uma ou mais cadeias polipeptdicas lineares, com estabelecimento de interaces entre os resduos de aminocidos das cadeias (pontes de hidrognio, ligaes dissulfito), conferindo uma estrutura tridimensional compacta, e, no caso de estrutura quaternria, existe associao de cadeias polipeptdicas por meio de ligaes no covalentes ou pontes S-S-. A perda da estrutura tridimensional nativa das enzimas implica a perda da sua actividade cataltica. Classificao das enzimas (com base no tipo de reaces que catalisam): o Oxiredutases: catalisam reaces redox entre dois subtractos. o Transferases: transferncia de grupos funcionais entre duas molculas. o Hidrolases: catalisam a ciso de uma molcula, por hidrlise (consumo de uma molcula de gua), ficando uma das molculas resultantes com um H e a outra com um grupo OH no local onde a ligao foi quebrada. o Liases: adio ou remoo de grupos, com, respectivamente, quebra ou formao de ligaes duplas. o Isomerases: catalisam reaces de rearranjo molecular da qual resultam ismeros do substrato. o Ligases: catalisam o estabelecimento de ligaes covalentes entre molculas por condensao, utilizando a energia da hidrlise do ATP. O composto reagente da reaco a ser catalisada designa-se por substrato. Existem zonas localizadas na molcula, os centros activos, formados pelo conjunto das cadeias laterais dos resduos de aminocidos da enzima que efectivamente intervm na reaco de catlise stio cataltico, e pelo stio de ligao: regio da enzima que adquire complementariedade com o substrato, na qual se estabelecem as interaces no-covalentes (inicas, pontes de hidrognio e/ou interaces de van der Waals ). A aco enzimtica apresenta elevada especificidade: apenas quando ocorre o reconhecimento, por parte do centro activo, de um determinado substrato, que se d a reaco de catlise. Primeiramente, foi proposto o modelo de chave-fechadura, por Fischer (centro activo e substrato teriam formas complementares, o que possibilitava a sua ligao). Actualmente, o modelo mais aceite o de Koshland modelo de chave induzida ocorre reconhecimento dinmico do substrato, quando este se liga no centro activo, que adapta a sua forma ao subtrato, adquirindo assim a sua funcionalidade.

Algumas enzimas requerem um cofactor, que pode ser um ou mais ies metlicos (Fe, Mg2+ ou Zn2+) ou um complexo orgnico ou metalorgnico denominado coenzima (actuam como carregadores transitrios de grupos funcionais especficos). Algumas necessitam de ambos (cofactor e coenzima). As coenzimas ou cofactores que esto intimamente ligados enzima proteica (at por ligaes covalentes) so designados por grupos prostticos. A parte proteica da enzima designada por apoenzima. A sua ligao ao cofactor e/ou coenzima forma a holoenzima. Existem locais especficos nas enzimas centros alostricos, nos quais se ligam os efectores: pequenas molculas capazes de alterar a actividade biolgica de uma protena. Numa reaco enzimtica, os substratos (reagentes) transformam-se em produtos atravs de caminhos metablicos (srie de reaces enzimticas consecutivas em que se formam intermedirios metablicos ou metabolitos). Uns desses caminhos conduzem degradao de substratos (catabolismo) e outros sua biossntese (anabolismo). Enzima + Substrato [Complexo Enzima-Substrato] [Complexo Enzima-Produto] Enzima + Produto Muitas reaces so aceleradas pelo fornecimento de energia ao sistema (o que promove a agitao molecular). Energia de activao: energia que necessrio fornecer ao sistema para se iniciar uma reaco qumica; quanto mais elevada, mais difcil ser alcanar o estado de transio entre substrato e produto, diminuindo a velocidade de reaco Os catalisadores: o Reduzem a energia de activao necessria para que ocorram as reaces qumicas que catalisam. o No alteram o equilbrio qumico das reaces em que participam. o No so destrudos pelo efeito da reaco. As molculas orgnicas so muito estveis no meio celular, logo, necessria uma grande energia de activao para que possam reagir. A funo das enzimas , portanto, reduzir essa elevada energia de activao e, consequentemente, facilitar a ocorrncia dessas reaces. A reaco pode ser acelerada na ordem dos milhes de vezes. Energia livre de Gibbs: critrio de espontaneidade de um processo qumico; independente do percurso da transformao, ou seja, independente do mecanismo molecular e no permite inferir sobre a velocidade de uma reaco; constitui parte da variao da energia total que se encontra disponvel no sistema para realizar trabalho mecnico. G = H - T S o G variao de energia livre de Gibbs de um sistema biolgico em transformao, a presso e temperatura constantes o H variao de entalpia do sistema o T temperatura absoluta o S variao de entropia o Se G negativa, a reaco ocorre espontaneamente o Se G positiva, a reaco no ocorre espontaneamente o Se G nula, a reaco encontra-se em equilbrio Energia de ligao: energia libertada aquando da formao do complexo enzima-substrato; maior fonte de energia livre usada pelas enzimas para reduzir a energia de activao; contribui para a especificidade (permite enzima distinguir o substrato e molculas competidoras) e para a catlise da reaco; O poder cataltico das enzimas deve-se energia livre libertada na formao de ligaes fracas e interaces entre a enzima e o substrato. Estas interaces fracas so optimizadas no estado de transio da reaco: o centro activo das enzimas complementar no s ao substrato mas tambm aos complexos que se formam durante a catlise. Constantes de Equilbrio: k1 k2 k3 o E + S [Complexo E-S] [Complexo E-P] E + P o K1: constante de equilbrio de formao do complexo enzima-substrato k1= [Complexo ES ] [ Enzima ][ Substrato ]

[Complexo EP ] [Complexo ES ] [ Enzima][Pr oduto ] o K3: constante de equilbrio de formao do enzima k3= [Complexo EP ] Velocidade da reaco: quantidade de produto formada por unidade de tempo

K2: constante de equilbrio de formao do complexo enzima-produto k2=

Vmx * [ Substrato] K m + [ Substrato ] Estado de transio: altura em que o substrato est preparado para se transformar em produto e corresponde complementaridade mxima entre enzima e substrato. Mecanismos catalticos: As enzimas, tal como outros catalisadores, vo baixar a energia de activao duma determinada reaco. Aumentando a velocidade desta da ordem de 10 6 a 10 12 vezes. Catlise cido-base: 1. Catlise bsica: processo pelo qual a velocidade da reaco aumentada por remoo parcial de protes por uma base. 2. Catlise cida: processo pelo qual protes parciais se transferem de um cido a vo baixar a energia de transio de uma reaco. 3. Catalise cido-base: algumas reaces comportam os dois processos. Catalise covalente: acelera a reaco atravs da formao de uma ligao covalente catalisador substrato. Esta ligao formada pela reaco de um grupo nuclefilo catalisado com um electrfilo no substrato. Quanto mais estvel dor a ligao covalente, mais difcil decompor a reaco nos seus passos finais. Decomposio da catalise covalente em trs partes: 1. A reaco nuclefila entre o catalisador e o substrato para formar uma ligao covalente; 2. A troca de electres do centro de reaco com o agora electrfilo catalisador; 3. A eliminao do catalisador. Catlise metal inica: entre um quarto a um tero de todas as enzimas conhecidas exigem um io metlico para a sua actividade. 1. Enzimas metal activadas: ligam ies metlicos de solues, usualmente metais alcalinos ou alcalino-terrosos. 2. Metaloenzimas: contm como cofactores ies metlicos. 3. A interveno dos ies metlicos no processo cataltico pode realizar-se das seguintes formas: - Ligando-se aos substratos, de maneira a orienta-los adequadamente para a reaco. - Permitindo reaces redox, atravs de mudanas reversveis nos seus estados de oxidao. - Atravs da estabilizao electrosttica ou blindando as cargas negativas. Alm dos tipos de catlise acima descritos existem ainda trs outros tipos: - Catlise electrosttica; - Catlise atravs de proximidade e efeitos de orientao; - Catlise por preferncia de ligao do estado de transio. Influncia do pH na actividade enzimtica: Existe um valor de pH ptimo, para o qual a actividade enzimtica mxima. Uma mudana no pH altera a ionizao das cadeias laterais dos resduos de aminocidos da enzima, podendo provocar desnaturao. Influncia da temperatura na actividade enzimtica: assim como para o pH, existe um valor de temperatura ptimo, para o qual a actividade enzimtica mxima. Acima deste valor comea a ocorrer a desnaturao proteica, e abaixo desse valor, devido diminuio da coliso molecular, diminuindo a probabilidade de estabelecimento da ligao enzima-substrato. Influncia da concentrao do substrato: Para um determinado valor de pH e temperatura, a velocidade da reaco aumenta com o aumento da concentrao do substrato, at se atingir um mximo, a partir do qual ocorre a saturao das enzimas (quando todas as enzimas esto na forma do complexo enzima-substrato, havendo substrato excedente).
Equao de Michaelis-Menten: V=

6-CINTICA ENZIMTICA

Definio,deduo da equao de Michaelis- Menten, e respectiva aplicao; clculo da actividade enzimtica pela equao de Lineweaver-Burk. Inibio reversvel e irreversvel. Utilizar como exemplos de aplicao as reaces enzimticas catalisadas pela hexocinase, lisozima e quimotripsina.

Os bioqumicos servem-se geralmente de vrios processos para estudar os mecanismos de aco das enzimas. bastante comum partir da anlise da estrutura tridimensional da protena e dos processos qumicos clssicos associados, cuja anlise hoje em dia j evoluiu ao ponto de se conhecer o papel individual dos aminocidos na estrutura de uma enzima. No entanto, embora seja o mtodo mais antigo, continua a ser determinante a cintica enzimtica, que consiste no estudo da taxa e velocidades de reaco, e a forma como estas so alteradas atravs de parmetros experimentais. Tais parmetros tm hoje importantssimas aplicaes na indstria alimentar, no fabrico de frmacos, em tecnologias ambientais, Consideremos a ttulo de exemplo a reaco A 2 + B A + AB. Para que esta acontea, necessrio que as molculas de A2 e B se aproximem uma da outra, ultrapassando as repulses electrnicas existentes. Por outro lado, a interaco estabelecida ter de ser suficientemente forte para quebrar a ligao em A 2 e vencer interaces electrostticas transitrias. Esta uma barreira energtica que se designa energia de activao. Podem esquematizar-se as variaes energticas ao longo de uma transformao qumica em diagramas de estados de transio como este aqui apresentado. Temos no eixo das ordenadas a energia livre de Gibbs, G, com estados previamente estabelecidos em condies padro. No eixo das abcissas apresenta-se uma coordenada reaccional, que traduz o progresso da reaco. A energia livre de activao, G, a diferena energtica entre o complexo de transio e os reagentes. Por outro lado temos a variao da energia livre de Gibbs padro da reaco, G0, que a diferena energtica entre os produtos e os reagentes nos estados padro. de salientar que G e G0 so independentes entre si: enquanto a primeira sempre positiva, G0 pode ser positiva, em reaces endoenergticas, ou negativa, no caso de reaces exoenergticas. Recorde-se que G0 = -R T ln Ke, pelo que se observa que a energia livre de activao dita a posio de equilbrio. A uma dada temperatura, nada se pode fazer para alterar o equilbrio termodinmico, mas podem alterarse as condies da reaco, de modo a alterar as velocidades da mesma. com este mesmo intuito que se utilizam catalisadores, que diminuem a energia de activao. Tal bastante til, pois o meio celular aquoso a pH neutro, no muito favorvel ocorrncia de reaces espontneas. [Mecanismo de Michaelis-Menten] Antes de mais nada, h que referir dois conceitos importantes para a definio do mecanismo em questo: Velocidade de Reaco quantidade de produto formada por unidade de tempo; Unidade de actividade (U) quantidade de enzima que catalisa a transformao de um mmol substrato/min, em condies standard. A velocidade inicial de uma reaco catalisada por uma enzima pode ser estimada recorrendo ao clculo do declive da recta tangente ao grfico produto formado/tempo dessa mesma reaco, no seu ponto inicial. Verifica-se tambm, empiricamente, que a velocidade inicial de uma reaco catalisada por uma enzima directamente proporcional concentrao se substrato, pelo menos para baixas concentraes deste, sendo que, para valores mais elevados, se observa que o valor da velocidade em cada instante tende para um valor assimpttico, Vmx. A relao entre v0 e a concentrao do substrato tem uma forma hiperblica. Foi a partir destas observaes que Henri e, posteriormente, Leonor Michaelis e Maud Menten formularam uma hiptese para o mecanismo de aco enzimtica, o qual se desenvolvia em dois passos: formao do complexo

enzima substrato e a transformao do complexo em produto e enzima livre (este processo mais lento que o anterior).

Nesta equao considera-se uma situao de equilbrio qumico, sendo que a reaco da passagem do complexo enzima-substrato a produto e enzima livre se toma como irreversvel dado no momento do clculo da velocidade inicial a reaco inversa ainda no ter ocorrido o segundo passo da equao atingir muito mais rapidamente o equilbrio que o terceiro. A esta concluso chegaram Briggs e Haldane, que formularam a hiptese do estado estacionrio, segundo a qual a concentrao do complexo ES mantm-se aproximadamente invarivel no intervalo de tempo em que v0 est a ser medida. Pela hiptese do estado estacionrio, podem tambm tirar-se as seguintes concluses: vformao ES = k1 [E][S] vdecomposio de ES =k-1[ES] + k2[ES] k1 [E][S] = k -1[ES] + k2[ES] tambm conhecido que a a quantidade de enzima presente num dado meio a soma da quantidade dessa enzima livre e a que est associada ao substrato. como equao de Michaelis-Menten A partir destas consideraes, recorrendo a clculos, Briggs e Haldane chegaram aquela que conhecida

V Vmax
Esta equao pode-se traduzir por um grfico

S S Km

Para baixos valores de concentrao de soluto, verifica-se que a velocidade da reaco aumenta de forma proporcional com o soluto. Para valores altos de soluto, a velocidade tende para um valor assimpttico V max. KM , a constante de Michaelis, um valor, especfico para cada enzima, que nos permite caracteriz-la, dado ser impossvel calcular o valor da concentrao de soluto no qual atingida a velocidade mxima. Tem o valor de Vmax/2 e tanto menor quanto maior a afinidade da enzima para com o substrato. [Mtodos para determinao de Vmx e Km] Para determinar estas duas constantes cinticas recorre-se a formas linearizadas da constante de MichaelisMenten. Entre estes mtodos destacam-se os seguintes: -Lineweaver-Burk (em que temos 1/v0 em funo de 1/[S]) -Hanes-Woolf ([S]/ v0 em funo de [S]) -Eadie-Hofstee (v0 em funo de v0/[S]) [Lineweaver-Burk]

Invertendo a equao de Michaelis-Menten obtemos uma expresso para o grfico de Lineweaver-Burk:

v0

Vmx. S 1 Km S 1 Km Km S v0 Vmx. S v0 Vmx. S 1 Km 1 . v0 Vmx S 1 Vmx

S Vmx. S

Facilmente comparamos esta expresso com a equao geral de uma recta (y=mx+b). Assim vamos ter (1/ v 0) em funo de (1/[S]) numa recta com declive (K m/Vmx) e que cruza o eixo das ordenadas em (1/V mx) e o eixo das abcissas em (-1/Km). Embora apresente algumas desvantagens em relao a outras linearizaes da equao de Michaelis-Menten, este mtodo permite-nos determinar Km e Vmx com muito mais rigor que a curva de v0 em funo de [S], permitindo ainda visualizar rapidamente o comportamento cintico do enzima em estudo. A maior desvantagem desta linearizao que a maioria dos valores experimentais so realizados com [S] relativamente elevadas e ficam acumulados no lado esquerdo do grfico. Por outro lado, para [S] relativamente baixas, pequenos erros de v 0 transformam-se em erros muito maiores de 1/V, o que pode originar grandes erros de K m e de Vmx. Os inibidores enzimticos funcionam como agentes que interferem com o normal processo de catlise, tornando-o mais lento ou mesmo no vivel. As enzimas catalisam praticamente todos os processos celulares, da que os inibidores enzimticos sejam frmacos extremamente importantes. Existem dois tipos de inibio, irreversvel e reversvel . Fala-se de inibio irreversvel quando a actividade enzimtica no recupervel num intervalo de tempo de interesse, sendo que como caso extremo temos os inibidores suicidas, que procuram um local especfico para se ligarem, e que destroem a enzima uma vez que o encontram. Por outro lado, fala-se de inibio reversvel quando os inibidores se ligam de modo no covalente, o que faz com que a actividade seja recuperada assim que estes se desligam. A inibio reversvel pode ser de trs tipos: competitiva, no competitiva e mista. Na inibio competitiva, o inibidor compete directamente com o substrato pelo centro de ligao da enzima. Geralmente, estes inibidores tm semelhanas estruturais com o substrato para se conseguirem ligar, mas no reagem com a enzima. A ligao do substrato ao enzima resulta na formao de produto, o que no acontece quando se liga ao enzima uma molcula de inibidor. Uma inibio deste tipo diminui medida que se aumenta a concentrao de substrato, uma vez que para concentraes mais elevadas, mais provvel que o enzima se ligue ao substrato que ao inibidor. Analisando o grfico de Lineweaver-Burk, pode observar-se que o aumento de concentrao do inibidor induz o aumento de Km, enquanto Vmx no sofre alterao. Temos como exemplo teraputico da utilizao de inibidores competitivos as sulfamidas, que vo impedir a existncia de precursores do DNA e RNA, impedindo crescimento bacteriano. A inibio no competitiva caracteriza-se pelo facto de o inibidor se ligar exclusivamente ao complexo ES e no ao enzima livre. Assim, possvel a existncia de dois tipos de complexos, ES e ESI, sendo que apenas se verifica reaco quando se tem o complexo ES. Assim, medida que aumenta a concentrao de substrato, aumenta a inibio. Analisando o grfico de Lineweaver-Burk, verifica-se que ambos os parmetros sofrem diminuio com o aumento da concentrao de inibidor. Na inibio mista, a concentrao de substrato no afecta a ligao do inibidor, uma vez que estes se ligam em locas diferentes do centro activo do enzima. Tendo em conta que a ligao do inibidor no afecta a ligao do substrato, podem formar-se trs tipos de complexos, ES, EI e EIS, sendo que o nico que permite a existncia de reaco activa o complexo ES. Relativamente aos parmetros cinticos, Km mantm-se, pois a aco do inibidor no afecta a ligao do substrato, enquanto Vmx diminui, pois a ligao do substrato ao enzima tem um efeito idntico diminuio total de

enzima. Temos como exemplo de utilizao da inibio mista a fosfatase cida, que impede, assim, a desfosforilao do Glicerol-P. A quimotripsina uma enzima que pode fazer protelise, que consiste na digesto celular por enzimas de protenas. uma enzima sintetizada no pncreas e cliva os pptidos no seu grupo carboxil a principalmente 3 aminocidos essenciais: a tirosina, o triptofano e a fenilalanina. Para o estudo da cintica desta enzima, muito importante o facto de o intermedirio enzima-substrato p-nitrofenolato ter colorao amarela, pois permite obter a concentrao do mesmo atravs da absorvncia a 400 nm. A reaco enzimtica processa-se em duas fases: o grupo acilo que adicionado na primeira (reaco rpida) retirado na segunda (estado estacionrio), voltando a enzima ao seu estado original. Lisozima uma enzima descoberta acidentalmente pelo mdico escocs Alexander Fleming, em 1922. Este encontrava-se constipado e deixou cair algumas gotas de muco nasal numa cultura de bactrias, verificando que algumas morreram. um polipptido extrado da clara de ovo de galinha, constitudo por 129 aminocidos. Apresenta actividade enzimtica, traduzida na capacidade de catalisar a hidrlise das ligaes (1-4) entre o cido N-acetilmurmico e a N-acetilglucosamina nas membranas externas de diversas espcies bacterianas, nomeadamente organismos gram-positivos. De modo geral, obtida na forma de cloro-hidrato. encontrada nas lgrimas e no muco dos seres humanos. tambm produzida pelas bactrias e por outros organismos. Ela digere certos carbo-hidratos de alto peso molecular; assim as bactrias que contm esses carbo-hidratos na estrutura de sua parede celular desintegram-se ou partem-se sob a aco da lisozima. A hexocinase uma enzima que fosforila hexoses em hexose-fosfato, sendo que na maioria dos tecidos, a hexose fosforilada a glicose (substrato) em glicose-6-fosfato (produto). H quatro tipos de hexocinases nos mamferos: I, II, III e IV (so isozimas). As hexocinases I, II e III so chamadas isozimas low-Km por apresentarem uma grande afinidade com a glicose, mesmo em baixas concentraes. Alm disso todas as 3 enzimas so inibidas pelo produto da reaco que catalizam, a glicose-6fosfato. As hexocinases I e II seguem a cintica de Michaelis-Menten.

7-REGULAO ENZIMTICA Enzimas reguladoras, e tipos de moduladores. Cintica das enzimas reguladoras. Tipos de modulao covalente (fosforilao, adenilao, uridililao, ADP-ribosilao e metilao). Activao de zimognios. Aplicar aos seguintes exemplos de regulao glicognio sntase, glicognio fosforilase e aco de uma protease.
As enzimas reguladoras tm a capacidade de responder a determinados sinais qumicos, inibindo ou aumentando a sua actividade. Estas enzimas fazem parte das vrias enzimas que entram nas vias metablicas e so elas que regulam a actividade destas. A actividade metablica regulada por uma ou mais enzimas reguladoras. Estas enzimas ao catalizarem as primeiras reaces de uma via fazem com que haja um melhor aproveitamento de energia por parte da clula. Estas enzimas so formadas por varias subunidades, ficando o local de regulao e o centro activo em subunidades diferentes.

Os moduladores so compostos capazes de se ligar s enzimas nos seus locais de regulao, subunidades de regulao, alterando a sua actividade. Existem dois tipos de moduladores os positivos e os negativos, que estimulam e inibem, respectivamente, a actividade enzimtica. O mesmo modulador pode actuar como positivo para uma enzima e como negativo para outra. Existem dois tipos de moduladores, os que se ligam por ligaes covalentes s enzimas e os que se ligam por ligaes no covalentes. Os moduladores covalentes podem ligar-se de forma reversvel ou de forma irreversvel s enzimas, as modificaes covalentes nas enzimas fazem com que estas adquiram formas activas ou inactivas. Os moduladores que se ligam de forma no covalente, moduladores alostricos, ligam-se de forma reversvel s enzimas, alterando a sua afinidade para com os substratos. Na modulao alostrica, o modulador alostrico liga-se enzima, na sub unidade reguladora, provocando uma alterao na sua subunidade cataltica. Se o regulador for positivo, a subunidade cataltica adquire uma forma que se adapta perfeitamente ao substrato aumentando assim a actividade cataltica, se o modulador for negativo a subunidade cataltica alterada de forma a no se adaptar ao substrato. Um mecanismo de regulao alostrico a inibio por feed back, em que o produto final de uma via metablica actua como inibidor da enzima reguladora dessa via. Quando o produto est em excesso na clula este inibe a actividade da enzima reguladora fazendo com que no se produza mais desse produto, regulando assim a actividade metablica consoante as necessidades celulares. Uma outra importante classe de enzimas reguladoras inclui as enzimas cuja actividade cataltica modulada (condicionada) por modificaes covalentes na sua estrutura. As modificaes referidas traduzem-se pela adio de grupos fosfato, adenina monofosfatada, uracilo monofosfatado, ribosil adenosida difosfatada ou metilo. Estes grupos so geralmente ligados s e removidos das enzimas reguladoras por diferentes enzimas. A actividade de muitas enzimas regulada por modificaes de natureza covalente que se conjugam com modificaes alostricas (no covalentes) e as ampliam. Como exemplos tem-se o controlo do transporte atravs dos canais membranrios (caso que se explica mais adiante) e o das protenas-alvo. Relativo a cada uma das modificaes conformacionais referidas existe um tipo de modulao covalente. Estes tipos de modulao designam-se por Fosforilao, Adenilao, Uridililao, ADPRibosilao e Metilao. A fosforilao o tipo de modulao covalente mais comum. Mais concretamente sabe-se que a actividade cataltica de um tero a metade de todas as enzimas numa clula eucaritica activada ou inibida por fosforilaes ou desfosforilaes. Assim esta modificao covalente de facto crucial para a regulao de um elevado nmero de processos metablicos. Resumidamente a fosforilao implica a adio de um grupo fosfato (PO4) a um resduo de aminocido especfico de uma cadeia proteica da enzima reguladora. O grupo fosfato (muito negativo) quando introduzido na estrutura proteica causa radicais alteraes conformacionais alterando as interaces (pontes de hidrognio) que antes se estabeleciam entre os vrios aminocidos constituintes. De facto uma

enzima apolar e hidrofbica pode-se tornar polar e hidrfilica. Algumas enzimas so activadas sob a forma fosforilada, enquanto outras so inactivas sob esta forma. As enzimas que catalizam as fosforilaes designam-se cinases e as que catalizam as desfosforilaes designam-se fosfatases. Algumas enzimas reguladoras tm apenas um resduo fosforilado contudo outras podem ter vrias dezenas de resduos fosforilados. O ltimo caso traduz uma poli-fosforilao. A poli-fosforilao de uma enzima confere-lhe um carcter regulador muito preciso. Como exemplo de tal tem-se a protena p53 que possui 18 locais de fosforilao e contribui para a manuteno da integridade do material gentico e para o bom funcionamento do ciclo celular. Este caso de poli-fosforilao mostra o nvel de preciosismo que envolve a actividade reguladora deste tipo de enzima pois a mesma, quando muito activa, pode desencadear a apoptose da clula e, quando muito inactiva, torna-se provvel o desenvolvimento de cancro. Relembrando que o transporte activo de ies pela membrana celular pode ocorrer custa da energia fornecida pela hidrlise do ATP temos como exemplo importante deste a Bomba de Sdio Potssio. Este transporte mantm os nveis dos ies Na+ e K+ nas clulas nervosas e um dos processos de transporte melhor estudados. Este processo utiliza tambm uma protena transportadora integrada na membrana. Esta protena constituda por duas subunidades, uma das quais responsvel hidrlise do ATP e pela ligao do grupo fosfato outra unidade. De facto existe neste transporte uma fosforilao e portanto alterao da conformao da protena, que abre um canal ou poro atravs do qual trs Na+ so libertados para o exterior. Entretanto a ligao ao grupo fosfato hidrolisada, ocorrendo nova alterao conformacional que regenera a forma original da enzima e permite a entrada na clula de dois ies K+. A enzima representada no esquema a cinzento trata-se da fosforilase b (menos activa) que depois de aceitar dois fosfatos fornecidos por duas molculas de ATP sofre alteraes conformacionais e se torna a fosforilase a (mais activa) e representada no esquema a azula claro. No que diz respeito modulao covalente designada por adenilao tem-se uma adio por ligao covalente de uma grupo adenina monofosfato (AMP). Na modulao covalente designada por uridililao tem-se uma adio por ligao covalente de um grupo uracilo monofosfato. Tal como em todas as outras modulaes temos como resultado de uma ligao covalente de grupos especficos s enzimas reguladoras, alteraes na conformao espacial destas. Estas alteraes permitem obter enzimas nas formas menos ou mais activas e assim regular os muitos processos metablicos que delas dependem. ADP ribosilao um tipo de modulao covalente, em que apenas vai ocorrer numa pequena quantidade de enzimas. Esta modulao ocorre devido a uma enzima designada por ADP-ribose, em que esta deriva da nicotinamida adenina dinucleotida (NAD). A ADP ribosilao ocorre na enzima bacteriana dinitrogenase reductase - e devido a essa ocorrncia que regula um importante processo biolgico

designado por fixao de azoto. Duas enzimas que catalisam este tipo de modulao de muitos e importantes enzimas celulares ou protenas so as toxinas Difteria e Clera. Pode-se designar a metilao como um tipo de modulao covalente em que ocorre a substituio num resduo de aminocido de um hidrognio por um grupo metilo - CH3. Quando esta ocorre em sistemas biolgicos ser catalisada por enzimas. Est envolvida em processos distintos como: modificao de metais pesados, regulao da expresso gnica e no metabolismo de RNA. Pode-se definir a metilao, por outras palavras, como a adio do grupo CH3 a resduos de arginina ou lisina, em que a mais estudada e conhecida a metilao de histonas. Um dos exemplos que se pode referir a transferncia de grupos metil de S-adenosil metionina (cofactor) para histonas, em que esta catalisada por enzimas conhecidas como histonas metil transferases. A metilao das histonas pode influenciar a expresso gnica - factor epignico. Relativamente cintica das enzimas reguladoras, podemo-nos referir a um efeito muito particular, designado por Efeito cooperativo do substrato (ou homotrpico positivo) em que a fixao da primeira molcula de substrato ir facilitar a fixao da segunda (caso geral, das seguintes). O efeito cooperativo igualmente manifestado pelos inibidores, que inibem a reaco, e pelos activadores, que activam a reaco. Ao observar o grfico acima, relativamente curva Michaelis-Menten conclui-se que este no traduz a cintica de uma enzima alostrica, pois os efectores alostricos alteram o Km (constante de MichaelisMenten) sem modificar a velocidade mxima. Zimognios Muitas enzimas so sintetizadas como precursores inactivos, e subsequentemente, activadas pela clivagem de uma ou mais ligaes peptdicas especficas. O precursor inactivo designa-se por zimognio (ou proenzima). As formas zimognios so geralmente designadas pelo sufixo ognio depois do nome da enzima (por exemplo: a forma zimognio da quimiotripsina denominada por quimiotripsinogmio). Tambm so designadas muitas vezes pelo prefixo pro antes do nome da enzima (por exemplo: a forma zimognio do colagnio pro-colagnio). A protelise especfica um meio comum de activao de enzimas e outras protenas nos sistemas biolgicos. Nesta activao, as enzimas depois de segregadas sob forma inactiva (proenzima ou zimognio) sofrem uma hidrlise limitada ruptura de um ou mais fragmentos peptdicos que modifica a estrutura da molcula e a torna activa. A razo por que a eliminao de pptidos a partir dos zimognios transforma a protena numa enzima activa decorre de se verificar uma modificao da conformao da molcula e determinados aminocidos, que se encontravam distanciados, poderem aproximar-se de modo a constituir o centro activo da protena enzimtica.

Exemplos de aplicao Glicognio fosforilase e glicognio sintase A degradao do glicognio ocorre atravs da aco da glicognio fosforilase. Esta enzima remove fosforolitacamente um resduo de glicose a partir da quebra de uma ligao da molcula de glicognio. A enzima existe em dois estados conformacionais distintos: uma forma T (tensa, pouco activa) e uma forma R (relaxada, muito activa). Esta enzima s capaz de se ligar ao glicognio quando se encontra na forma R, activa. A forma inactiva da fosforilase um dmero designado fosforilase b. A fosforilase b activada pela adio de quatro grupos fosfato fornecidos pelo ATP, em reaco catalisada pela fosforilase b-cinase. Essa adio de fosfatos leva os dmeros a associarem-se em tetrmeros (fosforilase a). Por outro lado, a fosforilase-fosfatase retira o grupo fosfato e inactiva a fosforilase (fosforilase binactiva). J no caso da glicognio sintase ocorre o oposto. Enquanto que a glicognio fosforilase activada pela fosforilao e inactivada pela desfosforilao, a glicognio sintase inactivada pela fosforilao e activada pela desfosforilao. Em suma, a forma zimognio da glicognio fosforilase designa-se por glicognio fosforilase b e da glicognio sintase por glicognio sintase b. Aco de uma protease Proteases so enzimas que quebram as ligaes pepttidas entre os aminocidos numa protena. A este processo d-se o nome de clivagem proteoltica que consiste num mecanismo de activao e inactivao de enzimas. Estas enzimas tambm podem ser designadas por peptidases ou enzimas proteolticas. Por exemplo a forma inactiva da quimiotripsina, quimiotripsinognio, activada pela aco da tripsina; a forma zimognio da tripsina, tripsinognio, activada pela enterocinase, etc.

10 - NUCLETIDOS E CIDOS NUCLEICOS Nucletidos: Estrutura e composio geral, ligaes fosfodister, conformao, tipos mais comuns e funes especficas (informao gentica, transporte de energia qumica, constituintes de cofactores ou coenzimas, reguladores metablicos). cidos nucleicos: estrutura, conformao, tipos mais comuns e funes gerais especficas.

1. Nucletidos
Cada nucletido constitudo por 3 componentes: uma base azotada, uma pentose e um grupo fosfato. As bases azotadas so organizadas em 2 grupos: as pirimidinas e as purinas (o nome advm, respectivamente, de um composto chamada pirimidina e de outro chamado purina) . As purinas so a adenina (A) e a guanina (G). As pirimidinas so a citosina (C), a timina (T) (exclusiva do DNA) e o uracilo (T) (exclusivo do RNA). As bases e pentoses dos nucletidos so heterocclicas. As pentoses so acares com 5 carbonos. H 2 tipos de pentoses: a desoxirribose e a ribose. So estas que do o nome ao nucletido, respectivamente, desoxirribonucletido ou ribonucletido. Ambos os tipos de pentose esto na sua forma -furanose (anel fechado constitudo por 5 membros). Os tomos de carbono das pentoses so convencionalmente numerados de 1 a 5. Uma molcula que no tem o grupo fosfato, isto , que constituda apenas pelo acar e pela base azotada, chamada nuclesido. Quanto ao grupo fosfato: um nucletido livre contm 3 grupos fosfato, mas quando se liga a outro nucletido (atravs da ligao fosfodister) perde 2 grupos fosfato. A ligao N--glicosdica formada pela remoo de um grupo hidoxilo da pentose e um hidrognio da base azotada. Assim, a base ligada covalentemente ao carbono 1 da pentose atravs de uma ligao N--glicosdica. Chama-se assim, porque a ligao de um tomo de azoto, N, com um acar . Os nucletidos so ligados uns aos outros constituindo uma sequncia nucleotdica, a qual, por sua vez, constitui uma das cadeias do cido nucleico. Os sucessivos nucletidos da referida sequncia nucleotdica so ligados covalentemente atravs de ligaes fosfodister, na qual o grupo fosfato ligado ao carbono 5 se liga ao grupo hidroxilo do carbono 3 do nucletido seguinte. Quando esta ligao ocorre libertada uma molcula de gua.A sequncia tem sempre a direco de crescimento 5-3. A cadeia assim formada dotada de uma polaridade especfica e de 2 fins distintos: um 5`outro 3. Esta sequncia nucleotdica constitui a estrutura primria dos cidos nucleicos. Embora as bases no participem no encadeamento, a sequncia de bases caracterstica de um cido nucleico, pois nela que reside a informao gentica. A conformao de um nucletido afectada pela rotao de 7 diferentes ligaes, 6 das quais rodam livremente. A ligao 4 apenas roda 180. Esta limitao da rotao da ligao 4 afecta os carbonos 2 e 3 e faz com que o nucletido assuma 2 tipos de conformaes: endo ou exo. Esta conformao pode ser endo ou exo. Se o tomo estiver no lado do plano descrito pelo carbono 5 endo; se estiver do lado oposto exo. A ligao 7 vai afectar a ligao das bases. As purinas assumem 2 conformaes: anti ou syn. As pirimidinas, como s tm um anel, ocorrem na conformao anti. Funes especficas dos nucletidos: Subunidades dos cidos nucleicos; Informao gentica;

Transporte de energia qumica; Nucletidos de adenina so constituintes de cofactores; Alguns so reguladores metablicos; Informao gentica.

Transporte de energia qumica: Os nuclesidos podem ser mono-, di- ou trifosfato, de acordo com o nmero de grupos fosfato que esto ligados. Cada um desses grupos so designados por , , e , comeando no fosfato que se encontra ligado pentose, como se pode ver na figura. UTP, GTP e CTP so fontes de energia para diversas reaces, mas o nucletido mais utilizado pela clula para fornecer energia qumica o ATP. A fosfohidrlise do ATP tem um papel muito importante para diversas biossnteses com variao da energia livre de Gibbs positiva, uma vez que, como a hidrlise de ligaes fosfoanidrido (ligaes entre os grupos fosfato , e , ) liberta cerca de 30 kJ/mol , o equilbrio final dessas reaces alterado, favorecendo a formao dos produtos. Nucletidos de adenina so constituintes de cofactores: Os nucletidos de adenina fazem parte da estrutura de uma grande variedade de cofactores com diversas funes e, embora no participem directamente na funo primria do cofactor, a sua remoo diminui consideravelmente a aco deste. Tendo como exemplo a acetoacetilCoA (coenzima A derivada do acetoacetato), a remoo do nucletido de adenina desta coenzima reduz na ordem de 10^6 a reactividade dessa coenzima como substrato de uma enzima do metabolismo dos lpidos, a -cetoacil-CoA transferase. Outros exemplos so o NAD e FAD. Regulao metablica: Os nucletidos podem tambm ser produzidos como mensageiros secundrios nas clulas, provocando alteraes no interior destas, em resposta a sinais qumicos externos (mensageiros primrios). O mais comum o AMPcclico (cAMP), que tem funes reguladoras em todas as clulas, excepto nas vegetais. Outros nucletidos reguladores so: o cGMP e o ppGpp (produzido em bactrias, inibe a sntese de tRNA e rRNA, como resposta a uma diminuio de sntese proteica provocada pela falta de aminocidos disponveis). Informao gentica: A informao gentica est codificada na sequncia linear de quatro desoxirribonucletidos no ADN. A informao est agrupada em unidades codificantes (h zonas no codificantes no ADN), denominadas de codes. Cada codo uma sequncia de trs nucletidos que codifica um aminocido. O RNA o responsvel pela expresso da informao gentica, actuando como intermedirio, uma vez que usa a informao codificada no ADN de forma a especificar a sequncia de aminocidos de uma determinada protena. Portanto a estrutura de cada protena, e consequentemente de todas as biomolculas e componentes celulares, produto da informao contida na sequncia de nucletidos dos cidos nucleicos. A capacidade de armazenar e transmitir a informao gentica aos descendentes uma condio fundamental da vida.

2. cidos Nucleicos
DNA Um importante trabalho para a descoberta da estrutura do DNA foi o de Erwin Chargaff (dcada de 40). Descobriu que os 4 tipos de nucletidos de DNA ocorrem em percentagens diferentes em molculas de DNA de organismos diferentes. Atravs disto foi possvel concluir que: 1) A composio em bases de DNA geralmente varia de uma espcie para outra. 2) Amostras de DNA isoladas de diferentes tecidos de um dado organismo tm a mesma composio de nucletidos. 3) A composio de bases do DNA numa espcie no muda com a idade, estado nutricional ou ambiente de um dado organismo.

4) Em todas as molculas de DNA celular, independentemente da espcie, o nmero de resduos de adenina igual ao nmero de resduos de timina e o n de resduos de citosina igual ao nmero de resduos de guanina. Assim, o nmero de resduos de purinas igual ao nmero de resduos de pirimidinas: A + T = G + C. Estas relaes quantitativas, tambm chamadas as leis de Chargaff, foram a chave para o estabelecimento da estrutura tridimensional do DNA e abriram portas para o conhecimento de como a informao gentica est codificada no DNA (e como processado essa informao). Rosalind Franklin e Maurice Wilkins utilizaram difraco de raios-X para analisar fibras de DNA. Eles mostraram (dcada de 50) que o DNA produz um padro caracterstico de difraco de raios-X. A partir deste padro sups-se que as molculas de DNA seriam helicoidais com duas periodicidades ao longo do seu eixo, uma primria de 3,4 e uma secundria de 34 . Em 1953 Watson e Crick propuseram um modelo tridimensional da estrutura do DNA, que tinha em conta todos os dados recolhidos at altura (relao A-T e C-G). Este modelo consistia numa dupla hlice, de mo direita, de cadeias pulinucleotdicas. As partes hidroflicas das desoxirriboses e grupos fosfato esto voltados para fora, enquanto que as bases azotadas encontram-se no interior da hlice, com os seus anis hidrofbicos de estrutura quase planar, numa posio perpendicular ao eixo. de referir que as desoxirriboses esto na conformao endo C-2. Cada base do nucletido emparelha no mesmo plano com a base complementar na cadeia oposta, estabelecendo ligaes de hidrognio: dupla entre adenina e timina e tripla entre citosina e guanina, da que seja tanto mais difcil separar cadeias de DNA, quanto maior for a %GC. Trabalhos com DNA polimerases mostraram que as duas cadeias so anti-paralelas, isto , tm orientaes opostas. Para ter em conta as periodicidades encontradas nos padres de difraco de fibras de DNA, Watson e Crick observaram que as bases empilhadas verticalmente no interior da dupla hlice esto a 3,4 de distncia. A periodicidade secundria encontrada anteriormente (de 34 ) foi explicada pela presena de cerca de 10 pares de bases em cada volta completa da dupla hlice. Nota: em soluo aquosa, a estrutura altera-se ligeiramente, havendo 10,5 pares de bases, por cada volta da hlice, aumentando a distncia para 36 . A dupla hlice mantida por dois tipos de foras: as ligaes de hidrognio, entre bases complementares, e interaces hidrofbicas entre bases sobrepostas. A complementaridade entre as cadeias de DNA atribui-se ligao de hidrognio entre os pares de bases. As outras interaces, muito menos especficas do que as ligaes de hidrognio, fazem a maior contribuio para a estabilidade da molcula. uma molcula bastante flexvel, podendo haver rotao considervel volta de algumas ligaes pentose-fosfato. Podem ocorrer flutuaes trmicas que causam dobras, estiramentos e desemparelhamento das cadeias complementares. Ao nvel do DNA celular encontramos alguns desvios em relao ao modelo de Watson e Crick, que desempenham importantes funes no metabolismo do DNA. Estas variaes estruturais geralmente no afectam as propriedades chave definidas por Watson e Crick: complementaridade entre cadeias antiparalelas e as requeridas ligaes A-T e G-C. As variaes na estrutura do DNA so o reflexo de trs factores: 1) Diferentes conformaes possveis da desoxiribose. 2) Rotao livre em volta da ligao C-1- N glicosdica. 3) Rotaes nas ligaes da desoxirribose com o grupo fosfato. A estrutura de Watson e Crick tambm chamada DNA forma B (ou B-DNA) e a forma mais estvel existente para a molcula de DNA. Existem no entanto duas variantes bem caracterizadas em estruturas cristalinas, denominadas formas A e Z. A forma A ainda tem a conformao de hlice de mo direita, mas mais larga e tem maior nmero de pares de bases por volta da hlice do que da forma B e as bases azotadas emparelham num plano com cerca de 20 de inclinao. A forma Z tem j a conformao de hlice de mo esquerda, sendo mais estreita do que a forma B e tendo maior nmero de pares de bases por volta da hlice. No se sabe ao certo se a forma A ocorre ou no nas clulas, mas existem provas da existncia da forma Z em tanto procariotas como eucariotas, e pensa-se que pode ter um papel importante na regulao da expresso de alguns genes, ou na recombinao gentica. J foram tambm detectadas variaes de estrutura dependentes da sequncia nucleotdica, que podem afectar a funo e o metabolismo de segmentos de DNA na sua vizinhana. Por exemplo, ocorrem dobras na hlice de DNA, sempre que 4 ou mais resduos adenosina aparecem seguidos numa cadeia. Outro tipo de sequncias so as sequncias palindrmicas. Palindroma , basicamente, uma palavra ou frase que se l da mesma maneira da esquerda para a direita ou vice-versa. O termo aplica-se a regies no DNA com sequncias repetidas na ordem inversa na cadeia complementar. Desta forma, surgem sequncias auto-complementares, dentro de cada cadeia, e portanto tm a capacidade de gerar formas de gancho de cabelo (quando o DNA est sob a forma de cadeia simples) ou forma cruciforme. Quando a repetio invertida ocorre na mm cadeia individual de DNA, a sequncia tem o nome de repetio espelhada, no dando origem a nenhuma conformao especifica.

Outro aspecto a focar que o DNA pode ocorrer em cadeias triplas ou qudruplas. Quanto a cadeias triplas, referese que nucletidos ligados segundo uma ligao normal de Watson e Crick, podem formar ligaes de hidrognio adicionais, sendo que os tomos que participam nessas ligaes adicionais tm o nome de posies de Hoogsteen. O par adicional chamado eemparelhamento de Hoogsteen. Assim, forma-se um triplex de DNA. Este tipo de estrutura mais estveis a pH baixo, pois envolve muitas vezes a ligao de resduos de nucletidos protonados. Quanto a cadeias qudruplas, ocorrem apenas para molculas de DNA com uma percentagem muito elevada de nucletidos de guanina. Uma estrutura rara que ocorre no DNA chamada a H-DNA e encontrada apenas em longas sequncias polipricas ou polipirimidicas, causando uma dobra acentuada na estrutura, fazendo com que uma poro da cadeia exista sob cadeia tripla, em que duas das trs cadeias contm apenas purinas (ou pirimidinas) e a outra contem apenas pirimidinas (ou purinas). RNA A molcula de RNA tem uma muito maior variedade de funes e conformaes do que o DNA, fazendo com que no exista uma estrutura secundria que sirva de base, tal como a dupla hlice era para o DNA. Dos diferentes tipos de RNA destacamos: RNA mensageiro, que transcreve a informao gentica do DNA e a transporta para o citoplasma; RNA ribossomal, que parte integrante do esqueleto dos ribossomas, que so o local de sntese proteica; RNA de transferncia, que funciona como descodificador do cdigo gentico, funcionando como ponte entre informao gentica e sntese proteica; RNAs especiais tais como as ribozimas, catalizando reaces. O RNA ao ser transcrito existe sempre em cadeia simples, adquirindo uma estrutura helicoidal de mo direita, sempre que no existem sequncias auto-complementares ao longo da cadeia polinucleotdica. No caso de existirem essas sequncias, ocorre a formao dos tais ganchos de cabelo falados anteriormente, e no caso de haver falhas na complementaridade de base, podem ocorrer arcos internos, protuberncias. de referir que as estruturas ganchos de cabelo no so estruturas planares, adquirindo tambm uma estrutura helicoidal de mo direita.

11 - BIOMEMBRANAS Composio e estrutura, dinmica dos constituintes, cavolas e receptores, interaco, adeso e fuso membranares. Mecanismos de transporte transmembranar gradientes, difuso, transportadores, energia qumica. Mecanismos de co-transporte, ATPase Na +,K+, ATPase Ca2+, aquoporinas, canais inicos.
Uma biomembrana um tipo de estrutura que delimita todas as clulas vivas. Funciona como uma barreira e caso separe a clula do meio envolvente, chamada membrana plasmtica, se por outro lado delimitar os organitos chamada endomembrana ou membrana intra-celular. As membranas so constitudas por lpidos, protenas e glcidos, variando a sua proporo consoante o tipo de membrana. Ao longo do tempo foram vrios os modelos propostos para a sua ultra-estrutura: primeiramente foi pensado numa simples bicamada fosfolipdica. Este modelo no conseguia explicar a passagem atravs da membrana de molculas polares como a gua, aminocidos ou oses. O valor da tenso superficial de membranas obtido para esse modelo era menor do que o teoricamente previsto. Assim, sabendo que a presena de protenas baixa os valores de tenso superficial, Davson e Danielli proposeram um modelo lipoproteico de membrana: a membrana plasmtica seria constituda por uma bicamada fosfolipdica revestida tanto interna como externamente por protenas. Este modelo no explicava a passagem de molculas apolares pela zona hidrofbica pelo que Davson e Danielli alteraram o seu modelo, acrescentando poros revestidos internamente por protenas, que explicariam a elevada permeabilidade das membranas gua e ies. No entanto certas variaes estruturais e bioqumicas entre diferentes membranas no eram explicveis por este modelo: as membranas mitocondriais, embora contendo maior percentagem de protenas, so mais finas que as membranas plasmticas. Surgiu ento por Singer e Nicholson o modelo actualmente aceite chamado modelo do mosaico fluido, em que a membrana plasmtica uma membrana flexvel mas resistente que consiste maioritariamente em fosfolpidos e protenas (quase todas as protenas so na realidade glicoprotenas). Existem tambm outras molculas presentes em quantidades mais pequenas como o colesterol ou glicolpidos. No entanto a estrutura base da membrana plasmtica a bicamada fosfolipdica que consiste em duas camadas posicionadas inversamente feitas de trs tipos de lpidos: fosfolpidos, colesterol e glicolpidos. No interior dessa bicamada localizam-se as caudas hidrofbicas dos fosfolpidos e superfcie as suas cabeas hidroflicas. As glicoprotenas podem ser de dois tipos: As protenas integradas ou intrnsecas so aproximadamente 70% e penetram na bicamada fosfolipdica. Caso atravessem a membrana de um lado ao outro designam-se por transmembranares. As protenas perifricas ou extrnsecas no penetram a bicamada fosfolipdica, surgindo superfcie ligadas s protenas intrnsecas ou s cabeas hidroflicas dos fosfolpidos por ligaes fracas. A membrana plasmtica permite que algumas substncias entrem e saiam da clula mas restringe a passagem de outras. Esta propriedade das membranas chama-se permeabilidade selectiva. A membrana tem uma estrutura dinmica. Essa fluidez resulta do espao existente a nvel das caudas hidrofbicas dos fosfolpidos. O colesterol pode influenciar a fluidez da membrana, aumentando-a ou diminuindo-a dependendo da temperatura que se considera: reduz a fluidez das membranas a temperaturas moderadas e inibe a solidificao a baixas temperaturas. As molculas de fosfolpidos apresentam mobilidade lateral, podendo alterar a sua posio relativa. Quanto aos movimentos transversais de

fosfolpidos, designados por flip-flop podem ocorrer mas como implicam a passagem da cabea hidroflica pela zona hidrofbica so pouco frequentes, sendo tambm movimentos muito mais lentos que os movimentos laterais. Existe uma assimetria na estrutura da membrana: por exemplo os glcidos ligados s protenas da membrana apenas se localizam na superfcie externa, formando no seu conjunto o glicoclice. Existem ainda assimetrias regionais: uma determinada protena pode localizar-se apenas numa dada regio, contribuindo tal facto para a especializao funcional de diferentes regies da membrana. H certas protenas intrnsecas, chamadas receptores que reconhecem e se ligam a uma molcula especfica que coordena alguma funo celular. Quando os receptores tm contacto com estas molculas, desencadeiam reaces qumicas no interior da clula. Um exemplo de receptor de membrana o Receptor AT1, que a protena responsvel pela interaco da Angiotensina II com as suas clulas alvo, no sistema renina-angiotensina. Os glicolpidos e as glicoprotenas membranares so frequentemente marcadores de identidade celular. Permitem que uma clula reconhea outras clulas do seu tipo durante a formao de tecido ou a reconhecer e a responder a clulas potencialmente perigosas. Outro exemplo disto a determinao dos grupos A-B-O do sangue: isso deve-se a pequenas variaes na estrutura dos glcidos presentes nas protenas da membrana dos eritrcitos. Constantemente vo-se descobrindo novas caractersticas das estruturas das membranas sendo disso exemplo as cavolas: cavidades ou invaginaes da membrana plasmtica. So estruturas ricas em protenas e em lpidos como os esfingolpidos ou o colestrol. A sua principal funo a participao na transduo de sinal, sendo que tambm se pensa ter um papel relevante na endocitose ou na oncognese. As clulas animais possuem certas especializaes membranares responsveis pela coeso celular. Junes especializadas entre as clulas e a matriz extra-celular garantem uma coeso estvel, atravs do estabelecimento de ligaes fortes entre protenas membranares intrnsecas designadas por protenas de adeso celular. Nalguns casos, clulas adjacentes evidenciam estruturas especializadas que as unem ou que restringem a movimentao de substncias atravs do espao intercelular, designadas por junes intercelulares. Localizam-se em tecidos epiteliais, tecidos estes que revestem as superfcies corporais e as cavidades do organismo, de que exemplo o tubo digestivo: As junes apertadas so estruturas especializadas que ligam as clulas epiteliais adjacentes que delimitam uma estrutura oca, como o intestino. Resultam do estabelecimento de ligaes entre protenas membranares especficas e estendem-se a todas a clulas que delimitam as cavidades. Tm por funo impedir a passagem de substncias do lmen atravs dos espaos intercelulares, dando s clulas epiteliais o controlo absoluto das substncias que entram para o organismo, bem como restringir a mobilidade das protenas e fosfolpidos membranares,. Os desmossomas so estruturas membranares especializadas frequentes em tecidos epiteliais sujeitos a ambientes agressivas e que mantm clulas adjacentes firmemente unidas. Cada desmossoma constitudo por uma densa placa na superfcie citoplasmtica da membrana que se encontra ligada a filamentos proteicos do citoesqueleto e a protenas de adeso celular. Estas estabelecem a conexo, atravs do espao intercelular, entre as duas placas citoplasmticas adjacentes. As junes de hiato, ao contrrio das estruturas anteriores, facilitam a comunicao celular entre clulas adjacentes. So constitudas por protenas-canal especializadas pelas quais podem circular pequenas molculas e ies, no permitindo a passagem a protenas, cidos nucleicos ou organelos celulares. So estruturas dinmicas que abrem ou fecham sob a aco de estmulos celulares nomeadamente com a variao do Ca2+ citoplasmtico e com a variao do pH. Fuso membranar um processo fundamental que ocorre quando duas diferentes membranas lipdicas se juntam numa nica e contnua bicamada. As reaces de fuso tm caractersticas comuns, mas so catalizadas por diversas enzimas. Quando as clulas se fundem, as membranas juntam-se num local e criam um ponto de conexo entre as clulas que permite a troca de material. TRANSPORTE PELA MEMBRANA Transporte de pequenas molculas e ies -Transporte Passivo As substncias de tamanho reduzido lipossolveis atravessam a membrana espontaneamente no sentido da maior para a menor concentrao de soluto por difuso simples, sem qualquer gasto energtico.

A esta diferena de concentraes d-se o nome de gradiente de concentrao, com o sentido referido. O equilbrio d-se assim no sentido de eliminar esse gradiente. Essas substncias so molculas pequenas apolares (como o azoto, oxignio e dixido de carbono), pequenas molculas polares mas no carregadas, como a gua. Atingir o equilbrio implica o fim da difuso. Logo, existe um limite para este tipo de transporte, que biologicamente no importante pois temos pequenos desequilbrios constantes a nvel celular, e portanto vemos que a difuso aumenta linearmente com a concentrao de soluto. Contudo, a membrana plasmtica no permevel a ies como K+, Na+, Ca(2+),Cl-, HCO3-, ou a molculas hidroflicas como glicose, nem ainda a macromolculas como protenas e RNA. Assim teremos a difuso facilitada para o seu transporte. Protenas transmembranares (sozinhas ou em complexos) criam poros ou canais na membrana, pelos quais esses compostos referidos so capazes de entrar no meio intracelular. Os canais podem ser regulados conforme as necessidades celulares, mas como falamos em transporte passivo, esta difuso realizada sempre a favor do gradiente. Tais canais so selectivos, isto , a estrutura da protena admite a passagem apenas a certos tipos de molculas. Denota-se que o transporte facilitado limitado pelo nmero de canais proteicos disponveis, onde a velocidade da difuso apenas dependente do gradiente de concentrao. A temperatura um factor importante, proporcional taxa de difuso, devido ao aumento dos movimentos moleculares. Este tipo de difuso pode ser inibido, por ligao de compostos protena transportadora que diminuem a sua afinidade com o substracto, e podemos ter competio se um transportador funcionar para mais que uma substncia. - Transporte Activo Transporte de molculas e ies contra o seu gradiente de concentrao. Assim, a este processo, associa-se sempre gasto de energia. Aqui tambm so essenciais as protenas transportadoras (normalmente associadas em complexos proteicos), que transferem energia para a substncia a ser transportada. De acordo com a via de obteno da energia, teremos dois tipos de transporte activo: Transporte activo primrio o ATP liga-se protena, que utiliza a energia proveniente da sua hidrlise. (Ex: Bomba Na+-K+) Transporte activo secundrio consiste em utilizar a energia para criar um gradiente de um certo composto, para posteriormente utilizar esse gradiente como energia para transportar o produto pretendido. (Ex: Bomba de Protes (H+)) semelhana da difuso facilitada, o transporte activo limitado pelo nmero de transportadores presentes. Transporte em massa (maiores dimenses e quantidades) realizado por meio de vesculas limitadas por uma membrana, visto que apenas as pequenas molculas e ies conseguem ser transportados das formas acima referidas. Endocitose: As vesculas de endocitose formam-se por invaginao, a que se segue uma fuso e separao de um segmento da membrana celular. Transportam substncias para o interior da clula. Exemplos destas vesculas so as vesculas de pinocitose, de pequeno tamanho, que contm apenas fluidos ou solutos. O trfego de substncias do interior para o exterior da clula tem o nome de exocitose, e permite compensar as perdas de membrana ocorridas na endocitose, visto que a membrana da vescula adicionada membrana plasmtica. Fagocitose: um processo em que as clulas, que possuem prolongamentos (pseudpodes), os utilizam para englobar partculas de maiores dimenses, formando vesculas fagocticas, sendo por isso muito importantes a nvel do sistema imunitrio. Transporte Activo Exemplos O transporte activo dividido em dois tipos, primrio e secundrio, de acordo com a fonte energtica usada para accionar o transporte. No transporte activo primrio, a energia deriva, directamente, da hidrlise do ATP. No transporte activo secundrio, a energia deriva, secundariamente, da que foi armazenada na forma

das diferenas de concentrao inica entre os dois lados da membrana, geradas inicialmente pelo transporte activo primrio. Em ambos os casos, o transporte depende de permeases que funcionam atravs da membrana. Entretanto, no transporte activo, a permease funciona de maneira especfica, j que capaz de conferir energia substncia transportada para que ela possa movimentar-se contra gradiente electroqumico. Transporte Activo Primrio Bombas e ATP-ases Nem todas as bombas inicas so ATP-ases porque o ATP no a nica forma de energia. Embora actualmente se conheam diversas bombas inicas, a bomba de sdio-potssio das mais importantes na manuteno do gradiente electroqumico nos animais. A dita bomba uma protena intrnseca da membrana. um tetrmero de duas subunidades transmembranares, 2 e 2 . No domnio citoslico de , encontra-se o stio cataltico para a hidrlise de ATP. Como assimtrica, pode-se explicar que numa das faces internas da protena se liguem trs ies Na2+ e uma molcula de ATP e na outra face apenas se liguem dois ies K +. Ento 3 Na2+ e 1 ATP ligam-se na face interna da bomba. O ATP hidrolisado e o ADP resultante libertado, causando uma conformao na bomba. Os 3 NA 2+ so libertados enquanto os 2 K+ se ligam bomba. O fosfato que se encontrava ligado protena de modo a fornecer energia ao processo libertado, causando outra conformao na bomba e libertando o K+ para o interior da clula, enquanto que o sdio como j vimos bombeado para o exterior. Quanto maior a diferena de concentrao de sdio, maior ser o fluxo de entrada destes ies atravs de canais inicos, criando-se um gradiente electroqumico. este dito gradiente que gera energia que permite o transporte simultneo de substncias contra o seu gradiente de concentrao, ou seja, permite o transporte activo secundrio. J a bomba de clcio existe na membrana plasmtica e membranas internas como a do retculo endoplasmtico. Tem a funo de remover o clcio para o exterior da clula ou para o interior de compartimentos celulares, trocando um io clcio por um proto. Funciona de modo similar bomba de sdio-potssio Transporte Activo Secundrio Co-Transporte O co-transporte um mecanismo de transporte activo atravs do qual uma substncia transportada contra um gradiente electroqumico, aproveitando a "boleia energtica" de uma outra substncia que transportada a favor do seu gradiente electroqumico, podendo ser transportadas no mesmo sentido (Simporte) ou em sentidos opostos (Antiporte). No simporte, glicose e aminocidos so transportados com o auxlio de ies sdio. Assim, a protena transportadora apresenta um local receptor para a fixao do io sdio, voltado para o lado externo da membrana celular, e um stio receptor para a fixao da glicose e aa, tambm voltado para o lado externo da membrana. O sdio e a glicose/aa so transportados para dentro da clula, ou seja, so transportados no mesmo sentido. O transporte da glicose/aa ocorre contra o seu gradiente de concentrao, graas ao transporte simultneo do sdio a favor do seu gradiente electroqumico. Por sua vez, o gradiente electroqumico do sdio mantido pela bomba de sdio-potssio (a qual realiza transporte activo primrio), logo, o transporte de glicose/aa activo secundrio. Como exemplo de antiporte temos o transporte de clcio nas clulas musculares. necessrio o transporte de clcio para o exterior celular, contra o seu gradiente, e isso torna-se possvel com a difuso de sdio para o interior da clula, gerando a energia necessria para o transporte de clcio. Transporte Passivo Difuso Simples atravs de Canais um tipo de transporte passivo j que no ocorre sobre influncia de energia mas sim de gradientes de concentrao. Apesar de existir interferncia de protenas neste tipo de transporte, este considera-se simples e no facilitado j que as protenas no interferem directamente sobre as molculas mas sim criando canais por onde estas passam. Canais Inicos Este transporte est associado a ies, geralmente muito permeveis gua. Neste tipo de transporte h a interveno do gradiente de concentrao e da carga elctrica que interfere no transporte. H uma grande disparidade de canais. Alguns so especficos em relao aos ies que os podem atravessar enquanto outros permitem a passagem de todos os tipos de ies abaixo de um certo tamanho. Alguns canais esto constantemente abertos enquanto outros s o esto momentaneamente. A sua abertura e o seu fecho so regulados por factores especficos do meio. Os fluxos de ies atravs dos canais inicos contribuem para criar um gradiente elctrico atravs da membrana, chamado de potencial de membrana, que faz gerar uma

diferena de potencial entre o meio interno e o meio externo. Este gradiente juntamente com o gradiente de concentrao forma o gradiente electroqumico. A regulao dos canais inicos e efectuada atravs de 3 formas diferentes: Regulao por voltagem (entrada e sada de sdio, potssio e clcio) - Ex.: canais de sdio das clulas musculares. Permanecem fechados quando a membrana plasmtica mantm potencial de repouso (negativo relativamente ao meio intracelular, 90 mV). A despolarizao de um ponto da membrana origina a abertura deste tipo de canais; Regulao por ligantes - So canais receptores que, ao ligarem-se a ligantes especficos, sofrem uma alterao na sua conformao o que determina a sua abertura. Ex.: receptor da acetilcolina; Regulao mecnica Canais que se abrem devido a uma tenso transmitida s protenas da membrana por fibras do citoesqueleto. Aquaporinas Canais membranares para a gua e outros pequenos solutos que tm um papel muito importante na regulao do volume celular e na homeostase e osmoregulao de clulas individuais e de organismos complexos. Estes canais esto bastante distribudos por todos os reinos, incluindo o das bactrias, das plantas e dos mamferos. Mais de 10 diferentes aquaporinas foram encontradas no corpo humano, e muitas doenas, como as cataratas congnitas e um tipo de diabetes esto ligadas ao mau funcionamento destes canais. So compostos por protenas tetramricas que podem ser reguladas (aquaporina responsvel pelo aumento da permeabilidade gua no epitlio dos tbulos colectores do rim) ou constitutivas (aquaporina do epitlio dos tbulos renais proximais). As aquaporinas so uma das matrias de estudo em desenvolvimento neste sculo. Uma nota histrica: Sabe-se da existncia delas em membranas biolgicas desde o final dos anos 50, tendo a caracterizao do mecanismo de transporte sido descrita nos anos 80. A identificao molecular feita por Peter Agre em 1992 permitiu observar a sua ampla distribuio na natureza em clulas animais, vegetais e microbianas. A resoluo da estrutura molecular de uma aquaporina, realizada em 2000/2001, foi galardoada com a atribuio do Nobel da Qumica em 2003.

8 - GLCIDOS SIMPLES Monossacridos: Tipos estruturais mais comuns (aldoses e cetoses), ismeros, frmulas estruturais, derivados, reactividade. Dissacridos: tipos biolgicos mais comuns, ligao 0glicosdica, propriedade redutora. Polissacridos (ou glicanos): tipos mais comuns, ligaes em cadeia linear e ramificada, configurao, derivados, funes celulares. Glcidos complexos: proteoglicanos, glicoprotenas e glicolpidos: caracterizao estrutural, tipos mais comuns e funes celulares. 9 - LPIDOS SIMPLES E COMPLEXOS cidos gordos, triacilglicerois, glicerofosfolpidos e esfingolpidos: estrutura, tipos mais comuns, conformaes e funes. Eicosanoides e esteris: estrutura, tipos mais comuns e funes especficas.