IA em caprinos e ovinos

Governo do Estado do Rio Grande do Norte
ISSN 1983-280 X Ano 2010
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TECNOLOGIA DO SMEN E INSEMINAO ARTIFICIAL EM CAPRINOS E OVINOS

Marciane da Silva Maia Md. Vet., D. Sc em Medicina Veterinria/ Reproduo Animal - Emparn E-mail: marcianemaia@yahoo.com.br
GOVERNADOR DO ESTADO DO RIO GRANDE DO NORTE IBER PAIVA FERREIRA DE SOUZA SECRETRIO DA AGRICULTURA, DA PECURIA E DA PESCA FRANCISCO DAS CHAGAS AZEVEDO
EMPRESA DE PESQUISA AGROPECURIA DO RIO GRANDE NORTE
DIRETORIA EXECUTIVA DA EMPARN DIRETOR PRESIDENTE FRANCISCO DAS CHAGAS MEDEIROS LIMA DIRETOR DE PESQUISA & DESENVOLVIMENTO MARCONE CSAR MENDONA DAS CHAGAS DIRETOR DE OPERAES ADM. E FINANCEIRAS AMADEU VENNCIO DANTAS FILHO
INSTITUTO DE ASSISTNCIA TCNICA E EXTENSO RURAL DO RN
DIRETORIA EXECUTIVA DA EMATER-RN DIRETOR GERAL HENDERSON MAGALHES ABREU DIRETOR TCNICO MRIO VARELA AMORIM DIRETOR DE ADM. RECURSOS HUMANOS E FINANCEIROS CCERO ALVES FERNANDES NETO
ISSN 1983-280 X Ano 2010
TECNOLOGIA DO SMEN E INSEMINAO ARTIFICIAL EM CAPRINOS E OVINOS EXEMPLARES DESTA PUBLICAO PODEM SER ADQUIRIDOS EMPARN - Empresa de Pesquisa Agropecuria do RN UNIDADE DE DISPONIBILIZAO E APROPRIAO DE TECNOLOGIAS AV. JAGUARARI, 2192 - LAGOA NOVA - CAIXA POSTAL: 188 59062-500 - NATAL-RN Fone: (84) 3232-5858 - Fax: (84) 3232-5868 www.emparn.rn.gov.br - E-mail: emparn@rn.gov.br COMIT EDITORIAL Presidente: Maria de Ftima Pinto Barreto Secretria-Executiva: Vitria Rgia Moreira Lopes Membros Aldo Arnaldo de Medeiros Amilton Gurgel Guerra Marciane da Silva Maia Marcone Csar Mendona das Chagas Maria Cla Santos Alves Jos Arajo Dantas Terezinha Lcia dos Santos Fernandes Revisor de texto: Maria de Ftima Pinto Barreto Normalizao bibliogrca: Biblioteca da EMPARN Editorao eletrnica: Lenio Robson (leanio@rn.gov.br) 1 Edio 1 impresso (2009): tiragem / 3000 TODOS OS DIREITOS RESERVADOS A reproduo no-autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei no 9.610). Ficha catalogrca elaborada por Vanessa de Oliveira Pessoa CRB-15/ 453 Maia, Marciane da Silva Tecnologia do smen e inseminao articial em caprinos e ovinos / Marciane da Silva Maia; Revisado por Maria de Ftima Pinto Barreto. Natal: EMPARN, 2010. XXp.; v.13, il. (Circuito de tecnologias adaptadas para a agricultura familiar; 7) ISSN: 1983-280X 1. Inseminao articial. 2. Tecnologia do smen. 3. Inseminao - caprinos. 4. Inseminao ovinos. 5. Colheita de smen. 6. Reproduo animal. I. Autor. II. Ttulo. RN/ EMPARN/ BIBLIOTECA CDD 636.005
SUMRIO
APRESENTAO
O Circuito de Tecnologias Adaptadas para a Agricultura Familiar alcana em 2010 a sua stima edio. Desde 2004 o evento vem sendo realizado com o objetivo de apresentar aos produtores, extensionistas e tcnicos, as tecnologias disponveis desenvolvidas pela pesquisa agropecuria nas diferentes atividades, procurando elevar os nveis apropriao destas pelos agricultores familiares. Nesse perodo, para a realizao dos circuitos, a EMPARN sempre contou com a estratgica parceria da EMATER-RN e com o apoio da Secretaria Estadual de Agricultura, da Pecuria e da Pesca (SAPE), alm de importantes parceiros como o Banco do Nordeste, o Sebrae-RN, a Embrapa, o Consepa e as prefeituras municipais. Os Ministrios do Desenvolvimento Agrrio (MDA) e da Cincia e Tecnologia (MCT), sempre reconheceram a importncia e a inovao metodolgica do Circuito e foram decisivos no aporte de recursos para viabilizar as atividades previstas. So plenamente reconhecidas as diculdades existentes nos processos de transferncia e apropriao de tecnologias ou inovaes tecnolgicas na agricultura familiar brasileira. Quando se agregam a esse panorama caractersticas comuns aos agricultores familiares da regio Nordeste, tais como: pequeno tamanho da propriedade, risco e incerteza, capital humano com baixo nvel de escolaridade, forma de domnio sobre a terra (arrendamento, parceria, direitos de propriedade), disponibilidade de trabalho, crdito, assistncia tcnica insuciente, visualiza-se um cenrio de diculdades ainda maior. O Circuito de Tecnologias pode ser considerado uma importante ferramenta em aes de socializao do conhecimento tcnico e cientco para a agricultura familiar potiguar. O processo necessita ser complementado por atividades como unidades
VII CIRCUITO DE TECNOLOGIAS ADAPTADAS PARA A AGRICULTURA FAMILIAR
de validao das tecnologias disponibilizadas estabelecidas em unidades familiares regionais, incorporando tambm os saberes locais, com maior participao do extensionista no campo e maior formao de instrutores multiplicadores. Os ganhos qualitativos e quantitativos obtidos com a adoo das prticas previstas num projeto como o Circuito de Tecnologias, contribuem de forma direta para a reduo dos nveis de pobreza e para o aumento da produo de alimentos das comunidades trabalhadas e de forma indireta, na gerao de emprego e renda, devido a qualicao da mo de obra em atividades demandadas pelo negcio rural potiguar. Este ano o Circuito ter como tema central Gesto e Crdito as chaves para o sucesso da agricultura familiar, levando em considerao as reconhecidas decincias de planejamento e administrao dos negcios familiares rurais e do potencial de impacto do crdito do PRONAF no Nordeste, que apenas no perodo 2005/2006 realizou 805 milhes de contratos, envolvendo um montante de recursos da ordem de RS 1,9 bilho. Em 2010 o Circuito incorporou tambm sua programao as aes de disponibilizao de tecnologias apropriadas agricultura familiar desenvolvidas pela EMPARN dentro do Programa Mais Alimentos do MDA. Essas aes visam construo de estratgias para aperfeioar a integrao entre a pesquisa, a assistncia tcnica e extenso rural (ATER) e a agricultura familiar, com foco na gesto, no crdito e nas diversas atividades desenvolvidas por esses agricultores. Francisco das Chagas Medeiros Lima Diretor Presidente da EMPARN Henderson Magalhes Abreu Chefe Geral da EMATER-RN
Marciane da Silva Maia 1.0 INTRODUO A inseminao articial (IA) uma tcnica de reproduo em que o smen obtido de um macho e depositado no sistema genital feminino, por meio de instrumentos apropriados e no momento em que os espermatozoides possam encontrar o vulo e fecund-lo. O uso da inseminao articial em animais muito antigo. Segundo uma lenda rabe, a primeira tentativa de realizar uma inseminao foi feita por rabes por volta do ano de 1300. Chefes tribais que desejavam obter um lho do melhor garanho da tribo rival conseguiram emprenhar suas guas com smen recolhido em uma mecha de algodo. No entanto, a histria documentada da IA abrange mais de dois sculos. A primeira experincia documentada, de sucesso no uso da inseminao articial, foi feita pelo siologista italiano Lazzaro Spallazani, que em 1780 colheu o smen de um co pelo mtodo da masturbao e inseminou uma cadela da qual nasceram trs lhotes vivos e normais. Um ano mais tarde (1781) a experincia de Spallazani foi conrmada por Pietro Rossi. No nal do sculo XIX, Heape relatou na Royal Sociedade de Londres, seus estudos com inseminao articial em mamferos. Somente a partir de 1900 que cientistas da antiga Unio Sovitica comearam os estudos com animais de produo. Na Rssia, o veterinrio Elias Ivanov demonstrou que a fecundao era possvel mesmo quando o smen era diludo; esclareceu o papel do frio na conservao do smen fora do organismo e aplicou a tcnica da inseminao de forma intensiva. Ele iniciou seus
trabalhos com cavalos, mas, o sucesso na inseminao articial foi obtido primeiro, em bovinos e ovinos. Em 1901 inseminou as primeiras ovelhas. Em 1914 o italiano Giuseppe Amantea construiu a primeira vagina articial adaptvel ao co. Em 1932 o russo Kusenov construiu a primeira vagina articial para ovinos. A partir da, o mtodo de inseminao na ovelha passou a ser explorado em grande escala na ex-URSS e a ser difundido para outros pases da Europa e posteriormente para diferentes partes do mundo. Somente a partir dos anos 1970 que os mtodos de reproduo controlada e processamento do smen ovino e caprino tornaramse disponveis e possibilitaram uma nova abordagem da IA nessas espcies, como a sincronizao do estro e a inseminao em tempo xo. A Frana e a Austrlia so pioneiras em tais desenvolvimentos. A histria recente da inseminao articial est bem documentada em muitas revistas cientcas em todo o mundo e o acesso s informaes geradas muito rpido devido ao avano da tecnologia da comunicao em rede. No Brasil, o uso da inseminao articial em caprinos e ovinos ainda insipiente. Nos estados da regio Sul e Sudeste, onde predomina a criao de ovinos e caprinos leiteiros, essa tcnica usada com maior frequncia por parte dos criadores. No entanto, no Nordeste do Brasil o mtodo passou a ser mais difundido apenas a partir da dcada de 1980 e sua aplicao nos sistemas de produo ainda muito baixa. 2.0 VANTAGENS E LIMITAES DA INSEMINAO ARTIFICIAL 2.1 Vantagens Promover o melhoramento gentico do rebanho por meio do uso de animais selecionados;
ESQUEMA ILUSTRATIVO DO POTENCIAL DE PRODUO DE DESCENDENTES DE UM REPRODUTOR USADO EM MONTA NATURAL OU EM INSEMINAO ARTIFICIAL
Possibilitar o uso de animais de alto valor zootcnico por pequenos criadores sem condies nanceiras de adquirir um animal de elite; Reduzir o nmero de reprodutores na propriedade e com isso baixar o custo de manuteno dos mesmos (alimentao, abrigo, cercas, etc); Evitar perdas na taxa de concepo em decorrncia do uso de machos subfrteis; Reduzir a transmisso de doenas sexualmente transmissveis; Permitir a fecundao de vrias fmeas no mesmo dia, quando se usa sincronizao do estro; Induzir a anotao de dados como: data do cio, cobrio, reprodutor, etc., e com isso ajudar no melhoramento gentico (pedigree conhecido) do rebanho e fazer com que o criador tome decises melhores; Possibilitar um maior aproveitamento do reprodutor, uma vez que, com a utilizao do smen diludo, de cada ejaculado colhido possvel inseminar cerca de 20 fmeas. Dessa forma, um reprodutor utilizado em regime de inseminao articial, potencialmente teria condies de produzir 15 vezes mais descendentes a cada ano, do que quando usado em monta natural, conforme o esquema demonstrativo apresentado em seguida.
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2.2 Limitaes Exigncia de uma infraestrutura mnima na fazenda, como: currais, bretes, capineiras, banco de protena etc.; Realizao de controle sanitrio e nutricional do rebanho; Necessidade de pessoal treinado para a realizao da IA; Uso de reprodutores testados para evitar a disseminao de caractersticas hereditrias indesejveis; Investimento inicial com a compra de equipamentos. 3.0 ANATOMIA E FISIOLOGIA DA REPRODUO DO CARNEIRO E BODE O aparelho genital do macho constitudo pelos testculos, epiddimos, escroto, canal deferente, glndulas acessrias, o pnis e o prepcio. O testculo tem duas funes principais produzir os gametas masculinos (espermatozoides) e os hormnios sexuais masculinos ou andrgenos, entre eles a testosterona que responsvel pelo desenvolvimento das caractersticas sexuais secundrias e pelo comportamento sexual. O tamanho dos testculos varia com a idade, peso corporal e estao do ano. No carneiro adulto e saudvel, os testculos atingem cerca de 200-300 gramas
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cada e no bode cerca de 100 150 gramas. Isso importante porque o nmero de espermatozoides produzidos correlacionado com o tamanho do testculo. O epiddimo um rgo de formato alongado que se encontra aderido ao testculo. dividido em trs partes denominadas: cabea, corpo e cauda. A cabea do epiddimo est aderida ao topo do testculo e a cauda est na parte inferior e pode ser palpada atravs da parede do escroto. A maturao dos espermatozoides, isto a aquisio da motilidade e da capacidade de fertilizao, ocorre na cabea e no corpo do epiddimo, enquanto que as clulas maduras so armazenadas na cauda. O escroto o saco ou bolsa onde os testculos cam alojados. A pele do escroto na e elstica, coberta com pelos nos ou l e contem muitas glndulas sudorparas e sebceas.Tem a funo tanto de proteger quanto de regular a temperatura do testculo. A produo de espermatozoides ocorre normalmente a 4 7 C abaixo da temperatura corporal. O canal deferente um ducto que transporta os espermatozoides desde a cauda do epiddimo at a uretra. No nal de cada ducto deferente (3 4 cm) ocorre uma dilatao que conhecida como ampola do canal deferente e serve como um reservatrio de espermatozoides. As glndulas acessrias compreendem as vesculas seminais, a prstata e as glndulas bulbo-uretrais. Esto localizadas prximas uretra e juno do canal deferente e produzem as secrees que contribuem para a formao do plasma seminal, lquido que transporta os espermatozoides. A secreo das glndulas acessrias serve para nutrir o espermatozoide, manter seu metabolismo, limpar a uretra antes da ejaculao e lubricar o pnis, facilitando a intromisso na vagina. No bode, a glndula bulbouretral secreta grande quantidade de uma enzima chamada fosfolipase A, que catalisa a hidrlise das lecitinas, presentes na gema de ovo, em cidos graxos e lisolecitinas. As lisolecitinas,
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quando presentes em grande quantidade, so txicas ao espermatozoide. Essa particularidade impede o uso de grandes quantidades de gema de ovo nos diluentes para smen caprino. O pnis tem duas funes, deposio do smen no trato reprodutivo da fmea e expulso da urina. Tanto o smen quanto a urina so expelidos atravs da uretra. Durante a excitao sexual o pnis torna-se rgido devido ao uxo sanguneo para o corpo cavernoso; este processo chamado de ereo. O pnis tem uma curva em forma de S, chamada exura sigmoide, que permite que o pnis seja estendido durante a cpula. A extremidade do pnis formada por tecido esponjoso denominada glande. Externamente glande do pnis existe uma pequena prolongao da uretra chamada apndice vermiforme ou processo uretral, que gira rapidamente durante a ejaculao para pulverizar o smen na parte anterior da vagina da fmea. A extremidade livre, do pnis, quando no est em ereo, coberta por uma invaginao da pele chamada prepcio. O ciclo completo de formao e maturao dos espermatozoides no carneiro e no bode, dura cerca de dois meses. Qualquer alterao no estado geral do animal (doena, nutrio, estresse) que possa causar uma interrupo ou alterao na espermatognese, pode ser vista no smen ejaculado aps esse perodo e a fertilidade normal s ser restaurada quando um novo ciclo espermatognico completo tenha ocorrido.
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Figura 1: Anatomia do sistema genital masculino Figura 2: Testculo e epiddimo
3.1 Smen e Caractersticas Seminais O smen constitudo pelo plasma seminal e pelos espermatozoides, e sua composio varia entre as espcies. O plasma seminal a mistura de uidos produzidos nos testculos, epiddimos, canal deferente e pelas glndulas sexuais, principalmente pela vescula seminal. um uido isotnico e neutro, rico em numerosas substancias, entre elas: frutose, cido ascrbico, cido ctrico, cido glutmico, inositol, sdio, potssio, clcio, fosfolipdios, prostaglandinas, protenas e serve para proteger e nutrir o espermatozoide. O espermatozoide uma clula altamente especializada, constituda de duas partes: a cabea e a cauda (Figura 3). A cabea formada principalmente pelo ncleo, que contm os cromossomos responsveis pela transmisso da informao gentica paterna. A parte anterior da cabea envolvida por uma espcie de capuz, chamado de acrossomo, que contm as enzimas necessrias para o processo de fertilizao. A cauda ou agelo o rgo de locomoo do espermatozoide. Os movimentos da cauda so responsveis pela propulso do espermatozoide nos uidos. A cauda pode ser dividida em trs regies: a pea intermediria, a pea principal e a pea nal. A pea intermediria a regio mais espessa da cauda, rodeada pelas mitocndrias, que produzem a energia necessria para a locomoo. A pea principal a parte mais longa da cauda e contm a maioria das estruturas responsveis pela propulso e coberta por uma bainha brosa. A pea nal relativamente curta e no possui bainha. Figura 3: Espermatozoide ovino.
1- cabea, 2- pea intermediria, 3 cauda
TECNOLOGIA DO SMEN E INSEMINAO ARTIFICIAL EM CAPRINOS E OVINOS VII CIRCUITO DE TECNOLOGIAS ADAPTADAS PARA A AGRICULTURA FAMILIAR
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No smen normal, os espermatozoides tm carga eltrica negativa e repelem um ao outro. Se os espermatozoides perdem sua carga negativa, eles se agregam uns aos outros, formando aglomerados. Este fenmeno chamado de aglutinao e pode ocorrer devido a um aumento na acidez do meio, a presena de ons metais, bactrias ou outras impurezas ou a presena de aglutininas no corpo do animal. A composio do smen varia entre as espcies. O volume e a concentrao de espermatozoides no ejaculado variam com a anatomia (tamanho do testculo) e atividade reprodutiva ou frequncia de coletas. Alm das variaes individuais, fatores como idade, condies climticas, nutrio e frequncia de ejaculao podem afetar a quantidade e qualidade do smen. No ovino e caprino o volume relativamente baixo e a concentrao alta. Durante a cpula, a ejaculao espontnea, dura somente alguns segundos e o smen depositado na poro anterior da vagina. As caractersticas do smen de caprinos e ovinos so mostradas na Tabela 1. Tabela 1: Valores mdios normais das caractersticas seminais de carneiros e bodes Caracterstica seminal Carneiro Bode
Volume (mL) cor Aspecto 0,8 2,5 (1,0) Prola ou marm Leitoso a cremoso 2 a 9 (3 ) 5,9 a 7,3 75 3 80 a 85 80 0,5 1,5 (0,8) Amarela Leitoso a cremoso 1 a 7,5 (2)
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Total espermatozoides/ ejaculado (bilhes) pH Motilidade (%) Vigor (0 a 5) Espermatozoides normais (%) Viveis (ps-vital)
6a7 80 3 80 a 90 80
Para o sucesso da inseminao articial, o inseminador deve ter um conhecimento bsico da anatomia e funo dos rgos do aparelho reprodutor da fmea. Os ovrios so os rgos responsveis pela produo do vulo e de hormnios importantes para a manuteno da gestao sendo o local onde ocorre a ovulao. A trompa ou oviduto um rgo tubular que liga cada ovrio a um corno uterino. responsvel pela captao do vulo aps a ovulao (via infundbulo) e o local onde ocorre a fecundao e as primeiras etapas de desenvolvimento do embrio durante seu transporte at o tero onde se desenvolver a gestao. O tero da cabra e da ovelha do tipo bipartido, composto pelo corpo, dois cornos uterinos e a crvice. Sua principal funo servir como incubador para o embrio e feto durante a gestao. A crvice ou colo uterino um rgo broso tubular que separa a cavidade uterina da cavidade da vagina. Apresenta em sua parede interna uma srie de dobras rgidas denominadas anis em nmero de 4 a 5. Na cabra, esses anis so alinhados de modo que formam um canal que permite a penetrao da pipeta de inseminao. Porm, na ovelha a disposio dos anis cervicais no possibilita a formao de um canal livre o que diculta ou mesmo impossibilita a sua transposio pelo instrumento inseminante. Normalmente, o conduto cervical se encontra fechado, abrindo-se apenas em algumas ocasies, como: no parto e durante o estro, para permitir a liberao de muco e o transporte dos espermatozoides. A vagina o rgo tubular que liga a vulva ao colo do tero, recebe o pnis durante a cpula e o local onde o smen depositado na monta natural.
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4.0 ANATOMIA E FISIOLOGIA DA REPRODUO EM CABRAS E OVELHAS
A vulva a poro mais externa do sistema genital. composta pelo vestbulo, pequenos e grandes lbios e possui glndulas que secretam um uido viscoso que facilita a cpula.
Figura 4 Anatomia do sistema genital feminino
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Figura 5: tero de cabra
4.1 O Ciclo Estral Ciclo estral o perodo de tempo transcorrido entre a manifestao de dois estros ou cios consecutivos. Nas cabras, esse intervalo duro em mdia 21 dias, podendo variar bastante desde ciclos curtos, com menos de 17 dias, a ciclos longos, mais de 25 dias. Nas ovelhas, o ciclo estral dura em mdia 17 dias, com uma pequena variao (15 a 19 dias). 4.2 O Estro ou Cio a fase do ciclo estral em que a fmea aceita o acasalamento, ou seja, deixa-se montar pelo macho. Nas cabras, esse perodo tem uma durao mdia de 36 horas (24-48h) e a ovulao ocorre no nal ou logo aps o nal do cio, cerca de 30-36 horas aps o
4.2.1 Identificao do cio A identicao correta da fmea em estro de fundamental importncia para o sucesso da inseminao. Pode ser feita por meio da observao do comportamento da fmea ou utilizando um ruo. Por meio da observao visual Baseia-se na observao do comportamento do animal, o qual apresenta sintomas caractersticos do cio. Na cabra estes sintomas so: -Inquietao; -Agitao frequente da cauda; -Urina e berra com frequncia; -Vulva inchada e avermelhada; -Corrimento de muco atravs da vulva, cristalino no incio do cio, creme durante o cio e esbranquiado no nal do mesmo; Monta e se deixa montar por outras fmeas e procura se aproximar do macho. Na ovelha: - difcil identicar o cio por meio da observao do comportamento porque a mesma no exterioriza muito as caractersticas de cio; as manifestaes comportamentais so mais evidentes quando est na presena do macho; - Portanto, quando se deseja trabalhar com reproduo programada indispensvel o uso de ruo para identicar as fmeas em estro. Por meio de ruao (uso do ruo) o mtodo mais seguro de identicar cio tanto na ovelha como na cabra. - Utilizar um macho inteiro da mesma espcie, mas que seja
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incio do cio. Na espcie ovina o estro dura em mdia 32 horas (de 24 a 36 h) e a ovulao ocorre no tero nal do cio, cerca de 24 -30 horas aps o incio do estro.
impossibilitado de fecundar a fmea (vasectomia ou xao do S peniano) o qual denominamos de ruo ou uma fmea androgenizada. -Untar o peito do ruo com tinta (p xadrez + graxa lubricante na proporo de 1:3) e colocar o mesmo junto com as fmeas; -Observar os animais duas vezes ao dia; Identicar e separar as fmeas que apresentem a garupa marcada pela tinta; -Alterar a cor da tinta a cada 15 dias para possibilitar identicar as fmeas que repetirem o cio. 5.0 SELEO E PREPARAO DE MACHOS PARA INSEMINAO ARTIFICIAL A seleo dos reprodutores deve ser feita com antecedncia de no mnimo 60 dias antes do incio das coletas. Esse perodo necessrio para que se realizem as alteraes de manejo e alimentao que forem necessrias, assim como para o treinamento dos machos para coleta em vagina articial. A boa seleo do macho doador de smen fundamental para o sucesso de um programa de inseminao. 5.1. Caractersticas a serem avaliadas na seleo de reprodutores Desejveis - Produzir smen de boa qualidade; - Ter boa libido (elevado interesse sexual, habilidade para deteco do cio e agilidade para efetuar a monta e a cpula); - Testculos simtricos, ovoides , rmes e presentes na bolsa escrotal; - Ausncia de alteraes penianas e prepuciais; - Ter bons cascos e aprumos;
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Indesejveis - Ausncia de chifres (mocho) no bode; - Hipoplasia testicular e criptorquidismo; - Tetas supranumerrias; - Agnatismo ou prognatismo; - Doenas infecciosas ou parasitrias. A ausncia de chifres nos caprinos, ou seja, o carter mocho est ligado manifestao de hermafroditismo. 5.2 Exame Androlgico A realizao do exame clnico androlgico dos bodes e carneiros destinados reproduo muito importante, uma vez que os distrbios funcionais em um ou mais rgos genitais iro prejudicar a ecincia reprodutiva do macho e a fertilidade das fmeas cobertas ou inseminadas, por ele. Ao realizar-se o exame androlgico, deve-se fazer o exame clnico geral do animal e o exame especial. No exame clnico geral dever ser observado o aspecto geral do animal, temperamento, estado nutricional, dentes, pele, cascos, aparelho circulatrio, respiratrio e digestivo. O exame especial inclui a avaliao morfolgica dos rgos genitais, exame funcional, avaliao do smen e exame sanitrio. Aspectos a serem observados nas diversas etapas do exame androlgico Identicao: informaes sobre proprietrio e propriedade, como nome, endereo, fone. Do animal: espcie, raa, nome/ nmero, tatuagem, data nascimento, peso, liao, sinais externos. Anamnese ou histrico clnico: realizada de acordo com o mo-
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- Capacidade de transmitir as caractersticas desejveis aos seus descendentes.
tivo do exame. Pode-se questionar regime de atividade sexual (monta natural / doador de smen); frequncia de ejaculao; nmero de fmeas cobertas pelo reprodutor; nmero de fmeas gestantes, ndice de retorno ao cio; condies de manejo e alimentao; tempo de aparecimento das alteraes; evoluo do processo em curso; tratamentos realizados e resposta clnica; situao sanitria e reprodutiva do rebanho; data e condies da aquisio e procedncia do reprodutor. Exame clnico geral: fazer a inspeo do animal em estao e em movimento, avaliar sistema nervoso, respiratrio, circulatrio, digestivo e locomotor assim como condio corporal. Observar a presena ou no de defeitos hereditrios como: hipoplasia testicular, criptorquidismo, hrnias, paresia espasmdica, miotroa, debilidade dos ligamentos interdigitais. Estes defeitos afetam o aproveitamento do reprodutor e so razo para eliminao. Exame do sistema genital: exame realizado mediante inspeo e palpao onde se verica a morfologia dos rgos genitais - Escroto: avaliar integridade da pele, simetria, mobilidade, sensibilidade, espessura, temperatura e aderncia (deslizamento e ausncia de processos inamatrios); - Testculo: avaliar situao (dentro da bolsa escrotal); posio (vertical, sem tores); mobilidade (deslizar livremente dentro da bolsa escrotal, sem aderncias); forma (oval, alongada); simetria (simtricos quanto ao tamanho e forma); consistncia (tensaelstica, com variaes desde cido at rme); sensibilidade (indolor, diferenciar sensibilidade dolorosa de simples reao do animal); tamanho (varia conforme a espcie, raa e idade. afetado pelo peso corporal, processo inamatrio, subnutrio, anormalidades de desenvolvimento). A aferio do tamanho do testculo pode ser realizada por meio da medio do permetro
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Exame funcional ou do comportamento sexual: vericar a libido (1 salto em at 10 min); e execuo das fases da cpula (excitao, aproximao, ereo, emisso do pnis, monta, abrao, procura, introduo, empuxo nal e ejaculao; desmonta, relaxamento e tranquilizao) quando diante de uma fmea em cio; aceitao ou no da vagina articial. Espermograma ou exame do smen: avaliar as caractersticas fsicas, volume, cor, aspecto, turbilho, motilidade, vigor e concentrao. Caractersticas morfolgicas (total de espermatozoides anormais, 15 a 20%). Exames complementares: % vivos (colorao vital), teste de termo-resistncia (smen congelado).
ou circunferncia escrotal (ta mtrica); comprimento, largura e espessura testicular (paqumetro, excluindo o epiddimo) e volume testicular (imerso dos testculos em um recipiente graduado cheio de gua e leitura do volume de lquido deslocado). Dar preferncia aos machos que apresentem o maior tamanho testicular, comparado aos seus pares, lembrando que o tamanho varia com a idade e peso corporal do animal. - Epiddimo: exame realizado por meio de palpao. Palpar a cabea, corpo e cauda, avaliando tamanho, simetria (simtricos), consistncia (elstico), forma e posio. - Cordo espermtico: por meio de palpao, devem ser simtricos e dimetro de um polegar. Aumento de volume pode indicar existncia de cistos, varicocele ou processos inamatrios. - Pnis e prepcio: examinar cuidadosamente pele e tecido subcutneo quanto a presena de aumento de volume, temperatura ferimentos ou cicatrizes. Abertura do prepcio deve permitir a passagem do pnis ertil e a mucosa prepucial deve ser rosa plido. Pnis: vericar mobilidade, mucosa e secrees. Deve ser bem desenvolvido e mvel.
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Tabela 2: Valores mdios da circunferncia escrotal (CE) de bodes de diferentes raas, tomados em exposies agropecurias em Natal-RN, 2001.
N IDADE (meses) 21 At 12 4 12 - 18 2 18 24 Alpina Americana 4 40 48 Saanen 12 At 12 4 12 - 18 3 18 24 3 29 36 4 40 48 Murciana 2 At 12 1 12 - 18 4 40 48 Boer 14 At 12 07 12 - 18 04 18 24 03 29 - 36 02 40 48 Anglonubiana 21 At 12 8 12 - 18 6 18 24 5 29 - 36 2 40 48 Obs: idade estimada com base na dentio
RAA Parda Alpina
CE (cm) 23,5 3,0 28,21,8 28,11,4 27,10,4 25,12,9 26,12,6 28,82,0 31,43,5 31,62,1 24,12,2 26,5 26,11,6 25,93,6 28,61,7 30,53,2 32,04,1 33,40,9 24,32,5 27,33,1 29,71,9 30,01,9 32,12,3
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Tabela 3: Valores mdios da circunferncia escrotal (CE) de carneiros de diferentes raas, tomados em exposies agropecurias em Natal-RN, 2001.
RAA Santa Ins
Somalis
N 72 26 08 11 04 09 17 03 04 01
IDADE (meses) At 12 12 - 18 18 24 29 36 40 48 > 48 At 12 12 - 18 29 36 40 48
CE (cm) 29,2 3,1 31,8 3,4 33,3 3,9 34,14,3 34,12,0 36,02,2 24,53,5 29,31,1 31,82,7 33,4
5.3 - Preparao dos Machos Vrios fatores ambientais e de manejo podem afetar a fertilidade do macho entre eles: alta temperatura ou umidade, mudana de ambiente, alterao de dieta, doenas, etc. Mesmo os procedimentos rotineiros de manejo, como corte de cascos, tosquia e aplicao de medicamentos podem ser estressantes para os animais. O transporte dos animais tambm causa estresse, por isso deve ser feito com grande antecedncia, para que os animais tenham tempo de se acostumar ao novo ambiente e alimentao. Alimentos ricos em protena podem aumentar a produo de espermatozoides. Por isso, recomenda-se melhorar a nutrio dos reprodutores 6-8 semanas antes do incio das coletas.
Figura 6: Instrumentos utilizados para Figura 7: medio do permetro aferio do tamanho dos testculos escrotal em bode
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02 > 48 37,00,9 01 At 12 28,5 08 12 - 18 30,42,5 03 18 24 32,31,8 01 29 36 35,5 02 40 - 48 33,41,5 Dorper 07 At 12 29,1 2,8 03 12 - 18 32,71,3 01 18 24 39,0 Obs: idade estimada com base na dentio Morada Nova
Nos programas de inseminao que necessitem realizar a coleta do smen, necessrio treinar os machos com antecedncia. O mtodo de coleta ideal o da vagina articial e os bodes e carneiros selecionados devem ser treinados para ejacular dentro da vagina articial. O treinamento deve comear 2-3 semanas antes do incio das coletas. Isso possibilita tempo hbil para o treinamento, avaliao da qualidade do smen e substituio de machos insatisfatrios. Para o treinamento, necessria a presena de uma fmea em estro para estimular a manifestao do comportamento sexual do macho e este deve se acostumar a cobrir a fmea na presena de um operador. De preferncia, a coleta deve ser realizada sempre no mesmo local e pelo mesmo operador. Depois de treinados, os machos chegam a montar qualquer fmea que esteja presa no tronco de coleta, independente de estar ou no em estro. O tempo necessrio para o treinamento depende da habilidade do operador e da idade, experincia sexual e temperamento do macho. Animais acostumados com a presena das pessoas como aqueles criados connados ou que esto em contato frequente com humanos so mais fceis de treinar que animais criados extensivamente em piquetes grandes com pouco contato e manejo. Animais jovens so mais tmidos que os mais velhos e os bodes tendem a ser mais sensveis que os carneiros. Animais em treinamento so muito sensveis a distraes ou sustos causados por barulho, gritos do tratador, presena de estranhos, ces, etc. Um susto ou medo, ocorrido durante o treinamento pode ter um efeito inibidor prolongado sobre o desempenho do animal. Uma vez condicionado a ejacular na vagina articial, o macho rapidamente realiza essa ao quando requerido para futuras coletas de smen.
Passos necessrios durante o treinamento para coleta de smen Levar os machos diariamente, ao local de coleta (sala ou baia) por um perodo de 7 a 10 dias, para que eles se acostumem com o ambiente; Introduzir uma ou duas fmeas em estro dentro da sala de coleta e deixar que os machos a montem; Acostumar os machos a montar uma fmea em estro presa no tronco de coleta. Isto deve ser feito na presena do operador. Quando o macho montar, o operador deve acostumar o animal a ser manipulado, tocando a regio do prepcio; Quando o macho estiver montando regularmente a fmea com o operador por perto, pode-se ento passar a trein-lo para ejacular na vagina articial. Se um macho no mostrar interesse na fmea quando est sozinho com ela, ele pode ser estimulado colocando-se um macho ativo dentro do local de coleta. Na coleta a campo, a mesma deve ser realizada no ambiente em que o macho est acostumado. 6.0 SELEO E PREPARAO DE FMEAS PARA INSEMINAO ARTIFICIAL No mnimo 30 dias antes de iniciar o perodo de acasalamentos, o criador dever fazer a seleo das fmeas que sero inseminadas. Na ocasio, deve avaliar todas as fmeas em idade reprodutiva, observando os aspectos sanitrios gerais, examinando a glndula mamria e vulva (para detectar mamite e corrimentos) e avaliando a condio corporal dos animais. As fmeas a serem includas em um programa de inseminao devem estar em bom estado sanitrio, livre de doenas e parasitas e em boa condio corporal. Fmeas desnutridas no ovulam ou sofrem uma alta
taxa de mortalidade embrionria. Fmeas muito gordas tambm podem apresentar distrbios reprodutivos. Ao incio da estao de acasalamento as fmeas devem apresentar um escore de condio corporal 3. Fmeas com escore abaixo do recomendado devem receber suplementao alimentar para ganhar peso, enquanto que aquelas muito gordas (escore 5), devem sofrer restrio alimentar. A suplementao deve ser iniciada quatro a seis semanas antes do incio dos acasalamentos e permanecer por todo o perodo de forma que as fmeas ganhem peso. 6.1 Caractersticas a serem observadas na seleo da matriz Ter boa produo de leite (ou em raas no especializadas, o suciente para criar o lhote); Apresentar bere bem inserido e com apenas duas tetas; Ter emprenhado e parido normalmente. Deve-se evitar inseminar as fmeas jovens nliparas devido menor fertilidade e ao traumatismo causado pelo rompimento do hmen com o especulo. Ser isenta de doenas infecciosas, parasitrias ou sexualmente transmissveis; No ter abortado; Ter aspecto feminino; Possuir chifres (cabras); Ter bons cascos e aprumos e Ter boa fertilidade. 6.2 Identificao das fmeas Para possibilitar a anotao precisa dos dados, cada fmea deve ser claramente identicada com um brinco numerado, colar
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6.3 Sincronizao ou induo do estro e ovulao Cabras e ovelhas podem ser inseminadas durante o estro natural. No entanto, quando o estro e ovulao so induzidos, um maior nmero de fmeas pode ser inseminado ao mesmo tempo. O estro e a ovulao nas cabras e ovelhas podem ser induzidos (fmeas em anestro) ou sincronizados por mtodos farmacolgicos ou mtodos naturais. Os mtodos farmacolgicos proporcionam uma maior sincronizao dos estros, em um maior nmero de fmeas, mas, tambm requerem maiores despesas com a aquisio e aplicao de medicamentos. Os mtodos naturais so menos caros, mas no resultam em uma boa sincronizao dos estros. No nosso meio, o mtodo farmacolgico mais empregado o dos progestgenos e entre os naturais o efeito macho. 6.3.1 Mtodos naturais Efeito Macho O Efeito Macho um mtodo natural de sincronizao do cio que possibilita a manifestao do cio em um grande nmero de fmeas em um curto perodo de tempo. A introduo do macho leva a um aumento imediato (2-4 min), na secreo de LH pela hipse da fmea. Em seguida ocorre aumento na pulsatilidade e reduo na amplitude dos pulsos de LH, semelhante ao que ocorre durante a fase folicular do ciclo estral. Esse padro de secreo leva liberao da onda pr-ovulatria de LH e ovulao.
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e plaqueta numerada ou tatuagem. Grupos de fmeas podem ser identicados com colar colorido, cada cor correspondendo a um reprodutor, para facilitar o manejo no momento da inseminao.
Para induzir o efeito macho cabras e ovelhas devem ser completamente isoladas dos machos (cheiro, viso e contato) por um perodo mnimo de trs semanas. Aps esse perodo, quando os machos forem introduzidos novamente no rebanho, a maioria das fmeas ovula em at trs dias aps o primeiro contato com os machos. Nas duas espcies a primeira ovulao seguida por um ciclo curto (5-6 dias) e um estro frtil ocorre aps um ciclo estral de durao normal. Etapas para realizao do efeito macho - Quatro semanas antes do incio da estao de cobertura, isolar completamente os machos das fmeas de modo que elas no possam ver, ouvir ou sentir o cheiro dos machos; - Fornecer uma suplementao alimentar s fmeas, na inteno de melhorar a taxa de ovulao; - Decorrido este perodo, introduzir no rebanho um ruo com o peito untado de tinta (1kg graxa : 1 caixa de tinta xadrez p) para estimular e identicar as fmeas em estros; - Aps os primeiros sete dias (cabras) ou 15 dias (ovelhas), as fmeas que forem marcadas devero ser acasaladas por meio de monta natural controlada ou IA. Cerca de 90% das fmeas ovulam dentro de 2-5 dias aps a introduo do macho no rebanho. Sendo que, nas cabras apenas 60-68% dessas ovulaes so acompanhadas de cio e nas ovelhas a primeira ovulao nunca vem acompanhada de cio. Associao do Efeito macho + progestgeno A associao do efeito macho com o tratamento prvio das fmeas com progesterona ou progestgeno, reduz a incidncia de ciclos curtos e aumenta a porcentagem de cabras em estro e a fertilidade ao primeiro estro, comparado com apenas o efeito macho. Essa estratgia possibilita o desenvolvimento de
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Etapas para realizao do tratamento Efeito Macho + Progestgeno Isolar completamente, as fmeas dos machos por um perodo de no mnimo quatro semanas; Dia 0: inserir uma esponja vaginal impregnada com 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) na vagina de cada fmea e introduzir o macho no rebanho (ruo); Dia 9: retirar a esponja e aplicar 75g de cloprostenol na submucosa vulvar; Dias 10 a 13: Observar a incidncia de cio, separar as fmeas e realizar a inseminao ou acasalamento. O intervalo entre o nal do tratamento hormonal e o incio do estro foi em mdia 50 horas. No ms de fevereiro, 100% das cabras manifestaram estro entre 36 e 48 horas aps a retirada das esponjas. No ms de julho a porcentagem de manifestao de estro foi de 29,4% entre 36 e 48 horas e de 70,6% entre 50 e 74 horas aps a remoo das esponjas.
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protocolos de sincronizao do estro e ovulao, baseados no uso do efeito macho, que possam ser utilizados em programas de inseminao articial. Em pesquisa realizada na EMPARN,avaliou-se um mtodo de sincronizao do estro em cabras leiteiras, baseado na associao do Efeito Macho ao tratamento com progestgeno. O estudo foi realizado durante os meses de fevereiro (plena estao reprodutiva) e julho (poca em que, no local, a atividade reprodutiva das fmeas baixa) e obtive-se com 100% de sincronizao em ambas as pocas. O protocolo utilizado ser descrito a seguir.
Tabela 4. Incidncia de estros, taxa de prenhez e intervalo entre o nal do tratamento hormonal e a manifestao do estro em cabras leiteiras submetidas ao tratamento de sincronizao com Efeito Macho (EM) ou Efeito Macho associado progestgeno (EM+MAP). Fmeas em Estro (%) FEV JUL 58,0 42,1 100,0 100,0 Taxa Prenhez JUL 13,0 65,0 Intervalo (horas) FEV
-
Tratamento Efeito Macho EM+MAP
JUL
-
43,6 1,4
56,5 2,8
Fonte: Maia et al. (2009)
6.3.2 Mtodos farmacolgicos Os mtodos farmacolgicos baseiam-se na administrao de progestgenos sintticos (ou progesterona) para simular a ao de um corpo lteo natural ou na administrao de prostaglandina F2 ou prostaglandina sinttica para encurtar a vida do corpo lteo. O mtodo mais usado em vrios pases o mtodo dos progestgenos. Mtodo dos progestgenos o mtodo mais usado para sincronizao do estro tanto para cabra como para ovelha, tambm conhecido como mtodo das esponjas. Esse mtodo se baseia no conhecimento de que altos nveis de progesterona inibem o estro e ovulao e sua queda promove ambos os eventos. O tratamento atua da mesma forma que um corpo lteo e a liberao de gonadotronas pela hipse suprimida. Quando o progestgeno exgeno (esponja ou CIDR) retirado, a hipse libera grandes quantidades de gonadotronas que estimulam o crescimento folicular e subsequente ovulao. O progestgeno exgeno no afeta a funo de um corpo lteo totalmente formado, que possa estar presente no ovrio da fmea no momento do incio do tratamento. Por essa razo, para que
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Figura 8: Protocolo de sincronizao do estro e ovulao na ovelha
o tratamento seja ecaz na sincronizao dos estros, a durao do tratamento com progestgeno deve ser igual ou superior ao perodo em que o corpo lteo ativo, que de 12 14 dias na ovelha e 16-18 dias na cabra. Na cabra e ovelha j foram muito utilizados os tratamentos longos -14 dias ovelha e 21 dias na cabra. Atualmente, o tratamento mais utilizado inclui a aplicao de prostaglandinas, cuja funo lizar o corpo lteo que possa estar presente no ovrio, reduzindo assim a durao do tratamento com progestgeno, e a injeo de gonadotronas ao nal do tratamento com progestgeno para aumentar o crescimento folicular, a durao do estro e a taxa de ovulao, cujo esquema de aplicao ser descrito a seguir. Ovelha (Figura 8) Dia 0: colocar a esponja impregnada com 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) ou 40mg de acetato de uorogesterona (FGA), no fundo da vagina (Figura 5 ); 12 dia: remover a espoja e aplicar 300-400 UI de eCG (gonadotrona corinica eqina, ) via intra muscular Observar a manifestao de cio utilizando ruo; Inseminar de acordo com o esquema escolhido; Com observao de estro: 15 a 17 horas aps o incio do estro (aceitao da monta). Em tempo xo: 55 horas aps o nal do tratamento.
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Cabra (Figura 9) Dia 0: colocar uma esponja de poliuretano impregnada com 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) ou 50mg de acetato de uorogesterona (FGA), no fundo da vagina da fmea; Dia 8: aplicar uma injeo intramuscular de 200-300 UI de eCG e 75-100 g de cloprostenol. As injees devem ser dadas 48h antes da remoo da esponja. Dia 10: retirar a esponja; Dia 11-12: observar a manifestao de cio utilizando ruo ou fazendo a observao visual dos sintomas clnicos do estro. Realizar a inseminao de acordo com o esquema escolhido: Com observao de estro: 12 a 18 horas aps o incio do estro (aceitao da monta) Em tempo xo: 38-42 horas aps a retirada da esponja.
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Figura 9: Protocolo de sincronizao do estro e ovulao na cabra
Figura 10: Materiais usados para realizao do tratamento hormonal.
Figura 11: Sequncia da aplicao da esponja com progestgeno em uma cabra
Aplicao da esponja Colocar a esponja dentro do aplicador comprimindo-a com os dedos; Esticar o cordo prendendo-o na caneleta existente no mbolo; Introduzir o mbolo no aplicador empurrando a espoja at a extremidade posterior do aplicador; Limpar a regio perineal da fmea utilizando gua e sabo; Secar com papel absorvente, cuidando para no entrar lquido na vagina; Lubricar a extremidade do aplicador utilizando glicerina lquida ou vaselina slida; Introduzir o aplicador no vestbulo da vagina acompanhando o direcionamento anatmico do canal vaginal; Quando no conseguir mais evoluir, pressionar o mbolo do aplicador para frente removendo a poro metlica (o tubo) do mesmo; Cortar as pontas do cordo deixando-o rente aos lbios vulvares; Introduzir as extremidades do o dentro do vestbulo da vagina, protegendo-as da curiosidade dos outros animais.
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7.0 FABRICAO DAS ESPONJAS

A esponja pode ser fabricada artesanalmente seguindo-se os passos descritos abaixo: Utilizar espuma de poliuretano com densidade 20 e altura de 3 cm; Usar como frma, um cano de ferro com 2 a 3 cm de dimetro; Chanfrar as bordas do cano com esmeril, tornando-o cortante; Colocar a frma sobre a espuma e modelar uma poro cilndrica, girando o cortador sobre a espuma at a liberao total do cilindro de espuma; Colocar o o de remoo da esponja, utilizando uma agulha com 60 cm de o de algodo zero; Inserir a agulha na parede lateral do cilindro de esponja (sentido horizontal) at atravess-la, remover a agulha e fazer uma segunda perfurao paralela primeira (a aproximadamente 1 cm de distncia) ; Remover a agulha deixando apenas o o preso esponja; Igualar as pontas do o; Puxar a poro do o que est envolvendo a esponja no lado oposto ao da sada das pontas de modo a formar uma ala que atinja a borda superior do cilindro de esponja; Entrelaar o o, passando uma das pontas por dentro da ala e a outra por cima e por dentro da mesma; Ajustar o o no centro da extremidade superior da esponja; Dar alguns ns com as pontas, cuidando para que quem no centro da circunferncia de forma que permita o equilbrio da esponja (Figura 12); Aplicar o hormnio na esponja; Utilizar uma dose de 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (1,2 ml de Promone E); Aplicar o hormnio em vrios pontos da esponja sempre do centro para a periferia, evitando o extravasamento do produto;
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Figura 12: Passos para fabricao da esponja (Fonte: Maia, 1997)
8.0 TECNOLOGIA DO SMEN

Grande parte do sucesso de um programa de inseminao em caprinos e ovinos depende da produo de smen de boa qualidade. Quanto melhor a qualidade do smen utilizado, maiores as chances de sucesso na prenhez. O processamento do smen envolve a coleta, avaliao, diluio, embalagem (pellet, palheta, ampola, micro tubo), refrigerao, congelao, estocagem e descongelao. Todas essas etapas devem ser realizadas com cuidado, pois diversos fatores podem interferir na viabilidade do espermatozoide. Fatores que afetam a sobrevivncia do espermatozoide
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-Secar as esponjas, pendurando-as em um varal colocado em local protegido da luz solar e de poeira; -Armazenar em saco plstico vedado para no ter contato com o ar e -Estocar em local protegido de luz solar direta.
Temperatura
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A temperatura do smen no momento da ejaculao em torno de 37,5C. A exposio do smen a temperaturas superiores a esta aumenta a taxa metablica, exaurindo as reservas energticas e com isso diminuindo o tempo e vida do espermatozoide. A reduo da temperatura reduzir o metabolismo do espermatozoide, mas uma queda sbita na temperatura, principalmente abaixo de 10C causa perda irreversvel de sua viabilidade. Este fenmeno chamado de choque de temperatura ou choque trmico e pode ocorrer devido ao descuido durante a manipulao, como: exposio do smen ao ar frio, utilizao de um tubo de coleta frio, ou lamina de microscpio fria. Deve-se ter muito cuidado tambm no momento da diluio do smen, assegurando-se de que o diluidor est na mesma temperatura do smen. Luz solar Incidncia direta de luz solar prejudicial ao smen. Um curto perodo de exposio luz do sol pode reduzir a viabilidade do espermatozoide e 30-40 minutos de exposio pode mat-los. Por isso, todos os procedimentos de coleta e manipulao do smen devem ser realizados em local coberto e longe de janelas por onde penetre luz do sol. conveniente tambm, evitar exposio prolongada a lmpadas uorescentes ou radiao ultravioleta. Contato com metal Contato com metal de qualquer tipo prejudicial ao smen. Por essa razo, somente utenslios de vidro ou equipamentos feitos de material sinttico inerte podem ser usados para coleta, diluio e estocagem do smen e na inseminao. Deve-se evitar o uso de gua destilada em destiladores de metal devido presena de
Contato com gua A gua um poderoso agente espermicida e o smen nunca deve ser colocado em contato com ela. A gua reduz a presso osmtica do plasma seminal e pode matar os espermatozoides. Por isso, todos os equipamentos devem ser cuidadosamente secos antes do uso, incluindo a vagina articial e os tubos de coleta. Muito cuidado deve ser tomado quando o smen mantido em banho-maria para evitar que a gua respingue acidentalmente dentro do smen. Impurezas e bactrias Bactrias, poeira, pelos, urina e outras impurezas que podem cair dentro do smen podero reduzir a viabilidade ou matar os espermatozoides. A contaminao do smen ocorre principalmente durante a colheita e pode ser evitada por meio de uma limpeza rigorosa do prepcio do macho antes da manipulao. Aps a coleta, o smen pode ser protegido cobrindo-se o tubo de coleta com papel alumnio ou tampa prpria. A proliferao de microorganismos no smen pode ser controlada pela adio de antibiticos ao diluidor. Desinfetantes O uso de desinfetantes e anti-spticos prejudicial ao espermatozoide e por isso deve ser evitado. A esterilizao dos equipamentos com lcool 70% e gua suciente. Materiais de vidro podem ser esterilizados em calor seco em estufas de esterilizao.
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ons metlicos na gua. Assim, no preparo de diluidores e demais solues utilizar apenas gua destilada em vidro.
Longo tempo de exposio ao ar

O oxignio presente no ar aumenta a atividade metablica do espermatozoide podendo resultar no aumento da produo de radicais livres, que em altas concentraes so prejudiciais ao espermatozoide, diminuindo sua viabilidade. Alm disso, com o aumento do metabolismo ocorre acmulo de cido ltico no smen que pode reduzir o pH para abaixo do timo 7,0 reduzindo assim a viabilidade do espermatozoide. Aps a coleta o smen deve ser usado na inseminao ou armazenado o mais rpido possvel. Capacidade tampo do diluidor O meio usado para diluir o smen deve ter a capacidade de manter o pH timo (7,0) no smen diludo. Variaes no pH acima (alcalino) ou abaixo de 7,0 (cido) reduzem a viabilidade do espermatozoide. Presso osmtica do diluidor a presso exercida sobre a membrana plasmtica, pelas partculas de soluto dissolvidas no meio ao redor do espermatozoide. Essa presso faz com que a gua se mova ou no atravs da membrana e proporcional concentrao de soluto no meio. O meio em que a concentrao de soluto equivalente a que est dentro da clula chamado isotnico. Meio com concentrao de soluto mais baixa hipotnico e aquele em que a concentrao de soluto mais alta hipertnico. Tanto os meios hipotnicos quanto os hipertnicos so prejudiciais ao espermatozoide. Os espermatozoides permanecem mveis por um perodo mais longo quando esto suspensos em um meio isotnico (300 mOsm/L) e somente uma pequena variao na tonicidade do diluidor no afeta a viabilidade espermtica.
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8.1 Coleta do smen A coleta do smen em bodes e carneiros pode ser feita por dois mtodos: a vagina articial ou a eletro ejaculao. O mtodo da vagina articial o preferido, por imitar melhor as condies de temperatura e presso do aparelho reprodutor da fmea e proporcionar a obteno de um smen de melhor qualidade (Figura 13 e 14). A eletro-ejaculao pode ser usada quando necessrio colher o smen de um macho que no treinado para coleta em vagina articial ou quando se realiza exame androlgico de um grande nmero de animais. A desvantagem desse mtodo que durante a estimulao eltrica o smen pode ser contaminado por urina. Geralmente o volume do ejaculado maior, mas a concentrao menor do que aquele coletado por vagina articial. A frequncia de coleta depende da idade, condio corporal e temperamento do animal. medida que aumenta o nmero de ejaculados sucessivos, o volume e concentrao do smen diminuem. Para bodes e carneiros, um regime de 2-3 coletas dirias em dias alternados considerado normal e no causa grande reduo na qualidade do smen. Requisitos necessrios antes de iniciar a coleta de smen Treinar os machos a ejacularem em vagina articial; Realizar esse treinamento de preferncia, no local onde sero feitas as futuras coletas e pela pessoa encarregada de efetu-las. No momento da coleta Ter uma fmea da mesma espcie em cio para estimular o macho; Pode-se utilizar uma fmea em cio natural ou induzido hormonalmente (fmea estrogenada) conforme o esquema sugerido a seguir:
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Esquema para estrogenizao da cabra ou ovelha Aplicar na fmea uma injeo intramuscular de 50 g benzoato de estradiol (1 ml de ECP); A manifestao do estro ocorre dentro de 24 a 48 horas aps a injeo; Para manter a fmea em estro por mais tempo repetir a aplicao do mesmo medicamento uma vez por semana. Coleta de smen pelo mtodo da vagina artificial A vagina articial (VA) usada para bodes e carneiros consiste de um tubo rgido (de PVC), medindo 15 a 20 cm de comprimento e 5,5cm de dimetro, revestido por uma membrana de borracha e com um dispositivo para entrada e sada de gua. A membrana de borracha deve ser macia e exvel e ter cerca de 2-3 cm de comprimento a mais que o tubo rgido, em cada extremidade. Para efetuar a coleta procede-se da seguinte maneira: Preencher o espao entre a membrana e o tubo rgido da vagina, com gua a 480C; Tomar cuidado para evitar que a gua respingue na membrana interna, se isto acontecer, deve ser completamente seca; Acoplar um tubo de vidro graduado (aquecido a 30-37C) em uma das extremidades da vagina articial; Se necessrio, acrescentar ar de forma a proporcionar uma presso adequada; Vericar a temperatura interna, utilizando um termmetro. No momento da coleta a temperatura da vagina deve ser de 42-45 C; Vericar a presso introduzindo um dedo no orifcio formado pela membrana. O mesmo deve deslizar para o interior da vagina sem muita diculdade, ou seja, sofrendo uma presso leve; Limpar o prepcio do macho com uma toalha de papel; Aproximar o reprodutor da fmea em cio, devidamente contida; O operador deve ento, se agachar ao lado do reprodutor;
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Esperar que o reprodutor realize o salto e exteriorize o pnis; Desviar cuidadosamente o pnis com a mo, pegando no prepcio; E simultaneamente, com a outra mo, aproximar a vagina articial para a penetrao e ejaculao; Se ocorrer penetrao na vagina articial e o macho no ejacular, vericar a temperatura e a presso da vagina; Imediatamente aps a coleta, proteger o smen de luz solar, remover o tubo, identicar, cobrir e colocar em banho-maria a 33 -35 C. Aps a coleta, a vagina deve ser lavada, enxaguada com gua destilada e seca. Antes do uso a membrana de borracha deve ser desinfetada com lcool a 70% e esperar para que esteja totalmente seca.
Figura 13: Equipamentos e materiais utilizados para a coleta do smen. 1vagina articial, 2- copo coletor, 3- termmetro, 4- camisa protetora.
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Figura 14: Vericao da temperatura da vagina articial
Figura 15: Coleta de smen imobilizao da fmea
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Figura 16: Coleta de smen pelo mtodo da vagina articial
8.2 Avaliao do smen Aps a coleta, cada ejaculado deve ser avaliado quanto a sua quantidade e qualidade. As caractersticas quantitativas so o volume e concentrao (nmero de espermatozoides por ejaculado) e as caractersticas qualitativas incluem a motilidade, morfologia e a cor. Durante as avaliaes todo o cuidado necessrio para no prejudicar a viabilidade espermtica, lembrando-se que vrios fatores afetam a viabilidade do espermatozoide aps a coleta do smen (ver item 8). Na fazenda, quando no possvel fazer uma avaliao completa, deve-se observar o volume, o turbilhonamento e a
8.2.1 Cor do smen A cor do smen avaliada atravs das paredes do tubo de coleta. A cor normal do smen de carneiros o branco marmreo ou creme claro e do bode amarelado. A presena de sangue deixa o smen com colorao avermelhada e infeces no trato reprodutivo deixam o smen com colorao cinza ou marrom (Figura 17 e 18). 8.2.2 Volume do smen avaliado diretamente no tubo de coleta, que deve ser graduado. O volume mdio do ejaculado de carneiros 1,0ml e dos bodes 0,8 ml, variando com a idade, condio corporal e frequncia de coletas (Figura 17 e 18)
Figura 17: Ejaculado de caprino
Figura 18: Ejaculado de ovino
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consistncia do smen diretamente no tubo de coleta e utilizar apenas os ejaculados com consistncia leitosa ou cremosa.
8.2.3 Motilidade do espermatozoide

A avaliao da motilidade feita de duas maneiras: a motilidade massal ou turbilhonamento e a porcentagem de espermatozoides progressivamente mveis. A avaliao de motilidade massal s realizada no smen fresco. Quando o smen diludo ou descongelado, faz-se apenas a avaliao da porcentagem de espermatozoides mveis e o vigor do movimento. Motilidade massal ou turbilhonamento o tipo de movimento resultante da interao entre o movimento individual e a concentrao espermtica; os espermatozoides se deslocam com movimentos vigorosos formando ondas. Pessoas com viso acurada podem observar o movimento das ondas atravs do tubo de coleta, mas uma avaliao precisa s pode ser realizada com o uso de microscpio. Uma gota de smen puro colocada sobre uma lamina de vidro limpa e aquecida (37C), e examinada sob microscpio ptico no aumento de 100x (objetiva de 10). A temperatura da lamina deve ser mantida durante a avaliao usando-se uma platina aquecedora no microscpio. A determinao do valor da motilidade feita usando notas numa escala de 0 (ausncia de movimentos) a 5 (mximo movimento de onda) como descrito na Tabela 5.
Nota 0 1 2 Tabela 5: Determinao da motilidade massal Descrio do movimento das ondas Totalmente sem movimento. Apenas movimento individual de poucos espermatozoides. 10% de espermatozoides vivos. Observam-se os movimentos espermticos, mas no forma ondas. 20-40% de espermatozoides ativos.
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Ondas muito rpidas e densas que se juntam formando um redemoinho (difcil determinar ondas isoladas). 90% ou mais de espermatozoides vivos. Fonte: Evans e Maxwell, (1987); Chemineau et al. (1991).
Percentual de espermatozoides mveis Esta avaliao feita em uma gota de smen diludo, colocada entre lmina e lamnula (37C) e examinada em microscpio tico no aumento de 200 ou 400x (objetiva de 20 ou 40x). Vrios campos da lmina so examinados e a porcentagem de espermatozoides progressivamente mveis estimada. Essa avaliao pode ser conrmada comparando-a com a exata percentagem de clulas vivas determinada pelo mtodo de colorao vital (eosina/ nigrosina, item 8.2.5). Como o smen de carneiros e bodes muito concentrado, para uma avaliao precisa, o mesmo deve ser diludo a uma concentrao entre 60 e 200 x 106 espermatozoides/ml. A diluio pode ser feita com soro siolgico ou com um diluidor para smen fresco e refrigerado (item 8.3.2). importante lembrar que nas amostras diludas em meios contendo gema de ovo, leite ou glicerol (no caso de smen congelado) a viscosidade contribui para que os espermatozoides tenham uma motilidade mais lenta, mas no altera a percentagem de espermatozoides progressivamente mveis. A motilidade progressiva (trajetria pra frente) a caracterstica desejvel. Movimento circular ou retrgrado indicativo de choque trmico, contaminao com gua ou diluidor hipotnico (erro na preparao). Quando esse padro anormal de motilidade observado, esses trs fatores devem ser checados. Na maioria das vezes a avaliao da motilidade espermti-
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Ondas de baixa amplitude e movimento lento. 45-65% de espermatozoides ativos. Ondas rpidas e vigorosas, no forma redemoinho. 70 a 85% de espermatozoides ativos.
ca baseada em ndices percentuais. No entanto, a valorizao que melhor atende os objetivos prticos deve exprimir a porcentagem de espermatozoides mveis e o vigor da motilidade (Tabela 6).
Tabela 6: Determinao do tipo de movimento e vigor espermtico Nota Descrio do movimento 0 1 2 Todos os espermatozoides so imveis Poucos espermatozoides mostram algum sinal de vida, com movimento fraco, tremendo ou com oscilao da cauda. Espermatozoides com movimento oscilatrio e desorganizado e deslocamento lento alguns se movem mais rpido, grande nmero de espermatozoides imveis. Prevalecem os espermatozoides com movimento circular, alguns com trajetria progressiva, sem movimento oscilatrio (tremor), metade so imveis. A maioria dos espermatozoides tem movimentos rpidos, com trajetria progressiva e alguns com trajetria circular. Todos ou quase todos os espermatozoides exibem enrgicos movimentos progressivos.
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Fonte: Mies Filho (1982); Chemineau et al. (1991).
8.2.4 Concentrao espermtica a medida usada para determinar o nmero de espermatozoides por unidade de volume. Normalmente expressa em nmero de espermatozoides por mm3 ou por mL. Existem diferentes possibilidades para medir a concentrao: Apreciao visual da consistncia do ejaculado; Contagem exata do nmero de espermatozoides em hematocitmetro (cmara de Neubauer) ou Medida da densidade tica da amostra em espectrofotmetro.
Avaliao da concentrao pelo mtodo da Cmara de Neubauer A cmara de Neubauer uma lmina de viro espessa composta por duas reas (A e B) contendo divises em forma de grade no centro da rea. A grade de contagem dividida em 16 ou 20 quadrados grandes delimitados por linhas duplas ou triplas, que so subdivididos em 16 quadrados pequenos. O princpio do mtodo contar o nmero exato de espermatozoides presentes em determinado volume a partir de uma soluo de diluio conhecida. Os passos para executar a tcnica so os seguintes: Diluir uma amostra de 0.01 ml (10 l) de smen puro em 4 ml de gua destilada ou soluo de formol salina (1/400); Preparar a cmara de Neubauer colocando uma lamnula sobre a rea de contagem. Para que a lamnula que aderida cmara, umedea as bordas que rodeiam a rea de contagem com saliva ou vaselina, coloque a lamnula e faa uma presso sobre ela. Aspire com uma pipeta uma pequena quantidade da soluo contendo os espermatozoides e introduza entre a lmina e a lamnula, cuidando para que o lquido no transborde a rea delimitada e no quem reas com bolhas de ar. Deixe a cmara na posio horizontal por alguns minutos para que os espermatozoides se assentem; Coloque a cmara na plataforma do microscpio e focalize a
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Os mtodos variam em sua rapidez e acurcia. O mtodo da consistncia no preciso, mas rpido e adequado s condies de trabalho a campo. O mtodo do hematocitmetro mais lento, mas mais preciso. O mtodo espectrofotomtrico tanto rpido quanto preciso, mas o equipamento nem sempre est disponvel.
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rea de contagem em um aumento pequeno (40 ou 100x) passe ento para o aumento de 400x para realizar a contagem. Conte no mnimo 10 quadrados maiores/ejaculado (5 em cada rea de contagem). Somente sero considerados os espermatozoides que estiverem no interior de cada quadrado e aqueles cujas cabeas se encontram nas linhas que formam o ngulo inferior esquerdo de cada quadrado (entrando no quadrado); A concentrao de espermatozoides/ml de smen calculada multiplicando-se o nmero de espermatozoides contados nos 10 quadros por 10.000.000, ou seja: C= A + B x 107 espermatozoides/ml; Exemplo: se foram contados 360 espermatozoides a concentrao 360 x 10.000.000 = 360 x 107 ou 3,6 x 109 espermatozoides/ml. Se a diluio for de 1:200 calcula-se a mdia das duas contagens e o resultado ser C = (A + B)/2 x 107 espermatozoides/ml.
Figura 19: Cmera de Neubauer. Figura 20: Identicao do local de contagem rea de contagem A e B
Figura 21: Cmara de Neubauer preenchida com smen
Figura 22: Modo de contagem dos espermatozoides na cmara. So contados apenas os espermatozoides na posio 1.
A consistncia do smen depende da proporo entre espermatozoides e plasma seminal. Smen de consistncia espessa contm mais espermatozoides que aquele no ou aquoso. Assim, a avaliao da consistncia do smen uma maneira simples e rpida de estimar a concentrao espermtica. Na Tabela 7 so apresentados os valores de concentrao do smen de bodes e carneiros de acordo com a sua consistncia. Para elaborao da tabela, o nmero de espermatozoides foi determinado usando cmara de Neubauer. Smen opaco e aquoso no deve ser usado em inseminao articial.
Tabela 7: Concentrao do smen de carneiro e bode de acordo com a consistncia do smen Nmero de espermatozoides (x109/ml) Consistncia Mdia Variao Cremoso espesso 5,0 4,5-6,0 Cremoso 4,0 3,5-4,5 Cremoso no 3,0 2,5-3,5 Leitoso 2,0 1,0-2,5 Opaco 0,7 0,3-1,0 Aquoso insignicante Fonte: Evans e Maxwell (1987).
8.2.5 Morfologia do espermatozoide A avaliao da morfologia espermtica um teste para determinar a qualidade do smen. Normalmente o ejaculado contm cerca de 5 a 10% de espermatozoides anormais, sem ter nenhum efeito adverso na fertilidade, mas se o percentual de clulas anormais for maior que 20-25% pode-se esperar uma reduo na fertilidade do smen. A porcentagem de espermatozoides anormais pode variar com
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Avaliao da concentrao com base na consistncia do smen
a poca do ano, temperatura ambiental, idade (puberdade), nutrio, doenas e quaisquer fatores estressantes. Durante a rotina de processamento do smen, a avaliao da morfologia espermtica no realizada em cada ejaculado devido ao longo perodo de tempo necessrio para execut-la. Normalmente a avaliao feita durante o exame androlgico para seleo de doadores e repetida mensalmente. Alm disso, espermatozoides anormais podem ser visualizados enquanto se avalia a motilidade. Se observados em grande nmero, pode ser usado como um indicativo da necessidade de fazer uma avaliao morfolgica do ejaculado. A tcnica mais utilizada para a avaliao da morfologia espermtica a microscopia de contraste de fase e a microscopia de campo claro, em amostras submetidas colorao. Avaliao da morfologia pelo mtodo de colorao Eosina-nigrosina O corante eosina-nigrosina amplamente utilizado na rotina de avaliao da morfologia do espermatozoide e na determinao da porcentagem de clulas mortas. A eosina um corante que no atravessa a membrana de clulas vivas, atravessa apenas a membrana de clulas mortas. Durante o exame, os espermatozoides que estavam vivos aparecem brancos (no corados) e os mortos apresentam a cabea corada de rosa acinzentado. Aparecem tambm espermatozoides parcialmente corados (metade da cabea corada e outra metade no), estes devem ser includos no nmero de mortos. Alguns autores consideram estas clulas como morimbundas ou que morreram recentemente. A percentagem de vivos na amostra pode ser usada como forma de vericar a determinao da motilidade. Mas deve-se ter em mente que a porcentagem de espermatozoides vivos sempre um pouco maior que a porcentagem de motilidade.
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Preparao das lminas Coloque 1-2 gotas de corante na extremidade de uma lmina de vidro limpa e aquecida (37C); Adicione uma pequena gota de smen puro ou diludo e misture com o corante por 10 segundos. Lmina, smen e corante devem estar na mesma temperatura (37C); Deixe a mistura descansar por cerca de 30 segundos; Faa um esfregao no e uniforme: - Pegue uma segunda lmina, coloque sua borda contra a superfcie da primeira, em frente mistura smen+corante, formando um ngulo de 45; -Puxe a lmina para trs de modo que entre em contato com a gota da mistura smen+corante, pressionando-a at que a gota se espalhe por toda a borda da lmina. -Deslize a lmina para a frente, guardando sempre o mesmo ngulo, em um s movimento, rme e uniforme, sem separar
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Prepare primeiro a soluo de citrato de sdio em gua destilada (100ml). Coloque em banho-maria quente (50-70C) e com esta soluo dilua os corantes. Misture bem com basto de vidro at obter uma mistura homognea. Deixe descansar por 24 horas e ento ltre, coloque em frasco de vidro escuro e armazene a 4C. O pH da soluo deve car entre 6,7- 6,8 se necessrio ajustar com soluo de cido ctrico.
Preparao do corante Existem vrias combinaes que do bons resultados, geralmente consiste de: Eosina (hidrosolvel) -------- 1 g Nigrosina (hidrosolvel) ---- 5 g Citrato de sdio (2H2O) ---- 2,9 g H2O destilada p/ ------------- 100 ml
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uma lmina da outra. -Identique a lmina; -Espere secar antes de examinar. As lminas devem ser secas rapidamente em uma mesa aquecedora (55 a 60C) para evitar que alguns espermatozoides ao morrer absorvam o corante antes que o processo de secagem se complete, dando uma falsa indicao da porcentagem de vivos. -Armazene em local seco at a realizao do exame.
Figura 23: Preparao do esfregao Contagem dos espermatozoides Coloque a lmina na plataforma do microscpio, focalize e realize a leitura no aumento de 1000x, sob imerso. Examine no mnimo 100 espermatozoides em diferentes campos da lmina. Quanto maior o nmero de espermatozoides avaliados maior a preciso do exame. Anote o nmero de espermatozoides normais e anormais. Os espermatozoides anormais podem ser classicados em cinco categorias diferentes: Espermatozoides sem cauda (cabea isolada normal ou anormal); Espermatozoides com anormalidade na cabea e acrossomo: (cabea estreita, piriforme, gigante, pequena, estreita na base,
Figura 24: Morfologia do espermatozoide ovino. 1- espermatozoide normal, 2-cauda dobrada com gota protoplasmtica distal, 3- cauda fortemente dobrada.
Figura 25: Teste de colorao vital (eosina-nigrosina) do esper-
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acrossomo destacado, enrugado, com bolhas, knobbed, etc); Espermatozoides com anormalidades na cauda e pea intermediria: (cauda dobrada, fortemente dobrada, enrolada, enrolada na ponta, pea intermediria quebrada, engrossamento, pseudogota); Espermatozoides com gota citoplasmtica proximal; Espermatozoides com gota citoplasmtica distal. Smen com mais que 20% de espermatozoides anormais, no deve ser utilizado para inseminao articial.
matozoide caprino. 1- espermatozoide vivo, 2- espermatozoide morto. Avaliao da morfologia espermtica em cmara mida O exame realizado em microscpio com contraste de fase. Diluir uma amostra de smen em soluo de formol salino tamponado ou soluo de citrato de sdio formolada (96 ml de soluo de citrato de sdio 2,94% + 4 ml de formol comercial); Colocar uma gota do smen assim diludo sobre uma lmina e cobrir com lamnula; Se desejar conservar o material por mais tempo deve-se vedar o contorno da lamnula com esmalte incolor, para evitar o extravasamento da amostra. Levar a lmina ao microscpio contraste de fase no aumento 1000x sob imerso; Realizar a contagem. 8.3 Processamento e conservao do smen Uma vez coletado e avaliado, o smen pode ser utilizado de trs formas: fresco (puro ou diludo), resfriado ou congelado. De acordo com a forma de utilizao que ser dada ao smen fazse a escolha do diluidor, a diluio e o processamento necessrio antes da utilizao. 8.3.1 Diluio do smen A principal razo para se diluir o smen antes do uso na inseminao articial obter um maior aproveitamento do ejaculado. Durante a monta natural um carneiro ou bode frtil deposita bilhes de espermatozoides na vagina da fmea. No entanto,
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Os componentes mais utilizados nos diluentes para criopreservao so glicose e frutose como fonte de energia; Tris, citrato de sdio ou tampo fosfato, como componente tampo; a gema de ovo ou o leite como protetor contra o choque trmico; o glicerol como crioprotetor e os antibiticos (c/ penicilina, estreptomicina, gentamicina, etc.) como agentes antimicrobianos.
somente alguns milhares desses espermatozoides penetram a crvice. Quando se usa a IA, tanto o volume quanto o nmero de espermatozoides na dose inseminante podem ser reduzidos em comparao com a inseminao natural. O limite mnimo para se obter uma taxa de concepo aceitvel de 100 milhes de espermatozoides mveis por dose inseminante. Isso possibilita a inseminao de um grande nmero de fmeas com um nico ejaculado. A diluio do smen deve ser feita o mais rpido possvel, aps a coleta e avaliao. Tanto o smen quanto o diluidor devem ser colocados em banho-maria a 30 32C, e deve estar na mesma temperatura no momento da diluio. Existem vrios tipos de diluidores para smen caprino e ovino, compostos de diferentes ingredientes. No entanto um bom diluidor deve ter as seguintes propriedades: Fornecer nutrientes para o espermatozoide; Ter capacidade tampo, para prevenir as mudanas no pH; Proporcionar um ambiente isotnico (osmolaridade igual a do plasma seminal); Proteger o espermatozoide contra o choque de temperatura durante o resfriamento; Proteger o espermatozoide contra as leses membrana plasmtica durante a congelao e descongelao; Controlar a proliferao microbiana; Preservar a vida do espermatozoide com um mnimo de prejuzo sua fertilidade.
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No entanto, diversos outros compostos tm sido testados com a nalidade de melhorar a viabilidade do espermatozoide criopreservado, entre eles antioxidantes, aminocidos, di e trissacardeos (lactose, trealose, ranose). Taxa de diluio Para calcular a exata taxa de diluio necessrio conhecer o volume do ejaculado, a concentrao e a motilidade espermtica do ejaculado, assim como estabelecer o volume e concentrao desejada na dose inseminante. Para uma dose com 100 x 106 espermatozoides mveis em palheta de 0,25 ml, a concentrao nal no smen diludo ser de 400 x 106 espermatozoides/ ml. Com essa informao calcula-se o volume do diluidor que ser acrescido ao ejaculado. Por exemplo, se o ejaculado possui: Volume: Vi = 1,2 ml Concentrao: Ci = 3 600 x 106 espermatozoides/ml Motilidade: M = 85% Total de espermatozoides no ejaculado: CT = Vi x Ci = 4320 x106 spz Total de espermatozoides viveis no ejaculado: Nv = CT x M/100 = 3672 x106 spz Concentrao desejada na dose: Cd =100 x 106 spz viveis Volume da palheta: Vp = 0,25 ml Nmero de doses: ND = Nv/ Cd = 36,7 doses Volume de diluidor a ser adicionado: Vd = (ND x Vp) Vi = 7,98 ml Pode-se tambm, fazer a diluio com base no volume, consistncia (Tabela 7) e na motilidade massal (Tabela 5), por exemplo, se: Volume do ejaculado = 1,2 ml
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Etapas da diluio Preparar um banho-maria (32C) com raque para colocar tubo de coleta e tubo com diluidor; Colocar o tubo contendo o diluidor no banho-maria; Aps coleta, identicar o tubo de coleta, anotar volume, avaliar a motilidade e a concentrao do ejaculado; Calcular a taxa de diluio; Com uma pipeta calibrada aspirar a quantidade apropriada de diluidor; Adicionar o diluente ao smen lentamente (32C ou temperatura ambiente). O diluente deve ser sempre adicionado ao smen e nunca o contrrio, pois pode causar choque ao espermatozoide. Misturar o smen com o diluente cuidadosamente; Reavaliar a motilidade espermtica no smen diludo; Cobrir o tubo e armazenar de acordo com a forma de uso. 8.3.2 Processamento do smen fresco e resfriado Para garantir a capacidade fecundante do espermatozoide durante o tempo entre a ejaculao e o uso necessrio que se faa o processamento adequado do mesmo.
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Consistncia: Cremoso = 4,0 x 109 spz/ml Motilidade massal: 4 = 85% vivos Assim: CT = M x V x C/100 (85 x 1,2 x 4,0 x 109)/ 100 = 4,1x 109spz = 4100 x 106spz viveis Dose: 150 x 106spz (maior margem de segurana j que o valor da CT foi estimado) ND = 27 doses Vd = 6,75 1,2 = 5,6 ml diluidor
A inseminao com smen recm-colhido (fresco), sem nenhuma reduo de temperatura para sua conservao, possvel quando ambos os processos so realizados no mesmo local. O smen fresco pode ser utilizado puro ou diludo e deve ser mantido em banho-maria a 32-35C ou temperatura ambiente (em regies quentes) ao abrigo da luz solar e usado imediatamente. O resfriamento consiste em reduzir a temperatura do smen de 32 C, temperatura de diluio, para a temperatura de armazenamento, 15C ou 5C. A reduo da temperatura diminui o metabolismo basal do espermatozoide aumentando a sua longevidade. No entanto, a reduo da temperatura deve ser feita lenta e progressivamente para evitar o choque trmico para o espermatozoide, reduzindo a sua viabilidade. Diluentes para smen fresco e resfriado Existem vrios tipos de diluidores para smen caprino e ovino, entretanto, os mais utilizados so aqueles base de leite de vaca desnatado ou aqueles contendo gema de ovo. Os diluentes sem gema de ovo podem ser preparados no dia anterior coleta de smen e depois de prontos guardados em geladeira ( 5 C) e utilizados, no mximo, dentro de 2-3 dias. J os diluentes com gema de ovo, devem ser frescos, preparados e usados no mesmo dia. DILUENTE BASE DE LEITE DE VACA DESNATADO PARA SMEN CAPRINO Leite em p desnatado (menos 1% 10 g gordura) 194 mg Glicose anidra 100 mg Estreptomicina 100 000 UI Penicilina potsica 100 ml gua bidestilada (em vidro) p/ Fonte: Chemineau et al. (1991).
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DILUENTE TRIS-GEMA PARA SMEN CAPRINO E OVINO Ovino Caprino Tris (hidroximetil)aminometano 3,634 g 3,634 g Frutose 0,50 g 0,50 g cido ctrico (monohidratado) 1,99 g 1,99 g Gema de ovo 14 ml 2,5 ml gua destilada (em vidro) p/ 100 ml 100 ml Fonte: Evans e Maxwell (1987). Preparo do diluente
Preparo do diluente Filtrar a gua de um coco com aproximadamente seis meses de idade (pH 4,4 a 4,8) e retirar a quantidade desejada; Acrescentar a gua destilada e a soluo de citrato de sdio; Vericar o pH da soluo (ideal 6,8 a 7,2); Corrigir o pH com soluo de hidrxido de sdio (se cido) ou com soluo de cido clordrico a 0,1 N (se alcalino).
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DILUENTE A BASE DE GUA DE CCO PARA SMEN CAPRINO E OVINO gua de coco ltrada 50 ml gua bidestilada (em vidro) 25 ml Soluo citrato de sdio 5% 25 ml Fonte: Nunes e Salgueiro (1999).
Preparo do diluente Dissolver a glicose na gua destilada; Acrescentar o leite em p e dissolv-lo; Ferver esta soluo em banho-maria por 15 minutos; Resfriar temperatura ambiente; Acrescentar a penicilina e estreptomicina; Guardar em geladeira por 2-3 dias, no mximo.
Em um frasco de vidro, graduado; Diluir o Tris, o cido ctrico e a glicose com parte da gua destilada ( 80 ml); Acrescentar a gema de ovo; Completar o volume nal para 100 ml com a gua destilada, Cobrir o frasco com lme plstico ou tampa prpria; Misturar os ingredientes agitando o frasco vrias vezes, para frente e para trs, at que a gema de ovo esteja bem diluda. O diluidor deve ser preparado e usado no mesmo dia (no armazenar em geladeira para reutilizar). O ovo usado deve ser novo, no mximo 4-5 dias de idade. Antes de abri-lo para retirar a gema, este deve ser lavado com gua morna, esterilizado com lcool 70% e seco. Aps quebrar o ovo, a gema separada da clara (cuidado para no quebrar a membrana da gema) e colocada sobre um ltro de papel. Em seguida, role a gema gentilmente sobre o papel para remover toda a clara. Aps remover a clara, quebre a membrana da gema, pressionando-a sobre o papel, e apare seu contedo dentro de um becker estril. A membrana da gema deve permanecer no papel e ser descartada. Etapas do processamento Diluir a amostra de forma a obter-se a concentrao desejada; Armazenar em banho-maria (32C) ou temperatura ambiente e usar imediatamente para inseminao (smen fresco) ou; Proceder o resfriamento: Colocar o tubo contendo o smen diludo em um becker ou copo com gua 32 C ou temperatura ambiente; Colocar o conjunto, becker c/ gua + smen, dentro de um refrigerador (5 C); Colocar um termmetro dentro do becker com gua para moni-
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torar a reduo da temperatura; Colocar tambm as palhetas e a substncia de vedao dentro do refrigerador; A refrigerao deve ocorrer a uma taxa de 0,2 a 0,3C/min; Nessa taxa, atinge-se a temperatura de 15C em cerca de 60 min e 5C em 120 minutos; Acrescentar pedras de gelo gua do copo, se a descida da temperatura estiver muito lenta, ou transferir o copo para uma prateleira mais baixa da geladeira, se a descida estiver muito rpida; Evitar descida brusca de temperatura na faixa de 18C a 5C, porque nessa faixa de temperatura o espermatozoide muito susceptvel ao choque trmico, se necessrio reduzir a taxa de resfriamento para 0,2C/min, na faixa de 15 a 5C. Esperar atingir a temperatura desejada e envasar; Envasar o smen em palhetas de 0,25ml ou 0,5ml de acordo com os seguintes passos: Identicar as palhetas com o nome ou nmero do reprodutor, raa e data; Inserir a extremidade aberta da palheta no frasco contendo o smen diludo e aspirar na extremidade com o tampo de algodo, at o preenchimento da mesma; Bater levemente na extremidade aberta da palheta, para descartar um pouco do smen e formar uma bolha de ar; Vedar a palheta com lcool polivinlico (APV) ou com massa de modelar para crianas; Submergir a extremidade vedada com APV em um copo com um pouco de gua (na temperatura de resfriamento) por alguns minutos; Secar cuidadosamente com papel e armazenar. Manter o smen na temperatura adequada (15 a 5C) durante todo o perodo de armazenagem; Transportar em garrafa trmica ou caixa de isopor com gelo, cuidando para que as palhetas no quem em contato direto
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com o gelo; Utilizar em at 12 horas aps o preparo.
8.3.3 Criopreservao do smen Quando o smen congelado e mantido a baixa temperatura, como no nitrognio lquido a -196C, o metabolismo do espermatozoide completamente inibido. Isso possibilita o armazenamento do smen por um perodo prolongado. Para o processamento do smen na forma congelada, necessrio dispor de laboratrio com equipamentos e materiais adequados, bem como de um prossional qualicado e no caso de smen para comercializao, necessita ainda de credenciamento junto ao Ministrio da Agricultura. Por isso mais aconselhvel e seguro para o criador, adquirir o smen congelado de uma central credenciada. Diluentes para congelao Os diluentes para congelao de smen caprino e ovino devem ter as mesmas caractersticas daqueles utilizados para smen fresco e refrigerado, ou seja, devem ser capazes de proteger contra as mudanas no pH e tonicidade, alm de conter uma fonte de energia, um agente para proteger a clula do choque trmico durante o resfriamento e um agente crioprotetor para proteger o
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TRIS-GLICOSE-GEMA PARA DILUIO EM UMA ETAPA Ovino Caprino* Tris (hidroximetil)aminometano 3,634g 3,786 g Glicose (anidra) 0,50g 0,625 g cido ctrico (monohidratado) 1,990g 2,172 g Gema de ovo 15mL 2,5 ml Glicerol 5mL 5 ml Penicilina Potssica 100.000UI 100.000UI Estreptomicina 0,100g 0,100g gua destilada qsp 100mL 100mL Fonte: Evans e Maxwell (1987). * smen no lavado DILUENTE BASE DE LEITE DESNATADO PARA SMEN CAPRINO, DILUIO EM DUAS ETAPAS Meio I Meio II Leite em p desnatado (me- 10 g 10 g nos 1% gordura) Glicose Anidra 194 mg 194 mg Glicerol 14 ml Penicilina Potssica 100.000UI 100.000UI Estreptomicina 0,100g 0,100g gua Destilada p/ 100 mL 100 mL Fonte: Chemineau et al. (1991). Preparar o diluente da mesma forma descrita no tem 8.3.2. Adicionar o glicerol aps atingir a temperatura ambiente. TRIS-GLICOSE-GEMA PARA SMEN OVINO, DILUIO EM DUAS ETAPAS Tris (Hidroximetil)Aminometano Glicose (anidra) cido Ctrico (monohidratado) Gema de Ovo Glicerol Meio I 3,028g 0,20g 1,675g 20mL Meio II 3,028g 0,20g 1,675g 20mL 14mL
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espermatozoide contra os danos membrana plasmtica durante a congelao.
OEP (Orvus es paste)* 1% Penicilina Potssica 100.000UI 100.000UI Estreptomicina 0,100g 0,100g gua Destilada p/ 100 mL 100 mL Fonte: Maia (2006). * OEP (Orvus es Paste) um detergente usado como dispersor de fatores de proteo existentes no plasma seminal e na gema de ovo. Preparar o diluente da mesma forma descrita no tem 8.3.2. Meio II: adicionar o OEP, homogeneizar a soluo e completar p/ 100 ml. Retirar 14 ml e descartar e em seguida acrescentar o mesmo volume de glicerol. Processamento do smen congelado Durante a congelao do smen necessrio realizar todas as operaes feitas para o smen resfriado, como: diluio, resfriamento, acondicionamento em palhetas, para ento realizar o congelamento. No caso do smen caprino, alm dessas etapas tambm necessrio proceder a retirada do plasma seminal. Esse procedimento necessrio devido a existncia de enzimas no plasma seminal do bode, que atuam sobre os fosfolipdios do diluidor liberando compostos txicos ao espermatozoide. Diluidores que conteem leite ou gema de ovo em sua composio so ricos em fosfolipdios, por isso, para utiliz-los o smen deve ser lavado antes da diluio. No caso da gema de ovo, se a sua concentrao no ultrapassar 2,0% no smen diludo no necessrio remover o plasma seminal antes da diluio. Lavagem do smen caprino A retirada do plasma seminal deve ser feita imediatamente aps a coleta. Para isso, diluir o smen com uma soluo KrebsRinger-fostato ou soluo a base de Tris-frutose e ento centrifuga-
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Preparo da Soluo Preparar cada soluo em gua bidestilada, nas concentraes nais recomendadas e reservar; Preparar o tampo fosfato: Dissolver 35,81 g de fosfato de sdio dibsico (Na2HPO4, 12 H2O) em 20 ml HCl/N; Adicionar gua bidestilada p/ volume de 1000 ml.
SOLUO DE LAVAGEM (Krebs-Ringer-Fosfato) Soluo Inicial Volume de Soluo Inicial (ml) na Soluo nal Cloreto de sdio (NaCl) a 0,9% 100 ml Cloreto de potssio (KCl) a 1,15% 4,0 ml Cloreto de clcio (CaCl2) a 1,22% 3,0 ml Fosfato de potssio monobsico (KH2PO4) 0,4 ml a 2,11% Sulfato de magnsio (MgSO4, 7H2O) a 1,0 ml 3,82%. Tampo fosfato pH 7,4* 12,0 ml 4,5 ml Glicose anidra (C6H12O6) a 5,34% Misturar as solues nessa ordem Fonte: Chemineau et al. (1991)
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lo, conforme as seguintes etapas: Preparar a soluo de lavagem no dia anterior a coleta; Colocar um tubo com a soluo de lavagem no banho-maria (30-32C); Logo aps a coleta, diluir o ejaculado (32C) com a soluo de lavagem na proporo de 1:9; Centrifugar a 500 -600 x g por 10-15 minutos; Descartar o sobrenadante usando uma pipeta; Adicionar ao tubo o mesmo volume da soluo de lavagem ( temperatura ambiente) e centrifugar novamente; Descartar o sobrenadante e adicionar o diluidor temperatura ambiente.
Soluo HCl/N (d=1,19): 50 ml de gua bidestilada + 84,7 ml de HCl (cido clordrico), homogeneizar a soluo e acrescentar gua destilada at obter 1000 ml de volume nal de soluo. Preparar a soluo nal Krebs-Ringer-Fosfato misturando as quantidades indicadas de cada soluo inicial, na ordem em que foram listadas. SOLUO DE LAVAGEM (Tampo Tris-frutose) Tris (Hidroximetil)aminometano 3,605 g 2,024 g cido Ctrico (monohidratado) 1,488 g Frutose 100 ml gua destilada para Preparo: diluir os compostos em gua destilada, misturar e completar o volume p/ 100 ml (pH 7,0). Etapas da congelao em palhetas Calcular a taxa de diluio e obter o volume total de diluidor a ser acrescentado ao smen; Diluir o smen em uma ou em duas etapas. Diluio em uma etapa: diluir o smen, a 30C ou temperatura ambiente, acrescentando o volume total do diluente, j contendo o crioprotetor e ento resfriar 5C. Diluio em duas etapas: dividir o volume total do diluente em duas partes iguais, uma do meio I (sem glicerol) e a outra do meio II (contendo glicerol). Proceder a primeira diluio do smen, a 30C ou temperatura ambiente, com a frao no glicerolizada do diluente. Levar o smen geladeira para resfriar. Quando atingir 5C fazer a segunda diluio. 2 diluio: dividir a quantidade necessria do meio II (com glicerol) em trs alquotas de volume igual e adiciona-las ao smen, a intervalos de 10 minutos. Refrigerar o smen:
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A congelao pode ser feita usando uma mquina de congelao automtica, onde a reduo da temperatura ocorre automaticamente e de forma controlada ou conforme as orientaes a seguir: Colocar o nitognio lquido (N2L) em uma caixa de isopor, na quantidade necessria para atingir a temperatura de pr-congelao (-75 a 100C) no vapor de nitrognio. O controle da temperatura deve ser feito com termmetro eletrnico acoplado a uma palheta; Distribuir as palhetas horizontalmente, em uma prateleira metlica apropriada (a 5C); Realizar a pr-congelao em vapor de nitrognio: Existem diferentes recomendaes de altura e tempo de exposio ao vapor de nitrognio, dependendo do ritmo de congelao desejado. A velocidade do resfriamento regulada pela distancia entre a palheta e o nvel do N2L. Quanto maior a altura em que o porta-palhetas se encontra, mais lento o ritmo da congelao. O espermatozoide ovino tolera uma ampla variao na velocidade de congelao. A suspenso das palhetas em vapor de nitrognio com temperatura entre -75 C e -125 C no afeta a sobrevivncia do espermatozoide. J o espermatozoide caprino menos tolerante. Geralmente, recomendada a exposio das palhetas a uma temperatura de -75 C no vapor de nitrognio. Para smen caprino e ovino Evans e Maxwell (1987) recomendam:
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Seguir as etapas descritas no item 8.3.2; Colocar o frasco com o meio II, as palhetas e a substncia de vedao no refrigerador; Quando atingir 5C fazer a segunda diluio (no mtodo de diluio em duas etapas) Envasar: como descrito no tem 8.3.2 Congelar o smen:
Colocar a prateleira com as palhetas sobre o vapor de nitrognio a uma distancia de 3-4 cm do nvel do nitrognio por 7-8 minutos e ento submergir as palhetas no nitrognio lquido. Chemineau et al. (1991) recomendam: Para smen caprino em palhetas de 0,5 ml: 5 minutos a 4 cm do nvel do nitrognio; Palhetas de 0,25 ml: 2 min a 16 cm + 3 min a 4 cm do nvel do nitrognio. Para smen ovino em palhetas de 0,5ml: 8 minutos a 20 cm do nvel do nitrognio. Outras taxas de congelao utilizadas com bons resultados so: Smen caprino: 20 minutos 5 cm do nvel do nitrognio (Bittencourt et al., 2004); Smen ovino: 20 minutos 3 cm do nvel do nitrognio (Rodello, 2006) Mergulhar as palhetas no N2L; Colocar as palhetas em raques prprias; Armazenar em botijo criognico at o uso.
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Figura 31: Armazenamento e manipulao do smen congelado Cuidados com o botijo de smen Manipular o botijo com cuidado evitando pancadas, movimentos bruscos e tombamento; De preferncia, acondicion-lo em uma caixa de madeira, para maior proteo; Transportar o botijo em caixas de madeira, preso na posio vertical, mesmo quando estiver vazio (nunca deve ser transportado
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Armazenamento e manipulao do smen congelado Manter o smen submerso no nitrognio lquido a 1960C; Transportar em botijes criognicos; Descongelar a dose imediatamente antes do uso.
solto em carrocerias de veculos); Medir regularmente o nvel do nitrognio com a rgua que acompanha o botijo; Nunca deixar que o nvel do nitrognio que abaixo 15cm; Reabastecer o botijo quando o nvel do nitrognio estiver prximo ao mnimo; Manter o botijo em ambiente ventilado, seco, ao abrigo de raios solares, fechando-o apenas com sua tampa prpria; nunca vedar a tampa para impedir a evaporao do lquido; Manusear canecas e raques com cuidado para evitar acidentes (o contato do nitrognio com as partes do corpo pode causar ferimentos); Evitar que as canecas e raques sejam levantadas vrias vezes procura de smen de um determinado reprodutor; Identicar as canecas e raques com o nome dos reprodutores para facilitar a localizao no momento da inseminao; Manter o controle adequado do uso e aquisio de smen. Descongelao do smen: Retirar a palheta do botijo; Mergulhar imediatamente, em gua a 37 C por 30 segundos; Secar a palheta com papel, antes do uso.
9.0 A TCNICA DA INSEMINAO ARTIFICIAL CERVICAL

As cabras e ovelhas podem ser inseminadas, basicamente, por dois mtodos: a inseminao cervical e a inseminao intrauterina por laparoscopia. A inseminao cervical o mtodo mais utilizado tanto em cabras como em ovelhas. Nesse mtodo, o smen depositado na entrada da crvice (ovelha e maioria das cabras) ou, se possvel,
dentro do tero, conforme as etapas descritas a seguir. 9.1 Equipamentos Os equipamentos utilizados para a inseminao cervical so um espculo vaginal, uma fonte de luz e um aplicador de smen. Existem dois tipos de especulo: o tubular e o bico de pato. O bico de pato proporciona melhor visibilidade e localizao da crvice e mais fcil de limpar. Alguns espculos tm a fonte de luz embutida, caso no tenha, pode ser usada uma lanterna pequena, tipo caneta. Vrios tipos de seringas e pipetas so usados na inseminao cervical. Mas, o aplicador modelo universal o mais popular devido ao grande uso na inseminao de bovinos. Esse modelo tambm o mais adequado ao uso quando o smen armazenado em palhetas.
Figura 32: Equipamentos utilizados na inseminao articial. 1- espculo bico de pato, 2- especulo tubular, 3- aplicador de smen, 4- bainha do aplicador. Procedimentos Necessrios Antes da Inseminao Preparar as fmeas que sero inseminadas, colocando-as em uma baia ou curral prximo ao local onde a inseminao ser realizada
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algumas horas antes do incio dos trabalhos, mantendo-as em condies normais, com acesso a gua e comida e evitando ao mximo condies de estresse (gritos, movimentao dos animais, presena de ces, etc). Denir o horrio da inseminao, considerando o nmero de inseminaes que sero realizadas (uma ou duas) e a espcie com que se est trabalhando. Avaliar a qualidade do smen, analisando uma amostra antes de iniciar os preparativos para a inseminao, e utilizando apenas smen com no mnimo 30% de motilidade e vigor 3 (CBRA, 1998). 9.3 Etapas da Inseminao Cervical 9.3.1 Preparo do smen Retirar rapidamente a palheta da caixa trmica (smen resfriado) ou do botijo (smen congelado); Colocar em um recipiente com gua 37oC por 30 segundos (smen congelado); Secar a palheta com papel limpo; Cortar a extremidade vedada com lcool polivinlico e encaix-la na bainha; Colocar a bainha no aplicador; Segurar o aplicador entre os lbios e dirigir-se fmea que ser inseminada, a qual j dever estar imobilizada. 9.3.2 Imobilizao da fmea Levantar o trem posterior da fmea de forma a permitir que a vulva que na altura dos olhos do inseminador, prendendo a cabea da mesma entre as pernas (Figura 26); ou Levantar o trem posterior da fmea apoiando os membros traseiros sobre uma viga, sacos de rao ou fardos de feno; Manter a fmea na posio correta enquanto limpa a vulva com papel seco, se necessrio.
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9.3.3 Introduo do espculo e deposio do smen Introduzir cuidadosamente, na vagina da fmea segurando-o com a mo direita e abrindo os lbios vulvares com a mo esquerda; Se usar um espculo tipo bico de pato, este deve ser introduzido fechado na vagina, com as partes laterais do bico paralelas aos lbios vulvares; Girar e abrir o espculo quando este penetrar cerca de 8-10 cm no canal vaginal; Localizar o orifcio de entrada da crvice (orifcio cervical); Observar o tipo e quantidade de muco presente na vagina e drenar se necessrio; Colocar o aplicador na entrada do orifcio cervical (Figura 28) e; Introduzir cuidadosamente o aplicador na crvice, fazendo movimentos rotacionais e para cima e para baixo, mas sem uso de fora; Nesse ponto, duas possibilidades podem ocorrer: impossvel penetrar mais que 1-2 cm na crvice, o que ocorre na ovelha e em grande nmero de cabras. Nesse caso, o inseminador deve puxar o aplicador para trs alguns milmetros (para evitar bloqueio pelo contato com as dobras cervicais) e depositar o smen lentamente. Este mtodo chamado de inseminao intra-cervical. possvel transpor o canal cervical e introduzir a pipeta de inseminao no tero, o que pode ocorrer em nmero variado de cabras (20-80 %). Nesse caso, puxar o aplicador alguns milmetros, depositando o smen no corpo do tero. Este mtodo denominado inseminao intrauterina. A inseminao intrauterina est correlacionada com um aumento da fertilidade. No entanto, de fundamental importncia, que a crvice no seja forada pelo inseminador, pois quando lesionada, o contato com o sangue
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Figura 33: Inseminao articial cervical em uma cabra Figura 34: Visualizao do local de aplicao do smen e intro-
mata os espermatozoides. Retirar o aplicador e o espculo; Colocar a fmea de p cuidadosamente; Massagear o clitris; Anotar os dados de identicao da fmea, smen, condies e data da inseminao e nalmente; Limpar e desinfectar o espculo antes de us-lo na prxima fmea.
duo do aplicador 9.4 Momento Ideal Para Inseminar O momento em que a inseminao realizada interfere na fertilidade. Esse momento deve ser ajustado de acordo com a durao do estro e o momento da ovulao em cada espcie. Na inseminao cervical, maior sucesso obtido quando a inseminao realizada antes da ovulao, porm prximo ao horrio da mesma. Para isso necessria a deteco do estro. No estro sincronizado no precisa detectar o estro e a inseminao pode ser feita em um horrio pr-determinado em relao ao nal do tratamento hormonal. Este tipo de inseminao denominado IATF (inseminao em tempo xo). Quando se realiza a sincronizao hormonal, o momento da ovulao varia muito pouco entre os animais, ocorrendo em um curto intervalo de tempo na maioria deles. Na sincronizao pelo mtodo do progesterona + eCG, a maioria das fmeas apresentam estro entre 36 e 48 horas e ovulam cerca de 60 horas aps a remoo da esponja. 9.4.1 Em estro natural 12 a 18 horas aps a aceitao da monta pelo ruo na cabra 15 a 17 horas na ovelha, Ou quando o muco estiver com colorao creme claro e com aspecto viscoso. 9.4.2 Em estro sincronizado Duas inseminaes: Na cabra, inseminar s 30 e s 48 horas aps a retirada da esponja; Na ovelha, inseminar s 50 e s 60 horas aps a retirada da esponja.
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Uma nica inseminao em horrio pr-determinado (IATF): Na cabra, inseminar entre 42 2 horas aps a retirada da esponja; Na ovelha, inseminar entre 48 e 58 horas aps a retirada da esponja (geralmente, s 55 horas).
10.0 MANEJO DA CABRA E OVELHA APS A INSEMINAO ARTIFICIAL

O manejo das fmeas aps inseminao articial, no difere muito do manejo dado aos animais acasalados em monta natural. No entanto, condies estressantes devem ser evitadas nas quatro semanas aps a inseminao. Devem ser tomados os cuidados bsicos principalmente quanto nutrio, sade e manejo durante a gestao, parto e lactao. Algumas prticas que necessitam de modicao, especialmente nos programas de Inseminao articial so: 10.1 Identicao e Acasalamento das Fmeas que no Conceberam As fmeas que no conceberam durante o programa de inseminao devem ser cobertas novamente no estro subseqente, de forma a obter uma maior taxa de pario. Nesses casos, as fmeas podem ser acasaladas ou por IA ou monta natural. A monta natural preferida devido facilidade e baixo custo, alm de proporcionar uma fertilidade maior quando comparada a IA, favorecendo a identicao de fmeas com problemas reprodutivos. Novo acasalamento com monta natural
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10.2 Diagnstico de gestao O diagnstico de gestao ajuda no manejo do rebanho, uma vez que possibilita a separao das fmeas gestantes para receberem o manejo adequado a sua condio siolgica. Existem vrios mtodos de diagnstico de gestao em cabras e ovelhas. O mais simples deles o no retorno ao cio at 21 dias aps a cobertura. Esse mtodo realizado como descrito acima, usando ruo ou macho inteiro. Outros mtodos incluem: dosagem hormonal, ultrassonograa e palpao abdominal, mas nenhum deles capaz de detectar prenhez antes de 20 dias.
11.0 FATORES QUE INTERFEREM NA FERTILIDADE APS A INSEMINAO

11.1 Nmero de espermatozoides inseminados O nmero total de espermatozoides inseminados um dos principais fatores que podem interferir na fertilidade obtida. O nmero requerido varia de acordo com o tipo de smen (fresco,
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Se a fmea no concebeu na IA, um novo cio ocorrer em torno de 16-17 dias aps a inseminao (ovelha) e entre 19-21 dias na maioria das cabras (uma porcentagem de cabras pode apresentar ciclo curto). Cerca de 10-12 dias aps a IA introduzir no rebanho 3% de machos inteiros para identicar as fmeas em estro e realizar os acasalamentos. Usar bucal marcador ou tinta no peito dos machos, para poder identicar as fmeas que repetiram cio e a data da nova cobertura (a cor da tinta deve ser diferente da usada anteriormente).
resfriado ou congelado) e o local da inseminao. Na inseminao cervical o nmero mnimo de espermatozoides viveis/dose, para atingir uma boa fertilidade de 100 milhes para smen fresco e de 100 a 200 milhes com smen resfriado ou congelado. Na inseminao intrauterina (laparoscopia) a dose recomendada varia de 10 a 50 milhes de espermatozoide em cada corno uterino. 11.2 Qualidade do smen A fertilidade do smen est altamente correlacionada com o percentual de espermatozoides viveis e com a motilidade, quanto maior esse percentual, maior as chances de prenhez. Smen com menos de 30% de motilidade resulta em baixa fertilidade. 11.3 Tipo de estro A fertilidade de fmeas inseminadas em estro natural maior que em estro sincronizado. Possivelmente, isso ocorre devido a um efeito negativo do hormnio sobre a sobrevivncia do espermatozoide durante seu transporte no trato genital feminino e/ou devido a qualidade do vulo e do corpo lteo resultantes desta ovulao, que pode ser inferior no estro sincronizado. 11.4 Local de deposio do smen A profundidade de deposio do smen no sistema genital da fmea no momento da inseminao interfere na fertilidade. A taxa de prenhez aumenta medida que aumenta a profundidade de deposio do smen: vagina < crvice < tero. 11.5 Momento da inseminao
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11.6 Intervalo entre o ltimo parto e a inseminao Nas ovelhas, recomendado um intervalo mnimo de 90 dias aps o parto antes de se realizar a inseminao. J na cabra, a fertilidade baixa quando o tratamento hormonal aplicado antes de 120 dias aps o parto. 11.7 Idade da fmea Fmeas muito jovens podem ser menos frteis que fmeas adultas, assim como aps cinco anos a fertilidade diminui progressivamente. A fertilidade mxima das fmeas obtida entre 18 meses e trs anos de idade. 11.8 Nutrio O nvel nutricional modica os resultados aps a inseminao. Em rebanhos onde o nvel nutricional baixo, os resultados so geralmente baixos. Um nvel nutricional muito alto tambm prejudicial fertilidade. Fmeas muito gordas tm a fertilidade
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Para obter maior ndice de fertilidade a inseminao deve ser realizada prximo ao momento da ovulao, pois quando realizada muito cedo ou muito tarde a fertilidade prejudicada. O ambiente uterino e tubrio, no nal do estro, no so favorveis ao transporte e sobrevivncia do espermatozoide. O momento da inseminao mais crtico quando se usa smen resfriado e congelado do que com smen fresco. O mesmo em relao ao estro natural e sincronizado. Em estro sincronizado, inseminao realizada muito cedo (36 h) ou muito tarde (72 h ou +) aps a remoo da esponja resulta em menor fertilidade.
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reduzida comparada com aquelas normais. O estado nutricional da fmea no momento da inseminao pode ser avaliado pelo escore de condio corporal (ECC), que varia de 1 a 5 (1 muito magra, 5- muito gorda). O ideal para reproduo um ECC 3,0. No macho, a subnutrio leva a uma reduo da libido, da concentrao e nmero total de espermatozoides ejaculados. Na fmea, a subnutrio pode resultar em supresso do estro (anestro) e ovulao ou aparecimento de ovulaes silenciosas (cio silencioso). Por estas razes, recomenda-se a suplementao alimentar de machos e fmeas antes do incio da estao de monta. Na cabra e ovelha, uma alimentao com maior nvel proteico e energtico (ushing) oferecida algumas semanas antes do incio dos acasalamentos resulta em aumento signicativo na taxa de ovulao e nmero de crias por parto. 11.9 O Inseminador Um dos principais pontos de sucesso na inseminao de cabras e ovelhas o inseminador. O bom inseminador deve ter prtica e um bom conhecimento do sistema genital da fmea. Uma pessoa pouco atenta, irritada, que no goste de executar este servio e que o faa sem a delicadeza e o cuidado necessrio, ser um mau inseminador. Tabela 8: Fatores que afetam a taxa de prenhez (%) em cabras, aps inseminao articial com smen fresco diludo (37 C). FATOR N PRENHEZ (%) FONTE Nqecn"fgrqukq" Maia e Santos (2008) Orifcio cervical 43 48,5 Intra cervical 49 63,1 Intrauterina 12 24,1 Kpugokpcfqt
2,0 47 2,5 41 3,0 32 4,0 06 ECC escore de condio corporal
36,76b 65,28a a 70,63ab 54,68
Tabela 9. Fatores que afetam a taxa de prenhez de ovelhas aps inseminao articial. IA* SMEN ESTRO HORARIO PRE- FONTE NHEZ (%) Cervical Fresco Natural 12 - 18 h / 87,8 Souza, cio*** et al. Congela- Natural 65,4 (1994) do Cervical Fresco (di- Natural 12h/ cio 78,6 S o u s a ludo) (2002) Sincroni- IATF (56- 41,9 zado 59h) Resfriado Natural 12h/ cio 71,4 (24 h) Sincroni- IATF (56- 21,5 zado 59h) Cervical Fresco Natural 12-18h/cio 82,0 Donov a n Sincroni- IATF (57h) 70,0 e t a l zado (2004) Congela- Natural 12-18h/cio 40,0 do Sincroni- IATF (57h) 52,0 zado
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1 2
GEE
46 58
48,9 41,5
Maia e Santos (2010)
Intrauteri- Congela- Sincroni- IATF (53h) na** do zado 25h/cio Intrauteri- Congela- Sincroni- I A T F na** do zado (541h) I A T F (551h) Intrauteri- Resfriado Sincroni- I A T F (8 h) zado (551h) na** I A T F (491h) Intra-uteri- Resfriado Sincroni- IATF (50(6 h) zado 55h) na** Cervical Cervical Cervical
20,0 50,0 69,0 40,0 77,3 15,0 71,8 35,7
Gonzalez et al. (2006) King et al. (2004) M i l -
IATF (4850h) * Mtodo da inseminao articial, ** inseminao intra-uterina por laparoscopia, *** horas aps o inicio do cio. 12.0 LIMPEZA DO MATERIAL Todos os utenslios e instrumentos utilizados na coleta, manipulao do smen e inseminao articial devem ser cuidadosamente limpos e esterilizados. Lavar os equipamentos com gua limpa e tratada, usando um detergente prprio para vidraria de laboratrio (ex. Extran neutro) diludo em gua na concentrao recomendada. Vidraria e material plstico (tubos, ponteiras, tampas, etc) sujos com material proteico: Retirar os resduos com gua corrente e imergi-los em soluo de
M a chado et al. (2006)
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Vidraria e material plstico, sujos com gua ou solues tampo sem material proteico: Lavar com detergente, gua corrente e enxaguar trs vezes em gua destilada. Usar bucha e escovas apropriadas para limpar o interior das vidrarias. Aps a lavagem, todos os instrumentos devem ser enxaguados vrias vezes com gua corrente, para remover todos os traos do detergente, e depois com gua destilada (vrios enxgues). Depois de secos, os materiais de plstico e borracha podem ser esterilizados com calor mido (autoclave, 120 C/ 20 min) ou enxaguados com lcool 70%. A vidraria deve ser coberta com papel alumnio e esterilizada a seco (estufa a 140-180 C/2 horas).
Figura 35: Estufa de esterilizao
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hipoclorito de sdio a 1% por 12 horas; Lavar com gua corrente e colocar em imerso na soluo de detergente por 2-4 horas antes de lav-los;
13.0 ANOTAO DE DADOS

Quando se usa a inseminao articial, a anotao dos dados necessria para que se tenha um controle do desempenho reprodutivo do rebanho e dos animais isoladamente. Deve-se fazer anotaes dirias sobre fmeas que entram em cio; repetio de cio aps cobertura; nome e nmero das fmeas inseminadas; nome ou nmero do reprodutor cujo smen foi utilizado; horrio da inseminao, tipo de inseminao (intra cervical/intrauterina); nmero de inseminao por cabra por poca de cobertura; data do parto; nmero de crias por parto; sexo das crias; peso ao nascer. O criador dever ter o maior nmero de anotaes possveis sobre o desempenho reprodutivo de seu rebanho para poder selecionar as fmeas que sero descartadas, bem como aquelas que sero inseminadas com smen de um determinado reprodutor, que melhore determinada caracterstica, conforme o objetivo da criao. 14.0 BIBLIOGRAFIA CONSULTADA AISEN, E.G. Reproduccion ovina y caprina. Buenos Aires: Intermdica, 2004. 216 p. BEARDEN, J.H.; FUQUAY, J.W. Applied animal reproduction. Reston: Reston Publishing Company, 1980. 337p. BITTENCOURT, R.F.; RIBEIRO, A.L.; SANTOS, A.D.F.; FURST, R.; TEIXEIRA, R.B.S.; CHALHOUB, M.; PORTELA, A.P.; ALVES, S.G.G.; ALMEIDA, A.K.; GUIMARES, J.D. Utilizao de glicerol e etilenoglicol como
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EMPRESA DE PESQUISA AGROPECURIA DO RIO GRANDE NORTE

INSTITUTO DE ASSISTNCIA TCNICA E EXTENSO RURAL DO RN

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VII CIRCUITO DE TECNOLOGIAS ADAPTADAS PARA A AGRICULTURA FAMILIAR

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Figura 1: Anatomia do sistema genital masculino Figura 2: Testculo e epiddimo

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4.0 ANATOMIA E FISIOLOGIA DA REPRODUO EM CABRAS E OVELHAS

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Figura 4 Anatomia do sistema genital feminino

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Figura 5: tero de cabra

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- Capacidade de transmitir as caractersticas desejveis aos seus descendentes.

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RAA Parda Alpina

RAA Santa Ins

IDADE (meses) At 12 12 - 18 18 24 29 36 40 48 > 48 At 12 12 - 18 29 36 40 48

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Tratamento Efeito Macho EM+MAP

Fonte: Maia et al. (2009)

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Figura 8: Protocolo de sincronizao do estro e ovulao na ovelha