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EPIDEMIOLOGIA MOLECOLARE DEI TUMORI E DI ALTRE PATOLOGIE CRONICO-DEGENERATIVE

MAINSTREAM SMOKE SIDESTREAM SMOKE

MALATTIE
ENVIRONMENTAL CIGARETTE SMOKE (ECS)

I NN CE E D NI N A

FATTORI DI RISCHIO

R GIO

NI -

TIM SET

E AN

DOSE BIOLOGICAMENTE EFFETTIVA Addotti a DNA e proteine

DANNI BIOLOGICI PRECOCI Alterazioni metaboliche Danno e riparazione del DNA Mutazioni/Effetti citogenetici Attivazione di oncogni Delezione o mutazione di geni oncosoppressori Effetti su proliferazione, differenziazione, apoptosi

MARCATORI DI ESPOSIZIONE

Analisi di metaboliti Mutagenicit di escreti

FATTORI PROTETTIVI

MALATTIE

I NN CE E D NI N A

FATTORI DI RISCHIO

R GIO

NI -

TIM SET

E AN

DOSE BIOLOGICAMENTE EFFETTIVA Addotti a DNA e proteine

DANNI BIOLOGICI PRECOCI Alterazioni metaboliche Danno e riparazione del DNA Mutazioni/Effetti citogenetici Attivazione di oncogni Delezione o mutazione di geni oncosoppressori Effetti su proliferazione, differenziazione, apoptosi

STOP

MARCATORI DI ESPOSIZIONE

Analisi di metaboliti Mutagenicit di escreti

DOSIMETRIA DEGLI XENOBIOTICI

DOSE DI ESPOSIZIONE

DOSE FARMACOLOGICA DOSE CELLULARE DOSE BERSAGLIO CELLULA INIZIATA DOSE MOLECOLARE CELLULA NEOPLASTICA

ADDOTTO AL DNA
CELLULA BERSAGLIO

40 30 20 10 0 0 50 100 150 200

Cigarettes / day

r = 0.57 P < 0.05

BPDE-DNA adducts (FU)


A. Izzotti et al., Carcinogenesis 12, 1281-1285, 1991

SIGNUM PROJECT (918 subjects)


End-points: DNA adducts 8oxodG Metabolic polymorphisms

ADDOTTI AL DNA DEL FEGATO DI WOODCHUCKS, IN RELAZIONE ALLINFEZIONE CON IL VIRUS DELLEPATITE

WHV

WHV +

A. Izzotti et al., Chem.-Biol. Inter. 97, 273-285, 1995

IL FENOMENO DELLICEBERG PER MALATTIE CRONICODEGENERATIVE


DIAGNOSI MALATTIE CARDIOVASCOLARI CANCRO BPCO
NA al D dativo nica o n ro si Dan ss os ione c e Str mmaz a Infi

TERAPIA

EPIDEMIOLOGIA

PREVENZIONE

FATTORI DI RISCHIO E FATTORI PROTETTIVI

THE 'OMICS TECHNOLOGIES


DNA RNA MicroRNA Proteins
Chronic degenerative diseases and critical periods of life

GENOME

Colored by: SHAM vs CS, Default Interpretation ( sham.txt) Gene List: mmu (484)

MIRNOME TRANSCRIPTOME

PROTEOME

PROTECTIVE FACTORS

MOLECULAR EFFECTS OF CIGARETTE SMOKE IN RAT LUNG


DNA MicroRNA mRNA Proteins

CIGARETTE SMOKE

100

10000

10

1
1000

0,1

0,01 0,01 0,1 1 10 100


1000 10000

SHAM

SHAM

SHAM

A. Izzotti et al., FASEB J. 23, 806812, 2009

COMMON PATHOGENETIC MECHANISMS

Stem cell susceptibility Agerelated diseases Perinatal vulnerability

Cancer Atherosclerosis

DNA damage Epigenetic mechanisms Oxidative stress Chronic inflammation

Degenerative heart diseases

Chronic obstructive pulmonary diseases

Transplacental damage Skin ageing and alopecia

Genetic predisposition
Neurological disorders Metabolic syndrome Eye diseases Diabetes

Pathological conditions

Cancer / Physical agents

Pathological conditions

Cancer / Chemicals and complex mixtures

Pathological conditions

Cancer / Microbial diseases

Pathological conditions

COPD
(A. Izzotti et al., FASEB J. 17, 11271127-29, 2003) (R. Balansky et al., Carcinogenesis 30, 13981398-401, 2009)

Pathological conditions

Alopecia
(R. Balansky et al., PNAS USA 103, 78237823-28, 2006)

Pathological conditions

Atherosclerosis

Pathological conditions

Heart diseases

Pathological conditions

Neurodegenerative diseases
S. La Maestra et al., Toxicol. Sci. 123, 471-9, 2011

PROLIFERATION AND CHRONIC DEGENERATIVE DISEASES

DNA damage DNA repair Oxidative stress Chronic inflammation Epigenetic mechanisms

n o i t ra e f i l Pro
Cancer Atherosclerotic plaque Degenerative diseases of the myocardium Neurodegenerative diseases

Pathological conditions

Eye diseases
(A. Izzotti et al., Am. J. Med. 114, 638638-646, 2003)

Pathological conditions

Rare genetic diseases


(A. Izzotti et al., Neurology 71, 610610-2, 2008)

Physiological situations

Pregnancy and perinatal period


(A. Izzotti et al., Mutat. Res. Rev. 544, 441441-449, 2003)

Physiological situations

Aging
(R. Balansky et al., Cancer Res. 56, 16421642-7, 1996)

Physiological situations

Stem cells
(S. De Flora et al., Int. J. Oncol. 29, 521521-529, 2006)

GENOMIC AND TRANSCRIPTIONAL ALTERATIONS IN MOUSE FETUS LIVER


SHAM TRANSPLACENTAL CIGARETTE SMOKE NAC ECS ECS + NAC

*
0 5 10 15 20 25 8-oxo-dG/105 nucleotides

SHAM NAC ECS ECS + NAC

SHAM NAC

*
0 0,5 1 1,5 2 2,5 DNA adducts/108 nucleotides

ECS ECS + NAC

*
0 2,5 5 7,5 10 12,5 MN PCE ()

A. Izzotti et al., FASEB J. 17, 126-129, 2003

NAC EXPRESSION OF 746 GENES IN A/J MOUSE LIVER Ox-stress protein FOETUS Trypsin-related GPx GST 1 GST M GST GST Pi 1
Xenobiotic metabolism
18/50 (36%)

Catalase Cu-Zn SOD 1 prec. Mn SOD 2 prec.

serine protease

1-Antitrypsin precursor
Stress response
18/120 (15%)

GSH metabolism
5/7 (71%)

Oxidative damage
4/7 (57%)

SMOKE

DNA repair
7/115 (6%)

Protein repair and removal


15/21 (71%)

Apoptosis
11/23 (48%)

Cell cycle regulation


19/96 (20%)

Angiogenin DNA repair VEGF precursor 7/115 (6%)

Growth factors and cytoskeleton


8/99 (8%)

Transcription factors
6/100 (6%)

Cell receptors
5/99 (5%)

Housekeeping genes
0/9 (0%)

SHAM

A. Izzotti et al., FASEB J. 17, 126-129, 2003

GENOMIC CHANGES IN MOUSE LUNG AT BIRTH


A. Izzotti et al., Mutat. Res. (Rev. Genetic Toxicol.), 544, 441-449, 2003

Newborn mice / fetuses


8-oxo-dGuo DNA adducts
Expression of 746 genes

UNTREATED PREGNANT MICE

1.9
P < 0.05

5.0
P < 0.001

NACTREATED PREGNANT MICE

0.9
NS

2.0
NS

INDUCTION OF LUNG TUMORS BY CIGARETTE SMOKE IN MICE EXPOSED EARLY IN LIFE


26 24 22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0

No. of lung tumors/mouse

Males

Females

Incidence = 14/22 (63.6%) Multiplicity = 6.1 1.64

Incidence = 12/16 (75.0%) Multiplicity = 13.6 2.33

Time (months)
Spontaneous deaths Including one malignant tumor

R. Balansky et al., Carcinogenesis 28, 223643, 2007

PRENATAL NACETYLCYSTEINE (NAC) PREVENTS CIGARETTE SMOKEINDUCED LUNG TUMORS IN NEONATAL MICE R. Balansky et al., Carcinogenesis 30, 13981401, 2009

Sham MCS NACMCS Sham MCS NACMCS Sham MCS NACMCS Sham MCS NACMCS

Total lung tumors

Total lung tumors

Microadenomas

Microadenomas

Adenomas

Adenomas

Bronchoalveolar carcinomas

Bronchoalveolar carcinomas

10

20

30

40

50

60

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

Incidence (%)

Multiplicity (mean SE)

PRENATAL NACETYLCYSTEINE (NAC) PREVENTS CIGARETTE SMOKEINDUCED HISTHOPATOLOGICAL ALTERATIONS IN NEONATAL MICE R. Balansky et al., Carcinogenesis 30, 13981401, 2009

Sham MCS NACMCS

Alveolar epithelium hyperplasia

Sham MCS NACMCS

Emphysema

Sham MCS NACMCS

Urinary bladder epithelium hyperplasia

10

15
Incidence (%)

20

25

30

Ramos et al. (1996). In Casarett and Doulls Toxicology, The Basic Science of Poisons, pp. 487527

HUMAN ABDOMINAL AORTA WITH ATHEROSCLEROTIC LESIONS

Extraction of DNA from smooth muscle cells

MOLECULAR EPIDEMIOLOGY OF ATHEROSCLEROSIS


S. De Flora et al., FASEB J. 11: 1021-1031, 1997

The levels of 32P postlabelled DNA adducts in the aorta from 85 atherosclerotic patients were significantly correlated with:
-Age of patients -Number of cigarettes smoked currently -High blood pressure -Blood triglycerides -Blood cholesterol (total/HDL) -SFS-positive DNA adducts -Oxidative DNA damage (8-OH-dG)

MODULATION OF DNA ADDUCTS BY DIETARY AGENTS IN THE AORTA OF SMOKE-EXPOSED RATS


SHAM ECS ECS + 5,6-BF ECS + D3T ECS + PEITC ECS + NAC ECS + OPZ ECS + NAC + OPZ P < 0.01 P < 0.01 P < 0.01

10

15

20

25

DNA adducts/10 8 nucleotides


A. Izzotti et al., Mutat. Res. 494, 97-106, 2001

8oxodG

DNA ADDUCTS

MODULATION OF DNA ADDUCTS BY DIETARY AGENTS IN THE HEART OF SMOKE-EXPOSED RATS


SHAM ECS ECS + 5,6-BF ECS + D3T ECS + PEITC ECS + NAC ECS + OPZ ECS + NAC + OPZ P < 0.001 P < 0.001 P < 0.01 P < 0.01 P < 0.05

10

15

20

25

30

35

DNA adducts/10 8 nucleotides

S. De Flora and A. Izzotti, Mutat. Res. 667, 15-26, 2009

ADDOTTI AL DNA DI RATTO


Esofago

Fegato

Polmone

Cuore

Controlli Etanolo

Fumo

Fumo + Etanolo

A. Izzotti et al., FASEB J. 12, 753-758, 1998

DANNO OSSIDATIVO AL DNA NEL TRABECOLATO OCULARE


(A. Izzotti et al., Am. J. Med. 114, 638-646, 2003)

8oxodG/105 nucleotidI

25 20 15 10 5 0 GSTM1 - nulli GSTM1 + GSTM1 - nulli GSTM1 +

Controlli (n = 47)

Malati di glaucoma (n = 39)

BIOTRANSFORMATION OF GENOTOXIC AGENT IN MARINE SPONGES. MECHANISMS AND MODULATION

S. De Flora et al. Mutagenesis 10, 357364, 1995

MONITORAGGIO BIOTOSSICOLOGICO DELLACQUA Bioindicatori alterati in trote stabulate nel punto C:


Mutagenicit della bile (1) Induzione di enzimi microsomiali epatici (2)

MONITORAGGIO BIOTOSSICOLOGICO DEI SEDIMENTI A] Iniezione di estratti di sedimenti in trote adulte


Eliminazione di metaboliti fluirescenti con la bile (1) Induzione di enzimi microsomiali epatici (2)

Induzione dellattivazione metabolica di un cancerogeno nel fegato(2) B] Esposizione per contatto di larve di trota Effetti citogenetici (micronuclei in Induzione di enzimi microsomiali in estratti eritrociti(3) di larva (2) FIUME LAMBRO

CONTROLLI IN ACQUARIO

Indicatori biotossicologici
(1) Marcatore di esposizione (2) Marcatore di effetto biologico precoce (3) Marcatore di danno genetico

B C

FIUME PO

MUTAGENICITY OF SEDIMENTS ALONG THE PO RIVER AND GENOTOXICITY BIOMARKERS IN FISH


L. Vigan et al., Mutat. Res. 515, 125134, 2002

ADDOTTI BPADNA IN VITRO


SPOTS AUTORADIOGRAFICI
8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 50 100 150 200 250

DOSEDIPENDENZA

Adducts/108 nucleotides

BPA dose (ng/l) A. Izzotti, S. Kanitz , F. DAgostini, A. Camoirano & S. De Flora, Mutat. Res. 679, 28-32, 2009

FRAMMENTAZIONE DI SPERMATOZOI DI RATTI INDOTTA DA BPA


A. Izzotti, S. Kanitz , F. DAgostini, A. Camoirano & S. De Flora, Mutat. Res. 679, 28-32, 2009

Studi epidemiologici suggeriscono che la qualit e quantit dello sperma umano sono diminuite durante gli ultimi 6 decenni