4.1. EL COMPLEJO BCR (RECEPTOR DE LA CLULA B) 4.1.1. ESTRUCTURA DEL BCR. 4.1.2. EL CORRECEPTOR DEL BcR. 4.1.3.

TRANSDUCCIN DE SEALES AL INTERIOR CELULAR. 4.2. RECEPTORES ANTGENO-ESPECFICO DE LAS CLULAS T (TcR). 4.2.1. TcR. 4.2.2. COMPLEJO CD3. 4.2.3. ESTRUCTURA DEL COMPLEJO TCR/CD3. 4.2.4. MOLCULAS DE MEMBRANA ACCESORIAS

4.1. EL COMPLEJO BCR (RECEPTOR DE LA CLULA B) Las Inmunoglobulinas se presentas en 2 formas diferentes: en solucin (sIg) o anclada en la membrana del linfocito B (mIg, transmembranal). En este ltimo caso, forma parte de un complejo de protenas que en su conjunto se denomina Receptor de la clula B (BcR). El que se expresen de un modo u otro depende del procesamiento del RNA mensajero de la cadena pesada y se exprese o no el exn correspondiente a los aminocidos transmembranales de la protena. Cabe destacar, que las formas polimricas de Ig (pentmeros de IgM y dmeros de IgA) slo se van a expresar en su forma soluble. Todas las mIg van a ser monomricas.

4.1.1. ESTRUCTURA DEL BCR.

La parte variable del BcR, entre diferentes linfocitos B, la constituye la molcula de Ig completa (2 cadenas pesadas y 2 ligeras) que se inserta en la membrana a travs de las 2 cadenas pesadas. Tambin hay 2 heterodmeros iguales, compuestos de 2 cadenas de la la superfamilia de las Igs, denominadas Iga e Igb. Ms recientemente, estas dos molculas se han denominado CD79-a (vara segn el isotipo de Ig) y CD79-b (comn para todas la inmunoglobulinas de superficie). La mayor parte de los linfocitos B expresan BcR con IgM en superficie (muy a menudo, de modo simultneo expresan IgD). Estos linfocitos B IgM+IgD+, son linfocitos maduros que an no han sido estimulados por el Ag que reconocen. Una pequea proporcin de linfocitos B expresan slo BcR con alguno de los otros isotipos (G1, G2, G3, G4, A1, A2, E, D); ya han reconocido su antgeno especfico y se han especializado en la sntesis de un isotipo en concreto. Un tipo especial de linfocitos B, son aquellos que expresan CD5 en su membrana. Su Ig de superficie es siempre IgM (pero no IgD). Son minoritarios y su expresin parece restringida. Parecen ser menos evolucionados y ser capaces de reconocer muchos Ag diferentes (poli-especificos). Adems, a diferencia de la mayora de linfocitos B, estos linfocitos CD5 tienen capacidad de autorenovacin. Debido a estas caractersticas diferenciales, y a su posible funcin primaria en la respuesta inmune, a los linfocitos B CD5 se les denomina B1, mientras que a los convencionales se les denomina B2.

En el BcR, la Ig es la responsable del reconocimiento especfico del Ag, en tanto que las protenas CD79 median la posterior transduccin de la seal hacia el ncleo celular. Sin embargo, hay otras protenas implicadas en el proceso de transduccin de seales, constituyen el complejo correceptor.
4.1.2. EL CORRECEPTOR DEL BcR.

Hay una serie de molculas accesorias que ayudan al linfocito B a activarse, entre las que desteca el complejo correceptor que se compone de 3 molculas asociadas de modo no covalente: CD19, CD21 y CD81. CD21 reconoce a la molcula CD23 de las clulas dendrticas foliculares, o alternativamente fragmentos del componente 3 del complemento (CD21 es tambin llamado CR2, o receptor de complemento 2). CD19 se expresa en todos los linfocitos B maduros y su activacin activa a cinasas intracitoplasmticas. La funcin de CD81 (TAPA-1) es hasta el momento desconocida. Adems del complejo correceptor, hay otras molculas accesorias importantes en la activacin del linfocito B: CD45 (cuya porcin intracelular tiene actividad fosfatasa), CD22, CD40, CD72 y los antgenos HLA de clase II, todas estas participando en el intercambio de seales entre linfocitos B y T, ya que sus ligandos ms probables se encuentran en los linfocitos T (protenas sializadas, CD40L, CD5 y TcR/CD4, respectivamente)
4.1.3. TRANSDUCCIN DE SEALES AL INTERIOR CELULAR.

Para que la respuesta humoral (y produccin de anticuerpos) se inicie, es necesario que los linfocitos B se activen. Para ello, tiene que haber contacto directo con el antgeno y entrecruzamiento de receptores (BcR).

Como consecuencia de este entrecruzamiento, y de la activacin del correceptor y otras molculas accesorias, se concatenan una serie de procesos, que tienen como misin ltima mandar seales al ncleo de que hay que entrar en un proceso de activacin: a) Hay una primera ronda de fosforilaciones y defosforilaciones, realizadas por enzimas cinasas (Fyn, Lyn, Lck, Btk, Syk, PI3K) y fosfatasas (CD45). El resultado final de esta etapa es la activacin de la fosfolipasa C (PLC).

b) La PLC hidroliza fosfolpidos de membrana, generando 2 segundos mensajeros fundamentales: Inositol trifosfato (IP3) y diacil-glicerol (DAG). c) El DAG activa a una cinasa nueva: la proten cinasa-C (PKC) d) El IP3 se une a canales de calcio, activndolos, tanto en la membrana plasmtica como en el retculo endoplsmico: el resultado final es el incremento del in calcio en el citoplasma celular. As se activan una serie de protenas dependientes de Ca: calcineurina. e) Se produce una segunda ronda de fosforilaciones- defosforilaciones, producto de la activacin cinasas (PKC, Raf, Ras, MAPK) y de fosfatasas (mediada por la calcineurina). El producto final es que determinados factores de transcripcin que estaban inactivos, pasan a su forma activa. f) Los factores de transcripcin activos se translocan al ncleo celular: lo que conduce finalmente a una modificacin en los perfiles de expresin de varios genes celulares que permitirn al linfocito B desarrollar sus funciones efectoras. Entre los genes que se activarn, hay genes comunes a otros tipos celulares, necesarios para la mitosis, y genes especficos de linfocitos B: Inmunoglobulinas, citocinas y receptores de citocinas.

4.2. RECEPTORES ANTGENO-ESPECFICO DE LAS CLULAS T (TcR). El TcR es el nico Rc de los LT cuya secuencia varia de un individuo a otro, por lo que dicta la especificidad y la individualidad de los linfocitos T. Hay dos tipos de Rc de Ag en las clulas T (TcR), definidos por la naturaleza de las cadenas heterodimricas que lo forman (alfa, beta, delta y gamma). Las cadenas proteicas tienen la misma estructura en los dos tipos de Rc y estn unidas por un puente disulfuro (cerca de la membrana). Para que este heterodmero llegue a la membrana necesita asociarse de forma no covalente con una serie de protenas que forman el complejo CD3 (responsable de la transmisin de seales al interior de la clula).

4.2.1. TcR.

Cada monmero del TcR esta formado por: - Dos dominios globulares de tipo C-Ig (90 aminocidos), con puente disulfuro intracatenario. El dominio externo es ms variable y se une al Ag. Tienen escasez de Pro y por eso no hay regin bisagra. - Regin transmembranal que contiene residuos cargados positivamente (infrecuente). - Regin citoplasmtica en el extremo C-terminal.

Los genes se sitan en el cromosoma 14 (cadenas alfa y delta) y 7 (cadenas beta y gamma): - Los segmentos gnicos de beta y gamma son similares a las cadenas pesadas de las Ig (V, D, J y C). - Los segmentos gnicos alfa y delta tienen slo genes C, V y J.

Existen menos genes para codificar la regin variable que en las Ig, pero sigue habiendo tres CDR en posiciones anlogas. Hay dos tipos de Rc. Ello hace que los linfocitos T se subdividan en dos poblaciones excluyentes: a) TCR-1 (gamma y delta): aparece en el 5% de los LT. En timocitos fetales y en mucosas (linfocitos intraepiteliales), que son CD3+CD4-CD8- en el timo, pero se hacen CD8+ al estimularse en los tejidos. Las regiones CDR3 de la regin variable tienen una gran variabilidad y una estructura parecida ms a las del CDR3 de las Ig. b) TCR-2 (alfa y beta): esta presente en el 95% de los LT. Es el ms estudiado y esta en los LT CD4+ y CD8+.
4.2.2. COMPLEJO CD3.

Este complejo se une de forma no covalente al TcR. Esta asociacin es necesaria para que se pueda expresar el TcR en la membrana y para transducir la seal al interior celular, cuando el TcR se une a un Ag. Esta constituido por varias protenas diferentes que se engloban en varias familias: a) Gamma, delta y psilon tienen un puente intracatenario y se unen de forma no covalente entre ellas. Son estructuras parecidas y relacionadas con la superfamilia de las Ig: - Un dominio externo tipo C-Ig. - Regin transmembrana con residuos que llevan carga negativa (infrecuente). - Cola citoplasmtica (C-terminal) muy conservada de 40 aminocidos. b) zeta y nu estn codificadas en un mismo gen, pero son dos cadenas que difieren en el extremo C-terminal a causa de un mecanismo de splicing alternativo del RNAhn. No pertenecen a la superfamilia de las Ig: - Dominio externo de slo 9 residuos. - Segmento intramembrana que contiene residuos cargados negativamente. - Cola citoplasmtica larga y conservada.

Zeta y nu se encuentran como dmeros (homo o heterodmero), unidos por puentes disulfuro que se forman entre cisteinas que se encuentran en el segmento intramembranario libre. La ausencia de alguna de las cadenas del CD3 impide o disminuye severamente la expresin en membrana del TcR. El CD3 participa en la transduccin de la seal cuando el TcR se une al Ag. Todas las cadenas del CD3 tienen regiones intracelulares conservadas (secuencias ARAM) que inducen fosforilacin en residuos de tirosina, treonina o tirosina por TK de la familia src y PKC. Las colas intracitoplasmticas de gamma y delta estn muy conservadas y desempean una funcin esencial en la transmisin de la seal al interior de la clula.
4.2.3. ESTRUCTURA DEL COMPLEJO TCR/CD3.

- Los residuos cargados dentro de las membranas son esenciales para la unin y expresin del complejo TcR. - Los dominios de tipo Ig se asocian de manera similar a los VH/VL de las Ig. - Aun no se conoce la estequiometra exacta del complejo TcR/CD3.

4.2.4. MOLCULAS DE MEMBRANA ACCESORIAS

Aparte del complejo formado por el TCR y el CD3 que cumple un papel central en la unin con el antgeno procesado, la clula T madura cuenta con varias molculas accesorias de membrana, con funciones de adhesin a la clula presentadora de antgeno o a la clula

diana, reforzando la interaccin; (varias de ellas) transduccin de seales desde el TCR al citoplasma. - CD4: es una glucoprotena monomrica de unos 55 kDa, con 4 dominios extracelulares de tipo Ig (D1, D2, D3 Y D4), regin transmembrana y larga cola citoplsmica en la que existen tres serinas fosforilables. Cumple funciones de adhesin y co-sealizacin: se une al dominio proximal beta-2 del MHC-II de las clulas presentadoras de antgeno. Su presencia suele conferir al linfocito T papeles de clula coadyuvante (TH). - CD8: Suele ser un heterodmero alfa/beta donde las dos cadenas estn unidas por puente disulfuro. Cada cadena tiene de 30 a 38 kDa y un solo dominio extracelular de tipo Ig, una regin transmembrana y cola citoplsmica de 25 a 27 aminocidos, varios de ellos susceptibles de ser fosforilados. Cumple papeles de adhesin y co-sealizacin al unirse al dominio alfa-3 de la MHC-I de las clulas diana. Su existencia en los linfocitos suele caracterizar a las clulas T matadoras (citotxicas, TC). o En su papel como molculas de adhesin, las CD4 y CD8 incrementan unas 100 veces la avidez de la interaccin entre el TCR y el complejo {pptido-MHC}. o En su papel como correceptores (co-sealizadores) se piensa que actan detectando el cambio del TCR cuando se une al complejo pptido:MHC, y facilitando una seal al interior celular, a travs de sus dominios citoplsmicos, que estn asociados a Lck, una proten-quinasa de tirosina. - CD2: se une a LFA-3 (tambin conocida como CD58). - LFA-1 (=CD11a/CD18): se une a ICAM-1. - CD45R: se une a CD22. - CD28 (de TH) se une a la molcula B7-1 (CD80) y B7-2 (CD81) de la clula presentadora de antgeno, suministrando una segunda seal que se requiere para la activacin del linfocito T coadyuvante. Es la principal molcula coestimuladora.