Cincia Forense: exame de ADN

Introduo
O Teste de ADN para a justia como telescpio para as estrelas. No uma lio de bioqumica, no uma exibio das maravilhas reveladas por uma lente, mas um modo de ver as coisas como elas realmente so. (Barry Scheck e Peter Neufeld, Actual Innocence1) Acho que voc lembra da histria do Rei Salomo. Os registros so bblicos e aconteceu cerca de 3.000 anos. Trata-se da descrio em que o rei de Israel encontrase diante do impasse de duas mulheres que reinvidicavam a maternidade de uma criana. O rei Salomo ameaou cortar o beb ao meio, a fim de dar cada metade a uma mulher, fazendo com que a me verdadeira abrisse mo do filho para salvar sua vida. Uma bela histria. Fico imaginando o que este sbio rei faria se, em sua poca, houvesse toda a tecnologia de identificao humana que temos hoje. Mais adiante na histria, tenho certeza que o criador do personagem Sherlock Holmes lamentaria o fato de ter vivido na poca que antecedeu a era do ADN na investigao criminal. Um dos princpios da justia que as pessoas devem pagar pelos seus atos, e to somente por aquilo que cometeram. Julgar uma pessoa pelos seus antecedentes humanamente justificvel. Isto to verdade que duvido que haja quem no se revolta com o caso do menino Joo Hlio, no Rio de janeiro, que foi arrastado por centenas de metros por ladres que fugiam com o carro roubado. Igualmente no tenho dvidas que muitas pessoas gostariam de fazer o mesmo com os acusados do crime. E por que no citar os assassinatos, muitas vezes por motivos torpes, que acontecem todos os dias e ficamos sabendo por meio do noticirio? E o familiar da vtima de um assassinato, o que tem vontade de fazer? Mas a justia atual no permite que se faa, como a expresso popular diz, justia com as prprias mos, sem ficarmos impunes. Ela cobe este tipo de ao e se atm aos fatos e provas, a fim de aplicar as eventuais punies previstas em lei. Se certo ou no, as coisas funcionam assim. na aquisio e anlise de provas que a cincia forense entra na histria. Um dos princpios bsicos do mtodo cientfico a reprodutibilidade. Tanto aqui no Brasil como em qualquer lugar deste planeta, deve ser possvel realizar-se um experimento e se obter os mesmos resultados. Desta forma, a cincia passa a ser uma importante aliada da justia, pois fornece respostas com aceitveis nveis de preciso. No obstante, mesmo que a cincia possua esta capacidade, ela feita por seres humanos, estes falhos e de carter duvidoso, que podem perfeitamente tendenciar determinados resultados, de forma consciente ou no, prejudicando ou beneficiando outrem. O quarto artigo da srie sobre Cincia Forense ir versar sobre o exame de ADN e sua aplicao na investigao de crimes. Sero evidenciados desde aspectos tcnicos, como a estrutura do ADN, at os mtodos de extrao e anlise do mesmo. Ao final, pretende-se fazer uma reflexo sobre a atual situao destes exames e os aspectos ticos relacionados, tanto na fico como na realidade. Boa leitura.

1 O Projeto Inocncia luta para tornar livre o maior nmero de pessoas injustamente condenadas. Esta organizao legal e no lucrativa, fundada pelos advogados Barry C. Scheck e Peter J. Neufeld, trabalha para trazer a Justia queles a quem a mesma foi negada.

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O que ADN?
O ser humano tem usado materiais para armazenar informao desde o tempo das pinturas rupestres. Hoje podemos pensar na possibilidade de guardar informao em molculas nicas. Um sonho dos projetistas de computadores que um dia arranjos de tais molculas serviro como dispositivos de armazenamento de dados de enorme capacidade. A natureza, no entanto, j tem usado esta tcnica por milhes de anos. Ela usa o ADN para armazenar a informao gentica que permite a perpetuao da espcie. Mas, o que significa ADN? O original ingls DNA um acrnimo para DeoxyriboNucleic Acid (em portugus, ficaria ADN, referente cido DesoxirriboNuclico). Juntamente com do RNA (RiboNucleic Acid cido RiboNuclico ARN) e com ajuda de outras espcies bioqumicas, como enzimas, ele responsvel pela hereditariedade. Nele so guardadas todas a informaes genticas, como caractersticas fsicas e metablicas (h at quem diga que algumas caractersticas psicolgicas), com as instrues para sntese de protenas. Embora haja uma grande semelhana do ADN de dois indivduos quaisquer da populao, no existe uma identidade total salvo no caso de gmeos idnticos e essa pequena diferena (cerca de 0,1 % do ADN) fundamental na Cincia Forense como potencial forma de identificao humana. Veremos mais adiante como isto funciona. Estruturalmente falando, os cidos nuclicos ADN e ARN so enormes polmeros constitudos por nucleotdeos. Estes, por sua vez, possuem uma estrutura comum: um acar, um grupo fosfato e uma base nitrogenada, conforme podemos ver na Figura 1.

Figura 1 Esquema da estrutura de um nucleotdeo [adaptado de FARAH, 1997].

No ADN, o qual para o presente artigo tem maior importncia, os nucleotdeos so formados por um acar (desoxirribose), um grupo fosfato e uma base nitrogenada, que pode ser uma purina (Adenina e Guanina) ou uma pirimidina (Timina e Citosina) (Figura 2).
NH2 N N N N H N
guanina

O H3C NH

NH

N H

N
adenina

NH2

N H
timina

NH2 HO N O

OH O HO P OH
grupo fosfato

N H
citosina

O OH
desoxirribose

Figura 2 Os componentes estruturais dos nucleotdeos do ADN.

A informao gentica do ADN est na forma de um cdigo qumico. Este nada mais que a ordem dos nucleotdeos. Ele guia a juno de aminocidos especficos em uma protena. Estas, por sua vez, tm um papel crtico na constituio, manuteno e catlise nas clulas.
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Cincia Forense: exame de ADN Nosso organismo sem enzimas simplesmente no funcionaria. Um exemplo que podemos utilizar para evidenciar a importncia das protenas o da doena conhecida como Fenilcetonria. Esta uma patologia de origem gentica, na qual o organismo no capaz de produzir uma determinada enzima que catalisa o metabolismo de um determinado aminocido: a fenilalanina. O fenilcetonrico possui uma mutao em um gene2 no cromossomo 12. Este chamado de PAH contm instrues para sintetizar a enzima PAH, conhecida tambm por fenilalanina hidroxilase. Sem ela, h acmulo de fenilalanina no organismo, podendo, em casos extremos, levar o indivduo morte. Por isto, o portador da doena deve ter uma alimentao altamente regrada. Para os conjuntos de genes e protenas de um organismo d-se o nome de genoma e proteoma, respectivamente. Estes termos aparecem com grande freqncia na mdia, pois conhecer os genes e as protenas que compem um organismo permite o desenvolvimento de mtodos novos para o diagnstico de doenas e tambm de novas terapias para seu tratamento. possvel escrever o cdigo presente na molcula estvel de ADN pela combinao de quatro nucleotdeos (A, T, G, C) em uma seqncia particular. Estes, combinados em uma ordem especfica, caracterstica para cada indivduo, promovem a forma helicoidal da molcula de ADN, estrutura conhecida como dupla hlice (veja Figura 3).

Figura 3 Estrutura conhecida como dupla hlice do ADN evidenciando seus componentes estruturais. Na figura, temos os grupos fosfatos representados pela letra P e as bases nitrogenadas Citosina, Adenina, Guanina e Timina pelas letras C, A, G e T, respectivamente. O acar representado pelo pentgono lils. [fonte: ENGER et al, 2005].

2 Unidade funcional do cido desoxirribonuclico de carter hereditrio ou gentico, situada no cromossomo, e que determina as caractersticas de um indivduo.

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Cincia Forense: exame de ADN O modelo estrutural aceito atualmente o da hlice dupla, proposto por James Watson, Francis Crick e colaboradores, em 19533. Neste modelo, conforme evidencia a Figura 3, as duas hlices so mantidas unidas por meio de ligaes de hidrognio4, que se estabelecem entre as molculas das bases nitrogenadas. Elas so detalhadas na Figura 4 com suas respectivas combinaes e distncias intermoleculares.

Figura 4 Representao das ligaes de hidrognio formadas entre os tomos das bases nitrogenadas presentes nos nucleotdeos do ADN. As ligaes de hidrognio so representadas pelos pontilhados em rosa [fonte: ENGER et al, 2005].

Para compreender a conformao de hlice dupla consideremos a Figura 5 que consta num artigo do Journal Of Chemical Education [BRUIST, SMITH e MELL, 1998]. Esta revista considerada por muitos uma das melhores publicaes sobre ensino de qumica do mundo. Uma busca sobre o tema, nos volumes j publicados, revelar mais textos como este citado, que contm modelos explicativos da estrutura do ADN humano.

3 O livro Descobertas Acidentais em Cincia, de Royston M. Roberts, traz o seguinte relato: A estrutura de dupla hlice do ADN, segundo seus autores, James Watson, Francis Crick e Maurice Wilkins, foi descoberta praticamente por acaso, quando Watson, trabalhando com modelos, comeou a encaixar as bases nas mais variadas combinaes e, de repente, se deu conta de que a combinao adenina-timina [A-T] unida por duas pontes de hidrognio era idntica na forma a uma combinao guanina-citosina [G-C] unida da mesma maneira. 4 Ligaes de hidrognio o nome dado interao existente quando um tomo de hidrognio interage com tomos de Flor, Oxignio ou Nitrognio. Se estes ltimos estiverem na mesma molcula que o Hidrognio, ento dizemos que a ligao intramolecular, caso contrrio, ou seja, se estiverem em outra molcula, dizemos que a ligao intermolecular. Na Figura 4 temos representadas as ligaes de hidrognio intermoleculares pelas linhas pontilhadas de cor rosa.

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Figura 5 Em (a) temos a estrutura completa das bases nitrogenadas, desoxirribose e grupos fosfatos dos nucleotdeos. Em (b) temos um esquema onde cada par de bases representado por uma caixa e as estruturas de acar e fosfato pelas linhas.[fonte: BRUIST, SMITH e MELL, 1998].

Os nucleotdeos, como mencionado anteriormente, mantm a estrutura do ADN coesa por meio das ligaes de hidrognio formadas entre eles. Mas por que a estrutura assume uma forma helicoidal? Os mesmos autores apresentam uma representao simples com caixas empilhadas, as quais esto representadas na Figura 6.

Figura 6 Modelo que ilustra como as foras intermoleculares favorecem a estrutural helicoidal do ADN. [fonte: BRUIST, SMITH e MELL, 1998].

Os autores propem seis caixas unidas por dois fios. Cada caixa representa um par de nucleotdeos. O fio representa a coluna de acares e de grupos fosfato. Em (a) temos a situao em que as caixas so empilhadas uma encima das outra. Nesta configurao, as interaes de repulso so maximizadas, pois os grupos fosfato esto prximos e, como possuem carga negativa, tendem a se repelir, desestabilizando a estrutuCHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 5

Cincia Forense: exame de ADN ra. Em (b) temos uma tentativa de diminuir a repulso, com as caixas (no caso, representando os pares de bases nitrogenadas) afastadas, o que no ocorre com a molcula de ADN. J em (c), por fim, temos a conformao helicoidal, onde os grupos fosfato esto afastados numa distncia mxima que permite que as bases tenham contato entre si. Outros modelos para a molcula de ADN so discutidos em detalhe em outro artigo da mesma revista [Cady, 2005]. A compreenso da constituio da molcula de ADN fundamental para a entender como a vida se perpetua pelo tempo.

Onde se encontra o ADN?

Estudiosos acreditam que caso uma molcula de ADN humano pudesse ser extrada de onde se encontra e desenrolada da sua forma natural, altamente enovelada, ela teria aproximadamente dois metros de comprimento. Considerando que existam algo prximo de 10 clulas em nosso corpo, isto significa que temos cerca de 2 x10 metros de ADN, o que representa 50.000 vezes a distncia entre a Terra e a Lua. Onde ser que est tudo isto? O ADN pode ser encontrado em sua maioria no ncleo celular, organizado na forma de cromossomos (normalmente 22 pares autossmicos e um par de cromossomos do sexo (X e Y) - veja Figura 7).

Figura 7 Cromossomos humanos arranjados aos pares segundo uma classificao convencional.[fonte: CHEMELLO, 2005].

O nmero e a forma dos cromossomos so geralmente caractersticos para cada espcie, e todas as clulas do nosso organismo, com exceo das hemcias, apresentam a mesma quantidade deles5. As hemcias fogem a regra, pois so anucleadas, o que facilita seu papel no transporte de oxignio. Cada cromossomo formado por uma nica molcula de dupla hlice de ADN condensada com protenas bsicas, chamadas histonas. A este conjunto dado o nome de nucleossomo (veja Figura 8).

5 Alguns indivduos apresentam um certo nmero de cromossomos, outros um nmero diferente. Esta variao pode ser normal e no fruto de defeito gentico. Outra possibilidade de espcies distintas possurem o mesmo nmero de cromossomos.

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Figura 8 Localizao do ADN no ncleo das clulas dos Eucariontes6 [adaptado de ENGER et al, 2005].

O ADN humano tambm est presente nas mitocndrias. Tanto o ADN nuclear como mitocondrial so de interesse para a cincia forense. O nuclear possui mais informaes sobre o individuo, tendo preferncia em relao ao mitocontrial. Este ltimo tambm pode ser utilizado e merecer um breve captulo parte mais adiante neste artigo.

Exame de ADN
Estava escuro. Mesmo assim, a vtima no teve dvidas em identificar Larry Fuller, ento com 32 anos, como o homem que a estuprou e agrediu naquela madrugada de 1981. Apesar de jurar a sua inocncia, Fuller foi julgado e condenado a cinqenta anos de priso apenas com base no testemunho da vtima. Depois de vinte e cinco anos na cadeia, em Outubro de 2005, sua inocncia foi finalmente reconhecida por um Tribunal de Dallas (EUA), graas a um teste de ADN que provou, sem margem para dvidas, que no fora ele o estuprador. A primeira vez que um exame de ADN serviu como prova foi no caso das duas jovens inglesas, Lynda Mann e Dawn Ashworth, que foram assaltadas, violentadas sexualmente e assassinadas na dcada de 1980. Como as caractersticas dos crimes eram as mesmas, a polcia suspeitou que teria sido o mesmo homem a cometer os crimes. Com objetivo de solucionar o caso, mais de 3.600 homens na vila de Narborough, em Leicestershire, Inglaterra, foram convocados a fazerem exames de ADN e comparar os resultados com os da amostra smen coletada das vtimas. Um ano mais tarde um empregado de uma padaria pediu a um colega que doasse sangue em seu lugar. Sabendo disso, por intermdio de um informante que trabalhava no mesmo estabelecimento, a polcia procurou e prendeu o homem que no queria doar sangue. Este, posteriormente, confessou a autoria dos crimes e sua ligao com as evidncias coletadas das vtimas foi confirmada pelos exames de ADN. A tcnica, a partir de ento se disseminou por todo o mundo, chegando ao Brasil rapidamente no final da dcada de 1980.

6 Eucarionte todo o organismo composto por uma ou mais clulas que possuem ncleo distinto, envolvido por membrana nuclear. Ns, Homo sapiens, somos Eucariontes.

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Cincia Forense: exame de ADN A adoo por Alec Jeffreys (JEFFREYS, 1985) da expresso DNA fingerprint (impresso digital de ADN) para denominar a tecnologia por ele desenvolvida foi criticada pelos especialistas em medicina legal e pelos criminologistas, que no viam nela o significado preciso daquilo a que se propunha, alegando tambm a confuso com a tcnica j estabelecida de impresso digital (fingerprint). Segundo autores brasileiros (ARRUDA e PARREIRA, 2000), a expresso mais adequada para indicar o procedimento de anlise do ADN exame de ADN, a qual utilizada neste artigo. No obstante, conforme apontam estes autores, terminologias como PCR, RFLP e outras so mantidas na lngua inglesa, pois no se relacionam com a questo da legislao. Como o exame de ADN funciona? No se tem como objetivo realizar uma anlise aprofundada dos mtodos, mas dar uma breve noo dos princpios fundamentais de algumas tcnicas e suas caractersticas relacionadas Cincia Forense. A molcula de ADN, formada por milhes de nucleotdeos em cadeia, como foi visto anteriormente, sofre algumas vezes alteraes, chamadas de mutaes, que consistem na substituio de certos nucleotdeos por outros em determinadas regies, as quais Alec Jeffreys, em seu artigo publicado na Nature, em 1985, chamou de minissatlites. As mutaes so melhor toleradas pelo organismo quando ocorrem em locais sem informao til, os quais constituem aproximadamente 90% do genoma humano. Muitas vezes, as substituies tornam-se estveis, sendo transmitidas aos descendentes. Como muito grande a variao no nmero e no tipo destas alteraes no ADN fenmeno conhecido como polimorfismo gentico -, possvel identificar uma pessoa com base no seu padro de polimorfismo.

Mtodo de extrao
O ADN est presente nas clulas e especialmente no ncleo delas. Como fazer para retirar este ADN a fim de analis-lo posteriormente? Os mtodos de extrao variam de acordo com o tipo de evidncia coletada. Relembrando que, em princpio, qualquer tipo de tecido ou fluido biolgico pode ser utilizado como fonte de ADN, uma vez que so formados ou possuem clulas. Isso torna possvel realizar o exame de ADN em pequenas manchas de sangue ou smen, clulas da mucosa bucal (presas a cigarros, por exemplo), fios de cabelo (com bulbo), fragmentos de pele, etc. Na Tabela 1 temos a relao da quantidade de ADN que pode ser extrado em funo do tipo de amostra.
Amostras (tecidos e fluidos corporais) 1 mL de sangue Manchas de sangue seco em 1 cm 1 mL de Smen 1 fio de cabelo (contendo bulbo capilar) 1 mL de saliva Quantidade recuperada 20 a 40 g 200 ng 150 a 300 g 1 a 750 ng 1 a 10 g

Tabela 1 Quantidade aproximada de ADN coletado de amostras.[adaptado de RUMJANEK e RINZLER, 2001].

De maneira geral, as tcnicas de extrao consistem em desnaturar as protenas que envolvem o ADN. Para isto, utiliza-se uma gama de espcies qumicas. Por exemplo, a mistura de clorofrmio, lcool isoamlico e fenol. Outra forma utilizando uma soluo de cloreto de sdio, que separa os sistemas em uma fase slida e uma fase lquida, onde nesta ltima se encontra o ADN.

Mtodo RFLP
A fim de reconhecer os locos (stios) onde ocorreram mutaes foi desenvolvida a tcnica conhecida pela sigla RFLP, do ingls Restriction Fragment Length Polymorphism, ou Poliformismo de Comprimento de Fragmento de Restrio. Este mtodo se baseia no corte que as enzimas de restrio so capazes de fazer onde existem apenas certas seqncias especficas de nucleotdeos. Estas enzimas so uma espcie de tesoura biolgica que vo cortar o ADN em locais especficos, chamados de posies de restrio, gerando fragmentos de ADN de tamanhos diferentes e seqncias especficas. Para separar os fragmentos de ADN cortados pelas enzimas de restrio, utilizase a tcnica de eletroforese, que consiste na separao das espcies de uma soluo coloidal pela influncia de um campo eltrico. De forma geral, na Figura 9 temos um esCHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 8

Cincia Forense: exame de ADN quema que engloba as principais fases de um teste de ADN.

Figura 9 Esquema geral para o teste de ADN para fins forenses. [adaptado de ENGER et al, 2005].

Devido ao fato das pessoas terem uma seqncia de nucleotdeos diferentes entre si, pode-se identificar uma pessoa pela evidncia deixada no local do crime a partir da comparao dos resultados obtidos pelos exames de ADN. No esquema acima, temos um suspeito que supostamente teria estuprado a vtima. Em (a) temos a coleta de smen na vtima e posterior exame. Tambm feita a anlise do ADN a partir de uma amostra de sangue do suspeito. Em (b) so representadas as enzimas de restrio que tm a capacidade de cortar o ADN em lugares onde uma determinada seqncia de nucleotdeos ocorre. A tesoura simboliza as enzimas necessrias para a seleo de seqncias especficas. Em (c) ilustra-se os pedaos de ADN separados pela eletroforese. Em (d) mostrado um padro conhecido como DNA fingerprint. Observe que os padres oriundos do smen coletado e do sangue do suspeito coincidem, indicando que o smen do suspeito e que este est ligado ao crime. A separao dos fragmentos de ADN ocorre atravs de eletroforese, conforme visto anteriormente. Analisaremos mais detalhes deste processo a partir da observao da Figura 10.

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NH2

N Br H2N

CH3

Figura 10 Na esquerda temos a ilustrao da tcnica de separao por eletroforese. J na direita temos a representao da molcula de brometo de etdio.[fonte: Koolman e Rhm, 1996].

A mobilidade de molculas em um campo eltrico de determinada intensidade depende do tamanho e da forma destas, alm de suas cargas eltricas. Um meio, formado por gel do polissacardeo agarose7, conhecido como gar-gar, permite a passagem dos pedaos de ADN cortados. Ao colocar a amostra no plo negativo, esta migra para o plo positivo. Os pedaos menores migram mais longe que os maiores, criando-se assim um padro, o qual pode ser revelado utilizando-se substncias intercaladoras, tais como o brometo de etdio (veja novamente a Figura 10). Este composto interage com o ADN e o torna visvel devido fluorescncia do ADN quando exposto luz UV. Alguns detalhes do mtodo foram omitidos, bem como certas tcnicas de anlise dos resultados da eletroforese no sero tratadas aqui, pois so demasiadamente tcnicas e fogem do escopo do artigo. Quem no se lembra do caso de assdio sexual envolvendo a funcionria da Casa Branca, Mnica Lewinsky, em 1998, com o ento presidente do EUA, Bill Clinton? aquela velha histria. No se tinha provas que confirmassem ou acusassem o presidente, mas todos comearam a olh-lo de maneira diferente, imaginando: ser? O presidente realmente havia tido relaes sexuais com Mnica ou seria uma tentativa de exposio da imagem dela na mdia? O FBI coletou uma amostra de smen (Q3243) do vestido de Mnica e fez uma anlise pelo mtodo RFLP. Foi tambm coletada uma amostra de sangue (K39) do suspeito, no caso, do presidente Clinton. Aps anlises, foi reportado o seguinte: baseado nos resultados de sete locais genticos, o espcime K39 fonte do ADN obtido do espcime Q3243, com um grau razovel de certeza cientfica.A probabilidade de erro foi calculada e ficou na ordem de 1 em 7,8 trilhes. Bem razovel, eu diria. Diante da irrefutvel evidncia, o presidente Clinton quase sofreu um impeachment8.

Mtodo PCR
Inventado por Kary Mullis9 em 1984, o mtodo conhecido pela sigla PCR, do ingls Polymerase Chain Reaction ou reao em cadeia da polimerase, consiste na utilizao de uma enzima semelhante a ADN-polimerase, que no ncleo celular promove a

7 8

A agarose muito semelhante ao p utilizado para produzir a gelatina caseira.

No regime presidencialista, trata-se do ato pelo qual se destitui, mediante deliberao do legislativo, o ocupante de cargo governamental que pratica crime de responsabilidade.
9 A metodologia PCR foi considerada to poderosa para o estudo do ADN que seu inventor foi agraciado com o Prmio Nobel.

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Cincia Forense: exame de ADN replicao10 do material gentico, aumentando a quantidade de ADN para anlise e, conseqentemente, fazendo com que a quantidade de amostra necessria para o teste possa ser bem menor. Este mtodo pode ser utilizado junto ao RFLP. Desta forma, o ADN primeiramente seria amplificado pela tcnica PCR e depois se analisaria com a metodologia do RFLP, conforme vimos anteriormente. Para realizar o PCR pode-se utilizar uma enzima isolada da bactria Thermus aquaticus, encontrada em giseres e em fontes quentes, chamada de Taq DNA Polimerase. Esta altamente adaptada a ambientes quentes e mantm-se com sua forma normal por longo tempo temperatura de 95 C, que necessria para abrir os duplos filamentos de ADN. Todo o exame de ADN, ao seu final, acompanhado por um clculo que determina a raridade da combinao entre perfis encontrado nas amostras. este aspecto que vai determinar qual a probabilidade de o suspeito ser a nica fonte de ADN da amostra. O clculo baseia-se na comparao do padro de poliformismo com bancos de dados de ADN de uma populao. O perito necessita saber com que freqncia esta combinao ocorre na no grupo em que se classifica o suspeito para estimar a confiabilidade do exame. O FBI norte americano, por exemplo, utiliza um mtodo parecido com e analogia do nmero de sapato, chamado binning. Imagine que se tenha um instrumento para medir o tamanho dos ps de uma dada populao. Observa-se que as pessoas tm ps diferentes, mas que podem se ajustar a um padro de numerao. Cria-se ento um indicativo da freqncia destes nmeros numa dada populao. Este revelaria, por exemplo, que 5 % da populao cala tamanho 40, j 10 % cala 36, e assim por diante. Aqueles casos divulgados na mdia onde h uma probabilidade de 99,999 % podem ter este valor gerado a partir de uma anlise bayesiana. Esta leva em considerao a sensibilidade, especificidade e probabilidade do resultado. Como este mtodo aplica-se mais a casos de paternidade, no prosseguiremos com o detalhamento do mesmo.

ADN mitocondrial
Como foi visto, o ADN est presente principalmente no ncleo das clulas. Contudo, um determinado tipo de ADN est nas mitocndrias, organelas existentes no citoplasma celular. O interesse forense no ADN mitocondrial est no fato dele ser mais resistente degradao que o nuclear. Assim, em grandes desastres (incndios, exploses, queda de avio, etc), quando mais difcil identificar os corpos, pode-se optar pela anlise deste, que constitudo apenas herana gentica materna.

Confiabilidade do Mtodo
Qualquer falha entre a coleta de amostras e a divulgao dos resultados pode levar a concluses equivocadas em exames de ADN. Em condies ideais, sua probabilidade de acerto aproxima-se de 100 %, claro, dentro das margens de erro que o conhecimento cientfico prev. Em cincia, diz-se que no h certezas, mas sim apenas certezas provisrias11. Tambm importante salientar que desde a sua elaborao por Alec Jeffreys, descrita em um artigo publicado na Nature em 1985, at hoje, muito se discutiu sobre a confiabilidade do mtodo, principalmente nos EUA. Uma srie de artigos publicados nesta revista de impacto cientfico e em outras de mesma importncia demonstrou, na dcada de 90, que os fatores que influenciam os resultados so a padronizao da coleta, anlise das amostras e a expresso da probabilidade de acerto em funo da averiguao dos bancos de dados com estatsticas sobre o ADN de uma dada populao.

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Nome dado ao processo de duplicao da molcula de cido desoxirribonuclico atravs da cpia de um molde j existente.

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A palavra scire significa, em latim, saber. Tradicionalmente, associava-se ao significado de saber verdadeiro, correto e inquestionvel. O conceito de scientia, portanto, apenas podia ser atribuvel a um determinado tipo de conhecimento: ao que possua o saber correto. Esta foi a tnica da cincia at que, no incio do sculo XX, as quebras de paradigma que a Fsica promoveu fizeram com que a cincia como um todo passasse por uma transformao, considerando no verdades absolutas, mas passageiras, provisrias e falseveis. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 11

Cincia Forense: exame de ADN A padronizao da coleta de evidncias pode ser ilustrada no caso clssico da literatura forense em que o do ex-jogador de futebol americano O. J. Simpson acusado de assassinato. Este fato j foi citado em outro artigo, desta mesma srie, sobre manchas de sangue, mas interessante relembrarmos, pois a partir dele as autoridades americanas passaram a rever as regras de coleta e armazenagem de evidncias. Havia uma acusao contra ele de duplo homicdio, aps a descoberta dos corpos de Nicole Simpson e Ron Goldman, sua ex-mulher e amigo, respectivamente. A polcia encontrou uma cena de crime com diversas provas latentes: peas de vesturio, pegadas e uma trilha de sangue que revelava o caminho percorrido pelo criminoso(a). Seguindo estas pistas, os policiais chegaram casa de O. J. Simpson, obtendo, no local, mais evidncias: manchas de sangue em seu carro, nas suas meias e no cho do jardim. Exames de ADN comprovaram que esse sangue era das vtimas. Assim, a promotoria acreditava ter nas mos um caso que no poderia ser contestado. Mas foi surpreendida pela estratgia dos advogados de defesa: o questionamento das provas. As cmeras de televiso flagraram um perito coletando amostras sem a utilizao de luvas, enquanto outros no as trocavam entre cada coleta, sem falar no nmero de pessoas circulando na cena do crime, a qual no tinha sido isolada adequadamente. Alm disto, as evidncias no foram identificadas e registradas previamente, as amostras foram conservadas e empacotadas sem a devida separao e, o mais grave: a coleta foi feita por apenas uma pessoa, sem testemunhas. Finalmente, os advogados provaram que o laboratrio criminal da polcia de Los Angeles no cumpriu padres mnimos de manuseio, preservao e separao das evidncias e O. J. Simpson foi inocentado. aquela velha histria. H bons e maus profissionais em todo lugar. Existem os srios, comprometidos com a importncia de suas aes e, principalmente, com os reflexos de possveis equvocos cometidos. Porm, outros que no possuem tica e preocupao com os resultados de seus atos. Considerando a idealidade na coleta e anlise, um aspecto de erro que se sobressai o estatstico. O fato de duas amostras possurem o mesmo perfil para um grupo de marcadores genticos em especial no significa, necessariamente, que elas tenham uma origem comum. A interpretao dos testes depende das freqncias populacionais para cada marcador gentico utilizado, conforme comentado anteriormente. Portanto, quando o resultado do exame de ADN de duas amostras igual, torna-se necessrio expressar numericamente a sua significncia. Realizar o exame de ADN com qualidade a fim de servir a um teste de paternidade ou, no caso da cincia forense, para acusar ou inocentar um determinado suspeito de um crime, no uma tarefa fcil. Fica aqui a esperana que os rgos competentes cumpram com sua misso de orientar e fiscalizar os laboratrios e que estes ltimos invistam em pesquisa e tecnologia de ponta objetivando garantir que os inocentes sejam liberados e que os culpados sejam punidos.

Banco de dados de ADN

Hoje todo exame de ADN comparativo. Os institutos de percia trabalham comparando o ADN do suspeito com o das evidncias. A tecnologia disponvel na atualidade, no entanto, no permite traar caractersticas genricas, a partir do ADN coletado, que possibilitem uma seleo de pessoas para posterior investigao. Devido a isto, nos casos negativos, ou seja, quando o suspeito no a fonte do ADN encontrado, no h possibilidade de descobrir potenciais agressores. Um sonho para os estudiosos na rea chegar num nvel em que o exame de ADN permita, por exemplo, a reproduo de uma imagem do rosto da pessoa que deixou a evidncia no local do crime. Sries e filmes de investigao criminal, de fico ou realidade, s vezes, aproximam-se desta aspirao, fazendo com que certos resultados possam ser obtidos. Encontrar apenas um fio de cabelo e dizer que pertenceu a uma menina loira de 9 anos, que foi agarrada pela perna esquerda, sacudida trs vezes, e assim por diante, bobagem. diz Valter Stefani, professor e pesquisador da UFRGS, em entrevista ao website da FAPESP. Mas, se o teste apenas comparativo, ento o que pode ser feito quando no h suspeitos? Neste caso, uma ferramenta til um banco de ADN criminal. Trata-se de um conjunto de tipos diferentes de ADN que permite comparar os seus
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Cincia Forense: exame de ADN dados com os coletados na cena do crime. Um banco de ADN pode esclarecer crimes sem suspeitos de forma rpida e objetiva, conforme ocorre em outros pases que dispe deste recurso. Porm, no Brasil, por lei, uma pessoa acusada de um crime no obrigada a fornecer provas contra si mesma. O suspeito no precisa disponibilizar uma amostra de sangue, por exemplo, para que seu ADN seja analisado e comparado com o obtido na cena de crime. Stefani, na mesma entrevista, afirma: O problema quando isso [banco de ADN] ocorrer, pois no Brasil ainda estamos digitalizando impresses digitais. Depois, teremos que ter o sistema para ler esses bancos. E ainda h uma questo adicional: hoje, no podemos fazer bancos de DNA, pois a lei no permite. Tentamos fazer isso em Porto Alegre com a populao prisional e no foi possvel, pois, juridicamente, a pessoa estaria dando prova contra ela prpria. Vrios pases possuem bancos de dados de ADN criminal: EUA, Inglaterra, Canad, Alemanha, Frana, Austrlia e Nova Zelndia. Enquanto o Brasil no adere a este recurso, pases com a Gr-Bretanha ampliam seus bancos, alm de arquivar outros tipos de evidncias, tais como marcas de sapato12. Recentemente, a justia norte americana divulgou que comear a coletar amostras de ADN de suspeitos presos ou detidos pelas autoridades federais, inclusive dos imigrantes ilegais. As novas regras, que sero implantadas pelo Departamento de Justia, visam tornar rotina a prtica de coleta de ADN como identificao para qualquer pessoa detida. At o momento, as autoridades coletavam estas amostras apenas de indivduos condenados. Isto causou furor de alguns defensores da privacidade, alm da possibilidade destes dados serem utilizados para outros fins13. Em meio a possibilidade de um banco de ADN aqui no Brasil, devemos ponderar sobre a seguinte questo: quem pode garantir que esta ferramenta no ser utilizada de uma maneira diferente do propsito da justia? A recente divulgao do seqenciamento do genoma humano trouxe um importante questionamento com relao s conseqncias disto. Os debates sobre este tema, em outros pases, so um forte indicativo de que no h consenso. Ao mesmo tempo em que o sequenciamento gera a esperana de cura de muitas doenas de origem gentica e uma forma de associar evidncias deixadas na cena do crime a suspeitos em potencial, ele tambm provoca muitas especulaes sobre a possibilidade do uso indesejvel destes dados. Sabe-se que informaes genticas que indiquem a pr-disposio de um indivduo a uma doena, como o cncer, seriam valiosas a companhias de seguros e planos de sade, podendo causar discriminaes. Na fico, o filme Gattaca14 ilustra esta possibilidade. Dentro dessa perspectiva, o filme de Andrew Niccol uma interessante reflexo sobre os caminhos que o sequenciamento do genoma pode levar e os impactos que esta tecnologia - e a cincia de um modo geral - pode ter na sociedade. Em Gattaca, as pessoas esto divididas em duas classes sociais, os Vlidos, os filhos da Cincia, produtos da engenharia gentica e da eugenia social, e os Invlidos, os filhos de Deus, submetidos ao acaso da Natureza e s impurezas genticas. Este filme retrata uma sociedade cuja tcnica de manipulao do ADN tornou-se prtica cotidiana de controle social. Ser apenas fico ou prenncio de um futuro no muito distante?

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Terra:

http://tecnologia.terra.com.br/interna/0,,OI1377498-

Governo americano criar banco de DNA como ferramenta das foras da lei - 05/02/2007 - UOL ltimas Notcias. Disponvel em: http://noticias.uol.com.br/ultnot/afp/2007/02/05/ult1806u5465.jhtm Este nome deve-se s letras primeiras letras dos nomes das bases nitrogenadas dos nucleotdeos que constituem o ADN, Adenina, Guanina, Timina e Citosina. CHEMELLO, E. Qumica Virtual, maro (2007) Pgina 13

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Cincia Forense: exame de ADN

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Para saber mais

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Agradecimento
Agradeo ao qumico Leandro Maranghetti Loureno pelas referncias bibliogrficas e ao bilogo Roberto Takata pelas revises tcnicas e textuais.

Sobre o autor
Emiliano Chemello licenciado em Qumica pela Universidade de Caxias do Sul e professor do Ensino Mdio na regio da Serra Gacha. website: http://www.quimica.net/emiliano e-mail: chemelloe@yahoo.com.br MSN: chemelloe@hotmail.com

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