FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS: EFECTO DE LA CONCENTRQCIN SUSTRATO INHIBIDOR.

Laboratorio de Bioqumica Experimental, Facultad de Qumica UNAM. Equipo no. 2: Del Valle Rojano Karen, Martnez Roblero Neri Fabiola, Prez Valdez Nancy.
INTRODUCCIN Las enzimas son catalizadores biolgicos que disminuyen la energa de activacin de las reacciones que catalizan, pero no se modifican la constante Anlisis de resultados y conclusiones de equilibrio, adems estas no se consumen durante la reaccin. Los ensayos enzimticos son utilizados ampliamente durante el proceso de aislamiento y purificacin de una enzima, debido a que de esta forma se pueden determinar sus caractersticas cinticas, que son especficas para cada enzima. La cintica enzimtica se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Dichos estudios proporcionan informacin acerca del mecanismo de la reaccin cataltica, especificidad del enzima, efectos de diversos factores que afectan la reaccin. Estos estudios consisten en la medicin del efecto en la velocidad de la reaccin cuando se modifican factores como concentraciones del sustrato o inhibidor, la temperatura, fuerza inica, pH entre otros; estos factores alteran parmetros como la velocidad y el orden de reaccin. En la cintica de Michaelis-Menten se observa que a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad de la reaccin enzimtica es directamente proporcional a la concentracin del mismo, se duplica la velocidad (reaccin de primer orden). A medianas concentraciones de sustrato, la velocidad se incrementa con el incremento de la concentracin, en la ltima parte de la curva la velocidad es independiente de la concentracin de sustrato la velocidad es cercana a la mxima, indicando una saturacin (reaccin de orden cero). La Km, constante de Michaelis- Menten, es la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima y Vmax es la velocidad terica mxima de la reaccin catalizada por la enzima; estas constantes son conocidos como parmetros cinticos.Los inhibidores son las sustancias que reducen la actividad de la enzima, muchos de estos inhibidores se asemejan por su estructura al sustrato de la enzima, pero no reaccionan o lo hacen con lentitud, en comparacin con el sustrato .Un inhibidor competitivo es la sustancia que compite directamente con el sustrato para un sitio de unin enzimtico, disminuyendo la concentracin de la enzima libre disponible para unirse al sustrato. En el inhibidor no competitivo el complejo enzima-sustrato se une directamente a este, la mayora de estos inhibidores en realidad son mixtos. El inhibidor que no es capaz de unirse a la enzima libre sino que slo se une al complejo enzimasustrato, cuando el inhibidor se une a la enzima se previene la formacin de producto. HIPTESIS A una mayor pureza de la enzima LDH, habr mayor actividad enzimtica. A medida que se aumente la concentracin de piruvato, la velocidad de la reaccin aumentara hasta llegar a una velocidad mxima (Vmax). Se presentar inhibicin de tipo competitivo con el oxamato, ya que esta molcula tiene una similitud estructural con el sustrato de la LDH( piruvato). Por lo que se espera una modificacin en la Km OBJETIVOS Determinar el efecto de la concentracin del piruvato en la cintica enzimtica del lactato deshidrogenasa purificada en sesiones anteriores. Determinar el efecto de la concentracin del oxamato en la cintica enzimtica de la lactato deshidrogenasa. Determinar el tipo de inhibicin enzimtica que ejerce el oxamato en la actividad de la lactato deshidrogenasa. Calcular experimentalmente las constantes cinticas Km y Vmax. RESULTADOS

ANLISIS DE RESULTADOS

Conclusiones
METODOLOGA

Referencia bibliografica:
Koolman, Jan ((2004). Bioqumica: Texto y atlas. 3 edicin: Mdica Panamericana; Madrid. Pginas. 88-97 Voet, Donald (2006). Bioqumica. 3 edicin: Mdica Panamericana; Madrid. Pginas. 473-475, 498-501

Conc. Piruvato (mM) 0.06 0.09 0.15 0.25 0.36 0.5 Km (mM) Vmax (mol/(mL min))

Actividad (mmol/(min mg)) Sin oxamato Con oxamato 0.35mM 0.0107 0.0007 0.0149 0.0018 0.0174 0.0030 0.0202 0.0049 0.0218 0.0053 0.0257 0.0090 0.10 0.72 0.03 0.026