LA INMUNOTRAMFERENCIA ES UNA HERRAMINETA IMPORTANTE EN ESTUDISO INMUNOLOGICOS Y VIROLOGICOS.

POR EJEMPLO LA TECNICA CONFIRMATORIA EN EL DIAGOSTICO DEL VIH SE BASA EN ESTE PRINCIPIO. LAS PROTEINAS VIRALES SON SEPARADAS EN UN GEL DESNATURALIZANTE DE POLIACRILAMIDa Y POSTERIORMENTE SON TRANSFERIDAS A UNA MEMBRANA DE NITROCELULOSA, DESPUES DE UN PROCESO DE BLOQUEO DE LA MEMBRANA CON SOLUCIONES ALTAMENTE PROTEICAS SE HACE REACCIONAR LA MENBRANA CON EL SUERO DEL PACIENTE Y POSTERIRMNETE SE REVELA CON UNA ANTICUERPO ANTI-HUMANO MARCADO CON UNA ENZIMA QUE PRODUCE UN PRECIPITADO AL ENTRAR EN CONTACTO CON EL SUSTRATO RESPECTIVO. AL FINALIZAE ESTE PROICESO SI ENL PACIENTE ANTICUERPOS CONTRA PROTEINAS DE VIH SE PODRAN OBSERVAR BANDAS EN POSOCIONES ESPECIFICAS (DE ACUERDO CON SU PESO MOLECULAR) LAS CUALES SON COMPARADAS CON LOS PATRONES ESTABLECIDOS Y ASI SABER DE QUE PROTEINA VIRAL SE TRATA. 2 LA PRUEBA SE REALIZA CON PROTEINAS DEL VIRUS HIV1 O HIV2 PURIFICADAS APARTIR DEL VIRUS PROPAGADO EN LINEAS DE CELULAS T O CON PROTEINAS ERECOMBINANTES PRODUCIDAS POR INGENIERIA GENETICA EN EN CULTIVOS DE BACTERIAS O LEVADURAS TRANSFECTADAS CON LOS GENES D ELAS PROTEINAS VIRALES. LAS PROTEINAS SE SEPARAN POR ELECTROIFOREISS EN GELES DE POLIACRILAMIDA, SE TRANSFIEREN A MENBRANAS D E NITROCELULOSA Y SOBRE LAS MENBRANA SE REALIZA UNA INMUNODETECCION . los sueros reactivos pueden reaccionar con uno o varioa de los antigenos virales p18 p24 p31 gp41 p51 p65 gp120 gp160. La figura ilustra el resultado obtenido al probar suero control poositivo y uno negativo c+ c- , el suero de un paciente sero positivo y el suero de un paciente sero negativo p+ pTodos l os antigenos virales fueron detectados por el suero del paciente seropositivo
l Western blot es la prueba de confirmacin ms comn para el VIH ya que identifica los anticuerpos anti-VIH en funcin de su peso molecular. La prueba se realiza generalmente de tres a cinco semanas despus de la exposicin inicial, que es el tiempo requerido para que los anticuerpos anti-VIH aparezcan en la sangre del paciente. Este perodo es conocido como el "perodo ventana". La muestra ms comn para todas las pruebas confirmatorias de VIH, incluidos los de Western blot, es la sangre, aunque otros fluidos corporales, tales como fluidos lquidos y la orina se utilizan en circunstancias especiales. En promedio, requiere alrededor de una a dos semanas para procesar los resultados de una prueba de confirmacin de VIH. Los pacientes suelen tener una seleccin limitada, ya que la mayora de las pruebas no estn comnmente disponibles. El Western blot es muy especfico y rara vez da resultados positivos falsos. A veces puede ser concluyente, sobre todo si el paciente no tiene la concentracin de anticuerpos suficientes en su sangre. En tales casos, se repite la prueba despus de un mes.
Prueba confirmatoria (WESTERN BLOT VIH - 1) Las pruebas de confirmacin tienen como objetivo verificar que los resultados obtenidos con las pruebas de escrutinio sean correctos. La prueba de electroinmunotransferencia (Western Blot) es la principal prueba confirmatoria de la actualidad. Bsicamente consiste en la separacin de las protenas (antgenos virales) obtenidos del cultivo del virus del VIH-1 lisados y purificados por centrifugacin. La protena viral as obtenida se coloca en un gel de poliacrilamida en forma de lminas delgadas y luego se efecta una electroforesis, con lo que las protenas de menor peso molecular (p17, p24) emigran ms lejos en el gel, mientras que las de mayor peso molecular se mantienen cerca de su lugar de depsito. Despus se transfieren a una tira de nitrocelulosa y se cortan en tiras de 3 a 5 mm de ancho. Posteriormente, la prueba se basa en un ensayo inmunoenzimtico indirecto, sobre la tira de nitrocelulosa que contiene todas las protenas constituyentes del virus VIH-1 y un control interno Anti- IgG. stas son las tiras que se exponen al suero del paciente, despus de una incubacin se lavan y se vuelven a incubar con una IgG antihumana marcada con una enzima (conjugado), se lavan y posteriormente con la exposicin de un revelador enzimtico (sustrato de la enzima o cromgeno) producir una banda coloreada (azul-violeta) en las zonas correspondientes a los anticuerpos especficos que contenga la muestra del paciente en estudio. La banda de control interno se encuentra junto al extremo no numerado de la tira y permite validar la adicin de la muestra y de los reactivos as como un buen desarrollo del mtodo. Se debe observar cuidadosamente las tiras, ya que pueden contener un nmero variable de bandas; por lo tanto, debe comparase cada tira problema simultneamente con el corrimiento de un suero control NEGATIVO y un suero control POSITIVO. Existen diferentes criterios de interpretacin del Western Blot del VIH-1 para considerarlo como positivo.