Anah Nicols Sols

Nombre de la prueba

Nombre del medio

Composicin qumica

*Peptona de casena yde carne: fuente de carbono. *Sulfato de hierro y Medio SIM o agua amonio: Fuente de nitrgeno y de Degradacin de Indol peptonada azufre.*TIOSULFATO DE SODIO*Agar: es un agente gelificante. Es un medio slido

La hidrlisis del almidon.

Agar de Almidn

*Extracto de Carne y peptina: sirve como fuente de nitrgeno y azufre.*Almidon Soluble: fuente de carbono.*Agar-agar:agente gelificante.*Agua destilada:disolvente, medio de transporte.

Deteccin de la enzima extracelular caseinasa

Agar Leche descremada

*Enzima casena hidrolizada.*Extracto de levadura: fuente de nitrgeno, vitaminas del complejo B;*D-glucosa: fuente de carbono.*Leche desnatada en polvo: fuente de carbono.*Agar: agente gelificante

Hidrlisis de la urea

Caldo Urea

Urea:fuente de nitrgeno. Indicador de pH: rojo de fenol pH=7

Sntesiste de H2O2 Catalasa

Extracto de carne Pentona gelatina Medio Caldo Nitrato

Funcin de cada compuesto

Sustrato

Enzima/Va metablica

Productos(s)

La fuente de carbono sirve para que el microorganismo genere energa. El rojo de fenol sirve para Triptofano saber si se realiz o no la fermentacin de carbohidratos por los microorganismos.

Triptofanasa

Indol+ ac, indoscatol e indolactico.

La fuente de carbono sirve para que el microorganismo genere energa a partir de sta. Fuente de nitrgenoy azufre se usa en Almidn estructuras de aminocidos, cidos nuclicos.

Amilasa alfa y beta

Dextrina,Maltosa y Glucosa

La fuente de carbono sirve para que el microorganismo genere energa a partir de sta. Fuente de nitrgeno se usa en estructuras de aminocidos, cidos nuclicos. Las vitaminas y el nitrgeno que Caseina aporta el extracto de levadura indica que es un para organismos auxtrofos.

Caseinasa

Pptidos y aminocidos

Urea Urea: fuente nitrgeno, e usa estructura de aminocidos,cidos nuclicos.Rojo Fenol: indicador de pH que cambia en presencia de x sustancia

ureasa

NH4

H2O2

Catalasa

Agua y O2

Fuente de nitrgeno y carbono

NaNo3

Nitrato reductasa

Nitritos, N2O, NO N2

Indicador y/o revelador

Reaccin

Interpretacin

Reactivo de Kovac o Ehrlich

Anillo rojo: Indol (+)

Lugol

Inundar las placas con lugol.La presencia de un halotransparente alrededor de lacolonia indica que la pruebaes positiva, es decir que labacteria ha hidrolizado elalmidn mediante la amilas

No requiere

(+): Halo transparente.(-) Sin cambio en el medio

El indicador rojo de fenol, vira de amarillo claro a ligeremente rosado o rosa mexicano.

Rojo de fenol, azul de bromotimol

2H2O----->2 H2O O2

H2O2

La produccin rpida y sostenida de burbujas o efervescencia constituye una reaccin positiva.

a-naftil-amina y cido sulfanlico

Cuando la prueba resulta negativa para nitritos se utiliza la prueba del zinc para reducir N03- NO2- NO N2O N2 qumicamente los nitratos presentes a nitritos y formar con los reactivos de Griess el compuesto colorido

Microorganismos de referencia

Cuidados

alentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullicin durante 1 minuto para disolverlo por completo. Distribuir en tubos de ensayo. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lbs de presin) durante 15 minutos. Dejar Escherichia Coli, Salmonella thyphimurium, solidificar en posicin vertical. Conservar en refrigeracin Proteus vulgaris, Shigella flexeneris de 2 a 8C ensayo con o sin campana de Durham. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lbs de presin) durante 10 minutos. Conservar en refrigeracin de 2 a 8C. Antes de utilizarlo verificar que en las campanas no existan burbujas. Escherichia Coli, Sthaphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa, Enterococcus faecalis
Disolver ingredientes en el agua destilada, llevar a ebullicin agitando regularmente,calentar 3-4 minuto hasta disolucin. Enfriar a50-60 grados centgrados. Esterilizar en autoclave.

Lactococcus lactis, Escherichia coli, enterococcus faecalis

Escherichia coli, Salmonella typhimurium,Proteus vulgaris,Proteus mirabilis,Shigella flexneri,Enterobacter aerogenes

Se puede esterilizar en autoclave de 5 a 8 libras de presin durante 15 minutos. ES IMPORTANTE PROTEGERLO DE LA LUZ. Conservar en refrigeracin de 2 a 8 C.

Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes deagar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar conel asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienencatalasa y su presencia dar un falso resultado positivo.

Sthaphylococcus aurus, Escherichia ocli

Rehidratar 8 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos para disolucin completa. Agitar y distribuir en tubos de ensayo. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lbs de presin) durante 15 minutos. Conservar en refrigeracin de 2 a 8C.

Fundamento qumico

El triptofano puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos: indol, escatol e indolactico. El indol se manifiesta con el reactivo de Kovacs formando un anillo rojo en la superficie del medio. El cido sulfhdrico que se libera por accin de los microorganismos sobre los aminocidos azufrados, se combina con sales de fierro presentes en el medio, produciendo una reaccin que se manifiesta con un precipitado negro en el medio.

Las bacterias pueden usar alimentosmacromoleculares; para ello, es necesario unahidrlisis extracelular preliminar, igual quesucede en los animales superiores. Las distintasbacterias elaboran para este fin una ciertavariedad de enzimas extracelulares que sesegregan al medio.El objetivo de esta prctica es comprobar qubacterias producen amilasa y son por tantocapaces de utilizar el almidn como nutriente

La casena es una protena grande no soluble que se halla en la leche descremada. Al ser digerida por las enzimas de un organismo, la casena se descompone en pequeos aminocidos y pptidos.En las zonas de la placa de agar donde se haya descompuesto la casena, aparecern manchas claras.

los microorganismos que requieren la presencia de oxigeno para llevar acabo sus reacciones metablicas es decir como aceptor final deelectrones, invariablemente se encontraran, con productos txicosderivados del oxigeno, como radicales superxido y perxido cuyaacumulacin es fatal en estos microorganismos, sin mencionar adems deque neutrofilos y macrfagos tienen estas mismas sustancias toxicas paralisar y destruir a los microorganismos patgenos. Por lo que es de vital importancia que las bacterias aerobias y anaerobiasfacultativas dispongan de las enzimas necesarias para eliminar estassustancias nocivas; como la catalasa , que a la vez resulta beneficiosaporque evita que diversos grupos de glbulos blancos la fagociten y lisen,siendo este un factor de virulencia

Se utiliza paracomprobar la presencia delenzima catalasaque se encuentra el la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principalexcepcin es Streptococcus

El nitrito reacciona con dos reactivos: cido sulfanlico y dimetil-a-naftilamina (o a-naftilamina). La reaccin de color se debe a la formacin de un compuesto diazonio, psulfobenceno-azoanaftilamina.

Aplicaciones

Tcnica de inoculacin

Inocular al medio realizando Medio semislido diferencial, para siembra por picadura hasta la estudios bioqumicos de mitad del medio a partir del enterobacterias. cultivo del microorganismo en estudio.

Identificar microorganismos que degradan el almidon

Inocular en tres puntosequidistantes de la superficie delas placas (tocando suavementecon el asa un punto de dichasuperficie) con las bacterias deprueba

El procedimiento consiste en la incubacin de una placa Para crecer cepas y obterlas puras. petri con inoculacin en lnea recta.

Se emplea para la diferenciacin de bacterias por medio de la utilizacin de la urea como nica fuente de carbono.

inoculacin en caldo

La prueba de la catalasa se usa con mucha frecuencia para diferenciar miembros de la familia Micrococaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.
original o adicionado de indicadores, carbohidratos, sales, lquidos orgnicos, etc.