FUNDAMENTO Caldo de preenriquecimiento

Caldo peptona Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solucin fisiolgica para recuperar clulas de enterobacterias daadas por procesos fisicoqumicos, a los que ha sido sometido el alimento Medios de enriquecimiento

Caldo Selenito Cistina En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe flora Gram positiva y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp. La l-cistina es el agente reductor y fue propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en productos alimenticios incrementando la recuperacin por reduccin de la toxicidad del selenito. Composicin / 1 L Peptona 5.0 Lactosa 4.0 Fosfato de sodio 10.0 Selenito de sodio 4.0 L-Cistina 0.01

Figura 1: Caldo selenito cistina

Caldo rappaport vassiliadis Este medio es utilizado para el enriquecimiento de los microorganismos pertenecientes al gnero Salmonella, provenientes de diferentes tipos de muestras. El bajo pH del medio de cultivo combinado con la presencia de verde malaquita y la alta concentracin de cloruro de magnesio, que incrementa la presin osmtica, tiene carcter selectivo para las especies de Salmonella.

Composicin / 1 L Digerido pancretico de casena Cloruro de sodio Fosfato monopotsico Cloruro de Magnesio (anhidro) Oxalato de verde de Malaquita Agua destilada

4,54 g 7,2 g 1,45 g 13,4 g 36,0 mg 1000 mL

Figura 2: Caldo rappaport vassiliadis

Caldo tetrationato

El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos txicos. La selectividad est dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solucin iodoiodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompaante. Para evitar la proliferacin de especies de Proteus spp., se recomienda agregar 40 mg/l de Novobiocina, antes de la solucin iodada. Composicin / 1 L Peptona 5.0 Sales biliares 1.0 Carbonato de calcio 10.0 Tiosulfato de sodio 30.0 pH final: 8.4 0.2 Solucin iodo iodurada Iodo 6.0 Ioduro de potasio 5.0 Agua 20.0

Figura 3: Caldo tetrationato

Medio selectivo

Medio XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) La degradacin a acido a partir de la xilosa, lactosa y sacarosa producen un viraje a amarillo del indicador rojo de fenol. el tiosulfato y sal de hierro revelan la formacin de h2s por la precipitacin del sulfuro de hierro negro en las colonias. las bacterias que descarboxilan la lisina, producen cadaverina, se

reconocen por la presencia de un color rojo-purpreo debido al aumento de ph alrededor de las colonias. el efecto inhibidor es muy dbil. Composicin / 1 L Xilosa L- Lisina Lactosa Sacarosa Cloruro de Sodio Extracto de Levadura Rojo Fenol Desoxicolato de Sodio Tiosulfato de Sodio Citrato Frrico de Amonio Agar Agua destilada 3,75 g 5,0 g 7,5 g 7,5 g 5,0 g 3,0 g 0,08 g 2,5 g 6,8 g 0,8 g 15,0 g 1000 mL
Figura 4: Agar XLD

Agar hektoen El medio de cultivo contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompaante, y 2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina cida como indicadores de la fermentacin de carbohidratos, y (ii) el citrato de hierro como un indicador de la formacin de SH 2 a partir del tiosulfato. El medio de cultivo, permite una buena diferenciacin de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando as la identificacin de Salmonella y Shigella a partir de la muestra.

Composicin / 1 L
Proteosa peptona Extracto de levadura Sales biliares Lactosa Sacarosa Salicina Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio Citrato de hierro y amonio Agar Azul de bromotimol Fucsina cida 12.0 3.0 9.0 12.0 12.0 2.0 5.0 5.0 1.5 14.0 0.065 0.1

Figura 5: Agar hektoen

Medios para bioqumica

Agar TSI ( Agar-hierro-triple azcar ) Es una prueba usada para la fermentacin de la glucosa, lactosa y sacarosa y la produccin de H2S por parte de la bacteria sumndole produccin de gas. El cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentacin. Si se fermenta nicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, adems los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio. Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentacin. La produccin de H2S se manifiesta por la aparicin de un precipitado color negro debido a la reduccin de la sal de hierro presente en el medio.

Composicin / 1 L Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar 3.0 20.0 5.0 10.0 10.0 1.0 0.2 0.2 0.025 13.0

Figura 6: Bioquimica TSI

Agar LIA (Lisina Hierro agar) La descarboxilacion de la lisina ocurre en ambiente anaerbico o sea en el fondo del tubo y se pone de manifiesto por la alcalinizacin del medio

produciendo un viraje del indicador prpura de bromocresol. La glucosa en los componentes del LIA determina primero una reaccin de fermentacin, produciendo acidificacin y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable para la reaccin de descarboxilacion que ocurre despus, volviendo a su color violeta original la parte del fondo del tubo. La desaminacion de la lisina que se puede producir por los gneros Proteus y Providencia tiene lugar en la parte superior del tubo produciendo acido a cetocarbonico que al combinarse con la sal de hierro y en presencia de oxigeno forma un color violeta rojizo. La produccin de H2S se evidencia por la presencia de un precipitado negro por utilizacin de las sales de hierro.

Composicin / 1 L Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar 5.0 3.0 1.0 10.0 0.5 0.04 0.02 15.0
Figura 7: Bioquimica LIA

Agar Citrato de Simmons El citrato de sodio es una sal del acido ctrico, un compuesto orgnico simple que constituye uno de los metabolitos del ciclo de los cidos tricarboxilicos. Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como nica fuente de carbono, utilizan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas. La citritasa acta sobre el citrato produciendo acido oxalacetico y acetato; productos que son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido

de carbono. Durante esta reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador: azul de bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El medio incluye citrato como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno.

Composicin / 1 L Citrato de sodio 2.0 Cloruro de sodio 5.0 Fosfato dipotsico 1.0 Fosfato monoamnico 1.0 Sulfato de magnesio 0.2 Azul de bromotimol 0.08 Agar 15.0
Figura 3: Bioquimica citrato

Medio MIO

Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol. La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde ms all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.

Composicin / 1 L Dextrosa Extracto de levadura Peptona Triptena Clorhidrato de L-ornitina 1.0 3.0 10.0 10.0 5.0
Figura 8: Bioquimica MIO

Agar Prpura de bromocresol

2.0 0.02

MATERIALES Y METODOS El anlisis de la muestra (carne molida) comprendi los siguientes pasos: 1. Triturado de la muestra: se coloco la muestra en una bolsa estril para facilitar el degradado de la carne y as poder soltar la mayor cantidad de organismos presentes en el tejido analizado, 2. Pre-enriquecimiento: se utilizo 225 ml de caldo peptona al cual se le agrego 25 gramos de la muestra y se agito, aunque en el procedimiento se recomienda caldo lactosado y luego incubarlo por 20 horas aproximadamente.
3. Enriquecimiento-selectivo: los caldos de enriquecimiento y selectividad

que se usaron fueron el caldo selenito cistina al cual se le agrego 1 ml del caldo peptonado que contena la muestra, luego se incubo a 35 C (temperatura optima del medio es 36 C +/- 1C); tambin se utilizo el caldo tetrationato (contiene verde brillante 2 ml por cada 100 ml de caldo y iodo-ioduro de potasio 1ml por 100 ml) al cual tambin se le agrego 1ml de la muestra y se incubo a 35C y el caldo rappaport vassiliadis al cual tambin se le agrego 1 ml del caldo de pre-enriquecimiento con la muestra y se coloco en el bao maria a 41-42 C. Todos los caldos fueron dispensados 10 ml en cada tubo, la lectura de los caldos es a las 48 horas luego de la siembra.

Figura 9: Medios de enriquecimiento-selectividad: 1 caldo rappaport vassiliadis, 2 caldo tetrationato, 3 caldo selenito cistina.

4. Medio de selectividad: se utilizo el medio XLD, con ayuda de un asa de siembra se sembr por estriado cada caldo de enriquecimiento y selectividad y se incubo a 35 C, para luego hacer la lectura a las 24 horas despus de siembra; tambin se utilizo el agar hektoen y se sembr por estriado para luego incubarlo a 35 C.

RESULTADOS