Aula 2 Enzimas

Enzimas
Elaborao: Livia Melo Arruda Cunha
Conceitos
A manuteno da vida celular depende de uma enorme variedade de reaes bioqumicas, e quase todas elas so mediadas por uma srie de extraordinrios catalisadores biolgicos conhecidos como enzimas.
As enzimas so, portanto, substncias orgnicas de natureza normalmente protica que catalisam reaes bioqumicas que, sem a sua presena, dificilmente aconteceriam.
A capacidade cataltica das enzimas torna-as adequadas para aplicaes industriais, como na indstria farmacutica ou de alimentos.
Existem tambm catalisadores constitudas de RNAs, as ribozimas

Enzimas x Catalisadores Qumicos

1) As velocidades de reaes catalisadas por enzimas so tipicamente 106 a 1012 vezes maiores do que as reaes correspondentes no catalisadas e so, no mnimo, vrias ordens de magnitude maiores do que as mesmas reaes catalisadas quimicamente. 2) As reaes catalisadas enzimaticamente ocorrem em condies brandas (temperaturas inferiores a 100C, presso atmosfrica e pH quase neutro). Em contraste, geralmente uma catlise qumica eficiente requer temperaturas e presso elevadas, assim como pH extremos.
Enzimas x Catalisadores Qumicos

3) As enzimas apresentam um grau de especificidade imensamente maior do que os catalisadores qumicos em relao identidade dos seus substratos (reagentes) e dos seus produtos; isto , as reaes enzimticas poucas vezes produzem subprodutos. 4) Sua concentrao celular e sua atividade podem ser reguladas.
Resumindo, as enzimas (1) diminuem a energia de ativao, levando a altas velocidades de reao, (2) so muito especficas, (3) so sintetizadas pelas prprias clulas e (4) tm concentrao e atividade modulveis, permitindo um ajuste fino do metabolismo ao ambiente celular.
Atuao das Enzimas na Cintica das Reaes

A velocidade de uma reao explicada pela Teoria das Colises. Esta teoria estabelece que, para reagir, as molculas presentes em uma soluo devem colidir com orientao apropriada e que a coliso deve lev-las a adquirir uma quantidade mnima de energia que lhes permite atingir um estado reativo, chamado estado de transio. Para levar todas as molculas de um mol de uma substncia at o estado de transio, necessita-se de uma quantidade de energia definida como energia de ativao.

Essa energia , portanto, a barreira que separa os reagentes dos Catalisadores produtos. (Enzimas)
Substrato Substrato
Produto
Energia de Ativao

Ento, a velocidade das reaes podem ser aumentadas pelo menos de trs maneiras diferentes: 1) Aumentando o nmero de molculas em soluo, ou seja, sua concentrao; 2) Aumentando a populao de molculas com energia necessria para reagir, o que pode ser obtido pelo aumento da temperatura e;
3) Diminuindo a energia de ativao.
Catalisadores (ENZIMAS)

A reduo no valor da energia de ativao pode ser obtida pela presena de catalisadores, e o processo empregado pelos seres vivos para acelerar suas reaes qumicas. Os catalisadores so substncias que aceleram a velocidade de uma reao, sem alterar a proporo entre reagentes e produtos encontrada no final da reao e sem serem efetivamente consumidos durante o processo. Como sua concentrao permanece constante, podem atuar em quantidades mnimas, ditas catalticas, vrias ordens de grandeza menores do que as concentraes dos substratos.
O catalisador participa efetivamente da reao, sofrendo alteraes de sua estrutura qumica durante o processo; invariavelmente, porm, retorna sua forma original no final da reao.

O processo pelo qual os catalisadores aceleram uma reao qumica consiste em criar um novo caminho de reao, para o qual a energia de ativao requerida menor.

Substrato Substrato Produto Produto Catalisadores (Enzimas)
Energia de Ativao Energia de Ativao Substrato
Produto

O aceleramento da reao pode ser da ordem dos milhes de vezes: por exemplo, a enzima orotidina5'-fosfato descarboxilase diminui o tempo da reao por ela catalisada de 78 milhes de anos para 25 milissegundos.
Interao Enzima - Substrato

Geralmente h uma grande diferena de tamanho entre as molculas de enzimas e as molculas de seus substratos. As enzimas so macromolculas proteicas e seus pesos moleculares variam de 10.000 a alguns milhes de daltons, enquanto o peso molecular dos substratos muitas ordens de grandeza inferior.
Enzima Urease Substrato Peso Molecular (Dalton) 500.000 60 380.000 300
Uria
Fosfofrutoquinase Frutose-6-fosfato

Embora o total da molcula enzimtica seja necessrio para o papel cataltico, a ligao com o substrato d-se apenas em uma regio pequena e bem definida da enzima. Esta regio qual o substrato se liga chamada centro ativo ou stio ativo da enzima. O centro ativo formado por resduos de aminocidos, trazidos proximidade uns dos outros pelos dobramentos da cadeia polipeptdica que definem a estrutura globular da enzima.
O centro ativo, assim organizado, constitui uma cavidade com forma definida, que permite enzima reconhecer seu substrato.

De fato, uma molcula, para ser aceita como substrato, deve ter a forma espacial adequada para alojar-se no centro ativo e grupos qumicos capazes de estabelecer ligaes precisas com os radicais desse centro ativo.
Essa relao substrato-enzima no deve ser entendida como um modelo rgido chave-fechadura proposto por Fischer em 1894.
Este modelo exemplifica a especificidade de uma enzima pelo seu substrato, mas no explica toda a complexidade da relao estabelecida entre eles durante a catlise.

Na realidade, a anlise da estrutura da enzima na ausncia e presena do substrato revela com clareza que a aproximao e a ligao do substrato induz, na enzima, uma mudana na sua forma, tornando-a ideal para a catlise.
Cintica da Reao Enzimtica

A reao catalisada enzimaticamente processa-se em duas etapas: na primeira, a enzima (E) liga-se reversivelmente ao substrato ou substratos (S), formando o complexo enzima-substrato (ES); na segunda fase liberado o produto ou produtos (P) e a enzima volta forma livre, podendo ento, ligar-se a outra molcula de substrato
A primeira fase da reao (formaao do complexo ES) ocorre a velocidades muito maiores do que a segunda (decomposio do complexo ES em E + P).
Cintica da Reao Enzimtica

Em reaes catalisadas do tipo A + B C + D, os substratos A e B devem ligar-se simultaneamente ao centro ativo, onde ocorre a reao, com liberao dos produtos C e D.
Mecanismo de Ao das Enzimas

Na realidade as enzimas atuam de trs formas diferentes para aumentar a velocidade das reaes que as mesmas catalisam:
1) Baixando a energia de ativao, atravs da criao de um ambiente no qual o estado de transio estabilizado (por exemplo, distorcendo a forma da molcula do substrato diminuindo assim a energia global requerida para completar a reao);

2) Providenciando uma via alternativa (por exemplo, reagindo com o substrato formando um complexo enzima-substrato, de existncia impossvel sem a presena da enzima) e;

3) Reduzindo a variao da entropia (grau de desordem de um sistema) da reao ao orientar os substratos de forma correta para facilitar a reao.
Na ausncia de enzima, as molculas colidem em todas as direes possveis de forma aleatria, um processo menos eficiente que na presena da enzima.
Interferentes da Atividade Enzimtica

A estrutura e a forma do centro ativo da enzima so uma decorrncia da estrutura tridimensional da enzima e podem ser afetadas por quaisquer agentes capazes de provocar mudanas conformacionais na enzima. Isto torna a atividade enzimtica dependente das caractersticas do meio, notadamente do pH e da temperatura. O pH (a concentrao hidrogeninica) propiciando o arranjo de grupos protonados e desprotonados leva a molcula de enzima a uma conformao ideal para exercer seu papel cataltico.
Portanto, cada enzima tem seu pH timo de atuao.

Enzima Pepsina pH timo 1,5
Urease
6,5
Interferentes da Atividade Enzimtica

A velocidade da reao enzimtica, que a 0oC apresenta valores prximos de zero, favorecida pelo aumento da temperatura. Porm, acima de 50 e 55oC, a maioria das enzimas so desnaturadas (quebra das ligaes no covalentes). A desnaturao provoca drsticas alteraes conformacionais na molcula, acarretando a perda do poder cataltico.
Outros fatores que podem interferir na velocidade das reaes bioqumicas so: a concentrao das enzimas, a concentrao dos substratos e a presena de inibidores.
Inibidores Enzimticos
Muitas substncias afetam a atividade das molculas enzimticas combinando-se com elas, influenciando negativamente a ligao do substrato ou a velocidade de reao. Essas substncias designam-se inibidores e so, em geral, classificadas conforme o seu modo de ao. Segundo a estabilidade de sua ligao com a molcula da enzima, os inibidores so classificados em IRREVERSVEIS ou REVERSVEIS.
Os inibidores IRREVERSVEIS so aqueles que se combinam com um grupo funcional da molcula da enzima ou o destroem ou ainda formam uma associao covalente bastante estvel. A formao de uma ligao covalente entre o inibidor e a enzima muito comum.
A reao da acetilcolinesterase com o diisopropilfluorfosfato (DIFP) inibe irreversivelmente a enzima.
De maneira resumida podemos dizer que na INIBIO ENZIMTICA IRREVERSVEL: O inibidor se combina com um grupo funcional do stio ativo da enzima essencial para sua atividade ou o destri. O inibidor se liga enzima formando um complexo ESTVEL. Ocorre a formao de uma ligao COVALENTE entre o inibidor e a enzima.
Os inibidores reversveis so classicamente divididos em dois: os COMPETITIVOS e os NO-COMPETITIVOS. O critrio usado para esta diviso o estabelecimento ou no de competio entre o inibidor e o substrato pelo centro ativo da enzima. A identificao do tipo de inibio pode ser sugerida pela comparao entre a estrutura do inibidor e a do substrato.
Os INIBIDORES REVERSVEIS COMPETITIVOS (Ic) apresentam configurao espacial semelhante do substrato e so capazes de ligarem-se ao centro ativo da enzima, produzindo um complexo enzima-inibidor (que jamais gera produtos), semelhante ao complexo enzima-substrato.
Na presena do inibidor a afinidade da enzima pelo substrato diminui. Porm, aumentando-se a concentrao do substrato a atividade enzimtica recuperada.
X
Os INIBIDORES REVERSVEIS NO-COMPETITIVOS (Inc), no guardam qualquer semelhana estrutural com o substrato da reao que inibem. Seu efeito provocado por sua ligao com radicais que no pertencem ao centro ativo; esta ligao altera a estrutura enzimtica a tal ponto que inviabiliza a catlise.
V-se, pelos equilbrios, que, durante o tempo em que se processa a reao onde est presente o Inc, um determinado percentual da enzima est ligado ao inibidor, e portanto ela est inativa.
O que diferencia o Inc dos irreversveis que, no caso destes ltimos, uma molcula enzimtica ligada ao inibidor est definitivamente inativada, ao passo que, no caso dos Inc, uma molcula de enzima, que em um instante est ligada ao inibidor (inativa), pode encontrar-se livre (ativa) em um momento seguinte.
Regulao da Atividade Enzimtica

Os organismos podem regular a velocidade de uma reao catalisada enzimaticamente em dois nveis diferentes.
Primariamente, a sntese da enzima um processo controlado, respondendo s variaes das condies do meio. Como a velocidade da reao catalisada diretamente proporcional a concentrao da enzima, uma maior velocidade de sntese privilegia a via metablica da qual a enzima participa.

As enzimas j sintetizadas, porm, no tm uma atividade constante; esto sujeitas a um segundo nvel de regulao.
A modificao de sua atividade pode dar-se atravs de REGULAO ALOSTRICA ou MODIFICAO COVALENTE. 1) REGULAO ALOSTRICA: Alguns compostos produzidos pelo metabolismo tm a propriedade de ligarem-se, com alta especificidade, a uma regio de determinadas enzimas, designados stio alostrico (stio diferente do stio ativo).

Como possvel prever, a ligao de um composto qualquer modifica a estrutura terciria da enzima, com dois resultados possveis: a nova conformao pode auxiliar a catlise ou prejudic-la.
No primeiro caso, o composto dito EFETUADOR ALOSTRICO POSITIVO e, no segundo, EFETUADOR ALOSTRICO NEGATIVO.

A enzima que apresenta o stio alostrico, e portanto pode receber o efetuador alostrico (ou os efetuadores alostricos), chamada enzima alostrica.

Esse recurso para a regulao da atividade enzimtica largamento empregado pelas clulas no controle de seu metabolismo. Praticamente todas as vias metablicas contam com uma reao catalisada por uma enzima alostrica, sensvel a algum dos produtos finais da via, que atua como efetuador alostrico negativo.
A ligao do efetuador alostrico enzima reversvel e, portanto, o percentual de enzima que se encontra ligada ao efetuador est na dependncia da concentrao deste.

Quando o composto se acumula em virtude do alto funcionamento da via, sua ligao enzima alostrica acarreta diminuio da velocidade da reao por ela catalisada e a via desacelerada. Se, a seguir, o efetuador alostrico consumido por outra via, a diminuio de sua concentrao provoca seu desligamento da enzima, que volta a funcionar com velocidade normal. O processo constitui um mecanismo perfeito de feedback, impedindo o acmulo de produtos desnecessrios.

Um determinado composto pode atuar como efetuador alostrico negativo sobre algumas enzimas e como efetuador alostrico positivo sobre outras, pertencentes a vias metablicas diferentes. Quando a concentrao celular do efetuador alostrico aumenta, algumas vias so inibidas mas, simultaneamente, outras vias so estimuladas, tornando harmnico o funcionamento celular.
2) MODIFICAO COVALENTE:
Algumas enzimas so submetidas a um processo de regulao que consiste na ligao covalente de um grupo qumico sua estrutura

Um exemplo frequente a transferncia de um grupo fosfato, proveniente do ATP para a enzima-alvo.
Naturalmente, a presena do grupo fosfato acarreta a mudana da conformao espacial da enzima, outra vez com duas consequncias possveis.

Para algumas enzimas a nova conformao cataliticamente inativa; para outras, s ento forma-se um stio ativo funcional.
Assim, quando vrias enzimas so simultaneamente fosforiladas, o metabolismo drasticamente alterado, sendo acionadas vias que estavam inativas e inibindo vias que estavam em funcionamento.
Cofatores e Coenzimas
Muitas enzimas necessitam da associao com outras molculas ou ons para exercer seu papel cataltico. Esses componentes da reao enzimtica so genericamente chamados de COFATORES. Os COFATORES podem ser ONS METLICOS ou MOLCULAS ORGNICAS NO PROTICAS, de complexidade variada, que recebem o nome de COENZIMAS.
Os ons metlicos se ligam a radicais de aminocidos da cadeia proteica ou esto presentes em grupos prostticos. Cumprem papel decisivo na catlise, participando efetivamente da reao qumica.
Algumas enzimas aceitam vrios ons metlicos bivalentes como ativadores, como Ca+2, Mg+2 ou Mn+2, enquanto outras exigem ons especficos, como Fe, Cu, Ni, Co, Zn e Se. As coenzimas atuam como aceptores de tomos ou grupos funcionais retirados do substrato em uma dada reao e como doadores destes mesmos grupos ao participarem de uma outra reao e, por isso, diz-se que as coenzimas so transportadoras de determinados grupos.
Para que ocorra a remoo de determinado grupo do substrato e sua transferncia para a coenzima ou vice-versa, a coenzima e substrato alojam-se no centro ativo da enzima.
Algumas coenzimas so integralmente sintetizadas pelas clulas, outras apresentam em suas molculas um componente orgnico que no pode ser sintetizado pelos animais superiores e portanto devem ser obtidos pela dieta (vitaminas).
CATALISADORES BIOLGICOS
Substncias No Proteicas (RIBOZIMAS) RNAs
Substncias Proteicas (ENZIMAS)
Inorgnica
ons Simples APOENZIMA Conjugada
Coenzimas
Orgnica Cofator
Poro Proteica APOENZIMA
HALOENZIMA Grupamento PROSTTICO

Classificao e Nomenclatura das Enzimas

A Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular (IUBMB) divide as enzimas, de acordo com a natureza da reao qumica que catalisam, em xido-redutases, transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases.
1) xido-redutases: so enzimas que catalisam reaes de transferncia de eltrons, ou seja, reaes de oxi-reduo.

2) Transferases: so enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupos funcionais como grupos amina, fosfato, acil e carboxil.

3) Hidrolases: so enzimas que catalisam reaes de hidrlise (transferncia de grupos funcionais da gua).

4) Liases: so enzimas que catalisam a eliminao de grupos para formar ligaes duplas.

5) Isomerases: so enzimas que catalisam reaes de interconverso entre ismeros pticos ou geomtricos, ou seja, transferncia de grupos dentro de molculas para produzir formas isomricas (isomerizao).

6) Ligases: so enzimas que catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre duas j existentes, sempre s custas de energia (ATP).
Bons Estudos!

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